JPWO2005095413A1 - Antitumor agent - Google Patents

Antitumor agent Download PDF

Info

Publication number
JPWO2005095413A1
JPWO2005095413A1 JP2006511845A JP2006511845A JPWO2005095413A1 JP WO2005095413 A1 JPWO2005095413 A1 JP WO2005095413A1 JP 2006511845 A JP2006511845 A JP 2006511845A JP 2006511845 A JP2006511845 A JP 2006511845A JP WO2005095413 A1 JPWO2005095413 A1 JP WO2005095413A1
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
fraction
soluble part
organic solvent
aqueous solution
polar organic
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP2006511845A
Other languages
Japanese (ja)
Inventor
耕一 建石
耕一 建石
裕孝 星
裕孝 星
松永　謙一
謙一 松永
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Kureha Corp
Original Assignee
Kureha Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Kureha Corp filed Critical Kureha Corp
Publication of JPWO2005095413A1 publication Critical patent/JPWO2005095413A1/en
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/06—Fungi, e.g. yeasts
    • A61K36/07—Basidiomycota, e.g. Cryptococcus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

一般式（Ｉ）：
【化１】

Figure 2005095413

［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４の低級アルキル基、アセチル基、又はベンゾイル基である］
で表されるテレホール酸化合物若しくはその塩、あるいは、前記テレホール酸化合物若しくはその塩とタンパク質との結合物、あるいは、カワラタケ属に属する担子菌由来画分を有効成分として含有する、抗腫瘍剤を開示する。
Formula (I):
[Chemical 1]
Figure 2005095413

[Wherein, R 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are each independently a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acetyl group, or a benzoyl group]
An antitumor agent comprising, as an active ingredient, a teleholic acid compound or a salt thereof represented by the above, a conjugate of the teleholic acid compound or a salt thereof and a protein, or a fraction derived from basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake To do.

Description

本発明は、抗腫瘍剤に関する。本発明の抗腫瘍剤は、医薬品として投与することができるだけでなく、種々の形態、例えば、健康食品（好ましくは機能性食品）又は飼料として飲食物の形で与えることも可能である。なお、前記食品には飲料が含まれる。更には、オーラル衛生用組成物、例えば、口中に一時的に含むものの、そのほとんどを口中より吐き出す形態、例えば、歯磨剤、洗口剤、チューインガム、又はうがい剤の形で与えることも、あるいは、鼻から吸引させる吸入剤の形で与えることも可能である。   The present invention relates to an antitumor agent. The antitumor agent of the present invention can be administered not only as a pharmaceutical product, but also in various forms such as health food (preferably functional food) or feed as food and drink. The food includes a beverage. Furthermore, an oral hygiene composition, for example, temporarily contained in the mouth, but most of it is given in the form of exhaling from the mouth, for example, in the form of a dentifrice, mouthwash, chewing gum, or mouthwash, or It is also possible to give in the form of an inhalant to be aspirated from the nose.

多孔菌科のカワラタケ属に属する担子菌には種々の生理活性物質が含まれていることが知られている。例えば、特許文献１には、カワラタケ属に属するカワラタケに含有される糖タンパク質複合体が抗腫瘍作用、免疫調節作用、及び増殖因子阻害作用を有することが開示されている。また、特許文献２には、多孔菌科に属する菌、例えば、カワラタケが抗腫瘍性成分を含むことが開示されている。
特開平８−２０８７０４号公報 特開昭５２−６１２１４号公報 It is known that basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake of the Porous Mycology family contain various physiologically active substances. For example, Patent Document 1 discloses that a glycoprotein complex contained in Kawaratake belonging to the genus Kawaratake has an antitumor action, an immunoregulatory action, and a growth factor inhibitory action. Patent Document 2 discloses that a bacterium belonging to the porous family, for example, Kawaratake, contains an antitumor component.
JP-A-8-208704 JP 52-61214 A

本発明者は、カワラタケ属に属する担子菌に含まれる生理活性物質を見出すことを目的に鋭意研究したところ、カワラタケ由来画分が、抗腫瘍活性を示すことを見出し、更に、その活性成分が２，３，８，９−テトラヒドロキシベンゾビス［１，２−ｂ，４，５−ｂ’］ベンゾフラン−６，１２−キノン（2,3,8,9-Tetrahydroxybenzobis[1,2-b,4,5-b’]benzofuran-6,12-quinone；以下、テレホール酸と称する）であることを見出した。本発明は、このような知見に基づくものである。
本発明の課題は、新規の抗腫瘍剤を提供することにある。The present inventor has intensively studied for the purpose of finding a physiologically active substance contained in basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake, and found that the fraction derived from Kawaratake exhibits antitumor activity. , 3,8,9-Tetrahydroxybenzobis [1,2-b, 4,5-b ′] benzofuran-6,12-quinone (2,3,8,9-Tetrahydroxybenzobis [1,2-b, 4 , 5-b '] benzofuran-6,12-quinone; hereinafter referred to as teleholic acid). The present invention is based on such knowledge.
An object of the present invention is to provide a novel antitumor agent.

前記課題は、本発明による、（１）一般式（Ｉ）：

Figure 2005095413
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４の低級アルキル基、アセチル基、又はベンゾイル基である］
で表されるテレホール酸化合物若しくはその塩、あるいは、前記テレホール酸化合物若しくはその塩とタンパク質との結合物、
（２）（ａ）カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整することにより得られる、アルカリ水溶液抽出液の酸性条件下沈殿画分（以下、画分Ｆ１と称することがある）、
（ｂ）前記画分（ａ）を極性有機溶媒存在下で還流して得られる、極性有機溶媒抽出画分（以下、画分Ｆ２と称することがある）、
（ｃ）前記画分（ｂ）から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（以下、画分Ｆ３と称することがある）、
（ｄ）前記画分（ｃ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分（又はアセチル化物）（以下、画分Ｆ４と称することがある）、
（ｅ）前記画分（ｄ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（以下、画分Ｆ５と称することがある）、
（ｆ）前記画分（ｅ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物）（以下、画分Ｆ６と称することがある）、若しくは
（ｇ）前記画分（ｆ）の有機溶媒抽出画分（以下、画分Ｆ７と称することがある）、又は（３）（ｈ）カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去して得られる、極性有機溶媒抽出画分の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（以下、画分Ｆ８と称することがある）、
（ｉ）前記画分（ｈ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分（又はアセチル化物）（以下、画分Ｆ９と称することがある）、
（ｊ）前記画分（ｈ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（以下、画分Ｆ１０と称することがある）、
（ｋ）前記画分（ｊ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物）（以下、画分Ｆ１１と称することがある）、若しくは
（ｌ）前記画分（ｋ）の有機溶媒抽出画分（以下、画分Ｆ１２と称することがある）、又は
（４）（ｍ）前記画分（ａ）〜（ｌ）の少なくとも１つの画分と、タンパク質との結合物を有効成分として含有することを特徴とする、抗腫瘍剤により解決することができる。The object is achieved by the present invention in accordance with (1) the general formula (I):
Figure 2005095413
 [Wherein, R 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are each independently a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acetyl group, or a benzoyl group]
A teleholic acid compound or a salt thereof represented by the above, or a conjugate of the teleholic acid compound or a salt thereof and a protein,
(2) (a) Precipitation fraction under acidic conditions of an aqueous alkaline solution obtained by adjusting the aqueous alkaline solution of a basidiomycete belonging to the genus Kawaratake (hereinafter sometimes referred to as fraction F1). ,
(B) a polar organic solvent extraction fraction obtained by refluxing the fraction (a) in the presence of a polar organic solvent (hereinafter sometimes referred to as fraction F2),
(C) Hot water soluble part and nonpolar organic solvent soluble part removal fraction (hereinafter referred to as fraction) obtained by removing the hot water soluble part and nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (b). Sometimes referred to as minute F3),
(D) an acetylated fraction (or acetylated product) obtained by acetylating the fraction (c) (hereinafter sometimes referred to as fraction F4),
(E) an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (d), and Nonpolar organic solvent soluble part removal fraction (hereinafter sometimes referred to as fraction F5),
(F) a deacetylated fraction (or deacetylated product) (hereinafter sometimes referred to as fraction F6) obtained by deacetylating the fraction (e), or (g) the fraction (f ) Organic solvent extraction fraction (hereinafter sometimes referred to as Fraction F7), or (3) (h) basidiomycete belonging to the genus Kawaratake is extracted by refluxing with a polar organic solvent, and the obtained polar organic solvent extraction The fraction obtained by removing the non-polar organic solvent soluble part and the hot water soluble part from the fraction, and the fraction obtained by removing the hot water soluble part and the non-polar organic solvent soluble part of the polar organic solvent extraction fraction (hereinafter, fractions) Sometimes called F8),
(I) an acetylated fraction (or an acetylated product) obtained by acetylating the fraction (h) (hereinafter sometimes referred to as fraction F9),
(J) An acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (h), and Nonpolar organic solvent soluble part removal fraction (hereinafter sometimes referred to as fraction F10),
(K) a deacetylated fraction (or deacetylated product) (hereinafter sometimes referred to as fraction F11) obtained by deacetylating the fraction (j), or (l) the fraction (k ) Organic solvent extract fraction (hereinafter also referred to as fraction F12), or (4) (m) at least one fraction of the fractions (a) to (l) and a conjugate of protein Can be solved by an antitumor agent characterized by containing as an active ingredient.

また、本発明は、
（ａ）カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整することにより得られる、アルカリ水溶液抽出液の酸性条件下沈殿画分、
（ｂ）前記画分（ａ）を極性有機溶媒存在下で還流して得られる、極性有機溶媒抽出画分、
（ｃ）前記画分（ｂ）から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｄ）前記画分（ｃ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分（又はアセチル化物）、
（ｅ）前記画分（ｄ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｆ）前記画分（ｅ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物））、
（ｇ）前記画分（ｆ）の有機溶媒抽出画分、
（ｈ）カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去して得られる、極性有機溶媒抽出画分の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｉ）前記画分（ｈ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分（又はアセチル化物）、
（ｊ）前記画分（ｈ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｋ）前記画分（ｊ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物）、若しくは
（ｌ）前記画分（ｋ）の有機溶媒抽出画分、又は
（ｍ）前記画分（ａ）〜（ｌ）の少なくとも１つの画分と、タンパク質との結合物
に関する。The present invention also provides:
(A) a precipitate fraction under acidic conditions of an aqueous alkaline solution obtained by adjusting the aqueous alkaline solution of a basidiomycete belonging to the genus Kawaratake
(B) a polar organic solvent extraction fraction obtained by refluxing the fraction (a) in the presence of a polar organic solvent,
(C) A hot water soluble part and a nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained by removing a hot water soluble part and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (b),
(D) an acetylated fraction (or acetylated product) obtained by acetylating the fraction (c),
(E) an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (d), and Non-polar organic solvent soluble part removal fraction,
(F) a deacetylated fraction (or deacetylated product) obtained by deacetylating the fraction (e),
(G) an organic solvent extraction fraction of the fraction (f),
(H) A polar organic compound obtained by reflux-extracting basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake with a polar organic solvent and then removing the nonpolar organic solvent soluble part and the hot water soluble part from the obtained polar organic solvent extract fraction Hot water soluble part and nonpolar organic solvent soluble part removal fraction of solvent extraction fraction,
(I) an acetylated fraction (or acetylated product) obtained by acetylating the fraction (h),
(J) An acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (h), and Non-polar organic solvent soluble part removal fraction,
(K) a deacetylated fraction (or deacetylated product) obtained by deacetylating the fraction (j), or (l) an organic solvent extract fraction of the fraction (k), or (m) The present invention relates to a bound product of at least one of the fractions (a) to (l) and a protein.

