KR100272757B1

KR100272757B1 - 기니픽피부디스크제조방법및이를이용한항균력측정방법

Info

Publication number: KR100272757B1
Application number: KR1019970082226A
Authority: KR
Inventors: 경 희 서; 계 호 신; 문 삼 신
Original assignee: 서경배; 주식회사태평양
Priority date: 1997-12-31
Filing date: 1997-12-31
Publication date: 2000-11-15
Also published as: KR19990061931A

Abstract

본 발명은 기니픽 피부 디스크, 이의 제조방법 및 이를 이용한 항균력 측정방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 약제성분이 함유되어 있는 세척용 화장품이나 생활용품을 인체에 적용하고 나서 물로 씻어낸 후에도 상기 약제성분이 피부에 잔존하여 피부에 유해한 균의 증식을 억제하는 항균력 측정에 사용되는 기니픽 피부 디스크, 이의 제조방법 및 이를 이용한 항균력 측정방법에 관한 것이다.

Description

기니픽 피부 디스크, 이의 제조방법 및 이를 이용한 항균력 측정방법

본 발명은 기니픽 피부 디스크의 제조방법 및 이를 이용한 항균력 측정방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 약제성분이 함유되어 있는 세척용 화장품이나 생활용품을 인체에 적용하고 나서 물로 씻어낸 후에도 상기 약제성분이 피부에 잔존하여 피부에 유해한 균의 증식을 억제하는 항균력 측정에 사용되는 기니픽 피부 디스크의 제조방법 및 이를 이용한 항균력 측정방법에 관한 것이다.

일반적으로 지루성피부염, 전풍, 비듬, 무좀, 그외 암내 등과 같은 피부질환은 대부분 미생물에 의해 유발되거나 또는 병의 진행과정중에 미생물이 중요한 역할을 하는 것으로 알려져있다. 따라서 이러한 피부질환의 치료방법중 하나로서 이들 미생물의 증식을 억제하는 방법이 사용된다. 이러한 피부질환의 치료에 사용되는 약제성분은 샴푸, 비누, 바디클린저, 클린징폼 등과 같은 사용후 세척이 있는 제품에 첨가되어 손쉽게 사용할 수 있도록 되어 있다.

그러나 이런 약제가 인체에 적용후 물로 씻어내는 형태의 화장품이나 생활용품에 함유되어 사용될 경우 세척시 대부분이 씻겨져 없어지고 극히 일부분만이 피부에 남아있게 되어 세척후 피부에 남아있는 약제의 효과를 정확하게 측정하는데 어려움이 있었다.

따라서 약제의 불필요한 과량사용을 막고 피부에 대한 흡착력을 증진시켜 소량 사용으로도 약제의 효능을 극대화할 수 있는 제품의 개발을 위해 약제의 피부에 대한 흡착력과 항균력을 동시에 측정할 수 있는 방법의 개발이 요구되어 왔다.

제품이나 원료의 항균력 측정방법으로는 미생물의 증식을 억제하는 최소생육억제농도측정법(MIC)으로 액체배지희석법과 고체배지희석법이 있고, 페이퍼 디스크(paper disc)를 이용한 할로테스트법(halo test), 쉐이킹 플라스크법(shaking flask), 카프 서브스탄티비티(calf substantivity)법 등이 있다.

그러나 이러한 방법중 최소억제농도측정법이나 할로테스트법, 쉐이킹 플라스크법 등에는 세척단계가 없고 피부를 사용하지 않으므로 상기 약제성분이 함유되어 있는 비누, 샴푸, 바디클린저, 클린징폼 등과 같은 인체에 적용후 물로 씻어내는 형태의 제품(이하, 워시오프(wash off) 제품이라 함)의 정확한 효과와 항균제의 피부 흡착율을 측정할 수 없는 단점이 있다. 카프 서브스탄티비티법은 소의 피부를 이용하는 방법으로 전술한 여러 방법에 비해 좀더 실제 사용상황에 근접한 방법이기는 하지만 멸균방법으로 염을 사용하는 점과 시료를 100% 농도 그대로 처리하고 디스크(disc)를 실험후 제작하기 때문에 무게, 두께 등이 균일한 디스크를 사용할 수 없어 실험오차가 커져 경향성의 판별은 가능하지만 정확한 실험결과는 얻을 수 없는 단점이 있다. 또한 소의 피부와 사람의 피부가 서로 차이점이 있는 것도 이 방법이 가지는 단점의 하나가 된다.

