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Description
ＯＲＦ１のＮ２２ドメイン中のＹＮＰＸ２ＤＸＧＸ２Ｎモチーフ（配列番号８２９）の二次構造も、それを取り囲む保存二次構造を有する。５～６ＡＡβ鎖で開始して、これは、モチーフの１位のチロシン（Ｙ）後に切断し、モチーフのほとんどは、８～９ＡＡランダムコイルとして末端アスパラギン（Ｎ）まで配列し、その地点で、７～８ＡＡの別のβ鎖が開始する。例示的なアネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ＯＲＦ１ Ｎ２２モチーフ配列のアラインメントを図４８に示す。このモチーフ中のチロシンはβ鎖を切断し、第２β鎖が、モチーフの末端アスパラギンで開始する。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
以下：
（Ｉ）以下：
（ａ）プロモータエレメントと、
（ｂ）外性エフェクターをコード化する核酸配列であって、前記核酸配列が、前記プロモータエレメントに作動可能に連結されており、前記外性エフェクターが、ＩＤＨ１阻害剤である、核酸配列と；
（ｃ）以下：
配列番号５４のヌクレオチド３２３～３９３の核酸配列、若しくはそれに対して少なくとも９０％同一の核酸配列を含む５’ＵＴＲドメインと、
を含む遺伝子エレメント；
（ＩＩ）アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ＯＲＦ１核酸によりコード化されるポリペプチド、例えばＯＲＦ１分子を含むタンパク質性外層
を含む合成アネロソームにおいて；
前記遺伝子エレメントが、前記タンパク質性外層内に閉じ込められており；且つ
前記合成アネロソームが、前記遺伝子エレメントをヒト細胞内に送達することができる、合成アネロソーム。
（項目２）
前記ＯＲＦ１分子が、配列番号２１７のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目１に記載の合成アネロソーム。
（項目３）
前記ＯＲＦ１分子が、配列番号５４のヌクレオチド６１２～２６１２によりコード化される、項目１～２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目４）
前記遺伝子エレメントが、配列番号５４のヌクレオチド２８６８～２９２９の核酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸配列を含む、項目１～３のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目５）
前記ＯＲＦ１分子が、表１６に列挙されるａｒｇリッチ領域、ゼリーロールドメイン、超可変ドメイン、Ｎ２２ドメイン、及び／又はＣ末端ドメインのアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列のうち１つ若しくは複数を含むアミノ酸配列を含む、項目１～４のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目６）
前記ＯＲＦ１分子が、配列番号５８のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸配列を含む、項目１～５のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目７）
表１６に列挙されるＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをさらに含む、項目１～６のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目８）
前記遺伝子エレメントが、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化する、項目１～７のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目９）
前記合成アネロソームが、表１６に列挙されるＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＴＡＩＰ、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含まない、項目１～８のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１０）
前記遺伝子エレメントが、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化しない、項目１～９のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１１）
前記ＯＲＦ１分子が、アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）（Ｘ ｎ は、各々独立して、任意のｎ個のアミノ酸の連続した配列である）を含む、項目１～１０のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１２）
前記ＯＲＦ１分子が、アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）とフランキングする第１β鎖及び第２β鎖をさらに含み、例えば、前記第１β鎖は、前記アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）のチロシン（Ｙ）残基を含み、且つ／又は前記第２β鎖は、前記アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）の第２アスパラギン（Ｎ）残基（ＮからＣ）を含む、項目１１に記載の合成アネロソーム。
（項目１３）
前記ＯＲＦ１分子が、Ｎ末端からＣ末端方向の順で、第１β鎖、第２β鎖、第１αヘリックス、第３β鎖、第４β鎖、第５β鎖、第２αヘリックス、第６β鎖、第７β鎖、第８β鎖、及び第９β鎖を含む、項目１～１２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１４）
前記遺伝子エレメントが、宿主細胞内でのローリングサークル複製により増幅されて、例えば、少なくとも８コピーを産生することができる、項目１～１３のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１５）
