JPWO2019156145A1 - 改良されたαβT加工細胞製造方法 - Google Patents
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Abstract
Description
1)樹状細胞ワクチン療法、2)αβT細胞療法、3)細胞傷害性T細胞(CTL)療法、4)γδT細胞療法、5)NK細胞療法、などが盛んに行われている(非特許文献1)。
本願発明者らは、鋭意研究の結果、αβT細胞をインビトロ培養する際、細胞培養液中に、マンノース代謝を介してタンパク質の糖鎖修飾(N−結合型糖鎖)を変化させる化合物 [2-deoxy-d-glucose (以下、2DGとする)]を添加すると、調製した免疫細胞は、従来のαβT加工細胞に比べて、抗原非特異的な強い抗腫瘍効果(エフェクター機能)を獲得することを発見した。
[1]単離された末梢血単核球を
(1)IL−2、
(2)抗CD3抗体、ならびに
(3)2-deoxy-d-glucose(2DG)又はその誘導体
存在下でインビトロ培養することを含む、αβT加工細胞の製造方法;
[2]前記αβT加工細胞中、αβT細胞約74%〜90%;γδT細胞およびNK細胞約10%〜26%を含む、[1]に記載の製造方法;
[3]前記αβT加工細胞中、CD8陽性メモリーT細胞が、74、75、76、77、78%以上含まれる、[1]に記載の製造方法;
[4]前記αβT加工細胞中、IL−2R陽性αβT細胞が20、21、22、23、24、25、26、27、28 29或いは30%以上および/または、パーフォリン陽性αβT細胞が10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或いは20%以上および/または、グランザイム陽性αβT細胞が15、16、17、18,19、20、21、22、23、24或いは25%以上含まれる[1]に記載の製造方法;
[5]2DGの誘導体や類似体が、2−デオキシマンノース−6−リン酸、2−デオキシマンノース−1−リン酸およびGDP−2−デオキシマンノース、2−フルオロ−2−デオキシグルコース、2−フルオロデオキシグルコース、2−フルオロ−デオキシグルコース−6−リン酸、2−フルオロ−デオキシグルコース−1−リン酸、2−フルオロ−デオキシマンノース、2−フルオロ−デオキシマンノース−6−リン酸、2−フルオロ−デオキシマンノース−1−リン酸、またはガラクトースやマンノース等の六員環を有する糖およびその誘導体ならびにこれらの生理学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択される、
[1]〜[4]のいずれか一項に記載の製造方法。
[7]前記がんがNKG2Dリガンドを発現している、[6]に記載の医薬組成物;
[8]NKG2Dリガンドが、MICA、MICB、RAET1ε、RAET1α、RAET1β、RAET1γ、RAET1δ、Mult1、H60a、H60b、H60c、およびULBP1〜6MICAからなる群から選択される、[7]に記載の医薬組成物;
[9]NKG2Dリガンドを発現しているがんが骨肉種、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、メラノーマ、膀胱がん、肺がん、膵臓がん、結腸がん、前立腺がん、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病、甲状腺がん、濾胞性甲状腺がん、骨髄異形成症候群(MDS)、線維肉腫、横紋筋肉腫、メラノーマ、ぶどう膜メラノーマ、奇形癌、神経芽腫、神経膠腫、神経膠芽腫、角化棘細胞腫、腎臓がん、未分化大細胞リンパ腫、食道扁平上皮細胞癌、肝細胞癌、濾胞性樹状細胞癌、腸がん、筋層浸潤がん、精巣がん、表皮癌、脾臓がん、頭頸部がん、胃がん、肝臓がん、骨がん、脳がん、網膜がん、胆道がん、小腸がん、唾液腺がん、子宮がん、精巣がん、結合組織がん、前立腺肥大症、脊髄形成異常、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、鼻咽腔がん、神経内分泌がん、中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド、食道胃がん、ファローピウス管がん、腹膜がん、漿液性乳頭状ミュラー管がん、悪性腹水、消化管間質腫瘍(GIST)、リー・フラウメニ症候群からなる群から選択される、[7]に記載の医薬組成物。