항균력 측정법으로 고체배지희석법(agar plate법)과 액체배지희석법(broth dilution법)이 널리 사용되고 있다. 고체배지희석법(agar plate법)은 항균력을 측정하고자 하는 시료를 적당한 농도(예, 10^-n, 10^-(n-1), ···, 10^-2, 10^-1, 10⁰, 10¹, 10², ···, 10^n-1, 10ⁿ)로 조제한 후 각기 제조된 고체배지(agar plate)에 균을 접종하여 초기균의 균수를 현저히 감소시키는 농도를 최소생육억제농도(MIC)로 결정하는 방법이며, 액체배지희석법(broth dilution법)은 균의 배양을 고체배지(agar plate)상에서 행하는 것이 아니라 액상의 배양액을 사용한다는 차이점만이 존재한다. 이 방법들은 편리하기는 하지만 고체배지희석법을 사용할 경우에 동일양의 균을 스트리킹(streaking)하기가 어려운 단점이 있고, 액체배지 희석법을 사용할 경우에 시험대상인 균이나 시료가 자체의 탁도를 가진 경우 균의 생육 여부를 다른 기기(예, 현미경)를 사용하여 확인하여야 한다는 단점이 있고, 또한 두가지 방법 모두다 워시오프제품의 항균력을 측정하기에는 적용의 한계점이 있으며 이들 측정법은 실제 제품이 사용되는 피부와의 접촉 등이 고려되지 않는 단점이 있다.

페이퍼 디스크 확산법(paper disc diffusion method)은 균이 이미 접종된 상태의 고체배지 위에 여러 농도의 시험시료를 흡착시킨 멸균된 페이퍼 디스크를 올려놓은 후 배양하여 균의 증식이 억제된 투명대(clear zone)의 크기를 측정하여 항균력 정도를 측정하는 방법으로 역시 워시오프제품에 적용시키기에는 한계점이 있고 이 측정법은 실제 제품이 사용되는 피부와의 접촉 등이 고려되지 않는 단점이 있다.

카프 서브스탄티비티 테스트법(calf substantivity test)은 제모된 카프 피부(calf skin)를 소금에 절여 멸균하고 그 피부 조각을 사용하여 항균력을 측정하는 방법이다. 소금으로 멸균된 카프 피부를 샴푸 등의 제품에 넣어 고체 배지 위에 올려놓아 배양한다. 배양후 균의 증식이 억제된 투명대(clear zone)의 크기를 비교하는 방법으로 시료의 상대적인 항균력을 측정한다. 본 방법은 상기의 두 방법에 비해서는 워시오프제품의 피부에 대한 흡착력 등을 고려한 방법이지만 피부 디스크를 제조시 건조되지 않은 피부의 두께로 인해 균일한 피부 디스크 제작이 어려우며 사람 피부와의 유사성이 없으며 피부의 멸균에 사용한 소금에 의한 미생물 억제효과 등이 나타나므로 정확한 시험결과를 얻기가 어려운 단점이 있다.

