JPWO2017164332A1 - 生体試料を生存状態で観察する顕微鏡および方法 - Google Patents
生体試料を生存状態で観察する顕微鏡および方法 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2017164332A1 JPWO2017164332A1 JP2018507415A JP2018507415A JPWO2017164332A1 JP WO2017164332 A1 JPWO2017164332 A1 JP WO2017164332A1 JP 2018507415 A JP2018507415 A JP 2018507415A JP 2018507415 A JP2018507415 A JP 2018507415A JP WO2017164332 A1 JPWO2017164332 A1 JP WO2017164332A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- control light
- chemiluminescence
- biological sample
- light
- pattern
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N21/76—Chemiluminescence; Bioluminescence
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/06—Means for illuminating specimens
-
- G—PHYSICS
- G02—OPTICS
- G02B—OPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
- G02B21/00—Microscopes
- G02B21/36—Microscopes arranged for photographic purposes or projection purposes or digital imaging or video purposes including associated control and data processing arrangements
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N2021/751—Comparing reactive/non reactive substances
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/75—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated
- G01N2021/757—Systems in which material is subjected to a chemical reaction, the progress or the result of the reaction being investigated using immobilised reagents
Landscapes
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Pathology (AREA)
- Plasma & Fusion (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Multimedia (AREA)
- Investigating, Analyzing Materials By Fluorescence Or Luminescence (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Description
以下、図面を用いて本発明の第1実施形態を説明する。
細胞等の生体試料の中に含まれ化学発光を生成する化学発光物質について説明する。本実施形態で使用される化学発光物質20は、制御光の照射により化学発光の状態が変化する特性を有しており、図4に示されるように、発光基質(ルシフェリン)25と、発光基質25と協働して化学発光を生成する自発光タンパク質融合体24とを含む。自発光タンパク質融合体24は、蛍光タンパク質21と発光酵素(ルシフェラーゼ)22とを含む。発光酵素22が発光基質25の化学反応(酸化)を触媒することで化学発光が発生する。発光酵素22の発光量子収率よりも蛍光タンパク質21の蛍光量子収率が高ければ、発光酵素22と蛍光タンパク質21との間のフェルスター共鳴エネルギー移動(FRET)により化学発光の光強度が増加する。そこで、発光酵素22と蛍光タンパク質21との自発光タンパク質融合体24は、高い光強度の化学発光を生成するナノスケールの光源という意味を込めて、ナノランタン(Nano-lantern)と呼ばれる。
化学発光物質20の化学発光、すなわち、自発光タンパク質融合体24と発光基質25との協働による化学発光を制御する制御光の作用について説明する。生体試料の観察面を、図5の51のように、化学発光の生成を許容する第1領域7aと化学発光の生成を抑制する第2領域7bとに分ける。第1領域7aには、化学発光の生成を抑制する制御光は照射されない。一方、第2領域7bには、化学発光の生成を抑制するために制御光が照射される。制御光は、第1領域7aを取り囲むドーナツ形状の第2領域7bのみに照射されるドーナツ光である。
生体試料7を生存状態で観察するための顕微鏡について説明する。
図1は、実施例1の顕微鏡を示す。光源1は、生体試料7に含まれる化学発光物質20からの化学発光の生成を抑制する制御光を射出する。制御光の強度は、1W/cm2以下と微弱なので生体試料7を損傷する度合いがわずかであり、観察対象の生体試料7を生存状態で観察することが可能である。シャッタ2は、生体試料7に対する制御光の入射をオンオフする。画定部4は、生体試料7の観察面のうちで、化学発光の生成を許容して化学発光物質20からの化学発光を検出すべき第1領域7aに制御光を照射せずに、第1領域7aを取り囲み化学発光の生成を抑制する第2領域7bに制御光を照射するように、制御光の照明形状(照射パターン)を画定する。制御光は画定部4によってドーナツ形状のドーナツ光にされる。画定部4として、例えば、Voltex位相板(ラセン型位相板)、空間光変調器、または、制御光を遮断する材料が第1領域7aに対応する部分に塗布された透明板を使用し得る。
