KR100243455B1

KR100243455B1 - 헤르페스 병변 치유 촉진용 국소 투여 조성물

Info

Publication number: KR100243455B1
Application number: KR1019930703930A
Authority: KR
Inventors: 더블유. 밀러 브루스; 엘. 크로넨탈 리차드
Original assignee: 도날드 제이. 퍼그리시; 씨이피 홀딩스 인코포레이티드
Priority date: 1991-06-20
Filing date: 1992-06-19
Publication date: 2000-03-02
Also published as: KR940701273A; AU653248B2; EP0590024B1; GR3023867T3; DE69219470T2; CA2111837A1; WO1993000114A1; DE69219470D1; ES2101850T3; EP0590024A1; DK0590024T3; ATE152356T1; JPH07501045A; AU2222192A

Abstract

활성 성분으로서 항바이러스 활성을 갖는 마취제 및 계면활성제를 포함하는 국소용 조성물의 일일 수회 적용은 헤르페스 심플렉스 바이러스성(herpes simplex viral)병변의 치유 시간을 약 10 내지 14일로부터 3 내지 5일로 단축시키고, 또한 염증 및 동통을 감소시킨다. 조성물은 바람직하게는 감염의 예비 또는 전징 단계에서 시작하여 대략적으로 매일 4시간 마다 병변에 적용된다. 증상의 경감은 거의 즉시 일어나며 비처리된 병변과 비교하여 도통 및 종창의 감소 및 더 급속한 치유로 특징지워진다.

Description

헤르페스 병변 치유 촉진용 국소 투여 조성물

[발명의 상세한 설명]

[발명의 배경]

헤르페스 심플렉스 바이러스(Herpes Simplex Virus; HSV)는 구강의 피부 및 점막, 및 생식기의 염증을 특징으로 하는 감염을 일으킨다. 구강과 안면부의 병변과 가장 통상적으로 관련된 HSV 유형은 타입 I HSV이다. 타입 II HSV는 대부분 통상적으로 생식기부의 병변과 관련되어 있다.

HSV의 증상은 일반적으로 염증, 동통 및 병변을 포함한다. 증상은 초기에는 타진통, 동통 및 감염 부위의 종창을 수반하고, 이어서 병변(세포 괴사)이 초래되고 약 10일 내지 14일내에 치유된다. 초기 감염후, 재발성 발작이 여러가지 자극, 예를 들어, 체온의 변화, 스트레스, 자외선 조사 및 화학물질에 대한 노출에 반응하여 일생 동안 발생할 수 있다.

HSV에 대한 치료는 효능면에서 제한적이다. 여러가지 조성물이 시판되고 있음에도 불구히고 현재까지 공지된 치료법은 없다. 아사이클로비르(acyc1ovir; acyc1oguanosine)가 HSV의 치료를 위해 전신 투여되어 얼마간 성공을 거두고 있을뿐이다. 국소용 아사이클로비르는 1차 병변에는 다소 효과가 있지만 재발성 병변에는 효과가 없는 것으로 밝혀졌다. 인터페론 또한 HSV에 대해 전신용으로 및 국소용으로 시험되었지만 단지 제한된 효능만 나타내었다. 항바이러스제의 전신 투여와 연관된 부작용이 많으므로 국소 치료가 매우 바람직하다. 불행히도, 전신 투여시 약간의 효능을 나타내는 화합물조차 국소 투여시 일반적으로 효과가 없으므로 병변은 대체로 건조제 및/또는 국소용 마취제로만 치료된다.

그러므로, 본 발명의 목적은 헤르페스 심플렉스 감염 또는 기타 바이러스성 병변과 연관된 증상을 완화시키기 위한 국소용 조성물 및 이의 사용방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 최소의 부작용으로 HSV 감염 증상을 완화시키고 바이러스성 병변과 통상적으로 연관된 염증 및 동통을 경감시키기 위한 국소용 조성물을 제공하는 것이다.

[발명의 요지]

활성 성분으로서 항바이러스 활성을 갖는 마취제 및 계면활성제를 포함하는 조성물을 일일 수회 적용하여 염증 및 동통을 감소시킬 뿐만 아니라 헤르페스 심플렉스 바이러스성 병변의 치유 시간을 약 10일 내지 5일로 단축시킨다. 조성물은 시판되는 국소용 크림제와 인터페론 함유 정제를 배합함으로써 최초로 제형화되었다. 정제는 1,000IU 비타민 A 중의 1,000IU 사람 백혈구 타입 A 인터페론, 미량 원소 및 가능한 경우 카탈라제(catalase)와 슈퍼옥사이드 디스뮤타제(Superoxide disnmutase) 활성체를 함유한다. 인터페론은 크림제 1/2 용적 온스당 정제 4개의 비로 크림제에 첨가된다. 본 발명에 이르러 인터페론은 조성물의 필수 요소가 아닌 것으로 판명되었다. 마취제 및 계면활성제는 인터페론 부재하에서 치유를 촉진 하고 바이러스성 감염의 증상을 최소화하는 데 효과적이다. 그러나, 인터페론은 마취제와 계면활성제의 활성을 촉진시킬 수 있다.

