JPWO2003076399A1 - 免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応を抑制し得る化合物 - Google Patents

Abstract

本発明は、エバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンに関する新規な発見に基づくものであり、具体的には、エバスチンおよびカレバスチンを（Ａ）Ｔ細胞の増殖、（Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、（Ｃ）炎症性サイトカインの産生、または（Ｄ）Ｔ細胞遊走の阻害剤として利用することに関する。また、塩酸エピナスチンを（Ａ）Ｔ細胞の増殖、（Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、または（Ｃ）Ｔｈ−１型サイトカインの産生の阻害剤として利用することに関する。

Description

技術分野
本発明はエバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンの新規な用途に関する。
背景技術
アレルギー性疾患は免疫系の過剰な反応によって生じる。基本的なアレルギー反応は機序の上から、一般的に４種類の型に分類される。Ｉ型（即時型）アレルギーはアナフィラキシーとも呼ばれ、主にＩｇＥ抗体が関与する。自己の細胞や組織と反応し得る異常な抗体（自己抗体）による自己組織傷害（ＩＩ型アレルギー）は、ＩｇＧ、ｇＭ、ＩｇＡ等が関与する。免疫複合体病は、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ等の抗体と抗原、及び補体による抗原抗体複合体が関与するＩＩＩ型アレルギーを基礎とする。抗体の関与が無く、Ｔ細胞およびＴ細胞由来の炎症物質の反応によって起きるのがＩＶ型（遅延型）アレルギーである。またＩＩ型の中でレセプター刺激性免疫グロブリンが関与するものはＶ型とも呼ばれる。
蕁麻疹やアレルギー性鼻炎に代表されるＩ型（即時型）アレルギーに於いては、予め抗原特異的なＩｇＥが産生されることが必要となる。生体に入った外来抗原は真っ先にマクロファージや樹状細胞等の抗原提示細胞に取り込まれる。抗原はエンドソーム内で分解され、アミノ酸１１〜１３残基のペプチドとなり、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結合して細胞膜上に提示され、Ｔ細胞に認識される。Ｔ細胞はＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）によってＭＨＣとペプチドの複合体を認識すると、細胞内にシグナルが伝達され、細胞は活性化され、様々なサイトカインを産生する。Ｂ細胞では抗原刺激によって分化成熟して形質細胞となり、特異性を持つ抗体（免疫グロブリン）を産生する。ナイーブＴ細胞は末梢組織において環境に応じてＴｈ１型とＴｈ２型のサブセットに分化し、Ｔｈ２型の産生するサイトカインのＩＬ−４，ＩＬ−５はＢ細胞に作用しＩｇＥ、ＩｇＧ１が産生されるように働く。
Ｂ細胞によって産生された外来抗原特異的ＩｇＥ抗体は肥満細胞、好塩基球の高親和性ＩｇＥレセプター（ＦｃεＲＩ）に結合すると、それのみで活性化シグナルが核内に伝達され、ＦｃεＲＩの発現が増強し、アポトーシスが抑制され、肥満細胞や好塩基球の寿命が延長される。さらに、外来抗原とＦｃεＲＩが結合すると脱顆粒を起こし、ヒスタミンとロイコトリエンが放出され、周囲組織へ作用（血管透過性亢進、平滑筋収縮等）し、アレルギーの諸症状が引き起こされる。しかしながら、近年の研究では、気管支喘息、アトピー性皮膚炎等多くのＩ型アレルギー疾患において、慢性的な炎症がむしろ病態の中心をなしていることが示されている。
即時反応に引き続いて起こる慢性的なアレルギー性炎症は、主に局所の肥満細胞から放出されたサイトカインにより好酸球、好中球、リンパ球等の炎症関連細胞群が活性化され、炎症部位に遊走、浸潤することに起因する。即時型アレルギー反応の炎症の遷延化において、リンパ球の役割は必要不可欠と考えられる。
抗原刺激によるＴ細胞活性化に関して、早期に細胞内蛋白質の燐酸化と細胞内カルシウム濃度上昇が起き、両者は抗原刺激から数分以内に完成する。２４〜４８時間後には、Ｔ細胞表面に様々な活性化抗原分子やＩＬ−２受容体が発現し、サイトカインが盛んに産生、放出され、その後細胞増殖反応を引き起こす。
過敏なアレルギー免疫反応において、多くの種類の炎症細胞がサイトカインなどの可溶性因子の産生や細胞間の相互作用を介して、この反応を誘引し、また継続させている。ヘルパーＴ細胞（以下、「Ｔｈ細胞」と略す）は、特にエフェクター細胞と考えられ、過敏反応を制御する重要な役割を果たしている。ヘルパーＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞）は、サイトカイン産生プロファイルを基に二つのサブセットが同定されている（Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ Ｍ，Ｗｉｅｒｅｎｇａ Ｅ，Ｂｏｓ Ｊ，Ｊａｎｓｅｎ Ｈ．Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｕｂｓｅｔｓ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｒｅａｃｔｉｖｅ ｈｕｍａｎ ＣＤ４＋Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｔｏｄａｙ．１２：３９２−３９５，１９９１、Ｒｏｍａｇｎａｎｉ Ｓ．Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｂｙ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌ ｉｎ ｄｉｓｅａｓｅ ｓｔａｔｅｓ．Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：２２７−２５７，１９９４）。
一つはＴヘルパー１型細胞（Ｔｈ−１）であり、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γなどを放出する（前掲Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ Ｍら，１９９１、前掲Ｒｏｍａｇｎａｎｉ Ｓ．，１９９４）。もう一つはＴヘルパー２型細胞（Ｔｈ−２）であり、ＩＬ−４およびＩＬ−５などを放出する（前掲Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ Ｍら，１９９１、前掲Ｒｏｍａｇｎａｎｉ Ｓ．，１９９４）。炎症性サイトカイン（ＩＬ−６、ＴＮＦ−α等）はＴ細胞以外にも、マクロファージ等からも産生される。
ＩＬ−４はＢ細胞に働き、Ｃｌａｓｓ ｓｗｉｔｃｈを促進し、ＩｇＥ産生に重要な役割を果たし、一方ＩＬ−２、ＩＦＮ−γはそれぞれ異なった形式でＩＬ−４によるＩｇＥの産生亢進作用を抑制する。ＩｇＥの産生誘導にはサイトカイン以外に、Ｂ細胞表面分子ＣＤ４０への刺激が重要である。この過程でのＢ細胞増殖はＩＬ−６により誘導され、ＩＬ−５が補助的に働く。また、ＩＬ−５は好酸球の分化増殖を特異的に誘導し、好酸球、好塩基球からのメディエーター分泌を促進する。いくつかのアレルギー疾患において、Ｔｈ−２細胞が優性的に炎症部位に集積し、これら細胞が過敏反応を誘導するとの報告がされている（Ｄｅｌ Ｐｒｅｔｅ ＧＦ，Ｄｅ Ｃａｒｌｉ Ｍ，Ｄ’Ｅｌｉｏｓ ＭＭ ｅｔ ａｌ．Ａｌｌｅｒｇｅｎ ｅｘｐｏｓｕｒｅ ｉｎｄｕｃｅｓ ｔｈｅ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ Ｔｈ２ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ａｉｒｗａｙ ｍｕｃｏｓａ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：１４４５−１４４９，１９９３、Ｒｏｂｉｎｓｏｎ Ｄ，Ｈａｍｉｄ Ｑ，Ｂｅｎｔｌｅｙ Ａ，Ｙｉｎｇ Ｓ，Ｋａｙ ＡＢ ａｎｄ Ｄｕｒｈａｍ ＳＲ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４＋Ｔ ｃｅｌｌｓ，ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｔｈ−２ ｔｙｐｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｍＲＮＡ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，ａｎｄ ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌ ｒｅｃｒｕｉｔｍｅｎｔ ｉｎ ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ａｆｔｅｒ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｉｎｈａｌａｔｉｏｎ ｃｈａｌｌｅｎｇｅ ｉｎ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ａｔｏｐｉｃ ａｓｔｈｍａ．Ｊ．Ａｌｌｅｇｙ Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９２：３１３−３２４，１９９３、Ｍａｇｇｉ Ｅ，Ｂｉｓｗａｓ Ｐ，Ｄｅｌ Ｐｒｅｔｅ ＧＰ Ｐａｒｒｏｎｃｈｉ Ｐ，Ｎａｃｃｈｉａ Ｄ，Ｓｉｍｏｎｅｌｌｉ Ｃ，Ｅｍｍｉ Ｌ，Ｄｅｃａｒｌｉ Ｍ，Ｔｉｒｉ Ａ，Ｒｉｃｃｉ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈ２−ｌｉｋｅ ｈｅｌｐｅｒ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖａ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｖｅｒｎａｌ ｃｏｎｊｕｎｃｔｉｖｉｔｉｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１１６９−１１７４，１９９１）。そのため、Ｔｈ−２細胞の機能を特異的に阻害することにより、このようなアレルギー疾患や過敏症を治療し得る可能性が考えられる。
マクロファージは初期の抗原提示以外に、自身が活性化されることで炎症性サイトカイン（ＩＬ−６、ＴＮＦ−α等）を産生して、近接細胞の増殖、分化、活性化に積極的に関与する。このマクロファージが産生する種々のサイトカインも、アレルギー反応に重要な役割を果たす。
炎症局所での炎症細胞の遊走、浸潤はアレルギー反応において重要な役割を果たしている。リンパ球の血管外遊走は、３段階ステップ、つまり細胞接着カスケード（▲１▼ローリング、▲２▼強固な接着、▲３▼トランスマイグレーション）から成る。各段階は、白血球、血管内皮細胞の細胞膜上に発現する接着分子とリガンドの結合により媒介される。
接着分子は、構造的に多くのファミリーに分類され、インテグリンファミリー、免疫グロブリンスーパーファミリー、セレクチンファミリー、カドヘリンファミリー、リンク蛋白ファミリー、シアロムチンファミリー等がある。
活性化Ｔ細胞上に存在するＣＤ１１ａ、ＣＤ２９、ＣＤ４４、ＣＤ２６、ＣＤ４７等の表面分子は細胞接着との関連が深い。ＣＤ１１ａはＬＦＡ−１のα鎖であることが判明している。ＬＦＡ−１はリンパ組織中のリンパ球にのみ発現していて、そのリガンドであるＩＣＡＭ−１との結合を介して細胞間接着に関係している。β１インテグリンファミリーの中では、とりわけＶＬＡ−４（ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９）がＴ細胞の接着に関与し、そのリガンドの一つは血管内皮細胞上に発現されるＶＣＡＭ−１である。ＣＤ４４はヒアルロン酸受容体で、炎症部位での内皮細胞、間質細胞へのリンパ球の接着に関与する。ＣＤ２６はメモリーＴ細胞に発現し、Ｔ細胞の遊走に関わっている（Ｈａｆｌｅｒ ＤＡ，Ｆｏｘ ＤＡ，Ｍａｎｎｉｎｇ ＭＥ，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ ＳＦ，Ｒｅｉｎｈｅｒｚ ＥＬ，Ｗｅｉｎｅｒ ＨＬ．Ｉｎ ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ １９８５；３１２：１４０５．、Ｎａｋａｏ Ｈ，Ｅｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｋａｗａｋａｍｉ Ａ，Ｍｉｇｉｔａ Ｋ，Ｏｔｓｕｂｏ Ｔ，Ｕｅｋｉ Ｙ，ｅｔ ａｌ．Ｉｎｃｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｔａｌ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｊ Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ １９８９；１６：９０４．）。ＣＤ４７はインテグリン関連蛋白と呼ばれ、主に細胞遊走に関与している（Ｍａｓｕｙａｍａ Ｊ，Ｂｅｒｍａｎ ＪＳ，Ｃｒｕｉｋｓｈａｎｋ ＷＷ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ，Ｃｅｎｔｅｒ ＤＭ．Ｅｖｉｄｅｎｃｅ ｆｏｒ ｒｅｃｅｎｔ ａｓ ｗｅｌｌ ａｓ ｌｏｎｇ ｔｅｒｍ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｍｉｇｒａｔｉｎｇ ｔｈｒｏｕｇｈ ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ ｃｅｌｌ ｍｏｎｏｌａｙｅｒｓ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９２；１４８：１３６７．、Ｏｈａｓｈｉ Ｙ，Ｉｗａｔａ Ｓ，Ｋａｍｉｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｒｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｔｙｐｅ ｉｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｅｌｅｍｅｎｔ ｉｎ ＴＣＲ−ａｎｄ ｂｅｔａ １ ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９９；１６３：３７２７．、Ｌｉｕ Ｙ，Ｍｅｒｌｉｎ Ｄ，Ｂｕｒｓｔ ＳＬ，Ｐｏｃｈｅｔ Ｍ，Ｍａｄａｒａ ＪＬ，Ｐａｒｋｏｓ ＣＡ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ＣＤ４７ ｉｎ ｎｅｕｔｒｏｐｈｉｌ ｔｒａｎｓｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｒａｔｅ ｏｆ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４７．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ ２００１；２７６：４０１５６．）。
さらにβ１インテグリンは接着分子として細胞接着・遊走に関与するだけではなく、Ｔ細胞活性化・増殖・サイトカイン産生等の種々の生物学的作用を持つ。β１インテグリンは、細胞外マトリックスと結合すると互いに集積し、それに引き続いて細胞内チロシンキナーゼ（ＦＡＫ、Ｓｒｃ）、アダプター蛋白質（ｐ１３０Ｃａｓ、ｐａｘｉｌｌｉｎ）、アクチン結合蛋白質（α−ａｃｔｉｎｉｎ、ｖｉｎｃｕｌｌｉｎ、ｔａｌｉｎ）が集積する（Ｓｃｈａｌｌｅｒ ＭＤ，Ｏ．Ｃ．，Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄ．ＪＤ，Ｐａｒｓｏｎｓ ＪＴ．Ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｐａｘｉｌｌｉｎ ｂｉｎｄ ｔｏ ｐｅｐｔｉｄｅｓ ｍｉｍｉｃｋｉｎｇ ｂｅｔａ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｄｏｍａｉｎｓ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９５；１３０：１１８１．、Ｌｅｗｉｓ ＪＭ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＭＡ．Ｍａｐｐｉｎｇ ｉｎ ｖｉｖｏ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｏｆ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｗｉｔｈ ｉｎｔｅｇｒｉｎ ｂｅｔａ １ ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ ｄｏｍａｉｎ ｍｕｔａｎｔｓ．Ｍｏｌ Ｂｉｏｌ Ｃｅｌｌ １９９５；６（２）：１５１．）。集積したこれらの蛋白質群集合体はアクチン線維につながり接着斑（ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ）を形成し、チロシン燐酸化等の酵素反応による標的分子の活性化を繰り返し、多様なシグナルを発生して生物学的機能を制御している。
