KR0147465B1

KR0147465B1 - 시스플라틴과 알로에신의 병용투여를 위한 항암요법 조성물

Info

Publication number: KR0147465B1
Application number: KR1019950009271A
Authority: KR
Inventors: 정세영; 이승기; 박정일
Original assignee: 이연호; 주식회사남양알로에
Priority date: 1995-04-19
Filing date: 1995-04-19
Publication date: 1998-08-17
Also published as: KR960037051A

Abstract

본 발명은 시스플라틴과 알로에신의 병용투여를 위한 항암요법 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르는 조성물에서 시스플라틴과 알로에신은 1:01-50, 바람직하게는 1:1-30, 특히는 1:10의 몰비로 존재한다. 본 발명에 따라 알로에신을 시스플라틴과 병용함으로써 시스플라틴의 항암효과는 변화시키지 않으면서 시스플라틴에 의해 야기될 수 있는 신장독성 및 간독성 등의 부작용을 현저히 경감시킬 수 있다.

Description

시스플라틴과 알로에신의 병용투여를 위한 항암요법 조성물

제1도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:1, 1:5, 1:10의 몰비로 하여 시스플라틴 투여 1시간 전에 투여하였을 때의 래트의 체중변화를 정상군 및 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[-■- : 정상군, -+- : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, -*- : 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:1의 몰비로 투여한군 -□- : 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:5의 몰비로 투여한 군, -×- : 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비로 투여한 군].

제2도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:1, 1:5, 1:10의 몰비로 하여 시스플라틴 투여 1시간전에 투여하였을 때의 래트의 크레아티닌(▧) 및 BUN(▤) 변화를 정상군 및 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[A : 정상군, B : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, C : 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:1의 몰비로 투여한 군, D : 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:5의 몰비로 투여한 군, E : 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비로 투여한 군].

제3도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:1, 1:5, 1:10의 몰비로 하여 시스플라틴 투여 1시간 전에 투여하였을 때의 래트의 GPT(▧) 및 GOT(▤)의 변화를 정상군 및 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[A : 정상군, B : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, C : 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:1의 몰비로 투여한 군, D : 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:5의 몰비로 투여한 군, E : 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비로 투여한 군].

제4도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 하여 투여시기를 시스플라틴 투여 1시간 전, 동시 및 1시간 홀로 변화시켜 투여하였을 때의 래트의 체중변화를 대조군과 비교하여 나타낸 그래피이다[-■- : 시스플라틴만을 투여한 대조군, -+- : 1시간 전 투여군, -*- : 동시 투여군, -□- : 1시간후 투여군].

제5도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 하여 투여시기를 시스플라틴 투여 1시간 전, 동시 및 1시간 후로 변화시켜 투여하였을 때의 래트의 BUN(▤) 및 크레아티닌(▧)변화를 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[A : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, B : 1시간 전 투여군, C : 동시 투여군, D : 1시간 후 투여군].

제6도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 하여 투여시기를 시스플라틴 투여 1시간 전, 동시 및 1시간 후로 변화시켜 투여하였을 때의 래트의 GOT(▤) 및 GPT(▧) 변화를 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[A : 시스플라틴을 투여한 대조군, B : 1시간 전 투여군, C : 동시 투여군, D : 1시간 후 투여군].

제7도는 알로에신을 시스플라틴 투여 24시간 전 및 24시간 후에 총 2회 반복 투여하는 투여 스케쥴을 나타낸 모식도이다.

제8도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 하여 투여시기를 제7도에 도시한 바와 같이 시스플라틴 투여 24시간 전 및 24시간 후에 총 2회 반복투여하였을 때의 래트의 체중변화를 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[-■- : 시스플라틴 만을 투여한 대조군 -+- : 2회 반복 투여군].

제9도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 하여 투여시기를 제7도에 도시한 바와 같이 시스플라틴 투여 24시간 전 및 24시간 후에 총 2회 반복투여하였을 때의 래트의 BUN(▤) 및 크레아티닌(▧) 변화를 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[A : 대조군, B : 2회 반복투여군].

제10도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 하여 투여시기를 제7도에 도시한 바와 같이 시스플라틴 투여 24시간 전 및 24시간 후에 총 2회 반복투여하였을 때의 래트의 GOT(▤) 및 GPT(▧) 변화를 대조군과 비교하여 나타낸 그래프이다[A : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, B : 2회 반복 투여군].

제11도는 알로에신을 시스플라틴 투여 24시간 및 48시간 전과 투여 24시간 후에 총 3회 반복한 b군의 투여 스케쥴과 알로에신을 시스플라틴 투여 24시간 및 48시간 전, 동시 및 24시간 후에 총 4회 반복투여한 C군의 투여스케쥴을 나타내는 모식도이다.

제12도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 제11도에 도시한 바와 같이 3회 및 4회 반복투여한 경우의 래트의 체중의 변화를 시스플라틴 만을 투여한 대조군의 경우와 비교하여 나타낸 그래프이다[-■- : 시스플라틴만을 투여한 대조군, -+- : B군(3회 반복투여), -*- : C군(4회 반복투여)].

제13도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1 : 10의 몰비로 제11도에 도시한 바와 같이 3회 및 4회 반복투여한 경우의 래트의 BUN(▤) 및 크레아티닌(▧) 변화를 시스플라틴 만을 투여한 대조군의 경우와 비교하여 나타낸 그래프이다[A : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, B : 3회 반복투여, C : 4회 반복투여].

제14도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 제11도에 도시한 바와 같이 3회 및 4회 반복투여한 경우의 래트의 GOT 및 GPT의 변화를 시스플라틴 만을 투여한 대조군의 경우와 비교하여 나타낸 그래프이다 [A : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, B : 3회 반복투여, C : 4회 반복투여].

제15도는 알로에신을 시스플라틴 투여 전 및 후에 3회 연속투여하는 투여 스케쥴을 나타내는 모식도이다[A군 : 시스플라틴 투여 3일전부터 1일 전까지 연속투여, B군 : 시스플라틴 투여 2일 전부터 시스플라틴 투여당일 까지 연속투여, C군 : 시스플라틴 투여 1일전부터 시스플라틴 투여 1일 후까지 연속투여, D군 : 시스플라틴 투여당일부터 시스플라틴 투여 2일후까지 연속투여, E군 : 시스플라틴 투여 1일 후부터 시스플라틴 투여 3일후까지 연속투여].

제16도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 제16도에 도시한 바와 같은 투여스케쥴에 따라 투여한 경우의 래트의 체중의 변화를 시스플라틴 만을 투여한 대조군의 경우와 비교하여 나타낸 그래프이다[-■- : 시스플라틴 만을 투여한 대조군, -+- : A군, -*- : B군, -□- : C군, -×- : D군, -▲- : E군].

제17도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 제15도에 도시한 바와 같은 투여스케쥴에 따라 투여한 경우의 래트의 BUN변화를 시스플라틴 만을 투여한 대조군의 경우와 비교하여 나타낸 그래프이다.

제18도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 제15도에 도시한 바와 같은 투여스케쥴에 따라 투여한 경우의 래트의 크레아티닌 변화를 시스플라틴 만을 투여한 대조군의 경우와 비교하여 나타낸 그래프이다.

제19도는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 제15도에 도시한 바와 같은 투여스케쥴에 따라투여한 경우의 래트의 GOT(▩) 및 GPT(■)의 변화를 시스플라틴 만을 투여한 대조군의 경우와 비교하여 나타낸 그래프이다.

본 발명은 시스플라틴과 알로에신의 병용투여를 위한 항암요법 조성물에 관한 것이다. 더욱 구체적으로, 본 발명은 시스플라틴과 알로에신을 병용투여하여 시스플라틴의 항암작용은 변화시키지 않으면서 시스플라틴의 독성, 특히 간독성 및 신장독성을 현저히 경감시킬 수 있는 항암요법 조성물에 관한 것이다.

시스플라틴은 고환암, 식도암, 위암, 방광암, 전립선암, 폐암, 자궁경부암, 골육종 등 각종암에 효과를 나타내고 특히 생식기 계통의 암에 주로 쓰이는 항암제이다. 그러나 시스플라틴은 신장독성, 이독성, 위장관 독성, 골수독성, 알레르기 등의 독성이 보고되었다. 특히 시스플라틴은 신장독성이 매우 강하여 고용량으로 장기간 사용할 때에 신부전증으로 생명을 잃는 경우까지도 있어 임상적인 사용에 크게 제한을 받고 있다. 시스플라틴의 항암치료시에 임상적으로 중요한 것은 골수, 위장관, 특히 신장에서의 독성을 감소시키는 것이다.

따라서 시스플라틴의 독성, 특히 신장독서를 경감시키기 위한 수단들이 다양하게 연구되어 왔다. 현재 신장독성을 감소시키기 위해서 이루어지고 있는 여러 가지 시도 가운데 대표적인 것으로는 첫째, 시스플라틴 보다 독성이 적은 백금유도체를 합성하는 방법이 있다. 이러한 백금 유도체로는 예를 들어 카보플라틴(carboplatin)이 있는데 신장 독성은 적지만 골수 독성이 상당히 강하다는 단점이 있다. 둘째의 방법으로는 독성을 감소시키기 위해서 배설을 촉진시키는 방법이다.

그 예로는 만니톨을 병용 투여하거나 고장성 식염수를 병용투여 하는 방법 등이 있는데, 이러한 방법들은 시스플라틴의 반감기를 짧게 함으로써 효과를 감소시키는 결과를 초래한다. 셋째의 방법으로 시스플라틴의 독성을 감소시키기 위해서 2-경로 화학요법(two-route chemotherapy : TRC)에 의해 항암제를 투여하고 동시에 해독제를 투여하는 방법이 있다. 이러한 방법의 예로는 차질산비스무스(bismuth subnitrate)를 병용투여하거나 셀레늄을 병용투여하는 방법이 있는데, 이들 방법도 중금속의 체내축적으로 인한 부작용이 우려된다.

신장독성의 발현기전에 대한 연구는 이제까지의 연구가 임상적인 면에 너무 치우친 까닭에 별로 밝혀져 있지 않았다. 그러나 최근 수년간의 본 발명자들이 집중적인 연구의 결과에 의하면 시스플라틴의 신장독성은 체내에 분포된 시스플라틴이 빠른 속도로 배설되는 과정에서 신장내의 근위세뇨관에 흡수된 후에 화학주성(chemotaxis)에 의해 호중구를 끌어들이고 자극하며 이때 호중구로부터 분비된 산소 래디칼이 주위의 정상조직에 손상을 입히는 전형적인 염증발현 과정이라는 것이 밝혀졌다. 따라서 유리 래디칼에 대한 스카빈저(scavenger)로 작용하는 황산화제들이 일차적으로 시스플라틴의 신장독성을 경감시키는 대상약제들로 검색되었다. 그 결과 모든 항산화작용을 갖는 래디칼 스카빈저등이 시스플라틴에 의해 유발되는 신장독성에 다 효과가 있는 것은 아니며 이를 위해서는 다음과 같은 조건이 필요함을 확인하였다.

첫째, 신장에서 재흡수되어 호중구를 자극하여 활성산소를 분비하며 조직을 손상시키는 시점에서 적절히 분포되어야 한다.

둘째, 신장을 비롯한 체내 모든 조직에서 필요로 하는 생체내 성분일 경우에는 투여농도를 매우 높게 하지 않으면 안되므로 암조직에서도 이들을 흡수이용하게 되어 암 자신도 보호를 받게 된다. 따라서, 생체내 성분이어서는 불리하다.

셋째, 체내에서 쉽게 대사를 받아 불활성화되거나 간에 친화성이 너무 강하여 신장으로 분포되는 시간이 너무 지연되거나 양이 적은 경우에도 불리하다.

이러한 조건에 따라 여러 가지 성분들을 검색한 결과, 본 발명자들은 알로에의 유효성분인 알로에신(aloesin)이 강력한 항산화작용을 가지며 간손상을 유발하는 화학물질로부터 간세포를 보호하고 손상된 간세포의 재생효과를 나타내는 것을 밝혀내었다. 또한 항산화제인 알로에신은 시스플라틴에 의해 자극받아 호중구로부터 분비된 활성산소를 제거할 수 있는 래디칼 스카빈저로서 작용할 수 있을 뿐아니라, 천연 식물성분이므로 생체내 성분과는 달리 체내 대사속도가 늦고 암세포에 의해 이용될 수 있는 가능성이 지극히 적으므로 상기한 바와 같은 조건을 만족하는 성분이며, 따라서 알로에신이 시스플라틴에 의한 신장독성에 대한 유발억제제로 유용한 것으로 확인되어 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명은 시스플라틴과 알로에신의 병용투여를 위한 항암요법 조성물에 관한 것이다.

본 발명의 조성물에 따르면 시스플라틴의 항암효과는 감소시키지 않으면서 신장독성 만을 경감시킬 수 있어 이 분야에서의 명백한 진보성이 제공된다.

