KR100398307B1

KR100398307B1 - 코우팅 처리된 살충제, 이의 제조방법 및 이를 함유한 조성물

Info

Publication number: KR100398307B1
Application number: KR1019950022546A
Authority: KR
Inventors: 파크루딘아마드
Original assignee: 와이어쓰 홀딩스 코포레이션
Priority date: 1994-07-27
Filing date: 1995-07-27
Publication date: 2003-12-11
Also published as: UA47388C2; AU3203195A; EP0775208A2; WO1996003509A3; BR9508441A; ZA956277B; MY131774A; US5662897A; US5965123A; CO4600001A1; YU50695A; WO1996003509A2; ZA956276B; AU692290B2; CA2196044A1; US5858353A; CN1164871A; IL114741A0

Abstract

본 발명은 코우팅처리된 살충제 및 상기의 제조 방법을 제공한다. 또한, 본 발명은 코우팅처리된 살충제를 함유하는 수화성 분말형 살충제 조성물을 제공한다.

Description

코우팅처리된 살충제, 이의 제조방법 및 이를 함유한 조성물

본 발명은 코우팅처리된 살충제 및 상기의 제조 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 코우팅처리된 살충제를 함유하는 수화성 분말형 살충제 조성물에 관한 것이다.

특정 살충제는 태양으로부터의 자외선에 의해 불활성화된다. 이 살충제는 원치않는 해충을 방제하는 데에 유용하며 자외선에 노출될 지역에 적용되기 때문에, 상기 살충제를 함유하는 광에 안정한 조성물이 요구되고 있다.

자외선에 의한 살충제의 불활성화를 방지하기 위해, 자외선 흡수제 및/또는 반사제 및 살충제를 함유하는 조성물을 제조하여 왔다.

미합중국 특허 제 3,541,203호에는 곤충 방제를 위한 보호된 바이러스 조성물이 기재되어 있다. 바람직한 조성물로는 바이러스, 화학 광선 흡수 물질 및 중합체성 결합 물질이 포함된다. 그 특허에는 화학 광선 흡수 물질 및 바이러스의 혼합물을 에틸셀룰로스 중합체 물질과 함께 결합시키기위해, 혼합물을 톨루엔 용액내에서 에틸셀룰로오스와 배합하는 것을 공개하고 있다. 생성된 혼합물을 교반시키고, 폴리부타디엔으로 처리하고, 에틸 셀룰로스를 고형화시키는 석유 증류액내로 부어, 화학 광선 흡수물질 및 바이러스의 혼합물이 입자내에서 거의 균일하게 포함되는 매우 작은 입자로 된 에틸셀룰로스 중합체 물질을 얻는다. 이어서 입자를 부가량의 석유 증류액으로 수회 세척하여 잔류량의 액체 폴리부타디엔 물질을 완전히 제거한다. 불행히도, 미합중국 특허 제3,541,203호의 바람직한 조성물을 제조하는데 사용되는 방법은, 독성 물질의 사용 및 가연성 용매에 의한 다수의 세척 단계가 필요하기 때문에 전적으로 만족스럽지는 않다.

미합중국 특허 제 4,948,586호는 미세캡슐형 살충성 병원체를 공개하고 있다. 4개의 미세캡슐형 조성물은 오토그라파 캘리포니카 (Autographa Californica)NPV가 광에 의해 불활성화되는 것을 감소시키는 것으로 보인다. 그러나, 미세캡슐형 조성물은 태양광선에 노출되기 전 본래 활성의 30.7-71.43%만을 유지했다. 미합중국 특허 제 4,948,586호는 다수의 단계를 필요로 하고, 시간이 많이 소모되고, 노동 집약적인, 미세캡슐형 살충성 병원체의 제조 방법을 공개하고 있다. 미합중국 특허 제 4,948,586호에 기재된 미세캡슐형 살충성 병원체 또는 방법 중 어느것도, 살충성 병원체를 자외선의 영향으로부터 보호하는 데에는 전적으로 만족스럽지는 않은 것으로 나타난다.

본 발명의 목적은 자외선에 노출된 후에도 본래 활성을 상당한 양으로 유지하는 코우팅처리된 살충제를 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 목적은 상업적인 제조에 더욱 적합한 코우팅처리된 살충제를 제조하는 데에 간단하고, 덜 어려운 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 부가의 목적은 코우팅처리된 살충제를 함유한 수화성 분말형 살충제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 자외선에 노출된 후에도 본래 활성을 상당한 양으로 유지하는 코우팅처리된 살충제를 서술한다.

본 발명의 코우팅처리된 살충제는 2-25중량% pH-의존성 중합체, 0-약 5중량% 가소제, 약 5-45중량% 자외선 차단제, 0-약 75중량% 스틸벤 화합물, 0-약 10중량% 붕해제, 및 0-약 10중량% 윤활제로 구성된 매트릭스로 봉입된 살충제 코어를 포함한다.

부가로 본 발명은 코우팅처리된 살충제의 제조 방법, 및 코우팅처리된 살충제를 포함하는 수화성 분말형 살충제 조성물을 제공한다.

