JPS6379593A - ｔＰＡを精製する方法 - Google Patents
ｔＰＡを精製する方法Info
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- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、組織ブラスミノーゲンアクチベータ−（ｔＰ
Ａ）の精製法に関する。
Ａ）の精製法に関する。
さらに詳しくは、種々のｔＰＡの分子種を含む粗製のｔ
ＰＡを反応色素と結合した樹脂と接触させることにより
分子量約７万ダルトンｔＰＡを分離精製して得る方法に
関する。
ＰＡを反応色素と結合した樹脂と接触させることにより
分子量約７万ダルトンｔＰＡを分離精製して得る方法に
関する。
本発明においてｔＰＡとは、高等動物の組織で産生され
るものであって、フィブリンに特有な分解酵素であるプ
ラスミンの前駆物質であるプラスミノーゲンを賦活化さ
せる蛋白質である。
るものであって、フィブリンに特有な分解酵素であるプ
ラスミンの前駆物質であるプラスミノーゲンを賦活化さ
せる蛋白質である。
これを含む液とは、ヒトメラノーマ細胞培養液、ヒト正
常細胞培養液及び遺伝子組み換え技法を用いヒト ｔＰ
Ａ遺伝子を組み込んだ細胞の培養液等がある。またｔＰ
Ａを含む液として、上記培養液を部分精製した液でもよ
い。
常細胞培養液及び遺伝子組み換え技法を用いヒト ｔＰ
Ａ遺伝子を組み込んだ細胞の培養液等がある。またｔＰ
Ａを含む液として、上記培養液を部分精製した液でもよ
い。
本発明で使用する親和試薬には、プロジオンレッド、チ
バクロンブルー等のトリアジン環を含む反応性色素を固
形担体に結合したものが挙げられ、固形担体としてはア
ガロース、セルロース、ポリアクリルアミド粒子が使用
できる。
バクロンブルー等のトリアジン環を含む反応性色素を固
形担体に結合したものが挙げられ、固形担体としてはア
ガロース、セルロース、ポリアクリルアミド粒子が使用
できる。
本発明の特徴は抗ヒト ｔＰＡ抗体と反応する分子量の
異なる種々の蛋白の中から選択的に分子）７万ダルトン
のｔＰＡを取得することにある。
異なる種々の蛋白の中から選択的に分子）７万ダルトン
のｔＰＡを取得することにある。
つまりｔＰＡを生産する細胞を培養し、ｔＰＡを得よう
とする際、その培養液中には抗ヒｌ−ｔＰＡ抗体と反応
する蛋白質として分子量３万から４，５万ダルトンのも
の、５万から８万ダルトンのもの及び１０万ダルトン以
上のものが存在する。これら多種類のｔＰＡ分子分子色
種の不純タンパクを含む液の中から分子量約７万ダルト
ンのｔＰＡだけを分離精製する方法である。
とする際、その培養液中には抗ヒｌ−ｔＰＡ抗体と反応
する蛋白質として分子量３万から４，５万ダルトンのも
の、５万から８万ダルトンのもの及び１０万ダルトン以
上のものが存在する。これら多種類のｔＰＡ分子分子色
種の不純タンパクを含む液の中から分子量約７万ダルト
ンのｔＰＡだけを分離精製する方法である。
分子量の異なる蛋白質を分離する方法としてはゲル口過
法が一般に使用され得る。
法が一般に使用され得る。
これとは異なり、本発明者らは、分子量の異なるｔＰＡ
分子種と反応性色素との反応性を調べたところ、各々の
ｔＰＡ分子分子量中応性色素への親和性に差のあること
を見出し、この性質を利用して多種類のｔＰＡ分子分子
量中から分子量７万ダルトンｔＰＡを取得する方法を考
案した。
分子種と反応性色素との反応性を調べたところ、各々の
ｔＰＡ分子分子量中応性色素への親和性に差のあること
を見出し、この性質を利用して多種類のｔＰＡ分子分子
量中から分子量７万ダルトンｔＰＡを取得する方法を考
案した。
本発明ではｔＰＡを含む水性媒体を、反応性色素が担体
に結合している親和試薬層へ通過させ、ｔＰＡを吸着さ
せ次いでその層を洗浄し、その後ｔＰＡを例えば０．６
Ｍ以下のチオシアン酸塩溶液で脱着させ、脱着したｔＰ
Ａを層から洗い出す。層はカラムの形状をしていてよい
。
に結合している親和試薬層へ通過させ、ｔＰＡを吸着さ
せ次いでその層を洗浄し、その後ｔＰＡを例えば０．６
Ｍ以下のチオシアン酸塩溶液で脱着させ、脱着したｔＰ
Ａを層から洗い出す。層はカラムの形状をしていてよい
。
脱着は例えば、チオシアン酸塩、グアニジンおよびその
誘導体、尿素およびその誘導体、ヒドロキシルアミン、
ヒドラジンが使用できる。
誘導体、尿素およびその誘導体、ヒドロキシルアミン、
ヒドラジンが使用できる。
即ち、多種類のｔＰＡ分子分子量中他の不純蛋白を含む
液を反応性色素を担体に結合した親和試薬に吸着する為
に、弱酸性、中性または弱アルカリ性になるように調整
する。
液を反応性色素を担体に結合した親和試薬に吸着する為
に、弱酸性、中性または弱アルカリ性になるように調整
