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Description
本開示の実施形態に対する様々な変更及び改変が、当業者には明らかとなるであろう。かかる変更及び改変は、限定されるものではないが、化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、組成物、配合物、または本開示の使用方法に関するものを含め、本開示の要旨及び範囲を逸脱しない範囲でなされ得る。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドであって、天然に存在しない前記ルシフェラーゼポリペプチド。
〔２〕前記ポリペプチドが、配列番号２との少なくとも７０％の配列同一性、及び配列番号１との１００％未満の配列同一性を含む、前記〔１〕に記載のポリペプチド。
〔３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、２４４位、２４９位、３３７位、及び３３９位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｈ２４４Ｗ、Ｈ２４４Ｇ、及びＨ２４４Ｒ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔３〕に記載のポリペプチド。
〔５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、２４０位、２５４位、及び３４４位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕のいずれかに記載のポリペプチド。
〔６〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｉ２４０Ｌ、Ｙ２５４Ｓ、及びＴ３４４Ａ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔５〕に記載のポリペプチド。
〔７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して３００位及び３９６位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕及び〔５〕のいずれかに記載のポリペプチド。
〔８〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｖ３００Ｇ及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔７〕に記載のポリペプチド。
〔９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して２４５位、２８５位、及び３１５位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕及び〔７〕のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１０〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｇ２４５Ａ、Ｌ２８５Ｉ、及びＧ３１５Ａ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔９〕に記載のポリペプチド。
〔１１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して１０９位、１９３位、２１４位、２１８位、２２８位、２３４位、２６２位、２８７位、２９４位、３０５位、３０６位、３０９位、３１６位、３３５位、及び５３３位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕、〔７〕、及び９のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１２〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｉ１０９Ｖ、Ｓ１９３Ａ、Ｉ２１４Ｌ、Ｆ２１８Ｌ、Ｎ２２８Ｄ、Ｓ２３４Ｔ、Ｖ２６２Ａ、Ｖ２８７Ｉ、Ｌ２９４Ｈ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｋ３０９Ｅ、Ａ３１６Ｓ、Ｖ３３５Ｇ、及び／またはＶ５３３Ｍ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔１１〕に記載のポリペプチド。
〔１３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して１３３位、２３３位、２３６位、及び５０３位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕、〔７〕、９、及び１１のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１４〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｑ１３３Ｈ、Ｔ２３３Ｓ、Ｉ２３６Ｖ、及び／またはＳ５０３Ｒ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔１３〕に記載のポリペプチド。
〔１５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して１０７位及び１２１位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕、〔７〕、９、１１、及び１３のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１６〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｋ１０７Ｑ及び／またはＫ１２１Ｎ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔１５〕に記載のポリペプチド。
〔１７〕前記ポリペプチドが、表１に列挙する配列番号２～１２４のいずれか１つにおけるアミノ酸置換を含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔１８〕前記ポリペプチドが、配列番号１の前記ルシフェラーゼポリペプチドのデヒドロルシフェリン及びその誘導体による阻害と比較して、前記デヒドロルシフェリン及びその誘導体による阻害に対する耐性を示す、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔１９〕前記ルシフェラーゼポリペプチドにより生成される前記生物発光シグナルが、配列番号１の前記ルシフェラーゼポリペプチドにより生成される前記生物発光シグナルと比較して少なくとも１０倍増加する、前記〔１〕～〔１８〕のいずれか１項に記載のポリペプチド。
