KR100220404B1 - 펩티드, 기관지 확장제 및 혈류 개선제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 일반식(1) H-His-Ser-Asp-A-B-Phe-Thr-Asp-C-Tyr-D-Arg-E-Arg-F-Gln-G-Ala-Val-I-J-Tyr-Leu-K-L-M-Leu-N으로 표시되는 펩티드, 또는 약학적으로 허용된 그의 염에 관한 것이다. 상기 일반식 (1)에서, A는 Ala 또는 Gly이고; B는 Ile 또는 Val이고; C 는 Asn 또는 Ser이고; D는 Thr 또는 Ser이고; E는 Leu 또는 Tyr이고; F,I 및 J는 Lys 또는 Arg이며, F,I 및 J중 적어도 하나는 Arg이고; G는 Met, Leu 또는 nLeu이고; K는 Asn 또는 Ala이고; L은 Ser 또는 Ala이고; M은 Ile 또는 Val이고; 및, N은 -NH₂또는 Asn-NH₂이며, 이 때 A는 Ala, B는 Val, C는 Asn, D는 Thr, E는 Leu, K는 Asn, L은 ser, M은 Ile, 및 N은 Asn-NH₂인 조합은 제외한다. 또한, 본 발명은 전기 펩티드 또는 약학적으로 허용된 그의 염을 유효성분으로 포함하는 기관지 확장제 또는 혈류 개선제에 관한 것이다.

Description

[발명의 명칭]

펩티드, 기관지 확장제 및 혈류 개선제

[발명의 분야]

본 발명은 신규한 펩티드, 기관지 확장제 및 혈류 개선제에 관한 것이다.

[배경기술]

VIP(혈관 작용성 장관 펩티드)는 뇌-장 펩티드라고 불리는 생리학적 작용 펩티드의 일종이며, 그 작용은 혈류를 증진시키고 혈압을 저하시키는 것이다. VIP는 1970년에 돼지의 장에서 추출되었으며, 28개의 아미노산 잔기로 구성되어 있다(참조: S. I. Said, V. Mutt Science, 169, 1217 (1970)).

PACAP(뇌하수체 아데닐레이트 사이클라제 활성 폴리펩티드)는 1989년에 양의 시상하부에서 분리되었는데, 뇌하수체 배양세포의 아데닐레이트 사이클라제를 활성화 시키는 것을 지표로 삼아 생분석하였으며 38개의 아미노산 잔기로 구성된 구조적으로 결정된 펩티드임이 밝혀졌다(참조: A. Miyata, A. Arimura et al., Biochem. Biophys. Res. Commun., 164, 567(1989)). PACAP이 N-말단의 27 아미노산 잔기는 PACAP활성을 가지며, 상기 27 아미노산의 아미노산 서열은 VIP와 매우 유사한 구조를 갖는다.

VIP와 PACAP는 아미노산 서열에 있어서 시크리틴, 글루카곤 등과 유사하기 때문에, 글루카곤 계열에 속하는 펩티드로 분류된다. 혈관 팽창과 혈류 촉진에 대한 강한 작용 때문에, VIP와 PACAP는 궤양, 동상, 욕창, 발기부전 등의 치료와 머리카락의 재생과 성장에 사용할 수 있으리라 기대된다. 또한, VIP와 PACAP는 호흡계에서 기관지의 평활근에 대한 매우 강한 이완작용을 나타내므로, 아세틸콜린, 히스타민, 세로토닌 등과 같은 자극제에 의해 유도되는 평활근 수축을 경감시킨다. VIP와 PACAP의 이러한 이완작용은 일반적인 기관지 팽창에 의하여 아드레날린 β₂수용체를 통해 유발되는 이완작용과는 다르다. 그러므로, VIP와 PACAP는 β₂수용체의 자극제가 효과적으로 작용하지 않아 치료하기 어려운 천식성 경련에 대한 치료효과가 기대된다.

VIP와 PACAP 외에도, 기관지 확장작용, 혈압강하 작용 및 머리카락 재생 작용을 가지며 28 내지 31개의 아미노산잔기로 구성된 펩티드가 알려져 있다(참조: 일본국 공개특허 제 246,597/87호; 제 83, 012/89호; 및, 제297,498/92호).

그러나, VIP와 PACAP보다 나은 기관지 확장제와 혈류 개선제 및 기관지 확장작용과 혈류 증가작용의 지속성을 갖는 또다른 펩티드의 개발이 요구된다.

[발명의 개시]

본 발명의 목적은 기관지 확장 작용의 지속성이 탁월하고 또한 혈류 증가작용에서도 탁월한 신규한 펩티드, 전기 펩티드를 유효성분으로 포함하는 기관지 확장제 및 혈류 개선제를 제공하는 것이다.

본 발명은 일반식(1) H-His-Ser-Asp-A-B-Phe-Thr-Asp-C-Tyr-D-Arg-E-Arg-F-Gln-G-Ala-Val-I-J-Tyr-Leu-K-L-M-Leu-N 또는 일반식(2) H-His-Ser-Asp-A-B-Phe-Thr-Asp-C-Tyr-D-Arg-E-Arg-F-Gln-G-Ala-Val-I-J-Tyr-Leu-K-L-M-Leu-P-Gly-Q-R로 표시되는 펩티드, 또는 약학적으로 허용된 그의 염을 제공한다. 상기 일반식(1)에서, A는 Ala 또는 Gly 이고; B는 Ile 또는 Val이고; C는 Asn 또는 Ser이고; D는 Thr 또는 Ser이고; E는 Leu 또는 Tyr이고; F, I 및 J는 Lys 또는 Arg 이며 F, I 및J 중 적어도 하나는 Arg이고; G는 Met, Leu 또는 nLeu이고; K는 Asn 또는 Ala이고; L은 Ser 또는 Ala이고; M은 Ile 또는 Val이고; 및, N은 -NHz 또는 Asn-NHz이며, 이때 A는 Ala, B는 Val, C는 Asn, D는 Thr, E는 Leu, K는 Asn, L은 Ser, M은 Ile, 및 N은 Asn-NHz인 조합은 제외한다. 상기 일반식(2)에서 A, B, C, D, E, F, G, I, J, K, L 및 M은 전기와 같이 정의되며; F, I 및 J 중 적어도 하나는 Arg이고; P는 Asn 또는 화학결합이고; Q는 Lys, Arg, Lys-Arg, Arg-Arg 또는 화학결합이고; 및, R은 -OH 또는 -NH₂이다.

또한, 본 발명은 상기 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 기관지 확장제를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 혈류 개선제를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염 및 약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 사람에게 투여하는 단계를 포함하는 기관지 확장방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 사람에게 투여하는 단계를 포함하는 혈류 개선방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염의 기관지 확장을 위한 용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염의 혈류 개선을 위한 용도를 제공한다.

본 발명의 펩티드 또는 그의 염은 평활근의 이완작용으로 인한 기관지 확장 작용의 지속성이 우수하다. 그러므로, 본 발명의 펩티드 또는 그의 염은 기관지 확장제로 유용하다.

또한, 본 발명의 펩티드 또는 그의 염은 혈류 증가작용과 그 지속성이 우수하다. 따라서, 본 발명의 펩티드 또는 그의 염은 혈류 개선제로서도 유용하며, 적은 양의 투약으로 혈류 개선의 효과를 나타낼 수 있다.

본 명세서에서 아미노산, 펩티드, 보호기, 용매 등의 약자는 순수 및 응용화학 국제연합(IUPAC) 또는 생화학 국제연합(IUB) 또는 이 분야에서의 종래 약자를 따르며, 그 예는 하기와 같다. 아미노산 등의 광학 이성질체가 존재하면, 특별히 명시되지 않는 한 L-이성질체를 의미한다.

His : 히스티딘 잔기 Ser : 세린 잔기

Asp : 아스파라진산 잔기 Ala : 알라닌 잔기

Val : 발린 잔기 Phe : 페닐알라닌 잔기

Thr : 트레오닌 잔기 Tyr : 티로신 잔기

Asn : 아스파라진 잔기 Leu : 로이신 잔기

Arg : 아르기닌 잔기 Lys : 리신 잔기

Glu : 글루타민 잔기 Met : 메티오닌 잔기

Gly : 글리신 잔기 Ile : 이소로이신 잔기

Boc : t-부틸옥시카르보닐기 Nle : 노르로이신 잔기

Aoc : t-아밀옥시카르보닐 Bzl : 벤질기

z : 벤질옥시카르보닐기 Tos : p-톨루엔설포닐기

OBut : t-부틸에스테르 OMe : 메틸에스테르

OBz : 벤질에스테르 ONP : p-니트로페닐에스테르

Bom : 벤질옥시메틸기 TFA : 트리플루오로아세트산

THF : 테트라히드로푸란 DCM : 디클로로메탄

DMF : 디메틸포름아미드 DOC : 디시클로헥실카르보디이미드

WSC : N-에틸-N'-디메틸아미노프로필-카르보디이미드

OSu : N-히드록시석시니미드 에스테르

HOSU : N-히드록시석시니미드 HOBT : 1-히드록시벤조트리아졸

DIEA : 디이소프로필에틸아민.

상기식(1) 또는 (2)에 의해 표시되는 펩티드들은 공지의 펩티드의 합성을 위한 종래수단에 의해 생산할 수 있다. 예를 들면, 이 펩티드들은 "The Peptides"(펩티드들) 1권(1966)(참조: Schreder and Luhke: Academic Press, New York, U.S.A. 및 "Peputido Gosei"(펩티드 합성)(찹조: Izumiya et al., Maruzen K.K.(1975), Japan) 등에 기술된 방법에 따라 아지드법, 염산법, 무수물산법, 혼합무수물산법, DCC법, 활에스테르법(P-니트로페닐에스테르법, N-히드록시석시닉산 이미드 에스테르법, 시아노 메틸에스테르법 등), 우드워드(Woodward) 시약 K를 이용한 방법, 카르보이미다졸법, 산화-환원법, DCC-첨가(HONB, HOBt, HOSu)법 등으로 생산될 수 있다. 이 방법들은 고체-상 합성 및 액체-상 합성 모두에 적용할 수있다. 종래의 폴리펩티드들의 합성을 위한 상기에 기술된 방법들에 따르면, 표적 펩티드는 전기 펩티드의 각 아미노산이 C-말단 아미노산에 연속적으로 연결되는 단계별 연장법 또는 전기 펩티드의 일부 분절들이 합성된 후 서로 결합되는 분절 축합법으로 생산될 수 있다.

예를들어, 단계별 연장법에 의한 고체-상 합성은 다음과 같이 메리필드(Merrifield, R.B)의 방법(참조: Solid Phase Peptide Synthesis, J. Amer. Chem. Soc., 85, 2149-2159(1963))에 따라 수행될 수 있다: 표적 펩티드의 C-말단 아미노산(즉, 본 발명에서는 상기 일반식(1)또는 (2)의 아미노산 서열)의 아미노기를 보호시킨 후, 카르복실기에 결합할 수 있는 기능기를 가진 불용성 수지에 결합시킨다. 이후 아미노기를 탈보호시키고, 아미노기가 보호된 그 다음 아미노산을 전기 자유아미노기에 결합시킨다. 이러한 단계들을 여러번 반복하여, 식(1) 또는 (2)의 1-위치에 히스티딘 잔기가 결합될때까지 아미노산 사슬을 연장시킨다. 이후 수득된 펩티드를 수지에서부터 분리해낸다.

상기 방법은, 아미노산 간의 펩티드 결합에 참여하는 카르복실기의 활성 뿐 아니라 아미노산 간의 펩티드 결합에 참여하는 아미노기에 대한 보호(즉, 아미노기에 보호화기를 연결) 및 탈보호(즉, 아미노기에서 보호화기를 분리)를 필요로 한다. 필요하면, 보호화기를 아미노산의 측쇄에 있는 기능기에도 연결시켜야 한다.

아미노기를 보호시키는데에 사용되는 보호화기는 종래에 사용되는 것들을 포함한다. 예를 들면, 벤질옥시카르보닐(Z), t-부틸옥시카르보닐(Boc), t-아밀옥시카르보닐(Aoc), 이소보르닐옥시카르보닐, p-메톡시벤질옥시카르보닐, 2-클로로벤질옥시카르보닐, 아마단틸옥시카르보닐, 트리플루오로아세틸, 프탈로일, 포르밀, o-니트로페닐설페닐 및 디페닐포스피노티오일이 있다.

카르복실기를 보호하는데에 사용되는 보호화기는 종래에 사용되는 것들을 포함한다. 예를 들면 메틸 에스테르, 에틸 에스테르, 프로필 에스테르, 부틸 에스테르 및 tert-부틸 에스테르와 같은 알킬 에스테르, 벤질 에스테르, p-니트로벤질 에스테르, 메틸벤질 에스테르, p-클로로벤질 에스테르, 벤질히드릴 에스테르, 벤질옥시카르보닐히드라지드, tert-부틸옥시카르보닐히드라지드 및 트리틸히드라지드가 있다.

펩티드 결합에 참여하는 카르복실기의 활성을 상기에서 기술된 종래의 공지 방법에 의해 수행할 수 있으며, 활성에 사용되는 시약 등은 공지의 시약 등으로부터 선택될수 있다. 카르복실기의 활성은 전기 카르복실기가 여러 가지 시약과 반응하여 해당 염산, 무수물산 또는 혼합 무수물산, 아지드 및 활성 에스테르(예를들면, 펜타클로로페놀, p-니트로페놀, N-히드록시서시니미드, N-히드록시벤즈트리아졸, N-히드로이-5-노르보르넨-2,3-디카르복시이미드 등과 같은 에스테르) 등을 형성하는 것을 포함한다.

측쇄에 기능기를 가진 아미노산에 대하여, 펩티드 결합의 형성반응시 기능기가 바람직하게는 보호된다. 특히, His, Tyr, Lys, Asp, Arg 및 Ser의 측쇄에 있는 기능기가 바람직하게는 보호된다. 기능기의 보호는 종래의 방법에 의해 보호화기를 연결시킴으로 수행된다. 펩티드 합성을 완료한 후, 보호화기는 분리시킨다.

His에 있는 아미노기를 보호시키는데 사용되는 보호화기는 벤질옥시메틸(Bom), 토실(Tos), 벤질(Bzl), 벤질옥시카르보닐(Z) 및 트리틸 등을 포함한다.

Ser 및 Thr에 있는 히드록실기는 에스테르화 또는 에테르화에 의해 보호될 수 있지만, 꼭 필요한 것은 아니다. 에스테르화에 의해 도입되는 보호화기는 아세틸 등과 같은 약 알카노일기, 벤조일 등과 같은 아로일기 및 벤조일옥시카르보닐, 에틸옥시카르보닐 등과 같은 카르보닉산-유도기를 포함한다. 에스테르화에 의해 유도되는 보호기의 바람직한 예로는 벤질 (Bzl), 테트라히드로피라닐 및 tert-부틸이 있다.

Tyr에 있는 히드록실기를 보호하는데에 사용되는 보호화기는 벤질(Bzl), 브로모벤질옥시카르보닐(BrZ), 디클로로벤질(Cl₂-Bzl), 벤질옥시카르보닐(Z), 아세틸 및 토실(Tos) 등을 포함한다.

Lys에 있는 아미노기를 보호하는데에 사용되는 보호화기는 벤질옥시카르보닐(Z), 클로로벤질옥시카르보닐(Cl-Z), 디클로로벤질(Cl₂-Bzl), t-부틸옥시카르보닐(Boc) 및 토실(Tos) 등을 포함한다.

Arg에 있는 구아니디노기를 보호하는데에 사용되는 보호화기는 토실(Tos), 니트로, 벤질옥시카르보닐(Z) 및 t-아밀옥시카르보닐(Aoc) 등을 포함한다.

Asp에 있는 카르복실기의 보호는 벤질 알코올, 메탄올, 에탄올 또는 tert-부탄올 등으로 에스테르화함으로써 수행한다.

펩티드 결합의 형성 반응은 때때로, 축합시약, 예를 들면 디스클로헥실카르보디이미드(DCC), 카르보디이미다졸 등과 같은 카르보디이미드 시약, 또는 테트라에틸피로포스페이트, 벤조트리아졸-N-히드록시트리스디메틸아미노포스포니움 헥사플루오로포스페이트(Bop시약)의 존재하에서 실시할 수 있다.

상기 고체-상 합성에 사용되는 불용성 수지는 카르복실기에 결합할 수 있는 기능기를 가진 수지이다. 예를 들면 벤조히드릴아민 수지(BHA 수지), 클로로메틸수지, 옥시메틸수지, 아미노메틸 수지, p-메틸벤즈히드릴아민 수지(MBHA수지), 4-아미노메틸페녹시메틸 수지, 4-히드록시메틸페녹시메틸 수지, 4-옥시메틸페닐아세트아미드메틸 수지(PAM 수지) 등이 있다. 수지에 아미노산을 연결하고 수지로부터 합성된 펩티드를 분리하는 것은 종래의 공지 방법으로 수행할 수 있다.

상기 고체-상 합성에 사용되는 용매는, 펩티드 결합을 형성하는 데에 사용될 수 있는 것으로 공지된 용매이다. 예를들면, 무수 또는 유수 디메틸포름아미드(DMF), 디메틸설폭시드(DMSO), 피리딘, 클로로포름, 디옥산, 디클로로메탄(DCM), 테트라히드로푸란(THF), 에틸아세트산, N-메틸피롤리돈 및 헥사메틸 포스페이트 트리아미드(HMPA) 등이 있다. 이 용매들은 홀로 또는 조합으로 사용될 수 있다.

수득된 펩티드는 통상의 방법으로 탈염시키고 정제할 수 있다. 예를들면, DEAE-셀룰로오스 등에 의한 이온-교환 크로마트그래피, 세파덱스 LH-20, 세파덱스G-25 등에 의한 분배 크로마트그래피, 실리카겔 등에 의한 정상 상 크로마토그래피, ODS-실리카 겔 등에 의한 역상 크로마토그래피, 또는 고속액상 크로마토그래피(HPLC) 등에 의하여 탈염시키고 정제할 수 있다.

상기 일반식(1) 또는 (2)에 의해 표시되는 펩티드들의 약학적으로 허용되는 염들은 아세트산, 염산, 인산 등을 포함한다.

본 발명의 펩티드와 그 염들은 기관지 확장작용으로 인해 기관지 확장제로서 유용하다. 그러므로, 본 발명의 펩티드 또는 그 염을 유효성분으로 포함하는 기관지 확장제는 천식 등의 억제와 개선에 유용하다.

기관지 확장제로서, 본 발명의 펩티드 또는 그 염을 그대로 투약할 수 있지만, 대개 여러 가지 약학적으로 허용된 담체와 통상의 방법으로 혼합하여 액체, 겔 또는 고체의 형태로 제조하여 경구 또는 비경구 투여한다. 투약방법을 흡입(예를 들어, 분무제로), 주사, 외용 등을 포함한다.

투약량이 사용목적, 증후, 환자의 연령 및 체중 등, 투약방법 등에 따라 결정될지라도, 본 발명의 펩티드 또는 그 염이 기관지 확장제로서 사용될 때 그 투약량은 바람직하게 약 1

/

내지 1

/

(체중)/일/사람의 범위에 있다.

더욱이, 본 발명의 펩티드 또는 그 염은 혈류 증가 작용이 우수하고 그 지속성이 탁월하다. 그러므로 본 발명의 펩티드 또는 그 염을 포함하는 혈류 개선제는 머리카락의 재생과 성장 뿐 아니라, 궤양, 통상, 욕창, 발기부전 등에 효과적이다.

혈류 개선제로서 사용될 때 본 발명의 펩티드 또는 그 염은 종래의 약학적으로 허용된 담체와 혼합되어 약학적 조제물, 바람직하게는 주사물을 형성한다.

이와 같은 주사물 조제를 위해, 수득한 조제물을 바람직하게는 멸균되고 혈액과 등장이다. 주사물 제조를 위해 종래에 사용되는 희석제가 사용될 수 있다. 희석제의 예로는 물, 생리식염수 등을 들 수 있다. 이 경우에, 등장액을 제조하기 위해 충분한 양의 일반염 또는 글리세린을 주사물 형태의 조제물에 포함할 수 있다. 이 조제물은 종래의 완충액, 진정제, 방부제 등을, 필요하면 색소, 방부제, 향, 감미료 등을 포함할 수 있다. 주사를 목적으로 하는 상기 유효성분을 사용 전에 증류수에 용해시킬 수 있다. 얻어진 약학적 조제물을 투여하는 방법은 조제형태에 따라 다양하다. 예를 들어, 주사물 형태의 조제물은 홀로 또는 아미노산 등과 같은 종래의 보완물과 혼합한 후에 정맥주사한다.

투약량이 사용목적, 증후 상태 등에 따라 결정될지라도, 본 발명의 펩티드 또는 그 염이 혈류 개선제로 사용될 때 바람직하게는 약 1ng/

내지 1

/

(체중)/일/사람의 범위에서 매일 2 내지 4번으로 나누어 투약한다.

[도면의 간단한 설명]

제1도는 PACAP의 투여시 시간에 따른 기관지의 평활근 이완정도의 변화를 나나내는 그래프이다.

제2도는 SEQ ID NO:5에서 나타난 펩티드 5의 투여시에 시간에 따른 기관지의 평활근 이완정도의 변화를 나타내는 그래프이다.

제3도는 VIP의 투여시 시간에 따른 기관지의 평활근 이완정도의 변화를 나타내는 그래프이다.

제4도는 SEQ ID NO:11에서 나타난 펩티드 11의 투여시에 시간에 따른 기관지의 평활근 이완정도의 변화를 나타내는 그래프이다.

[본 발명을 실시하기 위한 최선의 실시태양]

이하에서는, 본 발명을 실시예를 참조하여 보다 상세히 설명하고자 한다. 본 실시예에 의하여 본 발명의 범주가 제한되지는 않는다.

후술하는 실시예들에서, 수득한 정제 펩티드의 확인은 고속액체 크로마토그래피(HPLC)에서의 잔류시간의 측정, 광학 회전도의 측정 및 아미노산 분석을 하기와 같이 실시하여 수행하였다.

·고속액체 크로마토그래피(HPLC)

고속액체 크로마토그래피에서의 분석을 위해, LC-모듈 1(Waters Ltd. Japan)을 사용하였다.

(HPLC에서의 분석조건)

칼럼 : TSK 겔 ODS-120T(4.6 x 250㎜)

용매 : 0.1

TFA-아세토니트릴(30분간의 20

에서 50

까지의 아세토니트릴 직선구배).

유속 : 1

/분

측정파장 : 220

·광학 회전도

광학회전도를 측정하기 위해, DIC-370(Nippon Bunko Kogyo K.K., Japan)이 사용되었다.

(광학 회전도 측정을 위한 조건)

광원 : Na 램프/589

온도 : 20

층 길이 : 100

농도 : 1

(아세트산에서 0.1M)

· 아미노산 분석

0.1

페놀이 포함된 6N HCl에 펩티드를 넣어 110

에서 20시간 동안 가수분해하고 히타치 아미노산 분석기 L-8500(Hitach. Ltd., Japan)으로 가수분해물을 분석하여, 아미노산 분석을 수행하였다.

[실시예 1]

펩티드 1의 제조

고체-상 합성기로 펩티드 합성기 9600(Milligen Bioresearch)을 사용하였다. SEQ ID NO:1에서 보여지며, C-말단기가 아미드화된 펩티드 1이 다음과 같은 고체-상합성과 정제에 의해 제조되었다.

우선, 694

MBHA수지(0.72mmol/g 아미노기, 일본의 펩티드 겐뀨조주식회사 제조)를 펩티드 고체-상 합성을 위한 반응기에 넣고, 아르곤 분위기에서 교반시키면서 DCM 8mL(4회, 각 1분), 60

TFA를 포함하는 DCM 8

(20분), DCM 4

(3회, 각 15초), 1

의 DIEA를 포함하는 DMF용액 3

(2회, 각 1분), 및 DMF 8

(6회, 각 60초)을 순서대로 처리하였다. 각 처리후에, 여과를 실시하였다.

이와는 별도로, SEQ ID NO:1의 27-위치에 있는 아미노산 잔기에 해당하는 Boc-Leu-OH의 아미노기가 보호된 아미노산 2mmol을 DCM 4

에 용해시켰다. 이 용액을 아미노산 활성을 위한 용기에 넣고, DCC(DCM에서 0.5M) 3

과 HOBt(DCM에서 0.5M) 4

을 가한 후 30분 동안 반응시켰다. 그 이후, 반응용액을 여과시킨 후, 그 여과액을 농축용기로 옮겼다. DMF 3

을 농축액에 첨가하여, 펩티드 고체-상 합성을 위한 상기 반응기에 옮기고 30분간 반응시켰다. 그런 다음, 반응 혼합물을 DCM 8

로 세척하였다(6회, 각 30초). 이와는 별도로, Boc-Leu-OH 2mmol을 DCM 4

에 용해시키고, 아미노산 활성을 위한 반응기에 넣고 상기에 기술한 것과 같은 과정을 반복하여(이중-커플링) 여과하였다. 이렇게하여 Boc-Leu-MBHA 수지를 수득하였다.

그런 다음, Boc-Leu-MBHA수지를 DCM 8

로 세척하고(4회, 각 1분) 여과하였다. 이 수지를 아르곤 분위기에서 교반하면 60

TFA를 포함한 DCM 8

(20분), DCM 4

(3회, 각 15초), 1

DIEA를 포함한 DMF용액 3

(2회, 각1분) 및 DMF 8

(6회, 각각 40초간)을 순서대로 처리하였다. 각각의 처리 후에는 여과를 실시하였다.

이와는 따로, SEQ ID NO:1의 26-위치에 있는 아미노산 잔기에 해당하는 Boc-Val-OH의 아미노기가 보호된 아미노산 2mmol을 DCM 4

에 용해시키고, 아미노산 활성을 위한 용기에 넣은후, DCC(DCM에서 0.5M) 1.5

을 가하나 후 30분 동안 반응시켰다. 그 이후, 반응용액을 여과시킨 후, 그 여과액을 농축용기로 옮겼다. 이에 DMF 3

을 가하고, 아르곤 분위기에서 DCM을 증류시켰다. 그런 다음, DMF 3

을 농축액에 가하고, 펩티드 고체-상 합성을 위한 상기 반응기에 옮겨 30분간 반응을 실시하였다. 이후, 반응화합물을 DCM 8

(6회, 각 20초)로 세척하고 여과하였다. Boc-Val-Leu-MBHA 수지가 이렇게 하여 수득되었다.

이후, SEQ ID NO:1에서 25번째 아미노산으로부터 첫 번째 아미노산까지에 해당되며 다음과 같이 아미노기가 보호화된 아미노산들을 각각 차례차례로 이에 결합시켰다.

상기 고체-상 합성에서 Asn, Arg, Gln 및 His의 경우에는 이중커플링(double coupling)이 실시되었다.

그리하여 다음과 같은 보호화된 펩티드-HBHA 수지 2.76g이 수득되었다:

Boc-His(Bom)-Ser(Bzl)-Asp(OBz)-Gly-Ile-Phe-Thr(Bzl)-Asp(OBz)Ser(Bzl)-Tyr(Bzl)-Ser(Bzl)-Arg(Tos)-Tyr(Bzl)-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Gln-Leu-Ala-Val-Arg(Tos)-Arg(Tos)-Tyr(Bzl)-Leu-Ala-Ala-Val-Leu-MBHA 수지.

아니졸(anisole) 5

을 상기 보호화된 펩티드-MBHA 수지 2.76g에 첨가한 후, 무수불산 25

을 가하여 그 혼합물을 0

에서 1시간 동안 교반시키면서 반응시켰다. 그런 다음, 무수불산을 감압하에서 증류시켰다. 잔류물을 에테르로 세척한 후, 그로부터 펩티드를 100

의 0.1M 아세트산으로 추출시켰다.

추출물을 20

의 음이온-교환수지 앰벌라이트(Amberlite) IR-410과 섞어 15분간 교반시키고, 불용성 수지를 여과에 의해 제거하였다. 이렇게 얻어진 현탁액을 0.22μ 밀리포아(Millipore) 여과지로 여과하고, 그 여과액을 동결 건조시켜 823

의 흰색 분말을 수득하였다. 그런 다음, 이 시료를 CM-셀룰로오스 칼럼(2.5×30cm)에 가하고, 0.05M에서 0.5M까지의 AcONH₄(pH7.0)의 직선구배로 용출시켰다. 69번에서 82번의 분획(10

/분획)을 모은 결과, 원하는 펩티드가 부분정제된 형태로 382

이 얻어졌다. 이 펩티드를 정제용 고속크로마토그래피로 더 정제하였다.

칼럼 : TSK 겔 ODS-12OT(21.5×300mm).

용매 : 0.1

TFA-아세토니트릴(20

에서 40

까지의 아세토니트릴 직선구배).

유속 : 10

/분.

원하는 물질인 펩티드 1의 피크에 해당하는 용출액을 동결건조시켰다. 상기 HPLC를 통하여 정제된 형태의 펩티드를 부분정제된 펩티드 100

당 63

의 양으로 수득하였다. 정제된 펩티드 1은 HPLC에서 잔류시간과 광학회전도로 결정하였으며, 그 아미노산을 분석하였다.

그 결과는 하기와 같다:

· HPLC 내 잔류시간 : 27.2분.

· [α]_D: -55.8°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.17, Thr(1) 0.98, Ser(3) 2.45, Glu(1) 1.09, Gly(2) 1.03, Ala(3) 3.18, Val(2) 2.14, Ile(1) 0.96, Leu(3) 3.07, Tyr(3) 2.73, Phe(1) 0.92, His(1) 1.12, Arg(5) 5.16.

[실시예2]

SEQ ID NO:2에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드2가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 73

· HPLC 내 잔류시간 : 27.6분.

· [α]_D: -53.2°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.10, Thr(1) 0.97, Ser(3) 2.46, Glu(1) 0.97, Gly(1) 1.97, Ala(3) 3.15, Val(2) 2.13, Ile(1) 1.00, Leu(3) 3.08, Tyr(3) 2.75, Phe(1) 0.98, His(1) 0.99, Arg(5) 4.54.

[실시예 3]

SEQ ID NO:3에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드3가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 88

· HPLC 내 잔류시간 : 27.0분.

· [α]_D: -52.8°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.11, Thr(1) 0.95, Ser(3) 2.56, Glu(1) 0.97, Gly(2) 2.00, Ala(3) 3.15, Val(2) 2.10, Ile(1) 1.00, Leu(3) 3.08, Tyr(3) 2.75, Phe(1) 0.98, His(1) 1.03, Arg(5) 5.14, Lys(1) 1.01.

[실시예 4]

SEQ ID NO:4에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드4가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 84

· HPLC 내 잔류시간 : 25.1분.

· [α]_D: -54.3°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.09, Thr(1) 0.96, Ser(3) 2.44, Glu(1) 0.97, Gly(2) 2.01, Ala(3) 3.11, Val(2) 2.03, Ile(1) 1.02, Leu(3) 3.08, Tyr(3) 2.74, Phe(1) 0.97, His(1) 1.05, Arg(6) 6.10.

[실시예 5]

SEQ ID NO:5에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드5가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 76

· HPLC 내 잔류시간 : 24.4분.

· [α]_D: -52.2°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.11, Thr(1) 0.96, Ser(3) 2.47, Glu(1) 1.01, Gly(2) 2.00, Ala(3) 3.03, Val(2) 2.03, Ile(1) 1.02, Leu(3) 3.03, Tyr(3) 2.70, Phe(1) 0.97, His(1) 1.07, Arg(6) 6.15, Lys(1) 1.02.

[실시예 6]

SEQ ID NO:6에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드6가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 85

· HPLC 내 잔류시간 : 23.6분.

· [α]_D: -53.7°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.09, Thr(1) 0.94, Ser(3) 2.51, Glu(1) 1.05, Gly(2) 2.00, Ala(3) 3.03, Val(2) 2.01, Ile(1) 1.02, Leu(3) 3.03, Tyr(3) 2.77, Phe(1) 0.97, His(1) 1.07, Arg(7) 7.11.

[실시예 7]

SEQ ID NO:7에 난 펩티드7이 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 단, 704

의 Boc-Arg(Tos)-PAM 수지(0.68mmol/g 아미노기, 일본의 펩티드 겐뀨조주식회사 제조), 즉 표적펩티드의 C-말단 아미노산 잔기를 갖는 수지를 사용하였다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 84

· HPLC 내 잔류시간 : 23.8분.

· [α]_D: -56.7°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.12, Thr(1) 0.96, Ser(3) 2.47, Glu(1) 1.01, Gly(2) 2.00, Ala(3) 3.03, Val(2) 2.03, Ile(1) 1.02, Leu(3) 3.03, Tyr(3) 2.70, Phe(1) 0.97, His(1) 1.03, Arg(6) 6.10, Lys(1) 1.02.

[실시예 8]

SEQ ID NO:8에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드8이 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 68

· HPLC 내 잔류시간 : 26.9분.

· [α]_D: -58.7°

· 아미노산 분석 :

Asp(5) 5.11, Thr(2) 1.72, Ser(2) 1.61, Glu(1) 1.10, Ala(2) 2.00, Val(2) 2.00, Ile(1) 1.02, Leu(4) 4.15, Tyr(2) 1.86, Phe(1) 0.99, His(1) 0.95, Arg(5) 4.75.

[실시예 9]

SEQ ID NO:9에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드9가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 76

· HPLC 내 잔류시간 : 25.4분.

· [α]_D: -52.9°

· 아미노산 분석 :

Asp(5) 5.11, Thr(2) 1.83, Ser(2) 1.49, Glu(1) 1.09, Gly(1) 1.04, Ala(2) 2.01, Val(2) 2.01, Ile(1) 0.96, Leu(4) 4.19, Tyr(2) 2.03, Phe(1) 1.01, His(1) 1.07, Arg(6) 6.10, Lys(1) 1.05.

[실시예 10]

SEQ ID NO:10에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드10이 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 77

· HPLC 내 잔류시간 : 24.9분.

· [α]_D: -52.5°

· 아미노산 분석 :

Asp(5) 5.12, Thr(2) 1.83, Ser(2) 1.55, Glu(1) 1.08, Gly(1) 1.03, Ala(2) 2.01, Val(2) 2.01, Ile(1) 0.96, Leu(4) 4.17, Tyr(2) 2.03, Phe(1) 1.01, His(1) 1.03, Arg(6) 6.15.

[실시예 11]

SEQ ID NO:11에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드11이 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 87

· HPLC 내 잔류시간 : 23.5분.

· [α]_D: -55.5°

· 아미노산 분석 :

Asp(5) 5.11, Thr(2) 1.83, Ser(2) 1.49, Glu(1) 1.09, Gly(1) 1.04, Ala(2) 2.01, Val(2) 2.01, Ile(1) 0.96, Leu(4) 4.19, Tyr(2) 2.03, Phe(1) 1.01, His(1) 1.07, Arg(6) 6.10, Lys(1) 1.05.

[실시예 12]

SEQ ID NO:12에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드12가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 78

· HPLC 내 잔류시간 : 23.0분.

· [α]_D: -56.2°

· 아미노산 분석 :

Asp(5) 5.13, Thr(2) 1.84, Ser(2) 1.49, Glu(1) 1.08, Gly(1) 1.03, Ala(2) 2.01, Val(2) 2.01, Ile(1) 0.96, Leu(4) 4.19, Tyr(2) 2.03, Phe(1) 1.01, His(1) 1.02, Arg(7) 7.11.

[실시예 13]

SEQ ID NO:13에 나타난 펩티드 13이 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 단, 704

의 Boc-Arg(Tos)-PAM 수지, 즉 표적펩티드의 C-말단 아미노산 잔기를 갖는 수지를 사용하였다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 83

· HPLC 내 잔류시간 : 22.8분.

· [α]_D: -58.6°

· 아미노산 분석 :

Asp(5) 5.15, Thr(2) 1.83, Ser(2) 1.53, Glu(1) 1.09, Gly(1) 1.01, Ala(2) 2.01, Val(2) 2.01, Ile(1) 1.02, Leu(4) 4.10, Tyr(2) 1.86, Phe(1) 1.00, His(1) 0.95, Arg(6) 6.15.

[실시예 14]

SEQ ID NO:14에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드14가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 64

· HPLC 내 잔류시간 : 25.1분.

· [α]_D: -52.7°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.17, Thr(1) 0.98, Ser(3) 2.55, Glu(1) 1.03, Gly(1) 1.03, Ala(3) 3.18, Met(1) 0.96, Val(2) 2.14, Ile(1) 0.96, Leu(2) 2.07, Tyr(3) 2.73, Phe(1) 1.00, His(1) 1.01, Arg(5) 5.15.

[실시예 15]

SEQ ID NO:15에 나타나며 그 C-말단 카르복실기가 아미드화된 펩티드15가 실시예 1과 동일한 방법으로 정제된 형태로 수득되었다. 전기 정제된 펩티드의 수율을 하기에 나타내었다. HPLC내 잔류시간과 광학회전도를 결정하고, 아미노산을 분석하였다. 그 결과는 다음과 같다:

· 수율 : 62

· HPLC 내 잔류시간 : 26.2분.

· [α]_D: -52.5°

· 아미노산 분석 :

Asp(2) 2.11, Thr(1) 0.95, Ser(3) 2.45, Glu(1) 1.04, Gly(1) 1.03, Ala(3) 3.18, Val(2) 2.14, Ile(1) 0.96, Leu(2) 2.10, Tyr(3) 2.73, Phe(1) 0.96, His(1) 1.02, Arg(5) 5.16, nLeu(1) 1.02.

[실시예 16]

실시예 1 내지 15에서 수득한 정제된 펩티드 1 내지 15의 기관지 확장 작용을 다음과 같은 방법으로 조사하고, VIP와 PACAP의 작용과 비교하였다.

450 내지 500g의 무게를 가지는 수컷 기니아픽(guinea pig)의 경정맥을 자르고 가슴을 절개한 후, 즉시 기관을 떼어내어 크렙스(Krebs) 용액에 담그었다. 그런 다음 기관을 고리모양으로 자르고, 연골부분과 철사로 서로 연결시켜 사슬처럼 만들었다. 그런 다음, 평활근 부분이 서로 맞붙도록 평활근 부분의 반대쪽에 있는 연골부분을 잘랐다. 얻어진 시료를 10ml 크기의 등온 기관용기에 넣어 수직으로 매달았다. 아랫부분은 고정하고 윗부분은 1.4g의 부하로 그라스력(grass force) 변환기에 연결시켰다. 94

의 산소와 6

의 이산화탄소의 기체를 이 시료에 충분히 넣어주면서, 0.1μmol/1의 카르바콜(carbachol)을 포함한 크렙스 용액을 0.33

/분의 속도로 시료에 떨어뜨려 이완작용을 조사하였다. 떨어뜨린 용액에 있는 시험시료의 양에 따라서 이완작용이 일어나므로, 기관지 평활근에 대한 VIP와 PACAP의 이완작용과 본발명의 펩티드의 이완작용을 비교할 수 있다.

VIP, PACAP 및 본 발명의 펩티드의 각 용액을 최종농도보다 100배 높은 농도로 만들어, 기관용액기에서 농도를 맞출 수 있도록 하였다. 카르바콜이 포함된 크렙스 용액을 떨어뜨린지 30분 후에, 시료용액 100μl를 떨어뜨린다.

카르바콜이 없을 때 평활근의 수축도를 0이라 하고 카르바콜이 있을 때 수축도는 100이라 하였다. 시료가 있을 때 최소 수축도 A(즉, 최대 이완값)를 결정하였고, 최대 이완도 B를 다음과 같이 계산하였다:

최대 이완도 B(

)=100-A

시료의 첨가 후 최대 이완값의 절반에 도달하는 데에 필요한 시간(이후에는 :절반-시간T"라고 명명함)을 결정하였다.

각 펩티드를 0.3μM, 1μM 및 3μM의 용량으로 각각 사용하여, 시간에 따른 기관지 평활근의 이완도의 변화를 결정하였다. 그 결과를 그림에 나타내었다: 제 1도에서는 PACAP; 제2도에서는 실시예5에서 수득한 펩티드 5; 제3도에서는 VIP; 및, 제4도에서는 실시예11에서 수득한 펩티드 11.3μM의 용량에서의 최대 이완도 B는 펩티드 5에 대해서 75

, 펩티드 11에 대해서 80

이다. 절반-시간 T는 두 경우 모두에서 360분 이상이다. 이 결과로부터, 본 발명의 펩티드들은 VIP와 PACAP와 유사한 이완효과를 나타내지만, 탁월한 지속성, 즉 VIP와 PACAP보다 더 긴 작용기간을 갖는 것을 알 수 있다.

표 1은 각 용량에서의 각 펩티드에 대한 최대 이완도 B와 절반-시간 T를 보여준다.

[실시예 17]

실시예 1 내지 15에서 수득한 정제된 펩티드 1 내지 15의 혈류 증가 작용을 조사하고, VIP와 PACAP의 작용과 비교하였다.

펜토바르비탈(25

/

)을 복강내 투여하여 220 내지 250g 무게의 위스타르(Wistar) 수컷랫트를 마취시켜 등을 바닥으로 하여 고정시켰다. 동맥 카눌라(canula)를 경동맥으로 주입한후, 헤파린이 포함된 생리식염수(10U/

)로 가득찬 둠(doom) 키트(SCK-512, Nippon Koden)를 통하여 혈압변환기(DX-300, Nippon Koden, Japan)에 연결시켜, 부하(strain) 혈압 증폭기(AP-601G, Nippon Koden)로 혈압을 측정하였다. 또한, 혈류 측정 탐침(FR-030T, Nippon Koden)으르 우대퇴골동맥에 부착하고 전자기 혈류 측정기(MFV-3200, Nippon Koden)에 연결시켜 혈류를 측정하였다. 동맥내로 투여한 각 펩티드의 용량은 100pmol/

이었다.

표 2는 각 펩티드를 주입한 랫트에서의 혈류 증가를 보여준다.

펩티드 1내지 15를 각각 100pmol/

주입된 랫트의 혈압에서 특별한 변화가 관찰되지 않았다.

[실시예 18]

[급성 독성 시험]

실시예 1 내지 15에서 수득한 펩티드 1 내지 15를 생리식염수에 용해시키고, 10

/

용량으로 마우스에 정맥내 투여하였다. 그 결과 모든 마우스가 생존하는 것으로 나타났다.

Claims (5)

1. 일반식(1) H-His-Ser-Asp-A-B-Phe-Thr-Asp-C-Tyr-D-Arg-E-Arg-F-Gln-G-Ala-Val-I-J-Tyr-Leu-K-L-M-Leu-N 혹은 일반식(2) H-His-Ser-Asp-A-B-Phe-Thr-Asp-C-Tyr-D-Arg-E-Arg-F-Gln-G-Ala-Val-I-J-Tyr-Leu-K-L-M-Leu-P-Gly-Q-R로 표시되는 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염: 상기 일반식 (1)에서, A는 Ala 또는 Gly이고; B는 Ile 또는 Val이고; C 는 Asn 또는 Ser이고; D는 Thr 또는 Ser이고; E는 Leu 또는 Tyr이고; F,I 및 J는 Lys 또는 Arg이며, F,I 및 J중 적어도 하나는 Arg이고; G는 Met, Leu 또는 nLeu이고; K는 Asn 또는 Ala이고; L은 Ser 또는 Ala이고; M은 Ile 또는 Val이고; 및, N은 -NH₂또는 Asn-NH₂이며, 이 때 A는 Ala, B는 Val, C는 Asn, D는 Thr, E는 Leu, K는 Asn, L은 ser, M은 Ile, 및 N은 Asn-NH₂인 조합은 제외한다; 상기 일반식(2)에서 A, B, C, D, E, F, G, I, J, K, L 및 M은 전기와 같이 정의되며; F, I 및 J중 적어도 하나는 Arg이고; P는 Asn 또는 화학결합이며: Q는 Lys, Arg, Lys-Arg, Arg-Arg 또는 화학결합이고; 및, R은 -OH 또는 -NH₂이다.
2. 제1항의 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 기관지 확장제.
3. 제1항의 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염을 유효성분으로 포함하는 혈류 개선제.
4. 제1항의 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 사람을 제외한 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는 기관지 확장방법.
5. 제1항의 펩티드 또는 약학적으로 허용되는 그의 염의 유효량을 사람을 제외한 포유동물에 투여하는 단계를 포함하는 혈류 개선방법.

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