KR100344330B1 - 지속성주사현탁제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 입자 크기 5 내지 200㎛에서 내재적 서방성 효과를 나타내는, 세트로렐릭스 엠보네이트와 같은 LHRH 유사체의 용해성이 불량한 염에 관한 것이다.

Description

장기 활성 주사 국사 현탁제 및 이의 제조 방법{Long-acting injection suspensions and a process for their preparation}

본 발명은 치료학적 활성 펩티드를 생리학적으로 허용되는, 낮은 용해도의 X-선 무정형 및 결정성 염으로서 함유하는 지속성(long-acting) 주사 현탁제 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

치료시, 펩티드는 경구 투여 후에 효소적 분해에 의해 분해되고; 종종 코로적용하여도 적용된 양의 수%만이 흡수되고; 피부 적용시에는 전혀 흡수되지 않으므로, 비경구적 주사후에만 안전하고 높은 생체이용률로 사용될 수 있다.

펩티드는 유기체내에서는 매우 짧은 반감기만을 갖기 때문에, 펩티드 약제,예를 들면 소위 초효능제 및 LHRH 길항제와 같은 LHRH 동족체 등의 비경구적 투여는 매일 수행하여야 양 물질 그룹의 경우 LH 및 FSH를 억제하는 데 있는 목적하는효과가 수득된다.

남자의 경우 테스토스테론 생성이 감소되고, 여자의 경우 에스트라디올 생성이 구체적으로 정의된 설정 값 미만이 된다. 용어 "화학적 제웅"(chemical castrat ion)이 사용된다.

LHRH 동족체는 고세렐린(INN) 또는 트립토렐린(INN)과 같은 초효능제 뿐만아니라 세트로렐릭스(INN), 안티드(INN) 또는 가니렐릭스(INN)와 같은 길항제 모두출인 것으로 이해된다. 괴세렐린 및 고세렐린의 합성은 문헌[참조: Drugs of the Future, 5(4) (1980), p, 191]에 기재되어 있다. 부세렐린 및 부세렐린의 합성은 문헌[참조: Drugs of the Future, 4(3), (1979), p, 173 and Drugs of Today, 21,(305), (1985)]에 기재되어 있다. 데카펩틸 및 데카펩틸의 합성은 문헌[참조:Drugs of the Future, 3, (9) (1978), p. 645]에 기재되어 있다. 류프롤리드 및 류프롤리드의 합성은 문헌[참조 : Drugs of the Future 7(12), (1982), p. 883]에 제시되어 있다.

아잘린 B는 문헌[참조: GHRH-Analogues-The State of the Art(1993), pp, 13-26, Pathenon Publishing Groups Ed , B. Lunenfeld, V Insler]에 기재되어 있다.

서방성 효과를 갖는 제제에서 지속성 LHRH 동족체를 가공하기 위한 많은 시도가 있었다. 펩티드 아연염, 참기름 및 스테아르산 알루미늄으로부터 서방성 주사 형태의 LHRH 동족체를 함유하는 제제가 예를 들면, GB 제2 052 258호에 기재되어 있다. 초효능제 및 길항제간의 차이는, 초효능제의 경우 피드백 메카니즘이 치료의 제1주에 소위 돌발(flare up)이라는 바람직하지 않은 높은 호르몬 방출과 연관된 효과를 유도하고, 이는 추가의 약제로 상쇄되어야 한다. 이와 대조적으로, 세트로렐릭스(INN)와 같은 길항제의 경우 약리적 효과가 즉시 발생하여 돌발 작용은 존재하지 않는다. 성 호르몬 혈중 농도의 지속적인 감소는 성 호르몬 의존성 종양의 성장을 감소시키기 위한 전립선 암종 및 유방 암종의 완화적 치료 및 자궁내막증의 치료시 표준 치료법이다. 화학적으로는, LHRM-초효능제 및 길항제는 노나펩티드 또는 데카펩티드이다.