〔２０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｉ２４０Ｌ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｎ７４Ｎ、Ｈ２４４Ｒ、Ｖ３００Ｇ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２２〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２４〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、Ｉ３９６Ｋ、Ｖ３００Ｇ、Ｌ３０５Ｐ、及びＳ３０６Ｐ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２６〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、Ｉ３９６Ｋ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、及びＩ１０９Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｉ２３０Ｆ、Ｖ３３５Ｇ、及びＩ４１０Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２８〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｓ、Ｙ１０８Ｆ、及びＴ３７６Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｓ、Ｆ５５Ｉ、Ｖ２６２Ａ、及びＩ４２２Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｙ１０８Ｆ、Ｖ２６１Ａ、Ｎ４２７Ｄ、及びＦ４３１Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＩ２３０Ｆ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３２〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＱ４８７Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｎ１５４Ｓ、Ｖ２６１Ａ、及びＩ４１０Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３４〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｙ１８３Ｃ、Ｖ２６１Ａ、及びＴ２８９Ｓ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＹ３２Ｃ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３６〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｆ２４６Ｙ、及びＶ２６１Ａ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＩ２３０Ｆ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３８〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｋ１２１Ｑ、Ｆ２４６Ｙ、及びＶ２６１Ａ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｋ１２１Ｑ、Ｖ２６１Ａ、及びＶ２８７Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してＶ３４８Ｉ、Ａ３１６Ｍ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ａ３４４Ｉ、Ｋ１２１Ｑ、Ｖ２６１Ａ、Ｖ２８７Ｉ、Ｋ１０７Ｎ、及びＴ２８９Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ａ３１６Ｗ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４２〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してＣ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｋ２０５Ｎ、Ｉ３９６Ｉ、Ｋ１２１Ｑ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４４Ｉ、及びＹ１０８Ｆからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４４〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、及びＴ３４４Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、Ｔ３４４Ｉ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ｙ３３９Ｍ、Ｉ２４０Ｖ、Ｔ２８４Ａ、Ｔ２８９Ｒ、Ｔ２８９Ｓ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、Ｌ４３７Ｒ、Ｗ５１０Ｒ、Ｃ２５７Ｒ、及びＳ３１３Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４６〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ｉ、Ｉ３９６Ｋ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、及びＹ３３９Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４８〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔５０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｔ２８９Ｓ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、及びＷ５１０Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔５１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｃ２５７Ｒ、Ｔ２８４Ａ、Ｔ２８９Ｓ、Ｓ３１３Ｔ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、Ｌ４３７Ｒ、及びＷ５１０Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔５２〕生物発光アッセイのための試薬組成物であって、
５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドと、
前記ルシフェラーゼポリペプチドの基質と、を含む前記試薬組成物。
〔５３〕前記基質がラセミ体ルシフェリンである、前記〔５２〕に記載の試薬組成物。
〔５４〕前記基質がルシフェリンアナログである、前記〔５２〕に記載の試薬組成物。
〔５５〕前記ルシフェリンアナログが５，５－二置換ルシフェリンアナログである、前記〔５２〕に記載の試薬組成物。
〔５６〕マグネシウムを更に含む、前記〔５２〕に記載の組成物。
〔５７〕緩衝液、脱泡剤、ＡＴＰアーゼインヒビター、Ｌ－ルシフェリン、アザチオチミン、酵素安定剤、界面活性剤、ＡＴＰ生成酵素のインヒビター、細胞溶解剤、ＡＴＰ抽出剤、補酵素Ａ、チオール試薬、金属イオンキレート剤、プロテアーゼインヒビター、ピロリン酸、フッ化ナトリウム、デヒドロルシフェリン、及び塩からなる群から選択される１種以上の追加成分を更に含む、前記〔５２〕または前記〔５３〕に記載の組成物。
〔５８〕前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の組成物。
〔５９〕前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の組成物。
〔６０〕固体成分及び液体成分を含む、前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の組成物。
〔６１〕前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の試薬組成物を含むキット。
〔６２〕生物発光アッセイを実行するための使用説明書を更に含む、前記〔６１〕に記載のキット。
〔６３〕前記生物発光アッセイが、カスパーゼ活性アッセイ、キナーゼ活性アッセイ、Ｐ４５０アッセイ、活性酸素種の測定、ヌクレオチドの検出もしくは定量化、細胞生存率の検出もしくは定量化、細胞障害性の検出もしくは定量化、または過酸化水素の検出もしくは定量化を含む、前記〔６１〕に記載のキット。
〔６４〕５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドと、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、を含むキット。
〔６５〕試料中のＡＴＰを検出または定量化するためのアッセイ系であって、
５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドを含む試薬組成物と、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、
ＡＴＰを含むか、または含むことが疑われる試料と、を含む、前記アッセイ系。
〔６６〕生物発光の検出及び／または測定のための装置を更に含む、前記〔６５〕に記載のアッセイ系。
〔６７〕前記試料が、細胞可溶化物試料、無細胞調製物試料、または精製酵素配合試料のうちの１種以上である、前記〔６５〕または前記〔６６〕に記載のアッセイ系。
〔６８〕前記試料が、環境試料、土壌試料、水試料、工業化学試料、法医学試料、食品ベースの試料、液体試料、飲料ベースの試料、または生化学試料のうちの１種以上である、前記〔６５〕または前記〔６６〕に記載のアッセイ系。
〔６９〕試料中のＡＴＰを検出または定量化する方法であって、
前記〔６５〕～〔６８〕のいずれかに記載のアッセイ系を、ＡＴＰを含むか、または含むことが疑われる前記試料に添加することと、
前記生物発光シグナルを検出または定量化することと、を含む前記方法。
〔７０〕試料中の標的酵素活性を検出または定量化するためのアッセイ系であって、
５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドを含む試薬組成物と、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、
標的酵素を含むか、または含むことが疑われる試料と、を含む前記アッセイ系。
〔７１〕前記５，５－二置換ルシフェリンアナログが、前記標的酵素の基質に結合されている、前記〔７０〕に記載のアッセイ系。
〔７２〕前記標的酵素が、プロテアーゼ、カスパーゼ、キナーゼ、シトクロム４５０、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、またはモノアミンオキシダーゼである、前記〔７０〕または前記〔７１〕に記載のアッセイ系。
〔７３〕生物発光の検出及び／または測定のための装置を更に含む、前記〔７０〕～〔７２〕のいずれかに記載のアッセイ系。
〔７４〕前記試料が細胞可溶化物である、前記〔７０〕～〔７３〕のいずれかに記載のアッセイ系。
〔７５〕前記試料が、環境試料、工業化学試料、法医学試料、食品ベースの試料、または生化学試料である、前記〔７０〕～〔７３〕のいずれかに記載のアッセイ系。
〔７６〕試料中の標的酵素活性を検出または定量化する方法であって、
前記〔７０〕～〔７５〕のいずれかに記載のアッセイ系を、標的酵素活性を含むか、または含むことが疑われる前記試料に添加することと、
前記生物発光シグナルを検出または定量化することと、を含む前記方法。
本発明のまた別の態様は、以下のとおりであってもよい。
〔１〕５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドであって、天然に存在しない前記ルシフェラーゼポリペプチド。
〔２〕前記ポリペプチドが、配列番号２との少なくとも７０％の配列同一性、及び配列番号１との１００％未満の配列同一性を含む、前記〔１〕に記載のポリペプチド。
〔３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、２４４位、２４９位、３３７位、及び３３９位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｈ２４４Ｗ、Ｈ２４４Ｇ、及びＨ２４４Ｒ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔３〕に記載のポリペプチド。
〔５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、２４０位、２５４位、及び３４４位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕のいずれかに記載のポリペプチド。
〔６〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｉ２４０Ｌ、Ｙ２５４Ｓ、及びＴ３４４Ａ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔５〕に記載のポリペプチド。
〔７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して３００位及び３９６位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕及び〔５〕のいずれかに記載のポリペプチド。
〔８〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｖ３００Ｇ及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔７〕に記載のポリペプチド。