본 발명은 당 분야에 공지된 방법과 관련된 문제점을 회피하는 코팅처리된살충제의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 한 방법은 하기의 단계를 포함한다:

a) 아세톤, C₁-C₃알콜, 또는 이들의 배합물과 같은 유기 용매내 pH-의존성 중합체, 살충제, 임의로 가소제, 자외선 차단제, 임의로 스틸벤 화합물, 임의로 붕해제, 및 임의로 윤활제의 혼합물을 블렌딩시켜 균질의 현택액을 생산하는 단계;

b) 단계 (a)의 균질의 현택액을 건조시키는 단계 ; 및 임의로

c) 단계 (b) 의 건조된 물질을 분쇄하는 단계

유리하게, 상술한 본 발명의 방법은 다중의 혼합 및 에멀션화 단계의 사용을 필요로 하지 않고, 가연성 용매로 세척하는 다수의 세척 단계의 사용을 필요로 하지 않는 코우팅처리된 살충제의 제조를 위한 효과적인 2단계 방법 또는 3단계 방법을 제공한다. 부가로, 상술한 본 발명의 상기 방법은 바람직하게 살충제, 예를 들면 살충성 병원체를 유의하게 불활성화시키지 않는 아세톤/C₁-C₃알콜 용액을 사용한다. 당해 분야에 지적된 다른 유기 용매, 예를 들면 염화메틸렌은 살충제, 예를 들면 살충성 병원체를 유의하게 불활성화 시킬 수 있다.

상기 방법은 종래 방법들에 비해 상당히 진전된 것으로 생각되며, 유기용매를 사용하지 않는 바람직한 방법 역시 발명되었다.

고유하게, 코우팅처리된 살충제는 하기로 구성된 수성 방법으로 제조할 수는 것으로 발견되었다:

a) pH-의존성 중합체 및 임의로 가소제의 수성 혼합물을 제조하는 단계 ;

b) 염기를 사용하여 단계 (a)의 혼합물의 pH를 약 8.5-10으로 조정하여 pH-의존성 중합체를 용해시키는 단계 ;

c) 살충제, 자외선 차단제, 임의로 스틸벤 화합물, 임의로 붕해제 및 임의로 윤활제를 단계 (b)의 용액에 첨가하고, 블렌딩시켜 균질의 현탁액을 생산하는 단계,

d) 단계(c) 의 균질의 현탁액을 건조시키는 단계 ; 및 임의로

e) 단계 (d)의 건조된 물질을 제분하는 단계.

유리하게, 본 발명의 수성 방법은 다중 혼합 및 에멀션화 단계의 사용을 필요로 하지 않고, 가연성 용매를 사용한 다수의 세척 단계의 사용을 필요로 하지 않으며, 또한 유기 용매의 사용을 필요로 하지 않는다.

바람직하게, 본 발명의 코우팅처리된 살충제는 약 20㎛ 미만의 입자 크기를 갖고, 더욱 바람직하게 약 2㎛-10㎛ 의 입자 크기를 갖는다. 본 발명의 균질의 현탁액은 임의의 통상적인 건조 기술을 사용하여 건조시킬 수 있다. 현탁액은 바람직하게 분무 건조되거나, 공기 건조된다.

상기 서술된 방법으로 제조된 바람직하게 코우팅처리된 살충제는 2-25중량% pH-의존성 중합체, 약 5중량% 이하의 가소제, 약 5-45중량% 자외선 차단제, 약 75중량% 이하의 스틸벤 화합물, 약 10중량% 이하의 붕해제, 약 10% 이하의 윤활제로 구성된 매토릭스로 봉입된 살충제 코어로 구성된 것이다.

살충제 대 매트릭스 비는 바람직하게 1:1-1:10이다. 그리고, 아세톤 대 C₁-C₃알콜의 비는 바람직하게 약 1:9-9:1, 더욱 바람직하게 약 1:4-2:3이다. 유기 방법에 사용하기에 적합한 C₁-C₃알콜로는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올 및 n-프로판올이 포함되고, 이소프로판올이 바람직하다.

본 발명에서 사용하기에 적합한 살충제로는 자외선에 의해 불활성화되는 화학적 살충제 및 생물학적 살충제, 진드기구충제, 선충박멸제 및 살균제 또는 이들의 혼합물이 포함된다. 바람직한 살충제는 살충성 병원체, 예를 들면 바이러스 병원체, 세균 병원체, 및 균류 병원체이다. 사용하기에 적합한 바이러스 병원체로는 야생형 집시 나방 NPV ; 오토그라파 캘리포니카 NPV 들, 예를 들면 AcMNPV E2, AcMNPV L1, AcMNPV V8, V8vEGTDEL 및 V8vEGTDEL-AaIT ; 더글라스 (Douglas) 전나무 토속 (tossock) 나방 NPV ; 유럽 (European) 소나무 서 파리 (saw fly) NPV ; 및 헬리오티스 (Heliothis) 제아 NPV이 포함된다. 본 발명에서 사용하기에 가장 바람직한 살충제는 야생형 집시 나방 NPV, AcMNPV E2, AcMNPV L1, AcMNPV V8, V8vEGTDEL, V8vEGTDEL-AaIT, 및 헬리오티스 제아 NPV이다.

AcMNPV E2는 1994년 10월 26일자 공개된 EP 621337 에 기재되어 있다.

본 발명에서 사용하기에 적합한 pH-의존성 중합체로는 메타크릴산과 메타크릴산 메틸의 공중합체, 무수말레인산과 스티렌의 공중합체 등 또는 이들의 혼합물과 같이, 본질적으로 약 pH 5 이하에서 불용성인 중합체가 포함된다. 바람직한 pH-의존성 중합체로는 메타크릴산과 메타크릴산 메틸의 공중합체, 메타크릴산과 메타크릴산 메틸의 공중합체의 혼합물 및 무수말레인산과 스티렌의 공중합체가 포함된다. 가장 바람직한 pH-의존성 중합체는 Eudragit^?S (자유 카르복실기 대 에스테르의 비가 약 1:2인 메타크릴산과 메타크릴산 메틸의 공중합체; Rohm Pharma GmbH, Weiterstadt, Germany), Eudragit^?L (자유 카르복실기 대 에스테르의 비가 약 1:1인 메타크릴산과 메타크릴산 메틸의 공중합체 ; Rohm Pharma GmbH) 및 이들의 혼합물이다.

