JPWO2020026434A1

JPWO2020026434A1 - 細胞検査装置及び細胞検査方法

Info

Publication number: JPWO2020026434A1
Application number: JP2020534016A
Authority: JP
Inventors: 三日市　高康; 高康三日市
Original assignee: Olympus Corp
Current assignee: Olympus Corp
Priority date: 2018-08-03
Filing date: 2018-08-03
Publication date: 2021-08-05
Also published as: CN112513631A; WO2020026434A1; US20210156841A1

Abstract

細胞検査方法は、前記光源と観察部との間に、細胞を捕捉するフィルタを内部空間に備えたチャンバを配置する準備工程と、フィルタの表面側からチャンバの内部空間に、細胞浮遊液を注入する第１注入工程と、フィルタの裏面側からチャンバの外に、細胞浮遊液を排出する第１排出工程と、フィルタの表面側からチャンバの内部空間に、細胞を染色する染色液を注入する第２注入工程と、フィルタの裏面側からチャンバの外に、染色液を排出する第２排出工程と、フィルタを押圧することにより、フィルタを平坦にする平坦工程と、光源で照明しながら平坦になったフィルタ上の細胞を観察部により観察する観察工程と、を有する。

Description

本発明は、細胞検査装置及び細胞検査方法に関する。

癌などの診断のために、組織の一部を採取して病理診断を行う生検は広く行われている。低侵襲な生検として、経皮的な穿刺吸引針生検や内視鏡・超音波内視鏡を用いた鉗子・穿刺吸引針による生検(ＥＢＵＳ-ＧＳ、ＥＢＵＳ-ＴＢＮＡ、ＥＵＳ-ＦＮＡ)が行われているが、超音波画像により間接的に患部にアクセスするため、確実に目的の組織が採取できるとは限らない。そこで一部では採取した検体が目的の検体かをその場で評価する迅速細胞診断（Ｒａｐｉｄｏｎ - ｓｉｔｅｅｖａｌｕａｔｉｏｎ，以下、ＲＯＳＥと称す）が行われている。一般的なROSEは、病理医または細胞検査士がベッドサイドで採取した検体の一部をスライドグラスに分取し、擦り合わせ法(スメア法)によりスライドに薄く広げて固定し、染色液にて細胞を染色し、顕微鏡にて細胞を観察して目的の検体が採取されたか否かを評価する。ＲＯＳＥにより、細胞を採取した場所で、必要な細胞が採取されているか否かを判断することができる。ＲＯＳＥを用いない場合、穿刺針等で採取した細胞は、細胞を採取した場所とは別の検査場所に搬送されて、時間を置いて病理診断などの検査が行われる。その結果、必要な細胞が採取されていなかった場合でも、既に生検は終了している。ＲＯＳＥを用いた検査では、細胞を採取した現場で必要な細胞が採取されたか否かを判断できるため、容易に細胞の採取を追加できる。したがって、ＲＯＳＥは、穿刺回数を削減して患者の負担を軽減し、再検査率を低減することができるため、各施設でのＲＯＳＥの実施が望まれている。ただし、一般にＲＯＳＥは病理医または細胞検査士が行うため、人員の確保に困難を極めることが多い。また各工程は手作業で行われ、特にスメアの作製と細胞画像の評価には熟練を要する。そのために、実施できる施設は限られている。
より簡便な細胞診の方法としては、液状化細胞診（ＬｉｑｕｉｄＢａｓｅｄＣｙｔｏｌｏｇｙ、以下ＬＢＣと称す）がある。採取された検体を細胞保存液に収納して細胞を拡散させて細胞浮遊液を作製する。細胞浮遊液から細胞を補足して細胞を標本化した後、顕微鏡により細胞を観察する。標本の作製には特殊な技能は不要である。

ＬＢＣによる細胞の標本の作製方法は数種類存在するが、迅速・簡便に標本を作製する方法として、メンブレンフィルタ上に捕捉した細胞を捕捉して直接顕微鏡で観察する方法が知られている。ただし、この場合、顕微鏡による細胞観察時に、フィルタのポア（穴）が目立ち、観察を妨げる。このため、透明スライド上に光を散乱させる半透明のシール片を貼り合わせるプレパラートが開示されている（例えば、特許文献１参照）。特許文献１では、シール片上に凹凸部を形成し、フィルタを取り付けた枠体を凹凸部に嵌合させ、フィルタ上に細胞を捕捉した後、封入剤を添加したカバーグラスを載置してプレパラートが作製されている。
また、メンブレンフィルタは樹脂による薄膜のため平面度が均一でなく、さらに標本作成のための染色などの操作により膨潤し、さらに平面度が悪化する。そのため、顕微鏡の焦点合わせの操作が煩雑になる。

日本国特開平３−１９１３１０号公報

特許文献１に開示されているプレパラートを用いて細胞の標本を作製する場合、シール片が貼り付けられたスライド上にフィルタを取り付けた枠体を移動させる必要があるため、作業が煩雑になる。
また、特許文献１のプレパラートを用いたＲＯＳＥは、プレパラートを用いて細胞の標本を作製する工程と、細胞を染色液に浸す工程と、染色された細胞を顕微鏡のステージ上に乗せて観察する工程とを要する。このような検査方法では、各工程での作業が別の場所で行われるため、作業が煩雑になるという問題がある。

本発明は、このような問題点に鑑みてなされたものであって、細胞を正確に観察することができ、かつ、細胞をスムーズかつ迅速に検査することができる細胞検査装置及び細胞検査方法の提供を目的とする。