따라서, 본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위해 연구검토한 결과, 사람 피부와 유사한 기니픽(guinea pig) 복부의 피부를 약제로 처리하여 피부에 붙어 있는 진피 등을 제거하고 이를 건조후 펀치(punch)하여 일정한 두께와 크기로 제조된 피부 디스크를 워시오프제품의 항균력 측정에 사용할 수 있다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

즉, 본 발명의 목적은 약제의 불필요한 과량사용을 막고 피부에 대한 흡착력을 증진시켜 약제의 효능을 극대화할 수 있는 제품의 개발을 위해 약제의 피부에 대한 흡착력과 항균력을 동시에 측정할 수 있는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 약제의 항균력 측정방법에 사용되는 기니픽 피부 디스크 및 이를 제조하는 방법을 제공하는 것이다.

이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.

본 발명에 따른 피부 디스크 확산법(skin disc diffusion method; SDDM)은 소비자의 사용습관에 가장 근접한 방법으로 사람 피부와 유사한 기니픽(guinea pig) 복부의 피부를 약제로 처리하여 피부에 붙어 있는 진피 등을 제거하고 이를 건조후 펀치(punch)하여 일정한 두께와 크기로 제조된 피부 디스크를 워시오프제품의 항균력 측정에 사용하여 소비자의 실제 사용방법에 가장 근접한 항균력 측정방법이다.

본 발명의 방법은 기니픽 피부(guinea pig skin)를 벗긴 후 시약을 처리하여 균일하게 펴 말린 후 일정 크기로 절단한 디스크를 사용한다. 피부를 멸균처리한 후 제품에 적당시간 접촉시킨 후 흐르는 물로 세정하여 항균력을 알아보고자 하는 시험균이 접종된 고체배지 위에 올려놓은 후 배양한다. 배양후 균의 증식이 억제된 투명대(clear zone)의 크기를 측정하여 상대적인 항균력을 측정하는 방법으로 워시오프제품에 적용이 용이하며 균일한 피부의 제작과 피부유사성, 소비자의 사용 습관에 대한 고려도 가능하다는 장점이 있다.

또한 샴푸 베이스에 항균제인 징크 피리티온(Zinc Pyrithione; 이하 ZPT)이 함유된 시료를 기니픽에 처리한 후 세척하고 스카치테이프로 스트리핑(stripping)하여 기니픽 피부에 흡착된 ZPT 양을 측정하여 SDDM 결과와의 상관성을 확인한 결과 시료 농도에 따라 피부에 침투력이 증가하는 경향을 보였다.

본 발명에 따른 항균력 측정방법은 피부 디스크 확산법으로서, 기니픽 피부디스크를 70% 에탄올로 30분 정도 살균한 다음, 상온에서 멸균수로 충분히 수화시켜 기니픽 피부 디스크의 흡수력을 높여준다. 여분의 물은 여과지로 눌러 제거하고, 이어서 수화된 피부 디스크를 시료용액에 넣어 시료용액이 충분히 흡착되도록 한다. 시료용액이 충분히 흡착된 피부 디스크를 개폐할 수 있는 체(closable sieve)에 옮겨넣어 흐르는 물에 씻는다. 이때 체는 멸균하여 사용하며 흐르는 수돗물에 10cm 정도 떨어진 위치에서 유속을 일정하게 조절하여 피부 디스크의 앞뒤면을 각각 적당한 시간동안 씻어준다. 이어서 피부 디스크를 여과지 사이에 넣고 유리판 등으로 눌러 여분의 물을 흡수제거후, 피부 디스크를 균이 접종된 고체배지에 넣고 핀셋으로 밀착시킨 다음 37℃에서 2일 이상 배양한다. 배양완료 후 투명대(clear zone)의 직경과 피부 디스크의 직경을 mm단위로 측정후, 하기 수학식 1에 의해 억제대(inhibition zone)를 측정한다.

투명대는 육안으로 관찰하며 투명대가 관찰되지 않을 경우에는 디스크를 벗겨내고 디스크가 있던 아랫부분에서 미생물 성장정도를 스테레오마이크로스코프(stereomicroscope)를 사용하여 측정한다.

상기 수학식 1에서 D는 투명대의 직경이고, d는 피부 디스크의 직경이다.

