KR100597615B1 - 인간 ＮＨＥ1 이온채널 단백질 결합제로서의 인간Ｄａｘｘ 단백질 및 그의 단편 - Google Patents

Abstract

본 발명은 인간 Daxx 단백질(death-associated protein 6)의 인간 NHE1(sodium hydrogen exchanger 1) 이온채널 단백질 결합제로서의 용도, 및 인간 Daxx 단백질의 아미노산 571∼625 부위의 단편 및 그의 인간 NHE1 이온채널 단백질 결합제로서의 용도에 관한 것이다.

Description

인간 ＮＨＥ1 이온채널 단백질 결합제로서의 인간 Ｄａｘｘ 단백질 및 그의 단편{Human Daxx protein and a fragment thereof as binding agents of human NHE1 ion channel protein}

도 1은 효모 2-하이브리드 스크리닝(yeast two-hybrid screening) 방법에 의해 인간 Daxx 단백질이 인간 NHE1 이온채널 단백질에 결합함을 보여주는 도면이고;

도 2는 시험관 내에서 Daxx 단백질이 NHE1 이온채널 단백질과 결합함을 보여주는 도면이며;

도 3은 생체 내에서 Daxx 단백질이 NHE1 이온채널 단백질의 세포질 내 영역에 결합함을 보여주는 도면이며;

도 4는 생체 내에서 Daxx 단백질의 아미노산 571∼625 부위가 NHE1 이온채널 단백질에 결합함을 보여주는 도면이고;

도 5는 인간 Daxx 단백질의 심근세포 내 도입 후 허혈/재관류에 의한 세포 내 pH 변화를 보여주는 그래프이며:

도 6은 인간 Daxx 단백질의 염기 및 아미노산 서열을 나타낸 도면이다.

본 발명은 인간 Daxx 단백질(death-asscoaited protein 6)의 신규 용도, 및 인간 Daxx 단백질의 신규 단편 및 그의 용도에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 인간 Daxx 단백질의 인간 NHE1(sodium hydrogen exchanger 1) 이온채널 단백질 결합제로서의 용도, 및 인간 Daxx 단백질의 아미노산 571∼625 부위의 단편 및 그의 인간 NHE1 이온채널 단백질 결합제로서의 용도에 관한 것이다.

세포의 죽음에 의한 생명 조절현상은 생물의 발생, 분화, 또는 암, 면역결핍, 퇴행성 질환 또는 허혈성 질환에서 나타나는데, 이를 세포사멸(apoptosis)이라 한다. 허혈성 질환의 경우, 허혈에 의해 세포의 괴사(necrosis)와 세포사멸이 유발되며, 특히 재관류(reperfusion) 후 세포사멸이 심근 손상의 주 원인이 된다. 또한, 허혈 시 죽음 유도 리간드(DIL: death inducing ligand)로 알려진 CD95L, TRAIL 및 TNFα의 방출량이 증가하므로, 허혈성 심질환에서 세포사멸 과정의 조절은 매우 중요하다고 할 수 있다. 이러한 허혈 시 세포사멸은 세포막에 존재하는 다양한 이온채널의 변화에 의한 세포 내 pH의 산성화로 인해 발생하며, 허혈과 관련된 대표적인 이온채널로는 K⁺-ATPase(sodium-potassium channel), NHE(sodium-hydrogen exchanger), NCX(sodium-calcium exchanger) 등이 있다.

허혈성 세포사멸과 관련이 있는 단백질로서, NHE 이온채널 단백질에는 여러 종류의 이소폼(isoform)이 존재하며, 이 중 인간 NHE1 이온채널은 815개의 아미노산으로 구성되어 있다. NHE 이온채널 단백질의 N-말단은 소수성으로 12개의 횡단 막(transmembrane) 영역이 존재하고, C-말단 부위는 친수성으로 호르몬 등에 의한 조절부위이며, 여러 이소폼들은 C-말단 부위에서 서로 서열 유사성을 갖는 것으로 알려져 있다. NHE 이온채널 단백질은 정상 세포 상태에서는 작동하지 않다가, 허혈 시 세포 내 과도한 산성화에 의해 활성화되어 세포 내 Na⁺ 이온을 증가시킨다. 이 때 세포 내에 과도하게 증가된 Na⁺ 이온을 배출하기 위하여 NCX(sodium calcium exchanger)가 역방향으로 작동하게 되고, 이로 인해 세포 내 칼슘 농도가 증가하며, 이러한 세포 내 칼슘의 과도한 증가가 세포사멸을 유발하는 것으로 보고되어 있다.