前記遺伝子エレメントが、一本鎖である、項目１～１４のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１６）
前記遺伝子エレメントが、環状である、項目１～１５のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１７）
前記遺伝子エレメントが、ＤＮＡである、項目１～１６のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１８）
前記遺伝子エレメントが、マイナス鎖ＤＮＡである、項目１～１７のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１９）
前記遺伝子エレメントが、前記ヒト細胞に進入する前記アネロソームの１０％、８％、６％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％、０．１％未満の頻度で組み込まれる、項目１～１８のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２０）
前記遺伝子エレメントが、表１６－１に示すコンセンサス５’ＵＴＲ核酸配列の配列を含む、項目１～１９のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２１）
前記遺伝子エレメントが、表１６－２に示すコンセンサスＧＣリッチ領域の配列を含む、項目１～２０のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２２）
前記遺伝子エレメントが、少なくとも１００ヌクレオチド長の配列を含み、これは、少なくとも７０％（例えば、約７０～１００％、７５～９５％、８０～９５％、８５～９５％、若しくは８５～９０％）の位置のＧ又はＣから構成される、項目１～２１のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２３）
前記遺伝子エレメントが、配列番号１２０の核酸配列を含む、項目１～２２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２４）
前記プロモータエレメントが、野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）に対して外性である、項目１～２３のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２５）
前記プロモータエレメントが、野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）に対して内在性である、項目１～２４のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２６）
前記外性エフェクターが、ｍｉＲＮＡを含み、宿主遺伝子の発現を低減する、項目１～２５のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２７）
前記遺伝子エレメントが、約１．５～２．０、２．０～２．５、２．５～３．０、３．０～３．５、３．１～３．６、３．２～３．７、３．３～３．８、３．４～３．９、３．５～４．０、４．０～４．５、又は４．５～５．０ｋｂの長さを有する、項目１～２６のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２８）
前記合成アネロソームが、ヒト細胞、例えば、免疫細胞、肝細胞、又は肺上皮細胞に感染することができる、項目１～２７のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２９）
実質的に非免疫原性であり、例えば、実施例４に記載の方法に従って検出される場合、例えば、検出可能な及び／又は不要な免疫応答を誘導しない、項目１～２８のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目３０）
前記実質的に非免疫原性のアネロソームが、被験者において、免疫応答が欠損する対照被験者における効力の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％である効力を有する、項目２９に記載の合成アネロソーム。
（項目３１）
少なくとも１０００の前記アネロソームの集団が、少なくとも約１００コピー（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は１０００コピー）の遺伝子エレメントを１つ若しくは複数のヒト細胞内に送達することができる、項目１～３０のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目３２）
以下：
（ｉ）以下：
（ａ）プロモータエレメントと、
（ｂ）外性エフェクターをコード化する核酸配列であって、前記核酸配列が、前記プロモータエレメントに作動可能に連結されており、前記外性エフェクターが、以下：
ＩＤＨ１阻害剤；
ＩＤＨ２阻害剤；
ＥＧＦＲ阻害剤；
ＬＲＰ５阻害剤；
ＤＫＫ２阻害剤；
ＤＰＰ－４阻害剤；
ＫＲＡＳ阻害剤；
好中球エラスターゼ阻害剤；
ＦＧＦＲ３アクチベータ、若しくは
ＨＴＴアクチベータ
から選択される細胞内治療薬である、核酸配列と；
（ｃ）以下：
配列番号５４のヌクレオチド３２３～３９３の核酸配列、若しくはそれに対して少なくとも８５％同一の核酸配列を含む５’ＵＴＲドメインと、
を含む遺伝子エレメント；並びに
（ｉｉ）ＯＲＦ１核酸によりコード化されるポリペプチド、例えば、ＯＲＦ１分子を含むタンパク質性外層
を含む合成アネロソームにおいて；
前記遺伝子エレメントが、前記タンパク質性外層内に閉じ込められており；且つ
前記合成アネロソームが、前記遺伝子エレメントをヒト細胞内に送達することができる、合成アネロソーム。
（項目３３）
項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目３４）
少なくとも１０ ３ 、１０ ４ 、１０５、１０ ６ 、１０ ７ 、１０ ８ 、又は１０ ９ の合成アネロソームを含む、項目３３に記載の医薬組成物。
（項目３５）
前記医薬組成物が、予め定めた比の粒子：感染性単位（例えば、＜３００：１、＜２００：１、＜１００：１、若しくは＜５０：１）を有する、項目３３又は３４に記載の医薬組成物。
（項目３６）
以下：
（ｉ）項目１～３５のいずれか１項に記載の合成アネロソームの前記遺伝子エレメントの配列を含む第１核酸（例えば、二本鎖又は一本鎖環状ＤＮＡ）、及び
（ｉｉ）例えば、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸配列