본 발명에 사용하기에 적합한 가소제로는 당 분야에 공지된 통상적인 여타의 약제, 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 프탈산 디에틸, 프탈산 디부틸, 시트르산 에테르, 피마자유, 트리아세틴 등 또는 상기의 혼합물이 포함되고, 약 300-1000의 분자량을 가지는 폴리에틸렌 글리콜이 바람직하다.

자외선 차단제를 본 발명에서 사용하여 살충제가 광에 의해 불활성화되는 것을 감소시킨다. 사용하기에 적합한 자외선 차단제로는 자외선 반사제 또는 이들의 혼합물이 포함된다. 자외선 흡수제로는 다양한 형태의 탄소, 예를 들면 유매 (carbon black); 벤조페논, 예를 들면 2-히드록시-4-메톡시벤조페논 (CYASORB^?UV 9, Cytec Ind), 2,2'-디히드록시-4-메톡시벤조페논 (CYASORB^?UV 24, Cytec Ind), 2-히드록시-4-아크릴오일옥시에톡시벤조페논(CYASORB^?UV 2098, Cytec Ind), 2-히드록시-4-n-옥톡시벤조페논(CYASORB^?UV 531, Cytec Ind.) 등 ; 및 염료, 예를 들면 콩고레드, 말라키트 녹색(malachite green), 말라키트 녹색 히드로클로라이트, 메틸 오렌지, 메틸 녹색, 밝은 녹색, 황색 아크리딘, FDC 녹색, FDC 황색, FDC 적색 등이 포함된다. 자외선 반사제로는 이산화 티타늄 등이 포함된다. 바람직한 자외선 차단제로는 유매, 벤조페논, 염료 및 이산화티타늄가 포함되고, 유매, CYASORB^?UV 9 및 CYASORB^?UV 24가 가장 바람직하다.

본 발명의 수성 방법에 사용하기에 적합한 염기로는 수산화암모늄, 수산화 알칼리금속, 수산화 알칼리성 토금속 등이 포함되고, 수산화 암모늄이 바람직하다. 특정 살충성 바이러스 병원체는 pH 10 이상에서 불활성화될 수 있다. 그러므로 pH를 약 8.5-10으로 조정하는 양의 염기를 선택하여, 용해를 용이하게 하고, 불활성화되는 기회를 감소시키는 것이 바람직하다.

스틸벤 화합물은 본 발명에 사용되어 살충제의 살충 활성을 향상시킨다. 본 발명에 사용하기에 적합한 스틸벤 화합물은 미합중국 특허 제 5,246,936호에 기재되어 있다.

바람직한 스틸벤 화합물은 4,4'-디아미노-2,2'-스틸벤 디설폰산의 유사체, 일명 Calcofluor White (미주리주 세인트 루이스시에 소재하는 Sigma Chemical Co.로부터 구입가능함), 예를 들면, Calcofluor White M2R, Calcofluor White ABT, Calcofluor White LD, Calcofluor White RWP 등 ; Blancophor (펜실베이니어주 피츠버어그시에 소재하는 Mobay Chemicals 로부터 구입가능함), 예를 들면 Blancophor BBH, Blancophor MBBH, Blancophor BHC 등 ; INTRAWITE^?(노오쓰 캐롤라이나주, 샤를로트에 소재하는 Crompton and Knowles Corp 으로부터 구입가능한이종고리 스틸벤 유도체), 예를 들면 INTRAWITE^?CF 등 ; Lecophor (노오쓰 캐롤라이나주, 샤를로트에 소재하는 Sandoz Chemicals Corp.로부터 구입가능함), 예를 들면 Leucophor BS, Leucophor BSB, Leucophor EKB, Leucophor PAB 등 ; Phorwite (펜실베이니어주 피츠버어그시에 소재하는 Mobay Chemicals 로부터 구입가능함), 예를 들면 Phorwite AR, Phorwite BBU, Phorwite BKL, Phorwite CL, Phorwite RKK 등이다. Blancophor BBH, Calcofluor White M2R 및 Phorwite AR이 가장 바람직한 스틸벤 화합물이다.

붕해제는 본 발명에 사용되어 분쇄 시간을 단축시키고, 건조된 물질의 입자 크기의 감소를 향상시킨다. 본 발명에서 사용하기에 적합한 붕해제로는 다중고리 방향족 화합물, 친수성 전분, 예를 들면 덱스트란, 카르복시 메틸셀룰로스, 다중비닐 피롤리딘 등 또는 이들의 혼합물의 설폰화 생성물과 포름알데히드의 축합 생성물의 염이 포함된다. 바람직한 붕해제는 다중고리 방향족 화합물의 설폰화 생성물과 포름알데히드의 축합 생성물의 염, 예를 들면 나프탈렌 설포네이트, 석유 설포네이트, 리그닌 설포네이트와 포름알데히드의 축합 생성물의 염이고, 나프탈렌 포름알데히드와 설폰산 나트륨의 축합 생성물, 예를 들면 MORWER^?D425 (텍사스주 휴스턴시에 소재하는 Wito), LOMAR^?PW(오하이오주, 신시네티시에 소재하는 헨켈) 및 DARVAN^?1 (코네티컷트주, 노어워어크시에 소재하는 R.T. Vanderbilt Co.)가 가장 바람직하다.

윤활제를 본 발명의 방법에 사용하여 건조되고 코우팅처리된 살충제를 함께 고정시켜 유지한다. 본 발명에서 사용하기에 적합한 윤활제로는 활석, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 황산 칼륨 등 또는 이들의 혼합물이 포함되고, 활석이 바람직하다.

또한 방부제, 안정제 (트리할로즈), 항성형제, 항균제, 항박테리아제 등과 같은 다른 첨가제를 본 발명의 매트릭스내 포함시킬 수 있다. 일반적으로 균류 병원체 및 박테리아 병원체가 코팅될 때에는 항균제 및 항박테리아제를 사용하지 않는다는 것은 자명하다.