상기에서 시료용액은 워시오프제품과 멸균수를 피부디스크에 가장 잘 흡착될 수 있는 농도로 조절하여 제조한다. 농도는 워시오프제품의 유형에 따라 적절하게 조절한다.

상기에서 기니픽 피부디스크는 기니픽(guinea pig)을 제모한 후 시약처리하여 완전히 털을 제거한 후 고르게 펴서 건조시킨 다음, 건조된 피부를 펀칭(punching)한 후 두께와 무게를 측정하여 동일 조건의 피부를 사용한다.

본 발명에 따른 기니픽 피부 디스크의 제조방법은 다음과 같다.

① 기니픽을 제모한후 복부 피부를 벗긴다.

② 200-500%의 물(20℃)에서 24-40시간 방치한다.

③ 200-500%의 물(20℃) + 2-5% CaO/Ca(OH)₂+ 2-5% 황화나트륨 용액 + 1-5% 염 + 1% 비이온계면활성제의 조성액에서 24시간 방치한다.

④ 20℃의 물로 20-30분간 세척한다.

⑤ 1-5% 농도의 수산화칼슘 수용액(20℃)에서 2-3일간 방치한다.

⑥ 물로 10분간 세척한다.

⑦ 1.5% 황산암모늄이 첨가된 200-500%의 물로 1시간 처리한다.

⑧ 30℃의 물로 10분간 세척한다.

⑨ 기니픽 피부를 판에 박아 건조시킨다.

⑩ 건조된 기니픽 피부를 시험하고자 하는 크기로 펀칭하여 사용한다.

이하, 실시예에 의해 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다.

〈실시예 1 : 액체배지희석법에 의한 항균제 성분의 항균력 측정〉

항균제의 항균력을 알아보기 위해 액체배지희석법에 의해 균주의 최소생육억제농도(MIC)를 측정하였다. 사용된 항균제는 징크 피리티온(zinc pyrithione; ZPT)(요시토미 제품, 일본), 케토코나졸(ketoconazole)(큄피나 제품, 스페인), 옥토피록스(octopirox)(획스트 제품, 독일), 트리클로산(triclosan)(시바가이기 제품, 독일), 콜타르(coal tar)(매디스 보태니컬스 제품, 미국), 트리클로로카바닐라이드(trichlorocarbanilide; TCC)(몬산토 제품, 미국), 살리실산, 셀레늄 디설파이드를 사용하였으며, 사용 균주는 ATCC에서 분양받은 P. ovale ATCC 12087이었다. 액체배지희석법에 의한 MIC 측정방법은 다음과 같다.

통상적인 방법에 따라 액체배지에 항균제 시료를 농도별로 희석하여 첨가한후 시험하고자 하는 균액을 접종, 배양후 시험균의 증식 유무를 배지의 탁도를 이용하여 평가하였다. 이때 사용배지 자체가 탁도를 가질 경우에는 현미경을 사용하여 평가하였다. 측정 결과는 표 1과 같다.

이 시험방법은 시료 자체의 항균력을 평가할 수는 있으나 워시오프제품처럼 피부에 잔존하는 항균제의 양이 미치는 결과를 평가하기는 어렵다.

액체배지희석법에 의한 항균제의 최소생육억제농도 MIC 측정결과

약제성분	균주	최소생육억제농도(μg/ml)
ZPT	P. ovale ATCC 12087	8
케토코나졸	P. ovale ATCC 12087	0.1-1
옥토피록스	P. ovale ATCC 12087	10-500
트리클로산	P. ovale ATCC 12087	500
살리실산	P. ovale ATCC 12087	2500
셀레늄 디설파이드	P. ovale ATCC 12087	5000
콜타르	P. ovale ATCC 12087	〉10000
TCC	P. ovale ATCC 12087	〉10000

표 1에서 알 수 있는 것처럼, ZPT의 P. ovale에 대한 MIC는 8μg/ml이며, 케토코나졸의 MIC는 0.1-1μg/ml로 가장 낮았으나, 항비듬제로 널리 쓰이는 콜타르나 TCC의 경우에는 μg/ml 케토코나졸, 옥토피록스는 적은 양의 농도로 항균효과가 있으나, 콜타르, TCC의 경우에는 P. ovale에 대한 항균력이 거의 없는 것으로 나타났다.