[11]前記細菌が、グラム陰性菌又はグラム陽性菌から選択される、[10]に記載の医薬組成物;
[12]前記ウイルスが、サイトメガロウイルス、インフルエンザウイルス、エプスタイン・バーウイルス(EBV)、アデノウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトTリンパ好性ウイルス(HTLV)およびHIVからなる群から選択される、[10]に記載の医薬組成物。
[14]前記再生医療等製品が、がんを治療又は予防するための再生医療等製品である、[13]に記載の使用;
[15]前記再生医療等製品が、細菌又はウイルスの感染を治療又は予防するための再生医療等製品である、[13]に記載の使用。
まず、αβT細胞の細胞源となるPBMCsを準備する。ここで「末梢血単核球(PBMCs)」とは、末梢血から分離された、リンパ球(ナチュラルキラー細胞、ナチュラルキラーT細胞、αβT細胞、γδT細胞など)、単球などを含む細胞集団を意味する。PBMCsを準備する方法は、特に限定されない。たとえば、採血により得られた末梢血を密度勾配遠心することで、PBMCsを得ることができる。1回の採血量は、αβT細胞療法を行う患者に応じて適宜設定すればよいが、例えば24〜72mL程度である。
また、多量の細胞を確保する必要がある場合には、成分採血装置を用いて単核球成分を採取することが可能である。
抗CD3抗体は培地中に添加しても、培養容器に固相化してもよいが、抗CD3抗体を固相化したフラスコ等の培養容器にリンパ球を播種することで、より好適に培養できることが知られている(例えば、特許3056230号)。IL−2の濃度は培地中に100〜2000IU/mLの濃度となるように添加することが好ましい。
培養は、34〜38℃、好ましくは37℃で、2〜10%、好ましくは5%のCO2条件下で行い、培養期間は1日〜20日、特に1〜2週間程度が好ましい。
使用する培地は特に限定されないが、AIM−V培地(インビトロジェン)、RPMI−1640培地(インビトロジェン)、ダルベッコ改変イーグル培地(インビトロジェン)、イスコフ培地(インビトロジェン)、KBM培地(コージンバイオ)、ALyS培地(細胞科学研究所)等細胞培養に使用されている市販の培地を使用することができる。あらかじめIL−2が含まれた、ヒト末梢血T細胞用培地(例えば、ALyS505N;細胞科学研究所)であってもよい。また、必要に応じて5〜20%の牛血清、牛胎児血清、ヒト血清、ヒト血漿等を添加することができる。
1)(i)人又は動物の体の構造又は機能の再建、修復又は形成、或いは
(ii)人又は動物の疾病の治療又は予防、
に使用されることが目的とされている物のうち、人又は動物の細胞に培養その他の加工を施したもの;或いは
2)人又は動物の疾病の治療に使用されることが目的とされている物のうち、人又は動物の細胞に導入され、これらの体内で発現する遺伝子を含有させたもの
を指す。特に限定しないが、
1) ヒト細胞加工製品
ア ヒト体細胞加工製品
イ ヒト体性幹細胞加工製品
ウ ヒト胚性幹細胞加工製品
エ ヒト人工多能性幹細胞加製品
2)動物 細胞加工製品
ア 動物体細胞加工製品
イ 動物体性幹細胞加工製品
ウ 動物胚性幹細胞加工製品
エ 動物人工多能性幹細胞加製品
3)遺伝子治療用製品
ア プラスミドベクター製品
イ ウイルスベクター製品
ウ 遺伝子発現治療製品(ア・イを除く。)
が挙げられ、本願発明のαβT加工細胞を大量に含む細胞集団はヒト体細胞加工製品に該当する。
本発明の医薬は、上述の本発明の製造方法により製造されたαβT加工細胞を含む、がんを治療・予防するための医薬である。
血液のサンプルは、すべての協力機関の倫理審査委員会の承認後に採取した。末梢血単核球(PBMCs)を、健常人ボランティアドナーの血液から単離した。PBMCsを、抗CD3モノクローナル抗体(ヤンセンファーマ株式会社)を固相化した培養容器で、IL−2を175IU/ml含むALyS培地(細胞科学研究所)中にて2週間自家血漿または血清を補って培養した。2DG(SIGMA ALDRICH社)は2mMを加えた。