本発明者らは、Ｔ細胞においてβ１インテグリンを介する刺激により、１０５ｋＤａの蛋白（ｐｐ１０５）が強くチロシン燐酸化されることを報告してきた（Ｎｏｊｉｍａ Ｙ，Ｒｏｔｈｓｔｅｉｎ ＤＭ，Ｓｕｇｉｔａ Ｋ，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ ＳＦ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｌｉｇａｔｉｏｎ ｏｆ ＶＬＡ−４ ｏｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｓ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ａ １０５−ｋＤ ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９２；１７５：１０４５．）。ｃＤＮＡクローニングにより、ｐｐ１０５がＣｒｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅのホモローグであることが明らかになり、この蛋白をＣｒｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｔｙｐｅ（Ｃａｓ−Ｌ）と命名した（Ｍｉｎｅｇｉｓｈｉ Ｍ，Ｔ．Ｋ．，Ｓａｔｏ Ｔ，Ｉｗａｔａ Ｓ，Ｎｏｊｉｍａ Ｙ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｃａｓ−Ｌ，ａ １０５−ｋＤ Ｃｒｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ−ｒｅｌａｔｅｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｔｈａｔ ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｂｅｔａ １ ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｉｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ．Ｊ Ｅｘｐ Ｍｅｄ １９９６；１：１３６５．、Ｌａｗ ＳＦ，Ｅｓｔｏｊａｋ Ｊ，Ｗａｎｇ Ｂ，Ｍｙｓｌｉｗｉｅｃ Ｔ，Ｋｒｕｈ Ｇ，Ｇｏｌｅｍｉｓ ＥＡ．Ｈｕｍａｎ ｅｎｈａｎｃｅｒ ｏｆ ｆｉｌａｍｅｎｔａｔｉｏｎ １，ａ ｎｏｖｅｌ ｐ１３０−ｌｉｋｅ ｄｏｃｋｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ，ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ ｗｉｔｈ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ ａｎｄ ｉｎｄｕｃｅｓ ｐｓｅｕｄｏｈｙｐｈａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｉｎ ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ．Ｍｏｌ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９６；１６：３３２７．）。また、Ｃａｓ−ＬはＦＡＫ及びＳｒｃ ｆａｍｉｌｙチロシンキナーゼによって直接チロシン燐酸化されることを明らかにした（Ｔａｃｈｉｂａｎａ Ｋ，Ｕｒａｎｏ Ｔ，Ｆｕｊｉｔａ Ｈ，Ｏｈａｓｈｉ Ｙ，Ｋａｍｉｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｉｗａｔａ Ｓ，ｅｔ ａｌ．Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｒｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ ｂｙ ｆｏｃａｌ ａｄｈｅｓｉｏｎ ｋｉｎａｓｅ．Ａ ｐｕｔａｔｉｖｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｒｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅｓ．Ｊ Ｂｉｏｌ Ｃｈｅｍ １９９７；２７２：２９０８３．）。Ｃａｓ−Ｌは末梢血Ｔ、Ｂ細胞、胸腺細胞等のリンパ系細胞に発現し、ｖ−Ｓｒｃ、ＢＣＲ−ＡＢＬ、ｖ−Ｃｒｋ分子によりチロシン燐酸化され、Ｃｒｋ、Ｎｃｋ等のアダプター蛋白質・Ｓｒｃ等のチロシンキナーゼ及びＳＨ−ＰＴＰ２等のホスファターゼとそれらのＳＨ２ドメインを介して結合する。Ｃａｓ−Ｌのチロシン燐酸化はβ１インテグリンを介するＴ細胞活性化に必須であり、Ｔ細胞増殖・サイトカイン産生・細胞遊走・細胞接着において重要な役割を果たしている（Ｏｈａｓｈｉ Ｙ，Ｉｗａｔａ Ｓ，Ｋａｍｉｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｔｙｒｏｓｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｒｋ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｓｕｂｓｔｒａｔｅ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ−ｔｙｐｅ ｉｓ ａ ｃｒｉｔｉｃａｌ ｅｌｅｍｅｎｔ ｉｎ ＴＣＲ−ａｎｄ ｂｅｔａ １ ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｍｉｇｒａｔｉｏｎ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９９；１６３：３７２７．、Ｋａｍｉｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｔａｃｈｉｂａｎａ Ｋ，Ｉｗａｔａ Ｓ，Ｏｈａｓｈｉ Ｙ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｃａｓ−Ｌ ｉｓ ｒｅｑｕｉｒｅｄ ｆｏｒ ｂｅｔａ １ ｉｎｔｅｇｒｉｎ−ｍｅｄｉａｔｅｄ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎ Ｔ ｃｅｌｌｓ．Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９９；１６３：５６３．）。従って、細胞接着や細胞遊走等のＴ細胞機能評価においてＣａｓ−Ｌに代表されるβ１インテグリン関連分子のチロシン燐酸化の検討は重要と思われる。
一方、ヒスタミンはＬ−ヒスチジンから脱炭酸酵素により細胞内で合成される生体内アミンであり、１９１０年Ｄａｌｅにより麦角から単離された。ヒスタミンは主として肥満細胞、好塩基球細胞の顆粒内に貯蔵されているが、種々の物理・化学的刺激、抗原によるＩｇＥ−ＦｃεＲＩ ｃｏｍｐｌｅｘの架橋形成によって放出される。古くから標的組織での血管透過性亢進、平滑筋収縮、血管拡張、粘液分泌増加等の免疫関連反応および胃壁細胞からの胃酸分泌亢進等多彩な生理活性が研究されてきたが、近年、中枢神経系において重要な神経伝達物質として働いていることも判明した。これらの生理作用はヒスタミン受容体を介して発現する。
ヒスタミン受容体は現在４種類のサブタイプ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｈ４）まで同定されている。Ｈ１受容体は毛細血管、血管平滑筋、血管内皮、気管支平滑筋、腸管平滑筋等の組織に主に発現し、肥満細胞から放出されたヒスタミンが結合することにより典型的な即時型アレルギーの症状を引き起こす。主に胃壁細胞や気道杯細胞に発現するＨ２受容体はヒスタミン刺激に対して胃酸分泌と気道粘液を分泌する。中枢神経系にはヒスタミン神経系と呼ばれる神経系が存在し、そこではＨ１、Ｈ２、Ｈ３のヒスタミン受容体サブタイプが発現している。神経細胞以外ではグリア細胞にもＨ１、Ｈ２受容体が発現していることが知られている。ヒスタミン神経系のＨ１受容体を介する機能には、覚醒、食欲、飲水、体温調節、平衡感覚調節、神経内分泌調節、痙攣抑制等の種々の中枢機能に関与している。ヒスタミンＨ１受容体拮抗薬（＝抗Ｈ１ブロッカー）の主要な副作用は眠気であるが、これは脳のＨ１受容体が覚醒を支配しているために起きる。Ｈ３受容体は主に中枢神経系にのみ発現し、ヒスタミン神経終末からのヒスタミン遊離を抑制するオートレセプターとして同定された。さらに、ヒスタミン神経系以外の神経終末にも発現し、伝達物質遊離の抑制に関わるとされている。Ｈ４受容体は末梢組織に発現が確認され、その機能は現在解析中である。
最近、ヒスタミンはアレルギー・炎症の調節への関与が報告されている（Ｊｕｔｅｌ Ｍ，Ｗａｔａｎａｂｅ Ｔ，Ｋｌｕｎｋｅｒ Ｓ，Ａｋｄｉｓ Ｍ，Ｔｈｏｍｅｔ ＯＡ，Ｍａｌｏｌｅｐｓｚｙ Ｊ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｔ−ｃｅｌｌ ａｎｄ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｂｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ Ｈ１ ａｎｄ Ｈ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｎａｔｕｒｅ ２００１；４１３：４２０−５．、Ｊｕｔｅｌ Ｍ，Ｋｌｕｎｋｅｒ Ｓ，Ａｋｄｉｓ Ｍ，Ｍａｌｏｌｅｐｓｚｙ Ｊ，Ｔｈｏｍｅｔ ＯＡ，Ｚａｋ−Ｎｅｊｍａｒｋ Ｔ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ｕｐｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｔｈ１ ａｎｄ ｄｏｗｎｒｅｇｕｌａｔｅｓ Ｔｈ２ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｄｕｅ ｔｏ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｔｔｅｒｎｓ ｏｆ ｓｕｒｆａｃｅ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ １ ａｎｄ ２ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ．Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１；１２４（１−３）：１９０−２．、Ｌａｇｉｅｒ Ｂ，Ｌｅｂｅｌ Ｂ，Ｂｏｕｓｑｕｅｔ Ｊ，Ｐｅｎｅ Ｊ．Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｍｏｄｕｌａｉｏｎ ｂｙ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ｏｆ ＩＬ−４ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ（ＩＦＮ−ｇａｍｍａ）ｒｅｌｅａｓｅ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ｈｕｍａｎ Ｔｈ０，Ｔｈ１ ａｎｄ Ｔｈ２ ｃｌｏｎｅｓ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９７；１０８（３）：５４５−５１．、Ｈｏｒｖａｔｈ ＢＶ，Ｓｚａｌａｉ Ｃ，Ｍａｎｄｉ Ｙ，Ｌａｓｚｌｏ Ｖ，Ｒａｄｖａｎｙ Ｚ，Ｄａｒｖａｓ Ｚ，ｅｔ ａｌ．Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ａｎｄ ｈｉｓｔａｍｉｎ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｍｏｄｉｆｙ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ａｎｄ ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｏｆ ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｇａｍｍａ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｈｕｍａｎ ｂｌｏｏｄ ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｉｎ ＣＤ１９−ｄｅｐｌｅｔｅｄ ｃｅｌｌ ｓｕｂｓｅｔｓ．Ｉｍｍｕｎｏｌ Ｌｅｔｔ １９９９；７０（２）：９５−９．）。ヒトＴ細胞には主としてＨ２受容体が存在すると言われている（Ｓａｃｈｓ Ｂ，ｈｅｒｔｌ Ｍ，Ｍｅｒｋ ＨＦ．Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ ｏｎ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ，ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ａｎｄ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ．Ｓｋｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ａｐｐｌ Ｓｋｉｎ Ｐｈｙｓｉｏｌ ２０００；１３（６）：３１３−２３．）が、マウスＴ細胞上にはヒスタミンＨ１、Ｈ２受容体が存在し、Ｈ１受容体には免疫活性化促進、Ｈ２受容体には免疫活性化抑制の情報伝達に関与していることが報告されている。ヒスタミンはＨ１受容体を介しＴ細胞からのＴｈ１サイトカイン産生を増強する一方、Ｈ２受容体を介しＴ細胞からのＴｈ１、Ｔｈ２両サイトカイン産生を抑制するという仮説が提唱されている（前掲Ｊｕｔｅｌ Ｍ，ｅｔ ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，２００１）。
即時型アレルギーの治療薬として開発されたヒスタミンＨ１受容体拮抗薬は標的細胞のＨ１受容体に強く結合し、ヒスタミンが受容体に結合するのを阻止することでアレルギー症状を抑制する。それ以外に局所麻酔作用、中枢神経鎮静作用、抗不整脈作用、アトロピン様作用、抗セロトニン作用、抗キニン作用等の多彩な薬理作用を併せ持つ。副作用の軽減、服薬コンプライアンスの向上を目指し、現在までに多くの第１・第２世代の抗Ｈ１ブロッカー（抗ヒスタミン薬）が開発されている。第２世代抗Ｈ１ブロッカーは、眠気等の鎮静作用、抗コリン作用が少ないことから、現在、蕁麻疹、アレルギー性鼻炎等のＩ型アレルギー性疾患の治療薬として幅広く用いられている（Ｓｔｏｒｍｓ ＷＷ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｅｂａｓｔｉｎｅ １０ ｏｒ ２０ｍｇ ｏｎｃｅ ｄａｉｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅａｓｏｎａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ＵＳ．Ｄｒｕｇｓ １９９６；５２ Ｓｕｐｐｌ １：２０．、Ｋａｌｉｓ Ｂ．Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｅｂａｓｔｉｎｅ，ｔｅｒｆｅｎａｄｉｎｅ ａｎｄ ｐｌａｃｅｂｏ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｕｒｔｉｃａｒｉａ ｉｎ ａｄｕｌｔｓ．Ｄｒｕｇｓ １９９６；５２ Ｓｕｐｐｌ １：３０．）。
抗Ｈ１ブロッカーは、化学構造において共通のアンモニウム基を持ち、このアンモニウム基によってＨ１受容体に認識される一方、その他の薬理効果はアンモニウム基以外の構造によって決定される。抗Ｈ１ブロッカーはＨ１受容体への結合より少ないながらもＨ２受容体へも結合する（Ｌｅｕｒｓ Ｒ，Ｃｈｕｒｃｈ ＭＫ，Ｔａｇｌｉａｌａｔｅｌａ Ｍ．Ｈ１−ａｎｔｉｈｉｓｔａｍｉｎｅｓ：ｉｎｖｅｒｓｅ ａｇｏｎｉｓｍ，ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ ａｃｔｉｏｎｓ ａｎｄ ｃａｒｄｉａｃ ｅｆｆｅｃｔｓ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｒｇｙ ２００２；３２（４）：４８９−９８．）。また、多くのヒスタミン拮抗薬がｉｎｖｅｒｓｅ ａｇｏｎｉｓｍ（Ｐｉｌｌｏｔ Ｃ，Ｏｒｔｉｚ Ｊ，Ｈｅｒｏｎ Ａ，Ｒｉｄｒａｙ Ｓ，Ｓｃｈｗａｒｔｚ ＪＣ，Ａｒｒａｎｇ ＪＭ．Ｃｉｐｒｏｘｉｆａｎ，ａ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ Ｈ３−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ／ｉｎｖｅｒｓｅ ａｇｏｎｉｓｔ，ｐｏｔｅｎｔｉａｔｅｓ ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｂｅｈａｖｉｏｒａｌ ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｈａｌｏｐｅｒｉｄｏｌ ｉｎ ｔｈｅ ｒａｔ．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ ２００２；２２（１６）：７２７２−８０．、Ｎｏｎａｋａ Ｈ，Ｏｔａｋｉ Ｓ，Ｏｈｓｈｉｍａ Ｅ，Ｋｏｎｏ Ｍ，Ｋａｓｅ Ｈ，Ｏｈｔａ Ｋ，ｅｔ ａｌ．Ｕｎｉｑｕｅ ｂｉｎｄｉｎｇ ｐｏｃｋｅｔ ｆｏｒ ＫＷ−４６７９ ｉｎ ｔｈｅ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ Ｈ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９８；３４５：１１１−７．）であるとの報告もなされている。抗Ｈ１ブロッカーの構造上の違いによって抗Ｈ１ブロッカーの受容体への親和性の差異及び臨床効果の相違も認められている。
