JPWO2011114678A1 - 哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤 - Google Patents
哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2011114678A1 JPWO2011114678A1 JP2012505492A JP2012505492A JPWO2011114678A1 JP WO2011114678 A1 JPWO2011114678 A1 JP WO2011114678A1 JP 2012505492 A JP2012505492 A JP 2012505492A JP 2012505492 A JP2012505492 A JP 2012505492A JP WO2011114678 A1 JPWO2011114678 A1 JP WO2011114678A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- trna
- lipofection
- cells
- gene transfer
- transfer efficiency
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/88—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation using microencapsulation, e.g. using amphiphile liposome vesicle
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/87—Introduction of foreign genetic material using processes not otherwise provided for, e.g. co-transformation
- C12N15/90—Stable introduction of foreign DNA into chromosome
Landscapes
- Genetics & Genomics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
Description
本発明の哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤(以下、「本発明の向上剤」とも表示する。)は、tRNAを含有し、かつ、リポフェクション試薬と併用することを特徴とする。tRNAを含有する本発明の向上剤を、リポフェクション試薬と併用すると、哺乳動物細胞への遺伝子導入効率を顕著に向上させることができる。なお、リポフェクション試薬と併用してリポフェクションを行ったときに、哺乳動物細胞への遺伝子導入効率を向上させ得る効果を、本明細書において「本発明の遺伝子導入効率向上効果」とも表示する。本発明の遺伝子導入効率向上効果の作用機作は明確ではないが、tRNAをリポフェクション試薬と併用すると、哺乳動物細胞への遺伝子の取り込み効率が向上すると考えられる。
かかるtRNA変異体としては、
(a)配列番号1〜4のいずれかに示されるポリリボヌクレオチドに対して80%以上、好ましくは85%以上、より好ましくは90%以上、さらに好ましくは95%以上、最も好ましくは98%以上の同一性を有し、かつ、いずれかの哺乳動物細胞において本発明の遺伝子導入効率向上効果を有するポリリボヌクレオチド:
(b)配列番号1〜4のいずれかに示されるポリリボヌクレオチドにおいて、1若しくは2個以上のリボヌクレオチドが欠失、置換若しくは付加されたポリリボヌクレオチドからなり、かつ、いずれかの哺乳動物細胞において本発明の遺伝子導入効率向上効果を有するポリリボヌクレオチド:
(c)配列番号1〜4のいずれかに示されるポリリボヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドとストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつ、いずれかの哺乳動物細胞において本発明の遺伝子導入効率向上効果を有するポリリボヌクレオチド:
本発明の哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上方法は、tRNAをリポフェクション試薬と併用することを特徴とする。tRNAをリポフェクション試薬と併用する方法としては、前述した本発明の向上剤をリポフェクション試薬と併用する方法と同様の方法を好適に例示することができる。本発明の哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上方法によれば、哺乳動物細胞への遺伝子導入効率を顕著に向上させることができる。なお、本発明の哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上方法は、本発明の哺乳動物への遺伝子導入方法とも表現することができる。
本発明の哺乳動物細胞の形質転換方法は、tRNAをリポフェクション試薬と併用することにより、目的遺伝子を哺乳動物細胞へリポフェクションすることを特徴とする。tRNAをリポフェクション試薬と併用する方法としては、前述した本発明の向上剤をリポフェクション試薬と併用する方法と同様の方法を好適に例示することができる。本発明の哺乳動物細胞の形質転換方法によれば、哺乳動物細胞での形質転換を高効率で行うことができる。
遺伝子導入効率に対するtRNAの影響を調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
実施例1では、宿主細胞としてマウス由来の細胞を用い、及び、仔ウシ由来のtRNAを用いた。宿主細胞として他の哺乳動物細胞を用い、及び、他の生物種由来のtRNAを用いた場合であっても、遺伝子導入効率向上効果を有しているかを調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
実施例1や2では、リポフェクション試薬として、Fugene(登録商標)HD transfection reagent(Roche Applied Science社製)を用いた。そこで、他のリポフェクション試薬を用いた場合であっても、tRNAの遺伝子導入効率向上効果が得られるかを調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
実施例1では、宿主細胞としてNIH3T3細胞を用い、実施例2〜3では、宿主細胞としてCOS7細胞を用いた。そこで、宿主細胞として、他の哺乳動物細胞を用いた場合であっても、tRNAの遺伝子導入効率向上効果が得られるかを調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
リポフェクション試薬とtRNAに加えて、さらにPEGを用いた場合の影響を調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
tRNAを用いずに、リポフェクション試薬にPEGを添加した場合の影響、及び、PEGの分子量の影響を調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
参考例1や2では、リポフェクション試薬として、Fugene(登録商標)HD transfection reagent(Roche Applied Science社製)を用いた。そこで、他のリポフェクション試薬を用いた場合であっても、PEGの遺伝子導入効率向上効果が得られるかを調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
参考例1〜2では、宿主細胞としてCOS7細胞を用いた。そこで、宿主細胞として、他の哺乳動物細胞を用いた場合であっても、PEGの遺伝子導入効率向上効果が得られるかを調べるために、以下のようなリポフェクション実験を行った。
Claims (9)
- tRNAを含有し、リポフェクション試薬と併用することを特徴とする、哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤。
- tRNA及びリポフェクション試薬を含有することを特徴とする、哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤。
- リポフェクション溶液中のtRNA濃度が3〜50μg/mLの範囲内となるように用いることを特徴とする請求項1又は2に記載の向上剤。
- さらにポリエチレングリコールを併用することを特徴とする請求項1〜3のいずれかに記載の向上剤。
- ポリエチレングリコールの分子量が、2000〜6000の範囲内であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の向上剤。
- ポリエチレングリコールの分子量が、3000〜5000の範囲内であることを特徴とする請求項1〜4のいずれかに記載の向上剤。
- 哺乳動物が、ヒト、マウス、サルから選ばれる哺乳動物であることを特徴とする請求項1〜6のいずれかに記載の向上剤。
- tRNAをリポフェクション試薬と併用することを特徴とする、哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上方法。
- tRNAをリポフェクション試薬と併用することにより、目的遺伝子を哺乳動物細胞へリポフェクションすることを特徴とする哺乳動物細胞の形質転換方法。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2012505492A JP5578338B2 (ja) | 2010-03-15 | 2011-03-13 | 哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤 |
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2010057732 | 2010-03-15 | ||
JP2010057732 | 2010-03-15 | ||
PCT/JP2011/001449 WO2011114678A1 (ja) | 2010-03-15 | 2011-03-13 | 哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤 |
JP2012505492A JP5578338B2 (ja) | 2010-03-15 | 2011-03-13 | 哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2011114678A1 true JPWO2011114678A1 (ja) | 2013-06-27 |
JP5578338B2 JP5578338B2 (ja) | 2014-08-27 |
Family
ID=44648793
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2012505492A Active JP5578338B2 (ja) | 2010-03-15 | 2011-03-13 | 哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤 |
Country Status (5)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US8633029B2 (ja) |
EP (1) | EP2548958B1 (ja) |
JP (1) | JP5578338B2 (ja) |
KR (1) | KR101637933B1 (ja) |
WO (1) | WO2011114678A1 (ja) |
Families Citing this family (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US10240125B2 (en) | 2013-03-14 | 2019-03-26 | Immusoft Corporation | Methods for in vitro memory B cell differentiation and transduction with VSV-G pseudotyped viral vectors |
WO2016100932A1 (en) | 2014-12-19 | 2016-06-23 | Immusoft Corporation | B cells for in vivo delivery of therapeutic agents |
CN111936617A (zh) | 2018-03-16 | 2020-11-13 | 益缪索夫特公司 | 经遗传工程化以分泌卵泡抑素的b细胞以及使用所述b细胞来治疗卵泡抑素相关的疾病、病况、病症及增强肌肉生长和力量的方法 |
CN111206049A (zh) * | 2020-02-13 | 2020-05-29 | 新疆维吾尔自治区生殖健康医院 | 一种精子外源基因转染方法 |
Family Cites Families (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US4650909A (en) * | 1984-11-28 | 1987-03-17 | Yoakum George H | Polyethylene glycol (PEG) reagent |
EP1096921B1 (en) * | 1998-07-20 | 2003-04-16 | Protiva Biotherapeutics Inc. | Liposomal encapsulated nucleic acid-complexes |
EP1354958A1 (de) * | 2002-04-18 | 2003-10-22 | Max-Delbrück-Centrum Für Molekulare Medizin | Herstellung und Anwendung von DNA-Polyelektrolyt-Nanopartikeln für den Gentransfer |
JP2005269920A (ja) | 2004-03-23 | 2005-10-06 | Yamaguchi Technology Licensing Organization Ltd | 酵母の形質転換法 |
