KR100446711B1 - 브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 비펩타이드성화합물, 그 제조방법 및 그 약학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 비펩타이드성 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 신규한 화합물은 화학식 1의 구조를 가지며, 화학식 1의 R1과 R2는 본 명세서에서 정의한 구조를 갖는다.
본 발명의 화합물의 제조방법은 액상 조합화학 방법을 이용한다.
본 발명의 화합물을 유효성분으로 하는 약학적 조성물은 브라디키닌에 의해 매개되는 각종 질환의 예방 및 치료제로 유용하다.

Description

브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 비펩타이드성 화합물, 그 제조방법 및 그 약학적 조성물{Novel non-peptide compounds having bradykinin antagonistic activity, preparation thereof and their pharmaceutical composition}
본 발명은 브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 비펩타이드성 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물에 관한 것이다.
브라디키닌은 내인성의 펩타이드 호르몬으로서 9개의 아미노산으로 이루어져 있으며, 칼리크레인이라는 일 군의 단백 분해 효소에 의해서 전구체인 키니노겐으로부터 생성된다.
브라디키닌은 염증, 외상, 화상, 쇼크, 알러지 및 특정의 심혈관 질환에 의하여 분비되며, 일단 분비되면 백혈구로부터 통각 구심성 신경 말단을 자극하는 매개자의 분비를 개시하거나 증가시킨다. 브라디키닌이 유발하는 여러가지 병리생리학적인 반응으로는, 패혈성 쇼크, 출혈성 쇼크, 과민증, 관절염, 비염, 천식, 염증성 장 질환, 급성 췌장염, 위 절제후 낙하증, 카르시노이드 증, 편두통, 유전성 혈관부종증 등이다.
브라디키닌의 수용체는 여러가지 브라디키닌 유사체의 효능에 따라 주로 B1과 B2형으로 분류된다.
B1 수용체에서의 브라디키닌의 작용은 주로 동맥 및 정맥을 수축시킴을 포함하지만, 말초 저항 혈관을 이완시킬 수도 있다. 그러나, 혈관투과성 증가, 통증 및 혈관확장과 같은 브라디키닌의 보다 중요한 다수의 기능은 B2 수용체에 의해 조정된다. B2 수용체에서 브라디키닌은 저혈압과 염증을 유발하고, 모세혈관 투과성을 높여서 부종 및 통증을 유발하므로, 염증, 심혈관 질환, 통증 및 감기와 같은 다수의 질환에서 중요한 역할을 담당하는 것으로 알려져 있다.
따라서 B1 수용체의 길항제는 해열 및 항염 작용을 갖는 약물로서 유용하며, B2 수용체의 길항제는 천식, 알러지성 비염, 감기, 염증성 관절 질환, 췌장염, 방광염 등에 유용하게 사용될 수 있다.
브라디키닌에 대한 제 1세대 길항제는 펩타이드 길항제로서, 주로 브라디키닌의 아미노산 서열 중 7번 위치에 있는 프롤린을 D-페닐알라닌 또는 D-방향족 아미노산으로 대체한 것이며, 대표적인 물질은 NPC-349로 알려진 D-Arg-[Hyp3, Thi5,8, D-Phe7]BK 이다[Vaverk, R. J.; Sewart, J. M. Competitive antagonists of bradykinin.Peptides1985, 6, 161-164].
제 2세대 길항제로 개발된 것은, Icatibant(HOE 140)와 Bradycor(CP0127, 다이머릭 펩타이드)이다[Griesbacher, T.; Lembeck, F.; Eckhardt, M.; Henke, St.; Breipohl, G.; Knolle, J. New, long-acting, potent bradykinin antagonists.Br. J. Pharmacol. 1991, 102, 257-304.; Hock, F. J.; Wirth, K.; Albus, U.; Linz, W.; Gerhard, H. J.; Weimer, G.; Henke, S.; Breiphl, G.; Konig, W.; Knolle, J.; Scholkens, B. A. Hoe 140, a new potent and long acting bradykinin-antagonist: In vitro studies. Br. J. Pharmacol. 1991, 102, 769-773.; Wirth, K.; Albus, U.; Linz, W.; Alpermann, H. J.; Anagnostopoulos, H.; Henke, S.; Breiphl, G.; Konig, W.; Knolle, J.; Scholkens, B. A. Hoe 140, a new potent and long acting bradykinin-antagonist: In vivo studies.Br. J. Pharmacol. 1991, 102, 774-777]. 이들은 제 1세대 길항제에 비하여 B2 수용체에 대해 강한 친화력이 있으며 생체 내에서 반응 지속 시간이 길지만 경구 투여시 생체 이용률이 낮으므로 아직 그 치료적 사용이 제한되어 있다.
최근에 브라디키닌 수용체의 비펩타이드성 길항제로서 장기간 경구 투여가 가능하고 만성 염증 질환을 치료할 수 있는 약물들을 개발하기 위하여 많은 연구가 진행되어 왔다.
B2 수용체의 비펩타이드성 길항제로서 가장 대표적인 예는 포스포니움 유도체인 WIN 64338과 헤테로 아릴 벤질 에테르인 FR 173657이다[Salvino, J. M.; Seoane, P. R.; Douty, B. D.; Awad, M. M. A.; Dolle, R. E.; Houck, W. T.; Faunce, D. M.; Sawutz, D. G. Design of potent non-peptide competitive antagonist of the human bradykinin B2 receptor.J. Med. Chem. 1993, 36, 2583-2584, Abe, Y.; Kayakiri, H.: Satoh, S.; Inoue, T.; Sawada, Y.; Inamura, N.; Asanno, M.; Hatori, C.; Oku, T.; Tanaka, H. A novel class of orally active non-peptide bradykinin B2 receptor antagonists. 3. Discovering bioisosteres of the Imidazo[1,2-a]pyridine moiety. J. Med. Chem.1998, 41, 4062-4079].
또한 피페라진 잔기를 갖는 제 2세대 항히스타민제 중 일부 화합물에서도 B2 수용체 길항 효과가 미약하게 관찰되었다. 이 중 세티리진(Cetirizine)의 탄소 사이드 체인을 아릴 또는 알킬 쇄로 변형시킴으로써 항히스타민 작용과 항브라디키닌 작용을 나타냄을 관찰하였다.
따라서 피페라진 잔기를 갖는 화합물 중 우수한 브라디키닌 길항 작용을 갖는 약물의 개발이 기대되는 바이다.
본 발명은 브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 비펩타이드성 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 제공하는데 목적이 있다.
도 1은 액상 조합화학 방법을 이용하여 본 발명의 화합물의 라이브러리를 제조하는 방법을 나타낸 도이다.
도 2는 액상 조합화학 방법을 이용하여 본 발명의 화합물의 개별물질을 제조하는 방법을 나타낸 도이다.
도 3은 기니아 피그 회장에서 본 발명의 pM4S3의 농도 변화에 따른 브라디키닌에 대한 축적농도-반응곡선을 나타낸 도이다.
도 4는 기니아 피그 회장에서 본 발명의 pM3S3의 농도 변화에 따른 브라디키닌에 대한 축적농도-반응곡선을 나타낸 도이다.
도 5는 기니아 피그 회장에서 본 발명의 pM6-H의 농도 변화에 따른 브라디키닌에 대한 축적농도-반응곡선을 나타낸 도이다.
도 6은 기니아 피그 회장에서 대조군으로서 Hoe 140의 농도 변화에 따른 브라디키닌에 대한 축적농도-반응곡선을 나타낸 도이다.
본 발명은 브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 비펩타이드성 화합물, 그 제조방법 및 이를 유효성분으로 함유하는 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 신규한 화합물은 하기 화학식 1의 구조를 가지며, 그 화합물들의 약제학적으로 허용가능한 염도 포함한다.
상기 화학식 1에서 R1은 이소프로필, 벤질, 4-메틸벤질, 4-메톡시벤질, 1-메틸-3-페닐프로필, 3,4,5-트리메톡시벤질, 2-(4-(4-클로로페닐)티아졸), 3-(5-t-부틸이소옥사졸), 2-(4-(4-브로모페닐)티아졸), 사이클로헥실, 5-(3-메틸이소옥사졸), 3,4-디벤질옥시펜에틸을 나타내며, R2는 H, R3CO 이며, R3는 메틸, 페닐, 벤질, 나프틸(C10H7), C10H7CH2을 나타낸다.
