JPWO2019224189A5 - - Google Patents

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  1. 7-デヒドロコレステロール(7-DHC)の生成のための適切な宿主細胞において異種発現される、配列番号2と少なくとも45%、例えば少なくとも50、52、60、70、80、90、92、95、98又は100%までなどの同一性を有するC5-ステロールデサチュラーゼを有する酵素を含むコレステロール産生酵母細胞であって、ラノステロール及び/又はラトステロールを含む副産物に対する7-DHCの比は、非修飾宿主細胞と比較して少なくとも5%だけ増加される、コレステロール産生酵母細胞。
  2. C5-ステロールデサチュラーゼ活性を有する酵素を含み及び発現する、ステロールの総量に基づいて少なくとも84%の7-DHCを含み、好ましくは少なくとも85、88、90、92、95、97、98又は100%までの7-DHCを含むステロールミックスを産生する、請求項1に記載のコレステロール産生酵母細胞。
  3. コレスタ-7-エノール及び/又はラノステロールに対する7-DHCの比は18又はそれを超える範囲である、請求項1又は2に記載のコレステロール産生酵母細胞。
  4. コレスタ-7-エノール及び/又はラノステロールに対する7-DHCの比は、少なくとも5%だけ増加される、請求項1又は2に記載のコレステロール産生酵母細胞。
  5. ERG5及びERG6は、不活化されている、請求項1~のいずれか一項に記載のコレステロール産生酵母細胞。
  6. ステロールΔ24-レダクターゼ活性を有するEC1.3.1.72から選択される異種酵素を発現する、請求項1~のいずれか一項に記載のコレステロール産生酵母細胞。
  7. C8-イソメラーゼ活性を有する異種酵素を発現する、請求項1~のいずれか一項に記載のコレステロール産生酵母細胞。
  8. 酵母細胞によって産生されるステロールミックス中のコレスタ-7-エノール及び/又はラノステロールの量を低減するプロセスであって、C5-ステロールデサチュラーゼ活性を有する異種酵素を発現する工程を含み、前記酵素は、サッカロミセス・セレビジエ(Saccharomyces cerevisiae)などのサッカロミセス属(Saccharomyces)、Y.リポリティカ(Y.lipolytica)などのヤロウイア属(Yarrowia)、K.ラクティス(K.lactis)などのクルイベロミセス属(Klyveromyces)、シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)などのシゾサッカロミセス属(Schizosaccharomyces)、P.パストリス(P.pastoris)などのピキア属(Pichia)、C.アルビカンス(C.albicans)などのカンジダ属(Candida)、P.ロックフォルティ(P.roqueforti)などのペニシリウム属(Penicillium)、A.ニデュランス(A.nidulans)などのアスペルギルス属(Aspergillus)、C.ネオフォルマンス(C.neoformans)などのクリプトコックス属(Cryptococcus)、例えばイネいもち病菌(Magneporte oryzae)、メタリジウム・アクリダム(Metarhizium acridum)などのメタリジウム属(Metarhizium)及びトウモロコシ黒穂病菌(Ustilago maydis)などの黒穂菌属(Ustilago)からなる群から選択される、プロセス。
  9. 酵母細胞において、少なくとも84%の7-DHCを有するステロールミックスを生成するプロセスであって、
    (a)ERG5及びERG6を不活化する工程、
    (b)コレスタ-7,24-ジエノール、チモステロール又はトリエノールに対するステロールΔ24-レダクターゼ活性を有するEC1.3.1.72から選択される異種酵素を発現する工程、
    (c)C5-ステロールデサチュラーゼ活性を有する異種酵素を発現する工程であって、前記酵素は、サッカロミセス・セレビジエ(Saccharomyces cerevisiae)などのサッカロミセス属(Saccharomyces)、Y.リポリティカ(Y.lipolytica)などのヤロウイア属(Yarrowia)、K.ラクティス(K.lactis)などのクルイベロミセス属(Klyveromyces)、シゾサッカロミセス・ポンベ(Schizosaccharomyces pombe)などのシゾサッカロミセス属(Schizosaccharomyces)、P.パストリス(P.pastoris)などのピキア属(Pichia)、C.アルビカンス(C.albicans)などのカンジダ属(Candida)、P.ロックフォルティ(P.roqueforti)などのペニシリウム属(Penicillium)、A.ニデュランス(A.nidulans)などのアスペルギルス属(Aspergillus)、C.ネオフォルマンス(C.neoformans)などのクリプトコックス属(Cryptococcus)、例えばイネいもち病菌(Magneporte oryzae)、メタリジウム・アクリダム(Metarhizium acridum)などのメタリジウム属(Metarhizium)及びトウモロコシ黒穂病菌(Ustilago maydis)などの黒穂菌属(Ustilago)からなる群から選択される、工程、
    (d)ステロール産生に適切な条件下で前記酵母細胞を培養する工程であって、ステロールミックス中に存在するコレスタ-7-エノール及び/又はラノステロールに対する7-DHCの比は、17.2を超える、工程
    を含むプロセス。
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