JPWO2003097087A1 - Bcgワクチンとその利用 - Google Patents
Bcgワクチンとその利用 Download PDFInfo
- Publication number
- JPWO2003097087A1 JPWO2003097087A1 JP2004505083A JP2004505083A JPWO2003097087A1 JP WO2003097087 A1 JPWO2003097087 A1 JP WO2003097087A1 JP 2004505083 A JP2004505083 A JP 2004505083A JP 2004505083 A JP2004505083 A JP 2004505083A JP WO2003097087 A1 JPWO2003097087 A1 JP WO2003097087A1
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- bcg
- sivgag
- vaccine
- bcg vaccine
- antigenic protein
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 229960000190 bacillus calmette–guérin vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 34
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 31
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 23
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 22
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 14
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 14
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 14
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims abstract description 13
- 230000037452 priming Effects 0.000 claims abstract description 13
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 10
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims abstract description 5
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims abstract description 5
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 30
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 21
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 20
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims description 6
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims description 6
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims description 4
- 229940124954 vaccinia virus vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 abstract description 6
- 241000282693 Cercopithecidae Species 0.000 description 18
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 17
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 12
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 12
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 12
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 11
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 11
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 11
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 9
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 6
- 241000713311 Simian immunodeficiency virus Species 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 5
- 230000036962 time dependent Effects 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 4
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 3
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 3
- 241000282567 Macaca fascicularis Species 0.000 description 3
- 241000700618 Vaccinia virus Species 0.000 description 3
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 102000006303 Chaperonin 60 Human genes 0.000 description 1
- 108010058432 Chaperonin 60 Proteins 0.000 description 1