する。
前記の親和試薬と接触させるとほとんどすべてのｔＰＡ
分子分子量中着させられる。次に１Ｍ以下の食塩濃度又
は０．３？’ｌ以下のチオシアン酸塩水溶液で石を洗浄
すると不純蛋白及び分子量約３万〜３．５万ダルトンｔ
ＰＡが？６出される。
分子分子量中着させられる。次に１Ｍ以下の食塩濃度又
は０．３？’ｌ以下のチオシアン酸塩水溶液で石を洗浄
すると不純蛋白及び分子量約３万〜３．５万ダルトンｔ
ＰＡが？６出される。
分子量４万〜６万ダルトンｔＰＡを０．６Ｍチオシアン
酸塩水溶液で溶出させた後１．ＯＭチオシアン酸塩水溶
液を用い分子量７万ダルトンｔＰＡを溶出させることが
できる。
酸塩水溶液で溶出させた後１．ＯＭチオシアン酸塩水溶
液を用い分子量７万ダルトンｔＰＡを溶出させることが
できる。
〔実施例１〕
ボウズ（Ｂｏｔｈｅｓ ）メラノーマ細胞（ＡＴＣＣＣ
ＲＬ１４２４ Ｇ３６１ ”）を１０％熱不活性化（５
６℃、３０分間）胎児牛血清（ＦＣＳ）を補充したＲＰ
ＭＩ−１６４０組織培養媒体中で培養後、培養物を一度
洗い、血清を含まない媒体中で２４時間培養後、媒体を
集め、新しい媒体を加えた。収穫液２１を０．１５Ｍ食
塩を含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡
化したレッドセファローズ（ファルマシア社製）カラム
５ｒＭｌに通した。
ＲＬ１４２４ Ｇ３６１ ”）を１０％熱不活性化（５
６℃、３０分間）胎児牛血清（ＦＣＳ）を補充したＲＰ
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洗い、血清を含まない媒体中で２４時間培養後、媒体を
集め、新しい媒体を加えた。収穫液２１を０．１５Ｍ食
塩を含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，２）で平衡
化したレッドセファローズ（ファルマシア社製）カラム
５ｒＭｌに通した。
流出液を集め、プラスミノーゲン依存フィブリン溶解活
性を測定したが活性は検出されなかった。
性を測定したが活性は検出されなかった。
全培養液をカラムに通過させた後、０．６Ｍチオシアン
酸アンモニウムを含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
，５）でカラムを洗った。洗液にはカラムにかけた活性
の約１０χが検出されＳＤＳポリアクリルアミドゲル電
気電気移動後イモグラフ上で分子量約３万〜６万のバン
ドがプラスミノーゲンアクチベーターとして確認された
。
酸アンモニウムを含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
，５）でカラムを洗った。洗液にはカラムにかけた活性
の約１０χが検出されＳＤＳポリアクリルアミドゲル電
気電気移動後イモグラフ上で分子量約３万〜６万のバン
ドがプラスミノーゲンアクチベーターとして確認された
。
吸着した蛍白質を、１．０Ｍチオシアン酸アンモニウム
を含む０．０団リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）を用いて溶
出したところ、この方法によりカラムにかけたプラスミ
ノーゲン依存フィブリン溶解活性の約８５％が検出され
、ザイモグラフ上で分子量約７万ダルトンのバンドが確
認された。
を含む０．０団リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）を用いて溶
出したところ、この方法によりカラムにかけたプラスミ
ノーゲン依存フィブリン溶解活性の約８５％が検出され
、ザイモグラフ上で分子量約７万ダルトンのバンドが確
認された。
〔実施例２〕
人胎児肺細胞（ＡＴＣＣパＲＣ−５ＣＣＬ−１７１）培
養液〔１０χ熱不活性化（５６℃、３０分間）胎児生血
・清及び２０ＫＩｔｌ／ｉｆ！アプロチニンを含む〕
２２を抗ヒトｔＰＡ抗体カラム２０−に通した。
養液〔１０χ熱不活性化（５６℃、３０分間）胎児生血
・清及び２０ＫＩｔｌ／ｉｆ！アプロチニンを含む〕
２２を抗ヒトｔＰＡ抗体カラム２０−に通した。
流出液を集め、プラスミノーゲン依存フィブリン溶解活
性を測定したが、この画分の活性はカラムにかけた活性
の約４０χを示したものの、抗ヒトウロキナーゼ抗体と
交叉反応させた後のプラスミノーゲン依存フィブリン溶
解活性は検出されなかったので、この活性はウロキナー
ゼによるものと判断された。
性を測定したが、この画分の活性はカラムにかけた活性
の約４０χを示したものの、抗ヒトウロキナーゼ抗体と
交叉反応させた後のプラスミノーゲン依存フィブリン溶
解活性は検出されなかったので、この活性はウロキナー
ゼによるものと判断された。