実施例1で調製したαβT加工細胞をフローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)を用いて、解析した。細胞をPBSで洗浄後、遠心して、細胞を2%FBS+5mM EDTA入りのPBSに再懸濁し、セルストレーナーに通して凝集物を除去した。氷上で1時間、PE標識抗CD8抗体(Beckman Coulter社)、FITC標識抗CCR7抗体、PE/Cy5標識抗CD45RO抗体(BioLegend社)と共にインキュベートし、洗浄後、計測した。データは、Kaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した(図1)。
未熟なT細胞(ナイーブT細胞)は、未だ抗原刺激を受けていない、CD45RA抗原を細胞表面に発現しているリンパ球細胞であり、樹状細胞などの抗原提示細胞と遭遇することにより活性化され、エフェクターT細胞となる。
エフェクターT細胞はCD45RA抗原の代わりにCD45RO抗原を細胞表面に発現している。また活性化されたT細胞(エフェクターT細胞)は、病原体などの抗原が排除された後には一部の細胞が、メモリーT細胞となる。
メモリーT細胞は、特異的刺激か非特異的刺激かを問わず、既に抗原刺激を受けてCD45RO抗原を発現しているリンパ球細胞であり、長期に体内で特異的又は非特異的抗原の記憶を維持しながら保存される。メモリーT細胞はさらにエフェクターメモリー(effector memory;EM)T細胞(CCR7陰性CD45RO陽性)とセントラルメモリー(central memory;CM)T細胞(CCR7陽性CD45RO陽性)に分けることができる。
したがって、メモリーT細胞群を主成分として含有する製剤は、体内で長期に維持され、免疫細胞治療において高い治療効果が得られる可能性が高い。
3.1.サイトカイン(IL−2、IFN−γならびにTNFα)ならびにパーフォリンおよびグランザイムBの分泌
実施例1で調製したαβT加工細胞のサイトカイン産生能をBio−plex「ヒトサイトカインG1 27plexパネル」(BioRad社)を用いて測定した(図2A)。具体的には、実施例1で調製したαβT細胞をIL−2なしのRPMI1640+10%FCS添加培地に置換して培養し、24時間後の培養上清を回収して測定した。
さらにPMA(5ng/ml)とイオノマイシン(0.5μg/ml)刺激による脱顆粒後の培養上清中のパーフォリンおよびグランザイムBをそれぞれHuman Perforin ELISA Kit、Human Granzyme B ELISA Kit(abcam社)を用いて測定した(図2B)。
IL−2はT細胞を活性化し、IFN−γやTNFαはT細胞からも産生され、抗腫瘍効果を発揮する。パーフォリンはキラーT細胞やNK細胞の細胞質内顆粒中に存在する糖タンパク質であり、標的細胞の膜脂質中に入り込み穴を開けることによって細胞傷害をもたらす。グランザイムBはセリンプロテアーゼの一種で、パーフォリン経由で標的細胞内部に侵入してカスパーゼカスケードを活性化し、標的細胞にアポトーシスやネクローシスを誘導する。
従って、2DG処理したαβT加工細胞の細胞傷害活性は従来法に較べて高い細胞傷害活性を有することが示唆された。
蛍光染色法による細胞傷害活性試験を、テラスキャンVPC2(MINERVA TECH社)を用いて行った。がん細胞株K562(白血病細胞株)、Daudi(バーキットリンパ腫細胞株)および、HOS(骨肉種細胞株)およびDLD1(大腸がん細胞株)を蛍光色素CellstainR−Calcein−AM solution(同仁化学研究所)2.55〜5μg/mLで30分間標識した。標識したがん細胞とαβT加工細胞を1:25の割合で混合してRPMI1640+10%FBS(IL−2の添加なし)で2〜4時間インキュベートした。細胞傷害活性は、1%NP40(界面活性剤)で処理した時の蛍光減衰率を100%として、αβT加工細胞を共培養したがん細胞の蛍光強度の変化を指標に計算した(図2C)。