を含む、反応混合物。
（項目３７）
前記第１核酸及び第２核酸が、同じ核酸分子中にある、項目３６に記載の反応混合物。
（項目３８）
前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子である、項目３６に記載の反応混合物。
（項目３９）
前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子であり、且つ、前記第２核酸が、二本鎖環状ＤＮＡとして提供される、項目３６に記載の反応混合物。
（項目４０）
前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子であり、且つ、前記第１及び第２核酸が、二本鎖環状ＤＮＡとして提供される、項目３６に記載の反応混合物。
（項目４１）
前記第２核酸配列が、ヘルパー細胞又はヘルパーウイルスに含まれる、項目３８に記載の反応混合物。
（項目４２）
合成アネロソームを作製する方法であって、前記方法が、以下：
ａ）以下：
（ｉ）項目１～４１のいずれか１項に記載の合成アネロソームの遺伝子エレメントの前記核酸配列を含む第１核酸分子と、
（ｉｉ）例えば、表１６のいずれかに列挙される、ＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸分子と、
を含む宿主細胞を用意するステップ；及び
ｂ）前記合成アネロソームを作製するのに好適な条件下で前記宿主細胞をインキュベートするステップを含み、
それによって前記合成アネロソームを作製する方法。
（項目４３）
ステップ（ａ）の前に、前記第１核酸分子及び／又は前記第２核酸分子を前記宿主細胞に導入するステップをさらに含む、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記第２核酸分子が、前記第１核酸分子の前に、それと同時に、又はその後に前記宿主細胞に導入される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記第２核酸分子が、前記宿主細胞のゲノム中に組み込まれる、項目４２又は４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記第２核酸分子が、ヘルパー（例えば、ヘルパープラスミド又はヘルパーウイルスのゲノム）である、項目４２～４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
第２核酸分子が、アミノ酸配列［Ｗ／Ｆ］Ｘ ７ ＨＸ ３ ＣＸ １ ＣＸ ５ Ｈ（配列番号９４９）（Ｘ ｎ は、任意のｎ個のアミノ酸の連続した配列である）を含むＯＲＦ２分子をコード化する、項目４２～４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
合成アネロソーム調製物を製造する方法であって、前記方法が、以下：
ａ）項目１～３２のいずれか１項に記載の複数の合成アネロソーム、項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物、又は項目３６～４１のいずれか１項に記載の反応混合物を用意するステップ；
ｂ）任意選択で、以下：本明細書に記載の混入物、光学密度測定値（例えば、ＯＤ２６０）、粒子数（例えば、ＨＰＬＣにより）、感染力（例えば、粒子：感染単位比）のうち１つ又は複数について前記複数を評価するステップ；並びに
ｃ）例えば、（ｂ）のパラメータの１つ又は複数が、指定閾値を満たす場合、例えば、被験者への投与に好適な医薬組成物として、前記複数の合成アネロソームを製剤化するステップ
を含む、方法。
（項目４９）
以下：
（ｉ）項目１～４８のいずれか１項に記載の合成アネロソームの遺伝子エレメントの前記核酸配列を含む第１核酸分子、及び
（ｉｉ）任意選択で、表１６のいずれかに列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸分子；
を含む宿主細胞。
（項目５０）
外性エフェクター（例えば、治療用外性エフェクター）を哺乳動物細胞に送達する方法において、以下：
（ａ）項目１～４９のいずれか１項に記載の合成アネロソームを用意するステップ；及び
（ｂ）哺乳動物細胞を前記合成アネロソームと接触させるステップ
を含み；
ここで、前記合成アネロソームは、前記遺伝子エレメントを前記哺乳動物細胞に送達することができ；
任意選択で、前記遺伝子エレメントを宿主細胞中の前記タンパク質性外層内に閉じ込めるのに好適な条件下で、前記遺伝子エレメントを前記宿主細胞に導入することにより、前記合成アネロソームが生産され；
これによって、前記治療用外性エフェクターを前記哺乳動物細胞に送達する、方法。
（項目５１）
前記遺伝子エレメントの宿主細胞への送達を目的とする、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
（項目５２）
被験者の疾患又は障害の治療を目的とする、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
（項目５３）
前記疾患又は障害が、癌である、項目５２に記載の使用。
（項目５４）
被験者の疾患又は障害の治療に使用するための、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
（項目５５）
被験者の疾患又は障害を治療する方法であって、前記方法が、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記被験者に投与するステップを含み、ここで、前記疾患又は障害が、癌である、方法。
（項目５６）
被験者の疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、任意選択で、前記疾患又は障害が癌である、使用。
特定の実施形態では、例えば、以下が提供される：
（項目１）
以下：
（Ｉ）以下：
（ａ）プロモータエレメントと、
（ｂ）外性エフェクターをコード化する核酸配列であって、前記核酸配列が、前記プロモータエレメントに作動可能に連結されており、前記外性エフェクターが、ＩＤＨ１阻害剤である、核酸配列と；
（ｃ）以下：
配列番号５４のヌクレオチド３２３～３９３の核酸配列、若しくはそれに対して少なくとも９０％同一の核酸配列を含む５’ＵＴＲドメインと、
を含む遺伝子エレメント；
（ＩＩ）アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ＯＲＦ１核酸によりコード化されるポリペプチド、例えばＯＲＦ１分子を含むタンパク質性外層
を含む合成アネロソームにおいて；
前記遺伝子エレメントが、前記タンパク質性外層内に閉じ込められており；且つ
前記合成アネロソームが、前記遺伝子エレメントをヒト細胞内に送達することができる、合成アネロソーム。
（項目２）
前記ＯＲＦ１分子が、配列番号２１７のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、項目１に記載の合成アネロソーム。
（項目３）
前記ＯＲＦ１分子が、配列番号５４のヌクレオチド６１２～２６１２によりコード化される、項目１～２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目４）
前記遺伝子エレメントが、配列番号５４のヌクレオチド２８６８～２９２９の核酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸配列を含む、項目１～３のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目５）
前記ＯＲＦ１分子が、表１６に列挙されるａｒｇリッチ領域、ゼリーロールドメイン、超可変ドメイン、Ｎ２２ドメイン、及び／又はＣ末端ドメインのアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列のうち１つ若しくは複数を含むアミノ酸配列を含む、項目１～４のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目６）
前記ＯＲＦ１分子が、配列番号５８のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸配列を含む、項目１～５のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目７）
表１６に列挙されるＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをさらに含む、項目１～６のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目８）
前記遺伝子エレメントが、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化する、項目１～７のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目９）
前記合成アネロソームが、表１６に列挙されるＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＴＡＩＰ、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含まない、項目１～８のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１０）
前記遺伝子エレメントが、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化しない、項目１～９のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１１）
前記ＯＲＦ１分子が、アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）（Ｘ ｎ は、各々独立して、任意のｎ個のアミノ酸の連続した配列である）を含む、項目１～１０のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１２）
前記ＯＲＦ１分子が、アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）とフランキングする第１β鎖及び第２β鎖をさらに含み、例えば、前記第１β鎖は、前記アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）のチロシン（Ｙ）残基を含み、且つ／又は前記第２β鎖は、前記アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）の第２アスパラギン（Ｎ）残基（ＮからＣ）を含む、項目１１に記載の合成アネロソーム。
（項目１３）
前記ＯＲＦ１分子が、Ｎ末端からＣ末端方向の順で、第１β鎖、第２β鎖、第１αヘリックス、第３β鎖、第４β鎖、第５β鎖、第２αヘリックス、第６β鎖、第７β鎖、第８β鎖、及び第９β鎖を含む、項目１～１２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１４）
前記遺伝子エレメントが、宿主細胞内でのローリングサークル複製により増幅されて、例えば、少なくとも８コピーを産生することができる、項目１～１３のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１５）
前記遺伝子エレメントが、一本鎖である、項目１～１４のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１６）
前記遺伝子エレメントが、環状である、項目１～１５のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１７）
前記遺伝子エレメントが、ＤＮＡである、項目１～１６のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１８）
前記遺伝子エレメントが、マイナス鎖ＤＮＡである、項目１～１７のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目１９）
前記遺伝子エレメントが、前記ヒト細胞に進入する前記アネロソームの１０％、８％、６％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％、０．１％未満の頻度で組み込まれる、項目１～１８のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２０）
前記遺伝子エレメントが、表１６－１に示すコンセンサス５’ＵＴＲ核酸配列の配列を含む、項目１～１９のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２１）
前記遺伝子エレメントが、表１６－２に示すコンセンサスＧＣリッチ領域の配列を含む、項目１～２０のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２２）
前記遺伝子エレメントが、少なくとも１００ヌクレオチド長の配列を含み、これは、少なくとも７０％（例えば、約７０～１００％、７５～９５％、８０～９５％、８５～９５％、若しくは８５～９０％）の位置のＧ又はＣから構成される、項目１～２１のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２３）
前記遺伝子エレメントが、配列番号１２０の核酸配列を含む、項目１～２２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２４）
前記プロモータエレメントが、野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）に対して外性である、項目１～２３のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２５）
前記プロモータエレメントが、野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）に対して内在性である、項目１～２４のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２６）
前記外性エフェクターが、ｍｉＲＮＡを含み、宿主遺伝子の発現を低減する、項目１～２５のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２７）
前記遺伝子エレメントが、約１．５～２．０、２．０～２．５、２．５～３．０、３．０～３．５、３．１～３．６、３．２～３．７、３．３～３．８、３．４～３．９、３．５～４．０、４．０～４．５、又は４．５～５．０ｋｂの長さを有する、項目１～２６のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２８）
前記合成アネロソームが、ヒト細胞、例えば、免疫細胞、肝細胞、又は肺上皮細胞に感染することができる、項目１～２７のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目２９）
実質的に非免疫原性であり、例えば、実施例４に記載の方法に従って検出される場合、例えば、検出可能な及び／又は不要な免疫応答を誘導しない、項目１～２８のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目３０）
前記実質的に非免疫原性のアネロソームが、被験者において、免疫応答が欠損する対照被験者における効力の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％である効力を有する、項目２９に記載の合成アネロソーム。
（項目３１）
少なくとも１０００の前記アネロソームの集団が、少なくとも約１００コピー（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は１０００コピー）の遺伝子エレメントを１つ若しくは複数のヒト細胞内に送達することができる、項目１～３０のいずれか１項に記載の合成アネロソーム。
（項目３２）
以下：
（ｉ）以下：
（ａ）プロモータエレメントと、
（ｂ）外性エフェクターをコード化する核酸配列であって、前記核酸配列が、前記プロモータエレメントに作動可能に連結されており、前記外性エフェクターが、以下：
ＩＤＨ１阻害剤；
ＩＤＨ２阻害剤；
ＥＧＦＲ阻害剤；
ＬＲＰ５阻害剤；
ＤＫＫ２阻害剤；
ＤＰＰ－４阻害剤；
ＫＲＡＳ阻害剤；
好中球エラスターゼ阻害剤；
ＦＧＦＲ３アクチベータ、若しくは
ＨＴＴアクチベータ
から選択される細胞内治療薬である、核酸配列と；
（ｃ）以下：
配列番号５４のヌクレオチド３２３～３９３の核酸配列、若しくはそれに対して少なくとも８５％同一の核酸配列を含む５’ＵＴＲドメインと、
を含む遺伝子エレメント；並びに
（ｉｉ）ＯＲＦ１核酸によりコード化されるポリペプチド、例えば、ＯＲＦ１分子を含むタンパク質性外層
を含む合成アネロソームにおいて；
前記遺伝子エレメントが、前記タンパク質性外層内に閉じ込められており；且つ
前記合成アネロソームが、前記遺伝子エレメントをヒト細胞内に送達することができる、合成アネロソーム。
（項目３３）
項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
（項目３４）
少なくとも１０ ３ 、１０ ４ 、１０５、１０ ６ 、１０ ７ 、１０ ８ 、又は１０ ９ の合成アネロソームを含む、項目３３に記載の医薬組成物。
（項目３５）
前記医薬組成物が、予め定めた比の粒子：感染性単位（例えば、＜３００：１、＜２００：１、＜１００：１、若しくは＜５０：１）を有する、項目３３又は３４に記載の医薬組成物。
（項目３６）
以下：
（ｉ）項目１～３５のいずれか１項に記載の合成アネロソームの前記遺伝子エレメントの配列を含む第１核酸（例えば、二本鎖又は一本鎖環状ＤＮＡ）、及び
（ｉｉ）例えば、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸配列
を含む、反応混合物。
（項目３７）
前記第１核酸及び第２核酸が、同じ核酸分子中にある、項目３６に記載の反応混合物。
（項目３８）
前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子である、項目３６に記載の反応混合物。
（項目３９）
前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子であり、且つ、前記第２核酸が、二本鎖環状ＤＮＡとして提供される、項目３６に記載の反応混合物。
（項目４０）
前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子であり、且つ、前記第１及び第２核酸が、二本鎖環状ＤＮＡとして提供される、項目３６に記載の反応混合物。
（項目４１）
前記第２核酸配列が、ヘルパー細胞又はヘルパーウイルスに含まれる、項目３８に記載の反応混合物。
（項目４２）
合成アネロソームを作製する方法であって、前記方法が、以下：
ａ）以下：
（ｉ）項目１～４１のいずれか１項に記載の合成アネロソームの遺伝子エレメントの前記核酸配列を含む第１核酸分子と、
（ｉｉ）例えば、表１６のいずれかに列挙される、ＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸分子と、
を含む宿主細胞を用意するステップ；及び
ｂ）前記合成アネロソームを作製するのに好適な条件下で前記宿主細胞をインキュベートするステップを含み、
それによって前記合成アネロソームを作製する方法。
（項目４３）
ステップ（ａ）の前に、前記第１核酸分子及び／又は前記第２核酸分子を前記宿主細胞に導入するステップをさらに含む、項目４２に記載の方法。
（項目４４）
前記第２核酸分子が、前記第１核酸分子の前に、それと同時に、又はその後に前記宿主細胞に導入される、項目４３に記載の方法。
（項目４５）
前記第２核酸分子が、前記宿主細胞のゲノム中に組み込まれる、項目４２又は４３のいずれか１項に記載の方法。
（項目４６）
前記第２核酸分子が、ヘルパー（例えば、ヘルパープラスミド又はヘルパーウイルスのゲノム）である、項目４２～４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４７）
第２核酸分子が、アミノ酸配列［Ｗ／Ｆ］Ｘ ７ ＨＸ ３ ＣＸ １ ＣＸ ５ Ｈ（配列番号９４９）（Ｘ ｎ は、任意のｎ個のアミノ酸の連続した配列である）を含むＯＲＦ２分子をコード化する、項目４２～４５のいずれか１項に記載の方法。
（項目４８）
合成アネロソーム調製物を製造する方法であって、前記方法が、以下：
ａ）項目１～３２のいずれか１項に記載の複数の合成アネロソーム、項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物、又は項目３６～４１のいずれか１項に記載の反応混合物を用意するステップ；
ｂ）任意選択で、以下：本明細書に記載の混入物、光学密度測定値（例えば、ＯＤ２６０）、粒子数（例えば、ＨＰＬＣにより）、感染力（例えば、粒子：感染単位比）のうち１つ又は複数について前記複数を評価するステップ；並びに
ｃ）例えば、（ｂ）のパラメータの１つ又は複数が、指定閾値を満たす場合、例えば、被験者への投与に好適な医薬組成物として、前記複数の合成アネロソームを製剤化するステップ
を含む、方法。
（項目４９）
以下：
（ｉ）項目１～４８のいずれか１項に記載の合成アネロソームの遺伝子エレメントの前記核酸配列を含む第１核酸分子、及び
（ｉｉ）任意選択で、表１６のいずれかに列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸分子；
を含む宿主細胞。
（項目５０）
外性エフェクター（例えば、治療用外性エフェクター）を哺乳動物細胞に送達する方法において、以下：
（ａ）項目１～４９のいずれか１項に記載の合成アネロソームを用意するステップ；及び
（ｂ）哺乳動物細胞を前記合成アネロソームと接触させるステップ
を含み；
ここで、前記合成アネロソームは、前記遺伝子エレメントを前記哺乳動物細胞に送達することができ；
任意選択で、前記遺伝子エレメントを宿主細胞中の前記タンパク質性外層内に閉じ込めるのに好適な条件下で、前記遺伝子エレメントを前記宿主細胞に導入することにより、前記合成アネロソームが生産され；
これによって、前記治療用外性エフェクターを前記哺乳動物細胞に送達する、方法。
（項目５１）
前記遺伝子エレメントの宿主細胞への送達を目的とする、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
（項目５２）
被験者の疾患又は障害の治療を目的とする、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用。
（項目５３）
前記疾患又は障害が、癌である、項目５２に記載の使用。
（項目５４）
被験者の疾患又は障害の治療に使用するための、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物。
（項目５５）
被験者の疾患又は障害を治療する方法であって、前記方法が、項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物を前記被験者に投与するステップを含み、ここで、前記疾患又は障害が、癌である、方法。
（項目５６）
被験者の疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における項目１～３２のいずれか１項に記載の合成アネロソーム又は項目３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物の使用であって、任意選択で、前記疾患又は障害が癌である、使用。
Claims (22)
- 以下：
（Ｉ）以下：
（ａ）プロモータエレメントと、
（ｂ）外性エフェクターをコード化する核酸配列であって、前記核酸配列が、前記プロモータエレメントに作動可能に連結されており、前記外性エフェクターが、細胞内ポリペプチド又は細胞内核酸である、核酸配列と；
（ｃ）野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）の５’ＵＴＲ保存ドメインに対して、少なくとも７５％の配列同一性を有する配列と
を含む遺伝子エレメント又はその相補体；
（ＩＩ）アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ＯＲＦ１核酸によりコード化されるポリペプチド、例えばＯＲＦ１分子を含むタンパク質性外層
を含む合成粒子において；
前記遺伝子エレメント又は前記その相補体が、前記タンパク質性外層内に閉じ込められており；且つ
前記合成粒子が、前記遺伝子エレメント又は前記その相補体をヒト細胞内に送達することができる、合成粒子。 - アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ＯＲＦ１核酸によりコード化される前記ポリペプチドが、ＯＲＦ１分子を含み、任意選択で：
（ｉ）前記ＯＲＦ１分子が、配列番号２１７のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む；
（ｉｉ）前記ＯＲＦ１分子が、タンパク質分解プロセシングされたものである；
（ｉｉｉ）前記ＯＲＦ１分子が、配列番号５４のヌクレオチド６１２～２６１２によりコード化される；
（ｉｖ）前記ＯＲＦ１分子が、表１６に列挙されるａｒｇリッチ領域、ゼリーロールドメイン、超可変ドメイン、Ｎ２２ドメイン、及び／又はＣ末端ドメインのアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列のうち１つ若しくは複数を含むアミノ酸配列を含む；且つ／或いは
（ｖ）前記ＯＲＦ１分子が、配列番号５８のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸配列を含む、請求項１に記載の合成粒子。 - 前記遺伝子エレメント又は前記その相補体が：
（ｉ）配列番号５４のヌクレオチド２８６８～２９２９の核酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有する核酸配列；並びに／或いは
（ｉｉ）配列番号５４のヌクレオチド３２３～３９３の核酸配列、若しくはそれに対して少なくとも９０％同一の核酸配列を含む５’ＵＴＲドメイン
を含む、請求項１又は２に記載の合成粒子。 - （ｉ）前記合成粒子が、表１６に列挙されるＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドをさらに含む；且つ／或いは
（ｉｉ）前記遺伝子エレメント又は前記その相補体が、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化する、請求項１～３のいずれか１項に記載の合成粒子。 - （ｉ）前記合成粒子が、表１６に列挙されるＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＴＡＩＰ、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを含まない；且つ／或いは
（ｉｉ）前記遺伝子エレメント又は前記その相補体が、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２のアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列をコード化しない、請求項１～３のいずれか１項に記載の合成粒子。 - （ｉ）前記ＯＲＦ１分子が、アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）（Ｘ ｎ は、各々独立して、任意のｎ個のアミノ酸の連続した配列である）を含む；
（ｉｉ）前記ＯＲＦ１分子が、アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）とフランキングする第１β鎖及び第２β鎖をさらに含み、例えば、前記第１β鎖は、前記アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）のチロシン（Ｙ）残基を含み、且つ／又は前記第２β鎖は、前記アミノ酸配列ＹＮＰＸ ２ ＤＸＧＸ ２ Ｎ（配列番号８２９）の第２アスパラギン（Ｎ）残基（ＮからＣ）を含む；
（ｉｉｉ）前記ＯＲＦ１分子が、Ｎ末端からＣ末端方向の順で、第１β鎖、第２β鎖、第１αヘリックス、第３β鎖、第４β鎖、第５β鎖、第２αヘリックス、第６β鎖、第７β鎖、第８β鎖、及び第９β鎖を含む；且つ／或いは
（ｉｖ）前記外性エフェクターが、ｍｉＲＮＡを含み、宿主遺伝子の発現を低減する、請求項１～５のいずれか１項に記載の合成粒子。 - 前記遺伝子エレメント又は前記その相補体が：
（ｉ）宿主細胞内でのローリングサークル複製により増幅されて、例えば、少なくとも８コピーを産生することができる；
（ｉｉ）一本鎖である；
（ｉｉｉ）環状である；
（ｉｖ）ＤＮＡである；
（ｖ）マイナス鎖ＤＮＡである；
（ｖｉ）前記ヒト細胞に進入する前記粒子の１０％、８％、６％、４％、３％、２％、１％、０．５％、０．２％、０．１％未満の頻度で組み込まれる；
（ｖｉｉ）表３８に示すコンセンサス５’ＵＴＲ核酸配列の配列を含む；
（ｖｉｉｉ）表３９に示すコンセンサスＧＣリッチ領域の配列を含む；
（ｉｘ）少なくとも１００ヌクレオチド長の配列を含み、これは、少なくとも７０％（例えば、約７０～１００％、７５～９５％、８０～９５％、８５～９５％、若しくは８５～９０％）の位置のＧ又はＣから構成される；
（ｘ）配列番号１２０の核酸配列を含む；且つ／或いは
（ｘｉ）約１．５～２．０、２．０～２．５、２．５～３．０、３．０～３．５、３．１～３．６、３．２～３．７、３．３～３．８、３．４～３．９、３．５～４．０、４．０～４．５、又は４．５～５．０ｋｂの長さを有する、請求項１～６のいずれか１項に記載の合成粒子。 - 前記プロモータエレメントが、野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）に対して外性であるか、又は前記プロモータエレメントが、野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）に対して内在性である、請求項１～７のいずれか１項に記載の合成粒子。
- （ｉ）前記合成粒子が、ヒト細胞、例えば、免疫細胞、肝細胞、又は肺上皮細胞に感染することができる；
（ｉｉ）前記合成粒子が、実質的に非免疫原性であり、例えば、実施例４に記載の方法に従って検出される場合、例えば、検出可能な及び／又は不要な免疫応答を誘導せず、任意選択で、前記実質的に非免疫原性の粒子が、被験者において、免疫応答が欠損する対照被験者における効力の少なくとも約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、又は１００％である効力を有する；
（ｉｉｉ）少なくとも１０００の前記粒子の集団が、少なくとも約１００コピー（例えば、少なくとも１、２、３、４、５、１０、２０、３０、４０、５０、１００、２００、３００、４００、５００、６００、７００、８００、９００、又は１０００コピー）の遺伝子エレメント又はその相補体を１つ若しくは複数のヒト細胞内に送達することができる；
（ｖｉ）前記細胞内ポリペプチド又は細胞内核酸が、以下：
ＩＤＨ１阻害剤；
ＩＤＨ２阻害剤；
ＥＧＦＲ阻害剤；
ＬＲＰ５阻害剤；
ＤＫＫ２阻害剤；
ＤＰＰ－４阻害剤；
ＫＲＡＳ阻害剤；
好中球エラスターゼ阻害剤；
ＦＧＦＲ３アクチベータ、若しくは
ＨＴＴアクチベータ
を含む；且つ／或いは
（ｖ）前記外性エフェクターが、以下：
（ｉ）ナノ－ルシフェラーゼ以外の細胞内ポリペプチド、又は
（ｉｉ）ｎ－ｍｙｃ相互作用タンパク質に対するｍｉＲ－１２４、ｍｉＲ－５１８、ｍｉＲ－６２５、ｍｉＲＮＡ以外の細胞内核酸（例えば、ｍｉＲＮＡ若しくはｓｉＲＮＡ）、又は野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）、例えば、本明細書に記載のように、例えば、ＴＴＶ－ｔｔｈ８アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）の前記内在性ｍｉＲＮＡを含む、請求項１～８のいずれか１項に記載の合成粒子。 - 以下：
（ｉ）以下：
（ａ）プロモータエレメントと、
（ｂ）外性エフェクターをコード化する核酸配列であって、前記核酸配列が、前記プロモータエレメントに作動可能に連結されており、前記外性エフェクターが、以下：
ＩＤＨ１阻害剤；
ＩＤＨ２阻害剤；
ＥＧＦＲ阻害剤；
ＬＲＰ５阻害剤；
ＤＫＫ２阻害剤；
ＤＰＰ－４阻害剤；
ＫＲＡＳ阻害剤；
好中球エラスターゼ阻害剤；
ＦＧＦＲ３アクチベータ、若しくは
ＨＴＴアクチベータ
から選択される細胞内治療薬ポリペプチド若しくは細胞内治療薬核酸である、核酸配列と；
（ｃ）野生型アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）の５’ＵＴＲ保存ドメインに対して、少なくとも７５％の配列同一性を有する配列と、
を含む遺伝子エレメント又はその相補体；並びに
（ｉｉ）アネロウイルス（Ａｎｅｌｌｏｖｉｒｕｓ）ＯＲＦ１核酸によりコード化されるポリペプチド、例えば、ＯＲＦ１分子を含むタンパク質性外層
を含む合成粒子において；
前記遺伝子エレメント又は前記その相補体が、前記タンパク質性外層内に閉じ込められており；且つ
前記合成粒子が、前記遺伝子エレメント又は前記その相補体をヒト細胞内に送達することができる、合成粒子。 - 前記遺伝子エレメント又は前記その相補体が、配列番号５４のヌクレオチド３２３～３９３の核酸配列、若しくはそれに対して少なくとも８５％同一の核酸配列を含む５’ＵＴＲドメインを含む、請求項１０に記載の合成粒子。
- 請求項１～１１のいずれか１項に記載の合成粒子、及び薬学的に許容される担体又は賦形剤を含む、医薬組成物。
- （ｉ）前記医薬組成物が、少なくとも１０ ３ 、１０ ４ 、１０５、１０ ６ 、１０ ７ 、１０ ８ 、又は１０ ９ の合成粒子を含む；且つ／或いは
（ｉｉ）前記医薬組成物が、予め定めた比の粒子：感染性単位（例えば、＜３００：１、＜２００：１、＜１００：１、若しくは＜５０：１）を有する、請求項１２に記載の医薬組成物。 - 以下：
（ｉ）請求項１～１１のいずれか１項に記載の合成粒子の前記遺伝子エレメント又は前記その相補体の配列を含む第１核酸（例えば、二本鎖又は一本鎖環状ＤＮＡ）、及び
（ｉｉ）例えば、表１６に列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸配列
を含む、反応混合物。 - （ｉ）前記第１核酸及び第２核酸が、同じ核酸分子中にある；
（ｉｉ）前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子であり、任意選択で、前記第２核酸配列が、ヘルパー細胞又はヘルパーウイルスに含まれる；
（ｉｉｉ）前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子であり、且つ、前記第２核酸が、二本鎖環状ＤＮＡとして提供される；又は
（ｉｖ）前記第１核酸及び第２核酸が、異なる核酸分子であり、且つ、前記第１及び第２核酸が、二本鎖環状ＤＮＡとして提供される、請求項１４に記載の反応混合物。 - 合成粒子を作製する方法であって、前記方法が、以下：
ａ）以下：
（ｉ）請求項１～１１のいずれか１項に記載の合成粒子の遺伝子エレメント又はその相補体の前記核酸配列を含む第１核酸分子と、
（ｉｉ）例えば、表１６のいずれかに列挙される、ＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸分子と、
を含む宿主細胞を用意するステップ；及び
ｂ）前記合成粒子を作製するのに好適な条件下で前記宿主細胞をインキュベートするステップを含み、
それによって前記合成粒子を作製する方法。 - （ｉ）前記方法が、ステップ（ａ）の前に、前記第１核酸分子及び／又は前記第２核酸分子を前記宿主細胞に導入するステップをさらに含み、任意選択で、前記第２核酸分子が、前記第１核酸分子の前に、それと同時に、又はその後に前記宿主細胞に導入される；
（ｉｉ）前記第２核酸分子が、前記宿主細胞のゲノム中に組み込まれる；
（ｉｉｉ）前記第２核酸分子が、ヘルパー（例えば、ヘルパープラスミド又はヘルパーウイルスのゲノム）である；且つ／或いは
（ｉｖ）前記第２核酸分子が、アミノ酸配列［Ｗ／Ｆ］Ｘ ７ ＨＸ ３ ＣＸ １ ＣＸ ５ Ｈ（配列番号９４９）（Ｘ ｎ は、任意のｎ個のアミノ酸の連続した配列である）を含むＯＲＦ２分子をコード化する、請求項１６に記載の方法。 - 合成粒子調製物を製造する方法であって、前記方法が、以下：
ａ）請求項１～３２のいずれか１項に記載の複数の合成粒子、請求項３３～３５のいずれか１項に記載の医薬組成物、又は請求項３６～４１のいずれか１項に記載の反応混合物を用意するステップ；
ｂ）任意選択で、以下：本明細書に記載の混入物、光学密度測定値（例えば、ＯＤ２６０）、粒子数（例えば、ＨＰＬＣにより）、感染力（例えば、粒子：感染単位比）のうち１つ又は複数について前記複数を評価するステップ；並びに
ｃ）例えば、（ｂ）のパラメータの１つ又は複数が、指定閾値を満たす場合、例えば、被験者への投与に好適な医薬組成物として、前記複数の合成粒子を製剤化するステップ
を含む、方法。 - 以下：
（ｉ）請求項１～１１のいずれか１項に記載の合成粒子の遺伝子エレメント又はその相補体の前記核酸配列を含む第１核酸分子、及び
（ｉｉ）任意選択で、表１６のいずれかに列挙されるＯＲＦ１、ＯＲＦ２、ＯＲＦ２／２、ＯＲＦ２／３、ＯＲＦ１／１、若しくはＯＲＦ１／２から選択されるアミノ酸配列、又はそれに対して少なくとも８５％の配列同一性を有するアミノ酸配列の１つ若しくは複数をコード化する第２核酸分子；
を含む宿主細胞。 - 外性エフェクター（例えば、治療用外性エフェクター）を哺乳動物細胞に送達するエクスビボの方法において、前記方法が、以下：
（ａ）請求項１～１１のいずれか１項に記載の合成粒子を用意するステップ；及び
（ｂ）哺乳動物細胞を前記合成粒子と接触させるステップ
を含み；
ここで、前記合成粒子は、前記遺伝子エレメント又は前記その相補体を前記哺乳動物細胞に送達することができ；
任意選択で、前記遺伝子エレメント又は前記その相補体を宿主細胞中の前記タンパク質性外層内に閉じ込めるのに好適な条件下で、前記遺伝子エレメント又は前記その相補体を前記宿主細胞に導入することにより、前記合成粒子が生産され；
これによって、前記治療用外性エフェクターを前記哺乳動物細胞に送達する、方法。 - 被験者の疾患又は障害の治療に使用するための組成物又は医薬組成物であって、請求項１～１１のいずれか１項に記載の合成粒子を含む組成物又は請求項１２若しくは１３に記載の医薬組成物であり、任意選択で、前記疾患又は障害が、癌である、組成物又は医薬組成物。
- 被験者の疾患又は障害の治療のための薬剤の製造における請求項１～１１のいずれか１項に記載の合成粒子又は請求項１２若しくは１３に記載の医薬組成物の使用であって、任意選択で、前記疾患又は障害が癌である、使用。
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