상술된 바에서 유효한 LHRH 길항제는 Ac-DHal-DpCl-Phe-DPal-Ser-Tyr-DCit-Leu-Arg-Pro-D-Ala-NH₂아미노산 배열의 데카펩티드인 세트로렐릭스이다, 이의 합성 및 약리학적 특성은 EP 제299 402호에 기재되어 있다, 세트로렐릭스 아세테이트는 생리학적으로 허용되는 염으로서 확인되어 있다. 전임상학 및 임상학적연구에 의하면, 세트로렐릭스 아세테이트는 다음 주사까지 테스토스테론 또는 에스트라디올의 호르몬을 적절한 수준으로 저하시키기 위해 매일 적용되어야 한다. 활성 기간은, 일단 한계 투여량에 이르면 비록 만성 환자 및 비입원 환자에 대해 매일 적용 간격 대신 일주 간격이 이미 진행되었어도 연장될 수 없다.

LHRH-동족체의 사용에 있어서 당해 기술분야의 상태는 수용성 염 용액을 주사액으로서 매일 적용하거나 코 점적제 형태(Suprefact nasal)인 부세렐린 아세테이트 또는 현재까지는 미합중국에서만 시판되는 코 점적제 형태인 나파렐린 아세테이트를 매일 다수회 코에 사용하는 것이다. 본원에 상술된 바와 같이, 이들은 본래 종종 사용되어야만 하는 약제학적 형태로 존재한다. 주사는 의사만이 제공해 줄 수 있고, 코 점적제는 일일 수회 사용되어야 한다. 이들 모두의 약제학적 형태는 만성 질환의 치료에 별로 적합하지 않다.

DE-OS 제42 23 282.1호에는 마이크로캡슐화(microencapsulation)에 의한 세트로렐릭스 엠보네이트의 서방성 제제의 제조가 기재되어 있다. 이식은 보다 긴 사용 간격을 허용하는 약제학적 형태이다. 예를 들면, 피부 밑에 이식될 경우, 고세렐린 아세테이트를 함유한 생물학적 분해성 폴리(젖산-글리콜산) 공중합체의 실린더는 효과적으로 테스토스테론 수준을 저하시킬수 있다(Zolader depot). 활성물질 류프로렐린 아세테이트를 함유한 생물학적 분해성 중합체 입자의 현탁제를 매달 주사하는 것도 이 기간에 걸쳐 혈액내 성호르몬 수준을 유효하게 저하시킨다(Enantone Monatsdepot^R).

이들 모두의 서방성 형태는 다음의 특허 및 특허원에 기재되어 있다. 적용간격의 이점과는 별도로 이들의 명백한 단점이 하기에 제시된다.

EP 제0 058 481호에는 상표명 졸라덱스^R(Zoladex^R)로 시판되는 이식물의 조성물 및 제조방법이 기재되어 있다. 투여 형태의 단점은, 특별히 요구되어지는 배출 기계 및 특별히 고안된 주사기로 극히 두꺼운 카뉼라와 함께 실린더를 삽입한 포장 기계를 사용한 값비싼 실린더의 제작 공정에 있다. 실린더의 형상-직경 1mm 및 길이 수mm-은 환자에게 이식될 경우, 극심한 고통 및 혈종을 유발시킨다. 덜 고통스러운 투여 형태가 바람직하다.

EP 제0 052 510호에는 예를 들면, 나파렐린 아세테이트를 포함한 미세입자의조성물 및 제조방법이 기재되어 있다. 염소화 탄화수소의 존재하에 활성 물질을 폴리(젖산, 글리콜산) 공중합체로 혼입한다. 생체내에서 필요한 생물학적 분해를 수행하는데 사용된 중합체가 염소화 탄화수소에만 용해되므로, 조성물에 염소화 탄화수소를 사용하는 것은 불가피하다. 약 1000ppm의 방식으로 제조된 약제학적 형태내의 높은 잔여 용매 성분 함량이 단점이다. 보다 최근에 공지된 바에 따르면, 염소화 탄화수소는 발암성이고, 천연 재료 및 약제내의 잔여 용매 성분은 유럽 약전의 최근 제안(참조 : Pharm Europe, Vol. 4, No. 1, March 1992)에 따라 50ppm 미만으로 제한되어야 한다. 이 방법은 또한, 마이크로캡슐 내에 실질적으로 혼입되는 활성 물질의 수율이 본 방법에 필수적인 수성 상 내의 펩티드 소실로 인해 작다는 단점이 있다.