본 발명의 화합물은 액상 조합화학(liquid-phase combinatorial chemistry) 방법을 이용하여 제조한다.
본 발명의 화합물은, 상기 화학식 1로 표시되는 화합물과 같은 목적 화합물의 구조를 3부분으로 나누어 각각에 다른 치환체를 조합하는 액상 조합화학 방법을 이용하여 제조한다.
이하, 본 발명의 제조방법에 대해 상세히 설명한다.
화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하기 위하여 이미노디아세트산 무수물을 주형으로 하고, 12개의 아민류, 1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진, 5개의 카르복실산을 이용하여 50개의 라이브러리를 제조한다(도 1, 도 2).
주형(template)인 이미노디아세트산 무수물은 여섯 원자로 이루어진 환식 무수물이며, 하기 화학식 2로 나타낸다. 이미노디아세트산 무수물은 대칭구조로서, 세 부위가 연속적으로 세 가지 다양한 작용기와 반응하여 라이브러리를 합성한다.
상기 화학식 2에서 P는 아미노 보호기를 나타내며, 벤질, 벤질옥시카르보닐 및 t-부틸옥시카르보닐기 중에서 선택할 수 있으며, t-부틸옥시카르보닐기가 바람직하다.
이미노디아세트산 무수물과의 반응에 사용하는 12개의 아민류는 이소프로필아민, 벤질아민, 4-메틸벤질아민, 4-메톡시벤질아민, 1-메틸-3-페닐프로필아민, 3,4,5-트리메톡시벤질아민, 2-(4-(4-클로로페닐)티아졸)아민, 3-(5-t-부틸이소옥사졸)아민, 2-(4-(4-브로모페닐)티아졸)아민, 사이클로헥실아민, 5-(3-메틸이소옥사졸)아민, 3,4-디벤질옥시펜에틸아민 이다.
이미노디아세트산 무수물, 아민류와의 반응에 사용하는 5개의 카르복실산은 아세트산, 벤조익산, 페닐아세트산, 2-나프토익산, 2-나프틸아세트산 이다.
본 발명의 화학식 1로 표시되는 화합물을 제조하기 위한 구체적인 제조방법은 하기 반응식 1과 같다.
이미노디아세트산에서 질소는 t-부틸옥시카르보닐(Boc)기로 보호하며, 인-시츄(in-situ) 반응으로 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸-카르보디이미드 하이드로클로라이드(EDCI)를 사용하여 이미노디아세트산 무수물 주형을 형성한다. 상기 이미노디아세트산 무수물 주형을 아민류와 반응시켜, 이미노디아세트산 무수물의 첫번째 작용기를 활성화하여 환을 오픈한다. 그러면 두번째 활성화 자리에 모노 카르복실산이 남아있는 화합물이 생성된다. 이 화합물에, 결합제로 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스피롤리디노 포스포니움 헥사플루오로포스페이트(PyBOP)를 사용하여 1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진와 반응시키면, 두개의 작용기가 결합되어진 화합물이 생성된다. 여기에 염산-다이옥산을 반응시켜 질소에 결합되어 있던 보호기를 제거하고, 결합제로 브로모트리스피롤리디노 포스포니움 헥사플루오로포스페이트(PyBrOP)를 사용하여, 5개의 카르복실산과 결합시키면, 3개의 작용기가 결합되어진 라이브러리가 얻어진다. 그러나 두개의 아민류 즉, 5-(3-메틸이소옥사졸)아민과 3,4-디벤질옥시펜에틸아민이 치환된 화학식 1 화합물에 한해서는 낮은 반응성 때문에 세번째 작용기와 카르복실산이 반응하지 않게 된다.
본 발명에서는 총 50개의 라이브러리를 제조한다. 각 단계에서, 당분야에서 알려진 액체-액체 추출에 의해 출발물질, 반응물, 시약, 부생산물로 부터 각각의 중간체와 최종생성물을 분리하고, 정제한다.
본 발명은 하나 또는 그 이상의 본 발명의 신규한 화합물을 유효성분으로 함유하는 브라디키닌 길항용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명의 약학적 조성물은 브라디키닌 길항 효과를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 브라디키닌에 의해 유발되는 다양한 증상을 예방 또는 치료한다. 따라서, 본 발명의 조성물은 브라디키닌에 의해 유발되는 천식, 알레르기성 비염, 관절염, 쇼크, 류마티스성 관절염, 뇌부종, 혈관신경부종, 급성 췌장염 등을 예방 또는 치료할 수 있다.
본 발명에서 제조한 화합물 1의 각 라이브러리(Library)와 개별물질(deconvolution)의 브라디키닌 길항 효과는, 화합물의 농도 변화(0.03uM ~ 1.0uM)에 따라 기니아 피그 회장 평활근(guinea-pig ileum smooth muscle)에 대한 브라디키닌 활성 효과로 확인된다.
브라디키닌의 최대반응은 약 1uM에서 나타나고, 그 이상의 농도에서 반응곡선은 아래로 떨어진다.
본 발명의 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하며, 본 발명의 조성물의 투여량은 투여경로에 따라 일회분 투여량당 본 발명의 화합물을 5 ~ 250㎎, 바람직하게는 8 ~ 60㎎을 포함한다. 적절한 농도 및 일회분 투여량은 당분야의 전문가에 의해서 결정될 수 있다.
약제학적으로 허용가능한 담체는 당분야의 전문가에게는 잘 알려져 있다. 액상 용액으로 제형화되는 조성물에 허용가능한 담체로는 식염수와 멸균수가 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 및 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 본 발명의 조성물에 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제형화할 수 있다. 당분야의 전문가는 본 발명의 화합물을 적정한 방법으로, 또는 Remington's Pharmaceutical Sciences, Gennaro, Ed., Mack Publishing Co., Easton, PA 1990.에 기재된 바와 같이 공인된 방법으로 제형화할 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 비펩타이드성 브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 화합물의 제조
1. N-((t-부틸옥시)카르보닐)이미노디아세트산의 제조
1ℓ플라스크에 이미노디아세트산(13.3g, 100m㏖), 다이옥산(200㎖), 물 200㎖에 녹인 수산화나트륨(8g, 200m㏖)을 넣고, 용액이 균일해질 때까지 교반하였다. 상기 용액에 디-t-부틸디카보네이트(25㎖, 110m㏖)를 소량 넣고, 실온에서 72시간 동안 교반한 후, 반응 혼합물을 에테르(2×100㎖)로 세척하였다. 수용액층을 10% 염산(100㎖)으로 산성화하고, 에틸아세테이트(3×150㎖)로 추출하였다. 모아진 유기층을 포화 소금물(2×150㎖)로 세척하고, Na2SO4로 수분을 제거한 후, 재결정(에틸아세테이트 : 헥산 = 1 : 2)하여 무색의 결정을 얻었다.
수율 : 10.33g(44%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 4.12 and 4.08(two s, 4H), 1.4(s, 9H)
2. N-((t-부틸옥시)카르보닐)이미노디아세트산의 첫번째 작용기에 아민을 결합시킨 화합물의 제조
2a. 화합물 M2~M6, M10의 제조
2a-1) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-벤질이미노디아세트산 모노아미드(M2)의 제조
플라스크에 상기 1에서 제조한 N-((t-부틸옥시)카르보닐)이미노디아세트산(0.5g, 2.13m㏖)과 EDCI(0.408g, 2.13m㏖)가 녹아있는 DMF 6.4㎖를 넣고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 여기에 벤질아민(0.23g, 2.13m㏖)을 주사기를 통해 천천히 적가한 후, 실온에서 20시간동안 교반하였다. 반응물을 에틸아세테이트(60㎖)로 희석시키고, 10% 염산 수용액(2×40㎖), 포화된 소금물(40㎖)로 세척한 후, Na2SO4로 수분을 제거하고, 용매를 감압하에 제거하여 연한 백색의 고체를 얻었다.