上記のように2DG処理したαβT加工細胞は、サイトカイン、パーフォリンおよびグランザイムB等のエフェクター因子の分泌が促進され、細胞傷害活性が亢進していた。細胞傷害性T細胞やNK細胞のエフェクター因子の放出には細胞内小胞に局在するCD107aの細胞表面への露出が脱顆粒の指標となることから、細胞傷害性の異なるがん細胞との共培養によるCD107aの細胞表面上の露出を検出した。
APC標識抗CD107a抗体(BioLegend社)存在下、αβT加工細胞とがん細胞を25:1の割合で混合し、6時間培養した。細胞を洗浄後、PE標識抗CD8抗体(Beckman Coulter社)で染色した。フローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)を用いて測定を行い、データは、Kaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した(図2D)。
上記細胞傷害活性と脱顆粒の関係から、2DG処理によってがん細胞を直接認識した細胞傷害活性が亢進している可能性が考えられた。そこでT細胞に発現するNKG2Dとがん細胞側に発現するNKG2Dリガンドを介した細胞傷害について確認した。
フローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)を用いてCD8+T細胞表面上のNKG2Dの発現を解析した。細胞をPBSで洗浄後、遠心して、細胞を2%FBS+5mM EDTA入りのPBSに再懸濁し、セルストレーナーに通して凝集物を除去した。氷上で1時間PE標識抗NKG2D抗体、FITC標識抗CD3抗体、PC5標識抗CD8抗体(Beckman Coulter社)と共にインキュベートし、洗浄後、計測した。データは、Kaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した(図3A)。
フローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)を用いて、および各種がん細胞表面におけるNKG2Dリガンドの発現を解析した。各がん培養細胞をPBSで洗浄後、遠心して、細胞を2%FBS+5mM EDTA入りのPBSに再懸濁し、セルストレーナーに通して凝集物を除去した。氷上で1時間抗MIC A/B抗体(BioLegend社)、抗ULBP1抗体、抗ULBP2/5/6抗体、および抗ULBP3抗体(R&D systems社)と共にインキュベートし、洗浄後、FITC標識抗マウスIgG抗体(Jackson ImmunoResearch社)を氷上で30分間反応させ、洗浄後計測した。データは、Kaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した(図3B)。
がんに対する細胞傷害能にαβT加工細胞上のNKG2Dが関与するか調べるため、αβT加工細胞をがん細胞と共培養する前に60分間抗ヒトNKG2Dブロッキング抗体(R&Dsystems社)又はコントロールとしてアイソタイプ抗体であるマウスIgG1(BioLegend社)と反応させた。細胞傷害活性の測定方法は3.2に準じて行った(図3C)。
2DGの効果がαβT加工細胞の解糖系阻害によるものなのか検証するため、2DG以外の解糖系阻害剤であるオキサメートならびに、ブロモピルベート(SIGMA ALDRICH社)を加え、2DGと同様の効果を有するかを検証した。
解糖系阻害剤である、オキサメート(2mM)またはブロモピルベート(10μM)を実施例1のαβT加工細胞調製の際、2DGの代わりに添加して、αβT加工細胞を調製した。調製したαβT加工細胞を実施例2に記載の方法でCD8+T細胞サブセットの分布解析を行った。
2DGは解糖系の阻害剤であることから、2DG以外の解糖系阻害剤であるオキサメートまたはブロモピルベートをαβT加工細胞調製の際、2DGの代わりに添加して、αβT加工細胞を調製し、それらの細胞の解糖能を評価した。
1)Glycolysis:定常状態における解糖能を示した。
2)Glycolytic Capacity:細胞が有する最大限の解糖能を示した。
実施例3の3.2.の方法を用いて、解糖系阻害剤であるオキサメート(2mM)またはブロモピルベート(10μM)処理したαβT加工細胞の各がん細胞に対する傷害活性を調べた。
従って2DG処理によるαβT加工細胞の細胞傷害活性の増強には解糖系阻害以外の機構の関与が示唆された。
2DGはマンノースと類似の構造を有することによってN結合型糖鎖を構成するマンノースの付加反応を阻害することが知られている。そこで2DGの効果がαβT加工細胞の糖鎖修飾への影響によるものなのか検証するため、2DG処理によるαβT加工細胞の糖鎖の変化ならびに、マンノースを加えて2DGの効果が抑制されるか検証した。
αβT加工細胞から、BlotGlyco(住友ベークライト社)を用いて糖鎖を精製、ラベル化し、LC−MS質量分析解析を行った(図5A)。ピークの番号の細胞あたりの糖鎖量(fmol)と糖鎖の推定構造を表1に示す。
2DGは糖鎖修飾の際のマンノース付加を競合的に阻害することが報告されている。それ故、2DG処理αβT細胞加工にD−マンノースを追加することで細胞傷害活性能が抑制されるか検討した。
実施例1の調製の際、D−マンノース(SIGMA ALDRICH社)またはL−マンノース(東京科成工業)を2mM添加してαβT加工細胞を調製し、3.2の方法で、細胞傷害活性を測定した。
次にマンノースが2DG処理αβT加工細胞の細胞内パーフォリン量の増加を阻害するか検証した。実施例1の調製の際、D−マンノース(SIGMA ALDRICH社)またはL−マンノース(東京科成工業)を2mM添加してαβT加工細胞を調製し、細胞をIntraPrep Permeabilization Reagent(Beckman Coulter社)にて処理し、細胞内パーフォリンの発現量をAPC標識抗パーフォリン抗体を用いて染色した。フローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)にて測定を行い、データは、Kaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した。Mean Fluorescence Intensity(MFI)値は平均蛍光強度で発現量を反映する。
エフェクター細胞の細胞内パーフォリン、グランザイムBはT細胞上のIL−2受容体からの刺激によって発現誘導されることが知られている。そこでIL−2受容体の発現を確認した。7.3.で調製したαβT加工細胞をPBSで洗浄後、遠心して、細胞を2%FBS+5mM EDTA入りのPBSに再懸濁し、セルストレーナーに通して凝集物を除去した。氷上で1時間PE/Cy5標識抗IL−2R抗体(BioLegend社)およびFITC標識抗CD3抗体(Beckman Coulter社)と共にインキュベートし、洗浄後、フローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)にて測定を行った。データは、Kaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した。
2DGで培養したαβ加工細胞のIL−2受容体発現が上昇していたことから、IL−2を介した細胞応答も上昇するのか確認した。2DGなし(cont)、2DG存在下(2DG)、2DGとD−マンノース存在下(2DG+D-Man)又は2DGとL−マンノース存在下(2DG+L-Man)で培養したαβT加工細胞を回収し、IL−2なしのRPMI1640培地+10%FCSにて24時間前培養した後、再度IL−2(0、50、250IU/ml、ニプロ社)添加RPMI1640培地+10%FCSにて培養した。24時間後の培養上清を回収し、IFN−γ産生量をELISA Kit(abcam社)で測定した(図5E)。
2DGによるIL−2受容体の発現量の変化がタンパク質発現レベルで制御を受けているのか遺伝子発現レベルで制御されているのかを確認した。2DGなし(cont)、2DG存在下(2DG)、2DGとD−マンノース存在下(2DG+D-Man)又は2DGとL−マンノース存在下(2DG+L-Man)で培養したαβT加工細胞からRNAを抽出し、逆転写酵素(Superscript III、サーモフィッシャーサイエンティフィック社)でcDNAを合成した。各条件のcDNAを用いてIL−2受容体αの遺伝子発現量をリアルタイムPCRシステム ViiA7(アプライドバイオシステムズ社)にて測定した。各サンプルのIL−2受容体αの発現量は内在性コントロールβ−アクチンで補正した後、contを1として相対値をグラフ化した(図5F)。