図2は、実施例2の顕微鏡を示す。実施例2の顕微鏡は、実施例1の顕微鏡と基本構成において共通するので、相違する以下の3つの構成だけを説明する。
図3を用いて、図1に示される実施例1の顕微鏡を用いて生体試料7を生存状態で観察する方法を説明する。まず、ステップS1で、発光酵素および蛍光タンパク質を含み発光基質と協働して化学発光を生成する自発光タンパク質融合体と、制御光の照明の有無に応じて化学発光を制御する発光制御部分と、を含む生体試料7に発光基質を添加して生体試料7を準備する。ステップS1は、例えば以下のようなサブステップに区分され得る。
・サブステップ1:光スイッチング化学発光を発現する細胞、生体組織、個体などの生体試料7を作成する。
・サブステップ2:高開口数の対物レンズ観察に適した厚さのガラス製のディッシュ8上で生体試料7を培養する。
・サブステップ3:ディッシュ8内の培養が血清培地であれば、観察開始前に血清を取り除いた培地に交換する。
第2実施形態では、光スイッチング型の化学発光物質のうち、制御光の照射により化学発光の生成が促進する、いわゆるネガティブ型の化学発光物質を生体試料が含む例について説明する。ネガティブ型の化学発光物質は、例えばDronpaやrsEGFP、Skylan、rsTagRFPなどの蛍光タンパク質を含み、制御光を照射すると、化学発光の生成を促進させて蛍光タンパク質の発光強度を増加させることができる。図6Aは、ネガティブ型の化学発光物質20aを示す図であり、該図では発光酵素22と発光制御部分23とを合わせて図示している。制御光を照射する前では(下図)、励起状態にある発光酵素22のエネルギーが蛍光タンパク質21aに共鳴エネルギー移動(FRET)することにより、化学発光の生成が抑制されている。この状態から制御光を照射すると、化学発光の生成が促進され、蛍光タンパク質21aからの発光強度を増加させることができる(上図)。
第3実施形態では、光スイッチング型の化学発光物質のうち、互いに異なる2種類の制御光の照射により化学発光の生成が促進されたり抑制されたりする、いわゆるデカップル型の化学発光物質を生体試料が含む例について説明する。デカップル型の化学発光物質は、例えばDreiklangやPSFPなどの蛍光タンパク質を含み、第1制御光を照射すると、化学発光の生成を促進させて蛍光タンパク質の発光強度を増加させることができる。一方、第1制御光とは異なる第2制御光を照射すると、化学発光の生成を抑制して蛍光タンパク質の発光強度を低下させることができる。
第4実施形態では、制御光の照射により化学発光の波長(発光色)が変化する、いわゆる光変換型の化学発光物質を生体試料が含む例について説明する。光変換型の化学発光物質は、例えばKaedeやKikGR、PS-CFP1、mEOS2、mEOS3.2、PSmOrangeなどの蛍光タンパク質を含み、制御光を照射すると、化学発光の波長を第1波長から第2波長に変化する。図7は、光変換型の化学発光物質20cを示す図であり、該図では発光酵素22と発光制御部分23とを合わせて図示している。制御光を照射する前では(下図)、化学発光の波長が第1波長(例えば緑色光)であるのに対し、制御光を照射すると、化学発光の波長を第1波長から第2波長(例えば赤色光)に変化させることができる。
第5実施形態では、上記の実施例1および実施例2に示した顕微鏡を用いて生体試料を観察する他の方法について説明する。生体試料は、低周波情報(粗い構造情報)から高周波情報(細かい構造情報)までの様々な情報を含んでおり、従来の顕微鏡では、解像限界(回折限界)により高周波情報を得ることが困難であった。そこで、本実施形態では、制御光を既知の照射パターン(第1パターン)で生体試料の観察面に照射し、生体試料の周波数成分と制御光の照射パターンの周波数成分との相互干渉(相互作用)によって該観察面に形成された干渉パターン(第2パターン(例えばモアレパターン))を検出器13で検出する。そして、制御光の照射パターンの周波数成分と検出器13で検出された干渉パターンの周波数成分とに基づいて、生体試料の周波数成分を処理部16で求める。つまり、既知の照射パターンで制御光を生体試料に照射すると、生体試料の周波数成分を干渉パターン(モアレパターン)として低周波側にずらして検出することが可能となるため、従来の顕微鏡では観察することのできなかった生体試料の高周波情報までも観察することができる。
Claims (31)
- 生体試料を生存状態で観察するための顕微鏡であって、
前記生体試料は、化学発光を生成する化学発光物質を含み、
前記顕微鏡は、
前記化学発光の状態を変化させる制御光を射出する光源と、
前記生体試料の観察面に照射される前記制御光の照射パターンを画定する画定部と、
前記生体試料から射出された前記化学発光を検出する検出器と、
を備えることを特徴とする顕微鏡。 - 前記制御光は、その照射により前記化学発光の生成を抑制し、
前記画定部は、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記制御光を照射せずに、前記第1領域を取り囲む第2領域に前記制御光を照射するように、前記制御光の照射パターンを画定することを特徴とする請求項1に記載の顕微鏡。 - 前記制御光は、その照射により前記化学発光の生成を促進し、
前記画定部は、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記制御光を照射するように、前記制御光の照射パターンを画定することを特徴とする請求項1に記載の顕微鏡。 - 前記制御光は、照射により前記化学発光の生成を促進する第1制御光と、照射により前記化学発光の生成を抑制する第2制御光とを含み、
前記画定部は、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記第1制御光を照射し、前記第1領域を取り囲む第2領域に前記第2制御光を照射するように、前記第1制御光および前記第2制御光の照射パターンを画定することを特徴とする請求項1に記載の顕微鏡。 - 前記制御光は、その照射により前記化学発光の波長を第1波長から第2波長に変化させ、
前記画定部は、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記制御光を照射するように、前記制御光の照射パターンを画定し、
