JPS63501134A - リポソ−ムの本来の調製及び配送 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 リポソームの　の　び配淀− ｘ更夏ｉ見 この発明は容器内の脂質膜の調製、貯蔵および水和に関する。

更に詳細にいうと、容器の内側表面上に脂質を被覆すること、及び該脂質膜を使 用直前に水和することに関する。

リポソームは、カプセル化された水溶液を含有する脂質二重層膜（１ｉｐｉｄ　 ｂｉｌａｙｅｒ　ｍｅｍｂｒａｎｅｓ、脂質二重層膜）からなる完全に閉鎖され た構造である。リポソームは、水性相で分離された多数の濃脂質二重層を含有す る（マルチラメラ小胞体もしくはＭＬＶＳ）か、または、単独の二重層膜（ユニ ラメラ小胞体）からなることができる。

リポソームの調製は、その典型的なものについてはパンガム（Ｂａｎｇｈａｍ） 等の方法〔ジャーナル・オブ・モレキュラー・バイオロジー（Ｊ　、　Ｍｏ１． 　Ｂｉｏｌ、）　１３　：　２３８−２５２，１９６５）によって達成でき、そ こでは有機溶媒中に！＠濁された脂質を減圧上蒸発させて反応容器中の乾燥膜と させる。続いて水性相の適量を該容器中に添加し、該混合物を振とうし１次いで しばらくの間、乱れないように放置し、ＭＬＶｓを形成する。このリポソーム中 に取り込まれた水性相は薬剤、ホルモン、蛋白質、染料、ビタミン類、もしくは 造形材（ｉｍａｇｉｎｇ　ａｇｅｎｔｓ）を含む生物活性剤を含有することがで きる。

本発明のリポソーム調製法は、１ケの容器を反応、貯蔵、および配送容器として 使用することができる。したがってこの方法は。

大容量のフラスコを使用し、次のような工程＝　（ａ）真空回転蒸発上脂質を乾 燥１次いでフラスコ中の膜の水和；　（ｂ）好適な小容器中に製造されたリポソ ームを貯蔵；及び（ｃ）該リポソームを使用するためにチューブもしくは注射器 （ｓｙｒｉｎｇｅ　）に移す。

といった工程を包含するＳ＋準的な形成方法と比べたとき、リポソームの調製及 び配送に必要な工程を減少させることができる。脂質膜は水和リポソームよりも 貯蔵性のあるものであるので１本発明は、脂質の安定性の問題を同時に扱いなが ら、調製の操作及び移動を減することができる。

第１」１生！１一 本発明はリポソームの本来の製造法に関するもので１次のような工程を包含する ものである＝　（ａ）チューブもしくは注射器中の溶媒−脂質混合物から溶媒を 除去して脂質膜を得、（ｂ）該容器を密閉して該脂質膜が非酸化性雰囲気中に置 かれるようにし。

次いで（ｃ）水性緩衝液で該脂質膜を水和して直ちに使用し得るよう準備された リポソームを形成する。親油性及び親水性の両方の性質を有する物質が、（１） 親油性薬剤もしくは生物活性薬剤を、該脂質膜と共に容器側面上に乾燥させるか 、又は、（２）更に親水性薬剤もしくは生物活性薬剤を含有する水性緩衝液を採 用する工程によって、リポソーム中にカプセル（封入）化することができる。脂 質はチューブもしくは注射器のような小さな容器中で乾燥させて膜とし、次いで 同じ容器中で貯蔵され、水和される。

この操作は、リポソーム製剤を保存するために必要な貯蔵容量と同様に、処理操 作を軽減することができる。

日の蕾　な この発明は、水和されてリポソームを形成する両親媒性化合物の製造および貯蔵 方法について記載している０両親媒性化合物とは疎水性および親水性基の両方を 含有するものである。

本発明で採用し得る両親媒性化合物としては、糖脂質、リン脂質、スフィンゴミ エリン、および、リン脂質と結合し得るコレステロールのようなステロール類が 挙げられる。これらの脂質は。