〔９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して２４５位、２８５位、及び３１５位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕及び〔７〕のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１０〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｇ２４５Ａ、Ｌ２８５Ｉ、及びＧ３１５Ａ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔９〕に記載のポリペプチド。
〔１１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して１０９位、１９３位、２１４位、２１８位、２２８位、２３４位、２６２位、２８７位、２９４位、３０５位、３０６位、３０９位、３１６位、３３５位、及び５３３位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕、〔７〕、及び９のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１２〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｉ１０９Ｖ、Ｓ１９３Ａ、Ｉ２１４Ｌ、Ｆ２１８Ｌ、Ｎ２２８Ｄ、Ｓ２３４Ｔ、Ｖ２６２Ａ、Ｖ２８７Ｉ、Ｌ２９４Ｈ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｋ３０９Ｅ、Ａ３１６Ｓ、Ｖ３３５Ｇ、及び／またはＶ５３３Ｍ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔１１〕に記載のポリペプチド。
〔１３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して１３３位、２３３位、２３６位、及び５０３位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕、〔７〕、９、及び１１のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１４〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｑ１３３Ｈ、Ｔ２３３Ｓ、Ｉ２３６Ｖ、及び／またはＳ５０３Ｒ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔１３〕に記載のポリペプチド。
〔１５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して１０７位及び１２１位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、前記〔１〕～〔３〕、〔５〕、〔７〕、９、１１、及び１３のいずれかに記載のポリペプチド。
〔１６〕前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｋ１０７Ｑ及び／またはＫ１２１Ｎ、及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、前記〔１５〕に記載のポリペプチド。
〔１７〕前記ポリペプチドが、表１に列挙する配列番号２～１２４のいずれか１つにおけるアミノ酸置換を含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔１８〕前記ポリペプチドが、配列番号１の前記ルシフェラーゼポリペプチドのデヒドロルシフェリン及びその誘導体による阻害と比較して、前記デヒドロルシフェリン及びその誘導体による阻害に対する耐性を示す、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔１９〕前記ルシフェラーゼポリペプチドにより生成される前記生物発光シグナルが、配列番号１の前記ルシフェラーゼポリペプチドにより生成される前記生物発光シグナルと比較して少なくとも１０倍増加する、前記〔１〕～〔１８〕のいずれか１項に記載のポリペプチド。
〔２０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｉ２４０Ｌ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｎ７４Ｎ、Ｈ２４４Ｒ、Ｖ３００Ｇ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２２〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２４〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、Ｉ３９６Ｋ、Ｖ３００Ｇ、Ｌ３０５Ｐ、及びＳ３０６Ｐ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２６〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、Ｉ３９６Ｋ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、及びＩ１０９Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｉ２３０Ｆ、Ｖ３３５Ｇ、及びＩ４１０Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２８〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｓ、Ｙ１０８Ｆ、及びＴ３７６Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔２９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｓ、Ｆ５５Ｉ、Ｖ２６２Ａ、及びＩ４２２Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｙ１０８Ｆ、Ｖ２６１Ａ、Ｎ４２７Ｄ、及びＦ４３１Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＩ２３０Ｆ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３２〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＱ４８７Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｎ１５４Ｓ、Ｖ２６１Ａ、及びＩ４１０Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３４〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｙ１８３Ｃ、Ｖ２６１Ａ、及びＴ２８９Ｓ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＹ３２Ｃ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３６〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｆ２４６Ｙ、及びＶ２６１Ａ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＩ２３０Ｆ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３８〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｋ１２１Ｑ、Ｆ２４６Ｙ、及びＶ２６１Ａ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔３９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｋ１２１Ｑ、Ｖ２６１Ａ、及びＶ２８７Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してＶ３４８Ｉ、Ａ３１６Ｍ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ａ３４４Ｉ、Ｋ１２１Ｑ、Ｖ２６１Ａ、Ｖ２８７Ｉ、Ｋ１０７Ｎ、及びＴ２８９Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ａ３１６Ｗ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４２〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してＣ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｋ２０５Ｎ、Ｉ３９６Ｉ、Ｋ１２１Ｑ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４４Ｉ、及びＹ１０８Ｆからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４３〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４４〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、及びＴ３４４Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４５〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、Ｔ３４４Ｉ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ｙ３３９Ｍ、Ｉ２４０Ｖ、Ｔ２８４Ａ、Ｔ２８９Ｒ、Ｔ２８９Ｓ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、Ｌ４３７Ｒ、Ｗ５１０Ｒ、Ｃ２５７Ｒ、及びＳ３１３Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４６〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ｉ、Ｉ３９６Ｋ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４７〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、及びＹ３３９Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含む、前記〔２６〕に記載のポリペプチド。
〔４８〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔４９〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔５０〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｔ２８９Ｓ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、及びＷ５１０Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔５１〕前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｃ２５７Ｒ、Ｔ２８４Ａ、Ｔ２８９Ｓ、Ｓ３１３Ｔ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、Ｌ４３７Ｒ、及びＷ５１０Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、前記〔１〕または前記〔２〕に記載のポリペプチド。
〔５２〕生物発光アッセイのための試薬組成物であって、
５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドと、
前記ルシフェラーゼポリペプチドの基質と、を含む前記試薬組成物。
〔５３〕前記基質がラセミ体ルシフェリンである、前記〔５２〕に記載の試薬組成物。
〔５４〕前記基質がルシフェリンアナログである、前記〔５２〕に記載の試薬組成物。
〔５５〕前記ルシフェリンアナログが５，５－二置換ルシフェリンアナログである、前記〔５２〕に記載の試薬組成物。
〔５６〕マグネシウムを更に含む、前記〔５２〕に記載の組成物。
〔５７〕緩衝液、脱泡剤、ＡＴＰアーゼインヒビター、Ｌ－ルシフェリン、アザチオチミン、酵素安定剤、界面活性剤、ＡＴＰ生成酵素のインヒビター、細胞溶解剤、ＡＴＰ抽出剤、補酵素Ａ、チオール試薬、金属イオンキレート剤、プロテアーゼインヒビター、ピロリン酸、フッ化ナトリウム、デヒドロルシフェリン、及び塩からなる群から選択される１種以上の追加成分を更に含む、前記〔５２〕または前記〔５３〕に記載の組成物。
〔５８〕前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の組成物。
〔５９〕前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の組成物。
〔６０〕固体成分及び液体成分を含む、前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の組成物。
〔６１〕前記〔５２〕～〔５７〕のいずれかに記載の試薬組成物を含むキット。
〔６２〕生物発光アッセイを実行するための使用説明書を更に含む、前記〔６１〕に記載のキット。
〔６３〕前記生物発光アッセイが、カスパーゼ活性アッセイ、キナーゼ活性アッセイ、Ｐ４５０アッセイ、活性酸素種の測定、ヌクレオチドの検出もしくは定量化、細胞生存率の検出もしくは定量化、細胞障害性の検出もしくは定量化、または過酸化水素の検出もしくは定量化を含む、前記〔６１〕に記載のキット。
〔６４〕５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドと、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、を含むキット。
〔６５〕試料中のＡＴＰを検出または定量化するためのアッセイ系であって、
５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドを含む試薬組成物と、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、
ＡＴＰを含むか、または含むことが疑われる試料と、を含む、前記アッセイ系。