약제 안정성의 관점에서 바람직한 잔여 용매 성분은, 수행하더라도 힘든 후처리 방법에 의해서만 한계치 미만으로 감소시킬 수 있다. 예를 들면 신텍스(Syntex)는 임계이하의 CO₂를 사용하여 잔여 용매를 감소시키는 방법을 제시하였다.

DE 제40 23 134 Al호에는 폴리(젖산, 글리콜산) 공중합체 유형의 생물학적 분해성 중합체에 대하여 상술된 바와 유사한 펩티드 혼입방법이 기재되어 있다. 상기 출원에 따르면, 물에 불용성인 펩티드 염이 폴리에스테르 중 펩티드 아세테이트 염을 혼입시키는 대신 사용되어 본 방법에서 많은 활성 물질 손실을 감소시킨다. 물에 불용성이라고 언급된 펩티드 염은 파모에이트, 탄네이트, 스테아레이트 및 팔미테이트이다. 이미 기재된 바와 같이, 이 방법은 발암성 탄화수소가 사용되어야 하는 단점을 갖고 생리학적으로 허용될 수 없는 잔여 클로로메탄 또는 클로로포름 용매 성분의 문제점이 존재한다.

EP 제145 240호에는 수용성 펩티드 염을 혼입하는 다른 방법이 포함되어 있다. 복잡한 방법에 의해, 활성 물질은 수성 활성 물질 용액으로부터 현저히 감소된수율로 생물학적 분해성 폴리(젖산, 글리콜산) 공중합체로 다중 에멀션을 통해 혼입되며, 이때 염소화 탄화수소를 사용하는 단점이 다시 존재한다.

EP 제505 966호에 따르면, 부세렐린 아세테이트를 염소화 탄화수소를 함유한 활성 물질-중합체 용액의 분무 건조를 통해 폴리(젖산, 글리콜산) 공중합체로 매봉한다. 이 방법 또한 발암성 클로로탄화수소를 용매로서 사용하는 단점이 있다.

클로로탄화수소가 사용되는 경우, 약제학적 형태내에 잔여 용매량이 많을 뿐만 아니라, 생태학적 견지에서, 이들 용매 자체의 사용은 제작 지역으로부터 염소화 탄화수소를 처리하는 문제점과 고용인들에 대한 위험을 유발시킨다.

WO 제9214449호에 따르면, 성장 호르몬과 같은 쉽게 용해되는 펩티드를 예를들면, 활성 물질을 라우린산과 혼합하여 융해시키고 냉각후 혼합물을 100μm 입자로 연마함으로써, 라우린산에 혼입시킨다. US 제5,137,669호에는 LHRH 길항제 입자를 활성 물질 서방성을 위한 현탁제로서 주사하기 위해 동일한 방법으로 LHRH 길항제에 대한 서방성 형태를 생성하는 것이 기재되어 있다. 양 제제에 대한 공통적인 요인은 장기간의 활성 물질 방출에 담체 물질을 필요로 하고, 힘든 방법을 통해서만 주사가능한 제제를 수득한다는 것이다. 이제까지 지방 침착에 대한 내성, 이의 신뢰성 및 활성 물질의 재생성 방출을 입증하는 것이 불가능하였다. 지방 매봉의 경우, 캡슐화 형태의 적용 부위에 부작용이 발생될 수 있고, 이는 수년간 지속되는 만성 치료에 허용될 수 없다.

서방성 형태로 제조되기 매우 힘든 활성 물질인 브로모크립틴 메실레이트의경우, DE 제3430852호에서는 목적하는 활성 물질 방출 프로필을 수득하기 위해 예를 들면, 글루코스와 젖산 및 글리콜산과의 폴리올에스테르로서 신규한 폴리에스테르를 합성한다. 이 경우, 더욱 간단하고 값싼 약제학적 형태는 동일한 목적을 전혀 성취할 수 없다는 것이 명백했으므로 충분한 활성 지속기간을 갖는 서방성 형태를 제조하기 위해서 포괄적이고 값비싼 개발 및 독물학성 시도를 수행할 필요가 있었 다.

