JPWO2022255273A5

JPWO2022255273A5 -

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Publication number: JPWO2022255273A5
Application number: JP2023525798A
Authority: JP
Filing date: 2022-05-27
Publication date: 2024-03-29

Description

［４］（Ｒ）－１－アジド－１７－（（４－デシルフェニル）カルバモイル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１６－アザオクタデカ－１８－ニルリン酸、又は（Ｒ）－２－アミノ－３－（（４－デシルフェニル）アミノ）－３－オキソプロピル（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）リン酸である、［１］の化合物及び製薬上許容される塩。
［５］１－アジド－１７－（ヒドロキシメチル）－１７－（４－オクチルフェネチル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１６－アザオクタデカ－１８－ニルリン酸、又は２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－４－（４－オクチルフェニル）ブチル（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）リン酸である、［１］の化合物及び製薬上許容される塩。
［６］式１で特定される化合物が、以下の構造を有する化合物群から選択された化合物である、［１］の化合物及び製薬上許容される塩。

［７］核酸と、式１で特定される化合物若しくは製薬上許容される塩が、リンカーを介して結合している、［１］～［６］のいずれかのリガンド結合核酸複合体。
［８］リンカーが、切断可能な構造を有する切断性リンカーである、［７］のリガンド結合核酸複合体。
［９］リンカーが、以下の構造を有するリンカーである、［８］のリガンド結合核酸複合体：

。
［１０］核酸分子が、標的遺伝子又はその転写産物に対して相補的である核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドからなるアンチセンス鎖を含む核酸分子と、標的タンパク質に対して特異的に結合する核酸塩基配列を有するアプタマーと、標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有するオリゴヌクレオチドからなるデコイから選択される核酸分子である、［１］のリガンド結合核酸複合体。
［１１］核酸分子がＡＤＯ、ＡＳＯ、ＨＤＯ、ＲＮＡｉから選択される核酸分子である、［１］のリガンド結合核酸複合体。
［１２］核酸分子のアンチセンス鎖が連続する１２～３０のヌクレオチドからなる、［１１］のリガンド結合核酸複合体。
［１３］核酸分子が標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有し８～３０のヌクレオチドからなるデコイである、［９］のリガンド結合核酸複合体。
［１４］前記オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡからなるアンチセンス鎖と、前記アンチセンス鎖に相補的である核酸鎖からなるｓｉＲＮＡである、［１０］のリガンド結合核酸複合体。
［１５］標的遺伝子、その転写産物又はその翻訳産物の発現又は編集を調節する核酸分子と、Ｓ１Ｐ受容体に対するリガンドとが結合している、リガンド結合核酸複合体。
［１６］標的遺伝子、その転写産物又はその翻訳産物の発現又は編集を調節する核酸分子と、Ｓ１Ｐ受容体に対するリガンドとが、リンカーを介して結合している、［１５］のリガンド結合核酸複合体。
［１７］リンカーが、切断可能な構造を有する切断性リンカーである、［１６］のリガンド結合核酸複合体。
［１８］核酸分子が、標的遺伝子又はその転写産物に対して相補的である核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドからなるアンチセンス鎖を含む核酸分子と、標的タンパク質に対して特異的に結合する核酸塩基配列を有するアプタマーと、標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有するオリゴヌクレオチドからなるデコイから選択される核酸分子である、［１５］のリガンド結合核酸複合体。
［１９］核酸分子がＡＳＯ、ＨＤＯ、ＲＮＡｉから選択される核酸分子である、［１８］のリガンド結合核酸複合体。
［２０］核酸分子の核酸鎖は、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及び／又はヌクレオチドアナログを含む、［１５］のリガンド結合核酸複合体。
［２１］核酸分子のアンチセンス鎖のヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びヌクレオチドアナログの総数が、１２～３０ヌクレオチドからなる、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［２２］核酸分子がＨＤＯであり、ＨＤＯのアンチセンス鎖及び相補鎖のヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びヌクレオチドアナログの総数が、それぞれ１２～３０ヌクレオチドからなる、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［２３］核酸分子が標的遺伝子又はその転写産物に対して相補的である核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドからなるアンチセンス鎖と、当該アンチセンス鎖に相補的な核酸塩基配列を有する相補鎖を持つＨＤＯであり、ＨＤＯの相補鎖にＳ１Ｐ受容体に対するリガンドが結合している、［１５］～［１６］のいずれかのリガンド結合核酸複合体。
［２４］核酸分子が標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有し８～３０ヌクレオチドからなるデコイである、［１５］のリガンド結合核酸複合体。
［２５］アンチセンス鎖は、ギャップマーであり、ヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含むギャップ領域と、その５’末側及び／又は３’末側に配置される１又は複数のヌクレオチドアナログ及び／又は修飾ヌクレオチドを含むウィング領域からなる、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［２６］アンチセンス鎖は、非ギャップマーであり、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及び／又はヌクレオチドアナログを含む、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［２７］相補鎖は、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及び／又はヌクレオチドアナログを含む、［２２］のリガンド結合核酸複合体。
［２８］相補鎖は、ヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含むセンター領域と、その５’末側及び／又は３’末側に配置される１又は複数のヌクレオチドアナログ及び／又は修飾ヌクレオチドを含むウィング領域からなる、［２７］のリガンド結合核酸複合体。
［２９］修飾ヌクレオチドは、２’－Ｏ－ＣＨ_３基又は２’－Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３（ＭＯＥ）基を含むヌクレオチドである、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［３０］ヌクレオチドアナログは、ＬＮＡ、ｃＥｔ－ＢＮＡ、アミドＢＮＡ（ＡｍＮＡ）及びｃＭＯＥ－ＢＮＡから独立して選択される架橋化ヌクレオチドを含む、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［３１］ヌクレオチドアナログは、ＬＮＡ、ｃＥｔ－ＢＮＡ、アミドＢＮＡ（ＡｍＮＡ）及びｃＭＯＥ－ＢＮＡから独立して選択される架橋化ヌクレオチドを含む、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［３２］ヌクレオチドアナログは、ＰＮＡ、ＧＮＡ、ＴＮＡ、ｔｃＤＮＡ、モルホリノ核酸、ＢＮＡから独立して選択される、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
［３３］核酸分子における少なくとも１つのヌクレオチド若しくは修飾ヌクレオチドがホスホロチオエート化若しくはボラノホスフェート化されている、［２０］のリガンド結合核酸複合体。
本明細書は本願の優先権の基礎となる日本国特許出願番号２０２１－０９１５８９号の開示内容を包含する。