上述のＴｈ−２型サイトカインの産生を抑制し得る薬剤としてテルフェナジンがある。このテルフェナジンは抗コリン作用や眠気を誘導しない抗Ｈ１ブロッカーであるが、ＱＴ延長や不整脈などの副作用などを稀に伴うことがあることが報告されている。このような副作用はヒスタミン受容体に対する拮抗作用によりもたらされると考えられているが（Ｒｏｂｅｒｔｓ ＤＪ．Ａ ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ｅｂａｓｔｉｎｅ．Ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｎ ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ Ｈ１ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｄｒｕｇｓ ５２（Ｓｕｐｐｌ）：８−１４，１９９６）、近年の研究からテルフェナジンはレセプターレベルでのヒスタミンの遮断とは関係がない別の性質を有している可能性が考えられている（Ｍａｓｓｅｙ ＷＡ，Ｌｉｃｈｔｅｎｓｔｅｉｎ ＬＭ．Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ａｎｔｉｈｉｓｔａｍｉｎｅｓ ｂｅｙｏｎｄ Ｈ１ ａｎｔａｇｏｎｉｓｍ ｉｎ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ．Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ．８６：１０１９−１０２４，１９９０、Ｃｒａｍｐｅｔｔｅ Ｌ，Ｍａｉｎｐｒｉｃｅ Ｂ，Ｂｌｏｏｍ Ｍ，Ｂｏｎｓｑｕｅｔ Ｊ，Ｃａｍｐｂｅｌｌ ＡＭ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｍｅｄｉａｔｏｒ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ ｄｉｓｐｅｒｓｅｄ ｎａｓａｌ ｐｏｌｙｐ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｅｒｆｅｎａｄｉｎｅ．Ａｌｌｅｒｇｙ ５１：３４６−３４９，１９９６）。
同様に抗コリン作用や眠気を誘導しない抗Ｈ１ブロッカーにエバスチン（４−ｄｉｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙ−１〔３−（４−ｔｅｒｂｕｔｙｌ−ｂｅｎｚｏｙｌ）−ｐｒｏｐｙｌ〕ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ；分子量４７１．６８）がある。このエバスチンは構造的には、テルフェナジンと類似しているが、テルフェナジンのようなＱＴ延長や不整脈などの副作用などがほとんどないことから、季節的なアレルギー性鼻炎などの治療薬として現在広く用いられている（Ｓｔｏｒｍｓ ＷＷ．Ｃｌｉｎｉｃａｌ ｓｔｕｄｉｅｓ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｉｃａｃｙ ａｎｄ ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ ｏｆ ｅｂａｓｔｉｎｅ １０ ｏｒ ２０ｍｇ ｏｎｃｅ ｄａｉｌｙ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｓｅａｓｏｎａｌ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｒｈｉｎｉｔｉｓ ｉｎ ｔｈｅ ＵＳ．Ｄｒｕｇｓ ５２（Ｓｕｐｐｌ．１）：２０−２５，１９６６、Ｋａｌｉｓ Ｂ．Ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｒｅ ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｓｔｕｄｙ ｏｆ ｅｂａｓｔｉｎｅ，ｔｅｒｆｅｎａｄｉｎｅ ａｎｄ ｐｌａｃｅｂｏ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｃｈｒｏｎｉｃ ｉｄｉｏｐａｔｈｉｃ ｕｒｔｉｃａｒｉａ ｉｎ ａｄｕｌｔｓ．Ｄｒｕｇｓ ５２（Ｓｕｐｐｌ．１）：３０−３４，１９９６）。エバスチンにおけるＴｈ−２型サイトカイン産生抑制活性などは解析されておらず、アレルギー疾患の治療に対して効果的であるが、他のメカニズムが存在する可能性があると考えられる。
過敏反応の初期段階においては、特定のアレルゲンがＴ細胞受容体（ＴｃＲ）に認識され、活性化されることにより、アレルギーを誘導し得る種々のサイトカインを遊離させる。しかしながら、このプロセス単独ではＴ細胞の活性化を誘導することはできない。様々な知見から、ＴｃＲとは別の更なるＴ細胞表面分子を通じて誘導される共刺激（コスティミレーション）シグナルと呼ばれる第二の因子の存在が示唆されている（Ｒｏｂｅｙ Ｅ，Ａｌｌｉｓｏｎ ＪＰ．Ｔ−ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ：Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｉｇｎａｌｓ ｆｒｏｍ ｔｈｅ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｄ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｍｏｌｅｃｕｌｅ．Ｉｍｍｕｎｏｌ ｔｏｄａｙ．１６：３０６−３０９，１９９５）。
これら共刺激シグナルは、Ｔ細胞増殖およびサイトカイン産生などにより特徴付けられ、ＴｃＲ刺激によるＴ細胞の完全な活性化のためには不可欠である。そのため、共刺激シグナルの誘引は、過敏な免疫反応の発症にも重要な役割を果たしている。共刺激シグナルは、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ−４のような数種のアクセサリー分子により産生され得る（Ｇｒｅｅｎ ＪＭ，Ｎｏｅｌ ＰＪ，Ｓｐｅｒｌｉｎｇ ＡＩ，Ｗａｌｕｎａｓ ＴＬ，Ｌｅｉｓｈｏｗ ＤＪ，Ｓｔａｃｋ Ｒ，Ｇｒａｙ ＧＳ，Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ ＪＡ，Ｔｈｏｍｐｓｏｎ ＣＢ．Ａｂｓｅｎｃｅ ｏｆ Ｂ−７ ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ ｉｎ ＣＤ２８−ｄｅｆｉｃｉｅｎｔ ｍｉｃｅ．Ｉｍｍｕｎｉｔｙ．１：５０１−５０８，１９９４、Ｇｉｍｍｉ ＣＤ，Ｆｒｅｅｍａｎ ＧＪ，Ｓｕｇｉｔａ Ｋ，Ｆｒｅｅｄｍａｎ ＡＳ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ ａｎｄ Ｎａｄｌｅｒ ＬＮ．Ｂ７ ｐｒｏｖｉｄｅｓ ａ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ｓｉｇｎａｌ ｗｈｉｃｈ ｉｎｄｕｃｅｓ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｔｏ ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｅ ａｎｄ ｓｅｃｒｅｔｅ ＩＬ−２．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８８：６５７５−６５７９，１９９１、Ｆｒｅｅｍａｎ ＧＪ，Ｂｏｒｒｉｅｌｌｏ Ｆ，Ｈｏｄｅｓ ＲＪ，Ｒｅｉｓｅｒ Ｈ，Ｈａｔｈｃｏｃｋ ＫＳ，Ｌａｓｚｌｏ Ｇ，Ｍａｋｎｉｇｈｔ ＡＪ，Ｋｉｍ Ｊ，Ｄｕ Ｌ，Ｌｏｍｂａｒｄ ＤＢ，ｅｔ ａｌ．Ｕｎｃｏｖｅｒｉｎｇ ｏｆ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｌｔｅｒｎａｔｉｖｅ ＣＴＬＡ−４ ｃｏｕｎｔｅｒ−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｉｎ Ｂ−７ ｄｅｆｉｃｉｅｎｃｅ ｍｉｃｅ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２６２：９０７−９０９，１９９３、Ｌｉｎｓｌｅｙ ＰＳ，Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ ＪＡ．Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ２８ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｄｕｒｉｎｇ Ｔ ｃｅｌｌ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｔｏ ａｎｔｉｇｅｎ．Ａｎｎｕ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：１９１−２１２，１９９３）。
さらに、本願発明者らは、近年、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞上に発現されている新規な共刺激分子、ＣＤ２６を同定している（Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ，Ｔｏｒｉｍｏｔｏ Ｙ，Ｌｅｖｉｎｓｏｎ Ｇ，Ｒｕｄｄ ＣＥ，Ｓｃｈｒｉｅｂｅｒ Ｍ，Ｄａｎｇ ＮＨ，Ｌｅｔｖｉｎ ＮＬ，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ ＳＦ．１Ｆ７，ａ ｎｏｖｅｌ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｍｏｌｅｃｕｌｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｈｅｌｐｅｒ ｆｕｎｃｔｉｏｎ ｏｆ ＣＤ４ ｃｅｌｌｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ １４３：３４３０−３４３９，１９８９、Ｄａｎｇ ＮＨ，Ｔｏｒｉｍｏｔｏ Ｙ，Ｄｅｕｓｃｈ Ｋ，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ ＳＦ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｃｏｍｉｔｏｇｅｎｉｃ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｓｏｌｉｄ−ｐｈａｓｅ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ ａｎｔｉ−１Ｆ７ ｏｎ ｈｕｍａｎ ＣＤ４ Ｔ ｃｅｌｌ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｖｉａ ＣＤ３ ａｎｄ ＣＤ２ ｐａｔｈｗａｙ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：４０９２−４１００，１９９０、Ｔａｎａｋａ Ｔ，Ｋａｍｅｏｋａ Ｔ，Ｙａｒｓｏｎ Ａ，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ ＳＦ，Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｔｈｅ ｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｔｈｅ ＣＤ２６ ａｎｔｉｇｅｎ ｒｅｑｕｉｒｅｓ ｄｉｐｅｐｔｉｄｙｌ ｐｅｐｔｉｄａｓｅ ＩＶ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ Ｓｃｉ ＵＳＡ．９０：４５８６−４５９０，１９９３）。そして、このＣＤ２６分子は、免疫に起因した疾患でみられる炎症部位へのエフェクターＴ細胞の遊走にも関与しているとされている（Ｈａｆｌｅｒ ＤＡ，Ｆｏｘ ＤＡ，Ｍａｎｎｉｎｇ ＭＥ，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ ＳＦ，Ｒｅｉｎｈｅｒｚ ＥＬ，Ｗｅｉｎｅｒ ＨＬ．Ｉｎ ｖｉｖｏ ａｃｔｉｖａｔｅｄ Ｔ ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｓ ｉｎ ｔｈｅ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ａｎｄ ｃｅｒｅｂｒｏｓｐｉｎａｌ ｆｌｕｉｄ ｏｆ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｍｕｌｔｉｐｌｅ ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１２：１４０５−１４１１，１９８５、Ｎａｋａｏ Ｈ，Ｅｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｋａｗａｋａｍｉ Ａ ｅｔ ａｌ．Ｉｎｃｒｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｔａ１ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ ｂｌｏｏｄ ｆｒｏｍ ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．１６：９０４−９１０，１９８９）。
発明の開示
本発明は、エバスチン（４−ｄｉｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙ−１［３−（４−ｔｅｒｂｕｔｙｌ−ｂｅｎｚｏｙｌ）−ｐｒｏｐｙｌ］ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｅ）、カレバスチン（４−［４−［４−（ｄｉ−ｐｈｅｎｙｌｍｅｔｈｏｘｙ）−１−ｐｉｐｅｒｉｄｉｎｙｌ］−１−ｏｘｏｂｕｔｙｌ］−α，α−ｄｉ−ｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｅｎｅａｃｅｔｉｃ ａｃｉｄ）および塩酸エピナスチン（３−ａｍｉｎｏ−９，１３ｂ−ｄｉｈｙｄｒｏ−１Ｈ−ｄｉｂｅｎｚ（ｃ，ｆ）ｉｍｉｄａｚｏｌ（１，５−ａ）ａｚｅｐｉｎｅ ｈｙｄｒｏ−ｃｈｌｏｒｉｄｅ、分子量２８５．７８）（Ｒｏｅｄｅｒ Ｔ，Ｄｅｇｅｎ Ｊ，Ｇｅｗｅｃｋｅ Ｍ．Ｅｐｉｎａｓｔｉｎｅ，ａ ｈｉｇｈｌｙ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｏｆ ｉｎｓｅｃｔ ｎｅｕｒｏｎａｌ ｏｃｔｏｐａｍｉｎｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ １９９８ ３４９（２−３）：１７１−１７７）の新規な作用メカニズムを解明することを第一の目的とし、また、上述したような共刺激シグナルなどによるサイトカイン産生、Ｔ細胞遊走などのアレルギー免疫反応を抑制し得る、より副作用の少ない化合物ならびにこれを含む組成物を提供することを目的とする。
上記課題に鑑み、本願発明者らはエバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンによるアレルギー免疫反応の阻害作用メカニズムを解析するために、Ｔ細胞増殖や異なる共刺激シグナル経路を介したサイトカイン産生におけるエバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンの影響を解析することを試みた。さらに、Ｔ細胞の遊走作用、Ｔ細胞およびマクロファージによる炎症性サイトカイン産生におけるエバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンの影響を解析した。そして、これら解析より、エバスチンおよびカレバスチンが共刺激条件下で、Ｔ細胞増殖、Ｔｈ−２型サイトカインの産生、炎症性サイトカインの産生、さらにはＴ細胞遊走を濃度依存的に阻害し得ることが示された。また、塩酸エピナスチンが共刺激条件下で、Ｔ細胞増殖、Ｔｈ−２型サイトカインの産生、さらにはＴｈ−１型サイトカインの産生を濃度依存的に阻害し得ることが示された。すなわち、本発明はこれらエバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンに関する新規な発見に基づくものであり、具体的には、以下の〔１〕〜〔７〕を提供するものである。
〔１〕 免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応を抑制し得る下記式（１）に記載の化合物であって、
前記アレルギー免疫反応が
（Ａ）Ｔ細胞の増殖、
（Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、
（Ｃ）炎症性サイトカインの産生、または
（Ｄ）Ｔ細胞遊走である、化合物。

［上記式（１）において、ＲはＣＨ_３またはＣＯＯＨである。］
〔２〕 免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応を抑制し得る下記式（２）に記載の化合物またはその塩であって、
前記アレルギー免疫反応が
（Ａ）Ｔ細胞の増殖、
（Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、または
（Ｃ）Ｔｈ−１型サイトカインの産生である、化合物またはその塩。

〔３〕 炎症性サイトカインがＴ細胞またはマクロファージから産生されるサイトカインである、〔１〕に記載の化合物。
〔４〕 〔１〕または〔３〕に記載の化合物を含む、組成物。
〔５〕 〔２〕に記載の化合物またはその塩を含む、組成物。
〔６〕 下記式（１）に記載の化合物を有効成分として含有する、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤であって、
前記アレルギー免疫反応が
（Ａ）Ｔ細胞の増殖、
（Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、
（Ｃ）炎症性サイトカインの産生、または
（Ｄ）Ｔ細胞遊走である、抑制剤。

〔７〕 下記式（２）に記載の化合物またはその塩を有効成分として含有する、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤であって、
前記アレルギー免疫反応が
（Ａ）Ｔ細胞の増殖、
（Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、または
（Ｃ）Ｔｈ−１型サイトカインの産生である、抑制剤。

本発明は、エバスチン、（上記式（１）においてＲがＣＨ_３である化合物）およびその酸化代謝物であるカレバスチン（上記式（１）においてＲがＣＯＯＨである化合物）の新規な作用に関する発見に基づくものであり、エバスチンおよびカレバスチンをＨ１ブロッカー阻害薬以外に、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤として用いることに関する。また、本発明は、エバスチンおよびカレバスチンを投与する工程を含む、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応に関連する疾患の治療方法、または免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤の製造におけるエバスチンおよびカレバスチンの使用に関する。
エバスチンおよびカレバスチンの新規な作用としては、Ｔ細胞の増殖抑制、Ｔｈ−２型サイトカインの産生抑制、Ｔ細胞またはマクロファージからの炎症性サイトカインの産生抑制、Ｔ細胞遊走抑制などを挙げられる。すなわち、本発明は、アレルギー免疫反応の中心的な役割を果たすＴ細胞、およびマクロファージを含む免疫細胞により誘導される上記種々のアレルギー免疫反応の抑制剤としてエバスチンおよびカレバスチンを利用することに関するものである。以下、これら各作用毎に詳細に説明する。
エバスチンおよびカレバスチンの第一の新規な作用として、Ｔ細胞の増殖の抑制を挙げることができる。Ｔ細胞の増殖はアレルギーを誘導し得る外的あるいは自己抗原刺激などにより、例えば休止期にあるＴ細胞が活性化されてＴ細胞が増加する現象であり、このＴ細胞の増殖は例えば培養細胞などでは、トリチウム^３Ｈ−チミジンなどの取り込みなどにより測定し得る。このようなＴ細胞の増殖を抑制するためのエバスチン濃度はｉｎ ｖｉｔｒｏでは１μＭ〜２０μＭ、好ましくは１０μＭ〜２０μＭである。また、Ｔ細胞の増殖を抑制するためのカレバスチン濃度はｉｎ ｖｉｔｒｏでは１μＭ〜２００μＭ、好ましくは２０μＭ〜２００μＭである。
エバスチンおよびカレバスチンの第二の新規な作用としては、Ｔｈ−２型サイトカインの産生を選択的に抑制し得る点を挙げることができる。ここで「選択的」とは、Ｔヘルパー細胞からのサイトカイン全ての産生を抑制するのではなく、Ｔｈ−１型細胞からのＩＬ−２やＩＦＮ−γなどのサイトカイン産生には影響を与えることなく、アレルギー疾患の炎症部位に検出されるＴｈ−２型サイトカインの産生のみを特異的に抑制し得ることを意味する。すなわちＴｈ−２型サイトカインは、Ｔヘルパー２型細胞から産生されるサイトカインであり、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、慢性ＧＶＨＤ（ｇｒａｆｔ ｖｓ ｈｏｓｔ ｄｉｓｅａｓｅ）、全身性エリトマトーデス、重症筋無力症などを含めた広範囲なアレルギー免疫疾患の炎症部位で検出されている。このようなサイトカインとしては、例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３などを挙げることができる。このＴｈ−２型サイトカインの同定、定量は、これらに対する抗体が固定化されたＥＬＩＳＡを用いて行うことができる。こうしたＴｈ−２型サイトカインの産生を抑制するためのエバスチンの濃度は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでは、例えば１μＭ〜２０μＭ、好ましくは、５μＭ〜２０μＭ、より好ましくは、１０μＭである。また、Ｔｈ−２型サイトカインの産生を抑制するためのカレバスチンの濃度は、ｉｎ ｖｉｔｒｏでは、例えば１μＭ〜２００μＭ、好ましくは、１０μＭ〜２００μＭ、より好ましくは、１００μＭ〜２００μＭである。
エバスチンおよびカレバスチンの第三の新規な作用として、炎症性サイトカインの産生抑制が挙げられる。この炎症性サイトカインとしては、一般にはＩＬ−１、ＩＬ−６を挙げることができるが、本明細書ではこれに限定されず、ＴＮＦ−αなども含まれる。また、上記エバスチンおよびカレバスチンにより産生が抑制される炎症性サイトカインは、マクロファージより産生されるものの他、Ｔ細胞から産生されるものも含まれる。ｉｎ ｖｉｔｒｏ系でＴ細胞からの炎症性サイトカイン産生を抑制するためのエバスチンの濃度は、１μＭ〜２０μＭ、好ましくは、５μＭ〜２０μＭ、より好ましくは１０μＭである。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系でマクロファージからの炎症性サイトカイン産生を抑制するためのエバスチンの濃度もまた、１μＭ〜２０μＭ、好ましくは、５μＭ〜２０μＭ、より好ましくは１０μＭである。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系でＴ細胞からの炎症性サイトカイン産生を抑制するためのカレバスチンの濃度は、１μＭ〜２００μＭ、好ましくは、１０μＭ〜２００μＭ、より好ましくは１００μＭ〜２００μＭである。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系でマクロファージからの炎症性サイトカイン産生を抑制するためのカレバスチンの濃度もまた、１μＭ〜２００μＭ、好ましくは、１０μＭ〜２００μＭ、より好ましくは１００μＭ〜２００μＭである。なお、ＩＬ−６、ＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインの測定は、例えば、対応するサイトカインに対する抗体が固定されたＥＬＩＳＡキットなどを用いて実施することができる。
エバスチンおよびカレバスチンの第四の新規な作用として、Ｔ細胞遊走が挙げられる。アレルギー疾患における炎症の発症初期段階には、血管内皮細胞などを透過してＴ細胞が炎症部位に集積し、ここで集積したＴ細胞より上記Ｔｈ−２型サイトカイン、炎症性サイトカインなどが放出されて、炎症が誘導される。エバスチンおよびカレバスチンは、アレルギー免疫反応の初期における血管内皮細胞の透過を介したＴ細胞の遊走を阻害する。ｉｎ ｖｉｔｒｏ系でのＴ細胞遊走を阻害するためのエバスチンの濃度は、１μＭ〜１０μＭ、好ましくは５μＭである。また、ｉｎ ｖｉｔｒｏ系でのＴ細胞遊走を阻害するためのカレバスチンの濃度は、１μＭ〜２００μＭ、好ましくは、１００μＭ〜２００μＭである。なお、Ｔ細胞の遊走は、詳細には実施例５に記載した方法に基づいて行うことができ、簡略に説明すると、血管内皮細胞の層を挟んで一方側にＴ細胞を配置し、所定の時間経過後に他方側へ移動したＴ細胞数をカウントすることにより実施することができる。
上記種々のアレルギー免疫反応を抑制するためのエバスチンおよびカレバスチンの濃度はｉｎ ｖｉｔｒｏで活性を示す濃度であるが、例えば、ｉｎ ｖｉｖｏ（動物などの個体内）での使用濃度やヒト疾患治療目的の濃度は、当業者であれば、上記ｉｎ ｖｉｔｒｏ系における濃度を基準または参考とし、また上述あるいは実施例に示した解析手法などを用いて、その至適濃度を容易に定めることができる。
上述したように、エバスチンおよびカレバスチンはＴ細胞増殖、Ｔｈ−２型サイトカイン産生、Ｔ細胞およびマクロファージからの炎症性サイトカイン産生、Ｔ細胞遊走などのアレルギー免疫反応やそこから生じる炎症反応を抑制するために用いることができる。そのため、ここに挙げたアレルギー免疫反応が関わる疾患の治療薬としてエバスチンおよびカレバスチンを用いることができる。
上記疾患を例示すると、アレルギー性鼻炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、慢性ＧＶＨＤ、Ｔｈ−２型自己免疫疾患（例えばループス腎炎など）などを挙げることができる。
気管支喘息などの疾患では、炎症部位にＴ細胞が遊走・集積し、そこでＴｈ−２型サイトカインを産生するとの所見が得られている。この点、エバスチンおよびカレバスチンは、上述の通り、Ｔ細胞遊走を抑制し、さらにはＴｈ−２型サイトカイン産生をも抑制する。そのため、エバスチンおよびカレバスチンはこうしたＴｈ−２型サイトカインが関与する喘息などの治療用医薬品として応用し得る。
また、アトピー性疾患などのアレルギー性の炎症疾患では、炎症性サイトカインが炎症部位で検出されている。この点、エバスチンおよびカレバスチンは、マクロファージからの炎症性サイトカインおよびＴ細胞からの炎症性サイトカインの双方の産生を抑制し得る。そのため、エバスチンおよびカレバスチンはアトピー性疾患などの炎症性サイトカインが関与するアレルギー性炎症疾患の治療薬として有効に応用し得る。さらに、慢性関節リウマチや炎症性腸疾患のクローン病などはＴＮＦ−αやＩＬ−６の抗体療法が有効とされていることから、これら抗体療法に代えてあるいは抗体療法とともにエバスチンおよびカレバスチンをこれら疾患治療薬として用いてもよい。
また、本発明は、式（２）に記載の化合物またはその塩の新規な作用に関する発見に基づくものであり、式（２）に記載の化合物またはその塩をＨ１ブロッカー阻害薬以外に、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤として用いることに関する。また、本発明は式（２）に記載の化合物またはその塩を投与する工程を含む、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応に関連する疾患の治療方法、または免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤の製造における式（２）に記載の化合物またはその塩の使用に関する。本発明の塩としては好ましくは塩酸塩（塩酸エピナスチン）が挙げられるがこれに限定されない。
式（２）に記載の化合物またはその塩の新規な作用としては、Ｔ細胞の増殖抑制、Ｔｈ−２型サイトカインの産生抑制、Ｔｈ−１型サイトカインの産生抑制などを挙げられる。すなわち、本発明は、アレルギー免疫反応の中心的な役割を果たすＴ細胞により誘導される上記種々のアレルギー免疫反応の抑制剤として式（２）に記載の化合物またはその塩を利用することに関するものである。以下、これら各作用毎に詳細に説明する。
式（２）に記載の化合物またはその塩の第一の新規な作用として、Ｔ細胞の増殖の抑制を挙げることができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴ細胞の増殖を抑制するための濃度は、塩酸エピナスチンの濃度を基準または参考とし、至適濃度を決定できる。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＴ細胞の増殖を抑制するための塩酸エピナスチン濃度は１０μＭ〜２００μＭ、好ましくは、２０μＭ〜２００μＭである。
式（２）に記載の化合物またはその塩の第二の新規な作用としては、Ｔｈ−２型サイトカインの産生を抑制し得る点を挙げることができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴｈ−２型サイトカインの産生を抑制するための濃度は、塩酸エピナスチンの濃度を基準または参考とし、至適濃度を決定できる。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＴｈ−２型サイトカインの産生を抑制するための塩酸エピナスチンの濃度は、例えば１０μＭ〜２００μＭ、好ましくは、２０μＭ〜２００μＭ、より好ましくは１００μＭ〜２００μＭである。
式（２）に記載の化合物またはその塩の第三の新規な作用としては、Ｔｈ−１型サイトカインの産生を抑制し得る点を挙げることができる。Ｔｈ−１型サイトカインは、Ｔヘルパー１型細胞から産生されるサイトカインであり、細胞性免疫に関与し、臓器特異的自己免疫疾患（例えば、自己免疫性甲状腺炎、多発性硬化症など）や、炎症性疾患（クローン病、炎症性腸疾患、関節リウマチなど）の病症に関与している。乾癬もＴｈ−１型サイトカイン病である。このようなサイトカインとしては、例えば、ＩＬ−２、ＩＦＮ−γなどを挙げることができる。このＴｈ−１型サイトカインの同定、定量は、これらに対する抗体が固定化されたＥＬＩＳＡを用いて行うことができる。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＴｈ−１型サイトカインの産生を抑制するための濃度は、塩酸エピナスチンの濃度を基準または参考とし、至適濃度を決定できる。ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＴｈ−１型サイトカインの産生を抑制するための塩酸エピナスチンの濃度は、例えば１０μＭ〜２００μＭ、好ましくは、２０μＭ〜２００μＭ、より好ましくは１００μＭ〜２００μＭである。
上記種々のアレルギー免疫反応を抑制するための式（２）に記載の化合物またはその塩のｉｎ ｖｉｖｏ（動物などの個体内）での使用濃度やヒト疾患治療目的の濃度は、当業者であれば、上記ｉｎ ｖｉｔｒｏ系における濃度を基準または参考とし、また上述あるいは実施例に示した解析手法などを用いて、その至適濃度を容易に定めることができる。
上述したように、式（２）に記載の化合物またはその塩はＴ細胞増殖、Ｔｈ−２型サイトカイン産生、Ｔｈ−１型サイトカイン産生などのアレルギー免疫反応やそこから生じる炎症反応を抑制するために用いることができる。そのため、ここに挙げたアレルギー免疫反応が関わる疾患の治療薬として塩酸エピナスチンを用いることができる。
上記疾患を例示すると、アレルギー性鼻炎、気管支喘息、アトピー性皮膚炎、尋常性乾癬、Ｔｈ−１／Ｔｈ−２サイトカイン不均衡が関与する自己免疫疾患（例えば全身性エリテマトーデス、関節リウマチなど）、クローン病、炎症性腸疾患、多発性硬化症などを挙げることができる。
上記の通りエバスチン、カレバスチンおよび式（２）に記載の化合物またはその塩を有効成分として含有するアレルギー反応の抑制剤には、賦形剤等の添加剤を加えて使用してもよい。エバスチン、カレバスチンおよび式（２）に記載の化合物またはその塩の投与は経口または非経口でもよく、投与剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、注射剤等が挙げられる。例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤等の経口剤として用いる場合には、乳糖、結晶セルロース、デンプン、植物油等の賦形剤、ステアリン酸マグネシウム、タルク等の滑沢剤、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン等の結合剤、カルボキシメチルセルロースカルシウム、低置換ヒドロキシプロピルメチルセルロース等の崩壊剤、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マクロゴール、シリコン樹脂等のコーティング剤、ゼラチン皮膜等の皮膜剤などを必要に応じて加えればよい。これらの製剤化は、当業者において汎用等されている製剤方法を用いて実施することができる。また、エバスチン、カレバスチンおよび式（２）に記載の化合物またはその塩を必要に応じてドラッグデリバリーシステムなどに組込むことも可能である。
発明を実施するための最良の形態
以下、本発明について実施例を用いてより詳細に説明するが、本発明はこの実施例に限定されるものではない。
［実施例１］ 異なる活性化経路を介したＴ細胞増殖における抗Ｈ１ブロッカーの影響
今回、抗Ｈ１ブロッカーとして比較検討したのは、すべて最近国内の臨床現場で使用されている長時間作用型第２世代抗Ｈ１ブロッカーである。すなわち、患者の服薬コンプライアンスの向上を目指し、１日１回投与で効果が認められているエバスチン（商品名エバステル）及びその活性代謝産物のカレバスチン、塩酸エピナスチン（アレジオン）、塩酸セチリジン（ジルテック）である。対照として従来の抗Ｈ１ブロッカーの中でＨ１受容体への選択性と親和性が高いとされるフマル酸ケトチフェン（ザジテン）を加えて計５種類の抗Ｈ１ブロッカーを検討した。
エバスチンの最大血中濃度は０．０３μＭ、エバスチンの代謝活性体カレバスチンの最大血中濃度は０．１μＭであり、塩酸エピナスチン、塩酸セチリジン、フマル酸ケトチフェンは腸管から吸収後も同じ構造で作用し、最大血中濃度はそれぞれ塩酸エピナスチン（０．１μＭ）、塩酸セチリジン（０．５μＭ）、フマル酸ケトチフェン（０．０１μＭ）である。今回、以下の濃度を用いて実験を行った。エバスチン（０．１μＭ〜１０．０μＭ）、カレバスチン（１．０μＭ〜１００．０μＭ）、塩酸エピナスチン（１．０μＭ〜１００．０μＭ）、塩酸セチリジン（５．０μＭ〜５００．０μＭ）、フマル酸ケトチフェン（０．１μＭ〜１０．０μＭ）。
Ｔ細胞増殖における抗Ｈ１ブロッカーの作用を解析するために、３つの異なる共刺激経路を用いた。第一はＰＭＡ、第二は代表的なＴ細胞共刺激分子の一つであるＣＤ２８に対する刺激、第三はＣＤ４＋メモリーＴ細胞上に発現しているＣＤ２６に対する刺激とし、これらと共にＣＤ３に対する刺激も加えた。これらＣＤ３、ＣＤ２６またはＣＤ２８に対する刺激は、それぞれのモノクローナル抗体であるＯＫＴ３、１Ｆ７（前掲Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃら，１９８９）または４Ｂ１０（前掲Ｇｉｍｍｉ ＣＤら，１９９１）を用いて行った。ＯＫＴ３はＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｉｓｓｕｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）より購入し、４Ｂ１０と１Ｆ７は本発明者らの研究室で樹立したｈｙｂｒｉｄｏｍａのマウス腹水から精製した（前掲Ｇｉｍｍｉ ＣＤら，１９９１、前掲Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃら，１９８９）。
具体的には、ヒト末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）は、正常健常者末梢血からフィコールパック（Ｐｈａｒｍａｃｉａ Ｂｉｏｔｅｃｈ Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を用いた比重遠心法で単離した（前掲Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃら，１９８９）。分画していない単核球細胞はＥロゼット陽性（Ｅ＋）法で分離し、これを未刺激Ｔ細胞として利用した。単核球はプラスティックプレートに２４時間、３７℃で接着させ、その後、５ｍＭ Ｌ−ｌｅｕｃｉｎｅ ｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ ＨＣＬ（Ｓｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．）溶液で１時間培養することにより取り除いた。回収した細胞の一部を抗ＣＤ３抗体及び抗ＣＤ１４抗体にて染色し、フローサイトメトリーにて細胞の精製度を確認した。その結果ＣＤ３陽性細胞は９７％以上、またＣＤ１４陽性細胞は１％以下であった。上記の純度で得られた細胞をＴ細胞として用いた。
ＯＫＴ３（０．０５μｇ／ｍｌ）、１Ｆ７（１μｇ／ｍｌ）もしくは４Ｂ１０（２μｇ／ｍｌ）のいずれかのモノクローナル抗体を含有したＰＢＳ（ｐｈｏｓｐｈａｔｅ−ｂｕｆｆｅｒ ｓａｌｉｎｅ）（１００μｌ）は、公知の方法に従い（前掲Ｄａｎｇ ＮＨら，１９９０）、平坦底の９６穴プレート（Ｃｏｓｔｅｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）にトリプリケートでコートし、４℃で一晩インキュベートした。使用前に、これらプレートはＰＢＳ（２００μｌ）で一回洗浄した。上述の高度に精製されたＴ細胞（１ｘ１０^５）は、１０％ヒトＡＢ血清および４段階の異なる濃度のエバスチン（０μＭ、１μＭ、５μＭ、および１０μＭ）を含有したＲＰＭＩ培地（２００μｌ）に再懸濁された。ＰＭＡ刺激を評価するために、ＰＭＡ（５ｎｇ／ｍｌ）を含有した細胞懸濁液をＯＫＴ３でコートされたウェルに注入した。細胞を３７℃、５％ＣＯ_２湿潤条件下で３日間培養した。細胞を各ウェルあたり１μＣｉの^３Ｈ−チミジン（ＩＣＮ Ｒａｄｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）で８時間刺激し、グラスファイバーフィルター（Ｗａｌｌａｃ，Ｔｕｒｋｕ，Ｆｉｎｌａｎｄ）上に回収し、液体シンチレーションカウンター（Ｗａｌｌａｃ）で取り込まれた放射活性を定量した。
図１〜図３に示す通り、ＣＤ３のみに対する刺激ではＴ細胞の増殖を誘導するレベルは低かった。ＣＤ３に対する刺激は、抗ＣＤ２６、抗ＣＤ２８またはＰＭＡなどの更なる第二の刺激と組合せたときに顕著なＴ細胞増殖が観察された。これら条件下で、エバスチンは濃度依存的にＴ細胞増殖を明らかに阻害した。塩酸セチリジン、フマル酸ケトチフェンは、各共刺激条件下、本実施例で用いたいかなる濃度においても、Ｔ細胞増殖をほとんど阻害しなかったが（図３）、エバスチン（１μＭ、５μＭおよび１０μＭ）、カレバスチン（１μＭ、１０μＭおよび１００μＭ）、および塩酸エピナスチン（１μＭ、１０μＭおよび１００μＭ）はいずれの共刺激条件の下でもＴ細胞増殖をほぼ１０％〜５０％阻害した（図１および図２）。なお、抗ＣＤ２６により誘導されたＴ細胞増殖はエバスチンによる阻害に対しわずかに耐性を示す傾向があった。さらに、エバスチン濃度２０μＭ〜５０μＭでは、あるドナーにおいてほぼ１００％抑制する場合もあった。
上記結果がエバスチン、カレバスチン、および塩酸エピナスチンの細胞毒性という副作用によるか否かを、トリパンブルー排除テストにより細胞生存率を評価することにより解析した。Ｔ細胞の生存率は、全実験の各測定点において９５％以上であった。このことからエバスチン、カレバスチン、および塩酸エピナスチンによる阻害効果はエバスチン、カレバスチン、および塩酸エピナスチンの細胞毒性という副作用によるものではないことが示された。
［実施例２］ Ｔｈ−１型サイトカイン産生に対する抗Ｈ１ブロッカーの作用
上記種々の共刺激により誘導されるサイトカイン産生における抗Ｈ１ブロッカーの阻害効果があるか否かを解析するために、上記種々の共刺激により誘導された培養上清中のＴｈ−１型サイトカイン（ＩＬ−２、ＩＦＮ−γなど）測定を試みた。
抗体がコートされたプレートおよびＴ細胞は、ＯＫＴ３濃度が０．５μｇ／ｍｌである点を除いて上記実施例１と同じ方法で調製した。Ｔ細胞によるサイトカイン産生は９６ウェル平坦底プレートを用い、上記Ｔ細胞増殖解析と同様の方法によりトリプリケートで解析した。培養２４時間後、培養上清をＥＬＩＳＡキット（ＩＬ−２：Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ；ＩＦＮ−γ：Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）に供し、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γをそれぞれ定量した。
図４Ａおよび図５Ａに示すように、エバスチンおよびカレバスチンは、とりわけ最高濃度（エバスチンでは１０μＭ、カレバスチンでは１００μＭ）においても、各共刺激条件下でＩＬ−２産生を阻害しなかった。ＩＬ−２に加え、エバスチンおよびカレバスチンは、０．１μＭ〜１０μＭ（エバスチン）および１μＭ〜１００μＭ（エバスチン）のいかなる濃度においても、ＩＦＮ−γ産生に対し明確な影響を与えなかった（図４Ｂおよび図５Ｂ）。一方、塩酸エピナスチンは各共刺激によるＩＬ−２、ＩＦＮ−γ産生をそれぞれ用量依存的に抑制した（図６）。また、塩酸セチリジンおよびフマル酸ケトチフェンも、各共刺激によるＩＬ−２、ＩＦＮ−γ産生には明らかな影響は及ぼさなかった（図７および図８）。すなわち、これら結果に示すとおり、エバスチンおよびカレバスチンはいかなる共刺激条件下においてもＴｈ−１型サイトカイン産生を阻害しないことが示された。
［実施例３］ Ｔｈ−２型サイトカイン産生に対する抗Ｈ１ブロッカーの作用
Ｔｈ−２型ＣＤ４ Ｔ細胞はアレルギー疾患において重要な役割を果たすことから、上記種々の共刺激により誘導されるＴｈ−２型サイトカイン（ＩＬ−４、ＩＬ−５）産生に対するエバスチンの影響を解析した。この解析では、ＩＬ−４、ＩＬ−５を定量するためにＥＬＩＳＡ（ＩＬ−４：Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｃａｍａｒｉｌｌｏ，ＣＡ；ＩＬ−５：Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いた点を除いて、上記実施例２に記載した方法と同様に行った。
図９Ａ、図１０Ａおよび図１１Ａに示した通り、エバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンは各共刺激条件下で濃度依存的にＩＬ−４産生を阻害した。特にエバスチンは、１０μＭにおいて、Ｔ細胞からのＩＬ−４産生をほぼ完全に阻害した。また、図９Ｂ、図１０Ｂおよび図１１Ｂに示した通り、エバスチン、カレバスチンおよび塩酸エピナスチンは各共刺激条件下で濃度依存的にＩＬ−５産生を阻害した。Ｔ細胞からのＩＬ−４産生に対するエバスチンの効果に比べ、ＩＬ−５産生ではエバスチン濃度５μＭで５０％以上阻害されたことから、ＩＬ−５産生はエバスチンに感受性が一層高いことが示された。この結果は５個体の別個のドナーにおいても再現された。さらに、２０μＭの濃度では、すべてのドナーにおいてＩＬ−４およびＩＬ−５産生は１００％抑制された。また、サイトカイン産生の抑制において、エバスチンと比して、カレバスチンは用量が多かった。また、塩酸セチリジンおよびフマル酸ケトチフェンも、各共刺激によるＩＬ−４、ＩＬ−５産生には明らかな影響は及ぼさなかった（図１２および図１３）。
［実施例４］ 炎症性サイトカイン産生に対する抗Ｈ１ブロッカーの作用
上記種々の共刺激経路によるＴ細胞からのＩＬ−６やＴＮＦ−αのような炎症性サイトカインの産生に対する抗Ｈ１ブロッカーの影響を解析した。この解析では、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α測定用のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いた点を除いて、上記実施例２に記載した方法と同様に行った。
図１４および図１５に示すように、Ｔ細胞からの炎症性サイトカイン、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αは、各共刺激条件下で、エバスチンおよびカレバスチンにより濃度依存的に阻害された。エバスチンにおいては、１０μＭ〜２０μＭの濃度では１００％抑制された。そして、この結果は３個体の異なるドナーにおいても再現された。一方、塩酸エピナスチンについては各共刺激下で、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α産生には明らかな抑制作用は認められなかった（図１６）。また、塩酸セチリジンおよびフマル酸ケトチフェンも、各共刺激によるＩＬ−６、ＴＮＦ−α産生には明らかな影響は及ぼさなかった（図１７および図１８）。
［実施例５］ 内皮細胞を介した（ｔｒａｎｓｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ）Ｔ細胞遊走に対する抗Ｈ１ブロッカーの影響
ｉｎ ｖｉｖｏにおけるＴ細胞浸潤に対するエバスチンの作用を確認するために、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいてＰＨＡ刺激Ｔ細胞の血管内皮細胞を介した遊走を解析した。休止期新鮮Ｔ細胞は、ほとんどは内皮細胞の単一層を透過して遊走をすることはないことから、遊走解析を行うためにＴ細胞をＰＨＡ（１０μｇ／ｍｌ）を用いて活性化した。
具体的には、内皮細胞を介した遊走解析は公知の方法（Ｉｗａｔａ Ｓ，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ Ｎ，Ｍｕｎａｋａｔａ Ｙ，Ｉｋｕｓｈｉｍａ Ｈ，Ｌｅｅ ＪＦ，Ｈｏｓｏｎｏ Ｏ，Ｓｃｈｌｏｓｓｍａｎ ＳＦ ａｎｄ Ｍｉｒｉｍｏｔｏ Ｃ．ＣＤ２６／ＤＰＰＩＶ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌｌｙ ｒｅｇｕｌａｔｅｓ ｔｈｅ ｃｈｅｍｏｔａｘｉｓ ｏｆ Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ｔｏｗａｒｄ ＲＡＮＴＥＳ．Ｐｏｓｓｉｂｌｅ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｍｉｔｃｈ ｆｒｏｍ ｉｎｎａｔｅ ｔｏ ａｃｑｕｉｒｅｄ ｉｍｍｕｎｅ ｒｅｓｐｏｎｓｅ．Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１：４１７−４２６，１９９９）を若干修正して実施した。ヒト内皮細胞株ＥＣＶ３０４はアメリカンティッシュコレクション（ＡＴＣＣ；Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）から入手し、ポアサイズ３．０μｍのＴｒａｎｓｗｅｌｌ ｃｅｌｌ ｃｕｌｔｕｒｅ ｉｎｓｅｒｔｓ（Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）上で４８時間培養した。細胞培養用２４穴プラスチックプレート（ＦＡＬＣＯＮ）に設置し、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌアッセイメディウム（ＲＰＭＩ１６４０培地、ＢＳＡ ０．６％、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ Ｇ／Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ １％，ＨＥＰＥＳ ５０ｍＭ）を用いて各濃度の抗Ｈ１ブロッカーと混合後、ＰＨＡ刺激Ｔ細胞（１×１０^７個／ｍｌ）２００μｌをｕｐｐｅｒ Ｃｈａｍｂｅｒに、またｌｏｗｅｒ ｃｈａｍｂｅｒにアッセイメディウム６００μｌを入れて３７℃、５％ＣＯ_２下で８時間遊走させた。回収後、フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ Ｃａｌｉｂｕｒ，Ｎｉｐｐｏｎ Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｔｏｋｙｏ，Ｊａｐａｎ）にて細胞数を１分間カウントした。
図１９Ａに示すように、Ｔ細胞遊走はエバスチン存在下では濃度依存的に著しく阻害された。５μＭにおいて、Ｔ細胞遊走の阻害がプラトーレベルとなったことは注目すべきである。また、カレバスチン存在下でも、Ｔ細胞遊走は濃度依存的に抑制された（図１９Ｂ）。逆に、４８時間、種々のエバスチン濃度でＥＣＶを予め処理し、その後、洗浄し、ＰＨＡ刺激Ｔ細胞に暴露したところ、エバスチンは実験に用いた最高濃度（１０μＭ）でさえ、ＥＣＶを介したＴ細胞の遊走に影響を与えなかった（図示せず）。すなわち、Ｔ細胞遊走解析時にエバスチンが存在することにより、Ｔ細胞遊走が抑制されることが示された。一方塩酸エピナスチン、塩酸セチリジン、フマル酸ケトチフェンはＰＨＡ刺激Ｔ細胞の遊走には明らかな影響を与えなかった（図２０）。
エバスチンは用量依存性にＰＨＡ刺激Ｔ細胞遊走能を抑制したことから、エバスチンによるＴ細胞遊走抑制の作用機序を解明するために、次にＰＨＡ刺激Ｔ細胞の内皮細胞への接着を解析した。ＰＨＡ刺激Ｔ細胞を蛍光色素３’−Ｏ−Ａｃｅｔｙｌ−２’，７’−ｂｉｓ（ｃａｒｂｏｘｙｅｔｈｙｌ）−４−ｏｒ５−ｃａｒｂｏｘｙｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ，ｄｉａｃｅｔｏｘｙｍｅｔｈｙｌ ｅｓｔｅｒ（ＢＥＣＥＦ−ＡＭ）と３０分反応させた後、抗Ｈ１ブロッカーであるエバスチン（１．０μＭ〜５．０μＭ）で処置し、さらに内皮細胞が付着した培養皿に撒いた。６時間後、ＰＢＳで培養皿を３回洗浄してから、蛍光顕微鏡で観察した結果、エバスチンは用量依存性にＰＨＡ刺激Ｔ細胞と内皮細胞との接着を抑制した（図２１）。
さらにＴ細胞上のＣＤ１１ａ、ＣＤ２９、ＣＤ４４ならびにＣＤ４７のような種々の接着分子、ＣＤ２５ならびにＣＤ２６のような活性化抗原、および内皮細胞膜上の接着分子のリガンドであるＩＣＡＭ−１ならびにＶＣＡＭ−１に対するモノクローナル抗体を用いて、細胞表面の染色試験を行った。
ＰＨＡ刺激Ｔ細胞、内皮細胞をエバスチン（１．０μＭ〜５．０μＭ）で３７℃、５％ＣＯ_２下で６時間培養後、様々な細胞表面分子（ＣＤ３，ＣＤ１１ａ，ＣＤ２５，ＣＤ２６，ＣＤ２９，ＣＤ４４，ＣＤ４７，ＩＣＡＭ−１，ＶＣＡＭ−１）に対する抗体を細胞と４℃・３０分間反応させた。２％ＦＢＳと０．０２％ｓｏｄｉｕｍ ａｚｉｄｅ（Ｓｉｇｍａ）を加えたＰＢＳで３回洗い、さらにＦＩＴＣ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（Ｓｉｇｍａ）を４℃・３０分間反応させ、ＰＢＳでさらに３回洗った後、フローサイトメトリーにて細胞蛍光強度を測定した。Ｔ細胞表面分子に対する抗体は抗ＣＤ３抗体（ＯＫＴ３）、抗ＣＤ１１ａ抗体（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ，ＮＪ，ＵＳＡ）、抗ＣＤ２５抗体（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）、抗ＣＤ２６抗体（１Ｆ７）、抗ＣＤ２９抗体（４Ｂ４）、抗ＣＤ４４抗体（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）と抗ＣＤ４７抗体（ＢＤ ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ）であり、内皮細胞表面の接着分子リガンドの同定は抗ＩＣＡＭ−１抗体、抗ＶＣＡＭ−１抗体を用いた。この結果を表１および表２に示す。

エバスチンで８時間処理後、試験した全てのＴ細胞上の接着分子および活性化抗原のうち、Ｔ細胞上のＣＤ２６、ＣＤ２９、およびＣＤ４７の発現が著しく影響を受けた（表１）。５μＭエバスチン濃度では、ＣＤ２６、ＣＤ２９およびＣＤ４７の発現レベルはそれぞれ約１４％、２１％および３１％減少した。他方、ＣＤ３、ＣＤ１１ａ、ＣＤ２５、ならびにＣＤ４４の発現レベルは全く影響がなかった（表１）。また、エバスチンは内皮細胞膜上の接着分子のリガンドであるＩＣＡＭ−１，ＶＣＡＭ−１の蛍光強度には影響を与えなかった（表２）。ＣＤ２６、ＣＤ２９、ならびにＣＤ４７は細胞遊走に関与することが報告されていることから、これら結果はＴ細胞遊走に対するエバスチンの阻害作用を部分的に説明し得る。
［実施例６］ マクロファージによる炎症性サイトカイン産生に対する抗Ｈ１ブロッカーの作用
マクロファージは、感染に対する宿主防御機構および免疫・炎症反応の局所調節における初期の役割を果たすことから（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＲＢＪｒ．Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．３１８：７４７−７５２，１９８８）、マクロファージからのＩＬ−６やＴＨＦ−αなどの炎症性サイトカインの産生におけるエバスチンの影響を解析した。
詳細には、マクロファージからＩＬ−６およびＴＮＦ−αを産生させるために、末梢血単核球をプラスティックプレートに接着させることによりマクロファージを単離し、回収した。このマクロファージ（１ｘ１０^６／ｍｌ）を１０％ ＦＣＳ含有ＲＰＭＩに懸濁し、ＬＰＳ（１μｇ／ｍｌ）で刺激した。３７℃、５％ＣＯ_２下で８時間培養後、培養上清を回収し、ＩＬ−６およびＴＮＦ−α測定用のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を用いてＩＬ−６およびＴＮＦ−αの産生量を定量した。
図２２および図２３に示すように、エバスチンおよびカレバスチンはＬＰＳ刺激によるマクロファージからのＩＬ−６、ＴＮＦ−α産生を用量依存的に抑制した。特にエバスチン濃度１μＭでは上記サイトカインの産生を５０％以上抑制し、１０μＭでは上記サイトカイン産生をほぼ完全に阻害した（図２２）。このように、エバスチンはマクロファージからのＩＬ−６、ＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカインの産生も阻害することが示された。一方塩酸エピナスチン、塩酸セチリジン、フマル酸ケトチフェンともにＬＰＳ刺激によるマクロファージのＩＬ−６、ＴＮＦ−α産生の抑制は認められなかった（図２４〜図２６）。
［実施例７］ エバスチンによるＰＨＡ刺激Ｔ細胞内Ｃａｓ−Ｌチロシン燐酸化の抑制
エバスチンはＴ細胞増殖に続く、サイトカイン産生、細胞遊走、接着等のＴ細胞機能を抑制し、またβ１インテグリンであるＣＤ２９の発現を抑制した。そこでエバスチンのＣＤ２９インテグリン関連シグナル伝達分子のチロシン燐酸化への影響を検討した。エバスチン（０．１μＭ〜１．０μＭ）で処理したＰＨＡ刺激Ｔ細胞はＩｓｃｏｖｅ’ｓ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ｍｅｄｉｕｍ（ＩＭＤＭ）で３回洗浄後、ｌｙｓｉｓ ｂｕｆｆｅｒ（１％ ＮＰ４０，１４０ｍＭ ＮａＣｌ，５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，５ｍＭ ＥＤＴＡ，５ｍＭ ＮａＦ，１μｇ／ｍｌ ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，１μｇ／ｍｌ ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，１μｇ／ｍｌ ｐｅｐｓｔａｔｉｎ Ａ，１ｍＭ ＰＭＳＦ，１ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｖａｎａｄａｔｅ，ｐＨ７．５）に４℃・３０分間静置することにより可溶化した。細胞溶解液を１５０００ｒｐｍ・４℃・３０分間遠心後、上清から細胞抽出液を回収した。チロシン燐酸化は抗燐酸化チロシン抗体を用いた細胞抽出液のウェスタンブロッティング法で解析した。細胞抽出液の解析によって得られたバンドの中で、β１インテグリン下流のシグナル伝達分子であるＣａｓ−ＬとＣａｓ−Ｌの燐酸化に関与するＦＡＫについて、免疫沈降とウエスタンブロット法により解析した。上記細胞抽出液に抗Ｃａｓ−Ｌ抗体或いは抗ＦＡＫ抗体を添加し４℃・一晩反応させた後、プロテインＡビーズを加え、４℃・４時間反応させた。３０００ｒｐｍ・４℃・５分間遠心し、ビーズをｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒ（０．５％ ＮＰ４０，１４０ｍＭ ＮａＣｌ，５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，５ｍＭ ＥＤＴＡ，５ｍＭ ＮａＦ，１μｇ／ｍｌ ａｐｒｏｔｉｎｉｎ，１μｇ／ｍｌ ｌｅｕｐｅｐｔｉｎ，１μｇ／ｍｌ ｐｅｐｓｔａｔｉｎ Ａ，１ｍＭ ＰＭＳＦ，１ｍＭ ｓｏｄｉｕｍ ｖａｎａｄａｔｅ，ｐＨ ７．５）で洗滌した。この操作を３回繰り返した後、ｗａｓｈ ｂｕｆｆｅｒを除いたビーズにｓａｍｐｌｅ ｂｕｆｆｅｒ（１％ ＳＤＳ）を添加し９５℃・５分間反応させ、遠心後、上清をサンプルとした。８％アクリルアミドゲルを作製後、サンプルを１００Ｖ・１２０分間、泳動バッファ中（１０％ＳＤＳ，２５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，１．９２Ｍ ｇｌｙｃｉｎｅ）で電気泳動した。泳動後のゲルをトランスファーバッファ（２５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，１．９２Ｍ ｇｌｙｃｉｎｅ，２０％ｍｅｔａｎｏｌ）を用いてＰＶＤＦメンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に１００Ｖ・８０分間・４℃で、トランスファーを行った。トランスファー後のメンブレンを５％ ｍｉｌｋ添加ＴＢＳ−Ｔ（０．０５％ Ｔｗｅｅｎ２０，５０ｍＭ Ｔｒｉｓ，１５０ｍＭ ＮａＣｌ，ｐＨ７．５）で６０分間ブロッキング後、一次抗体（１μｇ／ｍｌ）をＴＢＳ−Ｔ中で６０分間反応させた。メンブレンをＴＢＳ−Ｔで洗浄後、二次抗体としてＨＲＰ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体（１：１００００）を０．５％ ｍｉｌｋ添加ＴＢＳ−Ｔ中で６０分間反応させた。メンブレンをＴＢＳ−Ｔで洗浄後、ＥＣＬ溶液で反応させ、オートラジオグラフィーにより、フィルムに感光させた。
その結果、エバスチンはＰＨＡ刺激Ｔ細胞でのＦＡＫのチロシン燐酸化を僅かに抑制し、Ｃａｓ−Ｌのチロシン燐酸化を用量依存性に抑制した（図２７）。よって、細胞遊走抑制の一つのメカニズムとして、エバスチンはＣａｓ−Ｌのチロシン燐酸化の抑制を介して、細胞遊走を抑制したと考えられた。
以上の通り、エバスチンはＴｈ−２型サイトカインＩＬ−４およびＩＬ−５の産生、さらにはＴ細胞からの炎症性サイトカインＩＬ−６およびＴＮＦ−αを産生を阻害した。この阻害は特異性があり、Ｔｈ−１型サイトカインＩＬ−２およびＩＦＮ−γの産生には影響を与えなかった。また、エバスチンはＴ細胞遊走、さらにはマクロファージからの炎症性サイトカインＩＬ−６およびＴＮＦ−αの産生をも抑制した。
エバスチンは眠気を誘導しない新規な抗ＨＩブロッカーであり、この作用を利用して臨床的にアレルギー性鼻炎、蕁麻疹など（Ｏｈｔａｎｉ Ｈ，Ｓａｔｏ Ｈ，Ｉｇａ Ｔ，Ｋｏｔａｋｉ Ｈ ａｎｄ Ｓａｗａｄａ Ｙ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃ−ｐｈａｒｍａｃｏｄｙｎａｍｉｃ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｔｈｅ ａｒｒｈｙｔｈｍｏｇｅｎｉｃ ｐｏｔｅｎｃｙ ｏｆ ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｔｉａｌｌｅｒｇｉｃ ａｇｅｎｔ，ｅｂａｓｔｉｎｅ，ｉｎ ｒａｔｓ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｐｏｓｅ ２０：１０１−１０６，１９９９、Ｍａｔｓｕｄａ Ｍ，Ｓａｋａｓｈｉｔａ Ｍ，Ｍｉｚｕｋｉ Ｙ，Ｙａｍａｇｕｃｈｉ Ｔ，Ｆｕｊｉｉ Ｔ，Ｓｅｋｉｎｅ Ｙ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ ｏｆ ｔｈｅ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ Ｈ１−ｒｅｃｅｐｔｏｒ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ ｅｂａｓｔｉｎｅ ａｎｄ ｉｔｓ ａｃｔｉｖｅ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ ｃａｒｅｂａｓｔｉｎｅ ｉｎ ｒａｔｓ，ｑｕｉｎｅａ ｐｉｇｓ，ｄｏｇｓ ａｎｄ ｍｏｎｋｅｙｓ．Ａｒｚｈｅｉｍ Ｆｏｒｓｃｈ Ｄｒｕｇ．Ｒｅｓ．４４：５５−５９，１９９４、前掲Ｓｔｏｒｍｓ ＷＷ，１９６６、前掲Ｋａｌｉｓ Ｂ，１９９６）に用いられている。ヒスタミンとヒスタミンＨＩ受容体との相互作用により、一連の生物学的な作用、例えば重要な気管支平滑筋の収縮、末梢神経末端の血管透過性刺激の上昇による掻痒症や痛みの誘導、および迷走神経末端の刺激から反射的に気管支狭窄や咳が誘導される（Ｒｉｍｍｅｒ ＳＪ，Ｃｈｕｒｃｈ ＭＫ．Ｔｈｅ ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ ｏｆ ａｃｔｉｏｎ ｏｆ ｈｉｓｔａｍｉｎｅ Ｈ１−ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ．Ｃｌｉｎ Ｅｘｐ Ａｌｌｅｇｙ．２０ Ｓｕｐｐｌ ２：３−１７，１９９０）。
エバスチンの効果は主に好塩基球や肥満細胞からのヒスタミンの放出阻害によると報告されている（前掲Ｒｉｍｍｅｒ ＳＪら１９９０、Ｂｉｒｅｎｄｉａ Ｅ．Ｅｂａｓｔｉｎｅ ｉｎ ｃｏｎｔｅｘｔ ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．Ｄｒｕｇｓ ５２ Ｓｕｐｐｌ １：１−７，１９９６）。さらにエバスチンは、ｉｎ ｖｉｔｒｏでの抗原投与後におけるヒト鼻茸細胞からの抗ＩｇＥ誘導プロスタグランジンＤ２やロイコトリエンＣ４／Ｄ４の放出遮断を示すことが報告されている（Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ａ，Ｍｉｃｈｅｌ Ｆ−Ｂ，Ｂｒｅｍａｒｄ−Ｑｕｒｙ Ｃ，Ｃｒａｍｐｅｔｔｅ Ｌ ａｎｄ Ｂｏｕｓｑｕｅｔ Ｊ．Ｏｖｅｒｖｉｅｗ ｏｆ ａｌｌｅｒｇｉｃ ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｅｂａｓｔｉｎｅ ｈａｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ａｎ ａｎｔｉｈｉｓｔａｍｉｃ ｅｆｆｅｃｔ．Ｄｒｕｇｓ ５２ Ｓｕｐｐｌ １：１５−１９，１９９６）。このように、エバスチンはヒスタミンＨ１受容体の遮断効果以上の作用を有し、本明細書において有効な新規な作用が開示された。
過敏反応において、ヘルパーＣＤ４ Ｔ細胞はアレルギー性炎症反応を誘引する重要な役割を果たす。すなわち、Ｔｈ−２型細胞からのサイトカイン産生は過敏な炎症反応を発症させ、維持するために不可欠である（前掲Ｋａｐｓｅｎｂｅｒｇ Ｍら，１９９１、前掲Ｒｏｍａｇｎａｎｉ Ｓ．，１９９４）。活性化Ｔ細胞の炎症部位への輸送は、多数の分子、とりわけ接着分子およびケモカインにより厳格に制御されている（Ｂｕｔｃｈｅｒ ＥＣ ａｎｄ Ｐｉｃｋｅｒ ＬＪ．Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｈｏｍｉｎｇ ａｎｄ ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ ２７２：６０−６６，１９９６）。ＣＤ４＋エフェクターＴ細胞のサブセットの炎症部位への選択的なリクルートは異なる病理学的な症状を発症させることに寄与すると考えられている。ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１３を産生する活性化Ｔｈ−２型ＣＤ４ Ｔ細胞はアレルギー性の炎症部位、気管支肺胞の洗浄において、あるいはアトピー性および非アトピー性喘息患者の気管支生検において検出され、近年では喘息の病理生理学における作用機序の中心に位置付けられている（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ ＤＳ ｅｔ ａｌ．Ｐｒｅｄｏｍｉｎａｎｔ Ｔｈ２−ｔｙｐｅ ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ Ｔ−ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ａｓｔｈｍａ．Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２６：２９８−３０４，１９９２、Ｙｉｎｇ Ｓ ｅｔ ａｌ．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｏｆ ＩＬ−４ ａｎｄ ＩＬ−５ ｍＲＮＡ ａｎｄ ｐｒｏｔｅｉｎ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｂｙ ＣＤ４＋ａｎｄ ＣＤ８＋Ｔ ｃｅｌｌｓ，ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｓ ａｎｄ ｍａｓｔ ｃｅｌｌｓ ｉｎ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｂｉｏｐｓｉｅｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ ｆｒｏｍ ａｔｏｐｉｃ ａｎｄ ｎｏｎａｔｏｐｉｃ（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ）ａｓｔｈｍａｔｉｃｓ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５８：３５３９−３５４４，１９９７）。そのため、Ｔｈ−２型ＣＤ４ Ｔ細胞およびこれらサイトカインは重要な治療の標的とされている。この点、エバスチンは本実施例より種々の共刺激条件下おいてもＴ細胞からのＩＬ−４やＩＬ−５などのＴｈ−２型サイトカインの産生を濃度依存的に阻害し得ることが明らかとなった。
一方で、エバスチンはＩＬ−２やＩＦＮ−γのようなＴｈ−１型サイトカインの産生には影響を与えない。また、エバスチンと化学的な構造が類似しているヒスタミンＨ１受容体アンタゴニストであるテルフェナジンも同様の作用を有することが報告されているが（Ｍｕｎａｋａｔａ Ｙ，Ｕｍｅｚａｗａ Ｙ，Ｉｗａｔａ Ｓ，Ｄｏｎｇ Ｒ−Ｐ，Ｙｏｓｈｉｄａ Ｓ，Ｉｓｈｉｉ Ｔ ａｎｄ Ｍｏｒｉｍｏｔｏ Ｃ．Ｓｐｅｃｉｆｉｃ ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈ２−ｔｙｐｅ ｃｙｔｏｋｉｎｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｆｒｏｍ ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ Ｔ ｃｅｌｌｓ ｂｙ ｔｅｒｆｅｎａｄｉｎｅ ｉｎ ｖｉｔｒｏ．Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ａｌｌｅｇｙ．２９：１２８１−１２８６，１９９９）、テルフェナジンは時にＱＴ延長を、稀に致死的な急性の心室性不整脈を伴うことから（Ｗｏｏｌｓｅｙ ＲＬ．Ｃａｒｄｉａｃ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｔｉｈｉｓｔａｍｉｎｅｓ．Ａｎｎ Ｒｅｖ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｏｘｉｃｏｌ．３６：２３３−２５２，１９９６）、現在では欧米、日本を含め使用されていない。一方、エバスチンは、このような重篤な心臓血管性の副作用を伴わず、治療時の用量よりも５倍用量を増やしてもＱＴインターバルに影響を与えることはないとの報告がなされている（前掲Ｏｈｔａｎｉ Ｈら（１９９９）、Ｇｉｌｌｅｎ ＭＳ，Ｍｉｌｌｅｒ Ｂ，Ｃｈａｉｋｉｎ Ｐ ａｎｄ Ｍｏｒｇａｎｒｏｔｈ Ｊ．Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ｓｕｐｒａｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｄｏｓｅｓ ｏｆ ｅｂａｓｔｉｎｅ ａｎｄ ｔｅｒｆｅｎａｄｉｎｅ ｏｎ ｔｈｅ ＱＴ ｉｎｔｅｒｖａｌ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ Ｐｈａｒｍ．５２：２０１−２０４，２００１，Ｒｏｂｅｒｔｓ ＤＪ．Ａｓｓｅｓｓｉｎｇ ｔｈｅ ｃａｒｄｉａｃ ｓａｆｅｔｙ ｏｆ ｅｂａｓｔｉｎｅ．Ｅｐｉｌｏｇｕｅ．Ｄｒｕｇ Ｓａｆ．２１（Ｓｕｐｐｌ Ｉ）：８９−９２，１９９９）。
テルフェナジンおよび他のＨ１受容体アンタゴニストは好酸球および好中球ケモタキシスを阻害し、また、上皮細胞株上のＩＣＡＭ分子の発現を低減させるとの報告がなされているが（Ｎｅｇｒｏ−Ａｌｖａｒｅｚ ＪＭ，Ｆｕｎｅｓ Ｅ，Ｇａｒｃｉａ Ｃａｎｏｖａｓ Ａ，Ｈｅｒｈａｍｄｅｚ Ｊ，Ｇａｒｃｉａ−Ｓｅｌｌｅｓ ＦＪ，Ｐａｇａｎ ＪＡ ａｎｄ Ｌｏｐｅｚ−Ｓａｎｃｈｅｚ ＪＤ．Ａｎｔｉａｌｌｅｒｇｉｃ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ａｎｔｉｈｉｓｔａｍｉｎｅｓ．Ａｌｌｅｒｇｏｌ Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．２４：１７７−１８３，１９９６）、これらＨ１アンタゴニストがＴ細胞遊走を阻害するか否かは明らかにされていない。一方、上記実施例に示した通り、エバスチンはＴ細胞の遊走を濃度依存的に阻害することが示されている。このＴ細胞遊走能の抑制は、エバスチンが接着関連のＴ細胞表面分子であるＣＤ２６，ＣＤ２９，ＣＤ４７の発現を抑制することによって、内皮細胞への接着を抑制したのみならず、β１インテグリンの下流シグナルであるＣａｓ−Ｌのチロシン燐酸化の抑制もその一つのメカニズムであることが、本発明者らの研究結果によって示唆された。β１インテグリンは、チロシン燐酸化による様々な標的分子の活性化を介して多様なシグナルを送り、その生物学的機能を発揮している。β１インテグリンの下流に位置するＣａｓ−Ｌのチロシン燐酸化が、Ｔ細胞の活性化に続く増殖・サイトカイン産生及び細胞接着・細胞遊走能の発現において重要な役割を果たしているとされている（前掲Ｏｈａｓｈｉ Ｙ．Ｊ Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ １９９５、Ｋａｍｉｇｕｃｈｉ Ｋ，Ｊ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９９）ことから、エバスチンによるＣａｓ−Ｌチロシン燐酸化の抑制はＴ細胞遊走抑制の機序の一つであることが強く示唆された。
エバスチンはヒトマクロファージおよびＴ細胞からのＩＬ−６およびＴＮＦ−αなどの炎症性サイトカイン産生をも阻害した。テルフェナジンはヒト好塩基球からのＩＬ−４およびＩＬ−１３の放出を阻害したことや（Ｇｉｂｂｓ ＢＦ，Ｖｏｌｌｒａｔｈ ＩＢ，Ａｌｂｒｅｃｈｔ Ｃ，Ａｍｏｎ Ｕ，Ｗｏｌｆｆ ＨＨ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−４ ａｎｄ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１３ ｒｅｌｅａｓｅ ｆｒｏｍ ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌｌｙ ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｈｕｍａｎ ｂａｓｏｐｈｉｌｓ ｄｕｅ ｔｏ ｔｈｅ ａｃｔｉｏｎｓ ｏｆ ａｎｔｉ−ａｌｌｅｒｇｉｃ ｄｒｕｇｓ．Ｎａｕｎｙｎ Ｓｃｈｍｉｅｄｅｂｅｒｇｓ Ａｔｃｈ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１９９８ ３５７：５７３−５７８）、エバスチンが鼻茸細胞からのＴＮＦ−α、ＩＬ−８およびＧＭ−ＣＳＦを阻害することは報告されているが（前掲Ｃａｍｐｂｅｌｌ Ａら，１９９６）、上記のようなマクロファージやＴ細胞からの炎症性サイトカインの産生抑制は報告されていない。
マクロファージは気管において優勢な細胞であり、健常人および喘息患者の双方の肺実質において最も豊富な細胞の一つであり（前掲Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＲＢＪｒ．，１９８８）、最も多くの機能因子を提供している（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ ＲＢ Ｊｒ．Ｃｕｒｒｅｎｔ ｃｏｎｃｅｐｔｓ：ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．Ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ ａｎｄ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｎ Ｅｎｇｌ Ｊ Ｍｅｄ １９８８；３１８：７４７．）。マクロファージは広範囲な炎症性因子、例えば、酵素、サイトカインおよびケモカインを合成し、放出する（Ｎａｔｈａｎ ＣＦ．Ｓｅｃｒｅｔｏｒｙ ｐｒｏｄｕｃｔｓ ｏｆ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｎｖｅｓｔ １９８７；７９：３１９．）。肺のマクロファージにより産生される主なケモカインはＩＬ−６およびＴＮＦ−αである（Ｍａｒｏｎｅ Ｇ，Ｇｅｎｔｉｌｅ Ｍ，Ｐｅｔｒａｒｏｌｉ Ａ，Ｄｅ Ｒｏｓａ Ｎ，Ｔｒｉｇｇｉａｎｉ Ｍ．Ｈｉｓｔａｍｉｎｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｌｕｎｇ ｍａｃｒｏｐｈａｇｅｓ．Ｉｎｔ Ａｒｃｈ Ａｌｌｅｒｇｙ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１；１２４：２４９．、Ａｍｒａｎｉ Ｙ，Ｃｈｅｎ Ｈ，Ｐａｎｅｔｔｉｅｒｉ ＲＡ Ｊｒ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ ｉｎ ａｉｒｗａｙ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ：ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｔｈａｔ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｈｙｐｅｒ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｉｎ ａｓｔｈｍａ Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｓ ２０００；１：４９．）。
近年の研究から、腫瘍壊死因子（ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ；ＴＮＦ）−αが喘息患者の気道にかなりの量で産生されていることから、気道の平滑筋（ａｉｒｗａｙ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ；ＡＳＭ）の状態を直接変化させることにより気管支の過敏反応の発症に関与している可能性が示唆されている（Ａｍｒａｎｉ Ｙ，Ｃｈｅｎ Ｈ，Ｐａｎｅｔｔｉｅｒｉ ＲＡ Ｊｒ．Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｕｍｏｒ ｎｅｃｒｏｓｉｓ ｆａｃｔｏｒ ｒｅｃｅｐｔｏｒ １ ｉｎ ａｉｒｗａｙ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ：ａ ｐｏｔｅｎｔｉａｌ ｐａｔｈｗａｙ ｔｈａｔ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｂｒｏｎｃｈｉａｌ ｈｙｐｅｒ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅｎｅｓｓ ｉｎ ａｓｔｈｍａ Ｒｅｓｐｉｒ Ｒｅｓ ２０００；１：４９．）。
また、ＩＬ−６は炎症疾患で放出される多数の機能を持つサイトカインである。このサイトカインはヒト肥満細胞の分化・成熟、さらにはＩｇＥ合成の制御にも関与している（Ｈｉｒａｎｏ Ｔ．Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ ６ ａｎｄ ｉｔｓ ｒｅｃｅｐｔｏｒ：ｔｅｎ ｙｅａｒｓ ｌａｔｅｒ．Ｉｎｔ Ｒｅｖ Ｉｍｍｕｎｏｌ １９９８；１６：２４９．）。ＩＬ−６レベルの上昇は血液、喘息患者の気管支処置後の気管支肺胞の洗浄、気管支生検において検出されており、このことはＩＬ−６発現の上昇を示唆している（Ｖｉｒｃｈｏｗ ＪＣ Ｊｒ，Ｗａｌｋｅｒ Ｃ，Ｈａｆｎｅｒ Ｄ，Ｋｏｒｔｓｉｋ Ｃ，Ｗｅｒｎｅｒ Ｐ，Ｍａｔｔｈｙｓ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｔ ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ ｉｎ ｂｒｏｎｃｈｏａｌｖｅｏｌａｒ ｌａｖａｇｅ ｆｌｕｉｄ ａｆｔｅｒ ｓｅｇｍｅｎｔａｌ ａｌｌｅｒｇｅｎ ｐｒｏｖｏｃａｔｉｏｎ ｉｎ ａｔｏｐｉｃ ａｓｔｈｍａ．Ａｍ Ｊ Ｒｅｓｐｉｒ Ｃｒｉｔ Ｃａｒｅ Ｍｅｄ １９９５；１５１：９６０．）。
近年、自己免疫疾患におけるサイトカインネットワークとその異常が注目されつつある。自己免疫疾患の発症要因の一つとして、自己抗原或いは外来抗原の侵襲によるＴｈ１／Ｔｈ２バランスの不均衡の誘導が考えられており、自己免疫疾患を大まかにＴｈ１依存型，Ｔｈ２依存型および両者が関与したものに分類されている（太田 明夫，西村 孝司．自己免疫疾患におけるサイトカインネットワークとその異常．最新医学１９９８；５３（６）：１３３８．）。代表的な疾患として、ＳＬＥはＴｈ２サイトカイン優位であり、慢性関節リウマチがＴｈ１，Ｔｈ２両方のサイトカインが関与するとされている（前掲 太田 明夫，最新医学１９９８）。
上記種々の所見および本実施例より、エバスチンによるＴ細胞およびマクロファージからのＩＬ−６およびＴＮＦ−α産生の抑制は、喘息の治療上の重要なターゲットになることを示唆している。
また、塩酸エピナスチンの抗アレルギー作用は、ヒスタミン拮抗作用以外にＴ細胞からのＴｈ１，Ｔｈ２型サイトカインの産生抑制も関与することが考えられた。
エバスチンは、抗ヒスタミン作用以外にも、Ｔ細胞およびマクロファージに対して新規な機能的な作用を与えることが示された。エバスチンはＴ細胞によるＴｈ−２型サイトカイン産生、Ｔ細胞遊走さらにはＴ細胞およびマクロファージからの炎症性サイトカイン（ＩＬ−６やＴＮＦ−αなど）を阻害したことから、エバスチンは、喘息、アトピー性皮膚炎、ならびにＴｈ−２型自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、慢性ＧＶＨＤ、クローン病などの炎症性疾患などのＴ細胞が起因したアレルギー免疫疾患に対する本質的な治療薬となり得る。さらに、慢性関節リウマチでは、炎症部位でＴ細胞やマクロファージがＴＮＦ−αやＩＬ−６などの炎症性サイトカインを産生することや、Ｔ細胞の炎症部位への遊走が病気の引き金になることから、この病気への治療応用が考えられる。特に、最近、抗ＴＮＦ−α治療は関節リウマチやクローン病に有効であるという報告（Ｔａｙｌｏｒ ＰＣ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ ＲＯ，Ｍａｉｎｉ ＲＮ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ ｆｏｒ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｃｕｒｒ Ｏｐｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ ２００１；１３：６１１．、Ｋａｍ ＬＹ，Ｔａｒｇａｎ ＳＲ．ＴＮＦ−ａｌｐｈａ ａｎｔａｇｏｎｉｓｔｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｃｒｏｈｎ’ｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｅｘｐｅｒｔ Ｏｐｉｎ Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ ２０００；１：６１５．）や、ＩＬ−６受容体抗体治療も関節リウマチの治療に効果があるという報告（Ｃｈｏｙ ＥＨ，Ｉｓｅｎｂｅｒｇ ＤＡ，Ｇａｒｒｏｏｄ Ｔ，Ｆａｒｒｏｗ Ｓ，Ｉｏａｎｎｏｕ Ｙ，Ｂｉｒｄ Ｈ，ｅｔ ａｌ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｂｅｎｅｆｉｔ ｏｆ ｂｌｏｃｋｉｎｇ ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｗｉｔｈ ａｎ ａｎｔｉ−ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−６ ｒｅｃｅｐｔｏｒ ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ ａｎｔｉｂｏｄｙ ｉｎ ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ ａｒｔｈｒｉｔｉｓ：Ａ ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ，ｄｏｕｂｌｅ−ｂｌｉｎｄ，ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ，ｄｏｓｅ−ｅｓｃａｌａｔｉｏｎ ｔｒｉａｌ．Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ Ｒｈｅｕｍ ２００２；４６（１２）：３１４３．）がなされており、エバスチンが関節リウマチの治療に使用できると考えられる。
一方、塩酸エピナスチンでは気管支喘息の中等度改善以上の有効率は４７．０％と報告され、また掻痒を伴う尋常性乾癬への投与も臨床で認められている（塩酸エピナスチンのインタビューフォームによる）。塩酸エピナスチンのこのような臨床効果について、Ｈ１受容体への拮抗作用以外に、末梢血好酸球、単核球のサイトカイン産生への影響が報告されている（相良 博典．エピナスチンの好ｆ酸球に対する作用．アレルギー科２００１；１２（６）：５８７．、小嶋 幸夫，吉川 康之，西部 明子，周子 史男．アトピー性皮膚炎患者末梢血単核球のサイトカイン産生に対する抗アレルギー剤の影響．日皮会誌１９９６；１０６（４）：３９５．）。本発明によって、塩酸エピナスチンのＴ細胞増殖の抑制とＴ細胞からのＴｈ１，Ｔｈ２サイトカイン産生の抑制も認められ、特に尋常性乾癬はＴｈ１型の疾患とされ、現在塩酸エピナスチンはこの疾患にも使用されていることから、その有効性の一つのメカニズムとも考えられる。
しかし、同じ抗Ｈ１ブロッカーである塩酸セチリジンとフマル酸ケトチフェンにおいては、Ｔ細胞、マクロファージ機能への影響が認められなかった。
ヒト組換え型Ｈ１受容体を発現させたＣｈｉｎｅｓｅ Ｈａｍｓｔｅｒ Ｏｖａｒｙ細胞を用いた抗Ｈ１ブロッカーのＨ１受容体へのリガンド結合阻害のＩＣ_５０値の比較において、フマル酸ケトチフェンは０．５２±０．０６ｎＭであるに対し、塩酸エピナスチンは１．１±０．１６ｎＭで、塩酸セチリジンは１１±０．６７ｎＭである（前掲Ｎｏｎａｋａ Ｈら，１９９８）。また、モルモットの摘出気管標本におけるヒスタミン誘発収縮に対する作用のＩＣ_５０値の比較において、フマル酸ケトチフェンが０．００２５μＭに対し、カレバスチンは０．１２μＭで、エバスチンは＞１０μＭである（エバスチンのインタビューフォームによる）。上記のように、今回用いた抗Ｈ１ブロッカーの中で、フマル酸ケトチフェンはＨ１受容体への親和性及び拮抗作用が最も強い薬剤であった。しかし、フマル酸ケトチフェンはＴ細胞やマクロファージへの影響が全く認められなかったことから、抗Ｈ１ブロッカーの免疫細胞への作用はＨ１受容体における抗ヒスタミン作用とは別に、Ｈ１受容体を介さない作用が存在する可能性が示唆された。
抗Ｈ１ブロッカーはＨ１受容体への結合より、少ないながらもＨ２受容体にも結合する。Ｈ２受容体へのリガンド結合阻害（ＩＣ_５０値：ｎＭ）において、塩酸エピナスチン、フマル酸ケトチフェン及び塩酸セチリジンは各々６４０±６２，２２００±４５０，＞１００００である（前掲Ｎｏｎａｋａ Ｈら，１９９８）。上記の報告は、塩酸セチリジンは塩酸エピナスチンやフマル酸ケトチフェンより抗Ｈ１ブロッカーとしてのＨ１受容体への結合特異性が高い事を補足するための非臨床実験によるものである。この報告ではエバスチンとの対照実験は行なわれていなかった。現在、Ｈ２受容体への結合は抗Ｈ１ブロッカーとしての副作用としか見なされていないこともあり、エバスチンのＨ２受容体への結合に関する詳細は報告されていない。しかし、モルモットの摘出気管標本におけるヒスタミン誘発収縮に対する作用のＩＣ_５０値の比較等によって、エバスチン（もしくはカレバスチン）のＨ１受容体への親和性がフマル酸ケトチフェンより遥かに低いことから、エバスチン（もしくはカレバスチン）のＨ１受容体へ特異性がフマル酸ケトチフェンより低い可能性が推測される。
ヒトＴ細胞におけるヒスタミン受容体は主としてＨ２受容体である。本発明者らは以前抗Ｈ１ブロッカーであるテルフェナジンのＴ細胞におけるサイトカイン産生抑制を報告した（Ｍｕｎａｋａｔａ Ｙら，１９９９）。テルフェナジンにおけるＨ２受容体への結合実験で、［^３Ｈ］−チオチジンへの阻害率は最大濃度で２９％であった（内田 昌子，近江 直子，古閑 良彦，諸岡 茂昭．セチリジンの薬理作用．基礎と臨床２８（７）：１７９５−１８１２，１９９４．）。本発明では、Ｈ１受容体に対する特異性が相対的に低い抗Ｈ１ブロッカーであるエバスチンと塩酸エピナスチンにおいてＴ細胞のサイトカイン産生抑制が認められたのは、ヒトＴ細胞上のＨ２受容体に作用したことが関与すると推測される。マウスにおいてヒスタミンはＨ１受容体を介しＴｈ１サイトカイン産生を増強し、一方Ｈ２受容体を介しＴｈ１，Ｔｈ２両方のサイトカイン産生を抑制すると報告された（前掲Ｊｕｔｅｌ Ｍら，Ｎａｔｕｒｅ，２００１）。マウスＴ細胞の系で認められたＨ２受容体の刺激によるサイトカイン産生抑制効果は、本発明により、ヒトＴ細胞においても同様な効果が起こり得る可能性が考えられた。
産業上の利用の可能性
上述の通り、エバスチンおよびカレバスチンは、共刺激条件下で、Ｔ細胞増殖、Ｔｈ−２型サイトカインの産生、炎症性サイトカインの産生、さらにはＴ細胞遊走を濃度依存的に阻害し得ることが示された。これら作用より、エバスチンおよびカレバスチンは喘息、アトピー性皮膚炎、ならびにＴｈ−２型自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、慢性ＧＶＨＤ、クローン病、慢性関節リウマチなどの炎症性疾患などのＴ細胞が起因したアレルギー免疫疾患に対する本質的な治療薬となることが期待される。
また、塩酸エピナスチンが共刺激条件下で、Ｔ細胞増殖、Ｔｈ−２型サイトカインの産生、さらにはＴｈ−１型サイトカインの産生を濃度依存的に阻害し得ることが示された。これら作用により、塩酸エピナスチンは、アレルギー、喘息、尋常性乾癬、Ｔｈ−１／Ｔｈ−２サイトカイン不均衡が関与する臓器特異的自已免疫疾患（自己免疫性甲状腺炎、多発性硬化症）、炎症性疾患（クローン病、炎症性腸疾患、関節リウマチ）、全身性自己免疫疾患（全身性エリテマトーデス、重症筋無力症）及び慢性ＧＶＨＤなどの疾患に対する本質的な治療薬となることが期待される。
【図面の簡単な説明】
図１は、異なる刺激によるＴ細胞増殖に対するエバスチンの影響の解析結果を示す図である。なお、これらデータは異なるドナー由来の試料を用いた５回の別個の解析により再現性が確認されている。
図２は、異なる刺激によるＴ細胞増殖に対するカレバスチン（Ａ）および塩酸エピナスチン（Ｂ）の影響の解析結果を示す図である。
図３は、異なる刺激によるＴ細胞増殖に対する塩酸セチリジン（Ａ）およびフマル酸ケトチフェン（Ｂ）の影響の解析結果を示す図である。
図４は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−２（Ａ）およびＩＦＮ−γ（Ｂ）産生に対するエバスチンの作用を示す図である。なお、これらデータは異なるドナー由来の試料を用いた５回の別個の解析により再現性が確認されている。
図５は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−２（Ａ）およびＩＦＮ−γ（Ｂ）産生に対するカレバスチンの作用を示す図である。
図６は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−２（Ａ）およびＩＦＮ−γ（Ｂ）産生に対する塩酸エピナスチンの作用を示す図である。
図７は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−２（Ａ）およびＩＦＮ−γ（Ｂ）産生に対する塩酸セチリジンの作用を示す図である。
図８は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−２（Ａ）およびＩＦＮ−γ（Ｂ）産生に対するフマル酸ケトチフェンの作用を示す図である。
図９は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−４（Ａ）およびＩＬ−５（Ｂ）産生に対するエバスチンの作用を示す図である。なお、これらデータは異なるドナー由来の試料を用いた５回の別個の解析により再現性が確認されている。
図１０は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−４（Ａ）およびＩＬ−５（Ｂ）産生に対するカレバスチンの作用を示す図である。
図１１は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−４（Ａ）およびＩＬ−５（Ｂ）産生に対する塩酸エピナスチンの作用を示す図である。
図１２は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−４（Ａ）およびＩＬ−５（Ｂ）産生に対する塩酸セチリジンの作用を示す図である。
図１３は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−４（Ａ）およびＩＬ−５（Ｂ）産生に対するフマル酸ケトチフェンの作用を示す図である。
図１４は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対するエバスチンの作用を示す図である。なお、これらデータは異なるドナー由来の試料を用いた５回の別個の解析により再現性が確認されている。
図１５は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対するカレバスチンの作用を示す図である。
図１６は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対する塩酸エピナスチンの作用を示す図である。
図１７は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対する塩酸セチリジンの作用を示す図である。
図１８は、異なる刺激を与えた際の末梢血Ｔ細胞からのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対するフマル酸ケトチフェンの作用を示す図である。
図１９は、ＰＨＡにより活性化した際の血管内皮細胞透過性のＴ細胞遊走に対するエバスチン（Ａ）およびカレバスチン（Ｂ）の阻害作用を示す図である。なお、（Ａ）は異なるドナー由来の試料を用いた３回の別個の解析により再現性が確認されている。
図２０は、ＰＨＡにより活性化した際の血管内皮細胞透過性のＴ細胞遊走に対する塩酸エピナスチン（Ａ）、塩酸セチリジン（Ｂ）およびフマル酸ケトチフェン（Ｃ）の作用を示す図である。
図２１は、ＰＨＡ刺激Ｔ細胞の内皮細胞への接着に対するエバスチンの影響を示す写真である。上から下へ順に０μＭ、１．０μＭ、５．０μＭエバスチンで処理した。
図２２は、ＬＰＳによる刺激を与えた際のマクロファージからのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対するエバスチンの作用を示す図である。なお、これらデータは異なるドナー由来の試料を用いた５回の別個の解析により再現性が確認されている。
図２３は、ＬＰＳによる刺激を与えた際のマクロファージからのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対するカレバスチンの作用を示す図である。
図２４は、ＬＰＳによる刺激を与えた際のマクロファージからのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対する塩酸エピナスチンの作用を示す図である。
図２５は、ＬＰＳによる刺激を与えた際のマクロファージからのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対する塩酸セチリジンの作用を示す図である。
図２６は、ＬＰＳによる刺激を与えた際のマクロファージからのＩＬ−６（Ａ）およびＴＮＦ−α（Ｂ）産生に対するフマル酸ケトチフェンの作用を示す図である。
図２７は、エバスチンのＰＨＡ刺激Ｔ細胞内Ｃａｓ−Ｌ、ＦＡＫチロシン燐酸化への影響を示す写真である。