본 발명의 바람직한 코우팅처리된 살충제는 pH-의존 중합체 약 2-20중량%, 가소제 약 3중량% 이하, 자외선 차단제 약 5-35중량%, 스틸벤 화합물 약 25-75중량%, 붕해제 약 10중량% 이하, 및 윤활제 약 10중량% 이하로 구성되는 매트릭스에 의해 봉입된 살충제 코어를 포함하는 것이다.

본 발명은 또한 수화제 약 2-25중량% ; 분산제 약 2-40중량% ; 팽창제 약 10-70중량% ; 유동성 개선제 약 1-10중량% ; pH-조절제 약 20중량% 이하 ; 및 pH-의존 중합체 약 2-25중량%, 가소제 약 5중량% 이하, 자외선 차단제 약 5-45중량%, 스틸벤 화합물 약 75중량% 이하, 붕해제 약 10중량% 이하, 및 윤활제 약 10중량% 이하를 포함하는 매트릭스로 봉입된 살충제 코어를 포함하는 코우팅처리된 살충제 약 5-75중량%를 포함하는 수화성 분말형 살충제 조성물을 제공한다.

본 발명의 바람직한 수화성 분말형 살충제 조성물은 수화제 약 2-15중량% ; 분산제 약 2-15중량% ; 팽창제 약 10-60중량% ; 유동성 개선제 약 1-5중량% ; pH-조절제 약 20중량% 이하; 및 pH-의존 중합체 약 2-25중량%, 가소제 약 5중량% 이하, 자외선 차단제 약 5-45중량%, 스틸벤 화합물 약 75중량% 이하, 붕해제 약 10중량% 이하, 및 윤활제 약 10중량% 이하를 포함하는 매트릭스로 봉입된 살충제 코어를 포함하는 코우팅처리된 살충제 약 5-75중량%를 포함하는 것이다.

본 발명에 사용하기 적합한 수화제로는 당 기술에 알려진 여타의 종래 수화제가 포함된다. 바람직한 수화제로는 나트륨 N-메틸-N-올레오일 타우레이트, 옥틸페녹시 폴리에톡시 에탄올, 노닐페녹시 폴리에톡시 에탄올, 나트륨 디옥틸 설포숙시네이트, 나트륨 도데실 벤젠 설포네이트, 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 알킬 나프탈렌 설포네이트, 나트륨 설폰화 알킬 카르복실레이트 등 또는 상기의 혼합물과 같은 음이온제가 포함된다. 나트륨 알킬 나프탈렌 설포네이트 및 나트륨 설폰화 알킬 카르복실레이트의 혼합물 (MORWET^?EFW, witco)이 가장 바람직한 수화제이다.

본 발명의 수화성 분말형 살충제 조성물에 유용한 분산제로는 당해 기술에 공지진 여타의 종래 분산제가 포함된다. 바람직한 분산제는 포름알데히드와 폴리시클릭 방향족 화합물의 설폰화 생성물, 나트륨 리그노설포네이트 등 또는 상기의 혼합물의 축합 생성물의 염과같은 음이온제이고, MORWET^?D425(witco), LOMAR^?PW (Henkel) 및 DARVAN^?1 (R.T. Vanderbilt Co.)와 같은 나프탈렌 포름알데히드와 나트륨 설포네이트의 축합 생성물가 가장 바람직하다.

본 발명의 조성물에 사용하기 적합한 팽창제로는 천연 및 합성 점토 및 실리케이트, 예를들면 : 규조토와 같은 천연 실리카; 활석 같은 마그네슘 실리케이트;애터펄자이트 및 베어미클라이트와 같은 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 고령석, 몬모릴로나이트 및 운모와 같은 알루미늄 실리케이트; 및 고령토와 같은 수화된 알루미늄 실리케이트가 포함된다. 바람직한 팽창제는 수화된 알루미늄 실리케이트, 알루미늄 실리케이트, 마그네슘 실리케이트 및 마그네슘 알루미늄 실리케이트이고, 고령토가 가장 바람직한 팽창제이다. 본 발명의 수화성 분말형 살충제 조성물에 유용한 유동성 개선제는 당기술에 알려진 종래의 유동성 개선제이고, 칼슘 실리케이트와 같은 실리케이트가 바람직하다.

본 발명의 조성물로 부터 제조한 수성 탱크-혼합물의 pH 를 약 pH 5 이하로 유지하기 위해 pH-조절제를 사용한다. 사용하기 적합한 pH-조절제로는 프탈산 수소 칼륨 및 유기산이 포함되고 시트르산이 바람직하다.

본 발명의 수화성 분말형 살충제 조성물은 수화제, 분산제, 팽창제, 유동성 개선제 및 임의로 pH-조절제를 블렌딩함으로써 예비혼합물을 형성하여 제조할 수 있다. 그리고나서 예비혼합물을 코우팅처리된 살충제와 블렌딩하여 원하는 본 발명의 수화성 분말형 살충제 조성물을 형성한다.

해충 방제를 위해, 본 발명의 수화성 분말형 살충제 조성물을 물로 희석하여 수성 탱크 혼합물을 형성하고 그 탱크 혼합물을 직접 해충, 그의 생육지, 먹이 공급원 또는 서식지에 적용한다.

유인제, 점착물, 소포제등과 같은 다른 성분을 본 발명의 수화성 분말형 살충제 조성물에 첨가할 수 있다. 그러나, 상기 부가의 성분은 일반적으로 탱크-혼합물에 별개로 첨가한다. 또한, 보조제 또는 보조제 혼합물을 탱크-혼합물에 첨가할수 있다.

