JPWO2008056414A1 - 神経栄養因子産生促進装置 - Google Patents
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Abstract
Description
acid)を増加させて、神経栄養因子群神経栄養因子群の合成及び放出を促進させることができ、これにより、神経栄養因子群神経栄養因子群の産生を促進できるという知見を得た。
12 ハウジング
16 表示部
18 電源部
20 制御ブロック
21 電源供給回路
22 主制御回路
23 クロック生成回路
24 高周波発振手段
25 低周波発振手段
30、30A、30B 高周波用コイル
40、40A、40B 低周波用コイル
50 発振コイル
以下に、本発明の第1の実施形態にかかる神経栄養因子産生促進装置の一例として、磁気治療器について説明する。この磁気治療器は、人体の患部の細胞に磁気刺激を与えることで、細胞における神経栄養因子及び/又は神経栄養因子用物質(以下、「神経栄養因子及び/又は神経栄養因子用物質」を「神経栄養因子群神経栄養因子群」と称する。)の産生を促進させ、脳疾患等の各種の疾患を治療及び予防するための治療器である
まず、図1に基づいて、本実施形態にかかる磁気治療器10の外観構成について説明する。なお、図1は、本実施形態にかかる磁気治療器10の外観構成を示す斜視図である。
ここで、図4を参照して、本実施形態にかかる高周波用コイル30および低周波用コイル40に印加される高周波電流および低周波電流の波形について詳細に説明する。なお、図4は、本実施形態にかかる高周波用コイル30および低周波用コイル40に印加される高周波電流および低周波電流の波形を示す波形図である。
次に、図5A及び図5Bに基づいて、本実施形態にかかる磁気治療器10による磁気治療態様およびその作用効果について説明する。なお、図5A及び図5Bは、本実施形態にかかる磁気治療器10A、10B(図2A、図2B参照。)を用いた治療態様を示す説明図である。
次に、本実施形態にかかる磁気治療器10の(1)磁気刺激対象の細胞、(2)磁気刺激により産生される物質、(3)治療対象の部位、(4)治療対象の疾患、について、詳細に説明する。
磁気治療器10の磁気刺激対象の細胞は、神経栄養因子及び/又は神経栄養因子様物質を産生することが可能な細胞である。具体的には、この磁気刺激対象の細胞は、例えば、グリア細胞、神経細胞、繊維芽細胞、血管内皮細胞、筋肉細胞、表皮細胞、角化細胞又は免疫細胞などである。このような磁気刺激対象の細胞が存在する主な部位は、例えば、脳、脊髄、神経、血管、筋肉、皮膚などである。
磁気治療器10により、上記磁気刺激対象の細胞(グリア細胞等)に磁気刺激を与えると、当該細胞において、神経栄養因子及び/又は神経栄養因子様物質が産生される。この神経栄養因子及び/又は神経栄養因子様物質の生理的な効果が、磁気治療器10による磁気治療効果の主体となる。
monophosphate)、マンガンイオン、ゲニピン(植物成分で生薬由来低分子物質)、lysophosphatidylethanolamine(動植物膜成分)、ガングリオシド、Rho-kinaseなどを含む。このうち、アデノシン、アデノシン1リン酸は非タンパク性の神経栄養因子様物質であり、Rho-kinaseはタンパク性の神経栄養因子様物質である。
被治療体における治療対象の部位(患部)は、中枢神経系(CNS:Central Nervous System)又は脳脊髄神経系(Craniospinal Nervous System)である。中枢神経系は、終脳、間脳、中脳、小脳、橋、延髄、脊髄及び血管を含む。この中枢神経系は、神経細胞(neuron)とグリア細胞と血管とからなる。また、脳脊髄神経系は、末梢神経系(PNS:Peripheral Nervous System)のうち、脳神経(cranial
nerves)と脊髄神経(spinal
nerves)とから構成される神経系である。この脳脊髄神経系は、神経細胞(neuron)、シュワン細胞及び外套細胞からなる。これらの中枢神経系や脳脊髄神経系をなす細胞は、上記グリア細胞等から供給された神経栄養因子群の生理的効果により、修復、成長、分化、増殖し、以下に示す各種の疾患の治療に寄与する。なお、細胞の分化とは、細胞の性質、形態が変化することである。また、中枢神経系細胞とは、中枢神経系(終脳(大脳半球)、間脳、中脳、小脳、橋、延髄、脊髄、血管)に存在する細胞をいう。また、脳脊髄神経系細胞とは、脳脊髄神経系に存在する細胞をいう。
磁気治療器10による治療対象の疾患は、種々の要因で上記中枢神経系又は脳脊髄神経系をなす細胞(例えば神経細胞やグリア細胞)が脆弱化、損傷、またはその細胞数が減少することが原因で起こる疾患である。具体的には、治療対象の疾患は、例えば、(a)神経変性疾患(アルツハイマー型痴呆、パーキンソン病、ハンチントン病、筋萎縮性側索硬化症、多発性硬化症、多系統萎縮症、脊髄小脳変性症など)、(b)うつ病、(c)脳血管疾患(脳卒中、脳梗塞など)、(d)慢性疼痛、(e)神経因性疼痛、(f)脊髄損傷(病変又は外傷によるもの)などである。また、疾患ではないが、これらの疾患を予防するための(g)神経保護作用も、磁気治療器10による磁気治療効果の1つである。
次に、図6を参照して、本実施形態にかかる磁気治療器10による交番磁界の磁気刺激によって、上記疾患に対する磁気治療効果を奏するメカニズムについて、詳細に説明する。図6は、本実施形態にかかる磁気治療器10による磁気治療効果のメカニズムを示すフローチャートである。
エキソサイトーシス(開口放出)は、真核細胞が持つ細胞機能であり、細胞内に蓄積された物質を細胞外に放出する機能である。開口放出であるので、タンパクのような巨大分子でも細胞外に放出することが可能である。
このプロセス(2)は、細胞増殖促進作用に起因するものである。神経栄養因子群は、細胞分裂期にも産生されることが神経科学の分野ではすでに知られている。上記の磁気刺激(S10)により細胞内カルシウムイオン濃度が上昇する(S20)と、細胞の増殖周期が加速される。細胞増殖期の静止期にある細胞は、上記カルシウムイオン濃度の上昇により、G1期を経て、S期へ移行する。S期では、DNA、RNAの複製が起こり、神経栄養因子群を産生するためのmRNAが増加する(S40:これを証明するデータとして、後述の実験2の結果を参照。)。かかる複製により増加したmRNAにより、タンパク質である神経栄養因子と、タンパク性成分である一部の神経栄養因子様物質とが合成され(S42)、合成された神経栄養因子群が細胞外に放出される(S44)。このプロセス(2)による神経栄養因子群の産生は、磁気刺激後、時間経過と共に増大すると考えられる。このことは、細胞分裂のメカニズムから妥当と考えられる。
このプロセス(3)では、上記の磁気刺激(S10)を受けた細胞内で、細胞内カルシウムイオン濃度の上昇に起因せずに、mRNAが増加し(S40)、神経栄養因子群が合成されて(S42)、細胞外に放出される(S44)。
monophosphate)、マンガンイオン、ゲニピン(植物成分で生薬由来低分子物質)、lysophosphatidylethanolamine(動植物膜成分)、ガングリオシド、Rho-kinaseがある。これら以外にも数百種類の神経栄養因子様物質が発見されているが、物質として同定されていないものが多い。
まず、上記磁気治療器10によって被治療体の細胞に作用させる高周波交番磁界の産生促進用高周波数の適切な範囲を決定するために行った実験1について説明する。
神経栄養因子群の産生細胞(磁気刺激対象の細胞)として、グリア系細胞である「MB8細胞」を用いた。このMB8細胞は、神経栄養因子及び神経栄養因子様物質を産生する細胞である。生後8日のマウスの脳細胞を培養し、グリア細胞を増殖させて、MB8細胞を得た。このMB8細胞を、24穴の培養プレート(コラーゲンIコート)に1穴当たり約15.5×105個播いて、10%FBS加DMEM培地(日水製薬社製)及び炭酸ガス培養装置(インキュベーター)を用いて、温度37℃、炭酸ガス濃度5%の環境で24時間培養した。
上記磁気治療器10B(図2B参照)に相当する実験用の磁気刺激装置を用いて、上記培養プレート内の各MB8細胞(神経栄養因子群の産生細胞)に対して、磁気刺激を与えた。磁気刺激は、培養プレートの下面側から、磁気刺激装置を用いて交番磁界を照射することによって行った。この際、30分間磁気刺激を与えた後、30分間培養し(培養中は磁気刺激なし)、さらに、30分間磁気刺激を与えた。このようにMB8細胞に作用させる高周波交番磁界の周波数を実験単位ごとに、20MHz〜3000MHzの範囲で段階的に変えて、それぞれ実験を行った。
上記(2)の各周波数での磁気刺激を受けた磁気刺激群の各MB8細胞(神経栄養因子群の産生細胞)を、上記培養プレートを用いて温度37℃で3時間培養した。この培養中には、MB8細胞は、上記の磁気刺激を受けたときの各周波数に応じた量の神経栄養因子群を産生して、細胞外に放出する。また、上記(2)の磁気刺激を施さなかった非刺激群のMB8細胞も、磁気刺激群と同様な条件で培養した。
上記(3)の培養後、磁気刺激群の各MB8細胞の培地(MB8細胞が産生した神経栄養因子群を含む。)を吸引してマイクロフィルターで濾過し、この濾過後の培地を、PC12細胞にそれぞれ添加した。その後、温度37℃で24時間、各PC12細胞を培養した。この培養中に、培地内に存在する神経栄養因子群の量に応じて各PC12細胞の神経突起が形成されて、伸展する。また、非刺激群のMB8細胞の培地を添加したPC12細胞も同様に培養した。
上記(4)の培養後の各PC12細胞を顕微鏡で観察して、神経突起の長さが1細胞長以上に伸展しているものを陽性細胞と判定した。各周波数の磁気刺激群ごとに300個のPC12細胞を観察し、陽性細胞数を記録した。また、非刺激群のPC12細胞についても、同様に判定を行い、陽性細胞数を記録した。
(効果度)=(磁気刺激群の陽性細胞数)/(非刺激群の陽性細胞数)
・「周波数(MHz)」は、上記磁気刺激装置によって発生させた高周波電磁波の周波数、即ち、MB8細胞に作用させた高周波交番磁界の周波数である。
・「効果度」は、磁気刺激群の効果度を非刺激群の効果度で割った値を、周波数ごとに平均した値であり、各周波数の高周波交番磁界による磁気刺激群の神経突起伸展の効果が、非刺激群の何倍であるかを表す。
次に、上記磁気治療器10による磁気刺激により、細胞内のmRNAが増加して、神経栄養因子群の合成促進がなされていることを検証するために行った実験2について説明する。この実験2では、135MHzの磁気刺激後の細胞内のmRNAの発現増加を、RT−PCR法(Reverse Transcriptase-Polymerase Chain Reaction:逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応法)により検証した。