엠본산(4,4'-메틸렌-비스(3-하이드록시-2-나프타산)은 약제의 난용성 염을 제형화하기 위해 약제학적 제제에 종종 사용된다. 이러한 난용성 염은 생체내에서 더윽 길게 지속되고 약제에 서방성 효과를 제공한다(참조. Rompps Chemie-Lexikon, Stuttgart 1976, p. 1007).

특허청구의 범위 제1항에 따르는 본 발명의 제제는 놀랍게도 생물학적 분해성 중합체 또는 지방을 이용하지 않고 예기치 않은 활성 연장 및 개선된 효과를 유발하는 것으로 밝혀졌다. 호르몬 억제 기간에 의해 측정된 활성 기간의 연장 뿐만아니라, 종양 성장도 초비례적으로 억제됨이 밝혀졌다.

본 발명의 제제는 또한 예를 들면, 류프롤라이드, 부세렐린, 고세렐린 및 트리프토렐린과 같은 LHRH 길항제에 사용될 수 있다. 본 발명의 제제는 또한 봄베신길항제, 소마토스타틴 길항제 및 GHRH 동족체에 사용될 수 있다.

실험 과정은 하기 공정에 따라 수행된다 :

스프라크-다울리 래트(Spraque-Dowley rat)의 DMBA(7,12-디메틸벤즈[a]-안트라센)유도된 유방암종에 대한 억제 효과

방법 :

생후 50일의 앙컷 스프라크-다울리 래트(동물 식이 : 알트로민 R, 물 임의량)에게 위장 튜브를 사용하여 올리브 오일 1ml에 용해된 7,12-디메틸벤즈[a]-안트라센 20mg을 경구 투여한다. 종양의 발현은 동물의 주단위 촉진(palpation)으로 감지한다. 동물들의 약 90%가 실험적 시도에 적합한 유도후 35일에서 70일 사이에 종양을 진행시킨다.

종양 무게는 공지된 방법(참조: Druckrey, H., Steinhoff, D., Nakayama, M., Preussmann, R,, Anger, K.(1983). Experimentellezum Dosis-Problem In der Krebs-Chemotherapie und zur Wirkungsweise von Endoxan,[암 화학요법의 투여 문제 및 엔독산의 작용 방식에 대한 실험적 기여], Dtsch, Med, Wschr, 88:651)을 사용하여 측정한다.

이 방법은 촉진에 의해 측정된 종양 무게와 직접적인 칭량(종양 절제후)으로측정된 종양 무게간의 비교에 의해 유효화되었다, 관계 계수는 0.98이다. 종양의 전체 무게가 약 1g에 이른 후, 동물을 무작위로 선택하여 각각 7마리 동물을 대조 그룹 및 처리 그룹으로 배분한다. 치료는 이후 즉시 시험 물질을 피하 주사하여 시작한다. 동물의 호르몬 상태는 메틸렌 블루로 염색된 질 세포 도포법(vaginal cell smear)으로 측정하고 공지된 방법[참조: Jones, T. C., Mohr, U, Hunt, R. D(1972) : The genital system, in : Monographs on pathology of laboratory animals sponsored by the International Life Science Institute(Springer, N.Y. , London)]에 따라 평가한다.

실험 결과는 제1도에 나타내었다. 처리되지 않은 대조용 동물에 대한 종양측무게의 곡선은 억제되지 않은 증가를 나타낸다. 곡선 1(*) 및 2(0)는 2개의 상이한 담체내의 세트로렐릭스 아세테이트를 사용한 처리를 나타낸다. 연장된 곡선 3은 엠보네이트 처리 후 종양 부게의 급격한 감소를 나타낸다.

이 경우 치료는 단일 투여로만 행하므로, 단일 투여로 치료하는 것은 전체 종양 세포를 사멸시키는데 적합하지 않기 때문에 종양은 계속 성장한다.