ガレクチン-3はβ-ガラクトシドに親和性を持つ糖認識ドメインを1つ以上有するガレクチンファミリーの1つであり、がん細胞から分泌され、血管新生を誘導するだけでなくCD8陽性T細胞上の糖鎖修飾受容体に結合して細胞の不応答またはアポトーシスを誘導する。2DGの効果がαβT加工細胞の細胞表面上の糖鎖修飾を変化させるものであるため、2DG処理したαβT加工細胞に対する、ガレクチン-3の影響に変化があるかを調べた。
2DG処理(±)のαβT加工細胞がガレクチン−3と結合するか検証した。0〜4mMの2DG添加で培養したαβT加工細胞にリコンビナントガレクチン−3(BBI Solutions社)を加え、4℃で30分、インキュベート後、抗ガレクチン−3抗体(LifeSpan BioScience社)と反応させ、FITC標識抗マウスIgG抗体(Jackson ImmunoResearch社)でガレクチン−3結合能を検出した。尚、ガレクチン−3結合の実験コントロールとしてガレクチンの糖鎖への結合を阻害するラクトース(SIGMA ALDRICH社)0.1M添加条件をおいた。フローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)にて測定を行い、データはKaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した。
0.1Mラクトース(SIGMA ALDRICH社)(±)の条件下で、αβT加工細胞を3μMリコンビナントガレクチン−3(BBI Solutions社)で刺激した。細胞をPBSで洗浄後、ANNEXIN V−FITC Apoptosis Detection Kit(ナカライテスク社)を用いてPropidium Iodide (PI)(死細胞検出用)とFITC標識AnnexinV(アポトーシス検出用)で染色した。フローサイトメーターFACS CantoII(BD Biosciences社)にて測定を行い、データはKaluza(Beckman Coulter社)ソフトウェアを用いて解析した。蛍光標識(FITC)−AnnexinVは細胞膜の内側に存在する膜リン脂質(フォスファチジルセリン:PS)と強い親和性を有するするため、アポトーシスによってPSが細胞膜表面に露出するとAnnexinVが結合する。DNAと結合するPIは細胞膜の損傷がない場合、細胞内に取り込まれない。後期のアポトーシス細胞はAnnexinVとPIの両方に染まる。
免疫不全マウス(NOGマウス)(6〜8週齢)を日本チャールズリバーより購入し、大阪大学動物実験委員会のガイドラインに従って、特定の病原体を含まない条件下で飼育した。0日目に、PBS200μl中の200万個のヒトがん細胞(K562−Luc)を全マウスに尾静脈注射した。続いて、2DG処理したαβT加工細胞(図7の2DG群:7匹のNOGマウス)、又は2DG処理していないαβT加工細胞(図7のcont群:6匹のNOGマウス)を、マウスあたり2000万個細胞の用量で週一回(0日目、7日目、14日目、21日目(図7Bの▲))静脈内注射した。Vehicle群(6匹のNOGマウス)には、PBS200μlを0日目、7日目、14日目、21日目に静脈内注射した。
腫瘍のサイズは、In vivo Imaging System(IVIS)(住商ファーマ社)にて28日目に測定し、比較検討した(図7A)。なお、Cont群において27日目にマウス1匹が死亡したため、Cont群のIVIS測定は5匹で行った。また、生存期間についても比較検討した(図7B)。なお、28日目以降のCont群とVehicle群の生存率変化は同じ動向を示し、32日目に生存率0となった。
Claims (15)
- 単離された末梢血単核球を
(1)IL−2、
(2)抗CD3抗体、ならびに
(3)2-deoxy-d-glucose(2DG)又はその誘導体
存在下でインビトロ培養することを含む、αβT加工細胞の製造方法。 - 前記αβT加工細胞中、αβT細胞約74%〜90%およびおよびγδT細胞およびNK細胞約10%〜26%を含む、請求項1に記載の製造方法。