수율 : 0.52g(75%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2(5H,m), 4.4(2H,t), 4.0(2H,d), 3.9(2H,d), 1.3 and 1.4(9H, two s)
FABMSm/z: 323.15
2a-2) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(4-메틸벤질)이미노디아세트산 모노아미드(M3)의 제조
수율 : 0.49g(68%), 미색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2(4H,m), 4.4(2H,t), 3.9 and 4.0(4H, two s), 2.3(3H,s), 1.3 and 1.5(9H, two s)
FABMSm/z: 337.18
2a-3) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(4-메톡시벤질)이미노디아세트산 모노아미드(M4)의 제조
수율 : 0.43g(55%), 미색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 6.8(2H,dt), 7.2 and 7.3(2H,t), 4.4(2H,d), 4.2(2H,d), 4.0(2H,d), 3.8(3H,s), 1.4(9H, two s)
FABMSm/z: 353.16
2a-4) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(1-메틸-3-페닐프로필)이미노디아세트산 모노아미드(M5)의 제조
수율 : 0.62g(80%), 백색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2 and 7.3(5H,m), 4.1(1H,m), 3.8~4.0(4H,m), 2.6(2H,q), 1.8(2H,q), 1.4(9H,d), 1.2(3H,d)
FABMSm/z: 365.21
2a-5) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)이미노디아세트산 모노아미드(M6)의 제조
수율 : 0.23g(26%), 미색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 6.5(2H,d), 4.4(2H, two d), 4.0(4H,d), 3.8(9H, two d), 1.4(9H,s)
FABMSm/z: 413.18
2a-6) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-사이클로헥실이미노디아세트산 모노아미드(M10)의 제조
수율 : 0.3g(12%), 백색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 4.0(4H,dd), 3.8(1H,m), 1.8~1.9(2H, t), 1.7(2H,m), 1.6(1H,m), 1.4(9H,m), 1.2~1.3(5H, m)
FABMSm/z: 315.02
2b. 화합물 M1, M12의 제조
2b-1) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-이소프로필이미노디아세트산 모노아미드(M1)의 제조
플라스크에 상기 1에서 제조한 N-((t-부틸옥시)카르보닐)이미노디아세트산(0.5g, 2.13m㏖)과 EDCI(0.408g, 2.13m㏖)가 녹아있는 DMF 6.4㎖를 넣고, 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 여기에 이소프로필아민(0.126g, 2.13m㏖)을 주사기를 통해 천천히 적가한 후, 상기 2a와 같은 방법으로 반응시켜, 연한 자주빛 고체를 얻었다.
수율 : 0.3g(53%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 3.9(4H,dd), 2.6(1H,s), 1.3(9H,s), 1.0(6H,dd)
FABMSm/z: 275.15
2b-2) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(3,4-디벤질옥시펜에틸)이미노디아세트산 모노아미드(M12)의 제조
수율 : 0.51g(44%), 연한 백색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 6.6~7.4(13H,m), 5.0(4H,m), 3.9(4H,m), 3.3(2H,q), 2.6(2H,m), 1.3(9H,d)
FABMSm/z: 549.25
2c. 화합물 M7~M9, M11의 제조
2c-1) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(2-(4-(4-클로로페닐)티아졸))이미노디아세트산 모노아미드(M7)의 제조
플라스크에 상기 1에서 제조한 N-((t-부틸옥시)카르보닐)이미노디아세트산(0.5g, 2.13m㏖)과 EDCI(0.408g, 2.13m㏖)가 녹아있는 DMF 6.4㎖를 넣고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 여기에 2-아미노-4-(4-클로로페닐)티아졸(0.45g, 2.13m㏖)과 DMAP(0.52g, 4.26m㏖)를 천천히 적가한 후, 상기 2a와 같은 방법으로 반응시켜, 노란색 고체를 얻었다.
수율 : 0.29g(32%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 8.0(2H,d), 7.5(2H,d), 7.4(1H,s), 3.9(2H,d), 3.7(2H,d), 1.3(9H,s)
FABMSm/z: 426.08
2c-2) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))이미노디아세트산 모노아미드(M8)의 제조
수율 : 0.2g(26%), 백색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 6.2(1H,s), 4.5(4H,s), 1.5(9H,s), 1.35(9H,s)
FABMSm/z: 356.17
2c-3) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(2-(4-(4-브로모페닐)티아졸))이미노디아세트산 모노아미드(M9)의 제조
수율 : 0.27g(27%), 붉은 갈색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.7(2H,d), 7.6(1H,s), 7.5(2H,d), 4.6(4H,s), 1.4(9H,s)
FABMSm/z: 480.03
2c-4) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(5-(3-메틸이소옥사졸))이미노디아세트산 모노아미드(M11)의 제조
수율 : 0.12g(18%), 엷은 갈색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 6.2(1H,s), 4.5(4H,s), 2.4(3H,s), 1.5(9H,s)
FABMSm/z: 314.07
3. 상기 2에서 제조한 화합물(M1 ~ M12)에 1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진을 결합시킨 화합물 pM1 ~ pM12의 제조
3-1) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(1-메틸-3-페닐프로필)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM5)의 제조
30㎖ 바이알에 N-((t-부틸옥시)카르보닐)-이미노디아세트산 모노아미드(M5, 0.48g, 1.31m㏖, 1.0eq.), 1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진(0.41g, 1.441m㏖, 1.1eq.), 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스피롤리디노 포스포니움 헥사플루오로포스페이트(PyBOP) 0.75g (1.44m㏖, 1.1eq.)을 넣은 뒤, DMF(15㎖), N,N-디이소프로필에틸아민(i-Pr2NEt; 0.5㎖, 2.62m㏖, 2.0eq.)을 넣고, 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 에틸아세테이트(100㎖)로 희석시키고, 10% 염산 수용액(100㎖), 포화 NaHCO3수용액(2×50㎖), 포화 소금물(50㎖)로 차례로 세척하고, Na2SO4로 수분을 제거한 후, 감압하에 용매를 제거하여 미색 고체를 얻었다.
수율 : 0.78g(94%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.5(14H, m), 4.4(1H, d), 4.2-4.3(2H, m), 3.9(1H, m), 3.7-3.8(2H, m), 3.5-3.7(4H, m), 2.5-2.7(2H, m), 2.3-2.5(4H, m), 1.7(2H, m), 1.4(9H, d), 1.0-1.2(3H, dd)
FABMSm/z: 633.31
3-2) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-이소프로필-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM1)의 제조
수율 : 0.47g(77%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(9H,m). 4.4(1H,s), 4.3(2H,m), 3.95(1H,s), 3.8-3.9(4H,d), 3.6-3.7(2H,m), 1.4(9H,s), 1.3(6H,s)
FABMSm/z: 543.02
3-3) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-벤질-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM2)의 제조
수율 : 0.61g(73%), 오렌지색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(14H,m), 4.4(3H,ds), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.6(4H,s), 2.4(4H,m), 1.4(9H,d)
FABMSm/z: 591.27
3-4) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM3)의 제조
수율 : 0.73g(86%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-7.6(13H,m), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 3.8(2H, d), 3.6(4H,m), 2.4(4H,m), 2.3(3H,s), 1.3(9H,d)
FABMSm/z: 605.21
3-5) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(4-메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM4)의 제조
수율 : 0.67g(89%), 오렌지색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(11H,m), 6.8(2H,t), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.7(3H,s), 3.6(4H,m), 2.4(4H,m), 1.4(9H,d)
FABMSm/z: 621.28
3-6) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM6)의 제조
수율 : 0.31g(81%), 미색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(9H,m), 6.6(2H,d), 4.4(1H,d), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 4.1(2H,d), 3.8(9H,d), 3.6(4H,d), 2.4(4H,d), 1.3(9H,d)
FABMSm/z: 681.30
3-7) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(2-(4-(4-클로로페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM7)의 제조
수율 : 0.34g(69%), 미색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-8.0(14H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.1-4.15(2H,d), 3.6-3.8(4H,m), 2.4(4H,m), 1.3-1.4(9H,d)
FABMSm/z: 694.19
3-8) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM8)의 제조
수율 : 0.29g(83%), 미색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(9H,m), 6.6(1H,d), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 3.9-4.0(2H,d), 3.5-3.7(4H, m), 2.4(4H,m), 1.3-1.4(9H,d), 1.25(9H,d)
FABMSm/z: 694.29
3-9) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(2-(4-(4-브로모페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM9)의 제조
수율 : 0.23g(92%), 미색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(14H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.1-4.15(2H,d), 3.4-3.6(4H,m), 2.4(4H,m), 1.3-1.4(9H,d)
FABMSm/z: 738.14
3-10) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-사이클로헥실-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM10)의 제조
수율 : 0.47g(65%), 미색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(14H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.0(4H,dd), 3.8(1H,s), 3.4-3.6(4H,m), 1.9-1.8(2H,s), 1.7(2H,m), 1.6(1H,m), 1.5(9H,m), 1.4-1.2(5H,m)
FABMSm/z: 583.16
3-11) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(5-(3-메틸이소옥사졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM11)의 제조
수율 : 0.09g(82%), 미색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(9H,m), 6.2(1H,d), 4.5(4H,s), 4.4(2H,d), 4.0(2H,d), 3.6-3.8(4H,m), 2.4(4H,m), 2.2(3H,d), 1.3-1.4(9H,d)
FABMSm/z: 582.35
3-12) N-((t-부틸옥시)카르보닐)-N'-(3.4-디벤질옥시펜에틸)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM12)의 제조
수율 : 0.52g(63%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-7.6(9H,m), 7.2(10H,m), 6.5(3H,m), 5.2(4H,d), 4.5(4H,S), 4.4(2H,m), 3.9(2H,m), 3.7-3.8(4H,d), 3.5(2H,s), 2.8(2H,s), 1.4(9H,S)
FABMSm/z: 817.37
4. 상기 3에서 제조한 화합물(pM1 ~ pM12)의 N-보호기를 제거한 화합물 pM2-H ~ pM12-H의 제조 및 이들 화합물과 카르복실산(S1 ~ S5)을 결합시킨 화합물 pM2S1 ~ pM10S5의 제조
4a : 화합물 pM2-H ~ pM12-H의 제조
4a-1) N-(4-메톡시벤질)-N'-1-(4-클로로벤질하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM4-H)의 제조
4㎖ 바이알에 클로로포름(1㎖), 4M 염산-다이옥산(1㎖), 상기 3에서 제조한 pM4(0.033g, 0.0538m㏖)을 넣고, 3시간 동안 교반하였다. 용매와 과량의 산을 증발시켜 제거하여 노란색 고체를 얻었다.
수율 : 20㎎(67%)
녹는점(mp) : 110-120℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(11H,m), 6.8(2H,t), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.7(3H,s), 3.6(4H,m), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 505.02
4a-2) N-벤질-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM2-H)의 제조
수율 : 21mg(99%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(14H,m), 4.4(3H,ds), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.6(4H,s), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 491.00
4a-3) N-(4-메틸벤질)-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM3-H)의 제조
수율 : 6mg(96%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-7.6(13H,m), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 3.8(2H, d), 3.6(4H,m), 2.4(4H,m), 2.3(3H,s)
FABMSm/z: 505.02
4a-4) N-(1-메틸-3-페닐)-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM5-H)의 제조
수율 : 30mg(100%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.5(14H,m), 4.4(1H,d), 4.2-4.3(2H,m), 3.9(1H,m), 3.7-3.8(2H,m), 3.5-3.7(4H,m), 2.5-2.7(2H,m), 2.3-2.5(4H,m), 1.7(2H,m), 1.0-1.2(3H,dd)
FABMSm/z: 533.01
4a-5) N-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM6-H)의 제조
수율 : 58mg(54%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.4-7.6(9H,m), 6.6(2H,d), 4.4(1H,d), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 4.1(2H,d), 3.8(9H,d), 3.6(4H,d), 2.4(4H,d)
FABMSm/z: 581.30
4a-6) N-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM8-H)의 제조
수율 : 13mg(98%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(9H,m), 6.6(1H,d), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 3.9-4.0(2H,d), 3.5-3.7(4H, m), 2.4(4H,m), 1.25(9H,d)
FABMSm/z: 524.06
4a-7) N-사이클로헥실-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM10-H)의 제조
수율 : 160mg(66%), 노란색 고체
녹는점(mp) : 135-145℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(14H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.0(4H,dd), 3.8(1H,s), 3.4-3.6(4H,m), 1.9-1.8(2H,s), 1.7(2H,m), 1.6(1H,m), 1.4-1.2(5H,m)
FABMSm/z: 483.01
4a-8) N-(5-(3-메틸이소옥사졸))-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM11-H)의 제조
수율 : 16mg(99%), 갈색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(9H,m), 6.2(1H,d), 4.5(4H,s), 4.4(2H,d), 4.0(2H,d), 3.6-3.8(4H,m), 2.4(4H,m), 2.2(3H,d)
FABMSm/z: 481.95
4a-9) N-(3,4-디벤질옥시펜에틸)-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드(pM12-H)의 제조
수율 : 7mg(99%), 노란색 고체
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-7.6(9H,m), 7.2(10H,m), 6.5(3H,m), 5.2(4H,d), 4.5(4H,S), 4.4(2H,m), 3.9(2H,m), 3.7-3.8(4H,d), 3.5(2H,s), 2.8(2H,s)
FABMSm/z: 717.0
4b : 상기 3에서 제조한 화합물(pM1 ~ pM12)에 카르복실산(S1-5)을 반응시킨 서브 라이브러리의 제조
4b-1) 서브 라이브러리 pM2S1-5의 제조
DMF/클로로포름(8:1) 혼합물 9㎖에 각각의 카르복실산(S1-S5) 0.1858m㏖을 혼합하여 카르복실산 스톡용액(stock solution)을 준비하였다.
4㎖ 바이알에 클로로포름(1㎖), 4M 염산-다이옥산(1㎖), 상기 3에서 제조한 pM2(0.1g, 0.169m㏖)을 넣고, 3시간 동안 교반하였다. 용매와 과량의 산을 증발시켜 제거하고, 잔여물을 DMF 1㎖에 녹이고, i-Pr2NEt(0.53㎖, 3.09m㏖)를 가한 뒤, 상기 카르복실산 스톡용액 0.1㎖(0.0103m㏖)과 브로모트리스피롤리디노 포스포니움 헥사플루오로포스페이트(PyBrOP) 79.7㎎(0.169m㏖)을 넣고, 16시간 동안 교반시켰다. 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸아세테이트(90㎖)로 희석시킨 후, 10% 염산 수용액(3×90㎖), 포화 NaHCO3수용액(2×90㎖), 포화 소금물(90㎖)로 세척한 후, Na2SO4로 수분을 제거하고 농축하여, 서브 라이브러리의 붉은빛의 갈색 오일을 얻었다.
수율 : 20㎎(20%)
FABMSm/z: 533.26, 595.367, 609.305, 645.32, 659.38
4b-2) 서브 라이브러리 pM1S1-5의 제조
수율 : 33㎎(35%), 노란색 오일
FABMSm/z: 485.12, 547.119, 561.11, 597.11, 611.11
4b-3) 서브 라이브러리 pM3S1-5의 제조
수율 : 11㎎(10%), 오렌지색 오일
FABMSm/z: 547.31, 609.25, 623.34, 659, 673.31
4b-4) 서브 라이브러리 pM4S1-5의 제조
수율 : 30㎎(25%), 오렌지색 오일
FABMSm/z: 563, 625.19, 639.15, 675, 689.2
4b-5) 서브 라이브러리 pM5S1-5의 제조
수율 : 41㎎(34%), 노란색 오일
FABMSm/z: 575.20, 637.20, 651.28, 687.26, 701.28
4b-6) 서브 라이브러리 pM6S1-5의 제조
수율 : 26㎎(20%), 오렌지색 오일
FABMSm/z: 623.18, 685.21, 699.21, 735.24, 749.24
4b-7) 서브 라이브러리 pM7S1-5의 제조
수율 : 26㎎(20%), 붉은빛이 도는 갈색 오일
FABMSm/z: 636.18, 698.17, 712.2, 748.20, 762.25
4b-8) 서브 라이브러리 pM8S1-5의 제조
수율 : 35㎎(30%), 노란색 오일
FABMSm/z: 566, 628.09, 642, 678, 692.14
4b-9) 서브 라이브러리 pM9S1-5의 제조
수율 : 112㎎(82%), 연한 갈색 오일
FABMSm/z: 680.04, 742, 756, 792.14, 806.11
4b-10) 서브 라이브러리 pM10S1-5의 제조
수율 : 18㎎(1%), 노란색 오일
FABMSm/z: 525.29, 587.26, 601.32, 6.37.30, 651.32
4c : 상기 3에서 제조한 화합물(pM1 ~ pM12)에 카르복실산(S1)을 반응시킨 화합물 pM2S1 ~ pM10S1의 제조
4c-1) N-아세틸-N'-(4-메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM4S1)의 제조
4㎖ 바이알에 클로로포름(1㎖), 4M 염산-다이옥산(1㎖), 상기 3에서 제조한 pM4(9.19㎎, 0.017m㏖)을 넣고, 3시간 동안 교반하였다. 용매와 과량의 산을 증발시켜 제거하고, 잔여물을 DMF 1㎖에 녹이고, i-Pr2NEt(9㎕, 0.051m㏖)를 가한 뒤, 아세트산(S1) 0.001g(0.019mmol, 1.1eq.), PyBrOP 8.7㎎(0.019m㏖)을 넣고, 16시간 동안 교반시켰다. 교반한 후, 반응 혼합물을 에틸아세테이트(40㎖)로 희석시킨 후, 10% 염산 수용액(3×30㎖), 포화 NaHCO3수용액(2×30㎖), 포화 소금물(30㎖)로 세척한 후, Na2SO4로 수분을 제거하고 농축하여, 갈색빛의 노란색 오일을 얻었다.
수율 : 11.9㎎(71%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.5(11H,m), 6.8-6.9(2H,m), 4.4(1H,d), 4.3(2H,m), 4.1-4.2(2H,m), 3.8(2H,d), 3.7-3.8(3H,m), 3.6(4H,m), 2.3(4H,m), 1.9(3H,m)
FABMSm/z: 563.05
4c-2) N-아세틸-N'-벤질-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM2S1)의 제조
수율 :1㎎(2%), 흰색 가루
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(14H,m), 4.4(3H,ds), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.6(4H,s), 2.4(4H,m), 2.0(3H,s)
FABMSm/z: 533.02
4c-3) N-아세틸-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM3S1)의 제조
수율 : 58㎎(64%), 붉은빛의 갈색 가루
녹는점(mp) : 100-110℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-7.5(13H,m), 4.5(1H,s), 4.3-4.4(2H,t), 4.3(2H,m), 4.0(2H, d), 3.6(4H,m), 2.3-2.4(4H,m), 2.1(3H,s), 2.0(3H,d)
FABMSm/z: 547.10
HRFABMSm/z: 547.2475
4c-4) N-아세틸-N'-(1-메틸-3-페닐프로필)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM5S1)의 제조
수율 : 23㎎(76%), 붉은빛의 갈색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.5(14H,m), 4.4-4.5(1H,d), 4.2-4.3 (2H,d), 4.0-4.2(1H,m), 3.9-4.0(2H,m), 3.6(4H,m), 2.5-2.7(2H,m), 2.3-2.5 (4H,m), 2.0(3H,d) 1.6-1.8(2H,m), 1.0-1.1(3H,dd)
FABMSm/z: 575.05
4c-5) N-아세틸-N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM6S1)의 제조
수율 : 7.3㎎(33%), 갈색빛의 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(9H,m), 6.6(2H,m), 4.4(1H,d), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 4.1(2H,d), 3.8(9H,m), 3.7(4H,m), 2.4(4H,m), 2.2(3H,m)
FABMSm/z: 623.14
4c-6) N-아세틸-N'-(2-(4-(4-클로로페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM7S1)의 제조
수율 : 10.0㎎(13%), 연한 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-7.7(14H,m), 4.22(1H,s), 4.2(2H,d), 4.1-4.15(2H,d), 3.5-3.8(4H,m), 2.4(4H,m), 2.0(3H,m)
FABMSm/z: 635.96
4c-7) N-아세틸-N'-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM8S1)의 제조
수율 : 20.0㎎(17%), 연한 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(9H,m), 6.6(1H,d), 4.6(1H,s), 4.4 (2H,d), 4.0-4.3(2H,d), 3.5-3.7(4H, m), 2.5(4H,m), 2.4(3H,m)
FABMSm/z: 566.02
4c-8) N-아세틸-N'-(2-(4-(4-브로모페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM9S1)의 제조
수율 : 40.0㎎(20%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(14H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.1-4.15(2H,d), 3.4-3.6(4H,m), 2.4(4H,m), 2.0(3H,s)
FABMSm/z: 679.92
4c-9) N-아세틸-N'-사이클로헥실-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM10S1)의 제조
수율 : 10.0㎎(30%), 흰색 가루
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(14H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.0 (4H,dd), 3.8(1H,s), 3.4-3.6(4H,m), 2.0(3H,s) 1.9-1.8(2H,s), 1.7(2H,m), 1.6 (1H,m)
FABMSm/z: 525
4d : 상기 3에서 제조한 화합물(pM1 ~ pM12)에 카르복실산(S2)을 반응시킨 화합물 pM2S2 ~ pM10S2의 제조
4d-1) N-벤조일-N'-(4-메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM4S2)의 제조
4㎖ 바이알에 클로로포름(1㎖), 4M 염산-다이옥산(1㎖), 상기 3에서 제조한 pM4 26.5㎎(0.049m㏖)을 넣고, 3시간 동안 교반하였다. 용매와 과량의 산을 증발시켜 제거하고, 잔여물을 DMF 1㎖에 녹이고, i-Pr2NEt 0.026㎖(0.15m㏖)를 가한 뒤, 벤조익산(S2) 6.6㎎(0.054mmol, 1.1eq.), PyBrOP 25㎎(0.054m㏖)을 넣고, 16시간 동안 교반시켰다. 교반한 후, 반응혼합물을 에틸아세테이트(40㎖)로 희석시키고, 10% 염산 수용액(3×30㎖), 포화 NaHCO3수용액(2×30㎖), 포화 소금물(30㎖)로 세척한 후, Na2SO4로 수분을 제거하고 농축하여, 붉은빛의 갈색 오일을 얻었다.
수율 : 9㎎(53%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.5(11H,m), 6.8(2H,t), 4.4(1H,d), 4.3 (2H,m), 4.1-4.2(2H,m), 3.8(2H,d), 3.7-3.8(3H,m), 3.6(4H,m), 2.3(4H,m)
FABMSm/z: 655.08
4d-2) N-벤조일-N'-4-벤질-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM2S2)의 제조
수율 : 7㎎(14%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.8(19H,m), 4.4(3H,ds), 4.2(2H,d), 3.8 (2H,d), 3.6(4H,s), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 595.20
4d-3) N-벤조일-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM3S2)의 제조
수율 : 67㎎(66%), 붉은색 오일
녹는점(mp) : 98-118℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.5(18H,m), 4.4(1H,s), 4.3-4.4(2H,m), 4.0-4.1(2H,m), 3.6(2H,m), 3.3-3.5(4H,s), 2.3(4H,d), 2.0-2.2(3H,m)
FABMSm/z: 609.1
HRFABMSm/z: 609.2630
4d-4) N-벤조일-N'-(1-메틸-3-페닐프로필)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM5S2)의 제조
수율 : 37㎎(77%), 노란색 오일
녹는점(mp) : 92-105℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.4-7.8(5H,m) 7.1-7.4(14H,m), 4.4(1H,d), 4.2-4.3(2H,m), 3.9(1H,m), 3.7-3.8(2H,m), 3.5-3.7(4H,m), 2.5-2.7(2H,m), 2.3-2.5 (4H,m), 1.7(2H,m), 1.0-1.2(3H,dd)
FABMSm/z: 637.03
4d-5) N-벤조일-N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM6S2)의 제조
수율 : 5㎎(21%), 붉은빛의 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.4-7.7(5H,m), 7.2-7.4(9H,m), 6.6(2H,d), 4.4(1H,d), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 4.1(2H,s), 3.8(9H,d), 3.6(4H,d), 2.2-2.5(4H,d)
FABMSm/z: 707.06
4d-6) N-벤조일-N'-(2-(4-(4-클로로페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM7S2)의 제조
수율 : 35.0㎎(53%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-8.0(19H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.1-4.15(2H,d), 3.6-3.8(4H,m), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 698.03
4d-7) N-벤조일-N'-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM8S2)의 제조
수율 : 40.0㎎(27%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 8.0-8.2(5H,m) 7.2-7.7(9H,m), 6.6(1H,s), 4.5-4.6(1H,s), 4.2-4.5(2H,d), 4.1-4.2(2H,d), 3.4-3.7(4H, d), 1.3(4H,m)
FABMSm/z: 628.16
4d-8) N-벤조일-N'-(2-(4-(4-브로모페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM9S2)의 제조
수율 : 40.0㎎(21%), 연한 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(19H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.1-4.15(2H,d), 3.4-3.6(4H,m), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 741.95
4d-9) N-벤조일-N'-사이클로헥실-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM10S2)의 제조
수율 : 35㎎(95%), 갈색빛의 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-8.1(19H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.0 (4H,dd), 3.8(1H,s), 3.4-3.6(4H,m), 1.9-1.8(2H,s), 1.7(2H,m), 1.6(1H,m), 1.4-1.2 (5H,m)
FABMSm/z: 586
4e : 상기 3에서 제조한 화합물(pM1 ~ pM12)에 카르복실산(S3)을 반응시킨 화합물 pM2S3 ~ pM10S3의 제조
4e-1) N-페닐아세틸-N'-(4-메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM4S3)의 제조
4㎖ 바이알에 클로로포름(1㎖), 4M 염산-다이옥산(1㎖), 상기 3에서 제조한 pM4 0.031g(0.050m㏖)을 넣고, 3시간 동안 교반하였다. 용매와 과량의 산을 증발시켜 제거하고, 잔여물을 DMF 1㎖에 녹이고, i-Pr2NEt 26.1㎕(0.15m㏖)를 가한 뒤, 페닐아세트산(S3) 7.49㎎(0.055mmol, 1.1eq.), PyBrOP 25.64㎎(0.055m㏖)을 넣고, 16시간 동안 교반시켰다. 교반한 후, 반응혼합물을 에틸아세테이트(40㎖)로 희석시키고, 10% 염산 수용액(3×30㎖), 포화 NaHCO3수용액(2×30㎖), 포화 소금물(30㎖)로 세척한 후, Na2SO4로 수분을 제거하고 농축하여, 갈색빛의 노란색 오일을 얻었다.