본 발명의 제제는 엠본산 염으로서의 데카펩티드 세트로렐릭스의 X-선 무정형 침전물이다. 임의를 등장성 부가제를 함유할 수 있는 본 침전물의 수성 현탁제는 펩티드의 수용액에 비해 동물 모델에서 현저한 활성 연장을 나타냈다. 놀랍게도, 이런 활성 지속기간은 폴리(젖산, 글리콜산) 공중합체와 같은 생물학적 분해성중합체내에 펩티드 엠보네이트 침전물을 함유한 주사 현탁제와 거의 동일함이 밝혀졌다. 위에서 설명한 바와 같이, 이제까지 일반적으로 활성 물질을 생물학적 분해성 중합체내에 함유하는, 매우 힘들게 제조된 서방성 약제 형태만이 충분히 긴 활성 지속기간을 나타내었기 때문에 이러한 결과는 특히 예기치 못하였다.

상기 발견은 또한 문헌[참조: J. Pharm Pharmavol. 47, 878-883 (1985)]에 따라, 2,4-디아미노피리미딘 유도체인 피리메타민을 마우스에게 피하 주사한 후, 약력학적 거동, 혈장 수준 진행 및 AUC의 관점에서 이의 엠본산염과 비교하여 차이를 보이지 않았으므로 놀랄만하다.

유사하게, 이미프라민 HCl은 경구 투여후 이미프라민 엠보네이트와 차이가 없음을 나타냈다(참조: Indian Journal of Physiology and Pharmacology 25, (4),331-338 (1989)1. 프레드니솔론 또는 트리암시놀론과 같은 비펩티드 약제 물질의 결정형 주사 현탁제는, 당뇨병을 치료하는데 사용되는 결정형 인슐린 아연 현탁제의 경우와 같이 서방성 형태로 공지되어 있다, 상기 근래 지정된 형태는 모두 결정형인 반면, X-선 회절계 분석은 본 발명의 투여 형태가 무정형임을 나타낸다. 본 발명의 제제의 입자 크기는 5 내지 200μm이다, 입자 크기가 5μm 미만인 세트로렐릭스 엠보네이트는 본 발명의 제제에 비해 서방성 효과가 낮다. 유사하게, 입자 크기가 200μm 초과인 세트로렐릭스 엠보네이트는 본 발명의 제제에 비해 서방성 효과가 불량하다.

본 발의 제제의 기타 이점은 배치 적합성(batch conformity)이 높는 것이다: 따라서 본 발명의 제제로 제조된 약제의 품질은 거의 변동이 없다.

[실시예 1]

엠본산에 대한 펩티드 등몰 비(유리 염기로 계산됨)로, 초과량의 알칼리를 유하는 엠본산 수용액을 아세테이트 세트로렐릭스 아세테이트 용액과 배합하여, 엠본산을 황색 결정체로서 침전시킨다. 묽은 수산화나트륨 용액을 pH7 내지 7.5가 되도록 가하여, 엠본산을 용해시키고 펩티드:엠본산 2:1(Mol/Mol) 몰 조성의 수성 세트로렐릭스 엠보네이트 염으로서 데카펩티드와 함께 침전시킨다. 침전물을 여과하여, H₂O로 세정하고 건조시킨다.

[실시예 2]

세트로렐릭스 아세테이트와 엠본산을 디메틸아세트아미드중에 등몰 비로 용해시키고 이 용액을 물에 적가한다. 2:1(Mol/Mol)의 세트로렐릭스 엠보네이트 펩티드 : 엠본산의 백색 침전물을 여과하여 건조시킨다.

[실시예 3]

세트로렐릭스 및 엠본산을 디메틸 아세트아미드와 임의로 물과의 혼합물중에 1:1.6의 몰 비로 용해시키고 이 용액을 물에 적가한다. 황색 침전물을 여과하여 건조시킨다. 수득된 침전물을 70% 에탄올로 페이스트화하고 35℃에서 건조시킨후 80 내지 125㎛ 메쉬 크기의 씨브(sieve)를 통해 씨빙한다.

[실시예 4]

알칼러성 엠보네이트 용액을 펩티드 : 엠본산의 몰 비가 2:1이 되도록 펩티드아세테이트의 수성 에탄을 용액에 가한다. 백색 침전물을 여과하여 건조시킨다. 건조된 침전물을 50% 에탄올로 습윤시키고, 진공 건조 캐비넷내에서 건조시킨후 씨빙(sieving)한다. 백색 생성물은 2 : 1의 펩티드 엠보네이트 염(Mol/Mol)을 함유한다.