神経栄養因子群の産生細胞(磁気刺激対象の細胞)として、グリア系細胞である「MB8細胞」を用いた。このMB8細胞の培養は、上記実験1の細胞培養と同様にして行った。
上記実験1と同様な磁気刺激装置(図7参照。)を用いて、高周波交番磁界(135MHz)および低周波交番磁界(2.0kHz)をMB8細胞に対して照射して、20分間、磁気刺激を与えた。
上記(2)の磁気刺激を受けたMB8細胞を温度37℃で3時間培養して、MB8細胞内でmRNAの生成を促進させた。
上記培養後に、培地を捨て、RNA抽出液(ISOGEN)を添加した。次いで、MB8細胞をホモゲナイザーで破砕し、室温で5分間静置した。さらに、この懸濁液にクロロホルムを加えて、室温で10分間静置した後に、4℃にて12000xgで15分間遠心した。その後、上清を分取し、上清と等量のイノプロパノールを加えて、室温で10分間静置後、再度、4℃にて12000xgで15分間遠心した。次いで、得られた沈殿物に1mlの70%エタノールを加えて洗浄後、4℃にて12000xgで5分間遠心した。沈殿物をデシケーター内で15分間真空乾燥後、DEPC処理したTris−HCl/EDTA液を加えて十分に溶解して、RNA溶液とした。
上記RNA溶液と10μMプライマーと超純水とを、PCRチューブに入れ、72℃で2分間反応させた。次いで、10mMのdNTP(deoxynucleotide
triphosphate)液、100mMのDTT(dithiothreitol)液、200unit/μl逆転写酵素液を加えて、42℃で60分間、逆転写反応を行った。さらに、Tris−HCl/EDTA液を加えて、72℃で7分間、加熱処理し、一本鎖cDNA溶液を得た。この一本鎖cDNA溶液に、超純水、PCR buffer、25mM−MgCl2、2.5mM−dNTP mix、各10μM プライマー2種、Taqポリメラーゼを加え、PCRチューブに入れて、94℃で3分間反応させた。その後、変性を94℃で30秒間、アニーリングを45℃で1分間、鎖伸長を72℃で45秒間、以上の反応を1サイクルとして、40分間このサイクルを繰り返した。さらに、72℃で5分間反応させて、鎖伸長反応を終結させた。
上記の鎖伸長反応終了後に、ローディングバッファーを加え、エチジウムブロマイドを含む2(w/v)アガロースゲル上で電気泳動して、RNAをサイズ別に分離した。
上記電気泳動後、分離したRNAを蛍光発色させて、「Molecular Imaging FX(BIO RAD社製)」で画像として取り込んで、ソフトウェア「Image J」を用いて、mRNAを定量化した。
次に、上記磁気治療器10による磁気刺激により、細胞内でエキソサイトーシスが生じることを検証するために行った実験3について説明する。
磁気刺激対象の細胞(神経栄養因子群の産生細胞)としてのMB8細胞と、神経突起伸展の確認用細胞としてのPC12細胞を、上記実験1の(1)と同様にして、それぞれ24時間培養した。
上記実験1の磁気刺激と同様な磁気刺激装置(図7参照)を用いて、上記培養プレート内のMB8細胞に対して、30分間磁気刺激を与えた後、30分間培養し(培養中は磁気刺激なし)、さらに、30分間磁気刺激を与えた。このとき、MB8細胞に作用させる高周波交番磁界の周波数は120MHzとした。
上記磁気刺激後のMB8細胞の培養プレートを、温度37℃、炭酸ガス濃度5%の炭酸ガス培養装置で10分間静置したものを10分間放置群とし、一方、3時間放置したものを3時間放置群とした。これにより、10分間放置群では、エキソサイトーシスにより、神経栄養因子群が培地中に放出される。一方、3時間放置群では、エキソサイトーシスによる神経栄養因子群の放出と、それ以外のプロセスによる神経栄養因子群の産生、放出(mRNAの増加による合成、放出)の両方が起こっている。この神経栄養因子群の産生後、上記10分間放置群と3時間放置群のMB8細胞の培地を全て吸引し、当該培地をマイクロフィルターで濾過し、PC12細胞に添加するための培地を得た。
上記(1)で培養されたPC12細胞の培地を吸引して除去し、(3)で得た10分間放置群の培地と3時間放置群の培地とを、それぞれ添加した。その後、各培地が添加されたPC12細胞を、温度37℃、炭酸ガス濃度5%の炭酸ガス培養装置で、24時間、それぞれ培養した。
上記(4)でPC12細胞に(3)で得た各培地を添加した時から24時間後に、上記実験1と同様にして、神経突起を伸展させているPC12細胞の陽性細胞数をカウントし、神経突起の伸展率(陽性細胞率)を算出した。
次に、上記磁気治療器10による磁気刺激により、細胞内でカルシウムイオン濃度が上昇することを検証するために行った実験4について説明する。この実験4では、ウシの脳の各部位から細胞を採取し、この各細胞に対して、83.3MHz、2kHz、7.8Hzの磁気刺激を与え、細胞内カルシウムイオン濃度の上昇が確認された脳内の細胞の部位とその反応陽性率を検証した。
ウシの脳の各部位(大脳皮質前頭領域、大脳皮質側頭領域、小脳および延髄領域、海馬)から、解剖的に脳片を採取し、脳細胞の一般的な培養方法に従い初代培養して、被検細胞とした。
細胞内のカルシウムイオン濃度を測定するために、カルシウム蛍光指示薬Fluo−3(同仁化学社製)を用いた。ガラスベースディッシュで培養した上記被検細胞に、カルシウム蛍光プローブ(Fluo−3)を最終濃度4μMとなるように加え、温度37℃で30分間負荷した後、標準溶液で3回洗浄し、測定に供した。この標準溶液の組成は、135mM NaCl、2.8mM KCl、1.8mM MgCl2、10mM D−グルコース、10mM HEPES(pH=7.3)とした。
上記(2)の負荷後の細胞の入ったガラスベースディッシュを、倒立顕微鏡に載置した。このガラスベースディッシュのフタの上に、上記図7で示した発振コイル50を置いて、細胞に磁気刺激を10分間与えた。この磁気刺激では、図4で示したような83.3MHzの高周波交番磁界と、2kHzの低周波交番磁界とを、7.8Hzで間欠的に細胞に照射した。
倒立顕微鏡を用いて、上記蛍光色素で負荷染色した磁気刺激後の細胞を、室温(25℃)で観察した。20−40倍の対物レンズを用い、10個以上の細胞の蛍光強度を同時に測定できるようにした。励起光の照射による蛍光を、デジタルCCDカメラ(製品名:HiSCA、浜松ホトニクス社製)で検出した。細胞の蛍光強度比をタイムプラスシステム(製品名:AQUACOSMOS、浜松ホトニクス社製)で解析した。
細胞が、上記塩化カリウム添加に対して、カルシウムイオン濃度の急激な上昇を示す場合にのみ、その細胞の実験データを採用するようにした。塩化カリウム添加に対して、カルシウムイオン濃度の急激な上昇という正常反応がみられない細胞は、正常なカルシウム応答を示さないので、実験データとして採用しなかった。
磁気刺激後、細胞内の蛍光強度が刺激前よりも10%以上上昇した細胞が1個以上認められた場合、反応陽性(つまり、磁気刺激により細胞内のカルシウムイオン濃度が上昇した)と判断した。
次に、上記磁気治療器10による磁気刺激により、神経栄養因子以外の神経突起伸展作用を有する物質(即ち、神経栄養因子様物質)が産生されることを検証するために行った実験5について説明する。
上記実験1と同様にして培養したMB8細胞の培地を抜き取り、無血清のRPMIを400μl添加した。
上記実験1と同様な磁気刺激装置(図7参照。)を用いて、上記(1)のMB8細胞に対して、高周波交番磁界(135MHz)の磁気刺激を30分間与えた後、温度37℃、炭酸ガス濃度5%の環境で30分間培養し(培養中は磁気刺激なし)、さらに、30分間磁気刺激を与えた。
上記(2)の各周波数での磁気刺激を受けた磁気刺激群の各MB8細胞(神経栄養因子群の産生細胞)を、温度37℃、炭酸ガス濃度5%の環境で3時間培養した。
上記(3)の培養後、MB8細胞の培地(MB8細胞が産生した神経栄養因子群を含む。)を全量、マイクロチューブに取り、90℃のオイルバスで2分間加熱した。この2分間の加熱後、マイクロチューブを取り出し、氷水中で1分間、急冷した。この加熱処理により、培地中に含まれる神経栄養因子(タンパク質)の神経突起伸展作用が喪失される。
上記(4)で得られた培地にFBS(ウシ胎児血清)を濃度1%となるように添加し、培地をフィルターで濾過し、凝固物を除去した。
上記実験1と同様にして培養したPC12細胞の培地を吸引し、(5)で濾過した培地をPC12細胞に添加した。その後、温度37℃、炭酸ガス濃度5%の環境で24時間、PC12細胞を培養した。
上記非刺激群、加熱群、非加熱群それぞれについて、上記実験1と同様にして、神経突起を伸展させているPC12細胞の陽性細胞数をカウントし、神経突起の伸展率(陽性細胞率)を算出した。
Claims (21)
- 細胞に対して磁気刺激を与えることにより神経栄養因子又は神経栄養因子様物質の産生を促進させる神経栄養因子産生促進装置であって:
20〜180MHz、280〜600MHz、700〜1000MHzの範囲から選択された産生促進用高周波数の高周波交番磁界を磁束密度0.01テスラ以下で前記細胞に対して作用させるため、前記産生促進用高周波数の高周波電磁波を発生させる高周波電磁波発生手段を備え、
前記産生促進用高周波数の高周波交番磁界による磁気刺激により、前記細胞内のカルシウムイオン濃度を上昇させ、前記神経栄養因子又は前記神経栄養因子様物質のエキソサイトーシスを誘発させるとともに、前記磁気刺激により前記細胞内における前記神経栄養因子又は前記神経栄養因子様物質の転写因子(mRNA)を増加させて、前記神経栄養因子又は前記神経栄養因子様物質の合成及び前記細胞外への放出を促進させることを特徴とする、神経栄養因子産生促進装置。 - 前記細胞は、前記神経栄養因子及び/又は前記神経栄養因子様物質を産生可能な細胞であって、グリア細胞、神経細胞、繊維芽細胞、血管内皮細胞、表皮細胞、角化細胞、免疫細胞又は筋肉細胞を含むことを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記神経栄養因子は、神経成長因子(NGF)、脳由来神経栄養因子(BDNF)、塩基性線維芽細胞増殖因子(FGF−2)又はグリア細胞株由来神経栄養因子(GDNF)のうち少なくともいずれかを含むことを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記神経栄養因子様物質は、アデノシン、アデノシン1リン酸(AMP)、マンガンイオン、ゲニピン、lysophosphatidylethanolamine、ガングリオシド又はRho-kinaseのうち少なくともいずれかを含むことを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記神経栄養因子産生促進装置は、中枢神経系又は脳脊髄神経系の細胞の脆弱化、損傷又は細胞数の減少が原因で生じる疾患を治療するために用いられる治療器であることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記疾患は、神経変性疾患、うつ病、脳血管疾患又は脊髄損傷のうち少なくともいずれかを含むことを特徴とする、請求項5に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記産生促進用高周波数は、60〜180MHz、280〜300MHz、450〜550MHz、又は、900〜950MHzの範囲から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記産生促進用高周波数は、100〜160MHzの範囲から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記産生促進用高周波数は、120〜160MHzの範囲から選択されることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記高周波電磁波発生手段は、
高周波電流を出力する高周波発振手段と;
前記高周波発振手段から高周波電流が印加されることによって、前記産生促進用高周波数の高周波電磁波を発生させる高周波用アンテナと;
を備えることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。 - 前記高周波電磁波発生手段は、前記高周波電磁波を発生させるオン期間と、前記高周波電磁波を発生させないオフ期間を所定の周期で繰り返して、前記高周波電磁波を間欠的に発生させることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記高周波電磁波発生手段は、前記高周波電磁波を発生させる第1のオン期間と、前記高周波電磁波を発生させない第1のオフ期間を、2.0±10%kHzに対応する周期で繰り返して、前記高周波電磁波を間欠的に発生させることを特徴とする、請求項11に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記高周波電磁波発生手段は、前記高周波電磁波を発生させる第2のオン期間と、前記高周波電磁波を発生させない第2のオフ期間を、7.8±10%Hzに対応する周期で繰り返して、前記高周波電磁波を間欠的に発生させることを特徴とする、請求項11に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 2.0±10%kHzの範囲から選択される産生促進用低周波数の低周波交番磁界を前記細胞に対して作用させるため、前記産生促進用低周波数の低周波電磁波を発生させる低周波電磁波発生手段を備えることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記低周波電磁波発生手段は、
低周波電流を出力する低周波発振手段と;
前記低周波発振手段から低周波電流が印加されることによって、前記産生促進用低周波数の低周波電磁波を発生させる低周波用アンテナと;
を備えることを特徴とする、請求項14に記載の神経栄養因子産生促進装置。 - 前記低周波用アンテナに印加される前記低周波電流の立ち上がり時間は、0.1μ秒以下であることを特徴とする、請求項15に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記低周波電磁波発生手段は、前記低周波電磁波を発生させるオン期間と、前記低周波電磁波を発生させないオフ期間を所定の周期で繰り返して、前記低周波電磁波を間欠的に発生させることを特徴とする、請求項14に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記低周波電磁波発生手段は、前記低周波電磁波を発生させる第3のオン期間と、前記低周波電磁波を発生させない第3のオフ期間を、7.8±10%Hzに対応する周期で繰り返して、前記低周波電磁波を間欠的に発生させることを特徴とする、請求項17に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記高周波電磁波発生手段は、前記高周波電磁波を発生させるオン期間と、前記高周波電磁波を発生させないオフ期間を所定の周期で繰り返して、前記高周波電磁波を間欠的に発生させ、
前記高周波電磁波のオン期間と、前記低周波電磁波のオン期間とは、同期していることを特徴とする、請求項17に記載の神経栄養因子産生促進装置。 - 前記高周波電磁波発生手段は、前記産生促進用高周波数より大きい周波数の高周波電磁波を、前記産生促進用高周波数に対応する周期で間欠的に発生させることによって、前記産生促進用高周波数の高周波電磁波を発生させることを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
- 前記高周波電磁波発生手段が発生させる前記産生促進用高周波数の高周波電磁波は、前記産生促進用高周波数未満の高周波電磁波を発生させる際に生じる高調波を含むことを特徴とする、請求項1に記載の神経栄養因子産生促進装置。
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US9656096B2 (en) | 2003-12-05 | 2017-05-23 | Rio Grande Neurosciences, Inc. | Method and apparatus for electromagnetic enhancement of biochemical signaling pathways for therapeutics and prophylaxis in plants, animals and humans |
US9433797B2 (en) * | 2003-12-05 | 2016-09-06 | Rio Grande Neurosciences, Inc. | Apparatus and method for electromagnetic treatment of neurodegenerative conditions |
US10350428B2 (en) | 2014-11-04 | 2019-07-16 | Endonovo Therapetics, Inc. | Method and apparatus for electromagnetic treatment of living systems |
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US9440089B2 (en) * | 2003-12-05 | 2016-09-13 | Rio Grande Neurosciences, Inc. | Apparatus and method for electromagnetic treatment of neurological injury or condition caused by a stroke |
CN101534903B (zh) * | 2006-11-08 | 2011-02-09 | 株式会社医疗器械 | 神经营养因子产生促进装置 |
US10149982B2 (en) | 2009-03-11 | 2018-12-11 | University Of South Florida | Prevention and treatment of brain diseases and disorders related to abnormal protein aggregation through electromagnetic field treatment |
WO2010105035A2 (en) * | 2009-03-11 | 2010-09-16 | University Of South Florida | Prevention, treatment, and diagnosis of alzheimer's disease through electromagnetic field exposure |
ES2371820B1 (es) * | 2010-02-10 | 2013-01-30 | Pneuma Research, S.L. | Dispositivo transductor digital portátil programable con alta discriminación en baja frecuencia y de baja intensidad. |
CA2813036A1 (en) | 2010-10-01 | 2012-04-05 | Ivivi Health Sciences, Llc | Method and apparatus for electromagnetic treatment of head, cerebral and neural injury in animals and humans |
GB2486400B (en) * | 2010-11-20 | 2016-02-10 | Pulse Medical Technologies Ltd | Device for generating magnetic fields |
ITNA20110019A1 (it) * | 2011-04-28 | 2012-10-29 | Attilio Grattacaso | Apparecchiatura, sistema e metodo per la contrazione e la congiunta diatermia mediante modulazione e radiofrequenza |
US11759650B2 (en) * | 2013-03-11 | 2023-09-19 | NeuroEM Therapeutics, Inc. | Immunoregulation, brain detoxification, and cognitive protection by electromagnetic treatment |
US9739734B2 (en) | 2013-05-13 | 2017-08-22 | The Marine Biological Laboratory | Methods and systems of detecting exocytosis of a target molecule from a population of cells |
TWI586400B (zh) * | 2014-03-04 | 2017-06-11 | Bioelectromagnetic circuit device | |
WO2015161063A1 (en) | 2014-04-16 | 2015-10-22 | Iviv Health Sciences, Llc | A two-part pulsed electromagnetic field applicator for application of therapeutic energy |
EP3467094B1 (en) | 2016-05-26 | 2020-01-01 | IFG Corporation | Apparatus and method for non-contact electrical stimulation of cells in liquid culture medium |
WO2018089795A1 (en) | 2016-11-10 | 2018-05-17 | Qoravita LLC | System and method for applying a low frequency magnetic field to biological tissues |
JP7039192B2 (ja) * | 2017-06-23 | 2022-03-22 | ニプロ株式会社 | 生体刺激用信号波生成装置 |
IT201800004007A1 (it) * | 2018-03-27 | 2019-09-27 | Gabriele Alberton | Dispositivo magnetoterapico ad efficacia potenziata |
US20210121694A1 (en) * | 2019-10-28 | 2021-04-29 | Carnegie Mellon University | Non-invasive method for suppressing spreading depolarization in human brains |
WO2021202834A1 (en) * | 2020-04-03 | 2021-10-07 | Regents Of The University Of Minnesota | Spintronic nanodevice for low-power, cellular-level, magnetic neurostimulation |
WO2023218813A1 (ja) * | 2022-05-11 | 2023-11-16 | ニプロ株式会社 | 炎症性サイトカイン産生抑制装置 |
Family Cites Families (24)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
FR2387526A2 (fr) * | 1977-01-25 | 1978-11-10 | Fellus Marcel | Appareil electrique et electromagnetique implantable a usage medical |
US4932951A (en) | 1988-03-23 | 1990-06-12 | Life Resonances, Inc. | Method and apparatus for controlling tissue growth and an applied fluctuating magnetic field |
DE59106092D1 (de) | 1991-02-28 | 1995-08-31 | Medi Line Gmbh | Bestrahlungsvorrichtung zur Behandlung von lebendem Gewebe mit elektromagnetischen Wellen. |
DE4309395A1 (de) | 1992-03-24 | 1993-09-30 | Melitta Schneidawind | Gerät zur Verhinderung oder zum Abtragen von Ablagerungen |
US6277828B1 (en) * | 1993-08-20 | 2001-08-21 | Syntex (U.S.A.) Inc. | Pharmaceutical formulations of nerve growth factor |
US6132361A (en) * | 1994-11-28 | 2000-10-17 | Neotonus, Inc. | Transcranial brain stimulation |
US6425852B1 (en) * | 1994-11-28 | 2002-07-30 | Emory University | Apparatus and method for transcranial magnetic brain stimulation, including the treatment of depression and the localization and characterization of speech arrest |
IT1280961B1 (it) * | 1995-10-10 | 1998-02-11 | Istituto Deanna M Lanfranco Pe | Dispositivo e metodo per la modulazione delle funzioni biologiche. |
EP0930849B1 (en) | 1996-08-15 | 2007-07-11 | Neotonus, Inc. | Apparatus for transcranial brain stimulation |
DE19752934A1 (de) * | 1997-05-23 | 1998-12-03 | Siegfried Dr Kiontke | Gerät zum Aufschwingen physiologischer Signale auf einen Trägerstoff |
UA29798A (uk) * | 1997-07-01 | 2000-11-15 | Олег Олександрович Бородюк | Спосіб покращення імунного статусу людини |
EP1024858A1 (de) * | 1997-10-23 | 2000-08-09 | Siegfried Kiontke | Vorrichtung und verfahren zum aktivieren von objekten |
EP1326681B1 (en) | 2000-10-20 | 2007-01-10 | THE GOVERNMENT OF THE UNITED STATES OF AMERICA, as represented by THE SECRETARY, DEPARTMENT OF HEALTH AND HUMAN SERVICES | Coil for magnetic stimulation |
US7074175B2 (en) * | 2001-07-25 | 2006-07-11 | Erik Schroeder Handy | Thermotherapy via targeted delivery of nanoscale magnetic particles |
US7951061B2 (en) * | 2001-07-25 | 2011-05-31 | Allan Foreman | Devices for targeted delivery of thermotherapy, and methods related thereto |
US7967839B2 (en) * | 2002-05-20 | 2011-06-28 | Rocky Mountain Biosystems, Inc. | Electromagnetic treatment of tissues and cells |
US6899667B2 (en) * | 2002-10-21 | 2005-05-31 | Paul F. Becker | Method and apparatus for the treatment of physical and mental disorders with low frequency, low flux density magnetic fields |
CN1548148A (zh) * | 2003-05-16 | 2004-11-24 | 珠海亿胜生物制药有限公司 | 一种重组人碱性成纤维细胞生长因子胶囊剂及其制备方法 |
DE10357265A1 (de) * | 2003-12-03 | 2005-07-07 | Graviton Gmbh | Verfahren zur Wirkverstärkung von Therapeutika, insbesondere antimikrobiellen Chemotherapeutika, Antimykotika und Antibiotika |
US20060212077A1 (en) * | 2005-03-07 | 2006-09-21 | Pilla Arthur A | Electromagnetic treatment apparatus for augmenting wound repair and method for using same |
JP4613285B2 (ja) * | 2004-09-28 | 2011-01-12 | 財団法人ヒューマンサイエンス振興財団 | 生体内局所膜電位制御装置及び神経機能回復装置 |
US20060021077A1 (en) | 2005-07-11 | 2006-01-26 | Van Schijndel Johannes T | Lettuce variety nascent |
WO2007141874A1 (ja) * | 2006-06-09 | 2007-12-13 | Medical Appliance Co., Ltd. | 疼痛治療器,高周波治療器 |
CN101534903B (zh) * | 2006-11-08 | 2011-02-09 | 株式会社医疗器械 | 神经营养因子产生促进装置 |
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