吸着されている蛋白質は１．０Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ
リン酸緩衝液（ｐ）ｌ ７．５）で洗浄後２．０Ｍチオ
シアン酸カリウムを含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）で溶離した。
リン酸緩衝液（ｐ）ｌ ７．５）で洗浄後２．０Ｍチオ
シアン酸カリウムを含む０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
７，５）で溶離した。
溶出液の活性はカラムにかけた活性の約５ｏｚを示した
。この両分をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気電気移
動後イモグラフィーで調べると分子量約３万〜１５万ダ
ルトンの範囲で多数のバンドが検出され、抗ヒトｔＰＡ
抗体で処理したフィブリンアガープレートを用いると上
記のバンドが検出されないことがらｔＰＡと確認された
。
。この両分をＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気電気移
動後イモグラフィーで調べると分子量約３万〜１５万ダ
ルトンの範囲で多数のバンドが検出され、抗ヒトｔＰＡ
抗体で処理したフィブリンアガープレートを用いると上
記のバンドが検出されないことがらｔＰＡと確認された
。
この溶出液を０．０５Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）
で４倍希釈し、０．５Ｍチオシアン酸カリウムを含む０
゜０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で平衡化したブル
ーセファローズ（ファルマシマ社製） ５ｍｌ’に通
した。
で４倍希釈し、０．５Ｍチオシアン酸カリウムを含む０
゜０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で平衡化したブル
ーセファローズ（ファルマシマ社製） ５ｍｌ’に通
した。
溶出液を集め、プラスミノーゲン依存フィブリン溶解活
性を測定した。カラムに通した活性の約５％が確認され
、ザイモグラフ上で３万〜６万ダルトンのバンドが検出
された。
性を測定した。カラムに通した活性の約５％が確認され
、ザイモグラフ上で３万〜６万ダルトンのバンドが検出
された。
吸着されている蛋白を０，１Ｍアルギニンを含む上記平
衡化緩衝液により溶離したところ、溶出液の活性はカラ
ムにかけた活性の約９０％を示し、ザイモグラフ上で分
子量約７万ダルトンのバンドをしめした。
衡化緩衝液により溶離したところ、溶出液の活性はカラ
ムにかけた活性の約９０％を示し、ザイモグラフ上で分
子量約７万ダルトンのバンドをしめした。
〔実施例３〕
ヒト ｔＰＡ遺伝子を組み込んだチャイニーズハムスタ
ー卵母（ＣＨＯ）細胞（Ｄｒ、Ｃｈａｓｉｎ、Ｃｏｌｏ
ｍｂｉａ口ｎ１ｖｅｒｓｉｔｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ
ｔ Ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ５ｃｉｅｎｃ
ｅ）培養液〔１ｏｚ熱不活性化（５６℃、３０分間）胎
児牛血清及び４０ＫＩＵ／７！アプロチニン含む〕２１
！を抗ヒトｔＰＡ抗体カラム５０ｍ１に通した。１．０
Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）
で洗浄後、２．０Ｍチオシアン酸アンモニウムを含む０
．１Ｍグリシン−塩酸緩衝液（ｐＨ３，５）で吸着した
蛋白を溶離した。
ー卵母（ＣＨＯ）細胞（Ｄｒ、Ｃｈａｓｉｎ、Ｃｏｌｏ
ｍｂｉａ口ｎ１ｖｅｒｓｉｔｙ Ｄｅｐａｒｔｍｅｎ
ｔ Ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ５ｃｉｅｎｃ
ｅ）培養液〔１ｏｚ熱不活性化（５６℃、３０分間）胎
児牛血清及び４０ＫＩＵ／７！アプロチニン含む〕２１
！を抗ヒトｔＰＡ抗体カラム５０ｍ１に通した。１．０
Ｍ食塩を含む０．０５Ｍ リン酸緩衝液（ｐＨ７，５）
で洗浄後、２．０Ｍチオシアン酸アンモニウムを含む０
．１Ｍグリシン−塩酸緩衝液（ｐＨ３，５）で吸着した
蛋白を溶離した。
溶出液を集め、プラスミノーゲン依存フィブリン溶解活
性を測定したところ、カラムに通した活性の約９５％が
確認された。
性を測定したところ、カラムに通した活性の約９５％が
確認された。
この画分をＳＤＳポリアクリルアミド電気電気移動後イ
モグラフィーで調べると分子量３万〜１５ダルトンの範
囲にバンドが確認された。
モグラフィーで調べると分子量３万〜１５ダルトンの範
囲にバンドが確認された。