本発明の第１の態様に係る細胞検査方法は、光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、前記光源と前記観察部との間に、前記細胞を捕捉するフィルタを内部空間に備えたチャンバを配置する準備工程と、前記フィルタの表面側から前記チャンバの内部空間に、前記細胞浮遊液を注入する第１注入工程と、前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記細胞浮遊液を排出する第１排出工程と、前記フィルタの表面側から前記チャンバの内部空間に、前記細胞を染色する染色液を注入する第２注入工程と、前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記染色液を排出する第２排出工程と、前記フィルタを前記光源と前記観察部との間に位置させたまま、前記フィルタを押圧することにより、前記フィルタを平坦にする平坦工程と、前記フィルタを前記光源と前記観察部との間に位置させたまま、前記光源で照明しながら平坦になった前記フィルタ上の前記細胞を前記観察部により観察する観察工程と、を有する。

本発明の第２の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様において、前記細胞浮遊液及び前記染色液は、前記チャンバの側壁から前記内部空間に注入されてもよい。
本発明の第３の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様、または、上記第２の態様において、前記細胞浮遊液及び前記染色液は、前記チャンバの側壁から前記内部空間外に排出されてもよい。

本発明の第４の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様から上記第３の態様のいずれか一態様において、前記第１注入工程及び前記第２注入工程において、前記フィルタの表面側に配置され、前記フィルタを押圧する押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの表面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を注入する空間を形成してもよい。

本発明の第５の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様から上記第４の態様のいずれか一態様において、前記第１排出工程及び前記第２排出工程において、前記フィルタの裏面側に配置され、前記フィルタを押圧する押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの裏面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する空間を形成してもよい。

本発明の第６の態様に係る細胞検査方法は、上記第４の態様または上記第５の態様において、前記観察工程において、前記フィルタと前記押圧部材との間が液体で満たされていてもよい。
本発明の第７の態様に係る細胞検査方法は、上記第４の態様から上記第６の態様のいずれか一態様において、前記観察工程において、前記観察部と前記フィルタとの間に設けられたカバーグラスを通して前記フィルタ上の前記細胞を前記観察部により観察してもよい。
本発明の第８の態様に係る細胞検査方法は、上記第４の態様から上記第７の態様のいずれか一態様において、前記押圧部材は、前記光源からの光が透過する光透過材からなっていてもよい。

本発明の第９の態様に係る細胞検査装置は、細胞浮遊液に含まれる細胞を捕捉するフィルタと、内部空間を有し、前記フィルタが前記内部空間に配置されたチャンバと、前記フィルタの表面側から前記チャンバの前記内部空間に、前記細胞浮遊液及び前記細胞を染色する染色液を注入する注入部と、前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する排出部と、前記内部空間に前記フィルタと相対移動可能に設けられ、前記フィルタを押圧し、前記フィルタを平坦にする押圧部材と、前記細胞に光を照射する光源と、前記フィルタに対して前記光源と反対側に設けられた観察部と、を備える。

本発明の第１０の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様において、前記押圧部材は、前記チャンバ内に設けられるとともに、前記フィルタの表面側に配置され、前記押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの表面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を注入する空間が形成されていてもよい。

本発明の第１１の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様において、前記押圧部材は、前記チャンバ内に設けられるとともに、前記フィルタの裏面側に配置され、前記押圧部材と、前記チャンバの内壁と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの裏面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する空間が形成されていてもよい。

本発明の第１２の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様から上記第１１の態様のいずれか一態様において、前記注入部及び前記排出部が、前記チャンバから着脱可能であってもよい。
本発明の第１３の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様から上記第１２の態様のいずれか一態様において、前記押圧部材は、前記光源からの光が透過する光透過材からなっていてもよい。
本発明の第１４の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様から上記第１３の態様のいずれか一態様において、前記押圧部材は、前記光源からの光を拡散させる拡散板であってもよい。
本発明の第１５の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様から上記第１４の態様のいずれか一態様において、前記観察部と前記フィルタとの間にカバーグラスが設けられていてもよい。

上記各態様の細胞検査装置及び細胞検査方法によれば、細胞を正確に観察することが可能であり、かつ、細胞の検査をスムーズかつ迅速に行うことが可能となる。

本発明の第１実施形態に係る細胞検査装置を示す全体図である。図１のフィルタを示す斜視図である。図１のフィルタを押圧部材によって押し当てたときの状態を示す要部断面図である。本発明の細胞検査装置を示すブロック図である。本発明の細胞検査方法を示すフローチャートである。本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。本発明の細胞検査方法で使用される細胞浮遊液の作製手順を示す図である。本発明の細胞検査方法を示す図である。本発明の細胞検査方法を示す図である。本発明の細胞検査方法を示す図である。本発明の細胞検査方法を示す図である。本発明の細胞検査方法を示す図である。本発明の第１実施形態の細胞検査装置の変形例を示す図である。本発明の第２実施形態に係る細胞検査装置を示す全体図である。本発明の細胞検査方法を示す図である。本発明の細胞検査方法を示す図である。

［第１実施形態］
本発明の第１実施形態に係る細胞検査装置について、図１から図１４を参照して説明する。
細胞検査装置１は、細胞浮遊液に含まれる細胞を捕捉し観察する装置である。細胞検査装置１は、図１に示すように、フィルタ１０と、チャンバ２０と、注入部３０と、排出部４０と、押圧部材５０と、光源６０と、観察部７０とを備えている。光源６０と観察部７０との間に、フィルタ１０とチャンバ２０と押圧部材５０とが配置されている。

フィルタ１０は、図２に示すように、円環状の枠体１１と、枠体１１の表面に張り付けられた細胞を捕捉するフィルタ部１２とを備えている。フィルタ部１２は、細胞浮遊液に含まれる細胞を捕捉するため、細胞よりも小さな孔径を有している。フィルタ部１２の濾材は、薄膜のメンブレンフィルタであり、ポリカーボネートなどの樹脂に独立した穴の開いたフィルタが良く用いられる。フィルタ部１２は薄膜のため、通常、平面ではなく微細な起伏を有している。図１では、この起伏を分かりやすいように拡大して示している。

チャンバ２０は、図１に示すように、光源６０と観察部７０との間に配置されている。チャンバ２０は内部空間Ｐを有し、内部空間Ｐ内にフィルタ１０が配置されている。フィルタ１０の枠体１１の外側面１１ａが、チャンバ２０の内壁面２０ａに気密・水密を保って接触している。フィルタ１０の枠体１１がチャンバ２０の内壁面２０ａに接触しながら、フィルタ１０は内部空間Ｐを移動可能に配置されている。フィルタ１０は、フィルタ１０の枠体１１の表面１１ｂとチャンバの表面２０ｂとが面一になるまで移動可能である。チャンバの表面２０ｂに、フィルタ１０の観察部７０に向かう方向への移動を規制するストッパが設けられている。

チャンバ２０の側壁２０ｃには、観察部７０と光源６０の配列方向に沿って、第１貫通孔２１及び第２貫通孔２２が間隔をあけて形成されている。第１貫通孔２１は、第２貫通孔２２よりも観察部７０側に配置されている。第２貫通孔２２は、第１貫通孔２１よりも光源６０側に配置されている。第１貫通孔２１及び第２貫通孔２２は、チャンバ２０の内部空間Ｐと外部とを連通している。
フィルタ１０は、内部空間Ｐにおいて、チャンバ２０を側面視したとき、第１貫通孔２１と第２貫通孔２２との間の位置に配置されている。内部空間Ｐには、フィルタ１０とチャンバ２０の内壁面２０ａと表面２０ｂとにより囲まれた上部空間Ｐ１が形成されている。

注入部３０は、図１に示すように、第１貫通孔２１に連通した流路３１と、内部空間Ｐに細胞浮遊液Ｃが注入される注入口３２と、染色液Ｓが貯留される貯留部３３とを備えている。貯留部は複数の染色液と、洗浄液を備えている。注入部３０は、フィルタ１０の表面１０ａ側からチャンバ２０の上部空間Ｐ１に流路３１を介して細胞浮遊液Ｃ及び細胞を染色する染色液Ｓを注入する。図１では流路３１は一本にまとまり、第１貫通孔２１は一つであるが、流路３１は細胞浮遊液Ｃ及び複数の染色液Ｓと洗浄液ごとに独立し、それに対応して第１貫通孔２１が複数設けられていてもよい。貯留部３３の各液は、本体のピエゾアクチュエータやステッピングモータなどにより、独立してチャンバ２０の上部空間Ｐ１に注入される。

排出部４０は、図１に示すように、第２貫通孔２２に取り付けられた流路４１と、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを吸引する吸引部４２とを備えている。排出部４０は、流路４１を介してチャンバ２０の外に、フィルタ１０の裏面１０ｂ側から内部空Ｐ内の細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを、本体のピエゾアクチュエータやステッピングモータなどにより排出する。

押圧部材５０は、図１に示すように、内部空間Ｐのフィルタ１０の裏面１０ｂ側に配置され、フィルタ１０と相対移動可能に設けられている。押圧部材５０は、内部空間Ｐにフィルタ１０と間隔をあけて、第２貫通孔２２よりも光源６０側に配置されている。内部空間Ｐには、押圧部材５０とチャンバ２０の内壁面２０ａとフィルタ１０とにより囲まれるとともに、チャンバ２０の外にフィルタ１０の裏面１０ｂ側に細胞浮遊液Ｃと染色液Ｓを排出する下部空間（空間）Ｐ２が形成されている。

押圧部材５０は、円環状の枠体５１と、枠体５１内に配置されフィルタ１０に接触する凸部材５２とを備えている。凸部材５２のフィルタ１０に対向する面５２ａは滑らかな平面である。面５２ａの直径はフィルタの直径より小さい。押圧部材５０の枠体５１の外側面５１ａが、チャンバ２０の内壁面２０ａに気密・水密を保って接触している。押圧部材５０の枠体５１がチャンバ２０の内壁面２０ａに接触しながら、押圧部材５０は、内部空間Ｐで移動可能である。押圧部材５０の凸部材５２が、図３に示すように、フィルタ１０の裏面１０ｂを押圧することにより、フィルタ１０に張力が掛かり、表面１０ａが平坦になる。
凸部材５２は、光源６０からの光を透過させる光透過材からなる。また、凸部材５２は、光源６０からの光を散乱させる。凸部材５２は、例えば、屈折率が互いに異なる複数の透明な部材によって形成されていてもよく、スリガラス等の散乱板や、表面に微小な凹凸が配設されている拡散板によって形成されていてもよい。

光源６０は、例えば、ピエゾアクチュエータやステッピングモータなどに接続されており、観察部７０に向かって近接する方向、あるいは、観察部７０から離間する方向に移動可能である。光源６０の大きさは、押圧部材５０の枠体５１の大きさとほぼ同じである。光源６０は、内部空間Ｐで移動可能であり、押圧部材５０をフィルタ１０の裏面１０ｂに向かって押し進めることが可能である。

次に、細胞検査装置１のブロック構成について説明する。図４は、細胞検査装置１のブロック図である。
図４に示すように、細胞検査装置１は、制御部８０を備えている。制御部８０は顕微鏡画像の処理・保管機構を内蔵し、貯留部３３の注入機構と、吸引部４２の吸引機構と、光源６０と、モニタ７１とに接続されている。制御部８０は、図示しない入力部によって入力された指令信号に応じて貯留部３３の注入機構と、吸引部４２の吸引機構と、観察部７０と、光源６０との動作を制御する。

制御部８０は、染色液Ｓを注入する指令信号が入力されると、貯留部３３の注入機構の駆動を制御し、入力された指令信号に応じた種類や量の染色液Ｓと洗浄液が入力された指令信号に応じた時間で流路３１を介してチャンバ２０の内部空間Ｐに注入される。
制御部８０は、細胞浮遊液Ｃ、または、染色液Ｓと洗浄液を吸引する指令信号が入力されると、吸引部４２の吸引機構の駆動を制御し、吸引部４２によりチャンバ２０の内部空間Ｐ内の細胞浮遊液Ｃ、または、染色液Ｓと洗浄液が吸引される。
制御部８０は、光源６０を移動させる指令信号が入力されると、光源６０の駆動を制御し、光源６０を観察部７０に近接する方向に移動させる。
細胞検査装置１は、さらにモニタ（表示部）７１を備えている。モニタ７１は、制御部８０に接続されている。観察部７０により取得された細胞Ｔｂの画像は、制御部８０により適切に画像処理された上で、モニタ７１に表示される。

次に、本実施形態に係る細胞検査方法について図５のフローチャートを用いて説明する。
まず、図１に示すように、光源６０と観察部７０との間に、フィルタ１０と押圧部材５０とを内部空間に備えたチャンバ２０と、注入部３０と排出部４０を備えたカートリッジを配置する（準備工程：ステップＳ１）。
次に、患者の体内を超音波内視鏡で観察しながら穿刺針等を組織に刺入し、細胞を採取する。図６に示すように、採取された検体Ｔをシャーレ９０に吐出し、細胞保存液をシャーレ９０内に注入して、検体Ｔをほぐす。検体Ｔをほぐした後、図７に示すように、底部にフィルタ９１が設けられた容器９２をシャーレ９０内に挿入する。図８に示すように、シャーレ９０内に容器９２を押し進めていくと、図９に示すように、容器９２内の細胞浮遊液Ｃと、シャーレ９０内の組織Ｔａとに分離される。このようにして、細胞浮遊液Ｃが作製される。

作製された細胞浮遊液Ｃは、スポイト、または、シリンジ等に吸引され、図１に示す注入口３２に注入される。細胞浮遊液Ｃは、流路３１を通って第１貫通孔２１からチャンバ２０の上部空間Ｐ１に注入される（第１注入工程：ステップＳ２）。図１０に示すように、フィルタ１０の表面１０ａに細胞浮遊液Ｃが滞留する。
次に、制御部８０は、吸引部４２の吸引機構を駆動し、下部空間Ｐ２内を陰圧にすることで、上部空間Ｐ１の細胞浮遊液Ｃ及びフィルタ１０を通過した細胞浮遊液Ｃを吸引する。吸引された細胞浮遊液Ｃは第２貫通孔２２から流路４１を通って吸引部４２に排出される（第１排出工程：ステップＳ３）。図１１に示すように、細胞浮遊液Ｃ内の細胞はフィルタ１０上に捕捉される。

次に、制御部８０は、貯留部３３の注入機構を駆動する。貯留部３３内の染色液Ｓと洗浄液は、流路３１を通って第１貫通孔２１からチャンバ２０の上部空間Ｐ１に注入される（第２注入工程：ステップＳ４）。図１２に示すように、フィルタ１０の表面１０ａに染色液Ｃが滞留し、細胞Ｔｂが染色される。なお、第１注入工程及び第２注入工程の際、フィルタ１０が、第１貫通孔２１よりも観察部７０側に位置している場合や、第１貫通孔２１を塞いでいる場合は、第１貫通孔２１よりも光源６０側にフィルタ１０を配置し、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを注入する内部空間Ｐ１を形成する。

次に、制御部８０は、吸引部４２の吸引機構を駆動し、下部空間Ｐ２内を陰圧にすることで、上部空間Ｐ１の染色液Ｓ及びフィルタ１０を通過した染色液Ｓを吸引する。吸引された染色液Ｓは第２貫通孔２２から流路４１を通って吸引部４２に排出される（第２排出工程：ステップＳ５）。先ほどとは異なる染色液Ｓを流路３１から注入し（ステップＳ４）、流路４１から排出する（ステップＳ５）。染色液Ｓの注入（ステップＳ４）及び排出（ステップＳ５）を染色液の種類の数分行う。
図１３に示すように、細胞Ｔｂは染色される。なお、第１排出工程及び第２排出工程の際、フィルタ１０が、第２貫通孔２２よりも光源６０側に位置している場合や、第２貫通孔２２を塞いでいる場合は、第２貫通孔２２よりも観察部７０側にフィルタ１０を配置し、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを排出する内部空間Ｐ２を形成する。すべての染色が完了後、同様の工程で洗浄液をチャンバ２０に注入し（ステップＳ４−１）、その後、洗浄液を排出して（ステップＳ５−１）、余分な染色液を洗浄する。

次に、制御部８０は光源６０を駆動すると、光源６０が押圧部材５０に近接する方向に移動する。光源６０は、押圧部材５０と接触し、押圧部材５０と共に、フィルタ１０に向かって移動する。さらに、光源６０が、フィルタ１０に近接する方向に移動すると、押圧部材５０の凸部材５２がフィルタ１０の裏面１０ｂに接触する。光源６０は、フィルタ１０の表面１０ａとチャンバの表面２０ｂとが面一になるまで、押圧部材５０とフィルタ１０とを押し進める。押圧部材５０がフィルタ１０の裏面１０ｂに押し当たると、図１４に示すように、押圧部材５０の凸部材５２がフィルタ１０を押圧しているため、細胞Ｔｂを捕捉したフィルタ１０に張力が掛かり、表面が平坦になる（平坦工程：ステップＳ６）。
平坦になったフィルタ１０に光源６０により光を照明しながら、観察部７０によりフィルタ１０の表面１０ａの細胞をモニタ７１で観察する（観察工程：ステップＳ７）。必要な細胞が採取されていれば、図９に示す組織Ｔａと残った細胞浮遊液Ｃを病理検査に搬送する。一方、必要な細胞が採取されていない場合は、内視鏡を用いて再度検体を採取する。

