JPWO2008029730A1 - 半導体蛍光微粒子、生体物質蛍光標識剤及びバイオアッセイ法 - Google Patents
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Abstract
Description
J.phys.chem.B2005,109,14350−14355
7 ウェル
21 バイオアッセイ装置
22 ディスク装填部
23 滴下部
24 励起光検出部
25 制御/サーボ部
33 貯留部
34 滴下ヘッド
40 光学ヘッド
44 励起光源
D 量子ドット
F 蛍光
P 励起光
Pr 標準プローブDNA
S サンプルDNA
本発明は、本発明の表面修飾半導体蛍光微粒子の結合体および標的分析物に結合したこれらの結合体を含む組成物にさらに関する。
アルゴンガスで置換したグローブBOX内で無水InCl3を0.8g、P(Si−(CH)3)3を0.75g、トリオクチルホスフィンオキシド(TOPO):トリオクチルホスフィン(TOP)=0.1:1で5.0gを室温で混合したA1液を調整する。
上記で得られた半導体蛍光微粒子1(InPコア粒子)をピリジン中に分散させ100℃に保温した。別途、Zn(C2H5)2と((CH3)3Si)2S、P(C4H9)3をアルゴンガス雰囲気下、超音波をかけながらpHを制御しながらゆっくり混合した。
上記の半導体微粒子1(InPコア粒子のみ)の作製において、InCl3およびP(Si−(CH)3)3を高濃度にし、反応時間を1.5倍に変更すること以外は同様にして粒子形成を行った結果、平均粒径20nm、標準偏差15%の粒子を得た。
上記の半導体蛍光微粒子2(コア・シェル層を有する)の作製において、シェルの形成の攪拌時間を1時間に変更する以外は同様にしてコア・シェル粒子を得た。シェルの被覆率は100%であり、平均厚みは2.5nmであった。
以下のようにしてコア粒子、次いで、コア粒子上にシェル層を形成した。
アルゴンガスで置換したグローブBOX内で無水InCl3を0.8g、P(Si−(CH)3)3を0.75g、トリオクチルホスフィンオキシド(TOPO):トリオクチルホスフィン(TOP)=0.1:1で5.0gを室温で混合したA2液を調整する。
上記で得られたコア粒子をピリジン中に分散させ100℃に保温した。別途、Zn(C2H5)2と((CH3)3Si)2S、P(C4H9)3を本発明より2/3の濃度でアルゴンガス雰囲気下、ゆっくり混合した。
粒子の分光測定は、自作した共焦点顕微鏡システムで行った。走査ステージ上の試料は、直線偏光の半導体レーザ(532nm)もしくは430nm光を油浸対物レンズ(NA1.2)を通してフォーカスしたスポットで励起される。
以上のように製造された、半導体蛍光微粒子1(量子ドット1:InPコア量子ドット)、半導体蛍光微粒子2(量子ドット2:InP/ZnSコア/シェル量子ドット)の双方に生体サンプルDNAを酵素処理して切断することによって得たオリゴレヌクレオチド(20塩基鎖)を以下の如く導入した。
表面修飾化合物HS−(CH2)3−COOHを溶剤を純水に置換してバッファ塩を添加した量子ドットの分散水溶液中に添加し、pHを調整し加温攪拌することによって上記合成した粒子にメルカプト基を介して結合させた。
次に、バイオアッセイ基板を用いてDNA解析を行うバイオアッセイ装置について、図2を参照して説明する。
ウエルにサンプルDNAの滴下後、バイオアッセイ基板1を恒温層等に移し、ウェル7内を数十度に加熱し、加熱した状態のまま1MV/m、1MHz程度の交流電界を印加する。このような処理をすると、サンプルDNAとプローブオリゴヌクレオチドとが垂直方向に伸張して立体障害の少ない状態となるとともに、サンプルDNAがバイオアッセイ基板に対して垂直方向に移動する。この結果、互いの塩基配列が対応したサンプルDNAとプローブDNAとが同一のウェル7内にある場合には、それらがハイブリダイゼーション反応を起こす。
ウエル上の蛍光検出において同じ標的DNAを含むサンプルを100ウエル分で測定した時に目的の信号が明確に検出(80%以上の信号強度を示す)できたときの割合で検出精度を示した。
検出やや不良:明確検出頻度60%で信号のとぎれやや有り
検出不良 :明確検出頻度30%以下で信号とぎれ頻繁
Claims (4)
- 半導体微粒子からなるコアと該コアを被覆するコア組成とは異なる組成からなるシェル層とで構成される半導体蛍光微粒子において、該コアに励起光照射時間または照射量に対する蛍光強度のブリンキング(明滅現象)の平均蛍光滅時間が、シェル層を有するコア/シェル粒子のブリンキングの平均蛍光滅時間の100倍以上であり、コア/シェル粒子のブリンキング頻度がコア粒子のみのブリンキング頻度の1/10以下であることを特徴とする半導体蛍光微粒子。
- 前記コア/シェル粒子のコアが、1nm〜10nmの平均粒径を有し、インジウム(In)とリン(P)を含む半導体微粒子であることを特徴とする請求の範囲第1項に記載の半導体蛍光微粒子。
- 請求の範囲第1項または請求の範囲第2項に記載の半導体蛍光微粒子の表面に、生体物質に結合する修飾基と該半導体蛍光微粒子の表面に結合する修飾基とをもつ表面修飾化合物の少なくとも1つを有することを特徴とする生体物質蛍光標識剤。
- 追跡もしくは標的物質を有する生細胞に、請求の範囲第3項に記載の生体物質蛍光標識剤を添加することにより該標的物質と反応させる工程と、該標的物質に対して所定の波長の励起光を照射し、該励起光に応じて上記半導体蛍光微粒子から発生する所定の波長の蛍光を検出することにより、追跡・標的物質の生学分析もしくは蛍光イメージングを行う工程とを有することを特徴とするバイオアッセイ法。
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