合成プロセス１

＜ｔ－ブチル（Ｒ）－（１－（（４―デシルフェニル）アミノ）－３－ヒドロキシ－１－オキソプロパン－２－イル）カルバメート（化合物２）の合成＞
４－デシルアニリン（１．１６ｇ）を乾燥ジクロロメタン（２５ｍＬ）に溶解させ、（ｔ－ブトキシカルボニル）－Ｄ－セリン（化合物１，１．０２ｇ）、トリエチルアミン（７５０μＬ）、１－［ビス（ジメチルアミノ）メチレン］－１Ｈ－１，２，３－トリアゾロ［４，５－ｂ］ピリジニウム３－オキシドヘキサフルオロホスファート（２．１４ｇ）を順次加えて、窒素雰囲気下室温で２時間攪拌したのち、反応溶液に水（０．２ｍＬ）を加えて１時間攪拌した。反応溶液を溶媒留去後、酢酸エチル（５０ｍＬ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）と飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、残渣を白色固体（２．８４ｇ）として得た。残渣をクロロホルムに溶解させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＹａｍａｚｅｎＨＩ－ＦＬＡＳＨＰＲＥＭＩＵＭｓｉｌｉｃａ；φ４６×１３０ｍｍ；メタノール／クロロホルム（メタノール０％→１０％））により精製し、２を白色固体（１．８４ｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４１９．２［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：８．６８（ｂｒ，１Ｈ），７．３８（ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，２Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．６８（ｂｒ，１Ｈ），４．２９－４．２１（ｍ，２Ｈ），３．７５－３．６８（ｍ，１Ｈ），３．０９（ｂｒ，１Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．２７（ｍ，１４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

＜ｔ－ブチル（Ｒ）－（１－（４－デシルフェニル）アミノ）－３－（（ジ－ｔ－ブトキシホスホリル）オキシ）－１－オキソプロパン－２－イル）カルバメイト（化合物３）の合成＞
化合物２（２１０ｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、テトラゾール（７３ｍｇ）、ジ－ｔ－ブチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルホスホロアミダイト（３１０μＬ）を順次加えて、窒素雰囲気下室温で１８時間攪拌した。氷冷下で反応溶液にテトラヒドロフラン（５ｍＬ）と３５％過酸化水素水（０．３ｍＬ）を加え、室温で６時間攪拌した。その後１５％チオ硫酸ナトリウム水溶液（１ｍＬ）を加え室温で１７時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（３０ｍＬ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（４０ｍＬ×２）と飽和食塩水（４０ｍＬ）で有機層を洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、粗精製物を無色透明オイル（３２６ｍｇ）として得た。得られたオイルは、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎｓｉｌｉｃａ；φ３０×１６５ｍｍ；メタノール／クロロホルム（メタノール０％→３％））により精製し、化合物３を無色透明オイル（２４４ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６１１．２［Ｍ－Ｈ］。

＜（Ｒ）－２－アミノ－３－（（４－デシルフェニル）アミノ）－３－オキソプロピルリン酸（化合物４）の合成＞
化合物３（２４４ｍｇ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（５ｍＬ）を加えて室温で３時間攪拌した。反応溶液にトルエン（５ｍＬ）加えて溶媒留去した。残渣をジエチルエーテル（３ｍＬ）で５回洗い、化合物４を白色固体（１１１ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３９９．１［Ｍ－Ｈ］。

＜（Ｒ）－１－アジド－１７－（（４－デシルフェニル）カルバモイル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１６－アザオクタデカ－１８－ニルリン酸（ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－ａｚｉｄｅ）の合成＞
２，５－ジオキシピロリジンー１－イル１－アジドー３，６，９，１２―テトラオキサペンタデカー１５―ノエート（ＰＥＧ４－ａｚｉｄｅ－ＮＨＳエステル、２４ｍｇ）をジクロロメタン（１ｍＬ）に溶解させ、化合物４（２４ｍｇ）とトリエチルアミン（２４μＬ）を加えて室温で２時間攪拌した。溶媒減圧下留去した後得られた残渣をメタノール／重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液（０．１Ｍ）＝１：１に溶解させ、逆祖カラムクロマトグラフィー（ＹａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎＯＤＳ；φ２３×１２３ｍｍ；メタノール／重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液（０．１Ｍ）（メタノール４４％→１００％））により精製し、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－ａｚｉｄｅ・トリエチルアンモニウム塩を無色透明オイル（２８ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６７２．１［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．４７（ｄ，８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．６７（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２３－４．１５（ｍ，２Ｈ），３．８４－３．７５（ｍ，２Ｈ），３．６８－３．５９（ｍ，１４Ｈ），３．３５（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．１４（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ），２．６７－２．５１（ｍ，４Ｈ），１．５９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．３１－１．２５（ｍ，２３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．７９。

上述した合成プロセス１と同じ方法を使用し、ＰＥＧ４－Ａｚｉｄｅ－ＮＨＳエステルに代えて、ＰＥＧ１－Ａｚｉｄｅ－ＮＨＳエステル、ＰＥＧ９－Ａｚｉｄｅ－ＮＨＳエステルＣ１０－Ａｚｉｄｅ－ＮＨＳエステル、ＰＥＧ４－Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ－ＮＨＳエステル、ＰＥＧ４－ＳＰＤＰ－ＮＨＳエステルをそれぞれ使用する事で、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ１－Ａｚｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ９－Ａｚｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－Ｃ１０－Ａｚｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－ＳＰＤＰをそれぞれ得た。

（Ｒ）―２―（３―（２－アジドエトキシ）プロパナミド）－３－（（４―デシルフェニル）アミノ）―３―オキソプロピルリン酸（ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ１－Ａｚｉｄｅ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５４０．１［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．４７－７．４４（ｍ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２２－４．１２（ｍ，２Ｈ），３．８１（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），３．６７－３．６３（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），３．１５（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ），２．６７－２．５４（ｍ，４Ｈ），１．５９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．３１－１．２６（ｍ，２３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．２３。
（Ｒ）―１―アジド―３２―（（（４―デシルフェニル）カルバモイル）―３０―オキソ―３，６，９，１２，１５，１８，２１，２４，２７―ノナオキサ―３１―アザトリトリアコンタニ―３３―ルリン酸（ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ９－Ａｚｉｄｅ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８９４．４［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．４７（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．１２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．６２（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－４．１４（ｍ，２Ｈ），３．８３－３．５２（ｍ，３６Ｈ），３．３７（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．０９（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ），２．６５－２．５２（ｍ，４Ｈ），１．５９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．３１－１．２３（ｍ，２３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．４３。
（Ｒ）―２―（１１―ウンデカナミド）―３―（（４―デシルフェニル）アミノ）―３―オキソプロピルリン酸（ＲＮ０１－Ｎ－Ｃ１０－Ａｚｉｄｅ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６１０．３［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．３７（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．０２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５４（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１０－４．０５（ｍ，２Ｈ），３．１７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），２．４８（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．２３（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．５８－１．４６（ｍ，６Ｈ），１．２４－１．１９（ｍ，２６Ｈ），０．８１（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．４３。
（Ｒ）―１７―（（４―デシルフェニル）カルバモイル）―１―（２，５―ジオキソ―２，５―ジヒドロ―１Ｈ―ピローリ―１―ル）―１５―オキソ―３，６，９，１２―テトラオキサ―１６―アザオクタデカニ―１８―ルリン酸（ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８４５．３［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．４６（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．８１（ｓ，２Ｈ），４．６３（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－４．１４（ｍ，２Ｈ），３．８３－３．５２（ｍ，１８Ｈ），３．１８（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，６Ｈ），２．６７－２．５２（ｍ，４Ｈ），１．５９（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．３２－１．２７（ｍ，２３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．１１。
（Ｒ）―２―（（４―デシルフェニル）カルバモイル）―４，２０―ジオキサ―２２―（ピリジニ―２―ルジスルフェネル）―７，１０，１３，１６―テトラオキサ―３，１９―ジアザドコシルリン酸（ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４ＳＰＤＰ）
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８４５．３［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：８．４１－８．３９（ｍ，１Ｈ），７．８５－７．８０（ｍ，２Ｈ），７．４７（ｄｄ，Ｊ＝７．８，６．１Ｈｚ，２Ｈ），７．２４－７．２０（ｍ，１Ｈ），７．１１（ｔ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．６３（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－４．１０（ｍ，２Ｈ），３．７９（ｍ，２Ｈ），３．６６－３．５８（ｍ，１２Ｈ），３．５３（ｔ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，２Ｈ），３．３５（ｔ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，２Ｈ），３．０６（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），２．６５－２．５４（ｍ，６Ｈ），１．６１－１．５８（ｍ，２Ｈ），１．３１－１．２６（ｍ，２３Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．１１。
表８は、実施例１で合成したＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－ａｚｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ１－Ａｚｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ９－Ａｚｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－Ｃ１０－Ａｚｉｄｅ、ＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－Ｍａｌｅｉｍｉｄｅ、及びＲＮ０１－Ｎ－ＰＥＧ４－ＳＰＤＰの構造式を示す。

合成スキーム２

＜１４－ヒドロキシ－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル４－メチルベンゼンスルホネート（化合物６）の合成＞
化合物５（１．２２ｇ）を乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（７００μＬ）を加えた。トシルクロリド（９５９ｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させた後、氷冷下で先ほどの化合物５を含む溶液に滴下した。窒素雰囲気下氷浴下で１５分攪拌後、室温で４０分攪拌した。反応溶液にメタノール（０．１ｍＬ）を加えて室温で１時間攪拌後溶媒を留去し、残渣を白色ゲル（２．９０ｇ）として得た。残渣をクロロホルムに溶解させ、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎｓｉｌｉｃａ；φ３０×１６５ｍｍ；メタノール／クロロホルム（メタノール１％→８％））により精製し、化合物６を無色透明オイル（９９４ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３９３．０［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：７．８０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１６（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．７１－３．５９（ｍ，１８Ｈ），２．５７（ｂｒ，１Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ）。
合成スキーム３

＜１４－（（ｔ－ブトキシ（（Ｒ）－３－（（４－デシルフェニル）アミノ－３－オキソ－２－ピバルアミドプロピオキシ）ホスホリル）オキシ）３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル４－メチルベンゼンスルホネート（化合物７）の合成＞
化合物２（４２０ｍｇ）とｔ－ブトキシ－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトライソプロピルホスフィンジアミン（６０５ｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、ジイソプロアンモニウムテトラゾライド（３４６ｍｇ）を加えて、反応溶液を窒素雰囲気下室温で１時間攪拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）を加えて、ジクロロメタン（２０ｍＬ×３）で抽出した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、残渣を無色透明オイル（６９５ｍｇ）として得た。得られた残渣は、化合物６（４７６ｍｇ）と共に乾燥テトラヒドロフラン（５ｍＬ）に溶解させて、テトラゾール（３４４ｍｇ）の乾燥テトラヒドロフラン溶液（５ｍＬ）を滴下し窒素雰囲気下１日攪拌した。反応溶液に３５％過酸化水素水（０．５ｍＬ）を加えて室温で１．５時間攪拌した。反応溶液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で溶解させた後、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、残渣を無色透明オイル（８８０ｍｇ）として得た。残渣をクロロホルムに溶解させて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎｓｉｌｉｃａ；φ３０×１６５ｍｍ；酢酸エチル／ヘキサン（酢酸エチル８０％→１００％））により精製し、化合物７を無色透明オイル（１３９ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９２９．２［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：８．５６（ｂｒ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．４５（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），７．３３（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），５．９４（ｍ，１Ｈ），４．４９－４．４４（ｍ，２Ｈ），４．２５－４．０７（ｍ，５Ｈ），３．６９－３．５０（ｍ，１６Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．４４（ｓ，３Ｈ），１．５５（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．４６（ｓ，９Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，１４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：－５．４４。
＜１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル－ｔ－ブチル（（Ｒ）－３－（（４－デシルフェニル）アミノ）－３－ｏｘｏ－２－ピバルアミドプロピルホスフェート（化合物８）の合成＞
化合物７（１３９ｍｇ）を乾燥Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）に溶解させて、アジ化ナトリウム（５１ｍｇ）を加えて、反応溶液を窒素雰囲気下６０℃で２．５時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（２０ｍＬ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、化合物８を無色透明オイル（８７ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８０１．２［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：８．６３（ｂｒ，１Ｈ），７．５３（ｄｄ，Ｊ＝８．３，１．１Ｈｚ，２Ｈ），７．１１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），６．０３－５．９０（ｍ，１Ｈ），４，５９－４．４９（ｍ，２Ｈ），４．２７－４．０９（ｍ，３Ｈ），３．６９－３．５０（ｍ，１６Ｈ），３．３５（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），２．５５（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５７（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．４９（ｓ，９Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ），１．３０－１．２０（ｍ，１４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
＜^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：－５．４８。
（Ｒ）－２－アミノ－３－（（４－デシルフェニル）アミノ）－３－オキソプロピル（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）リン酸（ＲＮ０１－Ｐ－ＰＥＧ４－ａｚｉｄｅ）の合成＞
化合物８（８７ｍｇ）のジクロロメタン（２ｍＬ）溶液にトリフルオロ酢酸（０．２ｍＬ）を加えて室温で１時間攪拌した。さらに反応溶液にトリフルオロ（０．２ｍＬ）を加えて、室温で２時間攪拌した。反応溶液にトルエン（２ｍＬ）を加えて溶媒を留去し、残渣を無色透明オイル（７９ｍｇ）として得た。残渣をメタノールに溶解させて、逆相クロマトグラフィー（ＹａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎＯＤＳ；φ１８×１１４ｍｍ；メタノール）により精製し、ＲＮ０１－Ｐ－ＰＥＧ４－ａｚｉｄｅを無色透明オイル（４２ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６４４．１［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．４９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），４．３６－４．２１（ｍ，３Ｈ），４．０４－３．９８（ｍ，２Ｈ），３．６９－３．６１（ｍ，１６Ｈ），３．３７（ｔ，Ｊ＝５．１Ｈｚ，２Ｈ），２．５８（ｔ，Ｊ＝７．６Ｈｚ，２Ｈ），１．５９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，２Ｈ），１．３２－１．２３（ｍ，１４Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：－０．３５。
合成スキーム４

＜（Ｒ）―Ｎ―（４―デシルフェニル）―３―ヒドロキシ―２―（２，２，２―トリフルオロアセタミド）プロパナミド（化合物９）の合成＞
化合物２（８４６ｍｇ）をジクロロメタン（８ｍＬ）に溶解させ、トリフルオロ酢酸（２ｍＬ）を加えて室温で３時間半攪拌した。トルエン（５ｍＬ）を加えて溶媒留去した。得られた残渣をメタノール（２０ｍＬ）に溶解させ、トリエチルアミン（１．４ｍＬ）とトリフルオロ酢酸エチルエステル（０．８ｍＬ）を加えて室温で１時間半攪拌した。溶媒留去後残渣をジクロロメタン（８０ｍＬ）に溶解し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（８０ｍＬ×２）と飽和食塩水（８０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去し化合物９を白色固体（７７１ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：４１５．１［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：８．３７（ｂｒ，１Ｈ），７．６０（ｂｒ，１Ｈ），７．３９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．１５（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．５９（ｔｄ，Ｊ＝６．４，３．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２６（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，３．０Ｈｚ，１Ｈ），３．７６（ｄｄ，Ｊ＝１１．３，６．０Ｈｚ，１Ｈ），３．０８（ｂｒ，１Ｈ），２．５７（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），１．５８（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ），１．３９－１．２０（ｍ，１４Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）。

＜^１９Ｆ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：―７５．５５。
２―シアノエチル（Ｒ）―３―（（４―デシルフェニル）アミノ―３―オキソ―２―（２，２，２―トリフルオロアセタミド）プロピルホスホロアミダイト（ＲＮ０１－Ｐ－Ａｍｉｄｉｔｅ）の合成＞
化合物９を乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ―ジイソプロピルエチルアミン（５２０μＬ）と２―シアノエチル―Ｎ，Ｎ―ジイソプロピルクロロホスホロアミダイト（３３０μＬ）を加えて、反応溶液を窒素雰囲気下室温で１時間攪拌した。反応溶液にジクロロメタン（４０ｍＬ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）と飽和食塩水（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒留去し、残渣を黄色タール（６６６ｍｇ）として得た。残渣をヘキサンと酢酸エチルに溶解させて、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎａｍｉｎｏｓｉｌｉｃａ；φ２３×１２３ｍｍ；酢酸エチル／ヘキサン（酢酸エチル１５％→５０％、トリエチルアミン１％含有））により精製し、ＲＮ０１－Ｐ－Ａｍｉｄｉｔｅを無色透明オイル（３２９ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６１５．２［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：８．２２（ｄ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），７．５７－７．４０（ｍ，３Ｈ），７．１４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），４．７３（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１Ｈ），４．２１－３．５５（ｍ，６Ｈ），２．７２－２．５４（ｍ，４Ｈ），１．５８（ｔ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，２Ｈ），１．２９－１．１０（ｍ，２６Ｈ），０．８８（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）
^１９Ｆ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：―７５．７２。
^３１ＰＮＭＲ（１２１ＭＨｚ，ＣＤＣｌ_３）δ１５１．１１，１４９．２３（ジアステレオマーのため）。
合成スキーム５

＜（２－メチル－４－（４－オクチルフェネチル）－４，５－ジヒドロオキサゾリ－４－ル）メタノール（化合物１１）の合成＞
２－アミノ－２－（４－オクチルフェネチル）プロパン－１，３－ジオール塩酸塩（化合物１０，１７４ｍｇ）を乾燥Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）に溶解させて、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２６０μＬ）、オルト酢酸トリメチル（７５μＬ）を加えて、反応溶液を窒素雰囲気下１２０℃で３時間攪拌した。反応溶液を室温に戻し、酢酸エチル（４０ｍＬ）を加えて、水（４０ｍＬ）と飽和食塩水（４０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥し、溶媒留去することで化合物１１を褐色オイル（２３２ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３３２．２［Ｍ＋Ｈ］。
＜ジ－ｔ－ブチル（２－メチル－４－（４－オクチルフェネチル））－４，５－ジヒドロオキサゾリ－４－ル）メチル）ホスフェート（化合物１２）の合成＞
化合物１１（２３２ｍｇ）にテトラゾール（３４４ｍｇ）の乾燥テトラヒドロフラン溶液（８ｍＬ）、ジ－ｔ－ブチル－Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルホスホロアミダイト（３１０μＬ）を順次加えて、窒素雰囲気下室温で１６時間攪拌した。反応溶液に３５％過酸化水素水（０．３ｍＬ）を加え、室温で３日間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（３０ｍＬ）を加えて、１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）と水（３０ｍＬ）で有機層を洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、粗精製物を黄色オイル（３０２ｍｇ）として得た。得られた粗精製物は、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎｓｉｌｉｃａ；φ３０×１６５ｍｍ×２本；酢酸エチル／ヘキサン（酢酸エチル７２％→１００％））により精製し、化合物１２を黄色オイル（７１ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５２４．２［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：７．０８（ｓ，４Ｈ），４．３３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），３．９９（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９６－３．８５（ｍ，２Ｈ），２．６４－２．５３（ｍ，４Ｈ），２．００（ｓ，３Ｈ），１．９８－１．７７（ｍ，２Ｈ），１．５７－１．５３（ｍ，２Ｈ），１．４８（ｓ，９Ｈ），１．４７（ｓ，９Ｈ）１．２７（ｍ，１０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

＜^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：－９．７７。
１－アジド－１７－（ヒドロキシメチル）－１７－（４－オクチルフェネチル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１６－アザオクタデカ－１８－ニルリン酸（ＲＮ０２－Ｎ－ＰＥＧ４－Ａｚｉｄｅ）の合成＞
化合物１２（７１ｍｇ）をエタノール（５ｍＬ）に溶解させ、濃塩酸（１ｍＬ）を加えて反応溶液を５０℃で４時間攪拌した。反応溶液にトルエン（２ｍＬ）を加えて溶媒留去し、残渣を白色フォームとして得た。残渣にジクロロメタン（１ｍＬ）とトリエチルアミン（４００μＬ）、２，５－ジオキシピロリジ－１－ニル１－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサペンタデカ－１５－ノエート（５７ｍｇ）のジクロロメタン溶液（２ｍＬ）を加えて室温で２４時間攪拌した。反応溶液を溶媒留去し、アセトニトリル／重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液（０．１Ｍ）＝１：１に溶解させ、カラムクロマトグラフィー（ＬｕｎａＯｍｅｇａＰｏｌａｒＣ１８；Φ２１．２×２５０ｍｍ；アセトニトリル／重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液（０．１Ｍ）（アセトニトリル５０％））により精製し、ＲＮ０２－Ｎ－ＰＥＧ４－Ａｚｉｄｅのトリエチルアミン塩を無色透明オイル（１７ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６６１．１［Ｍ＋Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．１２－７．０３（ｍ，４Ｈ），４．１４－３．９８（ｍ，２Ｈ），３．８５－３．５６（ｍ，１６Ｈ），３．３９－３．３３（ｍ，２Ｈ），３．１８（ｑ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，４Ｈ），２．６３－２．５２（ｍ，４Ｈ），２．４８（ｄｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，２Ｈ），２．１３－２．００（ｍ，２Ｈ），１．５８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，２Ｈ），１．３７－１．１８（ｍ，１７Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：１．４５。
合成スキーム６

＜１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル－ｔ－ブチルジイソプロピルホスホロアミダイト（化合物１３）の合成＞
化合物３（４３８ｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解し、ジイソプロピルアンモニウムテトラゾライド（２５９ｍｇ）とｔ－ブトキシ－Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ－テトライソプロピルホスフィンジアミン（６１２ｍｇ）を加えて窒素雰囲気下室温で反応溶液を３時間攪拌した。反応溶液にジクロロメタン（４０ｍＬ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で有機層を洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後、溶媒を留去し粗精製物を無色透明オイル（１．１５ｇ）として得た。得られた粗精製物は、アミノシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎａｍｉｎｏ；φ２３×１２３ｍｍ×２本；酢酸エチル／１％トリエチルアミン含有ヘキサン（酢酸エチル４％→２５％））により精製し、化合物１３を無色透明オイル（４３８ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：５４０．２［Ｍ－Ｂｕ＋２Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：７．８２（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３６（ｄ，Ｊ＝７．９Ｈｚ，２Ｈ），４．１８（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），３．７８－３．５５（ｍ，２０Ｈ），２．４７（ｓ，３Ｈ），１．３６（ｓ，９Ｈ），１．１８（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，１２Ｈ）。
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：１３７．４３
合成スキーム７

＜ｔ－ブチル（１－ヒドロキシ－２－（（メトキシメトキシ）メチル）－４－（オクチルフェニル）ブタ－２－ニル）カルバメート（１４）の合成＞
化合物１０（３４９ｍｇ）を乾燥メタノール（７ｍＬ）に溶解し、Ｎ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（５２０μＬ）とジ－ｔ－ブチルジカルボネート４６０μＬ）を加えて、窒素雰囲気下室温で３時間攪拌し、再びジ－ｔ－ブチルジカルボネート（２３０μＬ）を加えて窒素雰囲気下室温で１９時間攪拌した。反応溶液に飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３０ｍＬ）を加えて、酢酸エチル（６０ｍＬ）で抽出し、有機層を飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、無色透明オイルを得た。無色透明オイルに乾燥ジクロロメタン（６ｍＬ）とＮ，Ｎ－ジイソプロピルエチルアミン（２５０μＬ）を溶解し０°Ｃに冷却しクロロメチルメチルエーテル（９０μＬ）を加えた後に窒素雰囲気下室温で３時間攪拌した。反応溶液にメタノール（１ｍＬ）を加えて室温で１４時間攪拌後、反応溶液をジクロロメタン（３０ｍＬ）に溶解し、飽和食塩水で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、粗精製物を無色透明オイル（５０５ｍｇ）として得た。得られた粗精製物を酢酸エチル／ヘキサン＝１：１溶液（３ｍＬ）に溶解し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎｓｉｌｉｃａ；φ２３×１２３ｍｍ×２本；酢酸エチル／ヘキサン（酢酸エチル１５％→４０％））により精製し、化合物１４を無色透明オイル（１７０ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：３５２．０［Ｍ－Ｂｏｃ＋２Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：７．０８（ｄ，Ｊ＝９．４Ｈｚ，４Ｈ），５．１４（ｂｒ，１Ｈ），４．６４（ｓ，２Ｈ），４．０５（ｂｒ，１Ｈ），３．８０－３．５０（ｍ，４Ｈ），３．３９（ｓ，３Ｈ），２．６８－２．４８（ｍ，４Ｈ），２．１１－１．８６（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．５６（ｍ，２Ｈ），１．４５（ｓ，９Ｈ），１．２７（ｍ，１０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。

＜１４－（（ｔ－ブトキシ（２－（（ｔ－ブトキシカルボニル）アミノ）－２－（（メトキシメトキシ）メチル）－４－（４－オクチルフェニル）ブトキシ）ホスホリル）－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル－４－メチルベンゼンスルホネート（化合物１５）の合成＞
化合物１３（４３８ｍｇ）と化合物１４（１７０ｍｇ）を乾燥ジクロロメタン（６ｍＬ）に溶解し、テトラゾール（８６ｍｇ）の乾燥アセトニトリル溶液（２ｍＬ）を加えて、反応溶液を窒素雰囲気下室温で２２時間攪拌した。その後、ｔ－ブチルヒドロぺルオキサイド／ｎ－デカン溶液（～５．５Ｍ；２７０μＬ）を加えて窒素雰囲気下室温で２６時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加えて、有機層を１０％チオ硫酸ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、粗精製物を薄黄色オイル（５７２ｍｇ）として得た。粗精製物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（Ｙａｍａｚｅｎｕｎｉｖｅｒｓａｌｃｏｌｕｍｎｓｉｌｉｃａ；φ２３×１２３ｍｍ；メタノール／酢酸エチル（メタノール０％→１７％））により精製し、化合物１５（ジアステレオ混合物）を無色透明オイル（２６９ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：９７９．３［Ｍ＋ＮＨ_４］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：７．８０（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．３４（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，２Ｈ），７．１１－７．０５（ｍ，４Ｈ），５．００（ｂｒ，１Ｈ），４．６２（ｓ，２Ｈ），４．１８－４．１０（ｍ，６Ｈ），３．７５－３．５８（ｍ，１８Ｈ），３．３６（ｓ，３Ｈ），２．６２－２．５２（ｍ，４Ｈ），２．４５（ｓ，３Ｈ），２．１３－２．１０（ｍ，２Ｈ），１．６０－１．５３（ｍ，２Ｈ），１．５０（ｓ，９Ｈ），１．４４（ｓ，９Ｈ），１．３２－１．２３（ｍ，１０Ｈ），０．８７（ｔ，Ｊ＝６．８Ｈｚ，３Ｈ）。
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤＣｌ_３）δ（ｐｐｍ）：－５．３２，－５．４３

＜ｔ－ブチル（１－（（（（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）オキシ）（ヒドロキシ）ホスホリル）オキシ）－２－（（メトキシメトキシ）メチル）－４－（４－オクチルフェニル）ブタ－２－ニル）カルバメート（化合物１６）の合成＞
化合物１５（２６９ｍｇ）を乾燥Ｎ，Ｎ－ジメチルホルムアミド（８ｍＬ）に溶解し、アジ化ナトリウム（９６ｍｇ）を加えて窒素雰囲気下８０℃で１．５時間攪拌した。反応溶液に酢酸エチル（５０ｍＬ）を加えて、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥後溶媒留去し、化合物１６を淡黄色オイル（２２８ｍｇ）として得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：８５０．３［Ｍ＋ＮＨ_４］。

＜２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－４－（４－オクチルフェニル）ブチル（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）リン酸（ＲＮ０２－Ｐ－ＰＥＧ４－Ａｚｉｄｅ）の合成＞
化合物１６（９７ｍｇ）をＴＨＦ（４ｍＬ）、水（０．５ｍＬ）、塩酸（６Ｍ；０．５ｍＬ）に溶解し、反応溶液を５０℃で２日間攪拌した。反応溶液にトリエチルアミン（０．６ｍＬ）を加え溶媒留去し、粗精製物を白色固体（４６４ｍｇ）として得た。粗精製物をアセトニトリル／重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液（０．１Ｍ）＝１：１に溶解させ、カラムクロマトグラフィー（ＬｕｎａＯｍｅｇａＰｏｌａｒＣ１８ＡＸＩＡ５ｍｍ；Φ２１．２×２５０ｍｍ；アセトニトリル／重炭酸トリエチルアンモニウム水溶液（０．１Ｍ）（アセトニトリル５０％→９０％））により精製し、ＲＮ０２－Ｐ－ＰＥＧ４－Ａｚｉｄｅを無色透明オイル（２５ｍｇ）で得た。
ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６３１．２［Ｍ－Ｈ］。
^１Ｈ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：７．１２（ｄｄ，Ｊ＝１８．３，８．１Ｈｚ，４Ｈ），４．１０－３．９９（ｍ，４Ｈ），３．７６－３．５９（ｍ，１８Ｈ），３．３５（ｔ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，２Ｈ），２．６６（ｔｄ，Ｊ＝８．７，６．４Ｈｚ，２Ｈ），２．５６（ｔ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，２Ｈ），２．０１－１．９５（ｍ，２Ｈ），１．５８（ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，２Ｈ），１．３０（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１０Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ，３Ｈ）
^３１Ｐ－ＮＭＲ（ＣＤ_３ＯＤ）δ（ｐｐｍ）：０．０４。

［実施例２］
本発明の核酸複合体は、標的遺伝子又は標的転写産物に対しハイブリダイズ可能なアンチセンス鎖を有しアンチセンス効果を奏するものであればよく、二本鎖の場合はさらにアンチセンス鎖とハイブリダイズ可能な相補鎖の組み合わせを用いることができる。例えば次の配列からなるＡＳＯ、ＨＤＯ、ｓｉＲＮＡから選択することが可能であるし、異なる疾患を標的とする場合、標的転写産物が異なることから、それぞれの標的に応じた核酸配列を持つアンチセンス鎖を有する核酸分子を用いることができる。

Claims

標的遺伝子、その転写産物又はその翻訳産物の発現又は編集を調節する核酸分子と、次の式で特定される化合物若しくは製薬上許容される塩が、リンカーを介して、又は介さず結合するリガンド結合核酸複合体。

式１中、
Ｒ_１は、Ｃ_６－Ｃ_５０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖は鎖中に二重結合、三重結合、炭素環Ｚ、Ｏ、Ｓ、Ｎおよび／またはカルボニルから選ばれる部分構造、結合またはヘテロ原子を一つ以上有してもよいし、置換基としてＹを一つ以上有してもよい；
Ｒ_２及びＲ_４は、（ＣＨ_２）_ｍであり；
ｍは、０－４の整数であり；
Ｒ_３及びＲ_５は、－Ｈ、－Ｘ－、－ＸＷ、－Ｐ（＝Ｘ）（－ＸＷ）_２、－ＸＰ（＝Ｘ）（－ＸＷ）_２からなる群から選択され；
Ｘは、Ｏ、Ｓ、ＮＨからなる群から選択され；
Ｙは、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホン酸、スルホン酸誘導体、アジド、チオールからなる群から選択され；
Ｚは、Ｃ_１－Ｃ_３０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖はシクロアルキルアルキル、アリールアルキル、ヘテロシクロアルキルアルキル、ヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、当該炭素鎖の鎖中に二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、Ｎ、スルフィニル、スルホニルおよび／またはカルボニルから選ばれる結合またはヘテロ原子を一つ有してもよいし、置換基にＹを一つ以上有してもよい；及び
Ｗは、独立して、Ｈ又はＣ_１－Ｃ_６０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖は鎖中に二重結合、三重結合、炭素環Ｚ、Ｏ、Ｓ、Ｎおよび／またはカルボニルから選ばれる部分構造、結合またはヘテロ原子を一つ以上有してもよいし、置換基としてＹを一つ以上有してもよい。
式１中、
Ｒ_１は、Ｃ_６－Ｃ_５０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖は鎖中に二重結合、三重結合、炭素環Ｚ、Ｏ、Ｎおよび／またはカルボニルから選ばれる部分構造、結合またはヘテロ原子を一つ以上有してもよいし、置換基としてＹを一つ以上有してもよい；
Ｒ_２及びＲ_４は、（ＣＨ_２）_ｍであり；
ｍは、０－４の整数であり；
Ｒ_３及びＲ_５は、－Ｈ、－Ｘ－、－ＸＷ、－ＸＰ（＝Ｘ）（－ＸＷ）_２からなる群から選択され；
Ｘは、Ｏ、Ｓからなる群から選択され；
Ｙは、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル、ヒドロキシ、カルボキシ、スルホン酸、アジド、チオールからなる群から選択され；
Ｚは、Ｃ_１－Ｃ_３０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖はアリールアルキル、ヘテロアリールアルキルからなる群から選択され、当該炭素鎖の鎖中に二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、Ｎ、スルフィニル、スルホニルおよび／またはカルボニルから選ばれる結合またはヘテロ原子を一つ有してもよいし、置換基にＹを一つ以上有してもよい；及び
Ｗは、独立して、Ｈ又はＣ_１－Ｃ_６０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖は鎖中に二重結合、三重結合、炭素環Ｚ、Ｏ、Ｓ、Ｎおよび／またはカルボニルから選ばれる部分構造、結合またはヘテロ原子を一つ以上有してもよいし、置換基としてＹを一つ以上有してもよい；
で表される、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。
式１中、
Ｒ_１は、Ｃ_６－Ｃ_５０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖は鎖中に二重結合、三重結合、炭素環Ｚ、Ｏ、Ｓおよび／またはカルボニルから選ばれる部分構造、結合またはヘテロ原子を一つ以上有してもよいし、置換基としてＹを一つ以上有してもよい；
Ｒ_２及びＲ_４は、（ＣＨ_２）_ｍであり；
ｍは、０－４の整数であり；
Ｒ_３及びＲ_５は、－Ｈ、－Ｘ－、－ＸＷ、－ＸＰ（＝Ｘ）（－ＸＷ）_２からなる群から選択され；
Ｘは、Ｏ、Ｓからなる群から選択され；
Ｙは、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル、ヒドロキシ、カルボキシ、アジドからなる群から選択され；
Ｚは、Ｃ_１－Ｃ_３０のアリールアルキルであって、当該アリールアルキルの鎖中に二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、Ｎ、スルフィニル、カルボニルから選ばれる結合またはヘテロ原子を一つ有してもよいし、置換基にＹを一つ以上有してもよい；及び
Ｗは、独立して、Ｈ又はＣ_１－Ｃ_５の直鎖または分岐のアルキル、アシル、アルコキシからなる群から選択され；
で表される、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。
（Ｒ）－１－アジド－１７－（（４－デシルフェニル）カルバモイル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１６－アザオクタデカ－１８－ニルリン酸、又は（Ｒ）－２－アミノ－３－（（４－デシルフェニル）アミノ）－３－オキソプロピル（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）リン酸である、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。
１－アジド－１７－（ヒドロキシメチル）－１７－（４－オクチルフェネチル）－１５－オキソ－３，６，９，１２－テトラオキサ－１６－アザオクタデカ－１８－ニルリン酸、又は２－アミノ－２－（ヒドロキシメチル）－４－（４－オクチルフェニル）ブチル（１４－アジド－３，６，９，１２－テトラオキサテトラデシル）リン酸である、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。
式１で特定される化合物若しくは式１で特定される化合物とリンカーとの結合体が、以下の構造を有する化合物群から選択された化合物である、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。
核酸分子と、式１で特定される化合物若しくは製薬上許容される塩が、リンカーを介して結合している、請求項１～６のいずれか１項に記載のリガンド結合核酸複合体。
リンカーが、切断可能な構造を有する切断性リンカーである、請求項７に記載のリガンド結合核酸複合体。
リンカーが、以下の構造を有するリンカーである、請求項８に記載のリガンド結合核酸複合体：

。
核酸分子が、標的遺伝子又はその転写産物に対して相補的である核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドからなるアンチセンス鎖を含む核酸分子と、標的タンパク質に対して特異的に結合する核酸塩基配列を有するアプタマーと、標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有するオリゴヌクレオチドからなるデコイから選択される核酸分子である、請求項１に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子がＡＤＯ、ＡＳＯ、ＨＤＯ、ＲＮＡｉから選択される核酸分子である、請求項１に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子のアンチセンス鎖が連続する１２～３０のヌクレオチドからなる、請求項１１に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子が標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有し８～３０のヌクレオチドからなるデコイである、請求項９に記載のリガンド結合核酸複合体。
前記オリゴヌクレオチドが、ＲＮＡからなるアンチセンス鎖と、前記アンチセンス鎖に相補的である核酸鎖からなるｓｉＲＮＡである、請求項１０に記載のリガンド結合核酸複合体。
標的遺伝子、その転写産物又はその翻訳産物の発現又は編集を調節する核酸分子と、Ｓ１Ｐ受容体に対するリガンドとが結合している、リガンド結合核酸複合体。
標的遺伝子、その転写産物又はその翻訳産物の発現又は編集を調節する核酸分子と、Ｓ１Ｐ受容体に対するリガンドとが、リンカーを介して結合している、請求項１５に記載のリガンド結合核酸複合体。
リンカーが、切断可能な構造を有する切断性リンカーである、請求項１６に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子が、標的遺伝子又はその転写産物に対して相補的である核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドからなるアンチセンス鎖を含む核酸分子と、標的タンパク質に対して特異的に結合する核酸塩基配列を有するアプタマーと、標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有するオリゴヌクレオチドからなるデコイから選択される核酸分子である、請求項１５に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子がＡＳＯ、ＨＤＯ、ＲＮＡｉから選択される核酸分子である、請求項１８に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子の核酸鎖は、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及び／又はヌクレオチドアナログを含む、請求項１５に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子のアンチセンス鎖のヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びヌクレオチドアナログの総数が、１２～３０ヌクレオチドからなる、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子がＨＤＯであり、ＨＤＯのアンチセンス鎖及び相補鎖のヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及びヌクレオチドアナログの総数が、それぞれ１２～３０ヌクレオチドからなる、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子が標的遺伝子又はその転写産物に対して相補的である核酸塩基配列を有するオリゴヌクレオチドからなるアンチセンス鎖と、当該アンチセンス鎖に相補的な核酸塩基配列を有する相補鎖を持つＨＤＯであり、ＨＤＯの相補鎖にＳ１Ｐ受容体に対するリガンドが結合している、請求項１５～１６のいずれか１項に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子が標的転写因子に対して相補的である核酸配列を有し８～３０ヌクレオチドからなるデコイである、請求項１５に記載のリガンド結合核酸複合体。
アンチセンス鎖は、ギャップマーであり、ヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含むギャップ領域と、その５’末側及び／又は３’末側に配置される１又は複数のヌクレオチドアナログ及び／又は修飾ヌクレオチドを含むウィング領域からなる、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
アンチセンス鎖は、非ギャップマーであり、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及び／又はヌクレオチドアナログを含む、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
相補鎖は、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチド及び／又はヌクレオチドアナログを含む、請求項２２に記載のリガンド結合核酸複合体。
相補鎖は、ヌクレオチド及び／又は修飾ヌクレオチドを含むセンター領域と、その５’末側及び／又は３’末側に配置される１又は複数のヌクレオチドアナログ及び／又は修飾ヌクレオチドを含むウィング領域からなる、請求項２７に記載のリガンド結合核酸複合体。
修飾ヌクレオチドは、２’－Ｏ－ＣＨ_３基又は２’－Ｏ－ＣＨ_２ＣＨ_２ＯＣＨ_３（ＭＯＥ）基を含むヌクレオチドである、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
ヌクレオチドアナログは、ＬＮＡ、ｃＥｔ－ＢＮＡ、アミドＢＮＡ（ＡｍＮＡ）及びｃＭＯＥ－ＢＮＡから独立して選択される架橋化ヌクレオチドを含む、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
ヌクレオチドアナログは、ＬＮＡ、ｃＥｔ－ＢＮＡ、アミドＢＮＡ（ＡｍＮＡ）及びｃＭＯＥ－ＢＮＡから独立して選択される架橋化ヌクレオチドを含む、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
ヌクレオチドアナログは、ＰＮＡ、ＧＮＡ、ＴＮＡ、ｔｃＤＮＡ、モルホリノ核酸、ＢＮＡから独立して選択される、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
核酸分子における少なくとも１つのヌクレオチド若しくは修飾ヌクレオチドがホスホロチオエート化若しくはボラノホスフェート化されている、請求項２０に記載のリガンド結合核酸複合体。
Ｒ_１は、炭素環Ｚを一つ以上有するＣ６－Ｃ５０の直鎖または分岐の炭素鎖であって、当該炭素鎖は鎖中に二重結合、三重結合、Ｏ、Ｓ、Ｎおよび／またはカルボニルから選ばれる部分構造、結合またはヘテロ原子を一つ以上有してもよいし、置換基としてＹを一つ以上有してもよい、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。
式１で特定される化合物はスフィンゴシン若しくはスフィンゴ脂質を含まない、請求項３４記載の化合物及び製薬上許容される塩。
Ｒ_１がアルキル鎖を含む場合、当該アルキル鎖中に二重結合を含まない、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。
Ｙは、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ニトロ、ハロゲン、ハロゲン化アルキル、カルボキシ、アジドからなる群から選択され、ヒドロキシを含まない、請求項１記載の化合物及び製薬上許容される塩。