조성물은 바람직하게는 감염의 예비 또는 전징 단계에서 시작하여, 매일 대략 4시간마다 병변에 도포한다. 거의 즉시 경감되며. 치료되지 않은 병변과 비교시 동통 감소. 종창 감소 및 보다 신속한 치유를 특징으로 한다.

HSV 병면의 증상을 완화시키기 위한 제형은 두개의 필수 성분, 즉 국소용 또는 국부용 마취제와 계면활성제를 포함하며, 이들은 병변에 대한 국소 도포용으로 적당한 안정화제, 완충제 및 방부제를 함유하는 통상적인 담체 크림제, 연고제, 액제 또는 겔에 첨가된다.

적합한 국소용 또는 국부용 마취제

바람직한 마취제는(하이드로클로라이드 또는 기타 염으로 또는 유리 염기로서의) 테트라카인이다. 국소용 마취제는 편리하게는 에스테르류, 에테르류 또는 아미드류로 분류될 수 있다.

에스테르류 아미드류 에테르류

테트라카인 디부카인 다이클로닌

벤조카인 리도카인 프라목신

프로파카카인

프로카인

코카인(미합중국에서 합법적인 약제 아님)

부탐빈 피크레이트(트리니트로페놀-2-부틸-p-아미노벤조에이트)

주사용으로 사용되는, 예를 들어, 척수 마취법에 사용되는 기타 마취제가 있으며, 이들은 국쇼용 마취제로서 통상 열거되지는 않지만 손상되지 않은 피부가 장벽으로 작용하지 않는 병변에 효과가 있을 것으로 예상된다. 이들의 예는 다음과 같다:

클로로프로카인 부피바카인

에티도카인

메피바카인

프릴로카인

테트라카인은 최초로 시험되어 표피를 효과적으로 침투하는 것으로 입증된 프로카인과 구조가 유사하고 시험관내에서 바이러스성 항복제 활성을 가지며, FDA모노그래프에 목록화되어 1 내지 2중량%의 농도로 구순 헤르페스 및 안면 헤르페스치료를 위해 매약(OTC) 제품으로서 시판되기 때문에 바람직한 마쉬제이다.

바람직한 양태에서, 마취제는 1 내지 2중량%의 농도로 담체와 배합되지만, 마취제는 약 0.15 내지 15중량%의 농도로 존재할 수 있다.

계면활성제

계면활성제는 독성이 매우 낮으면서 시험관 내에서 강력한 항바이러스 활성을 갖는 것으로 밝혀졌다. 계면활성제는 물리적으로 바이러스를 불활성화시키며 세포 수용체로의 마취제의 침투를 촉진하여 통상적으로 효과가 없는 농도의 화합물의 유효성을 증가시킬 수 있다.

최초 제형 중의 물질은 치약 및 기타 화장품용 제제에서 발견되는 통상의 계면활성제인, "SLS"라고 언급되는 나트륨 라우릴(또는 도데실) 설페이트이며, 이 물질은 "중첩되지 않은(unfold)" 3차 구조 단백질인 것으로 공지되어 있지만, 종래 실제적으로 항바이러스 활성을 갖는 것으로는 공지되지 않았다. SLS는 네가티브로 하전된 설페이트 그룹을 포함하는 음이온성 계면활성제이다. SLS는 또한 손상되지 않은 피부를 매우 효과적으로 침투할 수 있다.

기타 황 함유 계면활성제, 예를 들어, 나트륨 알킬 아릴 설포네이트 및 알킬 설포네이트가 SLS 대신 사용될 수 있다.

상응하는 양이온성 계면활성제는 단독으로 또는 SLS와 배합되어 활성일 수 있다. 예는 항미생물 특성을 가진 포지티브 하전된 4급 암모늄 착물인 트리메딜도데실 암모늄 클로라이드이다. 계면 활성을 나타내는 장쇄 잔기를 포함하거나 포함하지 않는 기타 4급염도 유용할 수 있다.

약간의 항바이러스 활성을 갖는 것으로 공지된 비이온성 계면활성제, 가장 통상적으로는 노녹시놀이 또한 유용할 수 있다. 통상의 비이온성 계면활성제로는 노녹시놀, 폴러옥시에틸렌 및 폴리옥시에틸렌-폴리옥시프로필렌 공중합체가 있다.

바람직한 양태에서, 계면활성제는 약 0.5 내지 2중량%의 농도로 담체와 배합되지만, 계면활성제는 약 0.1 내지 10중량%의 농도로 존재할 수 있다. 상이한 특성을 갖는 계면활성제가 또한 약 0.1 내지 20중량%의 농도로 배합될 수 있다.