〔６６〕生物発光の検出及び／または測定のための装置を更に含む、前記〔６５〕に記載のアッセイ系。
〔６７〕前記試料が、細胞可溶化物試料、無細胞調製物試料、または精製酵素配合試料のうちの１種以上である、前記〔６５〕または前記〔６６〕に記載のアッセイ系。
〔６８〕前記試料が、環境試料、土壌試料、水試料、工業化学試料、法医学試料、食品ベースの試料、液体試料、飲料ベースの試料、または生化学試料のうちの１種以上である、前記〔６５〕または前記〔６６〕に記載のアッセイ系。
〔６９〕試料中のＡＴＰを検出または定量化する方法であって、
前記〔６５〕～〔６８〕のいずれかに記載のアッセイ系を、ＡＴＰを含むか、または含むことが疑われる前記試料に添加することと、
前記生物発光シグナルを検出または定量化することと、を含む前記方法。
〔７０〕試料中の標的酵素活性を検出または定量化するためのアッセイ系であって、
５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドを含む試薬組成物と、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、
標的酵素を含むか、または含むことが疑われる試料と、を含む前記アッセイ系。
〔７１〕前記５，５－二置換ルシフェリンアナログが、前記標的酵素の基質に結合されている、前記〔７０〕に記載のアッセイ系。
〔７２〕前記標的酵素が、プロテアーゼ、カスパーゼ、キナーゼ、シトクロム４５０、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、またはモノアミンオキシダーゼである、前記〔７０〕または前記〔７１〕に記載のアッセイ系。
〔７３〕生物発光の検出及び／または測定のための装置を更に含む、前記〔７０〕～〔７２〕のいずれかに記載のアッセイ系。
〔７４〕前記試料が細胞可溶化物である、前記〔７０〕～〔７３〕のいずれかに記載のアッセイ系。
〔７５〕前記試料が、環境試料、工業化学試料、法医学試料、食品ベースの試料、または生化学試料である、前記〔７０〕～〔７３〕のいずれかに記載のアッセイ系。
〔７６〕試料中の標的酵素活性を検出または定量化する方法であって、
前記〔７０〕～〔７５〕のいずれかに記載のアッセイ系を、標的酵素活性を含むか、または含むことが疑われる前記試料に添加することと、
前記生物発光シグナルを検出または定量化することと、を含む前記方法。
Claims (15)
- ５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で配列番号１のルシフェラーゼポリペプチドにより生成される生物発光シグナルと比較して増加した生物発光シグナルを前記５，５－二置換ルシフェリンアナログの存在下で生成することができるルシフェラーゼポリペプチドであって、
前記ルシフェラーゼポリペプチドが天然に存在せず、
前記ポリペプチドが、配列番号２との少なくとも７０％の配列同一性、及び配列番号１との１００％未満の配列同一性を含み、
前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、２４４位、２４９位、３３７位、３３９位、２４０位、２５４位、３４４位、３００位、３９６位、２４５位、２８５位、３１５位、１０９位、１９３位、２１４位、２１８位、２２８位、２３４位、２６２位、２８７位、２９４位、３０５位、３０６位、３０９位、３１６位、３３５位、５３３位、１３３位、２３３位、２３６位、５０３位、１０７位及び１２１位での少なくとも１つのアミノ酸置換を含む、ポリペプチド。 - 前記少なくとも１つのアミノ酸置換が、Ｈ２４４Ｗ、Ｈ２４４Ｇ、Ｈ２４４Ｒ、Ｉ２４０Ｌ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｖ３００Ｇ、Ｉ３９６Ｋ、Ｇ２４５Ａ、Ｌ２８５Ｉ、Ｇ３１５Ａ、Ｉ１０９Ｖ、Ｓ１９３Ａ、Ｉ２１４Ｌ、Ｆ２１８Ｌ、Ｎ２２８Ｄ、Ｓ２３４Ｔ、Ｖ２６２Ａ、Ｖ２８７Ｉ、Ｌ２９４Ｈ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｋ３０９Ｅ、Ａ３１６Ｓ、Ｖ３３５Ｇ、Ｖ５３３Ｍ、Ｑ１３３Ｈ、Ｔ２３３Ｓ、Ｉ２３６Ｖ、Ｓ５０３Ｒ、Ｋ１０７Ｑ、Ｋ１２１Ｎ及び／または前記少なくとも１つのアミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションから選択される、請求項１に記載のポリペプチド。
- （ｉ）前記ポリペプチドが、表１に列挙する配列番号２～１２４のいずれか１つにおけるアミノ酸置換を含む、又は
（ii）前記ポリペプチドが、配列番号１の前記ルシフェラーゼポリペプチドのデヒドロルシフェリン及びその誘導体による阻害と比較して、前記デヒドロルシフェリン及びその誘導体による阻害に対する耐性を示す、又は
（iii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｉ２４０Ｌ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（iv）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｎ７４Ｎ、Ｈ２４４Ｒ、Ｖ３００Ｇ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（ｖ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（vi）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（vii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、及びＩ３９６Ｋ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（viii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、Ｉ３９６Ｋ、Ｖ３００Ｇ、Ｌ３０５Ｐ、及びＳ３０６Ｐ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（ix）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ａ、Ｉ３９６Ｋ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、及びＩ１０９Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含み、 ここで、任意に
（Ａ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してＶ３４８Ｉ、Ａ３１６Ｍ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ａ３４４Ｉ、Ｋ１２１Ｑ、Ｖ２６１Ａ、Ｖ２８７Ｉ、Ｋ１０７Ｎ、及びＴ２８９Ｓからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含んでいてもよく、又は
（Ｂ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ａ３１６Ｗ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含んでいてもよく、又は
（Ｃ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してＣ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｋ２０５Ｎ、Ｉ３９６Ｉ、Ｋ１２１Ｑ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４４Ｉ、及びＹ１０８Ｆからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含んでいてもよく、又は
（Ｄ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含んでいてもよく、又は
（Ｅ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、及びＴ３４４Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含んでいてもよく、又は
（Ｆ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較して、Ｔ３４４Ｉ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ｙ３３９Ｍ、Ｉ２４０Ｖ、Ｔ２８４Ａ、Ｔ２８９Ｒ、Ｔ２８９Ｓ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、Ｌ４３７Ｒ、Ｗ５１０Ｒ、Ｃ２５７Ｒ、及びＳ３１３Ｔからなる群から選択される少なくとも１つの追加のアミノ酸置換、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含んでいてもよく、又は
（Ｇ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、及びＹ３３９Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを更に含んでいてもよい、又は
（Ｘ）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｉ２３０Ｆ、Ｖ３３５Ｇ、及びＩ４１０Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xi）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｓ、Ｙ１０８Ｆ、及びＴ３７６Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｓ、Ｆ５５Ｉ、Ｖ２６２Ａ、及びＩ４２２Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xiii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｙ１０８Ｆ、Ｖ２６１Ａ、Ｎ４２７Ｄ、及びＦ４３１Ｖ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xiv）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＩ２３０Ｆ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xv）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＱ４８７Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xvi）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｎ１５４Ｓ、Ｖ２６１Ａ、及びＩ４１０Ｍ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xvii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｙ１８３Ｃ、Ｖ２６１Ａ、及びＴ２８９Ｓ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xviii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＹ３２Ｃ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xix）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｆ２４６Ｙ、及びＶ２６１Ａ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xx）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、及びＩ２３０Ｆ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xxi）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｋ１２１Ｑ、Ｆ２４６Ｙ、及びＶ２６１Ａ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xxii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｙ２５４Ｓ、Ｔ３４４Ａ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｋ１２１Ｑ、Ｖ２６１Ａ、及びＶ２８７Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xxiii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｔ３４４Ｉ、Ｉ３９６Ｋ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xxiv）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ａ３１６Ｗ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xxv）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、及びＶ３４８Ｉ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xxvi）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｔ２８９Ｓ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、及びＷ５１０Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、又は
（xxvii）前記ポリペプチドが、配列番号１と比較してアミノ酸置換Ｈ２４４Ｗ、Ｓ１９３Ａ、Ｎ２２８Ｄ、Ｌ３０５Ｆ、Ｓ３０６Ｐ、Ｉ１０９Ｖ、Ｃ３８Ｒ、Ｆ５５Ｉ、Ｙ１０８Ｆ、Ａ３１６Ｗ、Ｙ３３９Ｍ、Ｔ３４２Ｓ、Ｖ３４８Ｉ、Ｃ２５７Ｒ、Ｔ２８４Ａ、Ｔ２８９Ｓ、Ｓ３１３Ｔ、Ｋ３５３Ｒ、Ｄ４３５Ｇ、Ｌ４３７Ｒ、及びＷ５１０Ｒ、及び／または前記アミノ酸置換の任意の保存的もしくは半保存的バリエーションを含む、請求項１または請求項２に記載のポリペプチド。 - 前記ルシフェラーゼポリペプチドにより生成される前記生物発光シグナルが、配列番号１の前記ルシフェラーゼポリペプチドにより生成される前記生物発光シグナルと比較して少なくとも１０倍増加する、請求項１～３のいずれか１項に記載のポリペプチド。
- 生物発光アッセイのための試薬組成物であって、
請求項１～４のいずれか１項に記載のルシフェラーゼポリペプチドと、
前記ルシフェラーゼポリペプチドの基質と、を含む前記試薬組成物。 - （ｉ）前記基質がラセミ体ルシフェリンであり、
任意に、前記試薬組成物が、
緩衝液、脱泡剤、ＡＴＰアーゼインヒビター、Ｌ－ルシフェリン、アザチオチミン、酵素安定剤、界面活性剤、ＡＴＰ生成酵素のインヒビター、細胞溶解剤、ＡＴＰ抽出剤、補酵素Ａ、チオール試薬、金属イオンキレート剤、プロテアーゼインヒビター、ピロリン酸、フッ化ナトリウム、デヒドロルシフェリン、及び塩からなる群から選択される１種以上の追加成分を更に含み、
更に任意に、
（Ａ）前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、又は
（Ｂ）前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、又は
（Ｃ）前記試薬組成物が、固体成分及び液体成分を含む、又は
（ii）前記基質がルシフェリンアナログであり、
任意に、
（Ａ）前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、又は
（Ｂ）前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、又は
（Ｃ）前記試薬組成物が、固体成分及び液体成分を含む、又は
（iii）前記ルシフェリンアナログが５，５－二置換ルシフェリンアナログであり、
任意に、
（Ａ）前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、又は
（Ｂ）前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、又は
（Ｃ）前記試薬組成物が、固体成分及び液体成分を含む、又は
（iv）前記試薬組成物が、マグネシウムを更に含み、
任意に、
（Ａ）前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、又は
（Ｂ）前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、又は
（Ｃ）前記試薬組成物が、固体成分及び液体成分を含む、又は
（ｖ）前記試薬組成物が、緩衝液、脱泡剤、ＡＴＰアーゼインヒビター、Ｌ－ルシフェリン、アザチオチミン、酵素安定剤、界面活性剤、ＡＴＰ生成酵素のインヒビター、細胞溶解剤、ＡＴＰ抽出剤、補酵素Ａ、チオール試薬、金属イオンキレート剤、プロテアーゼインヒビター、ピロリン酸、フッ化ナトリウム、デヒドロルシフェリン、及び塩からなる群から選択される１種以上の追加成分を更に含み、
任意に、
（Ａ）前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、又は
（Ｂ）前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、又は
（Ｃ）前記試薬組成物が、固体成分及び液体成分を含む、又は
（vi）前記試薬組成物が、単一の液体試薬である、又は
（vii）前記試薬組成物が、単一の乾燥試薬である、又は
（viii）前記試薬組成物が、固体成分及び液体成分を含む、請求項５に記載の組成物。 - 請求項６に記載の試薬組成物を含むキット。
- （ｉ）前記キットが生物発光アッセイを実行するための使用説明書を更に含む、又は
（ii）前記生物発光アッセイが、カスパーゼ活性アッセイ、キナーゼ活性アッセイ、Ｐ４５０アッセイ、活性酸素種の測定、ヌクレオチドの検出もしくは定量化、細胞生存率の検出もしくは定量化、細胞障害性の検出もしくは定量化、または過酸化水素の検出もしくは定量化を含む、請求項７に記載のキット。 - 請求項１～４のいずれか１項に記載のルシフェラーゼポリペプチドと、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、を含むキット。 - 試料中のＡＴＰを検出または定量化するためのアッセイ系であって、
請求項１～４のいずれか１項に記載のルシフェラーゼポリペプチドを含む試薬組成物と、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、
ＡＴＰを含むか、または含むことが疑われる試料と、を含む、前記アッセイ系。 - （ｉ）前記アッセイ系が、生物発光の検出及び／または測定のための装置を更に含む、
ここで、任意に、前記試料が、細胞可溶化物試料、無細胞調製物試料、または精製酵素配合試料のうちの１種以上であり、
更に任意に、前記試料が、環境試料、土壌試料、水試料、工業化学試料、法医学試料、食品ベースの試料、液体試料、飲料ベースの試料、または生化学試料のうちの１種以上である、又は、
（ii）前記試料が、細胞可溶化物試料、無細胞調製物試料、または精製酵素配合試料のうちの１種以上である、又は
（iii）前記試料が、環境試料、土壌試料、水試料、工業化学試料、法医学試料、食品ベースの試料、液体試料、飲料ベースの試料、または生化学試料のうちの１種以上である、請求項１０に記載のアッセイ系。 - 試料中のＡＴＰを検出または定量化する方法であって、
請求項１０又は１１のいずれかに記載のアッセイ系を、ＡＴＰを含むか、または含むことが疑われる前記試料に添加することと、
前記生物発光シグナルを検出または定量化することと、を含む前記方法。 - 試料中の標的酵素活性を検出または定量化するためのアッセイ系であって、
請求項１～４のいずれか１項に記載のルシフェラーゼポリペプチドを含む試薬組成物と、
５，５－二置換ルシフェリンアナログと、
標的酵素を含むか、または含むことが疑われる試料と、を含む前記アッセイ系。 - （ｉ）前記５，５－二置換ルシフェリンアナログが、前記標的酵素の基質に結合されている、及び／又は
（ii）前記標的酵素が、プロテアーゼ、カスパーゼ、キナーゼ、シトクロム４５０、ＤＮＡポリメラーゼ、ＲＮＡポリメラーゼ、またはモノアミンオキシダーゼである、及び／又は
（iii）前記アッセイ系が、生物発光の検出及び／または測定のための装置を更に含む、及び／又は
（iv）前記試料が細胞可溶化物である、及び／又は
（ｖ）前記試料が、環境試料、工業化学試料、法医学試料、食品ベースの試料、または生化学試料である、請求項１３に記載のアッセイ系。 - 試料中の標的酵素活性を検出または定量化する方法であって、
請求項１３又は１４に記載のアッセイ系を、標的酵素活性を含むか、または含むことが疑われる前記試料に添加することと、
前記生物発光シグナルを検出または定量化することと、を含む前記方法。
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