Claims (7)

1. 免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応を抑制し得る下記式（１）に記載の化合物であって、
   前記アレルギー免疫反応が
   （Ａ）Ｔ細胞の増殖、
   （Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、
   （Ｃ）炎症性サイトカインの産生、または
   （Ｄ）Ｔ細胞遊走である、化合物。
   

   

   ［上記式（１）において、ＲはＣＨ_３またはＣＯＯＨである。］
2. 免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応を抑制し得る下記式（２）に記載の化合物またはその塩であって、
   前記アレルギー免疫反応が
   （Ａ）Ｔ細胞の増殖、
   （Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、または
   （Ｃ）Ｔｈ−１型サイトカインの産生である、化合物またはその塩。
   

   
3. 炎症性サイトカインがＴ細胞またはマクロファージから産生されるサイトカインである、請求項１に記載の化合物。
4. 請求項１または３に記載の化合物を含む、組成物。
5. 請求項２に記載の化合物またはその塩を含む、組成物。
6. 下記式（１）に記載の化合物を有効成分として含有する、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤であって、
   前記アレルギー免疫反応が
   （Ａ）Ｔ細胞の増殖、
   （Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、
   （Ｃ）炎症性サイトカインの産生、または
   （Ｄ）Ｔ細胞遊走である、抑制剤。
   

   
7. 下記式（２）に記載の化合物またはその塩を有効成分として含有する、免疫細胞が関与するアレルギー免疫反応の抑制剤であって、
   前記アレルギー免疫反応が
   （Ａ）Ｔ細胞の増殖、
   （Ｂ）Ｔｈ−２型サイトカインの産生、または
   （Ｃ）Ｔｈ−１型サイトカインの産生である、抑制剤。
   

   

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