이상과 같이, NHE 이온채널 활성화에 의한 허혈성 세포사멸은 815개 정도의 아미노산으로 구성된 NHE 이온채널에 의해 신호 전달자들과의 상호연관에 의해 그 기능을 수행하는 것으로 알려져 있다. 뿐만 아니라, 막 단백질 부위에 H⁺ 이온 센서가 존재하여 NHE 이온채널의 활성 조절에 관여하는 것으로 보고되어 있다. 또한 NHE 이온채널에 의한 허혈성 세포사멸 하위 신호전달체계에서 칼슘이 중요하게 작용하며, 칼모듈린(calmodulin)과 같은 칼슘 결합 단백질이 관여하고 있음이 보고되어 있다. 특히 최근에는 칼슘 결합 단백질인 테스칼신(tescalcin)이 NHE 이온채널 단백질의 세포질 내 영역에 결합하고, NHE 채널 활성의 조절에 관여함이 밝혀졌다. 즉, 칼슘과 pH 변화에 의해 NHE 이온채널의 구조 변화(conformational change)가 일어나고 H⁺에 대한 감도가 조절되며, 이 때 테스칼신이 밀접하게 관련되어 있는 것 으로 보고되어 있다.

그밖에도, NHE는 부정맥(arrhythmia), 당뇨병성 심장질환(diabetic heart disease), 심근비대증(heart hypertrophy) 및 심부전(heart failure) 등과도 연관되어 있는 것으로 알려져 있다.

조직의 성장·발달 및 항상성 유지에 있어서 조직 주변으로부터의 산소 공급은 가장 중요한 요소이다. 이러한 산소는 심혈관계에 의해 신체 내에 방대하게 나열된 혈관으로 공급이 조절되고 있다. 그런데, 동맥 협착에 의한 산소와 에너지의 부족에 의해 영향을 받은 세포는 존속 가능성에 치명적인 결과를 초래하며, 허혈성 질환은 이러한 세포 손상의 대표적인 질병에 해당된다. 허혈성 질환은 이미 서구에서는 오래 전부터 가장 흔한 사망 원인으로 알려져 있는 반면, 우리나라를 포함한 동양에서는 최근 들어 식습관의 변화와 함께 급격히 증가하고 있다. 허혈성 질환은 심장뿐만 아니라, 뇌, 대장 및 하지 등과 같은 신경에 의해 조절이 되는 중요한 부위의 세포 죽음에 관련되어 있으므로, 주로 생명과 직결되거나 신체 활동에 직접적인 영향을 주고 있다. 그럼에도 불구하고, 현재까지 효과적인 허혈성 질환의 치료제나 예방제의 개발이 이루어지지 못하고 있는 실정이다. 단지, 최근 이온채널들의 활성을 조절하여 허혈성 세포사멸을 조절하고자 하는 시도가 이루어지고 있으나, 명확한 조절 기전을 밝히지 못하고 있다. 또한 NHE 이온채널 억제제가 개발되어 허혈성 세포사멸을 억제하고자 하였으나, 정확한 세포 신호전달 체계의 미확립으로 뚜렷한 효과를 보지 못하고 있다.

한편, Fas는 다른 TNF(tumor necrosis factor) 수용체 유전자군 멤버들과 마 찬가지로 Fas에 리간드가 결합하면 3개의 세포막 수용체가 삼량체를 이루며, 이 때 죽음 도메인(DD)를 가진 FADD(Fas-associated death domain)라 불리는 어댑터 단백질 등이 자신의 죽음 도메인을 통하여 Fas의 세포질 부위의 죽음 도메인에 결합한다. FADD는 또한 죽음 특이 도메인(death effector domain)을 가지고 있어 캐스파제-8에 존재하는 유사한 도메인에 결합할 수 있다. FADD에 의해 모아지면, 캐스파제-8은 스스로의 절단에 의해 활성화되며 세포사멸을 실행하는 실행 캐스파제를 활성화시킨다. 인간 Daxx(death-associated protein 6) 단백질(서열번호 1 및 2, 도 6)은 이러한 Fas에 의한 수용체 매개 세포사멸에서 Fas의 죽음 도메인을 인지하여 결합하며, FADD와는 독립된 죽음 경로인 스트레스에 의해 활성화되는 c-jun 아미노말단 인산화효소(JNK)를 활성화시키는 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 그러나 인간 Daxx가 인간 NHE1에 결합하여 허혈성 세포사멸에 관여한다는 사실은 전혀 밝혀진 바 없었다.

본 발명자들은 상기한 바와 같이 허혈성 세포사멸에 관여하는 것으로 알려진 NHE 이온채널의 세포질 내 영역(cytoplasmic domain)에 특이적으로 결합하는 단백질을 검출함으로써 새로운 항허혈제를 개발할 수 있음에 착안하고, 지속적인 연구를 수행하였다. 그 결과, 수용체 매개 세포사멸에 관여하는 것으로 알려진 인간 Daxx 단백질이 인간 NHE1 이온채널 단백질에 결합함을 확인하고, 나아가 인간 Daxx 단백질 중 인간 NHE1 이온채널 단백질에 결합하는 활성을 갖는 최소 부위의 단편을 찾아내었다.

따라서 본 발명의 목적은 인간 Daxx 단백질을 함유하는 인간 NHE1 이온채널 단백질 결합제를 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 인간 NHE1 이온채널 결합 활성을 갖는 인간 Daxx 단백질의 특정 부위의 단편 및 이를 함유하는 인간 NHE1 이온채널 단백질 결합제를 제공하는 것이다.

상기 인간 NHE1 이온채널 단백질 결합제는 항허혈제로 유용하게 사용될 수 있다.

첫째, 본 발명은 유효성분으로서 인간 Daxx 단백질을 함유하는, 인간 NHE1 이온채널 단백질 결합제에 관한 것이다.

둘째, 본 발명은 NHE1 이온채널 단백질에 결합하는 활성을 갖는 인간 Daxx 단백질의 아미노산 571∼625 부위의 단편에 관한 것이다.

셋째, 본 발명은 상기 인간 Daxx 단편을 함유하는, NHE1 이온채널 단백질 결합제에 관한 것이다.

본 발명의 인간 NHE1 이온채널 단백질 결합제는 허혈성 질환, 예를 들어, 심장허혈, 망막허혈, 당뇨병성 혈관심장질환, 심부전 또는 심근비대증의 예방 또는 치료제로 사용될 수 있다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명에서는, 인간 NHE1 이온채널 단백질의 세포질 내 영역(508∼815번 아 미노산)과 결합하는 인자를 검색하기 위하여, 효모 2-하이브리드 스크리닝(yeast two-hybrid screening)을 실시하였다. 효모 2-하이브리드 스크리닝은 표적 유전자 및 세포의 모든 cDNA 라이브러리를 표지하여 효모에 넣어 주어 표적 단백질과의 결합이 일어나면 효모의 색깔이 변하게 되어 쉽게 결합을 인지할 수 있고, 결합이 일어난 효모의 유전자 서열을 밝힘으로써 결합 단백질에 대한 정보를 얻을 수 있는 방법으로서, 본 발명에서는 NHE1을 표적 단백질로 하였다. 그 결과, 수용체 매개 세포사멸에 관여하는 것으로 알려진 인간 Daxx 단백질이 NHE1 이온채널 단백질의 세포질 내 영역에 직접적으로 결합함을 확인하고, 이를 시험관 내 및 생체 내 결합 분석법을 이용하여 재확인하였다. 즉, 본 발명에서는 NHE 이온채널에 결합하는 단백질을 검출하기 위하여, NHE 세포질 내 영역의 GST(glutathion S-transferase) 융합 단백질을 제조하고, 동반침강법(coprecipitation)을 이용하여 NHE에 특이적으로 결합하는 단백질을 2차원 전기영동으로 규명하였다. GST를 이용한 면역침강법(immunoprecipitation)은 대량의 GST 융합단백질을 이용함으로써 세포 내에 존재하는 NHE 결합 단백질을 가시화할 수 있을 정도로 다량의 단백질을 침강할 수 있다는 장점을 갖는다. 또한, MALDI-TOF MS를 이용하여 NHE 결합 단백질을 동정할 수 있다.

나아가, 본 발명자들은 인간 Daxx 단백질의 571∼625번 아미노산 부위(서열번호 3 및 4)가 NHE1 이온채널 단백질의 세포질 내 영역에 결합하는 활성을 갖는 최소 부위임을 밝혀내었다. 이러한 결과를 바탕으로 인간 Daxx 단백질을 세포 내 주입한 경우 세포 내 pH가 증가하여 허혈성 세포사멸에 영향을 미침을 확인하였다.

따라서 인간 Daxx 단백질 및 그의 아미노산 571∼625 부위가 허혈성 질환의 예방 또는 치료제로 유용하게 사용될 수 있음을 알 수 있다. 또한, 수용체 매개 세포사멸에 관여하는 것으로 알려진 인간 Daxx 단백질이 NHE 이온채널 단백질에 대해 특이적인 결합 활성을 갖는다는 것은 NHE 이온채널 활성 조절 면에서 주목할만한 것으로 생각된다.

본 발명의 Daxx 단백질 또는 단편은 임상적인 목적으로 투여 시 환자에게 투여할 총 1일 용량은 체중 1 ㎏당 0.05 내지 200 ㎎의 범위이며, 바람직하게는 체중 1 ㎏당 0.05 ㎎이다. 그러나 특정 환자에 대한 투여용량은 환자의 체중, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법 및 질환의 중증도 등에 따라 증감될 수 있다.

본 발명의 Daxx 단백질 또는 단편은 용액 또는 미셀 형태로 직접 주입되거나 제제화하여 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 항허혈 제제는 비경구 또는 국부투여에 의해 인체에 적용될 수 있는데, 정맥주사, 피하주사, 내피주사, 근육주사 등 주사에 의해 투여하는 것이 바람직하다. 이러한 목적을 위해, 본 발명의 유효성분을 약제학적으로 허용가능한 수용성 담체에 현탁시키거나 용해시킬 수 있다.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 구체적으로 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것으로, 본 발명의 범위를 어떤 식으로든 제한하는 것은 아니다.

실시예 1: 효모 2-하이브리드 스크리닝을 통한 NHE1 이온채널 결합 단백질의 검색

효모 2-하이브리드 스크리닝 방법을 이용하여 NHE1 이온채널의 세포질 내 영역에 결합하는 단백질을 검색하였다. 즉, pLexA 벡터(BD bioscience Clontech, California, USA)에 NHE1 이온채널 세포질 내 영역(508∼815번 아미노산)을 클로닝하고, HeLa cDNA 라이브러리로부터 검색을 실시하였다.

그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에 나타낸 바와 같이, NHE1 결합 단백질로 인간 Daxx 단백질을 검출하였다. 양성 대조군(positive control)으로는 NHE1과 결합하는 것으로 이미 밝혀져 있는 FADD와 TRADD를 사용하였으며, 음성 대조군(negative control)으로는 FADD와 Daxx를 사용하였다.

실시예 2: GST-Daxx(1∼740), GST-Daxx(1∼130), GST-Daxx(1∼400), GST-Daxx(1∼571), GST-Daxx(1∼625), GST-Daxx(575∼740) 및 GST-Daxx(625∼740)의 제조

실시예 1에서 NHE1 이온채널과 결합하는 것으로 검색된 인간 Daxx를 7 종류의 절단 단백질 형태로 획득하기 위하여 GST-융합 벡터인 pGEX-4T-1 벡터(Amersham Pharmacia Biotech, Piscataway, USA)에 클로닝하였다. Daxx 결실 돌연변이체들을 GST 융합 벡터에 클로닝하기 위하여, PCR(polymerase chain reaction)을 프라이머로서 EcoRⅠ과 XhoⅠ 효소 링커를 포함하는 프라이머를, 주형으로 Daxx 전장 cDNA를 사용하여 수행하였다. 상기 재조합 벡터를 E. coli BL21(DE3) 균주(Novagen)에 형질전환시켜 형질전환된 콜로니를 획득하였다. GST 융합 단백질을 분리하기 위하 여, 세포를 37 ℃에서 OD₆₀₀이 0.5∼0.6이 되도록 배양한 후, IPTG(isopropyl-β-D-galactopyranoside)를 0.5 mM 농도로 첨가하여 GST-Daxx 결실 돌연변이체들의 발현을 유도하였다. 세포를 완충용액(200 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.5 M NaCl, 100 μM EDTA, 0.1% Triton X-100, 0.4 mM PMSF) 상에서 초음파 처리하여 13,000 rpm으로 원심분리한 후 상등액을 수거하였다. 일정량의 상등액에 글루타티온 아가로스 비드를 첨가하여 4 시간 동안 4 ℃에 방치하고 GST 융합 Daxx 결실 단백질들을 SDS-PAGE 겔에서 분리하여 정량화하였다.

실시예 3: 인간 NHE1 이온채널과 Daxx의 시험관 내 결합 확인

NHE1 이온채널과 Daxx의 상호결합이 직접적인 것인지를 확인하기 위하여, NHE1.cd(cytoplasmic domain)를 ³⁵S-메티오닌으로 표지하고, 실시예 2에서 제조한 GST 융합 Daxx 단백질간의 상호결합을 조사하였다. 두 단백질을 결합 완충용액(50 mM HEPES, pH 7.6, 50 mM NaCl, 5 mM EDTA, 0.1% Nonidet P-40 및 10% 글리세롤)에 첨가하여 4 ℃에서 3 시간 동안 방치한 후, 완충용액으로 3 회 세척하였다. 세척이 완료된 단백질 결합 복합체를 SDS-PAGE 겔에서 분리하여, X-선 필름에 노출한 후 방사능 이미지를 획득하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다. 도 2에 나타난 바와 같이, Daxx 단백질이 NHE 이온채널 세포질 내 영역에 특이적으로 결합함을 확인하였다.

실시예 4: 인간 NHE1 이온 채널과 Daxx의 생체 내 결합 확인

실시예 3에서 관찰한 바와 같이, 시험관 내에서 Daxx가 NHE1.cd에 특이적으로 결합한다는 사실에 입각하여, 세포 내에서 상호결합 여부를 재확인하고자 하였다. Daxx 전장 cDNA 염기서열을 FLAG이 융합된 pcDNA3(myc/FLAG) 벡터(Invitrogen, California, USA)에 클로닝하기 위하여, EcoRⅠ과 XhoⅠ 효소 링커를 포함하는 프라이머를 제작하고, 주형으로 Daxx 전장 cDNA를 사용하여 수행하였다. 클로닝된 FLAG-Daxx 클론을 인간 신장 유래 세포주인 BOSC23 세포주(ATCC CRL-11554)에 도입하였다. 48 시간 동안 배양한 후 세포를 수거하여, 용균 완충용액(50 mM Tris-Cl (pH8.0), 150 mM NaCl, 1 mM EDTA, 1% NP-40, 0.4 mM PMSF) 상에서 초음파 처리하고, 원심분리하여 세포 찌꺼기를 제거한 상등액을 취하였다. 이 상등액으로부터 FLAG 항체(Sigma, Missouri, USA)를 첨가하여, 4 ℃에서 4 시간 동안 방치하는 면역침강을 실시하였다. Daxx 단백질과 함께 면역침강된 단백질 복합체를 확인하기 위하여, SDS-PAGE 겔에서 분리하여 NHE1과의 결합을 확인하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었고, 이로부터 Daxx 단백질이 NHE1.cd에 결합함을 확인할 수 있었다.

실시예 5: 인간 NHE1 이온 채널과 결합하는 Daxx의 결합 부위 결정

상기 실시예에서 확인된 바와 같이, Daxx가 NHE1.cd에 특이적으로 결합하므로, 본 실시예에서는 시험관 내 결합 분석법에 의해 NHE1.cd와의 결합부위를 결정하기 위하여, 실시예 2에서 제조한 다양한 GST 융합 Daxx 결실 돌연변이 단백질을 확보하였다. pcDNA3 벡터(Invitrogen, California, USA)에 NHE1 세포질 내 영역을 클로닝하여 시험관 내에서 ³⁵S-메티오닌으로 표지하였다. ³⁵S-메티오닌으로 표지된 NHE1.cd와 각각의 GST-Daxx 결손 돌연변이 단백질들(GST-Daxx(1∼740), GST-Daxx(1∼130), GST-Daxx(1∼400), GST-Daxx(1∼571), GST-Daxx(1∼625), GST-Daxx(575∼740), GST-Daxx(625∼740))을 결합 완충용액에 첨가하여 4 ℃에서 4 시간 동안 반응시킨 후, SDS-PAGE 겔에서 분리한 후, X-선 필름에 노출시켰다.