본 발명에 대한 부가의 이해를 용이하게 하기 위해, 하기 실시예가 주로 그의 보다 구체적인 세부 사항을 예시할 목적으로 제시된다. 본 발명은 청구범위에 정의된 것 외에는 상기에 의해 제한되지 않아야 한다.

달리 지적되지 않으면, 표준 분자 생물학적 기술을 Sambrook 일동. Molecular Cloning : A Laboratory Manual, 제 2 판, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989) 에 서술된 계획서에 따라 사용한다. 간상체 바이러스 생장 및 생산을 위한 표준 기술을 Summers 및 Smith A Manual of Methods For Baculovirus Uectors and Insect Cell Culture Culture Procedures, Dept, of Entomology, Texas Agricultural Experimental Station and Texas A & M University, College Station, Texas 77843-2475, Texas Agricultural Experiment Station No. 1555 (1987)에 서술된 계획서에 따라 사용한다.

실 시 예 1

코우팅처리된 V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체의 제조-수성 방법

수산화 암모늄 용액 (28% NH₃)을 탈이온수 (551.8g)내 Eudragit^?S100 (62g,Pharma Co.) 및 PEG 400 (6.2g , 폴리(메틸렌 글리콜) 평균 분자량 400, Aldrich Chemical Co.)의 혼합물에 pH 약 9.4 를 얻을 때까지 첨가한다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하여 용액을 얻는다. V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체 (62g, 평균 크기 약 2μm, g 당 약 10¹¹개 본체), Blancophor BBH (248g, 스틸벤 광택제,Miles Inc.) 및 CYASORB^?UV 9 (31g, 평균 입자 크기 약 2μm, Cytec Ind.)를 pH 조정된 수용액에 첨가한다. 생성된 혼합물을 30분 동안 교반하고 블렌딩하며 공기 건조시켜 고체 과립을 얻는다. 고체 과립을 공기 제분하여 코우팅처리된 V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체 (362g, 평균 크기 약 5μm)를 얻는다. 상기 제조된 코우팅처리된 V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체는 표 II 에서 조성물 1로서 명시되어 있다.

표 I 에 나열된 성분을 사용하는 것을 제외하고는 반드시 같은 절차를 사용하여, 표 II 에 조성물 2-10 으로 명시된 코우팅처리된 살충제를 제조한다.

표 I

표 II

수성 방법에 의해 제조된 코우팅처리된 살충제 조성물

실 시 예 2

코우팅처리된 V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체 - 유기 방법

V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체 (43.24g, 평균 크기 약 2μm, g 당 약 10¹¹개 본체), Blancophor BBH (86.44g) 및 CYASORB^?UV9 (31.93g)를 30:70 아세톤/이소프로판올 용액 (195.15g)내 Eudragit^?S100 (5.88g) 및 PEG 400(1.51g) 용액에 첨가한다. 반응 혼합물을 수분 동안 교반하고 블렌딩하며 공기 건조시켜 고체 과립을 얻는다. 고체 과립을 60 메쉬 스크린을 통해 제분하여 평균 크기 약 10μm 를 갖는 코우팅처리된 V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체를 얻는다. 상기 제조된 코우팅처리된 V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체는 표 IV 에 조성물 11 로서 명시되어 있다.

표 III 에 나열된 성분을 사용하는 것을 제외하고는, 반드시 같은 절차를 사용하여, 표 IV 에 조성물 12-28 로서 명시된 코우팅처리된 살충제를 제조한다.

표 III

표 IV

유기 방법에 의해 제조된 코우팅처리된 살충제 조성물

실 시 예 3

수화성 분말형 살충제 조성물의 제조

표 II 에 조성물 1 로 명시된 코우팅처리된 V8vEGTDEL 폴리헤드린 봉입체 (362g)을 MORWET^?EFW (13.1g), MORWET^?D425 (26.2g), 고령토 (91.6g), 합성 칼슘설페이트 (6.5g, MICRO-CEL^?E, Manville Co.) 및 시트르산 (0.7g)의 예비 혼합물에 첨가한다. 생성된 혼합물을 블렌딩하여 표 V 에 조성물 29 로 명시된 수화성 분말형 살충제 조성물을 얻는다.

반드시 같은 절차를 사용하여, 표 V 에 조성물 30-53 으로 명시된 수화성 분말형 살충제 조성물을 제조한다.

표 V

수화성 분말형 살충제 조성물

실 시 예 4

L. 디스파 (dispar)에 대한 조사되지 않은 및 조사된 수화성 분말형 살충제 조성물의 살충성 평가

수화성 분말형 살충성 병원체 조성물을 증류수에 현탁시키고 mL 당 2.4 × 10⁵개 코우팅처리된 살충제 폴리헤드린 봉입체의 농도를 희석한다. 생성된 현탁액 (0.5 mL)을 180 mL 플라스틱 컵 내 밀 세균 식이의 표면에 피펫팅한다. 각각의 컵을 자외선 조사에 0 또는 80분 동안 노출시킨다 (7.62 cm (3 inch) 떨어져 고정된 Westinghouse BLB 전구 1개 및 Phillips F40 UVB 벌브 1개, 조사 광원과 식이 표면의 중심선으로 부터의 거리는 10.16 cm (4 inch)이다). 10초 영충기간 L. 디스파 영충을 각 컵에 넣는다. 컵을 봉하고 상대 습도 55-60%, 29℃ 의 암실에 방치한다. 13일 후, 컵을 검사하고 바이러스 감염에 의한 사망율을 결정한다.

결과는 표 VI 에 요약되는데 상기에서 각 조성물의 효과는 자외선 노출 후 남아있는 고유 활성의 % (% OAR), 즉 조사된 조성물에 의해 초래된 사망율 % ÷ 조사되지 않은 조성물에 의해 초래된 사망율% × 100 로서 표시된다. 평가에 사용된 대조군 조성물이 하기에 명시되어 있다.