기타 항미생물제

당해 조성물은 항생제, 항진균제 및 기타 항바이러스성 화합물을 포함하는 기타 항미생물제를 함유할 수 있는데, 이들은 기본 조성물의 활성을 보상하거나 보충할 수 있다. 적합한 항생제는 테트라사이클린, 폴리믹신 B 또는 국소용 조성물, 특히 매약 제형에 사용되는 기타 통상의 항생제가 포함된다. 유용한 항진규제의 예로는 톨나프테이프 및 미카틴이 있다. 항바이러스제의 예로는 인터페론, 천연 또는 재조합 물질, 및 뉴클레오사이드 동족체(예: 아사이클로비르)가 있다.

기타 성분

반대자극제(예: 캄포르 및 메탄올), 건조제(예: 벤질 알콜, 레조르시놀 및 레놀) 및 수렴제(예: 황산아연 및 탄닌산)가 또한 조성물에 첨가될 수 있다.

다른 유형의 제제가 또한 제형에 첨가될 수 있다. 예를 들어, 일광 차단데(예: PABA)가 첨가될 수 있는데, 이는 안면 헤르페스가 자외선 조사에 의해 유발될 수 있다고 공지되어 있기 때문이다.

허용되는 약제학적 담체

당해 조성물은 대부분의 경우 비교적 불활성 국소용 담체 중에서 제조될 수 있다. 이러한 많은 담체가 일상적으로 사용되며 약제 지침서를 참조하여 수득할 수 있다. 예로는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 폴리프로필렌 공중합체(플루로닉스) 및 몇몇 수용성 겔이 있다. 바람직한 담체는 유화된 크림제이지만, 계면활성제 및 마취제가 분산될 수 있는 특정 석유 또는 광유계 연고제와 같은 기타 통상적인 담체로 대체될 수도 있다.

이 경우에, 바이러스성 병변의 치유를 촉진하는 데 가장 효과적인 조성물의 바람직한 조성은 다음과 같다(모든 퍼센트는 중량을 기준으로 한다):

메틸 파라벤, 0.25%(0.25 내지 0.5%)

보락스, 0.5%(0.3 내지 0.6%)

라우르아미드 DEA, 4%(0.3 내지 0.4%)

스테아르산, 20%(15 내지 25%)

밀랍, 0.8%(0.5 내지 1.5%)

테트라카인, 1.8%(1 내지 2%)

나트륨 라우릴 설페이트, 0.8%(0.1 내지 3%)

유우칼리유, 0.025%(0.01 내지 0.05%)

PCMX 0.4%,(0.3 내지 0.5%)

물을 가하여 총 중량을 10Og으로 만든다.

대부분의 경우, 활성 성분을 함유하는 담체의 pH는 허용되는 완충제를 사용할 수 있지만, 완충제로서 보락스와 같은 성분을 사용하여 pH 약 6 내지 8로 조정하는 것이 바람직하다.

추가의 첨가제에는 산화방지제, 방향제, 착색제, 물, 방부제(산화방지제 또는 항미생물제), 윤활제, 습윤화제 또는 건조제가 포함될 수 있다.

도포 방법

가장 바람직하게는 전징이 감지된 직후부터 시작하여 환자가 매일 1 내지 6회 조성물을 병변에 도포한다. 병변 또는 전징부를 덮기에 충분한 조성물을 도포한다.

제형은 HSV I(안면 헤르페스 및 구순 헤르페스) 및 HSV II(생식기 헤르페스)둘다에 대해 활성인 것으로 입증되었다. 그러나, 이것은 구조 또는 감염 기작이 유사한, 헤르페스 조스터(Herp)es Zoster)(대상포진 유발) 및 바리셀라(Varicella)바이러스(수두 유발)를 포함하는 기타 바이러스에 대해서 활성이 있을 수 있다.

본 발명은 다음 실시예를 참조하여 추가로 이해될 것이다.

[실시예 1]

헤르페스 심플렉스 바이러스 타입-II의 복제를 직접적으로 불활성화시키거나 억제하는 조성물의 선택된 성분의 성능 측정세포.

사람 배아 폐의 연속 세포주(MRC-5)를 2mM L-글루타민, 1Omg/m1 젠타마이신, O.25mg/m1 암포테리신 B(Fungisone) 및 10% 열-불활성화 태아 송아지 혈청(성장 배지)이 첨가된 어를(Earle) 염중의 이글(Eagle) 최소 필수 배지(MEM)에서 성장시킨다. 세포를 습윤화된 5% C0₂대기하에 37℃에서 또는 밀폐된 플라스크 속에서 성장시킨다. 유지용 배지는 태아 송아지 혈청의 농도가 2%인 점을 제외하고는 상기한 것과 동일한 기본 조성이다. 베로(Vero) 세포(사바나 원숭이의 신장의 연속 세포주)를 MRC-5 세포와 동일한 방법으로 성장시킨다.

바이러스.

헤르페스 심플렉스 바이러스 타입(HSV-II)의 생식기 병변으로부터의 임상적 분리체를 사용한다.

바이러스 스톡은 MRC-5 세포를 세포당 0.01플라크 형성 단위(PFU)로 수회 감염시킴으로써 성장시키고 유지용 배지에 수집한다. 바이러스는 -70℃에서의 냉동과 해동의 3주기를 통해 회수한 후, 4℃에서 15분 동안 1000xg로 원심분리하여 세포 파편을 제거한다. 수득한 바이러스 스톡을 분획하여 -70℃에서 냉동시킨다.

화학 물질.

리도카인 하이드로클로라이드, 니아신, 나트륨 라우릴 설페이트 및 테트라카인의 스톡 용액을 통상적으로 시판되는 시약으로부터 제조한다. 스톡 용액은 보충물이 없는 이글 MEM에서 제조하고 4℃에서 저장한다.

세포 독성 연구.

세포 독성 검정은 MRC-5 세포 및 베로 세포로 수행한다. 시험 화합물을 소정 농도의 유지용 배지에 용해시키고, 96웰 조직 배양 평판 중의 MRC-5 또는 베로세포에 접종한다. 각각의 농축물을 3회 접종한다. 평판을 5% C0₂하에 37℃에서 항온처리하고, 접종 24,48 및 72시간 후에 세포 독성에 대해 등급을 매긴다. 72시간 후에 세포 독성을 50% 나타내는 화합물의 최고 농도를 종말점으로 표시한다.

결과는 다음과 같다:

프로카인 하이드르클로라이드.

프로카인 HC1은 24시간 항온처리한 후에 0.25% 이상의 농도에서 MRC-5 세포에서 유의성 있는 세포 독성을 나타낸다. 프로카인 HC1은 MRC-5 세포에서만큼 베로 세포에서 세포 독성이 크지 않으며 단지 2.0% 이상의 농도에서만 유의성 있는 독성을 나타낼 뿐이다.

테트라카인 HC1.

테트라카인 HC1은 또한 MRC-5 세포에 대해 보다 큰 독성을 나타내며,0.03

이상의 농도에서 24시간 후에 유의성 있는 독성을 나타내지만 베로 세포에 대해서는 독성을 나타내지 않는다.

니아신.

니아신은 0.25% 이하의 농도에서 MRC-5 세포에서 무독성이다.

나트륨 라우릴 설페이트(SLS).

SLS는 0.0025% 이상의 농도에서 MRC-5 세포에 대해 매우 독성을 나타낸다.

불활성화 연구.

시험 화합물이 HSV-II를 직접 불활성화시키는지를 측정하기 위해 시험 화합물의 일련의 희석액 0.5m1를 스톡 HSV-II(역가= 5.0 x 10PFU/ml) 0.5ml와 혼합하고 실온에서 30분 동안 항온처리한다. 30분 후, 화합물-바이러스 혼합물을 유지용 배지로 10,000배 희석시키고 MRC-5 세포에 접종함으로써 바이러스 회수율을 측정한다. 세포를 24시간, 48시간 및 72시간 후에 세포번성 효과에 대해 등급을 매긴다.

프로카인 HC1.

프로카인 HC1은 4% 이하의 시험 농도에서 HSV-II를 직접 불활성화하지 못한다.

테트라카인 HC1.

데트라카인 HC1은 2% 이하의 시험 농도에서 HSV-II를 직접 불활성화하지 못한다.

니아신.

니아신은 0.25% 이하의 시험 농도에서 HSV-II를 직접 불활성화하지 못한다.

나트륨 라우릴 설페이트.

SLS는 O.02 내지 30%의 농도 범위에서 HSV-II를 직접 불활성화하고, 0.0025%이상의 농도에서 바이러스를 부분적으로 불활성화한다. 0.00032%의 농도에서는 불활성화가 전혀 발생하지 않는다.

항바이러스 연구.

항바이러스 활성, 즉 세포내 바이러스의 감염 또는 복제를 억제하는 화합물의 능력은,12 x 100mm 배양 튜브 속의 MRC-5 세포의 컨플루언스한(confluent) 단층을 HSV-II 세포당 3.0플라크 형성 단위(PFU)의 중복 감염(MOI)으로 감염시키고, 유지용 배지를 제거하고, 단층을 인산염 완충 식염수(PBS)로 3회 세척하고, PBS에 현탁된 HSV-1 0.1ml를 가하여 측정한다. 중복 감염은 2개의 튜브 중의 생존해 있는 세포수를 계수하고 스톡 바이러스를 희석시켜, 계수된 세포수의 3배의 PFU가 함유된 바이러스 접종물을 0.1ml 용량으로 생성시킴으로써 계산한다. 60분의 흡수시간 후, 접종물을 제거하고, 유지용 배지 중의 적당한 농도의 시험 화합물 4ml 또는 유지용 배지(대조용)를 가한다. 튜브를 37℃에서 23시간 동안 추가로 항온처리한다. 후-감염(post-infection) 24시간 후 배지를 제거하고, 단층을 PBS로 2회 세척하고, 유지용 배지 1ml 속에서 냉동 및 해동을 3회 수행한다. 바이러스 수율은, MRC-5 세포를 함유하는 96웰 조직 배양 평판에서 일련의 종말점 역가에 의해 측정한다. 모든 실험은 3회 시험한다. 50% 종말점을 계산하고 역가를 TCID 50단위로 표시한다. 항바이러스 효과는 동일한 실험에서 적정된 HSV-II 바이러스 스톡의 TCID 50에서 시험 화합물의 TCID 50을 감하여 측정하고, 백분율로 계산한다.

프로카인 HCl.

2% 이하 농도의 프로카인 HC1은 HSV-II의 복제를 억제할 수 없다.

테트라카인 HCl.

테트라카인 HCl은 0.25%·및 O.5%의 농도에서 HSV-II의 복제를 부분적으로 억제한다. 보다 높은 농도의 테트라카인 HCl은 HSV-II의 복제를 완전히 억제할 것으로 보인다.

니아신.

니아신은 HSV-II의 복제를 억제하지 못한다.

나트름 라우릴 설페이트.

SLS는 0.0025% 및 0.0013%의 농도에서 바이러스의 복제를 억제하지 못한다.

요약하자면, 결과는 SLS가 0.02% 이상의 농도 범위에서 HSV-II의 불활성화제로서 시험 화합물 중 가장 활성이 큰 성분이며, 프로카인 HCl은 항바이러스 활성을 나타내지 않으나, 테트라카인 HCl은 0.5%의 농도에서 다소 바이러스 활성을 나타냄을 보여준다.

고 농도에서 SLS는 또한 병변내의 감염 세포를 박리시키는 작용을 함으로써 스캐빈저 세포(Scavenger cell) 및 세척에 의해 신속하게 제거될 수 있게 하여, 그 결과 상처 치유를 촉진시킨다.

[실시예 2]

기니 피그의 1차 생식기 헤르페스 심플렉스 바이러스 타입 II 감염에 대한 조성물의 선택된 성분의 생체내 효능 평가.

기니 피그의 1차 생식기 HSV-II 감염에 있어서 몇몇 화합물의 항바이러스 활성을 시험한다. 실험은 위약 조절되고 비감염된 동물을 각각의 제제로 처리하여 피부 자극을 평가한다. 5% 아사이클로비르로 처리된 그룹을 포지티브 대조군으로서 포함시킨다.

재료 및 방법.

기니 피그의 생식기 HSV-II 감염.

바이러스 및 바이러스 접종.

HSV-II의 MS 균주를 동물을 감염시키는 데 사용한다. 체중이 250 내지 30Og인 암컷 하틀리(Hartley)계 기니 피그(Chlarles River Breeding Laboratories, Kingston, NY)를 질내 분비물을 제거하기 위해 면봉으로 닦고, 1시간 후에 HSV-II를 1.4 x 10⁵플라크 형성 단위로 질내 접종한다.

기니 피그의 치료.

10마리의 감염된 기니 피그 그룹을, HSV를 접종하고 6시간 또는 48시간 후부터 시작하여 7일 동안 대략 8시간마다 1일 3회 외부 생식기 피부에 0.1m1 및 질내로 0.1m1 국소치료한다. 3마리의 비감염된 동물 그룹을 사용하여 각각의 제제의 독성을 평가한다.

샘플 수집 및 바이러스 검정.

질내 바이러스 복제에 대한 치료효과를 측정하기 위해, HSV-II를 접종한 후 1일, 3일, 5일, 7일 및 10일째에 질내 분비물을 면봉으로 수거하고 배지 2.0m1를 함유하는 튜브에 넣고, 볼덱싱시켜 HSV-II에 대해 적정할 때까지 -70℃에서 냉동 시킨다. 모든 샘플을 수집하면 이들을 해동시키고, 단계적으로 회석시켜 HSV-II 역가를 래빗 신장 세포에서 마이크로역가 CPE 검정을 사용하여 측정한다. 평균 최고 바이러스 역가 및 바이러스 역가-일 곡선하 면적(areas under the virus titer-day curve)을 계산하고 분석한다.

외부 생식기 병변의 스코어링.

외부 생식기 병변의 전개 및 확산에 대한 치료 효과를 측정하기 위해, 병변중증도를 1자 감염(21일) 동안 0 내지 5+ 스케일로 스코어링(scoring)한다. 평균최고 병변 스코어 및 병변 스코어-일 곡선하 면적을 계산하고 분석한다.

효능에 대한 평가.

접종된 동물의 수에 대한 감염된 동물의 수, 곡선하 병변 스코어-일 면적 및 바이러스 역가-일 면적, 비처리되고 위약 처리된 동물 또는 위약 처리되고 약물 처리된 동물간의 최고 병변 스코어 및 최고 바이러스 역가를 만-휘트니 U 순위 합계 시험(Mann-Whitney U rank sum test)을 사용하여 비교 분석한다. 0.05 이하의 p-값을 유의한 것으로 간주한다.

샘플:

1A 프로카인을 포함하지 않는 기본 배합물

2A 프로카인 또는 SLS를 포함하지 않는 기본 배합물

3A SLS를 포함하지 않고 1.8% 프로카인을 포함하는 기본 배합물

3 1.3% SLS 및 1.8% 프로카인을 포함하는 기본 배합물

5 프로카인을 포함하지 않고, 1.6% 테트라카인 및 SLS를 포함하는 기본 배합물

6 프로카인을 포함하지 않고, 1.6% 테트라카인, 인터페론(Schering Plough, 200,000단위) 및 SLS를 포함하는 기본 배합물

기본 배합물은 바이러스성 병변의 치유를 족진하는 바람직한 양태의 조성물에 대해 정의한 바와 같으나, SLS 또는 마취제를 포함하지 않는다. 아사이클로비르(ACV)를 포지티브 대조군(즉, 항바이러스 활성을 지니는)으로서 사용한다. 위약(PBS) 처리된 동물을 비처리된 대조군 동물과 비교한다. 2A를 위약 처리된 동물 및 비처리된 동물과 비교한다. ACV 그룹을 위약 처리된 그룹과 비교한다. 모든 기타의 것들을 2A와 비교한다.

결과:

1가 자극 측정을 위해, 3마리의 기니 피그 그룹을 각각의 샘플 또는 대조군으로 처리한다. 피부 자극 또는 생식기 독성에 대한 어떠한 육안적 징후도 관찰되지 않는다. 동물들은 연구과정을 통해 외관상으로는 건강하고 정상적으로 유지된다.

바이러스 복제에 대한 효과.

HSV-II 접종 후, 질관(vaginal tract)에서의 바이러스 복제는 3 내지 5일째에 최고에 달한 다음, 10일째까지 대부분의 동물의 경우 바이러스가 제거됨에 따라 점차적으로 감소한다. 바이러스 접종 후 6시간째 투여된 단지 5%의 ACV는 곡선하바이러스 역가-일 면적(AUC) 또는 핑군 최고 바이러스 역가를 유의성 있게 감소시킨다(p-값은 각각 0.05 및 0.01 미만). 다른 모든 배합물은 치료가 언제 개시되느냐에 관계없이 질의 바이러스 복제를 변경시키지 못한다.

병변 전개에 대한 효과.

HSV-II 점종 후 3 내지 4일째, 소포성 병변이 외부 생식기 피부에 나타나기 시작한다. 병변은 7 내지 8일까지 궤양형성 단계로 진전되고 15일 내지 21일째까지 점차 치유된다. +6시간째 PBS 위약으로 처리된 동물은 비처리된 대조군에 비해 병변 스코어-일 AUC 값을 상당히 증가시킨다(p-값은 0.05 미만). +6일째에 투여된 배합물(2A)에 대한 부형제 대조군은 비처리된 대조군과 비교하여 상당히 낮은 병변스코어-일 AUC 값을 나타낸다(p-값은 0.05 미만). +6시간째에 투여된 배합물(2A)에 대한 부형제 대조군은 +6시간째 위약 처리된 대조군 및 비처리된 대조군과 비교하여 매우 낮은 병변 스코어-일 AUC를 나타낸다(p-값은 각각 0.05 미만 및 0.001). 그러나, 2A 개시된 지 48시간째의 후접종은 +48시간째 위약 처리된 대조군 및 비처리된 대조군과 비교하여 매우 큰 병변 스코어-일 AUC를 나타낸다(p-값은 각각 O.O1 미만 및 0.001).

HSV-II 접종 후 6시간째에 개시된 1A, 5, 6 또는 5% ACV를 사용한 치료는 병변 전개를 매우 감소시킨다(p-값은 O.05 이하). 5% ACV는 또한 평균 최고 병변 스코어를 감소시킨다(p-값은 0.001 미만). 48시간째에 이들 배합물을 사용한 치료는 병변 전개를 억제하지 못한다. 증가된 병변 스코어-일 AUC 및 평군 최고 스코어가 1A 및 5를 사용한 경우 나타난다(p-값은 (].06 이하).

위약이 42.5의 병변 스코어를 나타내는 것을 주지하는 것은 중요하다. 모두 1.3% SLS를 함유하는 샘플 1A,3,5 및 6은 각각 스코어 17.2, 31.7, 19.8 및 17.4를 나타내는 반면, SLS를 함유하지 않는 샘플 2A 및 3A는 각각 27.8 및 21.0의 스코어를 나타낸다. 샘플 3 및 3A는 불규칙한 스코어를 나타내며, 이는 배합물 또는 시험 오차에 기인한다고 여겨진다. 그러나, 배합물 중에 SLS가 존재하는 것이 당해 모델에서 병변 경과의 중증도를 감소시킨다는 것이 명백하다.

배합물, 특히 SLS 비함유 배합물 중의 성분의 용해도 편차와 함께 사용된 동물 모델에 기인하여 결과에서 큰 표준편차가 나타나지만, SLS-함유 샘플의 전체 평균 스코어는 12로, SLS를 함유하지 않은 샘플의 스코어인 23에 비해 중증도가 48% 감소한다. 24시간 그룹에서 평균 스코어는 SLS 샘플이 14이고 대조군이 17.2로 19% 향상된 반면, 72시간 그룹에서, 필적하는 스코어는 10.5 대 26으로 병변 중증 도가 60% 감소한다.

[실시예 3]

사람에 대한 HSV 병면의 치유 촉진시 생체내 효능의 입증.

6명의 환자에 대한 케이스 보고 자료는 SLS 및 프로카인을 함유하는 샘플을 사용하여 개방 시도로 수득한다. 평균 치유일수는 동일한 환자에 대해 10일의 평균 병력에서 6일로 감소된다. 더우기, 질환의 경과는 유리하게 변형되는 것으로 나타난다. 감염의 단계는 다음과 같이 정의된다:

홍반(Ery)

구진 (Pap )

소포(Ves)

부종(Ede)

가피(Sca)

표 1은 크림제를 재발성(1차가 아닌) 병변에 1일 4회 국소적으로 도포한 임상 연구 결과를 나타낸 것이다.

[표 1]

6명 환자중 4명은 구진 상태 이상으로는 전혀 진행되지 않으며, 전신성 아사이클로비르가 사용된 병력 대조군과 비교하여 평균 치유일수가 44%까지 감소됨을 주지하는 것이 중요하다. 병변 관련 동통은 모든 케이스에서 감소되거나 제거된다.

[실시예 4]

사람 환자에 대한 보다 큰 규모의 연구.

위약 대조군으로 무작위로 추출된 15명 및 활성 화합물에 대해 무작위로 추출된 18명을 포함하는 33명을 헤르페스 심플렉스 I 감염에 대해 치료한다. 환자들은 입술 및 안면부에 주로 타입 I 헤르페스 심플렉스 바이러스의 헤르페스 병변이 존재하는 것을 특징으로 한다. 환자에게 전징 단계의 48시간 이내에 시작하여 가피가 떨어져 나갈 때까지 병변을 덮기에 충분한 양의 연고제/크림제를 깨어있는 동안 2시간마다 도포하도록 지시한다. 연고제는, 중량%를 기준으로 하여, 유우칼리유, 스테아르산, 라우르아미드 DEA, PCMX, 밀랍, 메틸파라벤 및 보락스의 수성 기제 중의 1.9% 데트라카인 및 1.0% 나트륨 라우릴 설페이트를 함유한다. 동통, 소양증, 치유 및 임상적 유효성에 대한 의사의 평점 스케일 및 치료의 인지된 경감에 대한 환자의 평점 스케일이 표 2에 기재되어 있다.

[표 2]

개개의 평점 스케일에 대한 평균, 표준오차 및 샘플 크기 및 치료 그룹에 의한 가피 형성 및 가피 상실까지의 시간(일)

표 2로부터 알 수 있는 바와 같이, 활성 그룹은 모든 스케일에서 보다 우수한 평점을 갖는다. 원-테일드(one-tailed)(위약 그룹토-다 우수한 활성 그룹) 월콕슨 순위 합계 시험(Wilcoxon Rank Sums Test)에 의해, 인지된 경감은 통계학적으로 유의성이 있지만(p=.043), 소양증에 대한 평점은 유의성이 없다(p=.055).

가피 상실까지의 시간 분포에 대한 카플란-마이어 분석(Kaplan-Meier analysis)을 수행한다. 로그-순위 시험(Log-Rank test)에 의한 2개의 곡선은 매우 상이하며(p=.049), 활성 그룹의 시간이 더 짧다.

예비 통계학적 분석에 의한 임상적 암시는 다음과 같다:

1. 주요 주관적인 QUS수(가피가 떨어져 나갈 때까지의 시간)는 7.1일에서 5.9일로 감소된다. 이것은 치유시간이 약 18% 감소됨을 나타내며 통계학적으로 유의성이 있다(p=.049).

2. 연구자들에 의한 객관적인 평가는, 소양증은 유의성 직전에 있으며 각각의 기타 변수(동통. 치유, 전체적인 유효성)는 포지티브 경향임을 보여준다. 연구자들의 견해는 헤르페스 감염의 국소 치료에 대한 환자의 의견과 또한 환자 자신의 편견을 어느 정도 반영하고 있음을 인지해야 한다.

3. 환자의 경감 의견은 통계학적으로 유의성이 있고(p=.043) 중요한 발견임을 나타낸다.

4. 비응답자들에 대해 의문이 야기되었다. 두가지 유형의 비응답자들이 있다: 약제에 대해 호의적인 견해를 갖는 위약 치료된 환자와 비호의적인 견해를 갖는 활성 치료된 환자.

특정 질환에 대한 임상적 연구에서 반응의 다양성은 개체간의 상이함에 기인한 사람 생물학에서의 다양성으로 설명되는 자연 현상이다. 모든 연구에서 항상 비응답자가 있다. 사실상, 연구는 비응답자가 없는 경우에 훨씬 의심이 생길 것이다.직접적인 어려운 측정이 없으므로 주관적인 평가가 사용되는 경우 훨씬 명백하다.

그러나, 요약하면, SLS 및 테트라카인을 함유하는 조성물은 균일하게 보다 양호한 결과를 제공하는 것으로 여겨지며 소량의 샘플에도 불구하고 중요한 측정치에 대해 통계학적으로 유의성이 있다.

본 발명의 조성물 및 방법의 변형 및 변이는 당해 분야의 숙련가에게 명백할것이다. 이러한 번형 및 변이는 첨부된 특허청구의 범위의 영역내에서 이루어져야 한다.

Claims

헤르페스 바이러스(herpes virus)로 인한 병변의 치유 시간을 단축시키기 위한 활성 성분으로서 테트라카인, 디부카인, 다이클로닌, 벤조카인, 리도카인, 프라목신, 프로파라카인, 프로카인, 트리니트로페놀 2-부틸-p-아미노벤조 에이트, 클로로프로카인, 부피바카인, 에티도카인, 메피바카인 및 프릴로카인 중에서 선택된 국소용 마취제와 음이온성 계면활성제와의 배합물을 약제학적으로 허용되는 국소용 담체와 함께 포함하는, 헤르페스 바이러스로 인한 병변을 치료하기 위한 국소 투여 조성물.
제1항에 있어서, 국소용 마취제가 약 0.1 내지 20중량% 농도의 테트라카인 및 프로카인 중에서 선택되는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 음이온성 계면활성제가 나트륨 라우릴 설페이트, 나트륨 알킬 아릴 설포네이트 및 알킬 설포네이트 중에서 선택되는 조성물.
제1항에 있어서, 마취제가 약 0.2 내지 2중량% 농도의 테트라카인이고, 계면 활성제가 약 0.5 내지 5중량% 농도의 나트륨 라우릴 설페이트인 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 마취제와 음이온성 계면활성제와의 유효 배합물 이외에 항생제, 항진균제 및 항바이러스제 중에서 선택된 화합물을 추가로 포함하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 완층제, 산화방지제, 방부제, 착색제, 방향제, 윤활제, 습윤제, 일광 차단제 및 건조제 중에서 선택된 화합물을 추가로 포함하는 조성물.
제1항 또는 제2항에 있어서, 담체가 스테아르산, 라우르아미드 DEA, 나트륨 라우릴 설페이트, 보락스,테트라카인, 유우칼리유, 밀랍, 방부제 또는 메틸 파라벤을 포함하는 조성물.
제1항에 있어서, 헤르페스 심플렉스 바이러스(herpes simplex virus) 타입 I 또는 타입 II로 감염된 병변에 적용되는 조성물.
제5항에 있어서, 음이온성 계면활성제가 라우릴 설페이트, 나트륨 알킬 아릴 설포네이트 및 알킬 설포네이트 중에서 선택되는 조성물.
제5항에 있어서, 마취제가 약 0.2 내지 2중량% 농도의 테트라카인이고 계면 활성제가 약 0.5 내지 5중량% 농도의 나트륨 라우릴 설페이트인 조성물.
제6항에 있어서, 음이온성 계면활성제가 라우릴 설페이트, 나트륨 알킬 아릴 설포네이트 및 알킬 설포네이트 중에서 선택되는 조성물.
제6항에 있어서, 마취제가 약 0.2 내지 2중량% 농도의 테트라카인이고 계면활성제가 약 0.5 내지 5중량% 농도의 나트륨 라우릴 설페이트인 조성물.
제7항에 있어서, 음이온성 계면활성제가 라우릴 설페이트, 나트륨 알킬 아릴 설포네이트 및 알킬 설포네이트 중에서 선택되는 조성물.
제7항에 있어서, 마취제가 약 0.2 내지 2중량% 농도의 테트라카인이고 계면활성제가 약 0.5 내지 5중량% 농도의 나트륨 라우릴 설페이트인 조성물.