- 108010041986 DNA Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 229940021995 DNA vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000709661 Enterovirus Species 0.000 description 1
- 241000991587 Enterovirus C Species 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 102100034353 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 241000186781 Listeria Species 0.000 description 1
- 239000001971 Middlebrook 7H10 Agar Substances 0.000 description 1
- 206010065764 Mucosal infection Diseases 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 241001467552 Mycobacterium bovis BCG Species 0.000 description 1
- 241000187479 Mycobacterium tuberculosis Species 0.000 description 1
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101710192141 Protein Nef Proteins 0.000 description 1
- 101710149951 Protein Tat Proteins 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 description 1
- 108010008038 Synthetic Vaccines Proteins 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 229960001212 bacterial vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000006727 cell loss Effects 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 1
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 1
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 1
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 1
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 229940124551 recombinant vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000002123 temporal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229940125575 vaccine candidate Drugs 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
- A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/15011—Lentivirus, not HIV, e.g. FIV, SIV
- C12N2740/15022—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
この出願の発明は、BCGワクチンとその利用に関するものである。さらに詳しくは、この出願の発明は、各種感染症や癌等の予防や治療のための免疫誘導における初回抗原刺激に使用する組換えBCGワクチンと、このBCGワクチンを用いたヒトまたは動物の免疫誘導方法に関するものである。
背景技術
牛型結核菌弱毒BCG株(Mycobacterium bovis BCG。以下「BCG」と記載する)は、その安全性から、最も一般的な生バクテリアワクチンとして知られている。
一方、この十数年来の遺伝子組換え技術の開発、向上に伴い、ウイルスや細菌などの微生物に外来性の抗原性タンパク質を発現させるように改変して、様々な感染症や癌の予防および治療に対するワクチンベクターとして応用しようという研究が盛んに行われて来ている。BCGについても、例えばヒト免疫不全ウイルス(HIV)やサル免疫免疫不全ウイルス(SIV)を標的とする組換えBCGワクチンが報告されている(J.Immunol.164:4968−4978,2000;J.Virool.71:2303−2309,1997;Infect.Immun.57:283−288,1989)。そして、BCGにHIV遺伝子を発現させたワクチンは長期に渡って(少なくとも2年間は)免疫の誘導が可能となるが、このような長期間の免疫誘導能は他のDNAワクチンではみられない優れた特徴である。
しかしながら、従来の組換えBCGワクチンの場合には、標的となる感染症や癌等に対する免疫誘導能の点においては必ずしも十分なものではなかった。例えば、HIV−1を標的とする組換えBCGワクチンを用いてモルモットに免疫誘導を行った場合には、通常のBCGワクチンのヒトへの使用量(0.05−0.1mg)の50〜100倍の量を投与する必要がある(Proc.Natl.Acad.Sci.USA.92:10698−10697,1995)。またサルのモデルを用いた試験では組換えBCG単独の投与では病原性ウイルスの感染防御について好ましい結果は得られていない。
組換えBCGワクチンは、免疫の持続性およびその安全性と供給が容易であるという点において優れたワクチン候補であり、その有効利用は医療分野において不可欠の課題である。
この出願の発明は、以上のとおりの事情に鑑みてなされたものであって、組換えBCGワクチンの有効利用のための新しい手段を提供することを課題としている。
発明の開示
この出願は、前記の課題を解決するための第1の発明として、外来性の抗原性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを保有する発現ベクターによって形質転換された組換えBCGワクチンであって、複数回の抗原刺激による免疫誘導において初回抗原刺激用として使用されることを特徴とするBCGワクチンを提供する。
またこの出願は、第2の発明として、外来性の抗原性タンパク質を複数回刺激する免疫誘導方法であって、前記第1発明のBCGワクチンによって初回抗原刺激を行い、同一の抗原性タンパク質を発現する非BCGワクチンによって1回以上の追加抗原刺激を行うことを特徴とする方法を提供する。
この第2発明の方法においては、追加抗原刺激用のワクチンが、組換えワクシニアウイルスワクチン、例えば組換えDIsワクチンであることを好ましい態様としている。
さらに、前記第1発明および第2発明においては、抗原性タンパク質が免疫不全ウイルス由来であること、さらに詳しくは、免疫不全ウイルスの抗原性タンパク質がHIV遺伝子産物、例えばGagであることをそれぞれ好ましい態様としている。
すなわち、この発明の方法に従えば、例えば組換えワクシニアウイルス(例えば組換えDIs−gagワクチン)の単独投与では得られなウイルスの血中への流出をほぼ完全に防止することができ、またCD4細胞の減少も抑制することが可能となる。これによって、少なくとも病原性ウイルスの体内での蔓延を抑制し、感染性疾患の進行を防止することが可能となる。
発明を実施するための最良の形態
第1発明は、外来性の抗原性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを保有する発現ベクターによって形質転換された組換えBCGワクチンである。そしてこの組換えBCGワクチンは、複数回の抗原刺激による免疫誘導において、その使用が初回抗原刺激用として使用されることを特徴とする。すなわち、この出願の発明者らは、単独使用では十分な免疫誘導能を持たない組換えBCGワクチンであっても、初回抗原刺激(プライミング)として使用することによって、その後の追加抗原刺激(ブースティング)による特異的免疫誘導を強化することを見出してこの発明を完成させた。
BCG株は、結核の予防接種等に使用されている公知のものを対象とすることができる。発現ベクターは、従来の組換えBCGワクチンの作成に使用されているような、BCG用ベクター(例えばプラスミドpSO246等)を使用することができる。このベクターのクローニングサイトに、外来性(すなわち、BCG以外)の任意の抗原性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを挿入することによって発現ベクターを構築することができる。なお、以下の記載では、外来性の抗原性タンパク質を「外来ポリペプチド」、これをコードするポリヌクレオチドを「外来ポリヌクレオチド」と記載することがある。また、外来ポリヌクレオチドには、BCG株由来の任意のプロモーターおよびターミネーター配列(例えばBCG株由来のヒートショックタンパク質Hspのプロモーターおよびターミネーター配列)等を連結することによって、外来ポリペプチドを良好に発現させるようにする。
外来ポリヌクレオチドは、BCG株以外の抗原性タンパク質をコードするポリヌクレオチド(例えば、cDNA断片)であり、外来ポリペプチドは生体内で抗原抗体反応を惹起するものであれば如何なるものであってもよい。具体的にはヒト後天性免疫不全症候群(AIDS)の原因ウイルスであるヒト免疫不全ウイルス(HIV)のgag前駆体p55またはp24タンパク質、envタンパク質gp120またはgp160、po1前駆体タンパク質、nefタンパク質、tatタンパク質等を対象とすることができる。また、サル免疫不全ウイルス(SIV)由来の同様の抗原性ポリペプチドを使用することもできる。あるいは、その他の病原体(他の病原性ウイルスや細菌)、もしくは癌細胞の抗原タンパク質をコードするポリヌクレオチド等を用いることもできる。
外来ポリヌクレオチドの取得方法としては、外来ポリペプチドをコードするゲノム遺伝子またはそのcDNAがクローン化されたプラスミドからその実質的な配列であるポリヌクレオチドを適当な制限酵素で切り出すか、適当な配列のプライマーを用いたpolymerase chain reaction(PCR)により増幅すればよい。クローン化されていない場合は、その遺伝子を持つ細菌、動物のゲノムDNAを、ウイルスの場合はウイルスが感染した動物細胞由来のDNAまたはRNAを鋳型として、上記PCR法によりDNA断片を増幅することにより得ることができる。
このようにして構築した発現ベクターを、塩化カルシウム法や電気穿孔法等の公知に方法でBCG株に導入し、形質転換菌の外来ポリペプチドの発現をウエスタンブロットや公知の免疫測定法(例えばELISA法等)によって確認することによって、この発明の組換えBCGを作成することができる。
このようにして作成した組換えBCGを、通常のBCGワクチンと同様の液状担体に懸濁するすることのよって、組換えBCGワクチンを作成することができ、このワクチンは、実際には第2発明の免疫誘導方法に使用することができる。
第2発明の方法は、前記第1発明のBCGワクチンによって初回抗原刺激を行い、同一の抗原性タンパク質を発現する非BCGワクチンによって1回以上の追加抗原刺激を行うことを特徴としている。
追加抗原刺激用のワクチン(ブースターワクチン)は、組換えワクチンに使用されている公知のウイルスや細菌(例えばポリオウイルス、インフルエンザウイルス、ライノウイルス、水痘ウイルス、ワクシニアウイルス、サルモネラ菌、リステリア菌等)を、第1発明の組換えBCGワクチン(プライムワクチン)と同一の外来ポリヌクレオチドによって形質転換することによって作成することができる。この発明の方法においては、この出願の発明者らが先に開発した組換えワクシニアウイルスDIsワクチン(特開2002−017370号公報)を好ましいブースターワクチンとしている。
プライムワクチンとブースターワクチンの投与は、注射または経口投与等の公知の方法によって行うことができる。投与量およびスケジュールは、被検疫個体の種類(ヒトまたは動物)、体重、誘導する免疫の種類等によって異なるが、例えば、プライムワクチンを0.01〜10mg、ブースターワクチンを105〜1010PFU程度とすることができる。また、ワクチン接種の間隔は、3〜12ヶ月程度とすることができる。
以下、実施例を示してこの出願の発明についてさらに詳細かつ具体的に説明するが、この出願の発明は以下の例によって限定されるものではない。
実施例
実施例1
組換えBCGの作成
SIVのgag遺伝子をプラスミドpNL432(J.Virol.59:284−291,1986)から単離し、この遺伝子DNAの前後にBCG株由来のhsp60プロモーターおよびターミネーター配列をそれぞれ連結し、これを大腸菌−BCG株シャトルベクターpSO246(FEMS Microbiol.Lett.135:237−243,1996)のマルチクローニングサイトに挿入して発現ベクターpSO−SIVgagを構築した(図1)。
この発現ベクターを、文献(Pro.Natl.Acad.Sci.USA.85:6987−6991,1988)の記載に従い、Gene−pulser(Bio−Rad社)を用いてBCG東京株に導入し、20μg/mlのカナマイシン含有のMiddlebrook 7H10寒天培地(Difco社)上で形質転換菌を選択し、pSO−SIVgagを保有する組換えBCG株(rBCG−SIVgag)を作成した。
ウェスタンブロッティングによってSIV gagタンパク質の産生を確認した結果、図2に示したように、rBCG−SIVgagの抽出物において55kDaタンパク質が検出された。一方、コントロールのrBCG−pSO246ではGagタンパク質は検出されなかった。またSIV Gagタンパク質の濃度は、rBCG−SIVgag1mg当たり45±12ngであり、この産生レベルは少なくとも450回のin vitro継代の間維持されていた。
実施例2
免疫誘導
実施例1で作成した組換えBCG株(rBCG−SIVgag)、および組換えワクシニアDIs(rDIs−SIVgag)を用いてカニクイサルに免疫誘導を行った。なお、rDIs−SIVgagは、特開2002−017370号公報の実施例1におけるHIV−1gagの代わりにSIVgag遺伝子を用いて、前記公報記載と同様の方法により作製した。
カニクイサル14匹を以下の5群に分け、初回抗原刺激から0、47、54週後の時点で免疫(ブースティング)した。
第1群(4匹):コントロール(1匹はナイーブサル、3匹はrBCG−pSO246(10mg)の皮内接種1回とrDIs−LacZ(106PFU)の静脈接種を2回)
第2群(2匹):rBCG−SIVgag(10mg)の皮内接種1回
第3群(2匹):rDIs−SIVgag(106PFU)の静脈接種2回
第4群(3匹):rDIs−SIVgag(106PFU)の静脈接種2回+rBCG−SIVgag(10mg)の皮内接種1回
第5群(3匹):rBCG−SIVgag(10mg)の皮内接種1回+rDIs−SIVgag(106PFU)の静脈接種2回
次いで、2回目のブースター免疫から10週間後に、病原性ウイルス(SHIV−KS661:2000TCID50)を粘膜感染させ(チャレンジ)、経時的に血中のウイルスRNAコピー数およびCD4細胞数を計測した。
コントロール群のサルにSHIV−KS661を感染させると、図3に示したように、CD4は約2週間後に1桁から2桁に減少し、それに反してウイルスRNAの血中コピー数は108−9レベルに増加し、速やかにセットポイントに達し、105−6レベルを推移した。また、rBCG−SIVgag単独(第2群:図4)、およびrDIs−SIVgag単独(第3群:図5)の場合も、CD4およびウイルスRNA数の経時的変化はコントロールと同様であった。さらに、rDIs−SIVgag(プライミング)+rBCG−SIVgag(ブースティング)を行ったサル(第4群)の場合もコントロールや単独免疫と同様の経時的変化を示した。
これに対して、第5群(rBCG−SIVgag+rDIs−SIVgag)のサルの場合には、図7に示したように、ウイルスRNAコピー数は顕著に減少し、強いGag特異的免疫が誘導された。また、CD4細胞の減少も有意に抑制された。
以上の結果から、組換えBCGワクチン(rBCG−SIVgag)でプライミングを行い、組換えDIsワクチン(rDIs−SIVgag)でブースティングを行うことによって、強い特異的免疫が誘導されることが確認された。
実施例3
BCGの既往症反応の制御
この発明の免疫誘導方法におけるBCG既往症反応の影響を検討した。すなわち、ヒトでの実際の投与の影響を想定して約2年前にBCG東京株(0.1mg)をカニクイサルに接種し、2年後でもDTHが明らかに誘導されていることを確認した後、以下の3群のサルにワクチン接種を行った。
第1群(3匹):rBCG−pSO246(80mg)の経口接種2回+rDIs−LacZ(106PFU)の静脈接種を2回)
第2群(2匹):rBCG−SIVgag(80mg)の経口接種2回+rDIs−SIVgag(106PFU)の静脈接種2回
第3群(2匹):rBCG−SIVgag(10mg)の静脈接種1回+rDIs−SIVgag(10mg)の静脈接種1回
なお、2回のプライミングは−48週および0週時点で、2回のブースティングは27週および57週後の時点で行った。また、第3群は、0週時点でプライミング、57週時点でブースティングを行った。
最後のワクチン接種から約3か月後に病原性ウイルス(SHIV−C2/120TCID50)をチャレンジし、CD4細胞数およびウイルスRNAコピー数を経時的に計測した。
結果は図8−10に示したとおりである。rBCG−SIVgagプライミング(静脈)+rBCG−SIVgagブースティング(静脈)(第3群)のウイルスRNA数およびCD4数の経時的変化(図10)はコントロール(第1群)と同様であった。これに対して、rBCG−SIVgagプライミング(経口)+rBCG−SIVgagブースティング(静脈)(第2群)では、血中ウイルス量の有意な減少と、CD4細胞の減少抑制が観察された。
以上の結果から、rBCG−SIVgagを経口接種によってプライミングを行い、rBCG−SIVgagを静脈接種によってブースティングすることによって、免疫誘導のみならず、防御免疫においても既往症反応の影響を除外することが可能であることが確認された。
産業上の利用可能性
以上詳しく説明したとおり、この出願の発明によって、組換えBCGワクチンを用いた効果的な免疫誘導が可能となり、様々な感染症や癌等に対して、有効な予防が実現される。
【図面の簡単な説明】
図1は、実施例1における組換えBCG株(rBCG−SIVgag)の作成に使用した発現ベクターpSO−SIVgagの構成を例示した模式図である。
図2は、rBCG−SIVgagのGagタンパク質産生量を測定したウェスタンブロット分析の結果である。
図3は、コントロールのサルに病原性ウイルスを感染させた場合の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化(左図)およびCD4細胞数の経時的変化(右図)である。
図4は、rBCG−SIVgag単独をワクチン接種したサルにおける病原性ウイルス感染後の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化(左図)およびCD4細胞数の経時的変化(右図)である。
図5は、rDIs−SIVgag単独をワクチン接種したサルにおける病原性ウイルス感染後の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化(左図)およびCD4細胞数の経時的変化(右図)である。
図6は、rDIs−SIVgag+rBCG−SIVgagをワクチン接種したサルにおける病原性ウイルス感染後の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化(左図)およびCD4細胞数の経時的変化(右図)である。
図7はrBCG−SIVgag+rDIs−SIVgagをワクチン接種したサルにおける病原性ウイルス感染後の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化である。図7/1はrBCG−SIVgag+rDIs−SIVgagをワクチン接種したサルにおける病原性ウイルス感染後のCD4細胞数の経時的変化である。
図8はBCG既往反応を有するサルにコントロールワクチン(ベクター)を接種した場合の、病原性ウイルス感染後の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化である。図8/1はBCG既往反応を有するサルにコントロールワクチン(ベクター)を接種した場合の、病原性ウイルス感染後のCD4細胞数の経時的変化である。
図9はBCG既往反応を有するサルにrBCG−SIVgag(経口)+rDIs−SIVgag(静脈)のワクチン接種をした場合の、病原性ウイルス感染後の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化である。図9/1はBCG既往反応を有するサルにrBCG−SIVgag(経口)+rDIs−SIVgag(静脈)のワクチン接種をした場合の、病原性ウイルス感染後CD4細胞数の経時的変化である。
図10はBCG既往反応を有するサルにrBCG−SIVgag(静脈)+rDIs−SIVgag(静脈)のワクチン接種をした場合の、病原性ウイルス感染後の血中ウイルスRNAコピー数の経時的変化である。図10/1はBCG既往反応を有するサルにrBCG−SIVgag(静脈)+rDIs−SIVgag(静脈)のワクチン接種をした場合の、病原性ウイルス感染後CD4細胞数の経時的変化である。
Claims (7)
- 外来性の抗原性タンパク質をコードするポリヌクレオチドを保有する発現ベクターによって形質転換された組換えBCGワクチンであって、複数回の抗原刺激による免疫誘導において初回抗原刺激用として使用されることを特徴とするBCGワクチン。
- 抗原性タンパク質が免疫不全ウイルス由来である請求項1のBCGワクチン。
- 免疫不全ウイルスの抗原性タンパク質がHIV遺伝子産物である請求項2のBCGワクチン。
- 外来性の抗原性タンパク質を複数回刺激する免疫誘導方法であって、請求項1のBCGワクチンによって初回抗原刺激を行い、同一の抗原性タンパク質を発現する非BCGワクチンによって1回以上の追加抗原刺激を行うことを特徴とする方法。
- 追加抗原刺激用のワクチンが、組換えワクシニアウイルスワクチンである請求項4の方法。
- 抗原性タンパク質が免疫不全ウイルス由来である請求項4の方法。
- 免疫不全ウイルスの抗原性タンパク質がHIV遺伝子産物である請求項6の方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
JP2002145132 | 2002-05-20 | ||
JP2002145132 | 2002-05-20 | ||
PCT/JP2002/012125 WO2003097087A1 (fr) | 2002-05-20 | 2002-11-20 | Vaccin bcg et utilisation correspondante |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPWO2003097087A1 true JPWO2003097087A1 (ja) | 2005-11-04 |
JP4654026B2 JP4654026B2 (ja) | 2011-03-16 |
Family
ID=29545071
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP2004505083A Expired - Lifetime JP4654026B2 (ja) | 2002-05-20 | 2002-11-20 | Bcgワクチンとその利用 |
Country Status (4)
Country | Link |
---|---|
US (1) | US20050123561A1 (ja) |
JP (1) | JP4654026B2 (ja) |
CA (1) | CA2494359A1 (ja) |
WO (1) | WO2003097087A1 (ja) |
Families Citing this family (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP2006149234A (ja) * | 2004-11-25 | 2006-06-15 | Japan Science & Technology Agency | プライム−ブーストワクチン接種法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998056919A2 (en) * | 1997-06-09 | 1998-12-17 | Oxxon Pharmaccines Limited | Methods and reagents for vaccination which generate a cd8 t cell immune response |
WO2001021201A2 (en) * | 1999-09-21 | 2001-03-29 | Isis Innovation Limited | Use of replication-deficient adenoviral vector to boost cd8+ t cell immune response to antigen |
WO2002024224A2 (en) * | 2000-09-21 | 2002-03-28 | Oxxon Pharmaccines Limited | Use of replication-deficient poxvirus vector to boost cd4+ t cell immune response to antigen |
Family Cites Families (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
JP4344805B2 (ja) * | 2000-07-07 | 2009-10-14 | 独立行政法人科学技術振興機構 | 遺伝子組換えワクシニアウイルスワクチン |
-
2002
- 2002-11-20 JP JP2004505083A patent/JP4654026B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 2002-11-20 CA CA002494359A patent/CA2494359A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-20 US US10/515,253 patent/US20050123561A1/en not_active Abandoned
- 2002-11-20 WO PCT/JP2002/012125 patent/WO2003097087A1/ja active Application Filing
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO1998056919A2 (en) * | 1997-06-09 | 1998-12-17 | Oxxon Pharmaccines Limited | Methods and reagents for vaccination which generate a cd8 t cell immune response |
WO2001021201A2 (en) * | 1999-09-21 | 2001-03-29 | Isis Innovation Limited | Use of replication-deficient adenoviral vector to boost cd8+ t cell immune response to antigen |
WO2002024224A2 (en) * | 2000-09-21 | 2002-03-28 | Oxxon Pharmaccines Limited | Use of replication-deficient poxvirus vector to boost cd4+ t cell immune response to antigen |
Non-Patent Citations (6)
Title |
---|
JPN5004016609, LAGRANDERIE,M., J.VIROL., 1997, V71 N3, P2303−2309 * |
JPN5004016610, 本田 三男, エイズ医薬品開発研究平成12年度 国際研究グランと事業研究報告, 2001, P60−65, JP * |
JPN5004016611, 中里見 哲也, 医学のあゆみ, 1996, P192−195, JP * |
JPN5004016612, YASUTOMI,Y., J.VIROL., 1995, V69 N4, P2279−2284 * |
JPN5004016613, YASUTOMI,Y., VACCINES 94:MOD.APPROACHES NEW VACCINES INCL.PREV.AIDS, 1994, P211−215 * |
JPN6009012941, 本多三男 他, "リコンビナントHIVワクチンのプレクリニカルトライアル", 日本熱帯医学会雑誌, 2001, Vol.29, p.144 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CA2494359A1 (en) | 2003-11-27 |
WO2003097087A1 (fr) | 2003-11-27 |
US20050123561A1 (en) | 2005-06-09 |
JP4654026B2 (ja) | 2011-03-16 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP4749481B2 (ja) | 弱毒化された非機能性vifタンパク質による免疫応答性誘導 | |
JP2011519834A (ja) | フラジェリンポリペプチドワクチン | |
US8916174B2 (en) | HIV DNA vaccine regulated by a caev-derived promoter | |
US7094410B2 (en) | DNA vaccine against proliferating endothelial cells and methods of use thereof | |
AU2002237195B2 (en) | Recombinant poxvirus for chimeric proteins of the human immunodeficiency virus | |
Billaut-Mulot et al. | Interleukin-18 modulates immune responses induced by HIV-1 Nef DNA prime/protein boost vaccine | |
Ahmed et al. | Innate immunity in experimental SIV infection and vaccination | |
Stevceva et al. | Mucosal HIV vaccines: where are we now? | |
US8785411B2 (en) | HIV DNA vaccine methods of use | |
CN114828884A (zh) | 用于疫苗的剂量方案 | |
JP4654026B2 (ja) | Bcgワクチンとその利用 | |
Voltan et al. | Live recombinant vectors for AIDS vaccine development | |
US20180117180A1 (en) | DNA-based plasmid formulations and vaccines and prophylactics containing the same | |
WO2007093134A1 (fr) | Vaccin contre le sida basé sur un vecteur du virus vaccinia réplicatif | |
US20120321655A1 (en) | Lentivirus vaccine based on the recombinant viral vaccine against yellow fever | |
Cavicchi et al. | Franklin Pierce Law Center Educational Report: Patent Landscape of DNA Vaccines for HIV | |
JP4914956B2 (ja) | Dnaワクチン | |
EP1590432A2 (en) | Dna compositon and uses thereof | |
KR20200122533A (ko) | H5 인플루엔자를 치료 또는 예방하기 위한 펩타이드 및 이를 암호화하는 코돈 최적화 서열, 및 이를 이용한 백신 | |
Ackley et al. | Defensive applications of gene transfer technology in the face of bioterrorism: DNA-based vaccines and immune targeting | |
Ali | Combination PT-PCR with in vitro Transcription-Translation System: Rapid and Simple Approach for Monoclonal Antibody Production | |
Seth | HIV-1 subtype C vaccine: waiting in wings for the human trials | |
MXPA06002993A (en) | Dna vaccine compositions and methods of use |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
A80 | Written request to apply exceptions to lack of novelty of invention |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A80 Effective date: 20041220 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20050630 |
|
A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A711 Effective date: 20051020 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20051020 |
|
A072 | Dismissal of procedure [no reply to invitation to correct request for examination] |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A072 Effective date: 20051129 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060313 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20060313 |
|
A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20051110 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20071109 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A821 Effective date: 20071112 |
|
A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20090324 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090624 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090701 |
|
A601 | Written request for extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601 Effective date: 20090724 |
|
A602 | Written permission of extension of time |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602 Effective date: 20090731 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20090824 |
|
A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100420 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100819 |
|
A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20101005 |
|
A911 | Transfer to examiner for re-examination before appeal (zenchi) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A911 Effective date: 20101101 |
|
TRDD | Decision of grant or rejection written | ||
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 Effective date: 20101124 |
|
A01 | Written decision to grant a patent or to grant a registration (utility model) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A01 |
|
A61 | First payment of annual fees (during grant procedure) |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61 Effective date: 20101220 |
|
R150 | Certificate of patent or registration of utility model |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 Ref document number: 4654026 Country of ref document: JP Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150 |
|
FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20131224 Year of fee payment: 3 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S533 | Written request for registration of change of name |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313533 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R313117 |
|
R350 | Written notification of registration of transfer |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R350 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
EXPY | Cancellation because of completion of term |