대조군 조성물

¹93.62 중량/중량% 야생형 집시 나방 NPV, 4.26% 중량/중량% Eudragit^?S100, 및 2.13 중량/중량% PEG 400.

표 VI

L. 디스파에 대한 살충성 평가(평가)

¹표 V 로 부터의 조성물 번호.

²자외선 노출 후 남아있는 본래 활성의 %.

실 시 예 5

헬리코베르파 제아에 대한 수화성 분말형 살충제 조성물의 살충성 평가

트레이당 32개 개방면을 갖는 웰 (4×4×2.5cm, L×W×H, C-D International Inc.)을 갖는 플라스틱 생물 검정 트레이를 본 평가에서 검사 아레나로서 사용한다. 스토네빌 식이 (대두/밀 세균) 5mL 를 각각의 트레이-웰에 붓고 경화시킨다. 수화성 분말형 살충성 병원체 조성물의 수성 현탁액 (0.4 mL)를 골고루 경화된 식이의 표면에 분무하여 웰 당 4×10⁵- 4×10⁷개 V8vEGTDEL 코무팅처리된 또는 코우팅처리되지 않은 폴리헤드린 봉입체를 얻는다. 층 흐름 후드내에서 트레이를 건조시킨 후, 3일된 헬리코베르파 제아 유충 1개를 각 트레이-웰 내 식이의 표면에 둔다. 웰을 접착성의 휘어진 투명한 플라스틱 시이트 (C-D International, Inc)로 봉하고, 일정한 형광 빛 아래 약 27℃ 온도에 보관한다. 처리 후 5일 및 10일에 웰을 검사하고 유충 사망율을 측정했다.

결과가 표 VII 에 요약되어 있다. 평가에 사용된 대조군 조성물이 하기에 명시되어 있다.

표 VII

¹표 V 로부터의 조성물 번호

실 시 예 6

H. 제아 및 H. 비레센스에 대한 조사되지 않은 및 조사된 수화성 분말형 조성물의 평가

트레이당 32개 개방면을 갖는 웰 (4×4×2.5cm, L×W×H, C-D International Inc.)을 갖는 플라스틱 생물 검정 트레이를 본 평가에서 검사 아레나로서 사용한다. 스토네빌 식이 (대두/밀 세균) 5mL 를 각각의 트레이-웰에 붓고 경화시킨다. 수화성 분말형 살충성 병원체 조성물의 수성 현탁액 (0.4 mL)를 골고루 경화된 식이의 표면에 분무하여 웰 당 4×10⁶개 V8vEGTDEL 코우팅 처리된 또는 코우팅처리되지 않은 폴리헤드린 봉입체를 얻는다. 그리고나서 처리한 트레이 몇개를 자외선 램프 (트레이 위 30cm 에 고정된 2개의 FS40UVB 전구, Phillips Co.) 하에 1 또는 2시간 유지한다. 조사 2시간 동안 선택한 트레이에 1시간 간격을 두고 웰 당 부가의 탈이온수 0.4 mL 를 제공하여 식이가 과건조되고 균열되는 것을 막는다. 그리고나서 모든 트레이를 3일된 H. 제아 또는 4일된 H. 비레센스 유충으로 감염시킨다. 웰을 집착성의 휘어진 투명한 플라스틱 시이트 (C-D International, Inc)로 봉하고, 일정한 형광 빛 아래 약 27℃ 온도에 보관한다. 처리 후 10일에 웰을 검사하고 유충 사망율을 측정했다.

결과가 표 VIII 에 요약되어 있다. 평가에 사용된 대조군 조성물이 하기에명시되어 있다.

표 VIII

H.제아 및 H. 비레센스에 대한 조사되지 않거나 조사된 수화성 분말형 조성물의 평가

¹표 V 로부터의 조성물 번호

실 시 예 7

하기 평가를 사용하여 오토그라파 칼리포르니타 (Autographa clifornica) 폴리헤드린 봉입체의 활성에 대한 다양한 용매 및 그의 혼합물의 효과를 결정한다. 오토그라파 칼리포르니카 폴리헤드린 봉입체 (0.55g) 및 적절한 용매 또는 용매 혼합물 (1.5 mL)의 혼합물을 원추형 튜브내 10 또는 60분 동안 보관한다. 그리고나서 튜브를 원심분리하고 상층액을 기울여 따라낸다. 고체를 데시케이터내 진공하에 건조시킨다. 그리고나서 건조된 고체를 실시예 6 (조사없음)에 서술된 절차에 따라헬리오티스 비레센스에 대해 평가한다.

결과가 표 XI 에 요약되어 있다. 표 IX 의 데이타에서 알 수 있는 바와 같이, 10 및 60분 동안 염화 메틸렌과 혼합한 오토그라파 칼리포르니카 폴리헤드린 봉입체는 아세톤, 이소프로판올 및 30:70 아세톤/이소프로판올 혼합물과 혼합한 본체 보다 헬리오티스 비레센스에 대해 현저히 낮은 활성을 보인다.

표 IX

용매 상용성 평가

제 1도는 egt 유전자의 위치를 도시하는 AcMNPV 게놈의 개략도이다. 제 1A도에서, 전체 AcMNPV 게놈은 도단위로, 및 Eco RI 및 Hind III 제한 지도로서 나타낸다. 제 1B도는 도단위 7.6 내지 11.1 사이에 위치한 영역의 보다 상세한 지도를 도식하고 있고, egt 유전자의 위치를 나타낸다.

제 2A도는 egt 유전자 영역의 개략도로서, AcMNPV 게놈내 도단위 8.3 내지 9.8 사이의 주요 제한 부위를 나타낸다. 제 2B도는 도단위 8.3 내지 9.8 사이의 AcMNPV 게놈의 3개의 전방 (1, 2, 3) 및 3개의 후방 (1', 2', 3') 판독 프레임내 개방 판독 프레임의 구성을 도식하고 있다. 프레임 2에서 넓은 개방 판독 프레임은 egt 유전자의 단백질 코딩 영역의 위치를 표시한다.

제 3도는 (로딩되지않은) AcMNPV V8 전이 벡터 NF4를 어셈블링하는데 사용되는 DNA 단편의 구성 및 유도의 개략도이다. 제 3A 도는 단편 A-D가 연결되어 NF4를 형성하는 방식을 도식하고 있다. 제 3B도는 단편 C 및 D를 제조하는 데에 사용되는 방법의 개략도이다. AcMNPV V8 Eco RI "I" 단편의 선형 제한 지도상의 화살표는 AcMNPV 게놈내 도 단위 0.32 내지 5.83 사이에 위치한 주요 개방 판독 프레임 (ORFS)의 위치 및 전사 극성을 묘사한다. 기호 "H" 및 "E" 각각 제한 엔도누클레아제 Hind III 및 Eco RI 에대한 인식 부위의 위치를 도식하고 있다.

제 4도는 이종 아디포키네틱 호르몬 유전자 시그널 서열 및 AaIT를 암호화하는 최적 코돈 cDNA 서열을 함유하는 플라스미드 pBS ADK-AaIT의 작제를 상세히 설명하는 도이다.

제 5도는 프로모터 모듈, 다중연결 모듈 및 3'UTR 모듈을 함유하는 발현 카세트(cassette)의 양측 말단에서 Bsu 36I 및 Sse 8387I 부위를 지닌 모듈의 발현 벡터의 일부를 도식하고 있다. 다중연결 모듈은 Esp 3I 인식 부위를 함유한다. 최외각 Bsu 36I 및 Sse 8387I 에 결합된 영역은 바이러스 삽입 모듈로서 정의된다.

제 6도는 아디포키네틱 호르몬 유전자 신호/최적 코돈 AaIT 유전자를 증폭시키고, 이어서 이를 Bam HI로 소화시키기 위한 폴리머라제 인쇄 반응(PCR)의 방법을 도식하고 있다.

제 7도는 아디포키네틱 호르몬 유전자 신호/최적 코돈 AaIT를 pMEV 1.1에 삽입시켜 형성되고 AcMNPV DA26 프로모터를 함유하는 모듈의 발현 벡터 (AC 0075.1)의 개략도이다.

Claims

하기의 단계:

a) pH-의존성 중합체의 수성 혼합물을 제조하는 단계;

b) 단계(a)의 혼합물의 pH를 pH 5이상으로 조정함으로써 pH-의존성 중합체를 용해시키는 단계;

c) 살균제 및 자외선 보호제를 단계(b)의 용액에 첨가하고, 블렌딩하여 균질 현탁액을 생성하는 단계; 및

d) 단계(c)의 균질 현탄액을 건조시키는 단계

를 포함하는 코우팅된 살균제의 제조 방법으로서,

살균제 코어는, 2-25중량%의 pH-의존성 중합체, 5-45중량%의 자외선 보호제를 포함하는 매트릭스에 봉입되고, 살균제 코어 대 매트릭스의 비가 1:1 - 1:10이며;

pH-의존성 중합체가 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체의 혼합물, 무수 말레인산 및 스티렌 공중합체, 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
하기의 단계:

a) pH-의존성 중합체 및 가소제의 수성 혼합물을 제조하는 단계;

b) 단계(a)의 혼합물의 pH를 염기를 첨가하여 pH-의존성 중합체의 용해 pH이상의 pH로 조정함으로써 pH-의존성 중합체를 용해시키는 단계;

c) 살균제, 자외선 보호제, 스틸벤 화합물, 붕해제 및 윤활제를 단계(b)의 용액에 첨가하고, 블렌딩하여 균질 현탁액을 생성하는 단계;

d) 단계(c)의 균질 현탄액을 건조시키는 단계; 및

e) 단계(d)의 건조된 물질을 제분하는 단계

를 포함하는 코우팅된 살균제의 제조 방법으로서,

살균제 코어가 2-25중량%의 pH-의존성 중합체, 5중량% 이하의 가소제, 5-45중량%의 자외선 보호제, 75중량% 이하의 스틸벤 화합물, 10중량% 이하의 붕해제, 및 10중량% 이하의 윤활제를 포함하는 메트릭스에 봉입되고, 살균제 코어 대 매트릭스의 비가 1:1 - 1:10이며;

상기 pH-의존성 중합체가 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체의 혼합물, 무수 말레인산 및 스티렌 공중합체, 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
제2항에 있어서,

pH-의존성 중합체가 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체의 혼합물, 및 무수 말레인산 및 스티렌 공중합체로 구성된 군으로부터 선택되고;

가소제가 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 디에틸 플탈레이트, 디부틸 프탈레이트, 시트르산 에테르, 피마자유 및 트리아세틴으로 구성된 군으로부터 선택되며;

염기는 수산화 암모늄, 수산화 알칼리 금속 및 수산화 알칼리성 토금속으로 구성된 군으로부터 선택되고;

살균제는 살충 병원체이며;

자외선 보호제는 유매(carbon black), 벤조페논, 염료 및 이산화 티타늄으로 구성된 군으로부터 선택되고;

pH는 단계(b)에서 pH 8.5-10으로 조정되며;

붕해제는 다중고리 방향족 화합물, 친수성 전분, 카르복시 메틸셀룰로스 및 폴리비닐 피롤리딘의 설폰화 생성물과 포름알데히드의 축합 생성물의 염으로 구성된 군으로부터 선택되고;

