JPWO2023080102A5 - - Google Patents
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Description
Lawrence Rajendran et al., Alzheimer’s disease β-amyloid peptides are released in association with exosomes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2006 Jul 25;103(30):11172-11177.
Massimo S. Fiandaca et al., Identification of preclinical Alzheimer’s disease by a profile of pathogenic proteins in neurally derived blood exosomes: A case-control study. Alzheimer’s & Dementia 11(2015)600-607
Olmedillas-Lopez S., et al., Current and Emerging Applications of Droplet Digital PCR in Oncology. Mol Diagn Ther. 2017 Oct;21(5):493-510
１つのウェル２４１に導入される脳神経細胞由来のエクソソーム１１０の数は特に制限されないが、好ましくは、１つのウェル２４１に１つ以下、すなわち、０個又は１個の脳神経細胞由来のエクソソーム１１０が導入される。これにより、脳神経細胞由来のエクソソーム１１０に結合したアミロイドβ１１１の検出を１個単位で行うことができ、すなわちデジタル計測が可能となる。また、ウェルアレイの全てのウェルに脳神経細胞由来のエクソソーム１１０が導入される必要はない。
続いて、脳神経細胞由来のエクソソーム表面上に存在するバイオマーカー１１２に結合したエクソソーム表面上バイオマーカー特異的結合物質１５０を検出する。本実施形態の検出方法は、デジタル計測による検出に適している、本実施形態の検出方法をデジタル計測で行う場合、複数のウェルが配置されたウェルアレイを有する流体デバイスを用いることが好ましい。流体デバイスとしては、前記第１実施形態に記載した流体デバイスが用いられる。ただし、核酸断片で標識された、アミロイドβ特異的結合物質の代わりに、核酸断片で標識された、エクソソーム表面上バイオマーカー特異的結合物質が用いられる。
図１０及び図１１に示したように、エクソソームの濃度に依存して、蛍光強度が増加した。この結果から、核酸標識抗アミロイドβ抗体により、脳神経細胞由来のエクソソームに結合したアミロイドβを検出できることが明らかとなった。
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