懸濁溶媒を除去することによって容器の側面に析出される。脂質をクロロホルム 、ジエチルエーテル、メタノール、もしくはメチレンクロライドのような毒性溶 媒中に懸濁されねばならないときは、該溶媒は減圧上除去し、該脂質は製薬上許 容し得る（即ち非毒性である）エタノールのような溶剤中に再懸濁させることが できる。好ましい具体例では、脂質はその懸濁溶剤から乾燥され。

約１００■／ＩＩＱ−’Ｑ％水エタノール中に再溶解する。このような溶媒に懸 濁された脂質は適当な容器中に入れ、減圧下でのロータリーエバポレーターを使 用して乾燥し、薄い膜となし、該脂質懸濁液で容器側面を十分に被覆する。取り 込まれるべき物質が親油性ならば、脂質と共に容器内表面上に乾燥させることが できる。

脂質及びその使用量はその調製に加えられる生物活性剤の性質。

および得られるリポソームの好ましい性質に依っている。カプセル化されるべき 生物活性剤は有機溶媒に可溶性であることができ、蒸発に先立って有機溶媒−脂 質混合物中に懸濁される。あるいは。

生物活性剤は水性相に可溶性であることができ、それ故、乾燥した脂質膜に水和 の際に加えられる。第三には、有機溶媒に部分的に可溶性の生物活性剤を水性溶 媒中に懸濁し、次いで蒸発に先立って該有機溶媒と混合する。

容器上に均一な脂質の膜を形成後、該容器は不活性環境（酸化及び部分的水和を 防止するために実質的に酸素及び水の不在の環境）中で密封される。不活性環境 として好ましいのは窒素、アル射器のプランジャー（ｐｌａｎｇｅｒ）が筒の中 に挿入され、十分に押しつけられる。即ち、該注射器の配送末端に脂質を析出さ せ、そして効果的に該注射器の頭部端を密封する。該注射器円筒の配送末端は、 当業界で公知の好適などのような方法で密封してもよく。

他の容器についても同様である。

該脂質の膜の水和は、この膜を蒸留水もしくは水性緩衝液のような水性媒質にさ らすことによって行うことができる；緩衝液としては例えば、リン酸塩緩衝生理 食塩水（ＰＢＳ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）もし くは（Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸）（ ＨＥＰＥＳ）があり、約７．０−７．５の間のｐＨ，好ましくは約７．２のｐＨ で行う、取り込まれるべき物質が親水性の場合には、水性媒質中に溶解すること ができる。容器が注射器の場合、水性媒体の標本を注射器中に注ぎ入れ、脂質の 膜と混合する。一般に。

注射器のピストンを２〜３回さしこみ、さっと撹拌し、数分間静かに放置すると リポソームが形成される。得られたリポソームは。

人間のような哺乳類を含めた対象に、非経口的に投与される。

失胤鮮工 鶏卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）（シグマケミカル社、セントルイス、ミズ ーリ州）　２０．を無水エタノール中に溶解して。

１００■／ｗａＱ　の濃度の溶液をつくった。この溶液を０．８■ｐの１００％ エタノール及びアルセナゾｍ　（Ａｒｓｅｎａｚｏ　ｍ　＊シグマケミカル社製 、セントルイス、ミズーリ州）の７％水溶液２０μａと、　１３　Ｘ　１００ｎ 園のホウ化ケイ素ガラス管およびポリスチレン管の両者中で混合した。これらの 管は、連結管を調節するために設けられた穴を通じて適当なサイズの２つのスト ッパーからなるアダプター系によってロータリーエバポレーターに付けられる。

これらのストッパーは適当な容器；入れ物およびロータリーエバポレーター中に 挿入される。この混合物を０．１ミリトル、３７℃で２２ｒｐｍ、続いて１５４ ｒｐ＋ａの真空回転蒸発によって水平位置で乾燥させ均一な薄い脂質／アルセナ ゾ■膜を管の側面上に析出させた。

失庭板裟 その調製からアルセナゾ■を除く外は、実施例１の方法および原料を採用した。

ガラス管およびプラスチック管の両者の壁土に白い脂質膜が均一に析出した。

失凰五王 第１表に挙げられた物質を用いて実施例１の方法を採用した。

１０ｏｃ及び２０ｃｃのポリプロピレン製注射器２本を用いた。

５０１１ｇ１．０ｍＡ　２０μΩ ５０■　１．０ｍＡ　５０μ　Ｍ　２０μ　０１００■　０．５謡Ｑ　２０μ　 Ω １００に０．５ｍ１ｌ　５０μ０　２０μ悲脂質を回転蒸発して膜とした後、プ ランジャーを注射器の筒内に挿入して該脂質を注射器の底まで移動させる。

リポソームは、ＰＨ７，２でＰＢＳ緩衝液を注射器中に注射器の総容量の５％の 量まで注ぎ、リポソーム形成のために数秒間置くことによって形成される。

取り込み（ｅｎｔｒａｐｍｅｎｔ）は注射器調製のリポソームを遠心分離してペ レットとし、アルセナゾ■の色の強さを注意することによって、目視することが できる１色の強さは標準的な技術で調製され、遠心分離されたＨ　Ｌ　Ｖ　ｓお よび５ＰＬＶｓと比較される。注射器技術によりＷ４製されたリポソームは同等 、もしくはそれより大きい色の強さを示し、それ故、取り込まれたことを示して いる。

失胤舛土 実施例１の方法および原料を採用し、更に管の封入工程を加えた。ゴム製の隔膜 を管の口に入れる。２本の針を該隔膜の横隔膜を通して挿入し、入口部と出口部 とにする。入口部として使用する針は連結ホースによって圧力をかけられた窒素 の円筒に付けられる。窒素バルブをまわして安定した窒素流を試料管を通して５ 分間流して空気を追い出す、この後、出口針を除き、次いで入口

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. １．両親媒性化合物組成を配送するための次ぎの構成を有する注射器 （ａ）その内側表面が両親媒性化合物を有する膜で被覆された胴体（ｂａｒｒｅ ｌ）； （ｂ）該注射器の頭部末端においてその内容物を密封するようにされた、胴体内 に挿入された可動性のプランジャー；および（ｃ）該注射器の配送末端における 封印（ｓｅａｌ）。
2. ２．両親媒性化合物が脂質である請求の範囲１による注射器。
3. ３．脂質がリン脂質である請求の範囲２の注射器。
4. ４．膜が更に生物活性剤を含有する請求の範囲１の注射器。
5. ５．次ぎの工程を包含する請求の範囲１の注射器でのリポソームの本来の調製の ための方法。 （ａ）注射器中の溶媒−両親媒性化合物混合物から溶媒を除去して膜を得； （ｂ）該膜が不活性雰囲気中にあるように、該注射器を密封し；次いで （ｃ）該膜を水和してリポソームを形成する。
6. ６．注射器の底部に両親媒性物質を析出するために注射器のプランジャーを十分 に押し入れる付加的工程を含む請求の範囲５による方法。
7. ７．注射器中に水性緩衝液を流し込んで脂質膜を水和する付加的工程を含む請求 の範囲５による方法。
8. ８．水和工程が水性緩衝液を用いる請求の範囲５による方法。
9. ９．その水性緩衝液がさらに生物活性剤を含有する請求の範囲５による方法。
10. １０．次ぎの工程を含有するリポソームの本来の調製方法；（ａ）容器中の溶媒 −両親媒性化合物混合物から溶媒を除去して、膜を得る工程。 （ｂ）その膜が不活性ガス中にあるように、その容器を密封する工程。 （ｃ）その膜を水和して、リポソームを形成する工程。