この両分を０．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５）で４
倍希釈し、Ｐｒｏｃｉｏｎ Ｃ，１，Ｒ＋ｐａｃｔｉｖ
ｅ Ｙｅｌｌｏｗ ＬＳｅｐｈａｒｏｓｅ ５ｍに通し
た。
倍希釈し、Ｐｒｏｃｉｏｎ Ｃ，１，Ｒ＋ｐａｃｔｉｖ
ｅ Ｙｅｌｌｏｗ ＬＳｅｐｈａｒｏｓｅ ５ｍに通し
た。
流出液の活性はカラムに通した活性の約１０％を示した
。分子量３万〜６万の範囲にバンドがザイモグラフ上で
確認された。
。分子量３万〜６万の範囲にバンドがザイモグラフ上で
確認された。
吸着した蛋白は０．２Ｍヒドロキシルアミン及び０゜釘
食塩を含む０．０５Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，５
）を用い溶離した。溶出液の活性はカラムに通した活性
の約８０％であった。
食塩を含む０．０５Ｍ トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，５
）を用い溶離した。溶出液の活性はカラムに通した活性
の約８０％であった。
ザイモグラフ上の分子量約７万ダルトンの位置にｔＰＡ
がバンドとして認められた。
がバンドとして認められた。
〔実施例４〕
ヒト ｔＰＡ遺伝子を組み込んだマウス線維芽細胞（Ｍ
ｏｕｓｅ Ｃ１２７１ＡＴＣＣＣＲＬ １６１６ ）培
養液〔２χ熱不活性化（５６℃、３０分間）胎児牛血清
及び４０ＫＩＵ／ｄアプロチニンを含む）２ｆｆをリン
酸でｐＨ４，５に調整し、０．１５Ｍ食塩を含む０．０
５リン酸２水素１ナトリウム（ｐＨ４，５）で平衡化し
たカルボキシメチル（ＣＭ）セファロースｌ０ｍ１に通
した。
ｏｕｓｅ Ｃ１２７１ＡＴＣＣＣＲＬ １６１６ ）培
養液〔２χ熱不活性化（５６℃、３０分間）胎児牛血清
及び４０ＫＩＵ／ｄアプロチニンを含む）２ｆｆをリン
酸でｐＨ４，５に調整し、０．１５Ｍ食塩を含む０．０
５リン酸２水素１ナトリウム（ｐＨ４，５）で平衡化し
たカルボキシメチル（ＣＭ）セファロースｌ０ｍ１に通
した。
吸着した蛋白を含む樹脂は５０ｍＭ食塩を含む２５ｍＭ
リン酸緩衝液（ｐＨ６，４）で洗浄後、０．５Ｍ食塩を
含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，４）を用い蛋白を
溶離した。
リン酸緩衝液（ｐＨ６，４）で洗浄後、０．５Ｍ食塩を
含む５０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６，４）を用い蛋白を
溶離した。
溶出液のプラスミノーゲン依存フィブリン）６解活性を
測定するとカラムにかけた活性の約９０％を示した。
測定するとカラムにかけた活性の約９０％を示した。
この百分をＳＯＳポリアクリルアミド電気泳動後のザイ
モグラフィーで調べると分子量３万〜１５万ダルトンの
範囲でｔＰＡのバンドとして５１７ｚされた。
モグラフィーで調べると分子量３万〜１５万ダルトンの
範囲でｔＰＡのバンドとして５１７ｚされた。
この溶出液を０．５Ｍ食塩を含む５０ｍＭリン酸緩衝液
（ｐＨ６，４）で平衡化したＰｒｏｃｉｏｎ Ｃ，１，
ＲｅａｃｔｉｖｅＯｒａｎｇｅ ｌ−５ｅｐｈａｒｏｓ
ｅに通した。
（ｐＨ６，４）で平衡化したＰｒｏｃｉｏｎ Ｃ，１，
ＲｅａｃｔｉｖｅＯｒａｎｇｅ ｌ−５ｅｐｈａｒｏｓ
ｅに通した。
０．３Ｍチオシアン酸アンモニウムを含む０．０５Ｍ
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄後、４Ｍ尿素
を含む０．０５Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）
で蛋白を溶離した。
トリス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）で洗浄後、４Ｍ尿素
を含む０．０５Ｍ ）リス塩酸緩衝液（ｐＨ８，０）
で蛋白を溶離した。
溶出液の活性はカラムにかけた活性の約９０％を示し、
ザイモグラフ上で分子量約７万ダルトンの位置にｔＰＡ
が確認された。
ザイモグラフ上で分子量約７万ダルトンの位置にｔＰＡ
が確認された。
〔実施例５〕
ヒト ｔＰＡ遺伝子を組み込み形質転換された宿主酵母
細胞は（Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉ
ｃｅ ｏｆＲｏｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ ｗｉｔｈ Ｙｅａｓｔ）ｉｎ Ｔ
ｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｙｅ
ａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ：Ｍｅｔａｂｏ