- 前記αβT加工細胞中、CD8陽性メモリーT細胞が、78%以上含まれる、請求項1に記載の製造方法。
- 前記αβT加工細胞中、IL−2R陽性αβT細胞が25%以上および/または、パーフォリン陽性αβT細胞が15%以上および/または、グランザイム陽性αβT細胞が20%以上含まれる請求項1に記載の製造方法。
- 2DGの誘導体や類似体が、2−デオキシマンノース−6−リン酸、2−デオキシマンノース−1−リン酸およびGDP−2−デオキシマンノース、2−フルオロ−2−デオキシグルコース、2−フルオロデオキシグルコース、2−フルオロ−デオキシグルコース−6−リン酸、2−フルオロ−デオキシグルコース−1−リン酸、2−フルオロ−デオキシマンノース、2−フルオロ−デオキシマンノース−6−リン酸、2−フルオロ−デオキシマンノース−1−リン酸、またはガラクトースやマンノース等の六員環を有する糖およびその誘導体ならびにこれらの生理学的に許容される塩又は溶媒和物からなる群から選択される、
請求項1〜3のいずれか一項に記載の製造方法。 - 2-deoxy-d-glucose(2DG)又はその誘導体で刺激されたαβT加工細胞を含む、がんを治療又は予防するための医薬組成物。
- 前記がんがNKG2Dリガンドを発現している、請求項6に記載の医薬組成物。
- NKG2Dリガンドが、MICA、MICB、RAET1ε、RAET1α、RAET1β、RAET1γ、RAET1δ、Mult1、H60a、H60b、H60c、およびULBP1〜6からなる群から選択される、請求項7に記載の医薬組成物。
- NKG2Dリガンドを発現しているがんが骨肉種、乳がん、子宮頸がん、卵巣がん、子宮内膜がん、膀胱がん、肺がん、膵臓がん、結腸がん、前立腺がん、白血病、急性リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、B細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、多発性骨髄腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、骨髄性白血病、急性骨髄性白血病(AML)、慢性骨髄性白血病、甲状腺がん、濾胞性甲状腺がん、骨髄異形成症候群(MDS)、線維肉腫、横紋筋肉腫、メラノーマ、ぶどう膜メラノーマ、奇形癌、神経芽腫、神経膠腫、神経膠芽腫、角化棘細胞腫、腎臓がん、未分化大細胞リンパ腫、食道扁平上皮細胞癌、肝細胞癌、濾胞性樹状細胞癌、腸がん、筋層浸潤がん、精巣がん、表皮癌、脾臓がん、頭頸部がん、胃がん、肝臓がん、骨がん、脳がん、網膜がん、胆道がん、小腸がん、唾液腺がん、子宮がん、精巣がん、結合組織がん、前立腺肥大症、脊髄形成異常、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、鼻咽腔がん、神経内分泌がん、中皮腫、血管肉腫、カポジ肉腫、カルチノイド、食道胃がん、ファローピウス管がん、腹膜がん、漿液性乳頭状ミュラー管がん、悪性腹水、消化管間質腫瘍(GIST)、リー・フラウメニ症候群からなる群から選択される、請求項7に記載の医薬組成物。
- 2-deoxy-d-glucose(2DG)又はその誘導体で刺激されたαβT加工細胞を含む、細菌又はウイルスの感染を治療又は予防するための医薬組成物。
- 前記細菌が、グラム陰性菌又はグラム陽性菌から選択される、請求項10に記載の医薬組成物。
- 前記ウイルスが、サイトメガロウイルス、インフルエンザウイルス、エプスタイン・バーウイルス(EBV)、アデノウイルス、B型肝炎ウイルス、C型肝炎ウイルス、ヒトパピローマウイルス、ヒトTリンパ好性ウイルス(HTLV)およびHIVからなる群から選択される、請求項10に記載の医薬組成物。
- 再生医療等製品の製造における、請求項1〜5のいずれか一項に記載の方法により製造されたαβT加工細胞の使用。
- 前記再生医療等製品が、がんを治療又は予防するための再生医療等製品である、請求項13に記載の使用。
- 前記再生医療等製品が、細菌又はウイルスの感染を治療又は予防するための再生医療等製品である、請求項13に記載の使用。
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