본 발명의 항암요법 조성물에서 시스플라틴의 신장독성을 경감시키기 위해 사용되는 알로에신은 알로에 베라(Aloe vera)등과 같은 알로에 식물의 잎으로부터 추출되는 성분으로서 다음의 구조식으로 표시되는 화합물이다[분자식 : C₁₉H₂₂O₉, 분자량 : 394] :

알로에신 [=4H-1-벤조피란-4-온, 8-β-I)-글루코피라노실-7-하이드록시-5-메틸-2-2-옥소프로필)]

지금까지의 선행기술에 따르면 알로에신은 피부에 대한 자외선 차단효과가 있는 것으로 보고되고 있으며[참조 : Strickland, F.M., Pelly, R.P., Hill, D. and Kripke, M.L., J. Investigative Dermatology, 98, 653, 1992], 세포성장 촉진작용 및 미백효과가 있다는 것을 본 발명자들이 보고한 것을 제외하고는 의약용으로서의 약리학적 용도에 대하여는 보고된 바가 없었다. 그러나, 본 발명에 이르러 상기에서 언급한 바와 같이 알로에신이 항산화작용을 가지고 있어 시스플라틴에 의해 자극을 받아 호중구로부터 분비된 활성산호를 제거함으로써 시스플라틴의 신장독성을 현저히 경감시킬 수 있다는 것이 확인됨으로써 알로에신의 시스플라틴의 신장독성 유발 억제제로서의 새로운 용도가 밝혀지게 된 것이다.

본 발명에 따라 이용되는 알로에신은 당해 기술분야에서 공지된 방법, 예를들면 문헌[참조 : Akira Yagi, Kenji Makino and Itsuo Nishioka, Chem, Pharm. Bull. 25(7), 1771-1776, 1977]에 기술된 방법에 따라 알로에 식물을 처리함으로써 수득될 수 있다. 예를들어 알로에신은 신선한 알로에 식물, 예를들면 알로에 베라의 전체 앞을 깨끗이 수세한 후에 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등과 같은 저급 알코올, 아세톤, 메틸에틸케톤 등과 같은 저급 케톤 또는 이들의 혼합물로 추출하고, 이 추출물을 물에 현탁시켜 다시 에틸에테르 등과 같은 저급 에테르, 에틸아세테이트 등과 같은 저급 에스테르 사염화탄소, 디클로로메탄, 크로로포름 등과 같은 할로겐화 탄화수수 용매 또는 이들의 혼합물로 추출하고 수층을 다시 저급 알콜로 추출한 후, 이 알콜 추출물을 할로겐화 탄화수소 용매와 저급 알콜이 2:1 내지 100:1, 바람직하게는 5:1 내지 20:1의 비로 혼합된 혼합용매 또는 저급 에스테르, 저급 알코올 및 물이 20:1:0 내지 6:4:2의 비로 혼합된 혼합용매를 용출제로 사용하여 실리카겔 칼럼 크로마토그라피시킴으로써 순수하게 분리하여 수득할 수 있다.

본 발명에 따르는 항암요법 조성물에서 시스플라틴과 알로에신은 1:0.1-50의 몰비로, 바람직하게는 1:1-30의 몰비로, 특히는 1:10의 몰비로 사용하는 것이 바람직하다.

본 발명에 따르는 조성물은 임상적으로 사용할 때에 투여에 용이한 형태로 제형화시킬 수 있다. 이러한 약제학적 제형중에서 시스플라틴과 알로에신은 서로 혼합된 상태로 존재하여 주사시에 한꺼번에 주사용 증류수에 용해시켜 투여하거나, 서로 분리된 형태로 존재하여 각각을 적절한 시간 간격을 두고 주사용 증류수에 용해시켜 투여할 수도 있다. 본 발명에 따르면 알로에신은 시스플라틴의 투여와 동시에 투여하는 것을 포함하여 시스플라틴의 투여를 전후하여 수회 분할하여 투여할 수도 있다. 특히, 시스플라틴의 독성을 경감시키는 알로에신의 효과를 최대로 이용하기 위해서는 시스플라틴과 알로에신을 동시에 정맥내 투여하도록 제형화시키는 것이 바람직하다. 이러한 단위제형중에서 시스플라틴은 성인에게 체표면적 ㎡당 10 내지 100㎎이 투여되도록 제형화되며, 알로에신은 상기 언급한 바와 같은 몰비의 범위내에서 적절한 양으로 배합하거나 독립적으로 존재할 수 있다.

본 발명에 따르는 조성물에서 사용되는 알로에신은 천연 식물 성분으로서 그 자체의 독성이나 부작용은 거의 없는 것으로 밝혀져 있는 성분이며, 후술하는 실험결과들로부터 입증되는 바와 같이 시스플라틴과 배합하여 사용시에 시스플라틴의 항암효과에는 영향을 미침이 없이 시스플라틴의 독성, 특히 신장독성 및 간독성을 현저히 경감시키므로 시스플라틴의 임상적인 이용분야에 있어 획기적인 발전을 이룰 수 있다.