ｌｉｓｍ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、
ＰＰ ６０３−６３６＋Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｌａ１ｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９８２）に記載された方法
を通常用いる標準酵母培養培地で増殖させた。
細胞は（Ｐｒ１ｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉ
ｃｅ ｏｆＲｏｃｏｍｂｉｎａｎｔ ＤＮＡ Ｒｅ
５ｅａｒｃｈ ｗｉｔｈ Ｙｅａｓｔ）ｉｎ Ｔ
ｈｅＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ ｏｆ Ｙｅ
ａｓｔ Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ ：Ｍｅｔａｂｏ
ｌｉｓｍ ａｎｄ Ｇｅｎｅ Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ、
ＰＰ ６０３−６３６＋Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａ
ｒｂｏｒ Ｌａ１ｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏ１ｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇＨａｒｂｏｒ、ＮＹ（１９８２）に記載された方法
を通常用いる標準酵母培養培地で増殖させた。
細胞はガラスピーズにより破砕され、そノ１１０゜０２
χＴｗｅｅｎ ８０ 及び０．１５ＦＩ食塩を含む０
．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５，２０ＫＩＵ、４の
アプロチニンを含む）でｔＰＡを抽出し、抽出液を遠心
分離しその上澄液を実施例３と同様の方法で、つまり抗
ｔＰＡ抗体セファロースとそれにＶｔ ＜ Ｐｒｏｃ
ｉｏｎ Ｃ，Ｉ 。
χＴｗｅｅｎ ８０ 及び０．１５ＦＩ食塩を含む０
．０５Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，５，２０ＫＩＵ、４の
アプロチニンを含む）でｔＰＡを抽出し、抽出液を遠心
分離しその上澄液を実施例３と同様の方法で、つまり抗
ｔＰＡ抗体セファロースとそれにＶｔ ＜ Ｐｒｏｃ
ｉｏｎ Ｃ，Ｉ 。
Ｒｅａｃｔｉｖｅ Ｙｅｌｌｏｗ １−セファロースに
通してｔＰＡを精製した。
通してｔＰＡを精製した。
精製したｔＰＡは分子量約７万ダルトンを示し、抽出液
からの活性の回収は約７５％であった。
からの活性の回収は約７５％であった。
Claims (1)
- 抗ヒトｔＰＡ抗体と反応し、かつ分子量約７万ダルトン
以外の分子量をもつ蛋白を不純物として含む粗ｔＰＡを
固定化反応性色素を含んでなる親和試薬と密接に接触さ
せ、これにより選択的に分子量７万ダルトンｔＰＡを取
得することを特徴とするｔＰＡを精製する方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22211386A JPS6379593A (ja) | 1986-09-22 | 1986-09-22 | ｔＰＡを精製する方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP22211386A JPS6379593A (ja) | 1986-09-22 | 1986-09-22 | ｔＰＡを精製する方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6379593A true JPS6379593A (ja) | 1988-04-09 |
Family
ID=16777350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP22211386A Pending JPS6379593A (ja) | 1986-09-22 | 1986-09-22 | ｔＰＡを精製する方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6379593A (ja) |
-
1986
- 1986-09-22 JP JP22211386A patent/JPS6379593A/ja active Pending
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