また、本発明は、前記画分（ａ）〜（ｌ）又は結合物（ｍ）の少なくとも１つと、薬剤学的又は獣医学的に許容することのできる担体又は希釈剤とを含有する、医薬組成物に関する。
また、本発明は、前記物質（１）、画分（ａ）〜（ｌ）、又は結合物（ｍ）の少なくとも１つを、癌の治療又は予防の必要な対象に、有効量で投与することを含む、癌の治療又は予防方法に関する。
また、本発明は、前記物質（１）、画分（ａ）〜（ｌ）、又は結合物（ｍ）の少なくとも１つの、抗腫瘍剤を製造するための使用に関する。The present invention also provides a pharmaceutical comprising at least one of the fractions (a) to (l) or the conjugate (m) and a pharmaceutically or veterinarily acceptable carrier or diluent. Relates to the composition.
In the present invention, at least one of the substance (1), fractions (a) to (l), or the conjugate (m) is administered in an effective amount to a subject in need of treatment or prevention of cancer. The present invention relates to a method for treating or preventing cancer.
The present invention also relates to the use of the substance (1), fractions (a) to (l), or the conjugate (m) for producing an antitumor agent.

本発明の抗腫瘍剤は、癌の治療及び／又は予防に有用である。   The antitumor agent of the present invention is useful for the treatment and / or prevention of cancer.

カワラタケ由来画分の１Ｈ−ＮＭＲ測定により得られたスペクトルである。It is the spectrum acquired by 1 H-NMR measurement of the fraction derived from Kawaratake. カワラタケ由来画分の１３Ｃ−ＮＭＲ測定により得られたスペクトルである。It is the spectrum obtained by the 13 C-NMR measurement of a Kawaratake-derived fraction. カワラタケ由来画分のＩＲスペクトルである。It is IR spectrum of a fraction derived from Kawaratake. カワラタケ由来画分のＭＳ解析により得られたスペクトルである。It is the spectrum acquired by MS analysis of the fraction derived from Kawaratake. マウス白血病細胞株Ｐ３８８の増殖に対するテレホール酸の抑制作用を検討した結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of having investigated the inhibitory effect of the teleholic acid with respect to the proliferation of mouse leukemia cell strain P388. 図５に示す実験と別の日に実施した実験における、マウス白血病細胞株Ｐ３８８の増殖に対するテレホール酸の抑制作用を検討した結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of having investigated the inhibitory effect of the teleholic acid with respect to the proliferation of the mouse leukemia cell strain P388 in the experiment conducted on a different day from the experiment shown in FIG. マウス発癌ウイルス形質転換細胞株ＳＶ４０／３Ｔ３の増殖に対するテレホール酸の抑制作用を検討した結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of having investigated the inhibitory effect of a teleholic acid with respect to the proliferation of mouse | mouth carcinogenic virus transformation cell strain SV40 / 3T3. マウス正常細胞株３Ｔ３の増殖に対するテレホール酸の作用を検討した結果を示すグラフである。It is a graph which shows the result of having investigated the effect | action of the teleholic acid with respect to the proliferation of mouse | mouth normal cell strain 3T3.

本発明の抗腫瘍剤は、有効成分として、（１）一般式（Ｉ）：

Figure 2005095413
［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４の低級アルキル基、アセチル基、又はベンゾイル基である］
で表されるテレホール酸化合物若しくはその塩、あるいは、前記テレホール酸化合物若しくはその塩とタンパク質との結合物、又は（２）カワラタケ属に属する担子菌に由来する本発明の各種画分（Ｆ１〜Ｆ１２）の少なくとも１つ、あるいは、前記画分Ｆ１〜Ｆ１２の少なくとも１つの画分とタンパク質との結合物を含有する。The antitumor agent of the present invention comprises (1) general formula (I):
Figure 2005095413
 [Wherein, R 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are each independently a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acetyl group, or a benzoyl group]
Or a combination of the teleholic acid compound or a salt thereof and a protein, or (2) various fractions of the present invention derived from a basidiomycete belonging to the genus Kawaratake (F1 to F12) Or at least one fraction of the fractions F1 to F12 and a bound product of protein.

本発明の抗腫瘍剤における有効成分の１つであるテレホール酸は、一般式（Ｉ）においてＲ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４が全て水素原子である化合物である。テレホール酸は、例えば、J. Gripenberg, Tetrahedron, vol.10, pp. 135-143 (1960)に記載の方法により化学合成することもできるし、あるいは、天然のキノコ又は人工培養の菌糸体から分離することもできる。テレホール酸を含むキノコとしては、例えば、カワラタケ

Figure 2005095413
あるいは、イボタケ科に属するキノコ［例えば、コウタケ（Sarcodon aspratus (Berk), S.Ito）、ケロウジ（Sarcodon scabrosus
(Fr.) Karst.）、又はシシタケ（Sarcodon imbricatum (L. ex Fr.) Karst.）］を挙げることができる。Teleholic acid, which is one of the active ingredients in the antitumor agent of the present invention, is a compound in which R 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are all hydrogen atoms in general formula (I). Teleholic acid can be chemically synthesized by, for example, the method described in J. Gripenberg, Tetrahedron, vol. 10, pp. 135-143 (1960), or separated from natural mushrooms or mycelium of artificial culture. You can also Examples of mushrooms containing teleholic acid include Kawaratake
Figure 2005095413
 Alternatively, mushrooms belonging to the family Amanita [for example, Sarcodon aspratus (Berk), S. Ito ), Keroji ( Sarcodon scabrosus
(Fr.) Karst.), Or Shishitake (Sarcodon imbricatum (L. ex Fr.) Karst.)] Can be exemplified.

テレホール酸の溶解性は、
ピリジン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、又はジオキサン＞アセトン＞メタノール、エタノール、酢酸エチル＞エーテル（例えば、ジエチルエーテル）、エステル類＞
水、ベンゼン、ヘキサン、四塩化炭素
であり、テレホール酸のアセチル化体の溶解性は、ピリジン、ＤＭＳＯ、又はジオキサンに溶解するが、それ以外の主要な溶媒には不溶である。The solubility of teleholic acid is
Pyridine, dimethyl sulfoxide (DMSO), or dioxane>acetone> methanol, ethanol, ethyl acetate> ether (for example, diethyl ether), esters>
Water, benzene, hexane, and carbon tetrachloride. The solubility of the acetylated form of teleholic acid is soluble in pyridine, DMSO, or dioxane, but insoluble in other major solvents.

一般式（Ｉ）における炭素数１〜４の低級アルキル基には、直鎖状アルキル基及び分枝状アルキル基が含まれ、例えば、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、又はｔｅｒｔ−ブチル基を挙げることができ、メチル基又はエチル基が好ましい。   The lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms in the general formula (I) includes a linear alkyl group and a branched alkyl group. For example, a methyl group, an ethyl group, an n-propyl group, an isopropyl group, n -A butyl group, an isobutyl group, a sec-butyl group, or a tert- butyl group can be mentioned, A methyl group or an ethyl group is preferable.

本発明における有効成分の１つであるテレホール酸の塩は、薬剤学的に許容される塩である限り、特に限定されるものではないが、例えば、無機塩基又は有機塩基との塩を挙げることができる。塩の形成に適した無機塩基は、例えば、アンモニア、カリウム、ナトリウム、リチウム、カルシウム、マグネシウム、又はアルミニウム等の水酸化物、炭酸塩、又は重炭酸塩等である。有機塩基との塩としては、例えば、メチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミンのようなモノ−、ジ−、若しくはトリ−アルキルアミン塩、モノ−、ジ−、若しくはトリ−ヒドロキシアルキルアミン塩、グアニジン塩、Ｎ−メチルグルコサミン塩、又はアミノ酸塩等を挙げることができる。   The salt of teleholic acid, which is one of the active ingredients in the present invention, is not particularly limited as long as it is a pharmaceutically acceptable salt. Examples thereof include salts with inorganic bases or organic bases. Can do. Inorganic bases suitable for salt formation are, for example, hydroxides such as ammonia, potassium, sodium, lithium, calcium, magnesium, or aluminum, carbonates, bicarbonates, and the like. Examples of salts with organic bases include mono-, di-, or tri-alkylamine salts such as methylamine, dimethylamine, and triethylamine, mono-, di-, or tri-hydroxyalkylamine salts, guanidine salts, N-methylglucosamine salt, amino acid salt, etc. can be mentioned.

本発明において抗腫瘍剤における有効成分として用いることのできる、カワラタケ属に属する担子菌に由来する画分Ｆ１〜Ｆ７及び画分Ｆ８〜Ｆ１２は、それ自体、新規物質である。
カワラタケ属に属する担子菌としては、例えば、カワラタケ

Figure 2005095413
又はハカワラタケ［Coriolus pargamenus (Fr.) Pat.］を挙げることができるが、とりわけカワラタケが好ましい。Fractions F1 to F7 and fractions F8 to F12 derived from basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake, which can be used as active ingredients in antitumor agents in the present invention, are novel substances themselves.
Examples of basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake include, for example, Kawaratake
Figure 2005095413
 Alternatively, there may be mentioned [ Tatsunotake ] [ Coriolus pargamenus (Fr.) Pat.].

本発明で用いるカワラタケ属に属する担子菌（好ましくはカワラタケ）としては、例えば、天然の担子菌の子実体若しくは菌糸体、又は培養により得られる担子菌の菌糸体若しくは培養物（Ｂｒｏｔｈ）を挙げることができる。前記担子菌として子実体又は菌糸体を用いる場合には、抽出効率が向上するように、破砕物又は粉体の状態に加工することが好ましい。   Examples of basidiomycetes (preferably Kawaratake) belonging to the genus Kawaratake used in the present invention include the fruit bodies or mycelia of natural basidiomycetes, or mycelia or cultures (Broth) of basidiomycetes obtained by culturing. Can do. When a fruit body or mycelium is used as the basidiomycete, it is preferably processed into a crushed material or powder so as to improve extraction efficiency.

本発明の酸性条件下沈殿画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整する工程により得られる、酸性条件下沈殿画分；画分Ｆ１）は、カワラタケ属に属する担子菌をアルカリ水溶液で抽出し、得られたアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整し、酸性条件で放置することにより得ることができる。前記アルカリ水溶液としては、例えば、飽和ホウ酸ナトリウム水溶液を用いることができる。アルカリ水溶液による抽出は、例えば、ｐＨ８〜１４のアルカリ条件下で、０〜１００℃にて０．５〜７２時間行うことができる。前記酸性条件は、例えば、ｐＨ１〜６とすることができ、例えば、０〜１００℃にて０．５〜７２時間放置した後、遠心分離することにより、沈殿を回収することができる。前記遠心分離は、例えば、１０，０００〜５０，０００×ｇで１０〜３０分間実施することができる。得られた沈殿は、適当な洗浄液（例えば水、好ましくは蒸留水）を用いて、洗浄液が中性（ｐＨ７）になるまで洗浄を繰り返すことが好ましい。   The precipitate fraction under acidic conditions of the present invention (that is, the precipitate fraction under acidic conditions obtained by the step of adjusting the alkaline aqueous solution extract of basidiomyceae belonging to the genus Kawaratake; fraction F1) belongs to the genus Kawaratake. The basidiomycete can be extracted with an alkaline aqueous solution, and the resulting alkaline aqueous solution extract is adjusted to be acidic and left under acidic conditions. As the alkaline aqueous solution, for example, a saturated sodium borate aqueous solution can be used. Extraction with an aqueous alkali solution can be performed, for example, at 0 to 100 ° C. for 0.5 to 72 hours under alkaline conditions of pH 8 to 14. The acidic condition can be adjusted to, for example, pH 1 to 6, and for example, the precipitate can be recovered by centrifuging after standing at 0 to 100 ° C. for 0.5 to 72 hours. The centrifugation can be performed, for example, at 10,000 to 50,000 × g for 10 to 30 minutes. The obtained precipitate is preferably washed repeatedly using a suitable washing liquid (for example, water, preferably distilled water) until the washing liquid becomes neutral (pH 7).

本発明の極性有機溶媒抽出画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整する工程、及び前記工程により得られる酸性条件下沈殿画分を極性有機溶媒存在下で還流する工程により得られる、極性有機溶媒抽出画分；画分Ｆ２）は、前記酸性条件下沈殿画分に、極性有機溶媒を添加し、還流することにより得ることができる。前記極性有機溶媒は、水溶性の性質を示すものである限り、特に限定されるものではないが、例えば、アセトン、メタノール、エタノール、酢酸エチル、又はジメチルエーテルを用いることができ、アセトンが好ましい。還流は、有機溶媒抽出液の色が消えるまで実施することが好ましく、例えば、５０〜１５０℃にて１〜２４時間実施することができる。本発明の極性有機溶媒抽出画分には、還流した後の抽出液と、その乾燥物の両方が含まれる。   Extraction fraction of polar organic solvent of the present invention (that is, the step of adjusting the alkaline aqueous solution extract of basidiomycete belonging to the genus Kawaratake to acidity, and refluxing the precipitate fraction obtained by the above step in the presence of the polar organic solvent) The polar organic solvent extraction fraction; fraction F2) obtained by the above step can be obtained by adding a polar organic solvent to the precipitate fraction under the acidic condition and refluxing. The polar organic solvent is not particularly limited as long as it exhibits water-soluble properties. For example, acetone, methanol, ethanol, ethyl acetate, or dimethyl ether can be used, and acetone is preferable. The refluxing is preferably carried out until the color of the organic solvent extract disappears, and can be carried out, for example, at 50 to 150 ° C. for 1 to 24 hours. The polar organic solvent extraction fraction of the present invention includes both the extract after reflux and its dried product.

本発明の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整する工程、前記工程により得られる酸性条件下沈殿画分を極性有機溶媒存在下で還流する工程、並びに前記工程により得られる極性有機溶媒抽出画分から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程により得られる、熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分；画分Ｆ３）は、例えば、前記極性有機溶媒抽出画分と熱水とを接触させた後、熱水可溶部を、例えば、遠心分離により除去し、続いて、得られた熱水可溶部除去画分と非極性有機溶媒とを接触させた後、非極性有機溶媒可溶部を、例えば、遠心分離により除去することにより得ることができる。熱水との接触と非極性有機溶媒との接触は、この順序で実施することもできるし、逆の順序で実施することもできる。   Fraction removing hot water soluble part and non-polar organic solvent soluble part of the present invention (that is, a step of adjusting the aqueous alkaline solution extract of basidiomyceae belonging to the genus Kawaratake to acidic, a precipitate under acidic conditions obtained by the step A hydrothermally soluble part obtained by a step of refluxing the fraction in the presence of a polar organic solvent, and a process of removing the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part from the polar organic solvent extraction fraction obtained by the process And non-polar organic solvent soluble part removal fraction; fraction F3), for example, after contacting the polar organic solvent extraction fraction and hot water, the hot water soluble part is removed, for example, by centrifugation Subsequently, after contacting the obtained hot water soluble part removal fraction and the nonpolar organic solvent, the nonpolar organic solvent soluble part can be obtained, for example, by removing by centrifugation. . The contact with hot water and the contact with the nonpolar organic solvent can be carried out in this order, or can be carried out in the reverse order.

熱水との接触は、例えば、５０〜１００℃で１０〜６０分間実施することができる。熱水との接触は、５〜１０回繰り返すことが好ましい。
非極性有機溶媒との接触は、例えば、１０〜６０分間実施することができる。前記非極性有機溶媒としては、例えば、クロロホルム、ヘキサン、ベンゼン、四塩化炭素、又はメチレンクロライドを用いることができる。非極性有機溶媒との接触は、１つの非極性有機溶媒に関して、５〜１０回繰り返すことが好ましい。また、１種類の非極性有機溶媒だけを用いることもできるし、異なる非極性有機溶媒を順次用いることもできる。Contact with hot water can be carried out, for example, at 50 to 100 ° C. for 10 to 60 minutes. The contact with hot water is preferably repeated 5 to 10 times.
The contact with the nonpolar organic solvent can be carried out, for example, for 10 to 60 minutes. As the nonpolar organic solvent, for example, chloroform, hexane, benzene, carbon tetrachloride, or methylene chloride can be used. The contact with the nonpolar organic solvent is preferably repeated 5 to 10 times for one nonpolar organic solvent. Moreover, only one type of nonpolar organic solvent can be used, or different nonpolar organic solvents can be used sequentially.

本発明のアセチル化画分（又はアセチル化物）［すなわち、カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整する工程、前記工程により得られる酸性条件下沈殿画分を極性有機溶媒存在下で還流する工程、前記工程により得られる極性有機溶媒抽出画分から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、並びに前記工程により得られる熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分をアセチル化する工程により得られる、アセチル化画分（又はアセチル化物）；画分Ｆ４］は、前記熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分をアセチル化することにより得ることができる。前記アセチル化は、例えば、前記熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分に、無水酢酸と適当な有機溶媒［例えば、ピリジン、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、又はジオキサン］を添加し、０〜１００℃にて１〜２４時間加熱することにより実施することができる。   The acetylated fraction (or acetylated product) of the present invention [that is, the step of adjusting the alkaline aqueous solution extract of basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake to acidity, the precipitate fraction obtained under the acidic conditions obtained by the above step in the presence of a polar organic solvent In which the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part are removed from the polar organic solvent extraction fraction obtained by the process, and the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent obtained by the process The acetylated fraction (or acetylated product); fraction F4] obtained by the step of acetylating the soluble portion-removed fraction is obtained by acetylating the hot water soluble portion and the nonpolar organic solvent soluble portion removed fraction. Can be obtained. In the acetylation, for example, acetic anhydride and a suitable organic solvent [for example, pyridine, dimethyl sulfoxide (DMSO), or dioxane] are added to the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction. It can be carried out by heating at 0 to 100 ° C. for 1 to 24 hours.

本発明の酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整する工程、前記工程により得られる酸性条件下沈殿画分を極性有機溶媒存在下で還流する工程、前記工程により得られる極性有機溶媒抽出画分から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、前記工程により得られる熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分をアセチル化する工程、並びに前記工程により得られるアセチル化画分から、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程から得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分；画分Ｆ５）は、前記アセチル化画分と酸性水溶液とを接触させた後、酸性水溶液可溶部を除去し、続いて、得られた酸性水溶液可溶部除去画分とアルカリ水溶液とを接触させた後、アルカリ水溶液可溶部を除去し、更に、得られた酸性水溶液可溶部及びアルカリ水溶液可溶部除去画分と非極性有機溶媒とを接触させた後、非極性有機溶媒可溶部を除去することにより得ることができる。酸性水溶液、アルカリ水溶液、及び非極性有機溶媒との接触は、この順序で実施することもできるし、これ以外の任意の順序で実施することもできる。   The acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part, and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction of the present invention (that is, the step of adjusting the alkaline aqueous solution extract of basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake to the acid, A step of refluxing a precipitate fraction in the presence of a polar organic solvent under acidic conditions, a step of removing a hot water-soluble portion and a nonpolar organic solvent-soluble portion from the polar organic solvent extraction fraction obtained by the step, and the step From the step of acetylating the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained by the above, and from the acetylated fraction obtained by the above step, an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, The acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part, and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained from the step of removing the polar organic solvent soluble part; fraction F5) is the acetylated fraction. After contacting with the acidic aqueous solution, the acidic aqueous solution soluble part is removed, and then the obtained acidic aqueous solution soluble part removing fraction and the alkaline aqueous solution are contacted, and then the alkaline aqueous solution soluble part is removed. Furthermore, after making the acidic aqueous solution soluble part and alkaline aqueous solution soluble part removal fraction and nonpolar organic solvent which were obtained contact, the nonpolar organic solvent soluble part can be removed. Contact with the acidic aqueous solution, the alkaline aqueous solution, and the nonpolar organic solvent can be performed in this order, or can be performed in any other order.

酸性水溶液との接触は、例えば、０〜１００℃で１０〜６０分間実施することができる。前記酸性水溶液としては、例えば、塩酸、硫酸、リン酸、又は硝酸を用いることができ、その濃度は、０．５〜２Ｎであることができる。酸性水溶液との接触は、５〜１０回繰り返すことが好ましい。   Contact with acidic aqueous solution can be implemented at 0-100 degreeC for 10 to 60 minutes, for example. As said acidic aqueous solution, hydrochloric acid, a sulfuric acid, phosphoric acid, or nitric acid can be used, for example, The density | concentration can be 0.5-2N. The contact with the acidic aqueous solution is preferably repeated 5 to 10 times.

アルカリ水溶液との接触は、例えば、０〜１００℃で１０〜６０分間実施することができる。前記アルカリ水溶液としては、例えば、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、１０〜２０％炭酸ナトリウム水溶液、又は飽和炭酸水素カリウム水溶液を用いることができ、そのｐＨは７．５〜１０であることができる。酸性水溶液との接触は、５〜１０回繰り返すことが好ましい。   The contact with the alkaline aqueous solution can be carried out, for example, at 0 to 100 ° C. for 10 to 60 minutes. As the alkaline aqueous solution, for example, a saturated sodium hydrogen carbonate aqueous solution, a 10-20% sodium carbonate aqueous solution, or a saturated potassium hydrogen carbonate aqueous solution can be used, and its pH can be 7.5-10. The contact with the acidic aqueous solution is preferably repeated 5 to 10 times.

非極性有機溶媒との接触は、例えば、０〜１００℃で１０〜６０分間実施することができる。前記非極性有機溶媒としては、例えば、クロロホルム、酢酸エチル、ヘキサン、ベンゼン、四塩化炭素、又はメチレンクロライドを用いることができる。非極性有機溶媒との接触は、１つの非極性有機溶媒に関して、５〜１０回繰り返すことが好ましい。また、１種類の非極性有機溶媒だけを用いることもできるし、異なる非極性有機溶媒を順次用いることもできる。   The contact with the nonpolar organic solvent can be carried out, for example, at 0 to 100 ° C. for 10 to 60 minutes. As the nonpolar organic solvent, for example, chloroform, ethyl acetate, hexane, benzene, carbon tetrachloride, or methylene chloride can be used. The contact with the nonpolar organic solvent is preferably repeated 5 to 10 times for one nonpolar organic solvent. Moreover, only one type of nonpolar organic solvent can be used, or different nonpolar organic solvents can be used sequentially.

本発明の脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物）（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整する工程、前記工程により得られる酸性条件下沈殿画分を極性有機溶媒存在下で還流する工程、前記工程により得られる極性有機溶媒抽出画分から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、前記工程により得られる熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分をアセチル化する工程、前記工程により得られるアセチル化画分から、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、並びに前記工程から得られる酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画を脱アセチル化する工程から得られる、脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物）；画分Ｆ６）は、前記酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分を脱アセチル化することにより得ることができる。前記脱アセチル化は、例えば、前記酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分に、アルコキシド（例えば、ナトリウムメトキシド）を適当な有機溶媒（例えば、無水エタノール、ビリジン、ＤＭＳＯ、又はジオキサン）に溶解した溶液を添加し、７０〜１００℃にて１〜２４時間撹拌することにより実施することができる。   Deacetylated fraction (or deacetylated product) of the present invention (that is, a step of adjusting the alkaline aqueous solution extract of basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake to acid, the precipitate fraction obtained under the acidic conditions obtained by the step described above as a polar organic solvent The step of refluxing in the presence, the step of removing the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part from the polar organic solvent extraction fraction obtained by the step, the hot water soluble part and the nonpolar organic obtained by the step The step of acetylating the solvent-soluble portion removal fraction, the step of removing the acidic aqueous solution-soluble portion, the alkaline aqueous solution-soluble portion, and the nonpolar organic solvent-soluble portion from the acetylated fraction obtained by the above-mentioned step, and Deacetylation fraction (or deaeration) obtained from the step of deacetylating the acidic aqueous solution soluble portion, alkaline aqueous solution soluble portion, and nonpolar organic solvent soluble portion removal fraction obtained from the step Chill products); Fraction F6), the acidic aqueous solution-soluble portion, alkaline aqueous solution-soluble portion, and a non-polar organic solvent-soluble portion removed fraction may be obtained by deacetylation. In the deacetylation, for example, an alkoxide (for example, sodium methoxide) is added to an appropriate organic solvent (for example, sodium methoxide) in the acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part, and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction. It can carry out by adding the solution melt | dissolved in absolute ethanol, pyridine, DMSO, or a dioxane and stirring at 70-100 degreeC for 1 to 24 hours.

本発明の有機溶媒抽出画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整する工程、前記工程により得られる酸性条件下沈殿画分を極性有機溶媒存在下で還流する工程、前記工程により得られる極性有機溶媒抽出画分から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、前記工程により得られる熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分をアセチル化する工程、前記工程により得られるアセチル化画分から、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、前記工程から得られる酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画を脱アセチル化する工程、並びに前記工程から得られる脱アセチル化画分を有機溶媒で抽出する工程により得られる、有機溶媒抽出画分；画分Ｆ７）は、前記脱アセチル化画分と有機溶媒とを接触させ、有機溶媒相を回収することにより得ることができる。前記有機溶媒は、疎水性の性質を示すものである限り、特に限定されるものではないが、例えば、ビリジン、ＤＭＳＯ、又は酢酸エチルを用いることができる。有機溶媒との接触による抽出は、有機溶媒相に着色が見られなくなるまで実施することが好ましい。   The organic solvent extraction fraction of the present invention (that is, the step of adjusting the alkaline aqueous solution extract of basidiomyceae belonging to the genus Kawaratake to acidity, the step of refluxing the precipitate fraction obtained under the acidic conditions in the presence of a polar organic solvent) , The step of removing the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part from the polar organic solvent extraction fraction obtained by the step, the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained by the step The step of acetylating the fraction, the step of removing the acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part and the non-polar organic solvent soluble part from the acetylated fraction obtained by the above process, the acidic aqueous solution obtained from the above process A step of deacetylating a soluble portion, an aqueous alkali solution soluble portion, and a non-polar organic solvent soluble portion removed fraction, and a step of extracting a deacetylated fraction obtained from the step with an organic solvent More obtained organic solvent extract fraction; fractions F7), the contacting the deacetylation fraction and an organic solvent, can be obtained by recovering an organic solvent phase. The organic solvent is not particularly limited as long as it exhibits hydrophobic properties. For example, viridine, DMSO, or ethyl acetate can be used. The extraction by contact with an organic solvent is preferably carried out until no coloration is observed in the organic solvent phase.

本発明の極性有機溶媒抽出画分の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去する工程により得られる、極性有機溶媒抽出画分の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分；画分Ｆ８）は、カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出し、例えば、得られた極性有機溶媒抽出画分と非極性有機溶媒とを接触させた後、非極性有機溶媒可溶部を除去し、続いて、得られた非極性有機溶媒除去画分と熱水とを接触させた後、熱水可溶部を除去することにより得ることができる。非極性有機溶媒との接触と熱水との接触は、この順序で実施することもできるし、逆の順序で実施することもできる。   The fraction obtained by removing the hot water soluble part and the nonpolar organic solvent soluble part of the fraction extracted from the polar organic solvent of the present invention (that is, the basidiomycete belonging to the genus Kawaratake was refluxed and extracted with a polar organic solvent, A hot water soluble part and a nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained by a process of removing a nonpolar organic solvent soluble part and a hot water soluble part from a solvent extraction fraction; The fraction F8) is obtained by reflux-extracting basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake with a polar organic solvent, for example, bringing the obtained polar organic solvent-extracted fraction into contact with a nonpolar organic solvent, and then a nonpolar organic solvent soluble part Subsequently, after the obtained nonpolar organic solvent removal fraction and hot water are brought into contact with each other, the hot water-soluble part can be removed. The contact with the non-polar organic solvent and the contact with hot water can be performed in this order, or can be performed in the reverse order.

前記極性有機溶媒は、水溶性の性質を示すものである限り、特に限定されるものではないが、例えば、アセトン、メタノール、エタノール、酢酸エチル、又はジメチルエーテルを用いることができ、アセトンが好ましい。還流は、有機溶媒抽出液の色が消えるまで実施することが好ましく、例えば、５０〜１５０℃にて１〜２４時間実施することができる。本発明の極性有機溶媒抽出画分には、還流した後の抽出液と、その乾燥物の両方が含まれる。   The polar organic solvent is not particularly limited as long as it exhibits water-soluble properties. For example, acetone, methanol, ethanol, ethyl acetate, or dimethyl ether can be used, and acetone is preferable. The refluxing is preferably carried out until the color of the organic solvent extract disappears, and can be carried out, for example, at 50 to 150 ° C. for 1 to 24 hours. The polar organic solvent extraction fraction of the present invention includes both the extract after reflux and its dried product.

非極性有機溶媒との接触は、例えば、１０〜６０分間実施することができる。前記非極性有機溶媒としては、例えば、クロロホルム、ヘキサン、ベンゼン、四塩化炭素、又はメチレンクロライドを用いることができる。非極性有機溶媒との接触は、１つの非極性有機溶媒に関して、５〜１０回繰り返すことが好ましい。また、１種類の非極性有機溶媒だけを用いることもできるし、異なる非極性有機溶媒を順次用いることもできる。
また、熱水との接触は、例えば、５０〜１００℃で１０〜６０分間実施することができる。熱水との接触は、５〜１０回繰り返すことが好ましい。The contact with the nonpolar organic solvent can be carried out, for example, for 10 to 60 minutes. As the nonpolar organic solvent, for example, chloroform, hexane, benzene, carbon tetrachloride, or methylene chloride can be used. The contact with the nonpolar organic solvent is preferably repeated 5 to 10 times for one nonpolar organic solvent. Moreover, only one type of nonpolar organic solvent can be used, or different nonpolar organic solvents can be used sequentially.
Moreover, a contact with hot water can be implemented at 50-100 degreeC for 10 to 60 minutes, for example. The contact with hot water is preferably repeated 5 to 10 times.

本発明のアセチル化画分（又はアセチル化物）［すなわち、カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去する工程、並びに前記工程により得られる画分をアセチル化する工程により得られる、アセチル化画分（又はアセチル化物）；画分Ｆ９］は、前記極性有機溶媒抽出画分の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分をアセチル化することにより得ることができる。前記アセチル化は、出発材料が異なること以外は、本発明の前記画分Ｆ４を調製するために実施するアセチル化と同様にして実施することができる。   Acetylated fraction (or acetylated product) of the present invention [that is, basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake are extracted by refluxing with a polar organic solvent, and then the non-polar organic solvent-soluble part and hot water are extracted from the obtained polar organic solvent-extracted fraction. The acetylated fraction (or acetylated product) obtained by the step of removing the soluble part and the step of acetylating the fraction obtained by the above step; the fraction F9] is the heat of the polar organic solvent extraction fraction. It can be obtained by acetylating the water-soluble part and the nonpolar organic solvent-soluble part removal fraction. The acetylation can be carried out in the same manner as the acetylation carried out to prepare the fraction F4 of the present invention except that the starting materials are different.

本発明の酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去する工程、前記工程により得られる画分をアセチル化する工程、並びに前記工程により得られるアセチル化画分から、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程から得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分；画分Ｆ１０）は、前記アセチル化画分と酸性水溶液とを接触させた後、酸性水溶液可溶部を除去し、続いて、得られた酸性水溶液可溶部除去画分とアルカリ水溶液とを接触させた後、アルカリ水溶液可溶部を除去し、更に、得られた酸性水溶液可溶部及びアルカリ水溶液可溶部除去画分と非極性有機溶媒とを接触させた後、非極性有機溶媒可溶部を除去することにより得ることができる。酸性水溶液、アルカリ水溶液、及び非極性有機溶媒との接触は、この順序で実施することもできるし、これ以外の任意の順序で実施することもできる。
酸性水溶液、アルカリ水溶液、及び非極性有機溶媒との各接触は、出発材料が異なること以外は、本発明の前記画分Ｆ５を調製するために実施する各接触と同様にして実施することができる。The acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part, and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction of the present invention (ie, the polar organic obtained after reflux extraction of basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake with a polar organic solvent) The step of removing the non-polar organic solvent soluble part and the hot water soluble part from the solvent extraction fraction, the step of acetylating the fraction obtained by the above step, and the acidic aqueous solution soluble from the acetylated fraction obtained by the above step Fraction, acidic aqueous solution soluble part, alkaline aqueous solution soluble part, and nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained from the step of removing the aqueous solution, alkaline aqueous solution soluble part, and nonpolar organic solvent soluble part; F10), after contacting the acetylated fraction and the acidic aqueous solution, the acidic aqueous solution soluble part was removed, and then the obtained acidic aqueous solution soluble part removing fraction was contacted with the alkaline aqueous solution. After, al The aqueous solution soluble part is removed, and after the acidic aqueous solution soluble part and alkaline aqueous solution soluble part removal fraction are brought into contact with the nonpolar organic solvent, the nonpolar organic solvent soluble part is removed. Can be obtained. Contact with the acidic aqueous solution, the alkaline aqueous solution, and the nonpolar organic solvent can be performed in this order, or can be performed in any other order.
Each contact with the acidic aqueous solution, the alkaline aqueous solution, and the nonpolar organic solvent can be carried out in the same manner as each contact carried out for preparing the fraction F5 of the present invention except that the starting materials are different. .

本発明の脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物）（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去する工程、前記工程により得られる画分をアセチル化する工程、並びに前記工程により得られるアセチル化画分から、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、並びに前記工程から得られる酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画を脱アセチル化する工程から得られる、脱アセチル化画分（又は脱アセチル化物）；画分Ｆ１１）は、前記酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分を脱アセチル化することにより得ることができる。前記脱アセチル化は、出発材料が異なること以外は、本発明の前記画分Ｆ６を調製するために実施する脱アセチル化と同様にして実施することができる。   The deacetylated fraction (or deacetylated product) of the present invention (that is, basidiomyceae belonging to the genus Kawaratake) after reflux extraction with a polar organic solvent, from the obtained polar organic solvent extract fraction, From the step of removing the hot water soluble portion, the step of acetylating the fraction obtained by the above step, and the acetylated fraction obtained by the above step, the acidic aqueous solution soluble portion, the alkaline aqueous solution soluble portion, and the nonpolar organic Deacetylation obtained from the step of removing the solvent soluble part, and the step of deacetylating the acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part, and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained from the above step The fraction (or deacetylated product); the fraction F11) is to deacetylate the acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part, and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction. Ri may be obtained. The deacetylation can be carried out in the same manner as the deacetylation carried out to prepare the fraction F6 of the present invention, except that the starting materials are different.

本発明の有機溶媒抽出画分（すなわち、カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去する工程、前記工程により得られる画分をアセチル化する工程、並びに前記工程により得られるアセチル化画分から、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去する工程、並びに前記工程から得られる酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画を脱アセチル化する工程、並びに前記工程から得られる脱アセチル化画分を有機溶媒で抽出する工程により得られる、有機溶媒抽出画分；画分Ｆ１２）は、前記脱アセチル化画分と有機溶媒とを接触させ、有機溶媒相を回収することにより得ることができる。前記有機溶媒との接触は、出発材料が異なること以外は、本発明の前記画分Ｆ７を調製するために実施する有機溶媒との接触と同様にして実施することができる。   The organic solvent extract fraction of the present invention (that is, basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake are extracted by refluxing with a polar organic solvent, and then the nonpolar organic solvent soluble part and the hot water soluble part are extracted from the obtained polar organic solvent extract fraction. The step of removing, the step of acetylating the fraction obtained by the above step, and the acetylated fraction obtained by the above step remove the acidic aqueous solution soluble portion, the alkaline aqueous solution soluble portion, and the nonpolar organic solvent soluble portion. A step of deacetylating the acidic aqueous solution soluble part, the alkaline aqueous solution soluble part, and the nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained from the step, and the deacetylation fraction obtained from the step The organic solvent extraction fraction obtained by the step of extracting with an organic solvent; fraction F12) is obtained by contacting the deacetylated fraction with an organic solvent and recovering the organic solvent phase. Rukoto can. The contact with the organic solvent can be carried out in the same manner as the contact with the organic solvent carried out for preparing the fraction F7 of the present invention, except that the starting materials are different.

本発明の結合物は、本発明の前記画分Ｆ１〜Ｆ１２の少なくとも１つの画分、又は一般式（Ｉ）で表されるテレホール酸化合物若しくはその塩と、タンパク質との結合物である限り、特に限定されるものではない。
前記タンパク質は、前記テレホール酸と複合体を形成することができ、且つ前記複合体が抗腫瘍活性を示す限り、特に限定されるものではないが、例えば、アルブミン又はグロブリンを挙げることができる。As long as the conjugate of the present invention is a conjugate of a protein with at least one fraction of the fractions F1 to F12 of the present invention, or a telephoric acid compound represented by the general formula (I) or a salt thereof, It is not particularly limited.
The protein is not particularly limited as long as it can form a complex with the teleholic acid and the complex exhibits antitumor activity, and examples thereof include albumin or globulin.

カワラタケ属に属する担子菌に由来する本発明の画分Ｆ１〜Ｆ１２は、例えば、不溶物が混在する状態でそのまま、あるいは、不溶物を除去した状態で、更には、適当な処理（例えば、濃縮若しくは希釈、乾燥、又は再溶解）を施した状態で、本発明の抗腫瘍剤の有効成分として用いることができる。本発明の画分Ｆ７の内、実施例１の手順に従って調製した画分は、テレホール酸のみを実質的に含有する。
なお、本発明において、有効成分として本発明の画分Ｆ１〜Ｆ１２を用いた場合、前記画分中に含有されるテレホール酸が抗腫瘍活性を示すものと本発明者は考えているが、前記画分中のテレホール酸以外の成分も抗腫瘍活性を示すことが考えられ、本発明の範囲は前記機構に限定されるものではない。The fractions F1 to F12 of the present invention derived from basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake are, for example, as they are in a state where insoluble matters are mixed, or in a state where insoluble matters are removed, and further suitable treatment (for example, concentration) Alternatively, it can be used as an active ingredient of the antitumor agent of the present invention after being diluted, dried, or redissolved). Of the fraction F7 of the present invention, the fraction prepared according to the procedure of Example 1 substantially contains only teleholic acid.
In the present invention, when the fractions F1 to F12 of the present invention are used as active ingredients, the present inventor believes that the teleholic acid contained in the fraction exhibits antitumor activity. Components other than teleholic acid in the fraction are also considered to exhibit antitumor activity, and the scope of the present invention is not limited to the above mechanism.

本発明の抗腫瘍剤は、有効成分として、（１）一般式（Ｉ）で表されるテレホール酸化合物若しくはその塩、あるいは、前記テレホール酸化合物若しくはその塩とタンパク質との結合物、又は（２）カワラタケ属に属する担子菌に由来する本発明の各種画分（Ｆ１〜Ｆ１２）の少なくとも１つ、あるいは、前記画分Ｆ１〜Ｆ１２の少なくとも１つの画分とタンパク質との結合物を含有する。本発明の抗腫瘍剤は、前記有効成分のいずれか１つを含有することもできるし、２つ以上を任意の組み合わせで含有することもできる。本発明においては、前記有効成分をそれ単独で、あるいは、好ましくは薬剤学的又は獣医学的に許容することのできる通常の担体又は希釈剤と共に、癌の治療又は予防の必要な対象［例えば、動物、好ましくは哺乳動物（特にはヒト）］に有効量で投与することができる。また、前記有効成分は、抗腫瘍剤、又は癌の治療又は予防剤を製造するために使用することができる。   The antitumor agent of the present invention comprises, as an active ingredient, (1) a teleholic acid compound represented by the general formula (I) or a salt thereof, a conjugate of the teleholic acid compound or a salt thereof and a protein, or (2 ) It contains at least one of the various fractions (F1 to F12) of the present invention derived from basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake, or a conjugate of at least one fraction of the fractions F1 to F12 and a protein. The antitumor agent of the present invention can contain any one of the above active ingredients, and can contain two or more in any combination. In the present invention, the active ingredient alone or preferably together with a normal carrier or diluent that can be pharmaceutically or veterinarily acceptable, a subject in need of treatment or prevention of cancer [for example, Animals, preferably mammals (especially humans)] in an effective amount. Moreover, the said active ingredient can be used in order to manufacture the antitumor agent or the treatment or prevention agent of cancer.

本発明の抗腫瘍剤による治療又は予防の対象となる癌としては、例えば、肺癌、胃癌、肝臓癌、結腸・直腸癌、膵臓癌、食道癌、乳癌、子宮癌、前立腺癌、又は白血病などを挙げることができる。   Examples of the cancer to be treated or prevented by the antitumor agent of the present invention include lung cancer, stomach cancer, liver cancer, colorectal cancer, pancreatic cancer, esophageal cancer, breast cancer, uterine cancer, prostate cancer, leukemia and the like. Can be mentioned.

本発明の抗腫瘍剤の投与剤型としては、特に限定がなく、例えば、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、カプセル剤、懸濁液、エマルジョン剤、シロップ剤、エキス剤、若しくは丸剤等の経口剤、又は注射剤、外用液剤、軟膏剤、坐剤、局所投与のクリーム、若しくは点眼薬などの非経口剤を挙げることができる。   The dosage form of the antitumor agent of the present invention is not particularly limited, and examples thereof include powders, fine granules, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, extracts, or pills. Or parenteral preparations such as injections, external solutions, ointments, suppositories, topical creams, or eye drops.

これらの経口剤は、例えば、アルギン酸ナトリウム、澱粉、コーンスターチ、白糖、乳糖、ぶどう糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、デキストリン、ポリビニルピロリドン、結晶セルロース、大豆レシチン、ショ糖、脂肪酸エステル、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、ケイ酸マグネシウム、無水ケイ酸、又は合成ケイ酸アルミニウムなどの賦形剤、結合剤、崩壊剤、界面活性剤、滑沢剤、流動性促進剤、希釈剤、保存剤、着色剤、香料、矯味剤、安定化剤、保湿剤、防腐剤、又は酸化防止剤等を用いて、常法に従って製造することができる。   These oral preparations include, for example, sodium alginate, starch, corn starch, sucrose, lactose, glucose, mannitol, carboxymethylcellulose, dextrin, polyvinylpyrrolidone, crystalline cellulose, soybean lecithin, sucrose, fatty acid ester, talc, magnesium stearate, Excipients such as polyethylene glycol, magnesium silicate, anhydrous silicic acid, or synthetic aluminum silicate, binders, disintegrants, surfactants, lubricants, fluidity promoters, diluents, preservatives, colorants, It can be produced according to a conventional method using a fragrance, a flavoring agent, a stabilizer, a moisturizing agent, an antiseptic, or an antioxidant.

非経口投与方法としては、注射（皮下、静脈内等）、又は直腸投与等が例示される。これらのなかで、注射剤が最も好適に用いられる。
例えば、注射剤の調製においては、有効成分の他に、例えば、生理食塩水若しくはリンゲル液等の水溶性溶剤、植物油若しくは脂肪酸エステル等の非水溶性溶剤、ブドウ糖若しくは塩化ナトリウム等の等張化剤、溶解補助剤、安定化剤、防腐剤、懸濁化剤、又は乳化剤などを任意に用いることができる。
また、本発明の抗腫瘍剤は、徐放性ポリマーなどを用いた徐放性製剤の手法を用いて投与してもよい。例えば、本発明における前記有効成分をエチレンビニル酢酸ポリマーのペレットに取り込ませて、このペレットを治療又は予防すべき組織中に外科的に移植することができる。Examples of parenteral administration methods include injection (subcutaneous, intravenous, etc.) or rectal administration. Of these, the injection is most preferably used.
For example, in the preparation of an injection, in addition to the active ingredient, for example, a water-soluble solvent such as physiological saline or Ringer's solution, a water-insoluble solvent such as vegetable oil or fatty acid ester, an isotonic agent such as glucose or sodium chloride, Solubilizers, stabilizers, preservatives, suspending agents, or emulsifiers can be optionally used.
In addition, the antitumor agent of the present invention may be administered using a sustained release preparation technique using a sustained release polymer or the like. For example, the active ingredient in the present invention can be incorporated into a pellet of ethylene vinyl acetate polymer and the pellet can be surgically implanted into the tissue to be treated or prevented.

本発明の抗腫瘍剤は、これに限定されるものではないが、本発明における前記有効成分を０．０１〜９９重量％、好ましくは０．１〜８０重量％の量で含有することができる。
本発明の抗腫瘍剤を用いる場合の投与量は、病気の種類、患者の年齢、性別、体重、症状の程度、又は投与方法などに応じて適宜決定することができ、経口的に又は非経口的に投与することが可能である。The antitumor agent of the present invention is not limited to this, but the active ingredient in the present invention can be contained in an amount of 0.01 to 99% by weight, preferably 0.1 to 80% by weight. .
The dosage in the case of using the antitumor agent of the present invention can be appropriately determined according to the type of disease, the age, sex, weight, symptom of the patient, or the administration method, orally or parenterally. Can be administered as a whole.

また、投与形態も医薬品に限定されるものではなく、種々の形態、例えば、健康食品（好ましくは機能性食品）又は飼料として飲食物の形で与えることも可能である。なお、前記食品には飲料が含まれる。
食品には、（１）栄養素としての働き（第一次機能）、（２）人間の五感に訴える働き（第２次機能）の他に、（３）人間の健康、身体能力、又は心理状態に好ましい影響を与える働き（第３次機能）、例えば、消化器系、循環器系、内分泌系、免疫系、又は神経系などの生理系統を調節して、健康の維持や健康の回復に好ましい効果を及ぼす働きがあることが知られている。本明細書において「健康食品」とは、健康に何らかの効果を与えるか、あるいは、効果を期待することができる食品を意味し、「機能性食品」とは、前記「健康食品」の中でも、前記の種々の生体調節機能（すなわち、消化器系、循環器系、内分泌系、免疫系、又は神経系などの生理系統の調節機能）を充分に発現することができるように設計及び加工された食品を意味する。Further, the administration form is not limited to pharmaceuticals, and various forms such as health food (preferably functional food) or feed can be given in the form of food and drink. The food includes a beverage.
In addition to (1) function as a nutrient (primary function), (2) function to appeal to the human senses (secondary function), (3) human health, physical ability, or psychological state For the maintenance of health and recovery of health by regulating physiological systems such as the digestive system, circulatory system, endocrine system, immune system, or nervous system. It is known to have an effect. In the present specification, “health food” means a food that has some effect on health or can be expected to have an effect, and “functional food” refers to the above-mentioned “health food”. Foods designed and processed to fully express various bioregulatory functions (i.e., regulatory functions of digestive, circulatory, endocrine, immune, or nervous systems) Means.

更には、オーラル衛生用組成物、例えば、口中に一時的に含むものの、そのほとんどを口中より吐き出す形態、例えば、歯磨剤、洗口剤、チューインガム、又はうがい剤の形で与えることも、あるいは、鼻から吸引させる吸入剤の形で与えることも可能である。例えば、本発明における前記有効成分を、添加剤（例えば、食品添加剤）として、所望の食品（飲料を含む）、飼料、歯磨剤、洗口剤、チューインガム、又はうがい剤等に添加することができる。   Furthermore, an oral hygiene composition, for example, temporarily contained in the mouth, but most of it is given in the form of exhaling from the mouth, for example, in the form of a dentifrice, mouthwash, chewing gum, or mouthwash, or It is also possible to give in the form of an inhalant to be aspirated from the nose. For example, the active ingredient in the present invention may be added as an additive (for example, a food additive) to a desired food (including beverage), feed, dentifrice, mouthwash, chewing gum, gargle, or the like. it can.

以下、実施例によって本発明を具体的に説明するが、これらは本発明の範囲を限定するものではない。   EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be specifically described by way of examples, but these do not limit the scope of the present invention.

《実施例１：カワラタケ乾燥子実体からのテレホール酸画分の分離及び同定》
カワラタケの乾燥子実体粉末１５ｇに、飽和ホウ酸ナトリウム水溶液２Ｌを加え、５Ｌ容のビーカー中、２５℃で２４時間攪拌抽出の後、遠心分離（１２，０００ｘｇ、３０分間）して上清を回収した。塩酸にて前記上清のｐＨを２．０に調整し、室温で一晩放置の後、遠心分離（４０，０００ｘｇ、３０分間）して沈殿部を回収した。沈殿部に蒸留水５００ｍＬを加え、充分に懸濁し、洗浄液のｐＨが７．０になるまで洗浄操作を繰り返した後、遠心分離（４０，０００ｘｇ、３０分間）を行い、沈殿部を回収し、凍結乾燥して粉末１．２ｇを得た。<< Example 1: Separation and identification of teleholic acid fraction from dried fruit body of Kawaratake >>
Add 2 L of saturated sodium borate aqueous solution to 15 g of dried fruit body powder of Kawaratake and stir and extract in a 5 L beaker at 25 ° C. for 24 hours, and then centrifuge (12,000 × g, 30 minutes) to recover the supernatant did. The pH of the supernatant was adjusted to 2.0 with hydrochloric acid, allowed to stand at room temperature overnight, and then centrifuged (40,000 × g, 30 minutes) to recover the precipitate. Distilled water (500 mL) was added to the precipitation part, suspended sufficiently, and after repeating the washing operation until the pH of the washing solution reached 7.0, centrifugation (40,000 × g, 30 minutes) was performed to recover the precipitation part, Lyophilization gave 1.2 g of powder.

ジムロート（ＰＹＲＥＸ製）に凍結乾燥物１．２ｇを入れ、アセトン１０ｍＬを加えて、８０℃にて３時間加熱還流した。抽出液の色が無くなるまで抽出を繰り返した後、抽出液を集め、エバポレーターを用いて濃縮乾固して乾固物を得た。この乾固物に蒸留水１０ｍＬを加え、８０℃で５分間加熱し、遠心分離により熱水可溶部を除去した。この操作を１０回繰り返した後、溶媒をヘキサン、次いでクロロホルムに代えて同様の操作を１０回ずつ行い、青紫色の沈殿画分８ｍｇを得た。   1.2 g of lyophilized product was added to Dimroth (manufactured by PYREX), 10 mL of acetone was added, and the mixture was heated to reflux at 80 ° C. for 3 hours. Extraction was repeated until the color of the extract disappeared, and then the extract was collected and concentrated to dryness using an evaporator to obtain a dried product. Distilled water (10 mL) was added to the dried product, heated at 80 ° C. for 5 minutes, and the hot water soluble part was removed by centrifugation. After this operation was repeated 10 times, the same operation was performed 10 times each by replacing the solvent with hexane and then chloroform to obtain 8 mg of a blue-purple precipitate fraction.

この画分に無水酢酸１ｍＬを加え、ピリジン１ｍＬの入った５０ｍＬ容のナスフラスコ中で７０℃にて２４時間加熱後、エバポレーターを用いて濃縮乾固した。次に、１Ｎ塩酸１０ｍＬを加え、塩酸可溶部を除去し、この操作を３回繰り返した。次いで、塩酸の代わりに、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、ヘキサン、クロロホルム、及び酢酸エチルを順に用いて、同様の操作を繰り返すことにより、各可溶部を除去した後、その不溶部をピリジンに溶解し、エバポレーターを用いて濃縮乾固してアセチル化画分５．９ｍｇを得た。   1 mL of acetic anhydride was added to this fraction, heated in a 50 mL eggplant flask containing 1 mL of pyridine at 70 ° C. for 24 hours, and then concentrated to dryness using an evaporator. Next, 10 mL of 1N hydrochloric acid was added to remove the hydrochloric acid soluble part, and this operation was repeated three times. Then, instead of hydrochloric acid, using a saturated aqueous sodium bicarbonate solution, hexane, chloroform, and ethyl acetate in this order, the same operation was repeated to remove each soluble part, and then the insoluble part was dissolved in pyridine. Then, it was concentrated to dryness using an evaporator to obtain 5.9 mg of an acetylated fraction.

アセチル化画分に、ＣＨ３ＯＮａを１Ｎとなるように無水エタノールに溶解した溶液１ｍＬを加え、５０ｍＬ容三角フラスコ中、室温で１時間攪拌した。次に、エバポレーターを用いて濃縮乾固した後、１Ｎ塩酸溶液２０ｍＬを加え、分液ロートに入れた。次に等量の酢酸エチルを加え、抽出操作を行った。酢酸エチル相に着色が見られなくなるまでこの操作を繰り返した。そして、酢酸エチル相を回収し、エバポレーターを用いて濃縮乾固して青色の脱アセチル化物４ｍｇを得た。To the acetylated fraction, 1 mL of a solution in which CH 3 ONa was dissolved in absolute ethanol to 1 N was added, and the mixture was stirred in a 50 mL Erlenmeyer flask at room temperature for 1 hour. Next, after concentrating to dryness using an evaporator, 20 mL of 1N hydrochloric acid solution was added and put into a separatory funnel. Next, an equal amount of ethyl acetate was added, and extraction operation was performed. This operation was repeated until no coloration was observed in the ethyl acetate phase. Then, the ethyl acetate phase was recovered and concentrated to dryness using an evaporator to obtain 4 mg of a blue deacetylated product.

得られた画分を１Ｈ−ＮＭＲ及び１３Ｃ−ＮＭＲ（ＵＮＩＴＹ ＩＮＯＶＡ ５００；バリアン）により構造解析したところ、１Ｈ−ＮＭＲ（図１）において、δ７．１４、７．３５ｐｐｍにベンゼン環由来の付け根のシグナル、δ９．８１、１０．０８ｐｐｍに水酸基由来のシグナルが観察された。更に、１３Ｃ−ＮＭＲ（図２）において、δ９８．４９、１０４．８２、１４６．４３、１４９．２４、１５０．７９、１５１．３２６ｐｐｍ付近にベンゼン環由来のシグナル、δ１７２．３８ｐｐｍにキノン由来のシグナルが確認された。以上のことから、キノン骨格を有する芳香族の存在を確認した。The obtained fraction was subjected to structural analysis by 1 H-NMR and 13 C-NMR (UNITY INOVA 500; Varian). As a result, in 1 H-NMR (FIG. 1), δ7.14 and 7.35 ppm were derived from a benzene ring. A signal derived from a hydroxyl group was observed at the root signal, δ9.81, 10.08 ppm. Further, in 13 C-NMR (FIG. 2), a signal derived from a benzene ring in the vicinity of δ 98.49, 104.82, 146.43, 149.24, 150.79, 151.326 ppm, and quinone derived from δ 172.38 ppm. A signal was confirmed. From the above, the presence of aromatics having a quinone skeleton was confirmed.

次に、ＩＲスペクトル（ＦＴ／ＩＲ ＶＡＬＯＲIII；日本分光）において、３２０４ｃｍ−１に水酸基由来の吸収、１６３４ｃｍ−１にキノン由来のカルボニル吸収、８６７ｃｍ−１及び８０１ｃｍ−１にフラン環由来の吸収を確認した（図３）。ＭＳ解析（Ｈｙｂｒｉｄ Ｍｓｔａｔｉｏｎ ＪＭＳ−７００ＱＱ；日本電子）では、ｍ／ｚＣ１８Ｈ８Ｏ８（Ｍ＋）３５２．０２４０を示し、テレホール酸と一致した（図４）。Next, in the IR spectrum (FT / IR VALORIII; JASCO), 3204 cm −1 absorbs hydroxyl group, 1634 cm −1 absorbs quinone derived carbonyl, 867 cm −1 and 801 cm −1 absorbs furan ring. (FIG. 3). MS analysis (Hybrid Mstation JMS-700QQ; JEOL) showed m / zC 18 H 8 O 8 (M + ) 352.0240, which was consistent with teleholic acid (FIG. 4).

《実施例２：テレホール酸画分とタンパク質との結合物の調製》
実施例１で調製したテレホール酸画分をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解し、１ｍｍｏｌ／Ｌに調整し、テレホール酸溶液を調製した。この溶液を、ヒトアルブミン又はヒトグロブリンのＰＢＳ溶解液（ｐＨ７．２）１０ｍｇ／ｍＬにそれぞれ加え、室温で３時間反応させた。得られた反応液を蒸留水に対して透析後、内容液を回収し、凍結乾燥して、テレホール酸・ヒトアルブミン結合物及びテレホール酸・ヒトグロブリン結合物を得た。<< Example 2: Preparation of a conjugate of a teleholic acid fraction and a protein >>
The teleholic acid fraction prepared in Example 1 was dissolved in dimethyl sulfoxide (DMSO) and adjusted to 1 mmol / L to prepare a teleholic acid solution. This solution was added to 10 mg / mL of human albumin or human globulin in PBS (pH 7.2) and reacted at room temperature for 3 hours. The resulting reaction solution was dialyzed against distilled water, and the content solution was collected and lyophilized to obtain a telephoric acid / human albumin conjugate and a teleholic acid / human globulin conjugate.

《実施例３：抗腫瘍活性の評価（１）》
本実施例では、呉羽化学工業株式会社・生物医学研究所で継代・維持しているマウス白血病細胞株Ｐ３８８を用いて抗腫瘍活性を評価した。
すなわち、１０％ウシ胎児血清（５６℃、３０分間処置）添加ＲＰＭＩ１６４０培地にグルタミンを１％、ゲンタマイシンを０．１％になるように加えて培地を調製し、この培地にＰ３８８細胞を懸濁液５×１０４／ｍＬになるように懸濁した。この懸濁液１００μＬずつを９６ウエル培養用マイクロプレートの各ウエルに蒔き（ｎ＝３）、３７℃の５％炭酸ガス培養器中で４８時間培養後、各濃度のサンプル溶液（テレホール酸）１００μＬを添加し、３７℃の炭酸ガス培養器中で更に２４時間培養した。溶媒のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）はすべてのウエルで１％濃度に調整した。次いで、細胞増殖検出試薬ＷＳＴ−１（同仁化学工業）２０μＬを加え、更に２時間培養の後、プレートリーダーを用いて吸光度（４５０ｎｍ−６３０ｎｍ）を測定した。<< Example 3: Evaluation of antitumor activity (1) >>
In this example, antitumor activity was evaluated using a mouse leukemia cell line P388 that has been passaged and maintained at Kureha Chemical Industry Co., Ltd. and Biomedical Research Institute.
Specifically, 10% fetal bovine serum (treated at 56 ° C. for 30 minutes) was added to RPMI1640 medium to 1% glutamine and 0.1% gentamicin to prepare a medium, and P388 cells were suspended in this medium. It was suspended to 5 × 10 4 / mL. 100 μL of this suspension was poured into each well of a 96-well culture microplate (n = 3), cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 37 ° C. for 48 hours, and then 100 μL of each concentration of sample solution (teleholic acid) Was added and cultured in a 37 ° C. carbon dioxide incubator for another 24 hours. The solvent dimethyl sulfoxide (DMSO) was adjusted to 1% concentration in all wells. Next, 20 μL of cell proliferation detection reagent WST-1 (Dojin Chemical Co., Ltd.) was added, and after further incubation for 2 hours, absorbance (450 nm-630 nm) was measured using a plate reader.

コントロール群の吸光度を１００％とした場合の、各実験群の値をプロットし、５０％増殖阻害濃度を算出したところ、Ｐ３８８細胞に対するテレホール酸のＩＣ５０値は１．７μｍｏｌ／Ｌであった。
別の日に、同一条件で再現性試験を実施したところ、テレホール酸のＩＣ５０値は１．６μｍｏｌ／Ｌであった。
結果を図５及び図６に示す。When the absorbance of the control group was 100%, the values of each experimental group were plotted and the 50% growth inhibitory concentration was calculated. The IC 50 value of teleholic acid for P388 cells was 1.7 μmol / L.
On another day, a reproducibility test was carried out under the same conditions. As a result, the IC 50 value of teleholic acid was 1.6 μmol / L.
The results are shown in FIGS.

《実施例４：抗腫瘍活性の評価（２）》
本実施例では、呉羽化学工業株式会社・生物医学研究所で継代・維持しているマウス発癌ウイルス形質転換細胞株ＳＶ４０／３Ｔ３及びマウス正常細胞株３Ｔ３を用い、抗腫瘍活性の評価を行なった。
すなわち、１０％ウシ胎児血清（５６℃、３０分間処置）添加ＲＰＭＩ１６４０培地にグルタミンを１％、ゲンタマイシンを０．１％になるように加えて培地を調製し、この培地にＳＶ４０／３Ｔ３細胞又は３Ｔ３細胞を懸濁液５×１０４／ｍＬになるように懸濁した。この懸濁液１００μＬずつを９６ウエル培養用マイクロプレートの各ウエルに蒔き（ｎ＝３）、３７℃の５％炭酸ガス培養器中で４８時間培養後、各濃度のサンプル溶液（テレホール酸）１００μＬを添加し、３７℃の炭酸ガス培養器中で更に２４時間培養した。溶媒のＤＭＳＯはすべてのウエルで１％濃度に調整した。次いで、細胞増殖検出試薬ＷＳＴ−１（同仁化学工業）２０μＬを加え、更に２時間培養の後、プレートリーダーを用いて吸光度（４５０ｎｍ−６３０ｎｍ）を測定した。<< Example 4: Evaluation of antitumor activity (2) >>
In this example, antitumor activity was evaluated using the mouse carcinogenic virus transformed cell line SV40 / 3T3 and the mouse normal cell line 3T3, which are subcultured and maintained by Kureha Chemical Industry Co., Ltd. and Biomedical Research Institute. .
That is, a medium is prepared by adding 1% glutamine and 0.1% gentamicin to RPMI1640 medium supplemented with 10% fetal bovine serum (56 ° C., 30 minutes), and this medium is prepared with SV40 / 3T3 cells or 3T3. Cells were suspended to a suspension of 5 × 10 4 / mL. 100 μL of this suspension was poured into each well of a 96-well culture microplate (n = 3), cultured in a 5% carbon dioxide incubator at 37 ° C. for 48 hours, and then 100 μL of each concentration of sample solution (teleholic acid). Was added and cultured in a 37 ° C. carbon dioxide incubator for another 24 hours. The solvent DMSO was adjusted to 1% concentration in all wells. Next, 20 μL of cell proliferation detection reagent WST-1 (Dojin Chemical Co., Ltd.) was added, and after further incubation for 2 hours, absorbance (450 nm-630 nm) was measured using a plate reader.

コントロール群の吸光度を１００％とした場合の、各実験群の値をプロットし、５０％増殖阻害濃度を算出したところ、ＳＶ４０／３Ｔ３細胞に対するＩＣ５０値は６．３μｍｏｌ／Ｌ、３Ｔ３細胞に対するＩＣ５０値は１０μｍｏｌ／Ｌ以上であった。
結果を図７及び図８に示す。When the absorbance of the control group was 100%, the values of each experimental group were plotted and the 50% growth inhibitory concentration was calculated. The IC 50 value for SV40 / 3T3 cells was 6.3 μmol / L, and the IC value for 3T3 cells. The 50 value was 10 μmol / L or more.
The results are shown in FIGS.

《実施例５：抗腫瘍活性の評価（３）》
培養癌細胞に対するテレホール酸のインビトロ抗腫瘍活性を、ヒト培養癌細胞パネル［ＨＣＣパネル；矢守隆夫ら, 癌と化学療法, 29, 225-415 (2002)］にて評価した。前記ＨＣＣパネルは、数十種のヒト培養癌細胞での薬剤感受性試験と特別なデータプログラムによる解析手法とを組み合わせたスクリーニングシステムであり、米国国立研究所（NCI）で１９９０年前後より実施され、既に数種の抗癌物質が選別され、第Ｉ相臨床試験が進められている。<< Example 5: Evaluation of antitumor activity (3) >>
The in vitro antitumor activity of teleholic acid against cultured cancer cells was evaluated in a human cultured cancer cell panel [HCC panel; Takao Yamori et al., Cancer and chemotherapy, 29, 225-415 (2002)]. The HCC panel is a screening system that combines a drug sensitivity test with several tens of types of human cultured cancer cells and an analysis method based on a special data program. Several types of anticancer substances have already been selected and phase I clinical trials are underway.

具体的には、３９種のヒト癌細胞（肺癌７系、胃癌６系、大腸癌５系、卵巣癌５系、脳腫瘍６系、乳癌５系、腎癌２系、及びメラノーマ１系）を、各々９６ウエルの培養用プレートの各ウエルに蒔きこみ、翌日、ＤＭＳＯに溶解させたテレホール酸を所定濃度添加し、３７℃の炭酸ガス培養器中で２日間培養後、細胞増殖をスルホローダミンＢによる比色定量（５７０ｎｍ−６９０ｎｍ）で測定した。   Specifically, 39 types of human cancer cells (lung cancer 7 system, stomach cancer 6 system, colon cancer 5 system, ovarian cancer 5 system, brain tumor 6 system, breast cancer 5 system, renal cancer 2 system, and melanoma 1 system), Inoculate each well of a 96-well culture plate, add the prescribed concentration of tereophoric acid dissolved in DMSO the next day, and incubate in a 37 ° C. carbon dioxide incubator for 2 days. The colorimetric determination (570 nm-690 nm) was used.

得られた測定データから、各細胞毎に、「ＧＩ５０」［被検物質（テレホール酸）を添加する直前（Time Zero）の細胞数を基準とし、対照に比べ、増殖を５０％に抑制する濃度］、「ＴＧＩ」（Time Zeroと同じ細胞数に増殖を維持する濃度）、及び「ＬＣ５０」（Time
Zeroの５０％に細胞数を減少させる濃度）を算出し、同時に、「ＧＩ５０」、「ＴＧＩ」、及び「ＬＣ５０」の各々について、「ＭＧ−ＭＩＤ」（Mean
graph-midpoint）、「Delta」（変数）、及び「Range」（範囲）を算出した。結果を表１に示す。From the obtained measurement data, for each cell, “GI50” [concentration that suppresses proliferation to 50% compared to the control, based on the number of cells immediately before the addition of the test substance (teleholic acid) (Time Zero). ] "TGI" (concentration that keeps growing at the same number of cells as Time Zero), and "LC50" (Time
The concentration at which the number of cells is reduced to 50% of Zero is calculated, and at the same time, for each of “GI50”, “TGI”, and “LC50”, “MG-MID” (Mean
graph-midpoint), “Delta” (variable), and “Range” (range). The results are shown in Table 1.

Figure 2005095413
Figure 2005095413

いずれの癌細胞株でもテレホール酸１０−８〜１０−４ｍｏｌ／Ｌ濃度の間で、用量依存的に増殖が抑制された。本評価法では、５０％増殖抑制濃度（ＧＩ５０）のＭＧ−ＭＩＤが−５未満である場合、増殖阻害の強さが優れていると判定することができるが、表１に示すとおり、ＧＩ５０のＭＧ−ＭＩＤは−５．２４であった。また、細胞株間での効力の違い（Differential activity）を示す尺度については、Deltaが０．５以上且つRangeが１以上である場合、優れていると判定することができるが、表１に示すとおり、それぞれ、０．５２及び１．７６であった。In any cancer cell line, proliferation was suppressed in a dose-dependent manner between 10 −8 to 10 −4 mol / L of teleholic acid. In this evaluation method, when MG-MID of 50% growth inhibitory concentration (GI50) is less than −5, it can be determined that the strength of growth inhibition is excellent. The MG-MID was −5.24. In addition, as for the scale indicating the difference in efficacy (Differential activity) between cell lines, it can be determined that the Delta is 0.5 or more and the Range is 1 or more, but as shown in Table 1. , 0.52 and 1.76, respectively.

本評価法では、更に、被検物質（テレホール酸）のフィンガープリントを、過去に蓄積された標準薬剤のフィンガープリントと比較して、各標準薬剤に関する「ｒ値」（相関係数）を算出することにより、被検物質の作用機作を予測することができる。例えば、標準薬剤中に、ｒ値が０．５以上の化合物があれば、被検物質はそれと近い作用機作をもつことが予測される。一方、最上位のｒ値が０．５以下であれば、その被検物質は新規の作用機作をもつことが予測される。テレホール酸に関して得られたｒ値の最大値はドキソルビシン（doxorubicin）の０．４２５であり、次いで、塩酸ミトキサントロン（mitoxantrone HCl）の０．３７６、SN-38の０．３７３であった。この結果は、テレホール酸の抗腫瘍作用が新規の作用機作に基づくものであることが期待される。   In this evaluation method, the fingerprint of the test substance (teleholic acid) is compared with the fingerprint of the standard drug accumulated in the past to calculate the “r value” (correlation coefficient) for each standard drug. Thus, the action mechanism of the test substance can be predicted. For example, if there is a compound having an r value of 0.5 or more in a standard drug, the test substance is predicted to have a mechanism of action close to that. On the other hand, if the highest r value is 0.5 or less, the test substance is predicted to have a new action mechanism. The maximum r value obtained for teleholic acid was 0.425 for doxorubicin, followed by 0.376 for mitoxantrone HCl and 0.373 for SN-38. This result is expected that the antitumor action of teleholic acid is based on a novel mechanism of action.

《実施例６：抗腫瘍活性の評価（４）》
呉羽化学工業株式会社生物医学研究所で継代・維持しているヒト白血病細胞株ＨＬ−６０［Louie
Naumouvski et al., Blood, 83(8), 2261-2267, 1994］の懸濁液（２×１０５細胞／ｍＬ）１００μＬを、９６ウエル培養用マイクロプレートの各ウエルに蒔き、３７℃の５％炭酸ガス培養器中で４時間培養後、テレホール酸溶液（９０％ＤＭＳＯ溶液で段階希釈し、最終濃度０．１、０．３、１．０、３．０、又は１０μｍｏｌ／Ｌに調整）１００μＬを添加し、３７℃の炭酸ガス培養器中で更に２４時間培養した。溶媒のＤＭＳＯはすべてのウエルで１％濃度になるように調整した。次いで、細胞増殖検出試薬ＷＳＴ−１（株式会社同仁化学研究所、熊本）を２０μＬ／２００μＬ加え、更に３時間培養の後、吸光度（４５０ｎｍ−６３０ｎｍ）を測定し、５０％増殖阻止濃度ＩＣ５０を算出した。その結果、テレホール酸の５０％増殖阻止濃度は２５０ｎＭｍｏｌ／Ｌであった。<< Example 6: Evaluation of antitumor activity (4) >>
Human leukemia cell line HL-60 passaged and maintained by Kureha Chemical Industries, Ltd. Biomedical Research Institute
Naumouvski et al., Blood, 83 (8), 2261-2267, 1994], 100 μL of a suspension (2 × 10 5 cells / mL) was seeded in each well of a 96-well culture microplate, After culturing in a% carbon dioxide incubator for 4 hours, a tereholic acid solution (serially diluted with a 90% DMSO solution and adjusted to a final concentration of 0.1, 0.3, 1.0, 3.0, or 10 μmol / L) 100 μL was added, and the cells were further cultured in a carbon dioxide incubator at 37 ° C. for 24 hours. The solvent DMSO was adjusted to 1% concentration in all wells. Next, 20 μL / 200 μL of cell growth detection reagent WST-1 (Dojindo Laboratories, Kumamoto Co., Ltd.) was added. After further incubation for 3 hours, the absorbance (450 nm-630 nm) was measured, and the 50% growth inhibitory concentration IC 50 was determined. Calculated. As a result, the 50% growth inhibitory concentration of teleholic acid was 250 nM mol / L.

《実施例７：アポトーシス誘導活性の評価》
１０ｍｍｏｌ／Ｌのテレホール酸存在下で４時間培養したヒト白血病細胞株ＨＬ６０細胞に、２％グルタールアルデヒド溶液１００μＬを加え、４℃で一晩固定後、ＰＢＳ２０μＬに浮遊させ、１０μｇ／ｍＬのＤＡＰＩ（4’,6-diamidine-2-phenylindole-dihydrochloride；ベーリンガー・マンハイム社、ドイツ）溶液２μＬを添加し、２時間反応させた。染色された核の形態を蛍光顕微鏡により観察した。その結果、テレホール酸添加群では、２時間培養で約１０％の細胞に、４時間培養で約２０％の細胞にクロマチン凝縮がみられた。陽性対照のカンプトテシン（シグマ・アルドリッチ、東京）１０μｇ／ｍＬ添加群では、２時間培養で約２０％の細胞に、４時間培養で約６０％の細胞にクロマチン凝縮がみられた。形態観察後、蛍光活性化セルソーター（FACSCalibur; Becton Dickinson, CA, 米国）を用いて細胞サイズの変動を調べたところ、蛍光顕微鏡観察での結果と同じ傾向が認められた。<< Example 7: Evaluation of apoptosis-inducing activity >>
To a human leukemia cell line HL60 cells cultured for 4 hours in the presence of 10 mmol / L tereholic acid, 100 μL of a 2% glutaraldehyde solution is added, fixed overnight at 4 ° C., suspended in 20 μL of PBS, 10 μg / mL DAPI ( 4 ′, 6-diamidine-2-phenylindole-dihydrochloride (Boehringer Mannheim, Germany) solution (2 μL) was added and reacted for 2 hours. The morphology of the stained nucleus was observed with a fluorescence microscope. As a result, in the group added with teleholic acid, chromatin condensation was observed in about 10% of the cells after 2 hours of culture and about 20% of the cells after 4 hours of culture. In the positive control camptothecin (Sigma Aldrich, Tokyo) 10 μg / mL addition group, chromatin condensation was observed in about 20% of the cells in the 2-hour culture and in about 60% of the cells in the 4-hour culture. After morphological observation, cell size fluctuations were examined using a fluorescence activated cell sorter (FACSCalibur; Becton Dickinson, CA, USA), and the same tendency as the result of fluorescence microscope observation was observed.

本発明の抗腫瘍剤は、癌の治療又は予防の用途に適用することができる。
以上、本発明を特定の態様に沿って説明したが、当業者に自明の変形や改良は本発明の範囲に含まれる。
The antitumor agent of the present invention can be applied to cancer treatment or prevention.
As mentioned above, although this invention was demonstrated along the specific aspect, the deformation | transformation and improvement obvious to those skilled in the art are included in the scope of the present invention.

Claims (5)

（１）一般式（Ｉ）：
Figure 2005095413
 ［式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、及びＲ４は、それぞれ独立して、水素原子、炭素数１〜４の低級アルキル基、アセチル基、又はベンゾイル基である］
で表されるテレホール酸化合物若しくはその塩、あるいは、前記テレホール酸化合物若しくはその塩とタンパク質との結合物、
（２）（ａ）カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整することにより得られる、アルカリ水溶液抽出液の酸性条件下沈殿画分、
（ｂ）前記画分（ａ）を極性有機溶媒存在下で還流して得られる、極性有機溶媒抽出画分、
（ｃ）前記画分（ｂ）から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｄ）前記画分（ｃ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分若しくはアセチル化物、
（ｅ）前記画分（ｄ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｆ）前記画分（ｅ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分若しくは脱アセチル化物、若しくは
（ｇ）前記画分（ｆ）の有機溶媒抽出画分、
（３）（ｈ）カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去して得られる、極性有機溶媒抽出画分の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｉ）前記画分（ｈ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分若しくはアセチル化物、
（ｊ）前記画分（ｈ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｋ）前記画分（ｊ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分若しくは脱アセチル化物、若しくは
（ｌ）前記画分（ｋ）の有機溶媒抽出画分、又は
（４）（ｍ）前記画分（ａ）〜（ｌ）の少なくとも１つの画分と、タンパク質との結合物を有効成分として含有することを特徴とする、抗腫瘍剤。(1) General formula (I):
Figure 2005095413
 [Wherein, R 1 , R 2 , R 3 , and R 4 are each independently a hydrogen atom, a lower alkyl group having 1 to 4 carbon atoms, an acetyl group, or a benzoyl group]
A teleholic acid compound or a salt thereof represented by the above, or a conjugate of the teleholic acid compound or a salt thereof and a protein,
(2) (a) a precipitate fraction obtained under acidic conditions of an aqueous alkaline solution obtained by adjusting the aqueous alkaline solution of a basidiomycete belonging to the genus Kawaratake
(B) a polar organic solvent extraction fraction obtained by refluxing the fraction (a) in the presence of a polar organic solvent,
(C) A hot water soluble part and a nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained by removing a hot water soluble part and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (b),
(D) an acetylated fraction or an acetylated product obtained by acetylating the fraction (c),
(E) an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (d), and Non-polar organic solvent soluble part removal fraction,
(F) a deacetylated fraction or a deacetylated product obtained by deacetylating the fraction (e), or (g) an organic solvent extraction fraction of the fraction (f),
(3) (h) obtained by reflux-extracting basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake with a polar organic solvent, and then removing the nonpolar organic solvent soluble part and the hot water soluble part from the obtained polar organic solvent extract fraction , Hot water soluble part and non-polar organic solvent soluble part removal fraction of polar organic solvent extraction fraction,
(I) an acetylated fraction or an acetylated product obtained by acetylating the fraction (h),
(J) An acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (h), and Non-polar organic solvent soluble part removal fraction,
(K) a deacetylated fraction or a deacetylated product obtained by deacetylating the fraction (j), or (l) an organic solvent extract fraction of the fraction (k), or (4) (m ) An antitumor agent comprising, as an active ingredient, a conjugate of at least one of the fractions (a) to (l) and a protein. （ａ）カワラタケ属に属する担子菌のアルカリ水溶液抽出液を酸性に調整することにより得られる、アルカリ水溶液抽出液の酸性条件下沈殿画分、
（ｂ）前記画分（ａ）を極性有機溶媒存在下で還流して得られる、極性機溶媒抽出画分、（ｃ）前記画分（ｂ）から熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｄ）前記画分（ｃ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分若しくはアセチル化物、
（ｅ）前記画分（ｄ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｆ）前記画分（ｅ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分若しくは脱アセチル化物、
（ｇ）前記画分（ｆ）の有機溶媒抽出画分、
（ｈ）カワラタケ属に属する担子菌を極性有機溶媒により還流抽出した後、得られた極性有機溶媒抽出画分から非極性有機溶媒可溶部及び熱水可溶部を除去して得られる、極性有機溶媒抽出画分の熱水可溶部及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｉ）前記画分（ｈ）をアセチル化して得られる、アセチル化画分若しくはアセチル化物、
（ｊ）前記画分（ｈ）から酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部を除去して得られる、酸性水溶液可溶部、アルカリ水溶液可溶部、及び非極性有機溶媒可溶部除去画分、
（ｋ）前記画分（ｊ）を脱アセチル化して得られる、脱アセチル化画分若しくは脱アセチル化物、若しくは
（ｌ）前記画分（ｋ）の有機溶媒抽出画分、又は
（ｍ）前記画分（ａ）〜（ｌ）の少なくとも１つの画分と、タンパク質との結合物。(A) a precipitate fraction under acidic conditions of an aqueous alkaline solution obtained by adjusting the aqueous alkaline solution of a basidiomycete belonging to the genus Kawaratake
(B) a polar machine solvent extraction fraction obtained by refluxing the fraction (a) in the presence of a polar organic solvent, (c) a hot water soluble part and a nonpolar organic solvent available from the fraction (b) Hot water soluble part and nonpolar organic solvent soluble part removal fraction obtained by removing the soluble part,
(D) an acetylated fraction or an acetylated product obtained by acetylating the fraction (c),
(E) an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (d), and Non-polar organic solvent soluble part removal fraction,
(F) a deacetylated fraction or a deacetylated product obtained by deacetylating the fraction (e),
(G) an organic solvent extraction fraction of the fraction (f),
(H) A polar organic compound obtained by reflux-extracting basidiomycetes belonging to the genus Kawaratake with a polar organic solvent and then removing the nonpolar organic solvent soluble part and the hot water soluble part from the obtained polar organic solvent extract fraction Hot water soluble part and nonpolar organic solvent soluble part removal fraction of solvent extraction fraction,
(I) an acetylated fraction or an acetylated product obtained by acetylating the fraction (h),
(J) An acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part obtained by removing an acidic aqueous solution soluble part, an alkaline aqueous solution soluble part, and a nonpolar organic solvent soluble part from the fraction (h), and Non-polar organic solvent soluble part removal fraction,
(K) a deacetylated fraction or a deacetylated product obtained by deacetylating the fraction (j), or (l) an organic solvent extract fraction of the fraction (k), or (m) the fraction A bound product of at least one fraction of (a) to (l) and a protein. 請求項２に記載の画分（ａ）〜（ｌ）又は結合物（ｍ）の少なくとも１つと、薬剤学的又は獣医学的に許容することのできる担体又は希釈剤とを含有する、医薬組成物。   A pharmaceutical composition comprising at least one of the fractions (a) to (l) or the conjugate (m) according to claim 2 and a pharmaceutically or veterinarily acceptable carrier or diluent. object. 請求項１に記載の物質（１）、画分（ａ）〜（ｌ）、又は結合物（ｍ）の少なくとも１つを、癌の治療又は予防の必要な対象に、有効量で投与することを含む、癌の治療又は予防方法。   2. An effective amount of at least one of the substance (1), fractions (a) to (l), or the conjugate (m) according to claim 1 is administered to a subject in need of treatment or prevention of cancer. A method for treating or preventing cancer, comprising: 請求項１に記載の物質（１）、画分（ａ）〜（ｌ）、又は結合物（ｍ）の少なくとも１つの、抗腫瘍剤を製造するための使用。
Use of at least one of the substances (1), fractions (a) to (l) or conjugates (m) according to claim 1 for the production of an antitumor agent.
JP2006511845A 2004-04-01 2005-04-01 Antitumor agent Pending JPWO2005095413A1 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
JP2004109404 2004-04-01
JP2004109404 2004-04-01
PCT/JP2005/006485 WO2005095413A1 (en) 2004-04-01 2005-04-01 Antitumor agent

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPWO2005095413A1 true JPWO2005095413A1 (en) 2008-02-21

Family

ID=35063705

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2006511845A Pending JPWO2005095413A1 (en) 2004-04-01 2005-04-01 Antitumor agent

Country Status (2)

Country Link
JP (1) JPWO2005095413A1 (en)
WO (1) WO2005095413A1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101249259B (en) * 2008-03-04 2011-07-27 上海师范大学 High content and high activity oral polysaccharide-peptide and preparing method and application of the same

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS536413A (en) * 1976-07-07 1978-01-20 Kureha Chem Ind Co Ltd Preparation of n-containing polysaccharides
KR100362394B1 (en) * 1999-09-20 2002-11-23 송경식 Method of refining active chemical compound with abstraction an extract and ethyl-alchol in a polyozellus multiflex have activated chemical
JP4245291B2 (en) * 2001-12-04 2009-03-25 正 五井野 Bioactive composition and method for producing the same

Also Published As

Publication number Publication date
WO2005095413A1 (en) 2005-10-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR830002801B1 (en) Process for preparing antihypercholesteramic agent monacolink and its preparation
KR102061526B1 (en) A compound having an ability to increase nerve growth factor and a composition for prevention, improvement and treatment of neurological diseases
JP2011026525A (en) METHOD FOR EXTRACTING POLYSACCHARIDE COMPRISING beta-GLUCAN AS MAIN COMPONENT
WO1998024926A1 (en) Gliotoxin derivatives and anticancer agent comprising the same
JP6249415B2 (en) Novel photosensitivity inhibitor trehangerin substance and method for producing the same
JP4863870B2 (en) Antiallergic agent
JPWO2005095413A1 (en) Antitumor agent
CN114940487B (en) Ginseng carbon dots, and preparation method and application thereof
JP4852353B2 (en) Novel cinnamic acid derivative, process for producing the same and propolis fermented product
CN117120455A (en) Novel polyphenol compounds
NL8204904A (en) DIHYDRO- AND TETRAHYDROMONACOLIN L, METAL SALTS AND ALKYL ESTERS, AND METHOD FOR PREPARING THE SAME.
JP2008255022A (en) Anticancer substance
JP6007374B2 (en) Novel mangromycin compound and method for producing the same
CN102952207A (en) Preparation method and application of 6-(1-methyl-beta-carboline-3-carboxylic acetyl)-6-deoxy-beta-cyclodextrin and supramolecular inclusion complex thereof with adriamycin
CN107182201B (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating cancer comprising exopolysaccharide produced by Ceriporia lacerata as active ingredient
JP6660301B2 (en) Novel compound, its production method and its use
JP6154382B2 (en) NOVEL COMPOUND, PROCESS FOR PRODUCING THE SAME, PHARMACEUTICAL COMPOSITION, AND ANTI-TUMOR
WO2014173957A2 (en) Compound
JPWO2018056470A1 (en) Epithelial-mesenchymal transition induction cell inhibitor
KR100348870B1 (en) Peptido-glyco Compounds from Chinese elm and Process for Preparing the Same
JP3124373B2 (en) Immunosuppressant
JP4608651B2 (en) Compound having anticancer activity, process for producing the same and anticancer agent
KR20230085317A (en) A composition for cancer treatment containing freshwater microalgae extract as an active ingredient
JP2005162668A (en) NEW TGF-beta COUPLER
JP5718450B2 (en) Anti-neoplastic agent and its production method and use