수율 : 25㎎(77%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.6(11H,m), 7.0-7.2(5H,m) 6.8(2H,t), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.7(3H,s), 3.6(4H,m), 3.4(2H,s), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 639.10
4e-2) N-페닐아세틸-N'-벤질-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM2S3)의 제조
수율 : 6㎎(17%), 연한 노란색 가루
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(14H,m), 7.0-7.2(5H,m), 4.4(3H,ds), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.6(4H,s), 3.4(2H,s), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 609.21
4e-3) N-페닐아세틸-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM3S3)의 제조
수율 : 77㎎(74%), 붉은빛의 갈색 가루
녹는점(mp) : 98-105℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(13H,m), 7.1-7.2(5H,m), 4.6(1H,s), 4.4(2H,d), 4.0-4.1(2H,d), 3.65(2H, s), 3.6(4H,m), 2.8(2H,d), 2.3-2.4(4H,m), 2.3 (3H,s)
FABMSm/z: 623.30
HRFABMSm/z: 623.2786
4e-4) N-페닐아세틸-N'-(1-메틸-3-페닐프로필)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM5S3)의 제조
수율 : 14㎎(34%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.5(14H,m), 7.1-7.2(5H,m), 4.4(1H,d), 4.2-4.3(2H,m), 3.9(1H,m), 3.7-3.8(2H,m), 3.5-3.7(4H,m), 3.4(2H,s), 2.5-2.7(2H,m), 2.3-2.5(4H,m), 1.7(2H,m), 1.0-1.2(3H,dd)
FABMSm/z: 651.15
4e-5) N-페닐아세틸-N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM6S3)의 제조
수율 : 2㎎(9%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-7.6(9H,m), 7.2(5H,m), 6.6(2H,d), 4.6 (1H,s), 4.4(2H,d), 4.3(2H,m), 4.0-4.1(2H,d), 3.7-3.8(9H,d), 3.6(6H,m), 2.3-2.4 (4H,m)
FABMSm/z: 699.1
4e-6) N-페닐아세틸-N'-(2-(4-(4-클로로페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM7S3)의 제조
수율 : 80㎎(99%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-8.0(14H,m), 7.0-7.2(5H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.1-4.15(2H,d), 3.6-3.8(4H,m), 3.4(2H,s), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 711.95
4e-7) N-페닐아세틸-N'-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM8S3)의 제조
수율 : 44㎎(32%), 붉은빛의 갈색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.55(9H,m), 7.2(5H,m), 6.6(1H,t), 4.65 (1H,s), 4.3-4.4(2H,q), 3.8-4.1(2H,m), 3.6-3.7(6H, m), 2.4-2.5(4H,m)
FABMSm/z: 642.14
4e-8) N-페닐아세틸-N'-(2-(4-(4-브로모페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM9S3)의 제조
수율 : 50㎎(23%), 붉은빛의 갈색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.7(14H,m), 7.0-7.2(5H,m), 4.05-4.2 (5H,m), 3.6-3.7(4H,m), 3.45(2H,t), 2.4(4H,q)
FABMSm/z: 755.98
4e-9) N-페닐아세틸-N'-사이클로헥실-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM10S3)의 제조
수율 : 10㎎(26%), 연한 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-7.7(14H,m), 7.2-7.3(5H,m), 4.45 (1H,t), 4.3(2H,s), 4.0-4.3(4H,m), 3.6-3.7(4H,m), 3.3(2H,d), 1.7(2H,m), 1.6 (2H,m), 1.2-1.4(5H,m)
FABMSm/z: 601.00
4f : 상기 3에서 제조한 화합물(pM1 ~ pM12)에 카르복실산(S4)을 반응시킨 화합물 pM2S4 ~ pM10S4의 제조
4f-1) N-(2-나프토일)-N'-(4-메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM4S4)의 제조
4㎖ 바이알에 클로로포름(1㎖), 4M 염산-다이옥산(1㎖), 상기 3에서 제조한 pM4 0.035g(0.056m㏖)을 넣고, 3시간 동안 교반하였다. 용매와 과량의 산을 증발시켜 제거하고, 잔여물을 DMF 1㎖에 녹이고, i-Pr2NEt 29.3㎕(0.168m㏖)을 가한 뒤, 2-나프토익산(S4) 10.68㎎(0.062mmol, 1.1eq.), PyBrOP 28.9㎎(0.062m㏖)을 넣고, 16시간 동안 교반시켰다. 교반한 후, 반응혼합물을 에틸아세테이트(40㎖)로 희석시키고, 10% 염산 수용액(3×30㎖), 포화 NaHCO3수용액(2×30㎖), 포화 소금물(30㎖)로 세척한 후, Na2SO4로 수분을 제거하고 농축하여, 붉은빛의 갈색 오일을 얻었다.
수율 : 29㎎(77%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-8.0(18H,m) 6.8(2H,t), 4.4(1H,s),4.3(2H,d), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.7(3H,s), 3.6(4H,m), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 575.24
4f-2) N-(2-나프토일)-N'-벤질-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM2S4)의 제조
수율 : 8㎎(19%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-8.0(21H,m), 4.4(3H,ds), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.6(4H,s), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 645.2
4f-3) N-(2-나프토일)-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM3S4)의 제조
수율 : 93㎎(85%), 붉은색 가루
녹는점(mp) : 105-120℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-8.0(20H,m), 4.5(1H,s), 4.0-4.2(2H,m), 3.6-3.7(2H, m), 3.2-3.5(4H,m), 2.3-2.5(4H,q), 1.8-2.1(3H,m)
FABMSm/z: 659.15
HRFABMSm/z: 659.2787
4f-4) N-(2-나프토일)-N'-(1-메틸-3-페닐프로필)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM5S4)의 제조
수율 : 43㎎(97%), 붉은빛의 갈색 오일
녹는점(mp) : 100-134℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-8.0(21H,m), 4.4(1H,d), 4.2-4.3(2H,m), 3.9(1H,m), 3.7-3.8(2H,m), 3.5-3.7(4H,m), 2.5-2.7(2H,m), 2.3-2.5(4H,m), 1.7(2H,m), 1.0-1.2(3H,dd)
FABMSm/z: 687.15
4f-5) N-(2-나프토일)-N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM6S4)의 제조
수율 : 4㎎(14%), 백색 가루
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-8.1(16H,m), 6.7(2H,d), 4.5(1H,s), 4.45(2H,d), 4.4(2H,d), 4.05(2H,m), 3.75(9H,d), 3.6(4H,s), 2.4-2.5(4H,d)
FABMSm/z: 735.22
4f-6) N-(2-나프토일)-N'-(2-(4-(4-클로로페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM7S4)의 제조
수율 : 60㎎(61%), 노란빛의 갈색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-8.0(21H,m), 4.2-4.3(5H,m), 3.4-3.8 (4H,m), 1.8-2.0(4H,m)
FABMSm/z: 748.03
4f-7) N-(2-나프토일)-N'-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM8S4)의 제조
수율 : 40㎎(25%), 백색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-8.0(16H,m), 6.6(1H,d), 4.4(1H,s), 4.3(2H,d), 3.9-4.0(2H,d), 3.5-3.7(4H, m), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 678.00
4f-8) N-(2-나프토일)-N'-(2-(4-(4-브로모페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM9S4)의 제조
수율 : 40㎎(21%), 갈색빛의 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.4-8.0(21H,m), 4.0-4.4(5H,m), 3.4-3.8(4H,m), 2.4(4H,d)
FABMSm/z: 791.92
4f-9) N-(2-나프토일)-N'-사이클로헥실-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM10S4)의 제조
수율 : 80㎎(34%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-8.0(21H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.0(4H,dd), 3.8(1H,s), 3.4-3.6(4H,m), 1.9-1.8(2H,s), 1.7(2H,m), 1.6(1H,m), 1.4-1.2(5H,m)
FABMSm/z: 637.28
4g : 상기 3에서 제조한 화합물(pM1 ~ pM12)에 카르복실산(S5)을 반응시킨 화합물 pM2S5 ~ pM10S5의 제조
4g-1) N-(2-나프틸아세틸)-N'-(4-메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM4S5)의 제조
4㎖ 바이알에 클로로포름(1㎖), 4M 염산-다이옥산(1㎖), 상기 3에서 제조한 pM4 0.036g(0.058m㏖)을 넣고, 3시간 동안 교반하였다. 용매와 과량의 산을 증발시켜 제거하고, 잔여물을 DMF 1㎖에 녹이고, i-Pr2NEt 30.3㎕(0.174m㏖)을 가한 뒤, 2-나프틸아세트산(S5) 11.9㎎(0.064mmol, 1.1eq.), PyBrOP 29.84㎎(0.064m㏖)을 넣고, 16시간 동안 교반시켰다. 교반한 후, 반응혼합물을 에틸아세테이트(40㎖)로 희석시키고, 10% 염산 수용액(3×40㎖), 포화 NaHCO3수용액(2×40㎖), 포화 소금물(30㎖)로 세척한 후, Na2SO4로 수분을 제거하고 농축하여, 갈색빛의 노란색 오일을 얻었다.
수율 : 34㎎(84%)
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.9(18H,m), 6.8-6.9(2H,m), 4.5(1H,s), 4.2(2H,t), 3.9-4.0(2H,m), 3.75(2H,d), 3.7(3H,d), 3.4(4H,m), 3.3(2H,s), 2.3 (4H,m)
FABMSm/z: 689.01
4g-2) N-(2-나프틸아세틸)-N'-벤질-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM2S5)의 제조
수율 : 8㎎(25%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.5(21H,m), 4.4(3H,ds), 4.2(2H,d), 3.8(2H,d), 3.6(4H,s), 3.5(2H,s), 2.4(4H,m)
FABMSm/z: 659.2
4g-3) N-(2-나프틸아세틸)-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM3S5)의 제조
수율 : 91㎎(82%), 붉은색 가루
녹는점(mp) : 95-116℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.1-7.9(20H,m), 4.4(1H,d), 4.3-4.4(2H,m), 4.0-4.2(2H,d), 3.8(2H,s), 3.5-3.6(4H,m), 3.1(2H,m), 2.8(4H,d), 2.3-2.4(4H,m)
FABMSm/z: 673.21
HRFABMSm/z: 673.2943
4g-4) N-(2-나프틸아세틸)-N'-(1-메틸-3-페닐프로필)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM5S5)의 제조
수율 : 40㎎(90%), 노란색 오일
녹는점(mp) : 85-103℃
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-7.7(21H,m), 4.4(1H,d), 4.2-4.3(2H,m), 3.9(1H,m), 3.7-3.8(2H,m), 3.4-3.7(4H,m), 3.5(2H,s), 2.5-2.7(2H,m), 2.3-2.5 (4H,m), 1.7(2H,m), 1.0-1.2(3H,dd)
FABMSm/z: 701.13
4g-5) N-(2-나프틸아세틸)-N'-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM6S5)의 제조
수율 : 10㎎(39%), 연한 노란색 가루
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(16H,m), 6.6(2H,d), 4.65(1H,s), 4.4 (2H,d), 4.3(2H,q), 4.0-4.2(2H,d), 3.7-3.8(9H,m), 3.7(2H,m), 3.5-3.6(4H,m), 2.3-2.4(4H,m)
FABMSm/z: 771.18
4g-6) N-(2-나프틸아세틸)-N'-(2-(4-(4-클로로페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM7S5)의 제조
수율 : 60㎎(47%), 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.0-7.8(21H,m), 4.2(1H,s), 4.15(2H,d), 3.7-3.8(4H,m), 3.4-3.5(2H,dt), 2.1-2.4(4H,m)
FABMSm/z: 762.11
4g-7) N-(2-나프틸아세틸)-N'-(3-(5-t-부틸이소옥사졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM8S5)의 제조
수율 : 44㎎(32%), 연한 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(16H,m), 6.6(1H,d), 4.7(1H,s), 4.4 (2H,t), 4.1-4.0(2H,d), 3.9-4.0(4H, m), 3.8-3.9(2H,s), 1.9(4H,s)
FABMSm/z: 692.10
4g-8) N-(2-나프틸아세틸)-N'-(2-(4-(4-브로모페닐)티아졸))-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM9S5)의 제조
수율 : 60㎎(22%), 붉은빛의 노란색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.3-8.0(21H,m), 4.7(1H,s), 4.4-4.6(2H,q), 4.2-4.3(2H,d), 3.6-4.1(4H,m), 3.5(2H,m), 3.3(4H,d)
FABMSm/z: 805.82
4g-9) N-(2-나프틸아세틸)-N'-사이클로헥실-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드(pM10S5)의 제조
수율 : 6㎎(13%), 붉은빛의 갈색 오일
1H-NMR(Acetone-d6, 400㎒) : 7.2-7.9(21H,m), 4.45(1H,s), 4.4(2H,d), 4.0(4H,dd), 3.8(1H,s), 3.5(2H,s), 3.4-3.5(4H,m), 1.9-1.8(2H,s), 1.7(2H,m), 1.6(1H,m), 1.4-1.2(5H,m)
FABMSm/z: 651.02
실시예 2 : 각 라이브러리의 활성 테스트
기니아 피그 회장(guinea-pig ileum)을 사용하여 각 라이브러리의 활성 테스트를 시행하였다.
250~600g의 수컷 하틀리계 기니아 피그(Male Hartley guinea-pigs)를 실험 전 하룻밤 굶기고 단두하였다.
회장과 맹장 연결부위 2㎝ 위로부터 40㎝를 잘라서 95% O2/ 5% CO2를 가지는 37℃ 타이로드 용액(mM)[NaCl 136.9, KCl 2.7, CaCl21.8, MgCl21.15, NaH2PO40.4, NaHCO311.9, glucose 5.6]에 담갔다. 이 중 회장 아래쪽 끝부분의 10㎝를 사용하였다. 회장 근육을 1.5~2㎝로 자른 뒤, 37℃ 타이로드 용액이 들어 있는 50㎖ 기관 욕조(organ bath)에 장치하고, 95% O2/ 5% CO2를 타이로드 용액에 주입시켰다.
1시간 동안 안정화 시킨 후, 20분마다 2~3회 브라디키닌(1uM)에 대한 수축 반응을 관찰하여, 회장 수축반응의 민감성과 재연성을 측정하였다. 회장 중에 재연성이 확인된 것만 사용하였다.
브라디키닌의 분해를 방지하고 신경 활성과 프로스타글라딘 생성을 막기 위하여 타이로드 용액에 각 1uM의 캅토프릴, 아트로핀, 디티오트레이톨, 인도메타신을 가하여 사용하였다. 대조군은 길항제 대신 생리식염수를 사용하였다.