표 1의 결과는 최소생육억제농도 이상에서부터 시험균의 증식을 억제할 수 있다는 의미를 갖으며 모든 항균제는 농도가 다를뿐 모두 MIC를 가지며 MIC는 시료에 함유된 총 항균제의 농도에 비례한다.

따라서 시료에 함유된 총 항균제의 농도에 따라 결과가 달라질 수 있고, 또한 탁도가 있는 배지를 사용할 경우에는 육안으로 판정이 곤란하여 현미경을 사용해야하는 단점이 있다.

〈실시예 2 : 기니픽 피부 디스크 확산법에 의한 항균력 측정〉

두께와 무게가 동일한 기니픽 피부디스크를 골라 70% 에탄올로 30분 정도 살균한 뒤 여분의 에탄올을 증발시켜 건조시키고 상온에서 멸균수에 1시간 담구어 충분히 수화시켰다. 수화된 디스크는 여과지로 물기를 제거한 뒤 하기 표 2에 나타낸 농도의 약제성분이 함유된 50%(w/w)로 희석한 샴푸용액에 3분 동안 담궈 샴푸용액이 충분히 흡착되도록 하였다. 샴푸용액이 충분히 흡착된 피부 디스크를 흐르는 물(300ml/분)에 씻은 다음 피부 디스크를 여과지 사이에 넣고 4-6mm 두께의 유리판(15cm X 15cm)에 넣어 여분의 물을 흡수제거후, 피부 디스크를 균이 접종된 고체평판배지에 올려놓고 핀셋으로 밀착시킨 다음 37℃에서 3일 배양하였다. 배양완료 후 투명대(clear zone)의 직경과 피부 디스크의 직경을 mm단위로 측정후, 수학식 1에 의해 억제대(inhibition zone)를 측정하였다. 측정 결과는 표 2와 같다.

피부디스크확산법에 의한 항균력 측정결과

약제성분	시료농도(%)	억제대(㎜)
ZPT	2	31.5±0.37
ZPT	1	38.0±4.08
ZPT	0.5	26.3±4.64
케토코나졸	2	32.7±9.46
콜타르	0.5	0.5 ± 0.5
옥토피록스	0.5	0
TCC	0.3	0
살리실산	0.5	0
셀레늄 디설파이드	1	0
시클로피록스 올라민	1	0
트리클로산	0.3	0

표 2에서 알 수 있는 것처럼, ZPT, 케토코나졸, 콜타르 성분이 함유된 샴푸 외에는 억제대가 형성되지 않았다. 케토코나졸을 2% 함유한 샴푸의 경우도 ZPT 1%가 들어있는 샴푸에 비하여 더 작은 억제대가 형성되었다. 콜타르 0.5% 함유한 샴푸는 디스크 아래쪽의 접촉면만 균의 증식을 억제하였다. 살리실산과 트리클로산, TCC가 함유된 샴푸에서는 억제대가 형성되지 않았다.

즉, 기니픽 피부 디스크 확산법은 피부에 흡착이 가능한 항균제만이 억제대를 나타낼 수 있으므로 액체배지희석법에 의한 항균력 측정 결과에서 MIC를 보이는 항균제도 피부 디스크 확산법에서는 전혀 억제대를 보이지 않을 수 있고, 반대로 액체배지희석법에 의한 항균력 측정 결과 항균력이 낮더라도 피부 디스크 확산법에서는 억제대가 나타날 수 있으므로 워시오프(wash-off) 단계를 거치는 제품에서는 피부에 잔존하는 항균효과를 측정한다는 점에서 적용이 가능한 측정방법이다.

따라서, 피부 디스크 확산법은 피부에 흡착되는 항균제의 효과를 정확하게 측정할 수 있다는 장점이 있다.

〈실시예 3 : 방부제와 항균제가 함유된 시료의 항균력 측정〉

통상의 샴푸 베이스에 방부제와 항균제가 함유된 시료에 대하여 쉐이킹 플라스크법과 피부 디스크 확산법을 이용하여 항균력을 비교시험하였다(방부제와 항균제의 성분 및 함량은 표 3, 4와 같다).

쉐이킹 플라스크법은 방부제인 카톤 CG(Kathon CG) 0.03%와 항균제(성분 및 함량은 표 3와 같다)가 함유된 시료를 일정 농도 넣은 완충액에 시험균을 일정량 넣고, 37℃ 쉐이커에서 진탕배양하면서 시간별로 균수를 측정하였으며, 피부디스크확산법은 전술한 방법에 준하여 시험하였다(방부제와 항균제의 성분 및 함량은 표 4와 같다). 그 결과는 표 3, 4와 같다.

쉐이킹 플라스크법을 이용한 항균력 측정결과

시료(샴푸 베이스속에 포함)	시간별 CFU/ml
시료(샴푸 베이스속에 포함)	0시간	2시간	4시간	6시간	24시간
카톤 CG 0.03%	13000	18100	3200	2000	100
카톤 CG 0.03% + ZPT 0.5%	13000	12000	18400	13800	100
카톤 CG 0.03% + 살리실산 0.5%	13000	2900	700	200	〈100
카톤 CG 0.03% + SBC-25KC 0.5%	13000	9900	11200	7300	〈100
카톤 CG 0.03% + 옥토피록스 1.0%	13000	11900	18500	6900	〈100
카톤 CG 0.03% + TCS 0.3%	13000	9400	6700	3500	〈100
카톤 CG 0.03% + TCC 0.3%	13000	8000	10500	10400	200

표 3에 나타낸 것처럼, 쉐이킹 플라스크법에 의한 항균력 측정 결과 모든 시료에서 24시간 후에는 균수가 감소 했으며 감소율이 가장 빠른 시료는 살리실산이 함유된 시료였다. 방부제로 사용된 카톤 CG 단독으로도 균수를 감소시키는 효과를 보였다.

피부디스크확산법을 이용한 항균력 측정결과

시료(샴푸 베이스속에 포함)	억제대(mm)
시료(샴푸 베이스속에 포함)	1차^a	2차^b	3차^c	4차^d
카톤 CG 0.03%	0	0	0	0
카톤 CG 0.03% + ZPT 0.5%	30.6	27.2	32.5	0
카톤 CG 0.03% + 살리실산 0.5%	0	0	0	0
카톤 CG 0.03% + SBC-25KC 0.5%	0	0	0	0
카톤 CG 0.03% + 옥토피록스 1.0%	0	0	0	0
카톤 CG 0.03% + TCS 0.3%	0	0	0	0
카톤 CG 0.03% + TCC 0.3%	0	0	0	0

표 4에 나타낸 것처럼, 피부 디스크 확산법을 이용한 항균력 측정 결과, ZPT가 함유된 시료에서만 억제대를 보였다. 따라서 피부 디스크 확산법은 실제로 효과가 있는 시료를 찾을 수 있는 시험방법이다. 방부제로 사용된 카톤 CG 단독으로는 억제대를 보이지 않았다.

즉, 카톤 CG만 포함된 시료는 쉐이킹 플라스크법을 이용한 경우에는 항균력이 있는 것으로 나타났으나 피부 디스크 확산법을 이용하여 측정한 결과는 항균력이 없는 것으로 나타났다. 이 결과로부터 제품의 방부를 위하여 포함된 방부제와 비듬 등에 효과가 있는 특정한 시료의 활성을 구분하여 측정할 수 있는 장점이 있음을 알 수 있다.

〈실시예 4〉

샴푸 베이스속에 항균제로서 ZPT 0.1%, ZPT 0.5%, ZPT 1.0% 및 케토코나졸 2.0%가 함유된 각각의 시료에 대하여 본 발명에 따른 기니픽 피부 디스크 확산법에 의한 항균력과 종래의 페이퍼 디스크 확산법, 카프 서브스탄티비티 테스트법에 의한 항균력을 비교 측정하였다.

페이퍼 디스크 확산법은 통상의 페이퍼 디스크를 이용한 할로테스트(워시오프 단계 없이 측정)에 의해 항균력을 측정하고(결과는 표 5에 나타냄), 페이퍼 디스크를 워시오프 처리하여 할로테스트에 의해 항균력을 측정하였으며(결과는 표 7에 나타냄); 피부 디스크 확산법은 워시오프 단계 없이 기니픽 피부 디스크를 이용하여 할로테스트(워시오프 단계 없이 측정)에 의해 항균력을 측정하고(결과는 표 6에 나타냄), 기니픽 피부 디스크를 워시오프 처리하여 할로테스트(본 발명에 따른 기니픽 피부 디스크 확산법)에 의해 항균력을 측정하였으며(결과는 표 8에 나타냄), 카프 서브스탄티비티 테스트법은 카프 피부를 이용하여 통상의 카프 서브스탄티비티 테스트법에 의해 항균력을 측정하였다(결과는 표 9에 나타냄).

페이퍼 디스크를 이용한 할로테스트 측정결과(워시오프 단계 없이 측정)

시료(샴푸 베이스속에 포함)	억제대(mm)
시료(샴푸 베이스속에 포함)	1차	2차	3차	4차
ZPT 0.1%	20.5	23.0	21.5	21.7
ZPT 0.5%	21.5	23.0	22.5	22.5
ZPT 1.0%	22.0	24.0	23.5	23.5
케토코나졸 2.0%	25.0	26.5	26.5	26.1

피부 디스크를 이용한 할로테스트 측정결과(워시오프 단계 없이 측정)

시료(샴푸 베이스속에 포함)	억제대(mm)
시료(샴푸 베이스속에 포함)	1차	2차	3차	4차
ZPT 0.1%	23.5	24.0	24.0	23.8
ZPT 0.5%	22.5	23.0	23.0	22.5
ZPT 1.0%	22.5	22.5	23.0	22.5
케토코나졸 2.0%	27.5	26.0	27.0	26.5

페이퍼 디스크를 워시오프 처리한 할로테스트 측정결과

시료(샴푸 베이스속에 포함)	억제대(mm)
시료(샴푸 베이스속에 포함)	1차	2차	3차	4차
ZPT 0.1%	0	0	0	0
ZPT 0.5%	0	0	0	0
ZPT 1.0%	0	0	0	0
케토코나졸 2.0%	0	0	0	0

피부디스크를 워시오프 처리한 할로테스트 측정결과 (기니픽피부디스크확산법)

시료(샴푸 베이스속에 포함)	억제대(mm)
시료(샴푸 베이스속에 포함)	1차	2차	3차	4차
ZPT 0.1%	4.5	5.0	5.0	5.0
ZPT 0.5%	15.0	12.0	15.5	14.5
ZPT 1.0%	17.0	15.5	18.0	16.8
케토코나졸 2.0%	14.0	12.5	12.5	13.0

카프 피부를 이용한 카프 서브스탄티비티 테스트법에 의한 측정결과

시료(샴푸 베이스속에 포함)	억제대(mm)
시료(샴푸 베이스속에 포함)	1차	2차	3차	4차
ZPT 0.1%	3.5	5.5	3.0	2.5
ZPT 0.5%	10.5	13.0	9.2	14.7
ZPT 1.0%	9.5	8.2	14.0	15.0
케토코나졸 2.0%	14.0	13.5	13.0	13.5

상기 표 5-9에서 알 수 있는 것처럼 시료농도에 따른 데이터에 일관성이 없다.

〈실시예 5 : ZPT 농도에 따른 피부 침투력 시험〉

샴푸 베이스에 ZPT가 0.1%, 0.5%, 1.0% 의 농도로 함유된 각각의 시료를 기니픽 피부 디스크에 2회 처리한후 세척하고 스카치 테이프로 스트리핑하여 ZPT를 용해시켜 스펙트로포토미터로 243nm에서 흡광도를 측정하여 기니픽 피부에 흡착된 ZPT 양을 측정하여 농도별로 기니픽 피부 디스크 확산법의 결과와의 상관성을 확인하였다. 그 결과는 표 10과 같다.

ZPT 농도에 따른 피부 침투력 시험결과

ZPT 농도	스트리핑 번호	1	2	3	4	5
0.1%	흡광도(Abs)	0.161	0	0	0	0
0.1%	침투량(㎍/cm²)	0.088	0	0	0	0
0.5%	흡광도(Abs)	1.292	0.656	0.458	0.143	0
0.5%	침투량(㎍/cm²)	0.892	0.440	0.299	0.075	0
1.0%	흡광도(Abs)	1.426	0.730	0.511	0.150	0
1.0%	침투량(㎍/cm²)	0.988	0.492	0.337	0.080	0

표 10에서 알 수 있는 것처럼, ZPT 농도가 0.1%와 0.5% 사이에서는 피부침투력에 차이가 많았고 0.5%와 1.0% 사이에서는 피부 침투력 차이는 크지 않았다.

이 결과는 상기 표 8에 나타낸 할로테스트 결과와 같은 경향을 보이고 있다.

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 비누, 샴푸, 바디클린저, 클린징폼 같은 사용후 세척이 있는 제품중의 항균효과를 기능성으로 하는 제품의 항균력을 정확하게 측정할 수 있고, 약제의 불필요한 과량사용을 막고 피부에 대한 흡착력을 증진시켜 약제의 효능을 극대화할 수 있는 제품의 개발을 위해 약제의 피부에 대한 흡착력과 항균력을 동시에 측정할 수 있고, 제품의 방부를 위하여 포함된 방부제와 비듬 등에 효과가 있는 특정한 시료의 활성을 구분하여 측정할 수 있는 장점이 있다.

Claims

기니픽을 제모한후 복부 피부를 벗긴 다음 200-500%의 물(20℃)에서 24-40시간 방치하고,

200-500%의 물(20℃) + 2-5% CaO/Ca(OH)₂+ 2-5% 황화나트륨 용액 + 1-5% 염 + 1% 비이온계면활성제의 조성액에서 24시간 방치하고,

20℃의 물로 20-30분간 세척하고,

1-5% 농도의 수산화칼슘 수용액(20℃)에서 2-3일간 방치하고,

물로 10분간 세척하고,

1.5% 황산암모늄이 첨가된 200-500%의 물로 1시간 처리하고,

30℃의 물로 10분간 세척하고,

기니픽 피부를 판에 박아 건조시키고,

건조된 기니픽 피부를 일정 크기로 펀칭하는 단계를 포함하는

기니픽 피부 디스크의 제조방법.
피부 디스크를 알코올로 살균처리후 멸균수에 덤궈 충분히 수화시키고, 수화된 디스크의 물기를 제거하고, 물기가 제거된 디스크를 시료용액에 담궈 흡착시키고, 시료용액이 흡착된 디스크를 흐르는 물에 씻은 다음 물기를 제거하고, 물기를 제거한 디스크를 항균력을 알아보고자 하는 균이 접종된 고체평판배지에 올려놓고 배양하여 하기 수학식 1에 의해 억제대를 측정하는 것을 포함하는 기니픽 피부 디스크를 이용한 항균력 측정방법:

················ 수학식 1

상기 수학식 1에서 D는 전체 억제대의 직경이고, d는 피부 디스크의 직경이다.