JPWO2017146062A1 - マイクロチップ - Google Patents

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Abstract

ＤＮＡ解析結果の再検証に適するマイクロチップを提供する。マイクロチップは、細胞を溶解する細胞溶解槽、及び当該細胞溶解槽と接続され溶解した細胞からＤＮＡを抽出するＤＮＡ抽出槽を少なくとも備え、ＤＮＡを解析するＤＮＡ解析部と、前記ＤＮＡ解析部と流路を介して接続され、ＤＮＡサンプルの一部を保存するＤＮＡ保存部と、を有する。

Description

［関連出願についての記載］
本発明は、日本国特許出願：特願２０１６−０３０６４１号（２０１６年 ２月２２日出願）の優先権主張に基づくものであり、同出願の全記載内容は引用をもって本書に組み込み記載されているものとする。
本発明は、ＤＮＡサンプルを解析するためのマイクロチップに関する。
マイクロチップ上で、ＤＮＡ抽出、ＰＣＲ、電気泳動などのＤＮＡ解析処理を実行する技術が開発されている（例えば、特許文献１）。また、該マイクロチップにサンプル溶液を注入するための注入具（例えば、特許文献２）も開発されている。
上記の注入具では、マイクロチップにサンプル溶液を注入する前に前処理を行う必要がある。そのため、近年では、該前処理もオートマチックに行うマイクロチップも開発されてきている。すなわち、このマイクロチップを用いた場合、利用者は、被験者の細胞が付着した綿棒をマイクロチップに装填すればよく、細胞の溶解、ＤＮＡ抽出、ＰＣＲ、そして、電気泳動がマイクロチップ上でオートマチックに実行される。
国際公開第２００９／１１９６９８号 特開２０１４−０９８５９５号公報
以下の分析は、本発明の観点からなされたものである。なお、上記先行技術文献の各開示を、本書に引用をもって繰り込むものとする。
上記のようなマイクロチップは、使い捨てタイプである場合が多く、研究室などにおいてＤＮＡ解析結果を改めて検証しようとしても、マイクロチップとともにサンプルが破棄されてしまい、再検証できないという問題が生じている。
そこで、本発明は、ＤＮＡ解析結果の再検証に適するマイクロチップを提供することを目的とする。
本発明の第１の視点によれば、細胞を溶解する細胞溶解槽、及び当該細胞溶解槽と接続され溶解した細胞からＤＮＡを抽出するＤＮＡ抽出槽を少なくとも備え、ＤＮＡを解析するＤＮＡ解析部と、前記ＤＮＡ解析部と流路を介して接続され、ＤＮＡサンプルの一部を保存するＤＮＡ保存部と、を有するマイクロチップが提供される。
本発明の第１の視点によれば、ＤＮＡ解析結果の再検証に適するマイクロチップが提供される。
一実施形態に係るマイクロチップの概要を説明するための図である。 マイクロチップ制御装置１０の具体的な一例を示す図である。 マイクロチップ１００上での流路制御機構の一例を説明するための図である。 マイクロチップ１００の具体的な一例を示す図である。 マイクロチップ１００の具体的な一例を示す図である。 マイクロチップ１００の具体的な一例を示す図である。 電気泳動部１２４の具体的な一例を示す図である。 マイクロチップ制御装置１０による処理のフローチャートである。 第２の実施形態のマイクロチップ１００の具体的な一例を示す図である。
本発明のとり得る好適な実施形態について図面を参照して詳細に説明する。なお、以下の記載に付記した図面参照符号は、理解を助けるための一例として各要素に便宜上付記したものであり、本発明を図示の態様に限定することを意図するものではない。
図１は、一実施形態に係るマイクロチップの概要を説明するための図である。図１に示すように、マイクロチップ１００は、ＤＮＡ解析部１０１とＤＮＡ保存部１０２とを含む。ＤＮＡ解析部１０１は、細胞を溶解する細胞溶解槽、及び細胞溶解槽と接続され溶解した細胞からＤＮＡを抽出するＤＮＡ抽出槽を少なくとも備える。ＤＮＡ保存部１０２は、ＤＮＡ解析部１０１と流路を介して接続される。
マイクロチップ１００では、ＤＮＡサンプルの一部がＤＮＡ解析部１０１におけるＤＮＡ解析に利用され、残りのＤＮＡサンプルがＤＮＡ保存部１０２に保存される。マイクロチップ１００の使用後に、操作者は、ＤＮＡ保存部１０２から保存されたＤＮＡサンプルを取り出して、別途保管する。このようにすれば、操作者は、保管したＤＮＡサンプルを使用してＤＮＡ解析結果を再検証することができる。
以下に具体的な実施の形態について、図面を参照してさらに詳しく説明する。なお、各実施形態において同一構成要素には同一の符号を付し、その説明を省略する。
［第１の実施形態］
第１の実施形態について、図面を参照しつつ具体的な一例を挙げて、マイクロチップ、マイクロチップ制御装置及びマイクロチップ制御システムを説明する。図２に示すように、マイクロチップ制御装置１０は、台座１１にテーブル１２が配置され、テーブル１２には、細胞溶解ユニット１３、ＰＣＲユニット１４、電気泳動ユニット１５が配置される。さらに、台座１１と蓋１６は、ヒンジを介して接続されており、蓋１６の開閉が可能である。
マイクロチップ１００は、テーブル１２に設けられたピンを、マイクロチップ１００に設けられたピン穴に嵌合させることで、テーブル１２上の所定の位置に載置される。蓋１６には、複数の加圧穴１７が設けられる。これらの加圧穴１７に対応する蓋１６の領域は貫通しており、加圧穴１７はチューブ１８を介して電磁弁１９に接続されている。また、蓋１６を閉じることで、加圧穴１７と、マイクロチップ１００上の各種制御孔とを接続する。なお、加圧穴１７と制御孔とはＯ−リング２０などの密封機構を介在させて密着することが好ましい。
蓄圧器２１には圧縮空気等の加圧媒体が封入されており、コントローラ２２が電磁弁１９を制御することで、加圧穴１７を介してマイクロチップ１００上の制御孔へ加圧媒体を出し入れする。なお、蓄圧器２１の内部圧力は、図示しない圧力センサ及びポンプ等により、所定の圧力を維持するように制御される。
蓋１６には、溶解した細胞からＤＮＡを抽出するためのＤＮＡ抽出ユニット２３が配置される。ＤＮＡ抽出ユニット２３は、例えば、電磁石やネオジム磁石などである。ＤＮＡ抽出ユニット２３は、コントローラ２２の制御の下で磁石をＤＮＡ抽出槽１２１に近づける、又はＤＮＡ抽出槽１２１から磁石を遠ざける。
細胞溶解ユニット１３及びＰＣＲユニット１４は、温度センサ、伝熱材、ペルチェ素子（熱電素子）、放熱板等を含む。細胞溶解ユニット１３は、細胞を含む溶液を加熱して溶解反応を実行し、ＰＣＲユニット１４は、ＰＣＲを実行する。
電気泳動ユニット１５は、キャピラリ電気泳動と蛍光標識の検出を実行する機構であり、蛍光標識検出機構としてハロゲンランプ、水銀灯、レーザ光などの励起装置及びフィルタやカメラなどを有する。電源部２４を介して電極に直流電圧が印加されてキャピラリ電気泳動が開始すると、電気泳動ユニット１５は、キャピラリ内を流れる蛍光標識を監視し、経時的な蛍光輝度の変化をグラフに示した検出結果を表示部２５を介して出力する。
なお、コントローラ２２は、マイクロチップ制御装置１０に搭載されたコンピュータに、そのハードウェアを用いて、後に詳述するマイクロチップ制御装置１０の処理を実行させるコンピュータプログラムにより実現することもできる。
マイクロチップ１００は、図３に示すように、弾性シート２１１〜２１４と、樹脂プレート２１５とを積層してなる。弾性シート２１１〜２１４は、耐熱性、耐酸・アルカリ性を有し、かつ伸縮性を有するシリコンゴム等を主材料とするのが望ましく、樹脂プレート２１５は、弾性シート２１１〜２１４の伸張を制御可能な程度に硬質であることが望ましい。弾性シート２１１〜２１４の一部は非接着であり、非接着箇所によって液体槽、流路、バルブ機構などが形成される。なお、図３において破線は、非接着箇所を示す。また、バルブ機構は、流路開閉機構とも称する。
ここで、図３（Ａ）〜（Ｃ）を用いて、マイクロチップ１００上での流路制御機構の一例を説明する。図３（Ａ）〜（Ｃ）に示すように、マイクロチップ１００において、液体槽２４０Ａが、弾性シート２１１と弾性シート２１２の間に形成され、流路２５０Ｘ及び２５０Ｙに接続される。樹脂プレート２１５において液体槽２４０Ａに対応する箇所は貫通して制御孔となっており、液体槽２４０Ａの上部には蓋１６に設けられた加圧穴１７Ａを介して加圧媒体が出し入れ可能である。同様に、液体槽２４０Ｂは流路２５０Ｙ及び２５０Ｚに接続され、液体槽２４０Ｂの上部には加圧穴１７Ｂを介して加圧媒体が出し入れ可能である。流路２５０Ｘ、２５０Ｙは、閉鎖されている。
このような前提の下、マイクロチップ制御装置１０は、まず、図３（Ａ）に示すように、バルブ機構２７０Ｚへ加圧媒体を注入して流路２５０Ｚを閉じ、次に、バルブ機構２６０Ｙから加圧媒体を放出することで流路２５０Ｙを開放する。そして、マイクロチップ制御装置１０は、加圧穴１７Ａを介して液体槽２４０Ａへ加圧媒体を印加する。その結果、図３（Ｂ）に示すように、液体槽２４０Ａから押し出された液体は、流路２５０Ｙを通って液体槽２４０Ｂへ到達し、弾性シート２１１を押し上げて液体槽２４０Ｂに溜まる。そして、マイクロチップ制御装置１０は、液体槽２４０Ａへの加圧媒体の印加圧が所定値を超えて、液体槽２４０Ａから液体を排出したと判断すると、図３（Ｃ）に示すように、流路２５０Ｙの上流側（すなわち、液体槽２４０Ａ側）から、バルブ機構２６０Ｙへ加圧媒体を注入する。その結果、流路２５０Ｙ内の液体は液体槽２４０Ｂへ押し出され、液体輸送が完了する。その後、流路２５０Ｘを閉じる必要が無くなったため、マイクロチップ制御装置１０は、バルブ機構２７０Ｘから加圧媒体を放出する。
図４は、マイクロチップ１００の具体的な一例を示す図である。図４（Ａ）は、マイクロチップ１００の斜視図であり、図４（Ｂ）は、マイクロチップ１００の三面図であり、図４（Ｃ）は、マイクロチップ１００の分解図である。図４に示すように、マイクロチップ１００は、チップ本体１１１と、チップ本体１１１に取り付けられるカードケース１１２と、カードケース１１２に挿入されるＤＮＡ吸収カード１１３とを有する。カードケース１１２には、スワブ受容部１１４が一体的に設けられる。スワブ受容部１１４とＤＮＡ吸収カード１１３とは、流路１１５を介して接続され、流路１１５はバルブ機構１１６によって開閉される。なお、図１のＤＮＡ解析部１０１は、チップ本体１１１及びスワブ受容部１１４に相当し、ＤＮＡ保存部１０２は、カードケース１１２及びＤＮＡ吸収カード１１３に相当する。また、ＤＮＡ吸収カード１１３は、溶液吸収性媒体とも称され、例えば、ＦＴＡ（登録商標）カードなどのセルロースシートを含む。なお、カードケース１１２やＤＮＡ吸収カード１１３をチップ本体１１１と一体的に形成することもできるが、使用後に操作者が容易にＤＮＡ吸収カード１１３をチップ本体１１１から容易に切り離せることが望ましい。
スワブ受容部１１４は、図５に示すように、筒形状を有し、上方開口部から細胞が付着したスワブ（綿棒）１１７が挿入される。スワブ受容部１１４の内空は細胞溶解槽１１８に相当し、細胞溶解槽１１８には、下方開口部を介してチップ本体１１１側から細胞溶解バッファが流入する。流路１１５は、チップ本体１１１の内部で弾性シート間の非接着箇所と、チップ本体１１１の表面上に設けられる溝と、カードケース１１２に設けられる貫通孔とによって形成される。また、流路１１５は、複数に枝分かれする分枝状部を有し、分枝状部の各々の開放端部が、ＤＮＡ吸収カード１１３上の異なる領域と当接する。すなわち、開放端部は、三角形の頂点に配置されるなど、ＤＮＡ吸収カード１１３全体において細胞溶解液が吸収されるように配置される。図５の細胞溶解槽１１８でも、図３と同様の流路制御が行われる。すなわち、細胞溶解液をＤＮＡ解析部１０１側に移動させる場合には、バルブ機構１１６Ａが開いた状態で、かつ、バルブ機構１１６Ｂが閉じた状態で、加圧媒体が細胞溶解槽１１８に流入して、細胞溶解槽１１８内の細胞溶解液が流路１１５に押し出される。また、細胞溶解液をＤＮＡ保存部１０２側に移動させる場合には、バルブ機構１１６Ａが閉じた状態で、かつ、バルブ機構１１６Ｂが開いた状態で、加圧媒体が細胞溶解槽１１８に流入して、細胞溶解槽１１８内の細胞溶解液が流路１１５に押し出される。なお、流路１１５をなす溝はカードケース１１２に設けても良く、また、溝を設けることなく弾性シート間の非接着箇所とカードケース１１２に設けられる貫通孔とを直接接続するようにしても良い。
図６は、図４のチップ本体１１１における溶液槽等の配置を示す図である。なお、図６では、流路１１５などは一部を除き省略されている。図６に示すように、チップ本体１１１は、細胞溶解槽１１８と接続される開口部１１９を有する。また、チップ本体１１１には、バッファ・試薬槽１２０、ＤＮＡ抽出槽１２１、ＰＣＲ槽１２２、秤量槽１２３、及び電気泳動部１２４が設けられる。
バッファ・試薬槽１２０には、細胞溶解バッファ、洗浄バッファ、ＤＮＡ溶出バッファなどが注入される。細胞溶解バッファは、例えば、アルカリリシスバッファであり、開口部１１９を介して細胞溶解槽１１８へ移動される。細胞を溶解する際に加熱処理などが必要な場合には、マイクロチップ制御装置１０やスワブ受容部１１４に、処理に必要な機構、例えばヒーターや伝熱版が設けられる。
細胞溶解槽１１８内の細胞溶解液は、ＤＮＡ抽出槽１２１と、ＤＮＡ吸収カード１１３とに移動される。具体的に説明すると、マイクロチップ制御装置１０は、先ず、細胞溶解槽１１８内の細胞溶解液がＤＮＡ抽出槽１２１へ移動するように、バルブ機構１１６Ａが開いた状態で、かつ、バルブ機構１１６Ｂが閉じた状態に流路制御する（図５参照）。そして、マイクロチップ制御装置１０は、細胞溶解槽１１８に加圧媒体を印加して、細胞溶解液をＤＮＡ抽出槽１２１へ移動させる。この時、ＤＮＡ抽出槽１２１の容量は細胞溶解槽１１８よりも小さいため、細胞溶解液の一部が細胞溶解槽１１８に残留する。続いて、マイクロチップ制御装置１０は、細胞溶解槽１１８内の細胞溶解液がＤＮＡ吸収カード１１３へ移動するように、バルブ機構１１６Ａが閉じた状態で、かつ、バルブ機構１１６Ｂが開いた状態に流路制御する（図５参照）。そして、マイクロチップ制御装置１０は、細胞溶解槽１１８に加圧媒体を印加して、残りの細胞溶解液をＤＮＡ吸収カード１１３に吸収させる。
ＤＮＡ抽出槽１２１では、ＤＮＡ抽出処理が実行される。ＤＮＡ抽出処理について具体的に説明すると、ＤＮＡ抽出槽１２１には、磁性ビーズ（シリカ）が予め封入されている。マイクロチップ制御装置１０は、細胞溶解液内のＤＮＡが磁性ビーズに吸着すると、洗浄バッファで磁性ビーズを洗浄する。続いて、マイクロチップ制御装置１０は、バッファ・試薬槽１２０からＤＮＡ溶出バッファをＤＮＡ抽出槽１２１へ移動させてＤＮＡを磁性ビーズから溶出し、さらにＤＮＡ溶出バッファをＰＣＲ槽１２２へ移動させる。なお、マイクロチップ制御装置１０は、細胞溶解液などをＤＮＡ抽出槽１２１から排出する際にネオジム磁石に磁性ビーズを吸着させることで、細胞溶解液及び洗浄バッファと一緒に磁性ビーズが排出されることを防止する。
ＤＮＡ抽出方法は諸般のプロトコルなどを参照して、例えば、洗浄回数を増やすなど改変することができる。また、ＤＮＡ抽出方法は、磁性ビーズを用いる方法に限定されるものでは無く、例えば、カラムを用いた方法を採用してもよい。
ＰＣＲ槽１２２では、ＰＣＲユニット１４による温度制御を受けてＰＣＲが実行される。具体的には、ＤＮＡ抽出槽１２１からＰＣＲ槽１２２への流路は分岐しており、ＤＮＡ溶出バッファは各ＰＣＲ槽１２２に分流する。ＰＣＲ槽１２２にはプライマーセットが予め封入され、ＤＮＡ溶出バッファはポリメラーゼなどのＰＣＲ反応に必要な試薬も含む。そのため、マイクロチップ制御装置１０は、ＰＣＲユニット１４を介してＰＣＲ槽１２２を温度制御すれば、ＰＣＲを実行することができる。この温度制御は、ホットスタート処理、サイクル反応（ディネイチャ反応、アニール反応及びプライマー伸張反応）に関する温度制御である。
秤量槽１２３は、ＰＣＲ反応後のアンプリコンを含むＰＣＲ溶液を秤取るための機構である。具体的には、秤量槽１２３の容量はＰＣＲ槽１２２よりも小さく、ＰＣＲ槽１２２内のＰＣＲ溶液が秤量槽１２３へ完全に移動していない状態で液体輸送が完了する。言い換えると、マイクロチップ制御装置１０は、ＰＣＲ槽１２２内にＰＣＲ溶液の一部を残留させることで、アンプリコンを含むＰＣＲ溶液を秤取る。
電気泳動部１２４は、図７に示すように、サンプル流路３０１、キャピラリ３０２及びポリマ槽３０３を有する。具体的には、サンプル流路３０１は、電極槽３０４を介して秤量槽１２３と接続され、反対側の端でリザーバ３０５と接続される。リザーバ３０５は、サンプル流路３０１へ流入したサンプルのオーバーフローを防止するための機構である。キャピラリ３０２は、電極槽３０４を介してポリマ槽３０３と接続される。また、サンプル流路３０１とキャピラリ３０２は平行して延在し、サンプル流路３０１とキャピラリ３０２に直交するブリッジ３０６により接続されている。電極槽３０４には、蓋１６に取り付けられた電極が挿入される。
マイクロチップ制御装置１０は、キャピラリ３０２及びブリッジ３０６にポリマを充填し、サンプルインジェクションを行った後に、電気泳動を実行する。その電気泳動の際に、マイクロチップ制御装置１０は、電気泳動ユニット１５によってキャピラリ内を流れる標識を監視し、経時的な蛍光輝度の変化をグラフに示した検出結果を、表示部２５を介して出力する。
以下では、上述のマイクロチップ制御装置１０による処理の流れを概説する。図８は、マイクロチップ制御装置１０による処理のフローチャートである。図８に示すように、マイクロチップ制御装置１０は、細胞溶解槽１１８へ細胞溶解バッファを移動させて細胞を溶解する（ステップＳ０１）。続いて、マイクロチップ制御装置１０は、細胞溶解液の一部をＤＮＡ抽出槽１２１へ移動させ（ステップＳ０２）、残りの細胞溶解液をＤＮＡ吸収カード１１３に吸収させる（ステップＳ０３）。次に、マイクロチップ制御装置１０は、ＤＮＡ抽出処理を実行して（ステップＳ０４）、ＰＣＲ反応を実行する（ステップＳ０５）。そして、マイクロチップ制御装置１０は、ＰＣＲ溶液を秤量して（ステップＳ０６）、電気泳動を実行する（ステップＳ０７）。
上述のように、第１の実施形態のマイクロチップ１００では、ＤＮＡサンプルの一部がＤＮＡ解析部１０１におけるＤＮＡ解析に利用され、残りのＤＮＡサンプルがＤＮＡ保存部１０２に保存される。マイクロチップ１００の使用後に、操作者は、ＤＮＡ保存部１０２から保存されたＤＮＡサンプルを取り出して、別途保管する。このようにすれば、操作者は、保管したＤＮＡサンプルを使用してＤＮＡ解析結果を再検証することができる。
［第２の実施形態］
第１の実施形態では、細胞溶解槽１１８とＤＮＡ吸収カード１１３とが接続され、ＤＮＡ吸収カード１１３がＤＮＡを含む細胞溶解液を吸収する場合、すなわちＤＮＡサンプルが細胞溶解液である場合を説明した。同様に、第２の実施形態では、ＤＮＡ吸収カード１１３がＤＮＡを含むＤＮＡ溶出バッファを吸収する場合、すなわち、ＤＮＡサンプルがＤＮＡ溶出バッファである場合を説明する。
具体的に一例をあげて説明すると、図９に示すように、第２の実施形態のマイクロチップ１００では、細胞溶解槽１１８と接続される開口部１１９は、バッファ・試薬槽１２０と、ＤＮＡ抽出槽１２１とに接続される。また、ＤＮＡ抽出槽１２１は、下流の流路１１５を介してＤＮＡ吸収カード１１３と接続される。
第２の実施形態では、マイクロチップ制御装置１０は、ＤＮＡ抽出処理後に、ＤＮＡ抽出槽１２１からＤＮＡ溶出バッファをＰＣＲ槽１２２へ移動させる。ＰＣＲ槽１２２の容量は、ＤＮＡ抽出槽１２１よりも小さく、ＤＮＡ溶出バッファの一部がＤＮＡ抽出槽１２１に残留する。続いて、マイクロチップ制御装置１０は、ＤＮＡ抽出槽１２１内のＤＮＡ溶出バッファがＤＮＡ吸収カード１１３へ移動するように流路を制御して、残りの細胞溶解液をＤＮＡ吸収カード１１３に吸収させる。
このように、第２の実施形態のマイクロチップ１００では、抽出処理後のＤＮＡサンプルを保存することができる。なお、同様にして、ＰＣＲ溶液を保存することもできるが、ＤＮＡ解析結果の再検証という点に鑑みれば、溶解処理後、又は抽出処理後のＤＮＡサンプルを保存することが好ましい。
上記の実施形態の一部又は全部は、以下の付記のようにも記載され得るが、以下には限られない。
（付記１）
細胞を溶解する細胞溶解槽、及び当該細胞溶解槽と接続され溶解した細胞からＤＮＡを抽出するＤＮＡ抽出槽を少なくとも備え、ＤＮＡを解析するＤＮＡ解析部と、
前記ＤＮＡ解析部と流路を介して接続され、ＤＮＡサンプルの一部を保存するＤＮＡ保存部と、
を有するマイクロチップ。
（付記２）
前記ＤＮＡ保存部が、前記流路を介して前記細胞溶解槽と接続されることを特徴とする付記１に記載のマイクロチップ。
（付記３）
前記ＤＮＡ保存部が、前記流路を介して前記ＤＮＡ抽出槽と接続されることを特徴とする付記１に記載のマイクロチップ。
（付記４）
前記ＤＮＡ保存部が溶液吸収性媒体を備え、当該溶液吸収性媒体に前記ＤＮＡサンプルが吸収されることを特徴とする付記１〜３のいずれか１つに記載のマイクロチップ。
（付記５）
前記溶液吸収性媒体が、前記ＤＮＡ保存部から着脱可能に設けられることを特徴とする付記４に記載のマイクロチップ。
（付記６）
前記溶液吸収性媒体が、セルロースシートを含むことを特徴とする付記５に記載のマイクロチップ。
（付記７）
前記流路が複数に枝分かれする分枝状部を有し、当該分枝状部の各々の開放端部が、前記溶液吸収性媒体上の異なる領域と当接することを特徴とする付記６に記載のマイクロチップ。
（付記８）
前記細胞溶解槽には、前記細胞が付着した綿棒が投入されることを特徴とする付記１〜７のいずれか１つに記載のマイクロチップ。
（付記９）
前記流路を開閉する流路開閉機構を有する付記１〜８のいずれか１つに記載のマイクロチップ。
（付記１０）
細胞を溶解する細胞溶解槽、及び当該細胞溶解槽と接続され溶解した細胞からＤＮＡを抽出するＤＮＡ抽出槽を少なくとも備え、ＤＮＡを解析するＤＮＡ解析ステップと、
前記ＤＮＡ解析部と流路を介して接続され、ＤＮＡサンプルの一部を保存するＤＮＡ保存ステップと、を含むＤＮＡ解析方法。
（付記１１）
細胞を溶解する細胞溶解槽、及び当該細胞溶解槽と接続され溶解した細胞からＤＮＡを抽出するＤＮＡ抽出槽を少なくとも備え、ＤＮＡを解析するＤＮＡ解析部と、前記ＤＮＡ解析部と流路を介して接続され、ＤＮＡサンプルの一部を保存するＤＮＡ保存部と、を有するマイクロチップと、
前記マイクロチップを制御するマイクロチップ制御装置と含む、
ＤＮＡ解析システム。
なお、上記の特許文献の開示を、本書に引用をもって繰り込むものとする。本発明の全開示（請求の範囲を含む）の枠内において、さらにその基本的技術思想に基づいて、実施形態ないし実施例の変更・調整が可能である。また、本発明の請求の範囲の枠内において種々の開示要素（各請求項の各要素、各実施形態ないし実施例の各要素、各図面の各要素等を含む）の多様な組み合わせ、ないし選択が可能である。すなわち、本発明は、請求の範囲を含む全開示、技術的思想にしたがって当業者であればなし得るであろう各種変形、修正を含むことは勿論である。
１０ マイクロチップ制御装置
１１ 台座
１２ テーブル
１３ 細胞溶解ユニット
１４ ＰＣＲユニット
１５ 電気泳動ユニット
１６ 蓋
１７ 加圧穴
１８ チューブ
１９ 電磁弁
２０ Ｏ−リング
２１ 蓄圧器
２２ コントローラ
２３ ＤＮＡ抽出ユニット
２４ 電源部
２５ 表示部
１００ マイクロチップ
１０１ ＤＮＡ解析部
１０２ ＤＮＡ保存部
１１１ チップ本体
１１２ カードケース
１１３ ＤＮＡ吸収カード
１１４ スワブ受容部
１１５ 流路
１１６ バルブ機構
１１７ スワブ（綿棒）
１１８ 細胞溶解槽
１１９ 開口部
１２０ バッファ・試薬槽
１２１ ＤＮＡ抽出槽
１２２ ＰＣＲ槽
１２３ 秤量槽
１２４ 電気泳動部
２１１〜２１４ 弾性シート
２１５ 樹脂プレート
２４０ 液体槽
２５０ 流路
２６０、２７０ バルブ機構
３０１ サンプル流路
３０２ キャピラリ
３０３ ポリマ槽
３０４ 電極槽
３０５ リザーバ
３０６ ブリッジ

Claims (9)

  1. 細胞を溶解する細胞溶解槽、及び当該細胞溶解槽と接続され溶解した細胞からＤＮＡを抽出するＤＮＡ抽出槽を少なくとも備え、ＤＮＡを解析するＤＮＡ解析部と、
    前記ＤＮＡ解析部と流路を介して接続され、ＤＮＡサンプルの一部を保存するＤＮＡ保存部と、
    を有するマイクロチップ。
  2. 前記ＤＮＡ保存部が、前記流路を介して前記細胞溶解槽と接続されることを特徴とする請求項１に記載のマイクロチップ。
  3. 前記ＤＮＡ保存部が、前記流路を介して前記ＤＮＡ抽出槽と接続されることを特徴とする請求項１に記載のマイクロチップ。
  4. 前記ＤＮＡ保存部が溶液吸収性媒体を備え、当該溶液吸収性媒体に前記ＤＮＡサンプルが吸収されることを特徴とする請求項１〜３のいずれか１項に記載のマイクロチップ。
  5. 前記溶液吸収性媒体が、前記ＤＮＡ保存部から着脱可能に設けられることを特徴とする請求項４に記載のマイクロチップ。
  6. 前記溶液吸収性媒体が、セルロースシートを含むことを特徴とする請求項５に記載のマイクロチップ。
  7. 前記流路が複数に枝分かれする分枝状部を有し、当該分枝状部の各々の開放端部が、前記溶液吸収性媒体上の異なる領域と当接することを特徴とする請求項６に記載のマイクロチップ。
  8. 前記細胞溶解槽には、前記細胞が付着した綿棒が投入されることを特徴とする請求項１〜７のいずれか１項に記載のマイクロチップ。
  9. 前記流路を開閉する流路開閉機構を有する請求項１〜８のいずれか１項に記載のマイクロチップ。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6614328B2 (ja) * 2016-02-22 2019-12-04 日本電気株式会社 マイクロチップ
CN111304077B (zh) * 2020-03-03 2023-10-24 广东工业大学 一种用于核酸提取的集成微流控芯片及其提取方法
US20220099622A1 (en) * 2020-09-30 2022-03-31 Icare Diagnostics International Co. Ltd. Nucleic acid detection kit and nucleic acid detection device

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008513022A (ja) * 2004-09-15 2008-05-01 マイクロチップ バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド マイクロ流体デバイス
JP2013537043A (ja) * 2010-09-21 2013-09-30 ザ ユニバーシティー オブ ハル 核酸を増幅する方法および装置
WO2014034952A1 (ja) * 2012-09-03 2014-03-06 国立大学法人九州大学 がんに対する免疫療法の有効性の予測方法
WO2015141790A1 (ja) * 2014-03-20 2015-09-24 日本電気株式会社 マイクロチップ、マイクロチップ制御方法及びマイクロチップ制御装置

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5863801A (en) * 1996-06-14 1999-01-26 Sarnoff Corporation Automated nucleic acid isolation
JPWO2009119698A1 (ja) 2008-03-24 2011-07-28 日本電気株式会社 マイクロチップの流路制御機構
EP3690433B9 (en) 2010-03-09 2022-12-21 ANDE Corporation Biochip with reagent storage
US8720036B2 (en) * 2010-03-09 2014-05-13 Netbio, Inc. Unitary biochip providing sample-in to results-out processing and methods of manufacture
JP2014098595A (ja) 2012-11-13 2014-05-29 Sony Corp サンプル液注入用具及びサンプル液熱処理装置
GB201403522D0 (en) * 2014-02-28 2014-04-16 Ge Healthcare Uk Ltd Improvements in and relating to processed biological sample storage
JP6614328B2 (ja) * 2016-02-22 2019-12-04 日本電気株式会社 マイクロチップ

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008513022A (ja) * 2004-09-15 2008-05-01 マイクロチップ バイオテクノロジーズ， インコーポレイテッド マイクロ流体デバイス
JP2013537043A (ja) * 2010-09-21 2013-09-30 ザ ユニバーシティー オブ ハル 核酸を増幅する方法および装置
WO2014034952A1 (ja) * 2012-09-03 2014-03-06 国立大学法人九州大学 がんに対する免疫療法の有効性の予測方法
WO2015141790A1 (ja) * 2014-03-20 2015-09-24 日本電気株式会社 マイクロチップ、マイクロチップ制御方法及びマイクロチップ制御装置

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