[실시예 5]

염기성 엠보네이트 용액을 펩티드:엠본산의 몰 비가 1:1 6이 되도록 펩티드아세테이트의 수성 에탄올 용액에 가한다. 황색 침전물을 여과하여 건조시킨다. 건조된 침전물을 50% 에탄을로 습윤시키고 35℃의 진공 건조 캐비넷내에서 건조시킨후 씨빙한다. 황색 생성물은 과량의 엠본산 이외에 2:1 펩티드 엠보네이트 염(Mol /Mol)을 함유한다.

동물내의 활성 지속기간에 대한 실험

침전물의 현탁제를 수컷 래트에게 세트로렐릭스 0.5mg/체중(kg) 투여량으로피하 투여하고 적용 후 테스토스테론 혈장 수준에 대한 펩티드의 효과를 측정하여 결정했다. 세트로렐릭스의 효과는 테스토스테론 수준의 감소에 있다, 참조로서 DE 제4023134 A1호에 따라 제조되고, 펩티드 엠보네이트를 폴리(젖산, 글리콜산) 공중합체에 함유하는 주사 현탁제를 역시 시험했다. 세트로렐릭스의 비서방성 투여 형태의 활성 지속기간은 세트로렐릭스 아세테이트의 수용액의 시험을 통하여 측정 했다.

제3도는 세트로렐릭스 아세테이트(D-20761)의 수용액을 적용한 후, 수컷 래트에서 300시간에 걸쳐 측정된 테스토스테론 수준의 진행을 나타낸다. 테스토스테론 억제 효과는 적용 후 6시간만에 달성된다. 1ng/ml 미만의 억제는 24시간 동안 2마리의 동물에서, 48시간 즉 2일까지 추가로 3마리의 동물에서 측정될 수 있었다.

제2도는 동량의 세트로렐릭스를 실시예 1에 따라 제조된 점성의 부가제 없이세트로렐릭스 엠보네이트(D-20762)의 현탁제로서 적용한 후, 4마리의 동물(11번 내지 14번)에서 300시간에 걸쳐 측정된 테스토스테론 수준을 나타낸다. 테스토스테론 억제는 또한 적용 후 6시간만에 달성되고, 192시간(8일) 후에 1마리의 동물에서 1ng/ml 초과의 수준으로 증가되고, 나머지 3마리 동물에서는 확실히 9일까지 지속된다.

제4도는 본 발명의 엠보네이트(입자 크기 : 80 내지 125㎛)로 처리된 래트의테스토스테론 수준의 진행을 나타낸다.

제2도 및 제3도를 제4도와 비교하면 본 발명의 제제의 이점을 즉시 알 수 있다.

Claims (6)

1. 젖산 및 글리콜산의 단일중합체 또는 공중합체의 입자 또는 마이크로캡슐의 형태가 아니며LHRH 동족체가 세트로렐릭스, 안타렐릭스, 가니렐릭스, 안티드및A-75998로 이루어진 그룹으로부터 선택됨을 특징으로 하는 염, 입자의 입자 크기가 5 내지 200㎛ 인 LHRH 동족체의 난용성 염
2. 제 1 항에 있어서, 염 입자의 입자 직경이 10 내지 150㎛임을 특징으로 하는 염.
3. 제 1 항에 있어서, 염 입자의 직경이 20 내지 125㎛임을 특징으로 하는 염.
4. 젖산 및 글리콜산의 단일중합체 또는 공중합체의 입자 또는 마이크로캡슐의 형태가 아니며염 입자의 입자 직경이 5 내지 200㎛임을 특징으로 하는, 봄베신 동족체의 난용성 염.
5. 제 1 항 내지 제 4 항 중의 어느 한 항에 있어서, 염이 엠본산 염임을 특징으로 하는 염.
6. LHRH 동족체 및 봄베신 동족체가 연장된 활성을 갖는,제 1 항 내지 제 5 항중의 어느 한 항에 따르는 염을 함유하는 약제학적 조성물.