前記検出器は、前記第1波長の光を透過させずに前記第2波長の光を透過させるフィルタを介して、前記生体試料から射出された前記化学発光を検出することを特徴とする請求項1に記載の顕微鏡。 - 前記画定部は、前記観察面に複数の前記第1領域を形成するように前記制御光の照射パターンを画定することを特徴とする請求項2乃至5のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記検出器の検出結果を処理して前記化学発光の画像を生成する処理部を更に備えることを特徴とする請求項1乃至6のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記検出器の検出結果を処理する処理部を更に備え、
前記画定部は、前記生体試料の観察面に照射される前記制御光の照射パターンを第1パターンに画定し、
前記検出器は、前記生体試料の周波数成分と前記第1パターンの周波数成分との相互作用により前記観察面に形成された第2パターンを検出し、
前記処理部は、前記第1パターンの周波数成分と前記第2パターンの周波数成分とに基づいて前記生体試料の周波数成分を求めることを特徴とする請求項1に記載の顕微鏡。 - 前記第1パターンは、縞状のパターンを含み、
前記第2パターンは、前記生体試料の周波数成分と前記第1パターンの周波数成分との相互干渉により得られるモアレを含むことを特徴とする請求項8に記載の顕微鏡。 - 前記制御光は、1W/cm2以下の強度を有することを特徴とする請求項1乃至9のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記生体試料を刺激する刺激光を射出する第2の光源をさらに備えることを特徴とする請求項1乃至10のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記化学発光物質は、発光基質と、発光酵素および蛍光タンパク質を含み前記発光基質と協働して前記化学発光を生成する自発光タンパク質融合体と、前記発光酵素と結合され、前記制御光の照明の有無に応じて前記化学発光を制御する発光制御部分と、を含むことを特徴とする請求項1乃至11のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記自発光タンパク質融合体は、化学発光反応を発生させる第1の立体構造と、前記化学発光反応の発生が抑制される第2の立体構造とをとることができ、
前記制御光は、前記自発光タンパク質融合体の立体構造を前記第1の立体構造から前記第2の立体構造に変化させることを特徴とする請求項12に記載の顕微鏡。 - 前記発光制御部分は、フォトトロピンのLight-oxygen-voltage-sensing ドメイン2(LOV2ドメイン)、前記LOV2ドメインの変異体であるLOV2−I427V、BLUFタンパク質のAppAドメイン(1−133)、BLUFタンパク質のPapBドメイン(1−147)、または、BLUFタンパク質のYcgFドメイン(1−97)を含むことを特徴とする請求項12又は13のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記自発光タンパク質融合体は、イエロ−ナノランタン、シアン−ナノランタン、オレンジ−ナノランタン、グリーン−ナノランタン、および、レッド−ナノランタンの少なくとも1つを含むことを特徴とする請求項12乃至14のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記生体試料に前記発光基質を添加する添加部をさらに含むことを特徴とする請求項12乃至15のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記画定部は、Voltex位相板、空間光変調器、または、前記制御光を遮断する材料が部分的に塗布された透明板であることを特徴とする請求項1乃至16のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記生体試料を保持する保持部と、
前記光源から射出された前記制御光の前記画定部への入射をオンオフするシャッタと、
前記保持部と前記検出器との間に配置された対物レンズと、
をさらに備えることを特徴とする請求項1乃至17のいずれか1項に記載の顕微鏡。 - 前記検出器は、前記生体試料の前記画定部の側とは反対の側の前記観察面から射出された前記化学発光を検出することを特徴とする請求項18に記載の顕微鏡。
- 前記光源と前記保持部との間に配置され、前記光源から射出された前記制御光を前記保持部に向けて導き、前記画定部の側の前記観察面から射出された前記化学発光を前記検出器に向けて導くビームスプリッタをさらに備えることを特徴とする請求項18に記載の顕微鏡。
- 前記保持部は、前記制御光の光路と直交する方向に前記画定部に対して移動可能であることを特徴とする請求項18乃至20のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記制御光は、1光子吸収の380〜480nmの波長または2光子吸収の850〜940nmの波長を有することを特徴とする請求項1乃至21のいずれか1項に記載の顕微鏡。
- 前記生体試料は、互いに異なる波長の複数の化学発光をそれぞれ生成する複数種類の化学発光物質を含み、
前記検出器は、前記複数の化学発光を検出することを特徴とする請求項1乃至22のいずれか1項に記載の顕微鏡。 - 前記複数の化学発光を波長に基づいて分離する波長フィルタをさらに備え、
前記検出器は、前記波長フィルタによって分離された前記複数の化学発光のそれぞれを検出することを特徴とする請求項23に記載の顕微鏡。 - 生体試料を生存状態で観察する方法であって、
発光酵素および蛍光タンパク質を含み発光基質と協働して化学発光を生成する自発光タンパク質融合体と、前記発光酵素と結合され、前記化学発光の状態を変化させる制御光の照明の有無に応じて前記化学発光を制御する発光制御部分と、を含む前記生体試料に前記発光基質を添加する添加工程と、
前記制御光の照射パターンを画定し、前記照射パターンに画定された前記制御光で前記生体試料を照明する照明工程と、
前記生体試料から射出される前記化学発光を検出する検出工程と、