본 발명은 이하의 실시예에 더욱 구체적으로 설명되나, 본 발명이 이들 실시예에 의해 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.

[조성물 실시예]

[조성예 1](혼합물)

시스플라틴 48㎎

알로에신 624㎎

상기의 성분을 배합하여 바이알에 충진하고 투여시에 주사용증류수에 용해시켜 투여한다.

[조성예 2] (키트 형태)

A부분 :

시스플라틴 40㎎

B부분 :

알로에신 1.56g

상기의 성분을 각각 별도의 바이알 A 및 B에 충진하고 B부분의 알로에신은 시스플라틴 투여 1일 전, 시스플라틴 투여 와 동시 및 시스플라틴 투여 1일 후의 3회 분할하여 투여한다

[실험예]

시스플라틴과 알로에신을 배합하여 정상 SD계 래트에게 투여용량, 투여시기 및 투여횟수를 변화시키면서 투여하여 시스플라틴에 의한 체중감소, 신장독성 및 간독성이 어느 정도 억제되는지를 특정하여 보았다. 구체적인 시험방법은 다음과 같다. 이하의 실험에서 신장독성의 지표로서 BUN(blood urea nitrogen) 및 크레아티닌의 측정 및 간장독성에 대한 지표로서 sGOT 및 sGPT에 대한 측정을 위해서는 다음과 같은 방법을 이용하였다.

(1) BUN의 측정

BUN의 측정은 BUN측정용 키트(영동제약)를 사용하여 다음과 같이 수행하였다. 우레아제 0.1㎖를 완충액 20㎖에 혼합시켜 효소 완충액을 만들어 2개의 시험관에 각각 가하고 하나의 시험관에는 시험할 혈청 샘플 0.02㎖를 가하고 다른 하나의 시험관에는 대조용으로 기준액[우레아-N 60㎎/100㎖이 함유된 액]0.02㎖를 가혀여 37℃에서 15분 동안 배양하였다. 그 후에 각각의 시험관에 발색액 2㎖씩을 가하고 37℃에서 다시 5분 동안 배양한 후에 570nm에서 흡광도를 측정하여 생성된 BUN의 양을 측정하였다.

(2) 크레아티닌의 측정

크레아티닌의 측정은 크레아티닌 측정용 키트(영동제약)를 사용하여 다음과 같이 수행하였다. 시험할 혈청 샘플 0.5㎖에 텅스텐 용액 4㎖를 가한 후에 이 혼합물을 격렬하게 진탕하고 10분동안 방치하였다. 그후에 1500xg에서 10분동안 원심분리하여 상등액을 분리하였다. 분리된 상등액, 크레아티닌 표준액 및 증류수(공시험용) 각각 3㎖씩을 시험관에 가하고, 각각의 시험관에 피크레이트 용액 1㎖씩을 가하였다. 그후에 각 시험관에 1.4N NaOH 0.5㎖를 가하고 잘 진탕하여 정확히 15분 후에 515nm에서 흡광도를 측정하였다.

(3) sGOT 및 sGPT의 측정

sGOT 및 sGPT의 측정은 sGOT 및 sGPT 측정용 키트(영동제약)을 사용하여 다음과 같이 수행하였다. GOT 및 GPT 기질용액 1㎖씩을 취해 37℃에서 3분 동안 배양한 후에 혈청 샘플 0.2㎖를 혼합시키고 37℃에서 GOT는 1시간동안, 했는 30분 동안 배양하였다. 배양액에 2,4-디니트로페놀 1㎖를 가하고 상온에서 20분동안 방치한 후에 0.4N NaOH 10㎖를 가하고 진탕하였다.

그후에 505nm에서 UV흡광도를 측정하였다.

[실험예 1]

체중 200 내지 250g의 수컷 SD계 랫트 50마리를 각각 10마리씩 5군으로 나누었다. 제 A군은 어떠한 약제도 투여하지 않은 정상군으로 하고, 제B군은 시스플라틴 만을 6㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하는 대조군으로 하며, 나머지 세 개의 군은 실험군으로 하였다. 첫 번째 실험군(C군)에는 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:1의 몰비에 해당하는 7.8㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사한 다음 1시간 후에 시스플라틴 6㎎/㎏을 복강내 주사하였으며, 두 번째 실험군(D 군)에는 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:5의 몰비에 해당하는 39㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사한 다음 1시간 후에 시스플라틴 6㎎/㎏을 복강내 주사하였으며, 세 번째 실험군(E군)에는 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비에 해당하는 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사한 다음 1시간 후에 시스플라틴 6㎎/㎏을 복강내 주사하였다. 시험의 시작시(0일)에 래트의 체중을 측정하고 시험을 시작한 다음 3일 동안 각 군의 래트의 체중을 측정하여 체중의 변화를 관찰하여 보았다.

시험을 시작한 지 4일 후에 각군의 래트를 치사시키고 혈액을 취하여 상온에서 30분 동안 방치하여 혈청을 분리시켰다. 분리된 혈청에 대하여 상기에서 기술한 방법에 따라 신장독성의 지표인 BUN 및 크레아티닌 치와 간장독성인 지표인 GOT 및 GPT치를 측정하였다. 측정된 결과는 제1도 내지 제3도에 각각 나타내었다.

체중변화는 제1도에서 보는 바와 같이 시스플라틴 단독투여시에 비해 체중증가효과가 나타나지 않았으며, 이때 신장독성 수치는 제2도에서 보는 바와 같이 크레아티닌치의 용량의존적인 억제가 나타난 반면, BUN치는 유의성 있는 감소가 보이지 않았다. 간독성 수치에 있어서는 제3도에 도시된 바와 같이 알로에신의 투여에 의해 GOT의 정상치로 감소가 나타났으며, 이는 알로에신의 간보호작용을 입증하는 것이다.

[실험예 2]

체중 200 내지 250g의 수컷 SD계 랫트 40마리를 각각 10마리씩 4군으로 나누었다. 제 A군은 시스플라틴만을 6㎎/㎏의 용량으론 복강내 주사하는 대조군으로 하며, 나머지 세 개의 군은 실험군으로 하였다. 첫 번째 실험군(B군)에는 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비에 해당하는 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사한 다음 1시간 후에 시스플라틴 6㎎/㎏을 복강내 주사하였으며, 두 번째 실험군(C군)에는 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비에 해당하는 78㎎/㎏의 용량으로 시스플라틴 6㎎/㎏과 동시에 복강내 주사하였으며, 세 번째 실험군(D군)에는 시스플라틴 6㎎/㎏을 복강내 주사한 다음 1시간 후에 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비에 해당하는 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하였다 시험의 시작시(0 일)에 래트의 체중을 측정하고 시험을 시작한 다음 3일 동안 각 군의 래트의 체중을 측정하여 체중의 변화를 관찰하여 보았다.

시험을 시작한 지 4일 후에 각 군의 래트를 치사시키고 혈액을 취하여 상온에서 30분 동안 방치하여 혈청을 분리시켰다. 분리된 혈청에 대하여 상기에서 기술한 방법에 따라 신장독성의 지표인 BUN 및 크레아티닌 치와 간장독성인 지표인 GOT 및 GPT치를 측정하였다. 측정된 결과는 제4도 내지 제6도에 각각 나타내었다.

제4도에서 보는 바와 같이 체중변화에 있어서는 투여시기를 변화시키더라도 시스플라틴 단독투여시와 큰 차이를 나타내지 않았다. 그러나 신장독성 지표에 있어서는 제5도에서 보는 바와 같이 동시투여하였을 때에만 크레아티닌 치의 감소가 나타났으며, 전투여 및 후투여시에는 신장독성 억제효과를 확인할 수 없었다. 한편, 간독성 지표에 있어서는 제6도에서 보는 바와 같이 알로에신의 투여에 의해 GOT가 약간 감소하는 경향을 보였으나 크게 개선되지는 않았다.

[실험예 3]

체중 200 내지 250g의 수컷 SD계 랫트 20마리를 각각 10마리씩 2군으로 나누었다. 제A군은 시스플라틴 만을 6㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하는 대조군으로 하며, 제B군은 실험군으로 하여 제7도의 도시된 바와 같은 투약 스케쥴에 따라 알로에신을 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비에 해당하는 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사한 다음 24시간 후에 시스플라틴 6㎎/㎏을 복강내 주사하고 다시 24시간 후에 알로에신을 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하였다. 알로에신을 일차 투약하기 시작하는 시점(-1일)에 래트의 체중을 측정하고 그후 4일동안 각 군의 래트의 체중을 측정하여 체중의 변화를 관찰하여 보았다. 시험을 시작한 지 5일 후에 각 군의 래트를 치사시키고 혈액을 취하여 상온에서 30분동안 방치하여 혈청을 분리시켰다. 분리된 혈청에 대하여 상기에서 기술한 방법에 따라 신장독성의 지표인 BUN 및 크레아티닌 치와 간장독성의 지표인 GOT 및 GPT치를 측정하였다. 측정된 결과는 제8도 내지 제10도에 각각 나타내었다.

체중변화에 있어서는 제8도에서 보는 바와 같이 2회 반복투여에 의해서 체중감소에 대한 현저한 억제효과를 나타냈으며, 제9도에 도시된 바와 같이 신장독성 지표인 BUN 및 크레아티닌 치는 모두 시스플라틴 단독투여시의 반 정도로 감소하였다. 또한 간독성 지표에 있어서는 큰 차이가 나타나지 않았다(제10도).

[실험예 4]

체중 200 내지 250g의 수컷 SD계 랫트 30마리를 각각 10마리씩 3군으로 나누었다. A군은 시스플라틴 만을 6㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하는 대조군으로 하며, 나머지 두 개의 군은 실험군으로 하여 제11도에 도시된 투약 스케쥴에 따라 투약하였다. 즉, 첫 번째 실험군(B군)에는 시스플라틴 6㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하기 48시간 전 및 24시간 전에 알로에신을 각각 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비에 해당하는 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하고 시스플라틴을 투여한 다음 24시간 후에 다시 알로에신을 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하였으며, 두 번째 실험군(C군)에는 시스플라틴과 알로에신을 각가 6㎎/㎏ 및 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하기 48시간 전에 알로에신을 각각 시스플라틴에 대하여 1:10의 몰비에 해당하는 78㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하고 시스플라틴을 투여한 다음 24시간 및 48시간 후에 다시 알로에신을 각각 78㎎/㎏의 용랴응로 복강내 주사하였다. 따라서 B군에는 알로에신이 총 3회 반복투여되였으며, C군에는 알로에신이 총 4회 반복투여되었다. 알로에신의 최초 투약시점(-2일)에 래트의 체중을 측정하고 시험을 시작한 다음 5일 동안 각 군의 래트의 체중을 측정하여 체중의 변화를 관찰하여 보았다. 시험을 시작한 지 6일 후에 각군의 래트를 치사시키고 혈액을 취하여 상온에서 30분 동안 방치하여 혈청을 분리시켰다. 분리된 혈청에 대하여 상기에서 기술한 방법에 따라 신장독성의 지표인 BUN 및 크레아티닌 치와 간장독성의 지표인 GOT 및 GPT치를 측정하였다. 측정된 결과는 제12도 내지 제14도에 각각 나타내었다.

체중변화는 제 12도에 나타내었는데 시스플라틴 단독투여시에 비해 B군 및 C군에서는 체중감소에 대한 현저한 억제효과를 나타내었으며, 신장독성 지표인 제13도에서 보는 바와 같이 BUN 및 크레아티닌 치도 시스플라틴 단독투여시에 비해 반 정도로 감소하였다. 간독성 지표에 잇어서는 제14도에 도시된 바와 같이 C군의 경우에 GOT의 감소가 확인되었는데, 이것은 알로에신의 간보호 작용에 기인하는 것이라고 생각된다.

상기의 실험결과들로부터 알 수 있는 바와 같이 알로에신은 시스플라틴에 의한 체중감소, 신장독성 및 간독성 전반에 걸쳐 개선효과를 나타냄을 알 수 있다. 투여용량에 있어서는 알로에신을 시스플라틴에 대해 1:10의 몰비로 투여한 경우에 신장독성 억제효과가 가장 우수하였으며 동시 투여가 가장 우수한 결과를 제공하였다. 1시간 전 투여, 후투여에 있어서는 신장독성 억제효과가 나타나지 않은 것으로 미루어 투여시기가 독성억제효과를 나타내는데 매우 중요하다는 것을 의미한다.

또한 하루 간격을 두고 반복투여함으로써 미리 신장내에 알로에신을 축적시켰을 때의 독성억제효과를 보면 체중감소 및 신장독성 억제효과가 현저하게 나타났으며, 2회, 3회 및 4회 반복투여시에 체중감소 및 신장독성에 대한 억제정도의 차이는 보이지 않았다.

이 사실은 대부분의 천연성분이 간에서 오랜기간 동안 존재함으로써 일어날 수 있는 대사장해의 문제를 생각하면 매우 바람직한 것이다.

[실험예 5]

체중 200 내지 250g의 수컷 SD계 랫트 60마리를 각각 10마리씩 6군으로 나누었다. 대조군은 시스플라틴 만을 6㎎/㎏의 용량으로 복강내 주사하였으며, 나머지 다섯 개의 군은 실험군으로 하여 제15도에 도시된 투약 스케쥴에 따라 투약하였다. 실험군으로서 A군에는 시스플라틴 투여 3일 전부터 1일 전까지 알로에신을 연속투여하였으며, B군에는 시스플라틴 투여 2일 전부터 시스플라틴 투여당일까지 알로에신을 연속투여하고, C군에는 시스플라틴 투여 1일 전부터 시스플라틴 투여 1일 후까지 알로에신을 연속 투여하였고, D군에는 시스플라틴 투여당일 부터 시스플라틴 투여 2일 후까지 알로에신을 연속투여하고, E군에는 시스플라틴 투여 1일 후부터 시스플라틴 투여 3일 후까지 알로에신을 연속 투여하였다. 각각의 실험군에서 알로에신의 투여량은 각 경우에 매회 78㎎/㎏으로 하여 연속 3회씩 복강내 주사하였다. 알로에신의 최초 투약시점(-3일)에 래트의 체중을 측정하고 시험을 시작한 다음 6일 동안 각 군의 래트의 체중을 측정하여 체중의 변화를 관찰하여 보았다. 시험을 시작한 지 8일 후에 각군의 래트를 치사시키고 혈액을 취하여 상온에서 30분 동안 방치하여 혈청을 분리시켰다.

분리된 혈청에 대하여 상기에서 기술한 방법에 따라 신장독성의 지표인 BUN 및 크레아티닌 치와 간장독성의 지표인 GOT 및 GPT치를 측정하였다. 측정된 결과는 제16도 내지 제19도에 각각 나타내었다.

체중변화에 있어서는 제16도에서 보는 바와 같이 시스플라틴 단독 투여군에 비해 어느 경우에도 유의성 있는 체중증가가 보였으며 시스플라틴 투여후 3일 동안 연속 투여한 경우에만 체중감소가 크게 나타났다.

신장독성지표인 BUN 및 크레아티닌 치는 모두 시스플라틴 단독투여군에 비해 현저한 감소가 나타났으며, 특히 시스플라틴 투여 3일 전부터 3회 연속투여하는 경우에는 정상치로의 회복이 나타났다(제17 및 18도).

그러나 체중감소가 크게 나타났던 시스플라틴 투여후 3회 연속투여에 있어서도 신장독성 지표는 모두 정상치로 회복되었다.

제19도에서 보는 바와 같이 간독성 지표인 GOT 및 GPT치에 있어서는 시스플라틴 단독 투여시에도 간독성은 거의 유도되지 않아 약간의 GOT 증가만 보였으며 알로에신 투여군에서도 시스플라틴 투여후의 경우(D 및 E군)를 제외하고 이와 비슷한 수치를 보였다. 시스플라틴 투여후 알로에신을 투여한 경우는 간독성이 있으므로 주의가 필요하다.

상기 실험의 결과로부터 알로에신을 시스플라틴 투여 전후로 3회 연속 투여할 경우에는 체중감소의 억제와 신장독성 지표의 현저한 감소가 나타나 유의성 있는 독성억제효과가 있음을 확인할 수 있다. 특히 시스플라틴 투여 전 3회 연속투여한 경우가 가장 독성억제효과가 좋안 모든 독성 지표를 정상치로 회복시켰으며 전 투여가 동시투여, 후투여를 포함하여 3회 연속 투여할 경우에 비해 모든 독성지표에 있어서 효과가 좋은 경향이 있는 것을 확인할 수 있었다.

상기의 실험결과들로부터 알로에신은 시스플라틴과 동시에 투여하거나, 또는 시스플라틴 투여를 전후하여 연속해서 3회 투여하는 것이 특히 바람직한 투여방법임을 알 수 있었다.

Claims

시스플라틴과 알로에신을 함유함을 특징으로 하는 시스플라틴과 알로에신의 병용투여를 위한 항암요법 주사용 조성물.
제1항에 있어서, 시스플라틴과 알로에신이 1:01-50의 몰비로 존재하는 조성물.
제2항에 있어서, 시스플라틴과 알로에신이 1:1-30의 몰비로 존재하는 조성물.
제3항에 있어서, 시스플라틴과 알로에신이 1:10의 몰비로 존재하는 조성물.
제1항에 있어서, 시스플라틴과 알로에신이 혼합물의 형태로 하나의 용기내에 존재하도록 제형화된 조성물.
제1항에 있어서, 시스플라틴과 알로에신이 별개의 용기내에 존재하여 일정시간 간격을 두어 투여되도록 키트 형태로 제형화된 조성물.
제6항에 있어서, 알로에신이 수회 분할투여될 수 있도록 되어 있는 조성물.