그 결과를 도 4에 나타내었고, 이로부터 ³⁵S-메티오닌으로 표지된 NHE1.cd 단백질이 검출됨을 확인할 수 있었다. 따라서 Daxx의 아미노산 571∼625 부위가 NHE1.cd의 결합에 중요하게 작용함을 확인할 수 있었다.

실시예 6: 인간 Daxx의 세포 내 도입 후 세포 내 pH 변화 측정

Daxx 단백질에 의한 허혈성 세포사멸 억제 능력을 평가하기 위하여, 실시예 4에서 제조한 pcDNA3(myc/FLAG)/Daxx 클론을 심근 세포주인 H9c2 세포주(ATCC CRL-1446)에 도입하여 분석하였다. 분석을 위해 Daxx가 도입된 세포를 60 ㎜ 세포배양 용기에 5×10⁴ 세포를 첨가하여 12 시간 배양한 후, 허혈/재관류(I/R; ischemia/reperfusion)(2 시간 허혈 및 12 시간 재관류) 처리하여, 허혈성 세포사멸을 유도하였다. 그 후, PBS 완충액과 무-Na⁺ 완충액으로 세척하고, 세포 내 pH 측정을 위한 형광 지시용액인 BCECF-AM(2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5(6)- carboxyfluorescein, acetoxymethyl ester) 을 10 μM로 처리하여 형광측정기에서 자극(excitation)을 440 ㎚ 및 490 ㎚로 처리하고, 방사(emission)를 530 ㎚로 측정하였다.

그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타낸 바와 같이, 정상 상태에서 Daxx를 도입한 세포는 세포 내 pH가 상승됨을 관찰할 수 있었다. 한편, 허혈/재관류 시에는, 정상 세포는 NHE1 채널 활성화로 세포 내 pH가 상승함에 비해, Daxx를 도입한 세포는 세포 내 pH가 정상 상태로 유지되는 것으로 관찰되었다. 이는 허혈/재관류 시 세포 내 산성화에 의한 NHE1 채널 활성화가 Daxx의 직접적인 결합에 의해 억제되었음을 시사하는 것이다.

상기한 바와 같이, 인간 Daxx 단백질, 특히 그의 571∼625 아미노산 부위가 NHE1에 특이적으로 결합하고, Daxx가 도입된 세포주에서 세포 내 pH가 증가함을 확인하였다. 따라서 인간 Daxx 단백질은 항허혈제 개발에 유용하게 사용될 수 있을 것으로 기대된다. 뿐만 아니라, 단백질 수준에서의 허혈에 대한 연구의 기반을 제공하여 허혈에 대한 분자적·세포 생물학적인 연구를 보다 활발히 수행할 수 있는 계기를 마련할 수 있을 것이다. 또한, 수용체 매개 세포사멸에 관여하는 것으로 밝혀진 인간 Daxx가 NHE 이온채널에 대해 특이적인 결합 활성을 갖는다는 것은 NHE 이온채널 활성의 조절 면에서도 주목할 만한 것으로 생각된다.

서열목록 전자파일 첨부

Claims (5)

1. 유효성분으로서 서열번호 1 또는 2의 아미노산 서열을 갖는 인간 Daxx 단백질(death-associated protein 6)을 함유하는, 허혈성 질환의 예방 또는 치료제.
2. 인간 NHE1(sodium hydrogen exchanger 1) 이온채널 단백질에 결합하는 활성을 갖는 서열번호 3 또는 4의 아미노산 서열을 갖는 인간 Daxx 단백질의 아미노산 571∼625 부위의 단편.
3. 유효성분으로서 제2항에 따른 인간 Daxx 단편을 함유하는, 허혈성 질환의 예방 또는 치료제.
4. 삭제
5. 제1항 또는 제3항에 있어서, 허혈성 질환이 심장허혈, 망막허혈, 당뇨병성 혈관심장질환, 심부전 또는 심근비대증인 예방 또는 치료제.

Images