1) 0.1 u M 농도에서 브라디키닌 길항제의 활성 측정
세척 및 안정화 시킨 후, 상기 실시예 1에서 제조한 각 0.1uM의 브라디키닌 길항제를 가하고, 5분 뒤 브라디키닌을 가하였다. 이 실험은 모든 라이브러리와 개별물질에서 동일한 농도(0.1uM)로 행하였다.
회장 수축 반응은 Grass model 76E 다원 기록기(polygraph)로 측정하였으며, 결과는 표 1과 표 2에 나타내었다.
시료 억제율(%) 시료 억제율(%)
pM3-H 29.40 pM8-H 29.40
pM4-H 52.38 pM10-H 54.54
pM5-H 28.00 pM11-H 33.33
pM6-H 57.69 pM12-H 27.27
시료 억제율(%) 시료 억제율(%)
pM1S1-5 12.3±6.2 pM2S1-5 22.4±5.9
pM1S3pM1S5 12.0014.00 pM2S2pM2S5 20.0016.66
pM3S1-5 32.0±12.3 pM4S1-5 32.8±15.2
pM3S1pM3S2pM3S3pM3S4pM3S5 52.6328.5742.8621.0520.00 pM4S3pM4S4pM4S5 45.4530.0023.53
pM5S1-5 28.8±10.9 pM6S1-5 35.8±11.2
pM5S1pM5S2pM5S3pM5S4 26.9028.7527.2728.57 pM6S1pM6S2 20.0021.05
pM7S1-5 6.3±6.5 pM8S1-5 24.6±17.7
pM7S1pM7S2pM7S5 6.389.622.13 pM8S1pM8S4pM8S5 10.0034.1821.75
pM9S1-5 9.0±4.2 pM10S1-5 18.2±10.3
pM9S3pM9S5 12.516.66 pM10S2 12.50
상기 표 1과 표 2에서 보듯이, 질소 보호기를 제거한 화합물(pM3-H ~ pM12-H)들의 억제효과는 27.27 ~ 57.69% 이고, 라이브러리 pM3S1-5는 32.01%의 억제효과를 보일 때, 그것의 개별물질 pM3S1 ~ pM3S5는 평균 33.02%로서 유사한 값을 보였다. 이 경우, 라이브러리와 개별물질의 브라디키닌에 대한 억제효과가 비슷한 것으로 확인되었다. 따라서, 조합화학을 이용하여 합성하므로써, 효과가 좋은 특정 라이브러리만 석출하여 그것의 개별물질을 확인하는 방법으로 약물 스크리닝하는데 크게 기여한다.
반면 라이브러리 pM4S1-5, pM6S1-5는 그들의 개별물질에 비하여 상대적으로 높은 브라디키닌 길항효과를 보였다. 이 경우에는 각각의 개별물질 사이에 상승작용 가능성이 있는 것으로 보인다. 따라서, 특정 개별물질들끼리 함께 있음으로 해서 그들의 활성을 증가하여 라이브러리가 예상보다 높은 효과를 나타냄을 알 수 있다. 그러므로, 조합화학을 통하여 서로 상승효과를 나타내는 약물들의 상관관계를 알아내어 1개 이상의 물질들의 조합으로 더 효과가 좋은 약물을 개발하는데 이용할 수 있다.
2) 농도 변화에 따른 브라디키닌 길항제의 활성 측정
또한, 브라디키닌에 대한 축적농도-반응곡선을 알아보기 위하여 브라디키닌의 농도(1nM ~ 3uM)에 변화를 주면서 실험을 하였다.
라이브러리와 개별물질의 약리활성에 따라 상대적으로 강한 브라디키닌 길항성을 갖는 3개의 물질을 선택하였다.
각 곡선의 끝에는 회장의 최대반응을 확인하기 위해 KCl 80mM을 가하였다. 세척 및 안정화 시킨 후, 개별물질의 농도(0.03uM-1.0uM)를 변화시키면서 활성을 측정하였다. Hoe140을 대조군으로 하여 0.01 ~ 0.3uM 농도에서 동일하게 실험하였다.
결과는 도 3 ~ 도 6에 나타내었다.
pM3S3과 pM4S3은 브라디키닌에 대한 최대반응(Emax)은 감소하지만 ED50값은 감소하지 않으므로, 브라디키닌을 비경쟁적 혹은 간접적으로 억제함을 알 수 있다.
또한, pM6-H는 브라디키닌 유도 수축을 경쟁적으로 억제하며, IC50값은 1.09×10-6M 로 나타났다.
본 발명의 브라디키닌 길항 작용을 갖는 신규한 비펩타이드성 화합물은, 브라디키닌 수용체에 길항작용을 나타내어 브라디키닌에 의해 매개되는 각종 질환을 예방 또는 치료하는 효과를 가져온다.
또한 본 발명의 화합물의 제조방법은 액상 조합화학 방법을 이용하므로써, 빠르고, 효율적이고, 무한한 스케일로, 순도가 높고, 간단한 공정으로 다수의 다양한 화합물을 제공하는 효과를 가져온다.

Claims (9)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
    <화학식 1>
    상기 화학식 1에서 R1은 이소프로필, 벤질, 4-메틸벤질, 4-메톡시벤질, 1-메틸-3-페닐 프로필, 3,4,5-트리메톡시벤질, 2-(4-(4-클로로페닐)티아졸), 3-(5-t-부틸이소옥사졸), 2-(4-(4-브로모페닐)티아졸), 사이클로헥실, 5-(3-메틸이소옥사졸) 및 3,4-디벤질옥시펜에틸로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종을 나타내며, R2는 H 또는 R3CO 이고, R3는 메틸, 페닐, 벤질, 나프틸(C10H7) 및 C10H7CH2로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종을 나타낸다.
  2. 제 1항에 있어서,
    i)N-(4-메톡시벤질)-N'-1-(4-클로로벤질하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드,
    ⅱ)N-(3,4,5-트리메톡시벤질)-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드,
    ⅲ)N-사이클로헥실-N'-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 디아미드,
    ⅳ)N-아세틸-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드,
    ⅴ)N-페닐아세틸-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드,
    ⅵ)N-(2-나프토일)-N'-(4-메틸벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드 및
    ⅶ)N-페닐아세틸-N'-(4-메톡시벤질)-N"-1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진 이미노디아세트산 트리아미드
    로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염.
  3. 삭제
  4. 액상 조합화학 방법을 이용하여, 1) 질소가 보호기로 보호된 이미노디아세트산에, 인-시츄(in-situ) 반응으로 EDCI를 사용하여 이미노디아세트산 무수물을 형성하고, 아민류와 반응시키는 단계, 2) 1)에서 생성된 화합물에 1-(4-클로로벤즈하이드릴)피페라진을 반응시키는 단계, 3) 염산과 다이옥산으로 질소에 결합되어 있던 보호기를 제거하는 단계 및 4) 3)에서 생성된 화합물에 카르복실산을 결합시키는 단계로 이루어지는 것을 특징으로 하는 청구항 1 또는 청구항 2의 화합물의 제조방법.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 1)단계에서 보호기는 벤질, 벤질옥시카르보닐 및 t-부틸옥시카르보닐기로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 청구항 1 또는 청구항 2의 화합물의 제조방법.
  6. 제 5항에 있어서, 1)단계에서 아민류는 벤질아민, 4-메틸벤질아민, 4-메톡시벤질아민, 1-메틸-3-페닐 프로필아민, 3,4,5-트리메톡시벤질아민, 2-(4-(4-클로로페닐)티아졸)아민, 3-(5-t-부틸이소옥사졸)아민, 2-(4-(4-브로모페닐)티아졸)아민, 사이클로헥실아민, 5-(3-메틸이소옥사졸)아민 및 3,4-디벤질옥시펜에틸아민으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 청구항 1 또는 청구항 2의 화합물의 제조방법.
  7. 제 6항에 있어서, 4)단계에서 카르복실산은 아세트산, 벤조익산, 페닐아세트산, 2-나프토익산 및 2-나프틸아세트산으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종인 것을 특징으로 하는 청구항 1 또는 청구항 2의 화합물의 제조방법.
  8. 삭제
  9. 제 1항 또는 제 2항의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하고, 브라디키닌이 매개하는 천식, 알레르기성 비염, 관절염, 쇼크, 류마티스성 관절염, 뇌부종, 혈관신경부종 및 급성 췌장염으로 이루어지는 군으로부터 선택되는 1종의 질병의 예방 또는 치료에 사용되는 약학적 조성물.
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