本実施形態の細胞検査装置１によれば、押圧部材５０を用いることにより、フィルタ１０を平坦にすることができる。これにより、フィルタ１０の表面１０ａに捕捉された細胞Ｔｂを正確に観察することが可能となる。すなわち、通常、フィルタ１０上の細胞を観察する場合は、フィルタ１０が起伏しているため、観察部７０の焦点が細胞Ｔｂの一部にしか合わず、細胞Ｔｂ全体を観察するのが難しい。本実施形態では、フィルタ１０を平坦にすることができるため、細胞Ｔｂに焦点を合わせやすくなり、鮮明な細胞Ｔｂの画像を観察することができる。
また、チャンバ２０の内部空間Ｐには、押圧部材５０と、チャンバ２０の内壁面２０ａと、フィルタ１０とにより囲まれるとともに、フィルタ１０の裏面１０ｂ側に細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを排出する下部空間Ｐ２が形成されている。これにより、フィルタ１０及び押圧部材５０が、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓの吸引の妨げにならない。

また、押圧部材５０の凸部材５２は、光源６０からの光を透過させる透過部材からなる。これにより、光源６０の光を効率良く利用することができるため、観察部７０による細胞Ｔｂを鮮明に観察することができる。また、押圧部材５０の凸部材５２は、光源６０からの光を散乱させる散乱板である。これにより、押圧部材５０の他に散乱板を設ける必要がないため、部品点数を少なくすることができる。
また、チャンバ２０と、注入部３０と、排出部４０とにより構成されたカートリッジ１００は使用ごとに交換するディスポーザブルタイプとして構成することができる。それにより、検体により装置が汚染されることがなく、医療従事者の検体による感染や、検体間のコンタミネーションも防ぐことができる。

また、本実施形態の細胞検査方法によれば、準備工程（ステップＳ１）、第１注入工程（ステップＳ２）、第１排出工程（ステップＳ３）、第２注入工程（ステップＳ４）、第２排出工程（ステップＳ５）、平坦工程（ステップＳ６）、観察工程（ステップＳ７）が、光源６０と観察部７０との間、すなわち、同じ場所で行われるため、細胞Ｔｂをスムーズかつ迅速に検査することができる。
また、チャンバ２０の側壁２０ｃに第１貫通孔２１を形成することにより、観察部７０の邪魔にならずに、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを上部空間Ｐ１に注入することができる。チャンバ２０の側壁２０ｃに第２貫通孔２２を形成することにより、光源６０の邪魔にならずに、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを下部空間Ｐ２から外部に排出することができる。

なお、押圧部材５０は、必ずしも光透過材から構成されていなくてもよいが、光透過率が高い部材から構成されていることが好ましい。押圧部材５０は、必ずしも拡散板でなくてもよい。
また、染色液Ｓを複数種類用いたが、１種類であってもよい。洗浄液による洗浄は必ずしも必要ではない。
また、光源６０が押圧部材５０を押したが、光源６０は動かず、押圧部材５０がアクチュエータ等に接続されて移動する構成であってもよい。
また、制御部８０により貯留部３３の注入機構と吸引部４２の吸引機構と光源６０とを駆動させたが、制御部８０を備えず、貯留部３３、吸引部４２、及び光源６０は手動であってもよい。制御部８０は、指令信号の入力により貯留部３３の注入機構と吸引部４２の吸引機構と光源６０とを制御したが、すべて一連の流れを自動で進めてもよい。
また、観察部７０により取得された細胞Ｔｂの画像をモニタ７１で観察したが、接眼レンズを介して目視で細胞Ｔｂを観察してもよい。
また、チャンバの表面２０ｂに、フィルタ１０の観察部７０に向かう方向への移動を規制するストッパが設けられている構成としたが、制御部８０により予め設定された移動量だけ光源６０を移動させる構成であってもよい。

［変形例］
本変形例では、チャンバ２４の構成が、第１実施形態のチャンバ２０の構成と異なる。上述したものと共通の構成要素には同一の符号を付し、重複する説明を省略する。
チャンバ２４は、図１５に示すように、チャンバ２４の表面２５ｂにカバーグラス２３が設けられている。フィルタ１０とチャンバ２４の内壁面２５ａとカバーグラス２３とにより囲まれた上部空間Ｐ１ａが形成されている。上部空間Ｐ１ａは、密閉されている。

次に、細胞検査方法について説明する。
まず、上述したステップＳ１からステップＳ６まで行う。流路３１を介して封入液Ｉが上部空間Ｐ１ａに注入される。上部空間Ｐ１ａが充填された状態で、平坦になったフィルタ１０に光源６０により光を照明しながら、観察部７０によりフィルタ１０の表面１０ａの細胞をモニタ７１で観察する。
なお、フィルタ１０とカバーグラス２３との間は間隔をあけて、細胞Ｔｂの観察を行ったが、フィルタ１０をカバーグラス２３に接近させて空間を狭くしても、接触させて観察してもよい。
また、カバーグラス２３に代えて透明な樹脂板であってもよい。上部空間Ｐ１ａが封入液で満たされることにより、よりフィルタ１０のポアの画像への影響を小さくして観察することができる。

［第２実施形態］
本発明の第２実施形態について、図１６から図１８を用いて説明する。
本実施形態の細胞検査装置は、押圧部材の構成において第１実施形態と異なる。
以降の説明において、上述したものと共通の構成要素には同一の符号を付し、重複する説明を省略する。

図１６に示すように、チャンバ２０の上壁２０ｄには開口部２５が形成されている。押圧部材５５は、開口部２５を塞ぐように、チャンバ２０の上壁２０ｄの観察部７０に対向する位置に設けられている。押圧部材５５のフィルタ１０に対向する面５５ａ（内部空間Ｐ側の面）は平面である。押圧部材５５は、光源６０からの光を透過する光透過材からなる。

フィルタ１０は、第１実施形態と同様に、内部空間Ｐにおいて、チャンバ２０を側面視したとき、第１貫通項２１と第２貫通孔２２との間の位置に配置されている。内部空間Ｐには、フィルタ１０とチャンバ２０の内壁面２０ａと押圧部材５５とにより囲まれた上部空間（空間）Ｐ３が形成されている。

チャンバ２０の内部空間Ｐには、フィルタ１０の裏面１０ｂ側に、拡散板２６が設けられている。拡散板２６は、第２貫通孔２２よりも光源６０側に配置されている。内部空間Ｐには、拡散板２６とチャンバ２０の内壁面２０ａとフィルタ１０とにより囲まれた下部空間Ｐ４が形成されている。拡散板２６の外側面２６ａがチャンバ２０の内壁面２０ａに接触して配置されている。拡散板２６は、外側面２６ａがチャンバ２０の内壁面２０ａに接触しながら、内部空間Ｐ内を移動可能である。拡散板２６は、光源６０からの光を拡散する。
光源６０は、第１実施形態と同様に、内部空間Ｐ内を移動可能であり、拡散板２６をフィルタ１０の裏面１０ｂに向かって押し進めることが可能である。
貯留部３３は、染色液Ｓと洗浄液に加えて、封入液Ｉを備える。

次に、本実施形態に係る細胞検査方法について図５に示すフローチャートを用いて説明する。
第１実施形態と同様の箇所については説明を省略する。
光源６０と観察部７０との間に、押圧部材５５が上壁２０ｄに設けられ、内部空間Ｐにフィルタ１０及び拡散板２６を備えたチャンバ２０を配置する（準備工程：ステップＳ１）。上部空間Ｐ３に細胞浮遊液Ｃを注入し（第１注入工程：ステップＳ２）、下部空間Ｐ４を陰圧にして細胞浮遊液Ｃを排出し（第１排出工程：ステップＳ３）、細胞Ｔｂをフィルタ１０上に捕捉する。その後、上部空間Ｐ３に染色液Ｓを注入し（第２注入工程：ステップＳ４）、下部空間Ｐ４を陰圧にして染色液Ｓを排出し（第２排出工程：ステップＳ５）、細胞Ｔｂを染色する。図１７に示すように、染色された細胞Ｔｂがフィルタ１０の表面１０ａに捕捉される。次に、染色液で染色された細胞Ｔｂが収載されたフィルタ上に封入液（液体）Ｉを少量注入し、フィルタを湿潤させる。

次に、制御部８０は光源６０を駆動すると、光源６０が拡散板２６に近接する方向に移動する。光源６０は、拡散板２６と接触し、拡散板２６と共に、フィルタ１０に向かって移動する。さらに、光源６０が、フィルタ１０に近接する方向に移動すると、フィルタ１０と拡散板２６とが接触する。光源６０は、フィルタ１０と拡散板２６とを押圧部材５５に向かって押し進める。フィルタ１０は、押圧部材５５により押圧されると、図１８に示すように、細胞Ｔｂを捕捉したフィルタ１０が平坦になる（平坦工程：ステップＳ６）。押圧部材５５とフィルタ１０の表面１０ａとの間は封入液Ｉで満たされている。図１８では、フィルタ１０上に捕捉された細胞Ｔｂを分かりやすく示すために、拡大して表示している。
次に、第１実施形態と同様に、観察部７０により細胞Ｔｂを観察する（観察工程：ステップＳ７）。必要な細胞が採取されていれば、図９に示す細胞Ｔｂａを病理検査に搬送する。一方、必要な細胞が採取されていない場合は、内視鏡を用いて再度細胞を採取する。

本実施形態の細胞検査装置によれば、押圧部材５５によりフィルタ１０を平坦にすることができる。これにより、フィルタ１０の表面１０ａに捕捉された細胞Ｔｂを正確に観察することが可能となる。
また、チャンバ２０の内部空間Ｐには、押圧部材５５と、チャンバ２０の内壁面２０ａと、フィルタ１０とにより囲まれるとともに、フィルタ１０の表面１０ａ側に細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを注入する上部空間Ｐ３が形成されている。これにより、フィルタ１０及び押圧部材５５が、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓの注入の妨げにならない。
また、観察工程において、フィルタ１０と押圧部材５５との間が封入液Ｉで満たされ、フィルタのポアに封入液が侵入しているため、ポアの影響を軽減して細胞Ｔｂを鮮明に観察することができる。また、フィルタ１０と押圧部材５５との間が液体で満たされていない場合は、フィルタ１０と押圧部材５５との間に泡やフィルタの張り付き・浮き等が発生し観察しくい場合がある。

なお、フィルタ１０と押圧部材との間が封入液Ｉで満たされているとした。通常、封入液は顕微鏡観察時にポアの影響が出にくい屈折率に調整されたキシレンなどの液が使われるが、アルコールやグリセリン溶液、水など封入液の種類は特に限定されない。例えば、染色液後の洗浄液を吸引する際、すべての洗浄液を排出せずに、わずかに残しておいてもよい。
また、拡散板２６は必ずしも備えられていなくてもよく、光源６０が直接フィルタ１０を押し、フィルタ１０を押圧部材５５に押し当ててもよい。
表面

以上、本発明の好ましい実施形態を説明したが、本発明はこれら実施形態に限定されることはない。本発明の趣旨を逸脱しない範囲で、構成の付加、省略、置換、およびその他の変更が可能である。本発明は前述した説明によって限定されることはなく、添付のクレームの範囲によってのみ限定される。

上記各実施形態の細胞検査装置及び細胞検査方法によれば、細胞を正確に観察することが可能であり、かつ、細胞の検査をスムーズかつ迅速に行うことが可能となる。

Ｃ細胞浮遊液
Ｉ封入液（液体）
Ｐ内部空間
Ｐ２下部空間（空間）
Ｐ３上部空間（空間）
Ｓ染色液
Ｔ検体
Ｔｂ細胞
１０フィルタ
１０ａフィルタの表面
１０ｂフィルタの裏面
２０チャンバ
２０ａチャンバの内壁面
２０ｃチャンバの側壁
３０注入部
４０排出部
５０，５５押圧部材
６０光源
７０観察部

本発明の第１の態様に係る細胞検査方法は、光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、前記光源と前記観察部との間に、前記細胞を捕捉可能な孔径および微細な起伏を有するフィルタを内部空間に備えたチャンバを配置する準備工程と、前記フィルタの表面側から前記チャンバの内部空間に、前記細胞浮遊液を注入する第１注入工程と、前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記細胞浮遊液を排出する第１排出工程と、前記フィルタの表面側から前記チャンバの内部空間に、前記細胞を染色する染色液を注入する第２注入工程と、前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記染色液を排出する第２排出工程と、前記第２排出工程の後に、前記フィルタと押圧部材とを接触させる接触工程と、前記接触工程の後に、前記フィルタを前記光源と前記観察部との間に位置させたまま、前記フィルタを押圧することにより、前記フィルタの前記微細な起伏を平坦にする平坦化工程と、前記フィルタを前記光源と前記観察部との間に位置させたまま、前記光源で照明しながら、前記平坦化工程により平坦になった前記フィルタ上の前記細胞を前記観察部により観察する観察工程と、を有する。

本発明の第４の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様から上記第３の態様のいずれか一態様において、前記第１注入工程及び前記第２注入工程において、前記フィルタの表面側に配置され、前記押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの表面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を注入する空間を形成してもよい。

本発明の第５の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様から上記第４の態様のいずれか一態様において、前記第１排出工程及び前記第２排出工程において、前記フィルタの裏面側に配置され、前記押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの裏面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する空間を形成してもよい。

本発明の第６の態様に係る細胞検査方法は、上記第４の態様または上記第５の態様において、前記観察工程において、前記フィルタと前記押圧部材との間が液体で満たされていてもよい。
本発明の第７の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様において、前記観察工程において、前記観察部と前記フィルタとの間に設けられたカバーグラスを通して前記フィルタ上の前記細胞を前記観察部により観察してもよい。
本発明の第８の態様に係る細胞検査方法は、上記第１の態様において、記観察工程において、前記光源からの光が前記押圧部材を透過してもよい。

本発明の第９の態様に係る細胞検査装置は、細胞浮遊液に含まれる細胞を捕捉可能な孔径および微細な起伏を有するフィルタと、内部空間を有し、前記フィルタが前記内部空間に配置されたチャンバと、前記フィルタの表面側から前記チャンバの前記内部空間に、前記細胞浮遊液及び前記細胞を染色する染色液を注入する注入部と、前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する排出部と、前記内部空間に前記フィルタと相対移動可能に設けられた押圧部材と、前記押圧部材の移動を制御する制御部と、前記細胞に光を照射する光源と、前記フィルタに対して前記光源と反対側に設けられた観察部と、を備え、前記制御部は、前記押圧部材を前記フィルタに接近する方向に向けて移動させることで前記フィルタに対し前記押圧部材を接触させ、前記押圧部材に前記フィルタを押圧させ、前記フィルタの前記起伏を平坦化する。

本発明の第１０の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様において、前記光源は、前記観察部と相対移動可能に設けられ、前記光源は、前記押圧部材を前記フィルタに向けて押し進め、または、前記フィルタを前記押圧部材に向けて押し進めてもよい。

本発明の第１１の態様に係る細胞検査装置は、上記第９の態様において、前前記押圧部材は、前記チャンバ内に設けられるとともに、前記フィルタの前記表面側または前記裏面側に配置され、前記押圧部材と、前記チャンバの内壁と、前記フィルタとにより囲まれ、前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する空間が形成されていてもよい。

排出部４０は、図１に示すように、第２貫通孔２２に取り付けられた流路４１と、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを吸引する吸引部４２とを備えている。排出部４０は、流路４１を介してチャンバ２０の外に、フィルタ１０の裏面１０ｂ側から内部空間Ｐ内の細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを、本体のピエゾアクチュエータやステッピングモータなどにより排出する。

次に、制御部８０は光源６０を駆動すると、光源６０が押圧部材５０に近接する方向に移動する。光源６０は、押圧部材５０と接触し、押圧部材５０と共に、フィルタ１０に向かって移動する。さらに、光源６０が、フィルタ１０に近接する方向に移動すると、押圧部材５０の凸部材５２がフィルタ１０の裏面１０ｂに接触する。光源６０は、フィルタ１０の表面１０ａとチャンバの表面２０ｂとが面一になるまで、押圧部材５０とフィルタ１０とを押し進める。押圧部材５０がフィルタ１０の裏面１０ｂに押し当たると、図１４に示すように、押圧部材５０の凸部材５２がフィルタ１０を押圧しているため、細胞Ｔｂを捕捉したフィルタ１０に張力が掛かり、表面が平坦になる（平坦化工程：ステップＳ６）。

また、本実施形態の細胞検査方法によれば、準備工程（ステップＳ１）、第１注入工程（ステップＳ２）、第１排出工程（ステップＳ３）、第２注入工程（ステップＳ４）、第２排出工程（ステップＳ５）、平坦化工程（ステップＳ６）、観察工程（ステップＳ７）が、光源６０と観察部７０との間、すなわち、同じ場所で行われるため、細胞Ｔｂをスムーズかつ迅速に検査することができる。
また、チャンバ２０の側壁２０ｃに第１貫通孔２１を形成することにより、観察部７０の邪魔にならずに、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを上部空間Ｐ１に注入することができる。チャンバ２０の側壁２０ｃに第２貫通孔２２を形成することにより、光源６０の邪魔にならずに、細胞浮遊液Ｃ及び染色液Ｓを下部空間Ｐ２から外部に排出することができる。

フィルタ１０は、第１実施形態と同様に、内部空間Ｐにおいて、チャンバ２０を側面視したとき、第１貫通孔２１と第２貫通孔２２との間の位置に配置されている。内部空間Ｐには、フィルタ１０とチャンバ２０の内壁面２０ａと押圧部材５５とにより囲まれた上部空間（空間）Ｐ３が形成されている。

次に、制御部８０は光源６０を駆動すると、光源６０が拡散板２６に近接する方向に移動する。光源６０は、拡散板２６と接触し、拡散板２６と共に、フィルタ１０に向かって移動する。さらに、光源６０が、フィルタ１０に近接する方向に移動すると、フィルタ１０と拡散板２６とが接触する。光源６０は、フィルタ１０と拡散板２６とを押圧部材５５に向かって押し進める。フィルタ１０は、押圧部材５５により押圧されると、図１８に示すように、細胞Ｔｂを捕捉したフィルタ１０が平坦になる（平坦化工程：ステップＳ６）。押圧部材５５とフィルタ１０の表面１０ａとの間は封入液Ｉで満たされている。図１８では、フィルタ１０上に捕捉された細胞Ｔｂを分かりやすく示すために、拡大して表示している。
次に、第１実施形態と同様に、観察部７０により細胞Ｔｂを観察する（観察工程：ステップＳ７）。必要な細胞が採取されていれば、図９に示す細胞Ｔａを病理検査に搬送する。一方、必要な細胞が採取されていない場合は、内視鏡を用いて再度細胞を採取する。

なお、フィルタ１０と押圧部材との間が封入液Ｉで満たされているとした。通常、封入液は顕微鏡観察時にポアの影響が出にくい屈折率に調整されたキシレンなどの液が使われるが、アルコールやグリセリン溶液、水など封入液の種類は特に限定されない。例えば、染色液後の洗浄液を吸引する際、すべての洗浄液を排出せずに、わずかに残しておいてもよい。
また、拡散板２６は必ずしも備えられていなくてもよく、光源６０が直接フィルタ１０を押し、フィルタ１０を押圧部材５５に押し当ててもよい。

Claims

光源と観察部とを用いて、細胞浮遊液に含まれる細胞を検査する細胞検査方法であって、
前記光源と前記観察部との間に、前記細胞を捕捉するフィルタを内部空間に備えたチャンバを配置する準備工程と、
前記フィルタの表面側から前記チャンバの内部空間に、前記細胞浮遊液を注入する第１注入工程と、
前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記細胞浮遊液を排出する第１排出工程と、
前記フィルタの表面側から前記チャンバの内部空間に、前記細胞を染色する染色液を注入する第２注入工程と、
前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記染色液を排出する第２排出工程と、
前記フィルタを前記光源と前記観察部との間に位置させたまま、前記フィルタを押圧することにより、前記フィルタを平坦にする平坦工程と、
前記フィルタを前記光源と前記観察部との間に位置させたまま、前記光源で照明しながら平坦になった前記フィルタ上の前記細胞を前記観察部により観察する観察工程と、
を有する細胞検査方法。
前記細胞浮遊液及び前記染色液は、前記チャンバの側壁から前記内部空間に注入される
請求項１に記載の細胞検査方法。
前記細胞浮遊液及び前記染色液は、前記チャンバの側壁から前記内部空間外に排出される
請求項１または請求項２に記載の細胞検査方法。
前記第１注入工程及び前記第２注入工程において、
前記フィルタの表面側に配置され、前記フィルタを押圧する押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの表面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を注入する空間を形成する
請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の細胞検査方法。
前記第１排出工程及び前記第２排出工程において、
前記フィルタの裏面側に配置され、前記フィルタを押圧する押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの裏面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する空間を形成する
請求項１から請求項３のいずれか１項に記載の細胞検査方法。
前記観察工程において、前記フィルタと前記押圧部材との間が液体で満たされている
請求項４または請求項５に記載の細胞検査方法。
前記観察工程において、前記観察部と前記フィルタとの間に設けられたカバーグラスを通して前記フィルタ上の前記細胞を前記観察部により観察する
請求項４から請求項６のいずれか１項に記載の細胞検査方法。
前記押圧部材は、前記光源からの光が透過する光透過材からなる
請求項４から請求項７のいずれか１項に記載の細胞検査方法。
細胞浮遊液に含まれる細胞を捕捉するフィルタと、
内部空間を有し、前記フィルタが前記内部空間に配置されたチャンバと、
前記フィルタの表面側から前記チャンバの前記内部空間に、前記細胞浮遊液及び前記細胞を染色する染色液を注入する注入部と、
前記フィルタの裏面側から前記チャンバの外に、前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する排出部と、
前記内部空間に前記フィルタと相対移動可能に設けられ、前記フィルタを押圧し、前記フィルタを平坦にする押圧部材と、
前記細胞に光を照射する光源と、
前記フィルタに対して前記光源と反対側に設けられた観察部と、
を備える細胞検査装置。
前記押圧部材は、前記チャンバ内に設けられるとともに、前記フィルタの表面側に配置され、
前記押圧部材と、前記チャンバの内壁面と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの表面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を注入する空間が形成される
請求項９に記載の細胞検査装置。
前記押圧部材は、前記チャンバ内に設けられるとともに、前記フィルタの裏面側に配置され、
前記押圧部材と、前記チャンバの内壁と、前記フィルタとにより囲まれるとともに、前記フィルタの裏面側に前記細胞浮遊液及び前記染色液を排出する空間が形成される
請求項９に記載の細胞検査装置。
前記注入部及び前記排出部が、前記チャンバから着脱可能である
請求項９から請求項１１のいずれか１項に記載の細胞検査装置。
前記押圧部材は、前記光源からの光が透過する光透過材からなる
請求項９から請求項１２のいずれか１項に記載の細胞検査装置。
前記押圧部材は、前記光源からの光を拡散させる拡散板である
請求項９から請求項１３のいずれか１項に記載の細胞検査装置。
前記観察部と前記フィルタとの間にカバーグラスが設けられている
請求項９から請求項１４のいずれか１項に記載の細胞検査装置。