윤활제는 활석, 스테아르산 마그네슘, 스테아산 칼슘 및 황산 칼슘으로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
제3항에 있어서, 가소제가 300-1,000의 분자량을 갖는 폴리에틸렌 글리콜이고;

염기는 수산화 암모늄이며;

살충 병원체가 야생 집시 나방 NPV, AcMNPV E2, AcMNPV L1, AcMNPV V8, V8vEGTDEL, V8vEGTDEL-AaIT 및 헬리오티스 제아 NPV(Heliothis zea NPV)로 구성된 군으로부터 선택된 비루스이고;

붕해제는 나프탈렌 포름알데히드 축합물의 설폰산 나트륨이며;

윤활제는 활석이고 코우팅된 살균제는 약 20㎛미만의 입자 크기를 갖는 방법.
하기의 단계:

a) pH-의존성 중합체, 살균제 및 자외선 보호제의 혼합물을, 아세톤, C₁-C₃알콜, 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 유기 용매 내에서 블렌딩하는 단계; 및

b) 단계(a)의 균질 현탁액을 건조하는 단계

를 포함하는 코우팅된 살균제의 제조 방법으로서,

살균제 코어는 2-25중량%의 pH-의존성 중합체, 5-45중량%의 자외선 보호제를 포함하는 매트릭스에 봉입되고, 살균제 코어 대 매트릭스의 비가 1:1 - 1:10이며;

상기 pH-의존성 중합체가 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체의 혼합물, 무수 말레인산 및 스티렌 공중합체, 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
하기의 단계:

a) pH-의존성 중합체, 살균제, 가소제, 자외선 보호제, 스틸벤 화합물, 붕해제, 윤활제의 혼합물을, 아세톤, C₁-C₃알콜, 또는 이들의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된 유기 용매 내에서 블렌딩하는 단계;

b) 단계(a)의 균질 현탁액을 건조하는 단계; 및

c) 단계 (b)의 건조된 물질을 제분하는 단계

를 포함하는 코우팅된 살균제의 제조 방법으로서,

살균제 코어는 2-25중량%의 pH-의존성 중합체, 5중량% 이하의 가소제, 5-45중량%의 자외선 보호제, 75중량% 이하의 스틸벤 화합물, 10중량% 이하의 붕해제, 및 10중량% 이하의 윤활제를 포함하는 매트릭스에 봉입되고, 살균제 코어 대 매트릭스의 비가 1:1 - 1:10이며;

상기 pH-의존성 중합체가 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체의 혼합물, 무수 말레인산 및 스티렌 공중합체, 및 그 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
제6항에 있어서, 유기 용매가 아세톤 및 C₁-C₃알콜의 혼합물이고, 아세톤 대 C₁-C₃알콜의 비가 1:9 - 9:1인 방법.
제7항에 있어서, pH-의존성 중합체가 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체의 혼합물 및 무수 말레인산 및 스티렌 공중합체로 구성된 군으로부터 선택되고;

살균제는 살충 병원체이며;

가소제는 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 디에틸 프탈레이트, 디부틸 프탈레이트, 시트르산 에스테르, 피마자유 및 트리아세틴으로 구성된 군으로부터 선택되고;

자외선 보호제가 유매(carbon black), 벤조페논, 염료 및 이산화 티타늄으로 구성된 군으로부터 선택되며;

붕해제는 다중고리 방향족 화합물, 친수성 전분, 카르복시메틸 셀룰로스 및 폴리비닐 파롤리딘의 설폰화 생성물과 포름알테히드의 축합 생성물의 염으로 구성된 군으로부터 선택되고;

윤활제는 활석, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘 및 황산 칼슘으로 구성된 군으로부터 선택되며; 및

C₁-C₃알콜은 이소프로판인 방법.
청구항 제1, 2, 5 및 6항 중 어느 한 항에 따른 방법에 의해 수득가능한 메트릭스에 의해 봉입된 살균제 코어를 포함하는 코우팅된 살균제로서, 상기 메트릭스는 2-25중량% pH-의존성 중합체, 5중량% 이하의 가소제, 5-45중량% 자외선 보호제, 75중량% 이하의 스틸벤 화합물, 10중량% 이하의 붕해제, 및 10중량% 이하의 윤활제를 포함하는 매트릭스이고, 살균제 대 매트릭스의 비가 1:1 - 1:10 인 코우팅된 살균제.
제9항에 있어서,

살균제가 살충 병원체이고;

pH-의존성 중합체가 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체, 메타크릴산 및 메틸 메타크릴산 공중합체의 혼합물, 및 무수 말레인산 및 스티렌 공중합체로 구성된 군으로부터 선택되며;

가소제가 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 디에틸 프탈레이트, 디부틸 프탈레이트, 시트르산 에테르, 피마자유, 및 트리아세틴으로 구성된 군으로부터 선택되고,

자외선 보호제는 유매(carbon black), 벤조페논, 염료 및 이산화 티타늄으로 구성된 군으로부터 선택되며;

붕해제는 다중고리 방향족 화합물, 친수성 전분, 카르복시 메틸셀룰로스 및 폴리비닐 피롤리딘의 설폰화 생성물과 포름알데히드의 축합 생성물의 염으로 구성된 군으로부터 선택되고;

윤활제는 활석, 스테아르산, 마그네슘, 스테아르산 칼슘 및 황산 칼슘으로 구성된 군으로부터 선택되는 코우팅된 살균제.
2-25중량%의 수화제; 2-40중량%의 분산제; 10-70중량%의 팽창제; 1-10중량%의 유동개선제; 20중량% 이하의 pH-조절제; 및 5-75중량%의 청구항 제9항에 따른 코우팅된 살균제를 포함하는 수화성 분말 살균제 조성물.