DE102005023170A1 (de) * | 2005-05-19 | 2006-11-23 | Curevac Gmbh | Optimierte Formulierung für mRNA |
TW200800235A (en) * | 2005-10-18 | 2008-01-01 | Otsuka Pharma Co Ltd | Carrier composition for nucleic acid transport |
JP2009195197A (ja) | 2008-02-22 | 2009-09-03 | Hiroshima Univ | 哺乳動物細胞の形質転換方法 |
-
2011
- 2011-03-13 US US13/583,847 patent/US8633029B2/en active Active
- 2011-03-13 JP JP2012505492A patent/JP5578338B2/ja active Active
- 2011-03-13 WO PCT/JP2011/001449 patent/WO2011114678A1/ja active Application Filing
- 2011-03-13 EP EP11755871.8A patent/EP2548958B1/en active Active
- 2011-03-13 KR KR1020127023701A patent/KR101637933B1/ko active IP Right Grant
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
WO2011114678A1 (ja) | 2011-09-22 |
EP2548958B1 (en) | 2017-11-22 |
KR20130056854A (ko) | 2013-05-30 |
US8633029B2 (en) | 2014-01-21 |
JP5578338B2 (ja) | 2014-08-27 |
KR101637933B1 (ko) | 2016-07-08 |
US20130005041A1 (en) | 2013-01-03 |
EP2548958A4 (en) | 2013-10-02 |
EP2548958A1 (en) | 2013-01-23 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
US20200354702A1 (en) | Polynucleotides, Compositions, and Methods for Genome Editing | |
KR102544051B1 (ko) | 인간화된 ttr 유전자좌를 포함하는 비인간 동물 및 사용 방법 | |
KR102628909B1 (ko) | 다중 가이드 RNAs를 이용한 면역학적 내성 파괴 방법 | |
US11125739B2 (en) | Gene editing through microfluidic delivery | |
JP2020532952A (ja) | Casトランスジェニックマウスの胚性幹細胞およびマウスならびにその使用 | |
JP2020533957A (ja) | Crisprリポーター非ヒト動物およびその使用 | |
JP5578338B2 (ja) | 哺乳動物細胞への遺伝子導入効率の向上剤 | |
US11622547B2 (en) | Genetically modified mouse that expresses human albumin | |
WO2019096054A1 (zh) | 一种筛选谷氨酰胺合成酶缺陷型hek293细胞株的方法 | |
JP2022527302A (ja) | ポリペプチド発現のためのポリヌクレオチド、組成物、および方法 | |
KR20220016869A (ko) | 베타-슬립 돌연변이를 갖는 인간화 ttr 좌위를 포함하는 비-인간 동물 및 사용 방법 | |
WO2019041344A1 (en) | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE TRANSFECTION OF SINGLE STRANDED DNA | |
JP2020530990A (ja) | in vivoでの外因性ドナー核酸とのCRISPR/Cas誘導性組換えの評価 | |
CN114174520A (zh) | 用于选择性基因调节的组合物和方法 | |
KR20220097414A (ko) | X-연관 연소 망막층간분리 치료법을 위한 crispr 및 aav 전략 | |
Sjeklocha et al. | β‐globin matrix attachment region improves stable genomic expression of the Sleeping beauty transposon | |
Breman et al. | Input DNA ratio determines copy number of the 33 kb Factor IX gene on de novo human artificial chromosomes | |
RU2784927C1 (ru) | Отличные от человека животные, включающие в себя гуманизированный ttr локус, и способы применения | |
WO2023138617A1 (zh) | 工程化的CasX核酸酶、效应蛋白及其用途 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20131213 |
|
A871 | Explanation of circumstances concerning accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A871 Effective date: 20140129 |
|
A975 | Report on accelerated examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A971005 Effective date: 20140217 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20140306 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20140502 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20140609 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20140624 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Ref document number: 5578338 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |