JPWO2016104642A1 - 乳化安定剤及びそれを用いた乳化安定化方法 - Google Patents
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- A23C—DAIRY PRODUCTS, e.g. MILK, BUTTER OR CHEESE; MILK OR CHEESE SUBSTITUTES; MAKING THEREOF
- A23C9/00—Milk preparations; Milk powder or milk powder preparations
Abstract
Description
(1)タンパク質であるMFG−E8(milk fat globule−EGF factor 8)を有効成分として含有する水中油型乳化物用の乳化安定剤。
(2)MFG−E8が乳由来である(1)に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
(3)MFG−E8が脱脂乳由来である(1)に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
(4)MFG−E8が脱脂乳の乳清由来である(1)に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
(5)水中油型乳化物にタンパク質であるMFG−E8を添加する工程を含む水中油型乳化物の乳化安定化方法。
(6)水中油型乳化物100質量部に対し、0.001〜1質量部のMFG−E8を添加する(5)に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
(7)水中油型乳化物が乳及び/又は乳製品を含有する乳性食品であり、MFG−E8が乳由来である(5)又は(6)に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
(8)MFG−E8が脱脂乳由来である(7)に記載の水中油型乳化物の乳化安定方法。
(9)MFG−E8が脱脂乳の乳清由来である(7)に記載の水中油型乳化物の乳化安定方法。
(10)MFG−E8が牛乳由来であり、水中油型乳化物が牛乳及び/又は牛乳由来の乳製品からなる乳性食品である(7)〜(9)のいずれか1に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
<乳化安定剤>
上述のように、本発明の水中油型乳化物用の乳化安定剤は、タンパク質であるMFG−E8(milk fat globule−EGF factor 8)を有効成分として含有することを特徴とする。
上述のように、本発明の乳化安定化方法は、水中油型乳化物にタンパク質であるMFG−E8を添加する工程を含むことを特徴とする。ここで、水中油型乳化物へ添加する前の、本発明のMFG−E8は、例えば、精製されたMFG−E8、部分的に精製されたMFG−E8、及び、乳又は脱脂乳(例えば、脱脂粉乳を還元したもの)を遠心分離し、カゼインを除去した上清画分(いわゆる乳清画分)を使用することができる。
実験動物として、野生型C57BL/6マウス(WT)(日本SLC社より購入)、及び、MFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)(京都大学大学院医学研究科 長田重一教授より供与)を使用した。これらのマウスに対し、研究用の餌(日本SLC社製)を与え、母マウスが出産した際に、マウスの同腹仔数が6〜8となるように調整した。
乳試料における脂肪球の形態観察は、乳試料をリン酸緩衝生理食塩水(PBS)で10倍希釈したものを、300×gで10分間、15℃で遠心分離をし、その上層の脂肪球(MFG)画分を洗浄し、2%のパラホルムアルデヒドを用いて固定した後に、PBSに溶解した1%のBSAでブロッキングしたものを観察試料とした。そして、これらの観察試料を位相差顕微鏡(IX71,オリンパス社)で観察した。
位相差蛍光顕微鏡(IX71,オリンパス社)で観察した顕微鏡視野(204.8×272μm2)における脂肪球を観察し、脂肪球を脂肪球径ごとに以下の4グループ(小:1.0〜3.2μm、中:3.3〜6.5μm、大:6.6〜9.9μm、特大:10μm以上)に分類し、各グループにおける脂肪球の個数を数えた。
MFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)の母乳(強制離乳の3時間後に母乳を搾乳した乳試料)を、キャップ付きの試験管に分注し、遊離のMFG−E8を含有する野生型C57BL/6マウス(WT)の母乳の乳清画分(50質量%)、又は牛乳から精製したMFG−E8(250μg/ml)を添加し、37℃で24時間又は48時間、恒温となるよう保持した。その後、上述の試験2及び試験3に基づき、脂肪球の形態、及び脂肪球形の分布を確認した。
強制離乳の3時間後(W3h)及び48時間後(W48h)に母乳を搾乳した乳試料における脂肪球を、位相差顕微鏡で観察した。その結果を図1Aに示す。
MFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)の母乳から搾取した乳試料で、強制離乳の48時間後(W48h)に母乳を搾取した乳試料の脂肪球の形態の再現を目的に、MFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)の母乳から搾取した乳試料をキャップ付きの試験管に分注し、57μg/mlのペニシリンG及び100μg/mlのストレプトマイシンの存在下となるよう、ペニシリンG及びストレプトマイシンを添加した後に、37℃で24時間又は48時間、恒温となるよう保持した。対照として、野生型C57BL/6マウス(WT)の母乳から搾取した乳試料も同様の条件で保持した。これらの保持した乳試料における脂肪球を、位相差顕微鏡で観察した。その結果を図2Aに示す。図2Aに示すように、24時間(24h)又は48時間(48h)保持に伴い、MFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)の乳試料中では、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。一方、24時間(24h)又は48時間(48h)保持に伴い、野生型C57BL/6マウス(WT)の乳試料中では、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加しなかった。また、MFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)の母乳から搾取した乳試料中では、脂肪球同士の会合が位相差顕微鏡の形態観察で確認できた。なお、図2Aの0hは、それぞれのマウスの母乳から搾取した(搾乳した)直後の状態を示す。
MFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)の母乳(強制離乳の3時間後に母乳を搾乳した乳試料)を、キャップ付きの試験管に分注し、遊離のMFG−E8を含有する野生型C57BL/6マウス(WT)の母乳の乳清画分(50質量%)、又は牛乳から精製したMFG−E8(250μg/ml)を添加し、37℃で24時間又は48時間、恒温となるよう保持した。対照として、別のMFG−E8欠損C57BL/6マウスの母乳の乳清画分(50質量%)を添加し、37℃で24時間又は48時間、恒温となるよう保持した。なお、全ての乳試料には、57μg/mlのペニシリンG及び100μg/mlのストレプトマイシンの存在下となるよう、ペニシリンG及びストレプトマイシンを添加した。これらの乳試料における脂肪球を、位相差顕微鏡で観察した。その結果を図3Aに示す。
搾乳直後の牛乳で、MFG−E8が脂肪球同士の会合を抑制しているかを解明するために、搾乳直後の牛乳を、キャップ付きの試験管に分注し、遊離のMFG−E8を含有する野生型C57BL/6マウス(WT)の母乳の乳清画分(50質量%)、又は牛乳から精製したMFG−E8(250μg/ml(10mMトリス塩酸緩衝液、150mM塩化ナトリウム))を添加し、37℃で1日間、2日間、3日間、4日間、又は7日間恒温で保持した。対照として、別のMFG−E8欠損C57BL/6マウス(KO)の母乳の乳清画分(50質量%)を添加し、37℃で1日間、2日間、3日間、4日間、又は7日間恒温で保持した。また、それぞれにアジ化ナトリウムを終濃度0.1%となるように添加した。
搾乳直後の牛乳中の脂肪球を位相差顕微鏡で観察した結果を図4に示す。図4に示すように、搾乳直後の牛乳では、37℃での保持に伴い、特大と分類された脂肪球の個数の割合が増加した。
MFG−E8、及びMFG−E8を含有する乳清画分の添加による、搾乳直後の牛乳中の脂肪球を位相差顕微鏡で観察した結果を図5、及び図6に示す。
Claims (10)
- タンパク質であるMFG−E8(milk fat globule−EGF factor 8)を有効成分として含有する水中油型乳化物用の乳化安定剤。
- MFG−E8が乳由来である請求項1に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
- MFG−E8が脱脂乳由来である請求項1に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
- MFG−E8が脱脂乳の乳清由来である請求項1に記載の水中油型乳化物用の乳化安定剤。
- 水中油型乳化物にタンパク質であるMFG−E8を添加する工程を含む水中油型乳化物の乳化安定化方法。
- 水中油型乳化物100質量部に対し、0.001〜1質量部のMFG−E8を添加する請求項5に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
- 水中油型乳化物が乳及び/又は乳製品を含有する乳性食品であり、MFG−E8が乳由来である請求項5又は請求項6に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
- MFG−E8が脱脂乳由来である請求項7に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
- MFG−E8が脱脂乳の乳清由来である請求項7に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
- MFG−E8が牛乳由来であり、水中油型乳化物が牛乳及び/又は牛乳由来の乳製品からなる乳性食品である、請求項7〜9のいずれか1項に記載の水中油型乳化物の乳化安定化方法。
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