を含むことを特徴とする方法。 - 前記制御光は、その照射により前記化学発光の生成を抑制し、
前記照明工程では、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記制御光を照射せずに、前記第1領域を取り囲む第2領域に前記制御光を照射するように、前記制御光の照射パターンを画定することを特徴とする請求項25に記載の方法。 - 前記制御光は、その照射により前記化学発光の生成を促進し、
前記照明工程では、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記制御光を照射するように、前記制御光の照射パターンを画定することを特徴とする請求項25に記載の方法。 - 前記制御光は、照射により前記化学発光の生成を促進する第1制御光と、照射により前記化学発光の生成を抑制する第2制御光とを含み、
前記照明工程では、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記第1制御光を照射し、前記第1領域を取り囲む第2領域に前記第2制御光を照射するように、前記第1制御光および前記第2制御光の照射パターンを画定することを特徴とする請求項25に記載の方法。 - 前記制御光は、その照射により前記化学発光の波長を第1波長から第2波長に変化させ、
前記照明工程では、前記生体試料の観察面のうち前記化学発光を検出すべき第1領域に前記制御光を照射するように、前記制御光の照射パターンを画定し、
前記検出工程では、前記第1波長の光を透過させずに前記第2波長の光を透過させるフィルタを介して、前記生体試料から射出された前記化学発光を検出することを特徴とする請求項25に記載の方法。 - 前記照明工程では、前記生体試料の観察面に照射される前記制御光の照射パターンを第1パターンに画定し、
前記検出工程では、前記生体試料の周波数成分と前記第1パターンの周波数成分との相互作用により前記観察面に形成された第2パターンを検出し、前記第1パターンの周波数成分と前記第2パターンの周波数成分とに基づいて前記第生体試料の周波数成分を求めることを特徴とする請求項25に記載の方法。 - 前記制御光の光路に直交する方向における前記生体試料の位置を変更する変更工程を含み、
前記変更工程の後、前記照明工程および前記検出工程をその順序で繰り返し行うことを特徴とする請求項25乃至30のいずれか1項に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2016058946 | 2016-03-23 | ||
JP2016058946 | 2016-03-23 | ||
PCT/JP2017/011837 WO2017164332A1 (ja) | 2016-03-23 | 2017-03-23 | 生体試料を生存状態で観察する顕微鏡および方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2017164332A1 true JPWO2017164332A1 (ja) | 2019-02-28 |
JP6764469B2 JP6764469B2 (ja) | 2020-09-30 |
Family
ID=59899578
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2018507415A Active JP6764469B2 (ja) | 2016-03-23 | 2017-03-23 | 生体試料を生存状態で観察する顕微鏡および方法 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US11268906B2 (ja) |
EP (1) | EP3435135B1 (ja) |
JP (1) | JP6764469B2 (ja) |
WO (1) | WO2017164332A1 (ja) |
Families Citing this family (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN112996898A (zh) * | 2018-10-12 | 2021-06-18 | 株式会社尼康 | 传代时期算出装置、传代时期算出方法及程序 |
US20220054011A1 (en) * | 2020-08-19 | 2022-02-24 | Li-Cor, Inc. | Multi-modal imaging systems and methods |
Family Cites Families (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2008057997A (ja) * | 2006-08-29 | 2008-03-13 | Olympus Corp | 化学発光試料の観察方法および顕微鏡 |
JP5124216B2 (ja) * | 2007-09-14 | 2013-01-23 | オリンパス株式会社 | 光シグナル観察方法および光シグナル観察システム |
-
2017
- 2017-03-23 EP EP17770372.5A patent/EP3435135B1/en active Active
- 2017-03-23 WO PCT/JP2017/011837 patent/WO2017164332A1/ja active Application Filing
- 2017-03-23 JP JP2018507415A patent/JP6764469B2/ja active Active
-
2018
- 2018-09-18 US US16/133,867 patent/US11268906B2/en active Active
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
JP6764469B2 (ja) | 2020-09-30 |
WO2017164332A1 (ja) | 2017-09-28 |
US20190017937A1 (en) | 2019-01-17 |
EP3435135B1 (en) | 2020-09-23 |
EP3435135A1 (en) | 2019-01-30 |
US11268906B2 (en) | 2022-03-08 |
EP3435135A4 (en) | 2019-02-06 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Sanderson et al. | Fluorescence microscopy | |
US11988604B2 (en) | Optical microscopy with phototransformable optical labels | |
Tam et al. | Stochastic optical reconstruction microscopy (STORM) in comparison with stimulated emission depletion (STED) and other imaging methods | |
Eggeling et al. | Lens-based fluorescence nanoscopy | |
Bates et al. | Stochastic optical reconstruction microscopy (STORM): a method for superresolution fluorescence imaging | |
US8174692B2 (en) | High spatial resolution imaging of a structure of interest in a specimen | |
Müller et al. | STED microscopy and its applications: new insights into cellular processes on the nanoscale | |
JP5392406B2 (ja) | 顕微鏡装置、観察方法 | |
Staudt et al. | Far-field optical nanoscopy with reduced number of state transition cycles | |
US7897937B2 (en) | Method of fluorescence-microscopically imaging a structure in a sample with high three-dimensional spatial resolution | |
EP2291641B1 (en) | High spatial resolution imaging of a structure of interest in a specimen | |
Hell | Nobel Lecture: Nanoscopy with freely propagating light | |
Martial et al. | Programmable illumination and high-speed, multi-wavelength, confocal microscopy using a digital micromirror | |
Chojnacki et al. | Super-resolution fluorescence microscopy studies of human immunodeficiency virus | |
Bélisle et al. | Rapid multicomponent optical protein patterning | |
Orth et al. | High throughput multichannel fluorescence microscopy with microlens arrays | |
WO2017164332A1 (ja) | 生体試料を生存状態で観察する顕微鏡および方法 | |
Prakash | Laser-free super-resolution microscopy | |
CN111103678B (zh) | 晶格光片显微镜和在晶格光片显微镜中平铺晶格光片的方法 | |
Willig | In vivo super-resolution of the brain–How to visualize the hidden nanoplasticity? | |
US11073477B2 (en) | Epi-cone shell light-sheet super-resolution system and microscope | |
Prakash | High-density superresolution microscopy with an incoherent light source and a conventional epifluorescence microscope setup | |
US20240176123A1 (en) | Tiling light sheet microscope and imaging method of a sample | |
Jerome et al. | Fluorescence Microscopy | |
Bodner | Determining the oligomeric state of G-protein-coupled receptors via single-molecule fluorescence microscopy |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20190322 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20190322 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20200703 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20200812 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20200904 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20200911 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 6764469 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |