JPWO2017061288A1 - チロシンホスファターゼ及びチロシンキナーゼ活性の測定方法 - Google Patents
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Abstract
Description
〔1〕以下の工程を含むことを特徴とするチロシンホスファターゼ活性の測定方法、
(1)測定対象とするチロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、リン酸化チロシン残基を脱リン酸化する工程、
(2)脱リン酸化させたチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物を結合させる工程、
(3)ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める工程。
で表される化合物であることを特徴とする〔1〕に記載のチロシンホスファターゼ活性の測定方法。
で表される化合物を含むことを特徴とするチロシンホスファターゼ活性測定用キット。
で表される化合物であることを特徴とする〔5〕に記載のチロシンホスファターゼ活性測定用キット。
(1)被験物質の存在下で、チロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる工程、
(2)チロシンホスファターゼと接触させたリン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物と接触させる工程、
(3)ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める工程。
で表される化合物であることを特徴とする〔7〕に記載のチロシンホスファターゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。
で表される化合物を含むことを特徴とする糖尿病の診断薬。
で表される化合物であることを特徴とする〔11〕に記載の糖尿病の診断薬。
(1)測定対象とするチロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、非リン酸化チロシン残基をリン酸化する工程、
(2)リン酸化しなかったチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物を結合させる工程、
(3)工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(4)工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドの非リン酸化チロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物を結合させる工程、
(5)工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(6)工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める工程。
で表される化合物であることを特徴とする〔13〕に記載のチロシンキナーゼ活性の測定方法。
で表される化合物を含むことを特徴とするチロシンキナーゼ活性測定用キット。
で表される化合物であることを特徴とする〔17〕に記載のチロシンキナーゼ活性測定用キット。
(1)被験物質の存在下で、チロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる工程、
(2)チロシンキナーゼと接触させた非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物と接触させる工程、
(3)工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(4)工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる工程、
(5)工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(6)工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める工程。
で表される化合物であることを特徴とする〔19〕に記載のチロシンキナーゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。
本発明のチロシンホスファターゼ活性の測定方法は、(1)測定対象とするチロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、リン酸化チロシン残基を脱リン酸化する工程、(2)脱リン酸化させたチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物を結合させる工程、及び(3)ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める工程を含むことを特徴とするものである。
工程(1)では、測定対象とするチロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、リン酸化チロシン残基を脱リン酸化する。
PTP1Bの活性化がインスリン抵抗性の原因となっているという報告があり(Haftchenary et al., ACS Med. Chem. Lett. 2015, 6, 982-986)、このことから、PTP1Bの活性測定により、インスリン抵抗性や糖尿病を診断できると考えられる。PTP1Bは、主に筋肉、肝臓、脂肪組織で発現しているので、これらの器官や組織の破砕物中に含まれるPTP1Bを測定対象とすることができる。
筋肉におけるLAR PTPの高活性化がインスリン抵抗性の発症に関与しているという報告がある(Zabolotny et al., Proc Natl Acad Sci U S A, 2001, 98(9):5187-92)。このことから、LAR PTPの活性測定により、インスリン抵抗性や糖尿病を診断できると考えられる。
被検者から細胞を採取し、その細胞中のPRL-1活性を評価し、膵臓癌の診断をする方法が知られている(特表2006-519616)。
哺乳類から得られる細胞可溶化物中で、LMW-PTPが過剰発現しているかどうかにより、癌を診断する方法が知られている(特表2006-501153)。
SHP1は、ピロリ菌の発癌タンパク質であるCagAの活性を低下させ、また、この酵素は、EBウイルスの感染により発現が抑制される(Saju et al., Nat Microbiol. 2016 Mar 14;1:16026. doi: 10.1038/nmicrobiol.2016.26.)。従って、胃の上皮細胞におけるSHP1活性を測定することにより、胃がんの罹り易さを診断できる。
工程(2)では、脱リン酸化させたチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物を結合させる。
工程(3)では、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める。
この方法では、リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物と特異的に結合する担体を用いて、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物を単離し、ペプチドに結合した蛍光物質によって一般式(I)で表される化合物の量を測定する。
この方法では、リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物に、前記蛍光物質とFRETペアを形成する蛍光物質を結合させ、ペプチドに結合させた蛍光物質及び/又は一般式(I)で表される化合物に結合させた蛍光物質の蛍光の変化によって、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する。
この方法では、リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物に、前記蛍光物質に対するクエンチャーを結合させ、ペプチドに結合させた蛍光物質の蛍光の変化によって、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する。
本発明のチロシンホスファターゼ活性測定用キットは、リン酸化チロシン残基を含むペプチドと一般式(I)で表される化合物を含むことを特徴とする。
本発明のチロシンホスファターゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法は、(1)被験物質の存在下で、チロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる工程、(2)チロシンホスファターゼと接触させたリン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる工程、及び(3)ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める工程を含むことを特徴とするものである。
工程(1)では、被験物質の存在下で、チロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる。
工程(2)では、チロシンホスファターゼと接触させたリン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる。
工程(3)では、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める。
本発明の糖尿病の診断薬は、リン酸化チロシン残基を含むペプチドと一般式(I)で表される化合物を含むことを特徴とするものである。
本発明のチロシンキナーゼ活性の測定方法は、(1)測定対象とするチロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、非リン酸化チロシン残基をリン酸化する工程、(2)リン酸化しなかったチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物を結合させる工程、(3)工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、(4)工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドの非リン酸化チロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物を結合させる工程、(5)工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、及び(6)工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める工程を含むことを特徴とするものである。
工程(1)では、測定対象とするチロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、非リン酸化チロシン残基をリン酸化する。
工程(2)では、リン酸化しなかったチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物を結合させる。
工程(3)では、工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する。
工程(4)では、工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドの非リン酸化チロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物を結合させる。
工程(5)では、工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する。
工程(6)では、工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める。
本発明のチロシンキナーゼ活性測定用キットは、非リン酸化チロシン残基を含むペプチドと一般式(I)で表される化合物を含むことを特徴とするものである。
本発明のチロシンキナーゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法は、(1)被験物質の存在下で、チロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる工程、(2)チロシンキナーゼと接触させた非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる工程、(3)工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、(4)工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる工程、(5)工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、(6)工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める工程を含むことを特徴とするものである。
工程(1)では、被験物質の存在下で、チロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる。
工程(2)では、チロシンキナーゼと接触させた非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる。
工程(3)では、工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する。
工程(4)では、工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる。
酸化剤、金属触媒、及び一般式(I)で表される化合物は、「〔1〕チロシンホスファターゼ活性の測定方法」に記載したものと同様のものを使用できる。
工程(5)では、工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する。
工程(6)では、工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める。
(1)チロシンホスファターゼPTP1BによるpY-RR-Srcの脱リン酸化の確認
pY-RR-Src(アミノ酸配列:RRLIEDAE(pY)AARG、ミリポア12-217)の100 μM溶液(60 mM NaOAc buffer pH5.5に溶解)50 μLに対して、human recombinant PTP1B(フナコシ 6301-100、凍結融解繰り返し厳禁)を1 μg分加え、室温で1時間インキュベートした。PTP1Bを加える前(control)とインキュベート後の100 μMペプチド溶液のサンプルを10倍量の0.1% TFA水溶液で希釈し、その溶液0.5-1 μMとCHCA溶液 (0.5 mg/mL in acetonitrile : 0.1% TFA = 1 : 1) 1 μMをMALDI-TOF-MSプレート上で混合し、室温で乾燥、MALDI-TOF-MS解析(Bruker, UltrafleXtreme)により、基質ペプチドpY-RR-Srcの脱リン酸化反応を確認した。図2(A)に1時間後のMSチャートを示した。
RR-Src(アミノ酸配列:RRLIEDAEYAARG、Anaspec AS22581)の100 μM溶液(12.5 mM HEPES buffer pH7.4, 10 mM MnCl2, ATP 1 mMに溶解)50 μLに対して、ErbB1(life PR7295B、凍結融解繰り返し厳禁)を1 μg分加え、37 ℃でインキュベートし、上記と同様のMALDI-TOF-MS測定手法により、基質ペプチドのリン酸化の経時変化を観測した。図2(B)に24時間後のMSチャートを示した。
下記の構造のN3 compoundのチロシン残基への結合性を調べた。
各反応50 μLのスケールで、100 mM Phosphate buffer (pH 7.4)中、最終の濃度がペプチドRR-Src/pY-RR-Src = 100/100 μM、HRP (horse radish peroxidase, Aldrich) 50 nM, N3 compound 1 mMになるように0.6 mlのエッペンドルフチューブ中に調整した。
図3に示したN3 comp. 10 eqと同じ組成のペプチド溶液(ペプチド 100 μM、加えたN3 compound 1 mM)に対して2 mMのDBCO-biotin(Aldrich)を加え、37 ℃で1時間インキュベートした。その溶液1 μMとCHCA 溶液(0.5 mg/mL in acetonitrile : 0.1% TFA = 1 : 1) 1 μMをMALDI-TOF-MSプレート上で混合し、室温で乾燥、MALDI-TOF-MS解析(Bruker, UltrafleXtreme)により、共有結合形成反応を確認した(図5下段)。
実施例2及び4に記載の方法により調製したN3 compound修飾RR-Srcおよび、ビオチン修飾RR-Src (100 μM peptide)溶液に対してFITC (5-Isothiocyanatofluorescein, TCI)の1 M DMSO溶液を最終濃度が4 mMになるように加え、室温で1時間インキュベートした。N3 compound修飾RR-Srcを蛍光標識した溶液をサンプル1、ビオチン修飾RR-Srcを蛍光標識した溶液をサンプル2とし、両サンプルの溶液からペプチド100 pmol相当分を取り、FG-beads Streptavidin beads(多摩川精機)200 μgと100 mM Phosphate buffer (pH7.4) 中で30分撹拌し、ビオチン修飾ペプチドを磁気ビーズに結合させた。その後、1 mLの100 mM Phosphate buffer (pH7.4)で3回ビーズを洗浄し、100 μLにビーズを懸濁させてプレートリーダー(TECAN、Ex/Em = 485/510 nm)で蛍光測定した。
数少ない従来のチロシンホスファターゼ測定法であるマラカイトグリーン法との比較のため、Progmega社Tyrosine Phosphatase Assay Systemの検出限界を実験により算出した。
Claims (22)
- 以下の工程を含むことを特徴とするチロシンホスファターゼ活性の測定方法、
(1)測定対象とするチロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、リン酸化チロシン残基を脱リン酸化する工程、
(2)脱リン酸化させたチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物を結合させる工程、
(3)ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める工程。 - 一般式(I)で表される化合物が、下記の一般式(Ia)
で表される化合物であることを特徴とする請求項1に記載のチロシンホスファターゼ活性の測定方法。 - リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物と特異的に結合する担体を用いて、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物を単離し、前記蛍光物質によってペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項1又は2に記載のチロシンホスファターゼ活性の測定方法。
- リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物に、前記蛍光物質とFRETペアを形成する蛍光物質又は前記蛍光物質に対するクエンチャーを結合させ、ペプチドに結合させた蛍光物質及び/又は一般式(I)で表される化合物に結合させた蛍光物質の蛍光の変化によって、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項1又は2に記載のチロシンホスファターゼ活性の測定方法。
- リン酸化チロシン残基を含むペプチドと下記の一般式(I)
で表される化合物を含むことを特徴とするチロシンホスファターゼ活性測定用キット。 - 一般式(I)で表される化合物が、下記の一般式(Ia)
で表される化合物であることを特徴とする請求項5に記載のチロシンホスファターゼ活性測定用キット。 - 以下の工程を含むことを特徴とするチロシンホスファターゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法、
(1)被験物質の存在下で、チロシンホスファターゼとリン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる工程、
(2)チロシンホスファターゼと接触させたリン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物と接触させる工程、
(3)ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定し、その量からチロシンホスファターゼ活性を求める工程。 - 一般式(I)で表される化合物が、下記の一般式(Ia)
で表される化合物であることを特徴とする請求項7に記載のチロシンホスファターゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。 - リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物と特異的に結合する担体を用いて、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物を単離し、ペプチドに結合した蛍光物質によって一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項7又は8に記載のチロシンホスファターゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。
- リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物に、前記蛍光物質とFRETペアを形成する蛍光物質又は前記蛍光物質に対するクエンチャーを結合させ、ペプチドに結合させた蛍光物質及び/又は一般式(I)で表される化合物に結合させた蛍光物質の蛍光の変化によって、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項7又は8に記載のチロシンホスファターゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。
- リン酸化チロシン残基を含むペプチドと下記の一般式(I)
で表される化合物を含むことを特徴とする糖尿病の診断薬。 - 一般式(I)で表される化合物が、下記の一般式(Ia)
で表される化合物であることを特徴とする請求項11に記載の糖尿病の診断薬。 - 以下の工程を含むことを特徴とするチロシンキナーゼ活性の測定方法、
(1)測定対象とするチロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを反応させ、非リン酸化チロシン残基をリン酸化する工程、
(2)リン酸化しなかったチロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物を結合させる工程、
(3)工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(4)工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドの非リン酸化チロシン残基に、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物を結合させる工程、
(5)工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(6)工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める工程。 - 一般式(I)で表される化合物が、下記の一般式(Ia)
で表される化合物であることを特徴とする請求項13に記載のチロシンキナーゼ活性の測定方法。 - 非リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物と特異的に結合する担体を用いて、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物を単離し、前記蛍光物質によってペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項13又は14に記載のチロシンキナーゼ活性の測定方法。
- 非リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物に、前記蛍光物質とFRETペアを形成する蛍光物質又は前記蛍光物質に対するクエンチャーを結合させ、ペプチドに結合させた蛍光物質及び/又は一般式(I)で表される化合物に結合させた蛍光物質の蛍光の変化によって、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項13又は14に記載のチロシンキナーゼ活性の測定方法。
- 非リン酸化チロシン残基を含むペプチドと下記の一般式(I)
で表される化合物を含むことを特徴とするチロシンキナーゼ活性測定用キット。 - 一般式(I)で表される化合物が、下記の一般式(Ia)
で表される化合物であることを特徴とする請求項17に記載のチロシンキナーゼ活性測定用キット。 - 以下の工程を含むことを特徴とするチロシンキナーゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法、
(1)被験物質の存在下で、チロシンキナーゼと非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを接触させる工程、
(2)チロシンキナーゼと接触させた非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、下記の一般式(I)
で表される化合物と接触させる工程、
(3)工程(2)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(4)工程(1)で使用した非リン酸化チロシン残基を含むペプチドを、酸化剤及び金属触媒の存在下で、一般式(I)で表される化合物と接触させる工程、
(5)工程(4)においてペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定する工程、
(6)工程(3)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量と工程(5)で測定したペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量からチロシンキナーゼ活性を求める工程。 - 一般式(I)で表される化合物が、下記の一般式(Ia)
で表される化合物であることを特徴とする請求項19に記載のチロシンキナーゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。 - 非リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物と特異的に結合する担体を用いて、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物を単離し、ペプチドに結合した蛍光物質によって一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項19又は20に記載のチロシンキナーゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。
- 非リン酸化チロシン残基を含むペプチドに蛍光物質を結合させ、一般式(I)で表される化合物に、前記蛍光物質とFRETペアを形成する蛍光物質又は前記蛍光物質に対するクエンチャーを結合させ、ペプチドに結合させた蛍光物質及び/又は一般式(I)で表される化合物に結合させた蛍光物質の蛍光の変化によって、ペプチドに結合した一般式(I)で表される化合物の量を測定することを特徴とする請求項19又は20に記載のチロシンキナーゼ阻害剤又は活性化剤のスクリーニング方法。
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