JPS6337257A - 抗ヒトｃｅａ血清の精製法 - Google Patents
抗ヒトｃｅａ血清の精製法Info
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- JPS6337257A JPS6337257A JP18055886A JP18055886A JPS6337257A JP S6337257 A JPS6337257 A JP S6337257A JP 18055886 A JP18055886 A JP 18055886A JP 18055886 A JP18055886 A JP 18055886A JP S6337257 A JPS6337257 A JP S6337257A
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Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明は、臨床検査上、癌胎児性抗原（Ｃａｒｃｉｎｏ
−ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ、 以下ＣＥ
Ａという）の検出に有用な抗ヒトＣＥＡ血清の精製法に
関する。
−ｅｍｂｒｙｏｎｉｃ ａｎｔｉｇｅｎ、 以下ＣＥ
Ａという）の検出に有用な抗ヒトＣＥＡ血清の精製法に
関する。
従来技術
ＣＥＡは、分子量約１８万の糖蛋白質で、その５０〜６
０％は糖であり、腫瘍検出用のマーカーとして知られて
いる。ＣＥＡの構造に類似した抗原性を有する正常組織
抗原はＣＥＡ関連抗原と称せられている。
０％は糖であり、腫瘍検出用のマーカーとして知られて
いる。ＣＥＡの構造に類似した抗原性を有する正常組織
抗原はＣＥＡ関連抗原と称せられている。
ＣＥＡ関連抗原は、その性状から２群に分けられている
。１群は、化学的にＣＥＡに非常に似ており免疫学的に
も抗ＣＥＡ血清ではＣＥＡと区別できないもので、非特
異的交差反応抗原（ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｒｏｓ
ｓｒｅａｃｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ）−２（以下ＮＣ
Ａ−２という）と正常糞便抗原（ｎｏｒｍａｌ ｆｅｃ
ａｌａｎｔｉｇａｎ）−２（以下ＮＦ／ｌ−２という）
とがある。
。１群は、化学的にＣＥＡに非常に似ており免疫学的に
も抗ＣＥＡ血清ではＣＥＡと区別できないもので、非特
異的交差反応抗原（ｎｏｎｓｐｅｃｉｆｉｃ ｃｒｏｓ
ｓｒｅａｃｔｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ）−２（以下ＮＣ
Ａ−２という）と正常糞便抗原（ｎｏｒｍａｌ ｆｅｃ
ａｌａｎｔｉｇａｎ）−２（以下ＮＦ／ｌ−２という）
とがある。
他の群は、ＣＥＡよりも分子量が小さく、免疫学的にも
抗ＣＥＡ血清とは部分的にのみ反応する抗原で、正常糞
便抗原−１（以下ＮＦΔ−１という）、非特異的交差反
応抗原（以下ＮＣＡという）、正常糞便交差抗原（ｎｏ
ｒｍａｌ ｆｅｃａｌ ｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｎｇａ
ｎｔｉｇｅｎ 、以下ＮＰＣΔという）などがある。
抗ＣＥＡ血清とは部分的にのみ反応する抗原で、正常糞
便抗原−１（以下ＮＦΔ−１という）、非特異的交差反
応抗原（以下ＮＣＡという）、正常糞便交差抗原（ｎｏ
ｒｍａｌ ｆｅｃａｌ ｃｒｏｓｓｒｅａｃｔｉｎｇａ
ｎｔｉｇｅｎ 、以下ＮＰＣΔという）などがある。
ＣＥＡは、ＮＦＡ−１、ＮＦＣＡ、ＮＣＡなどと共通す
る抗原決定基を有している。ポリクローナル抗体の抗ヒ
トＣＥＡ血清中には、これらに共通の抗原決定基に対す
る抗体も在り、これらの抗原決定基に対しても反応する
ことが知られている。
る抗原決定基を有している。ポリクローナル抗体の抗ヒ
トＣＥＡ血清中には、これらに共通の抗原決定基に対す
る抗体も在り、これらの抗原決定基に対しても反応する
ことが知られている。
（免疫と基礎４ 、７２３−７３５．１９８２＞発明が
解決しようとする問題点 酵素免疫分析法や放射性免疫分析法により血中ＣＥＡ濃
度の定量あるいは、免疫組織化学的にＣＥＡを検出する
ときに、白血球、肺胞」１皮、胆のう上皮、肺臓などの
好中球、組織法に多く含まれているＮＣＡは、これら組
織中のＣＥへの正確な定量、検出の障害となる。すなわ
ち、抗ヒトＣＥＡ血清中にＮＣＡに対する抗体が混在す
るときには、血中や組織に含まれるＮＣＡも定量、検出
されてしまうためにＣＥＡの定量検出の障害となる。従
って抗ヒトＣＥＡ血清中の抗ＮＣＡ抗体をあらかじめ吸
収、除去してから試料に供されている。
解決しようとする問題点 酵素免疫分析法や放射性免疫分析法により血中ＣＥＡ濃
度の定量あるいは、免疫組織化学的にＣＥＡを検出する
ときに、白血球、肺胞」１皮、胆のう上皮、肺臓などの
好中球、組織法に多く含まれているＮＣＡは、これら組
織中のＣＥへの正確な定量、検出の障害となる。すなわ
ち、抗ヒトＣＥＡ血清中にＮＣＡに対する抗体が混在す
るときには、血中や組織に含まれるＮＣＡも定量、検出
されてしまうためにＣＥＡの定量検出の障害となる。従
って抗ヒトＣＥＡ血清中の抗ＮＣＡ抗体をあらかじめ吸
収、除去してから試料に供されている。
抗ＮＣＡ抗体の吸収、除去には、現在ヒトの牌、肺など
の臓器から抽出されるＮＣＡが用いられている。しかし
、ヒト臓器の場合は、胆癌患者の臓器、死後長時間経過
後の臓器、感染症のおそれがある臓器などの使用はでき
ないので、供給量は限られている。
の臓器から抽出されるＮＣＡが用いられている。しかし
、ヒト臓器の場合は、胆癌患者の臓器、死後長時間経過
後の臓器、感染症のおそれがある臓器などの使用はでき
ないので、供給量は限られている。
問題点を解決する手段
本発明者は、ヒト以外の動物の臓器から抽出して得られ
るＮＣＡも、抗ヒトＣＥＡ血清中の抗ＮＣＡ抗体を吸収
、除去に利用できることを見出し、本発明を完成した。
るＮＣＡも、抗ヒトＣＥＡ血清中の抗ＮＣＡ抗体を吸収
、除去に利用できることを見出し、本発明を完成した。
以下、本発明の詳細な説明する。
本発明は、ヒト以外の動物臓器のＮＣＡまたは該ＮＣＡ
含有物質を用いて抗ヒトＣＥＡ血清中の抗ＮＣＡ抗体の
吸収、除去を行うことによる抗ヒトＣＥＡ血清の精製法
を提供する。
含有物質を用いて抗ヒトＣＥＡ血清中の抗ＮＣＡ抗体の
吸収、除去を行うことによる抗ヒトＣＥＡ血清の精製法
を提供する。
ヒト以外の動物臓器のＮＣＡは、ヒトの臓器からＮＣＡ
を抽出する方法〔ヒストケミストリイ（Ｈｉｓｔｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ） ５８ ： １−１１ 、１９７８）
により該臓器から抽出して得られたものが使用される。
を抽出する方法〔ヒストケミストリイ（Ｈｉｓｔｏｃｈ
ｅｍｉｓｔｒｙ） ５８ ： １−１１ 、１９７８）
により該臓器から抽出して得られたものが使用される。
すなわち、臓器からのＮＣＡの抽出、採取は下記のとお
り行う。
り行う。
臓器に１〜２倍量の生理食塩水を加えブレンダーを用い
て５〜１０分間ホモジナイズ（２，０００〜５、 ｏｏ
ｏｒｐｍ＞ する。これに水冷下等量の１．２モルの過
塩素酸を加え、３０〜４０分間攪拌（１００〜２００ｒ
ｐｍ） Ｌ、ＮＣＡを抽出する。抽出物を２０〜３０分
間６．０００〜８．００Ｏｒｐｍで遠心分離し、得られ
た上澄液を蒸留水、炭酸水素す） ＩＪウム、蒸留水の
順で透析する。透析液を２０〜３０分間８．０００〜１
０、００Ｏｒｐｍで遠心分離し、上澄液を凍結乾燥（−
３０〜−４０℃、７５０±１０ｍｇ１１ｇ、 ３〜４
日）する。
て５〜１０分間ホモジナイズ（２，０００〜５、 ｏｏ
ｏｒｐｍ＞ する。これに水冷下等量の１．２モルの過
塩素酸を加え、３０〜４０分間攪拌（１００〜２００ｒ
ｐｍ） Ｌ、ＮＣＡを抽出する。抽出物を２０〜３０分
間６．０００〜８．００Ｏｒｐｍで遠心分離し、得られ
た上澄液を蒸留水、炭酸水素す） ＩＪウム、蒸留水の
順で透析する。透析液を２０〜３０分間８．０００〜１
０、００Ｏｒｐｍで遠心分離し、上澄液を凍結乾燥（−
３０〜−４０℃、７５０±１０ｍｇ１１ｇ、 ３〜４
日）する。
かくして、ヒト臓器からの抽出物（凍結乾燥物）をＮＣ
Ａ含有物質として得る。
Ａ含有物質として得る。
ヒト以外の動物としては、牛、馬、羊、山羊などの哺乳
動物が用いられる。臓器としては、肺臓、肺臓などが用
いられる。
動物が用いられる。臓器としては、肺臓、肺臓などが用
いられる。
ＮＣＡ含有凍結乾燥物を用いる抗ヒトＣＥＡ血清の精製
は下記のとおり行う。
は下記のとおり行う。
凍結乾燥物をリン酸緩衝食塩水（ｐ Ｈ７，２〜７．４
）に溶解し、抗ヒト血清と４℃で混合し、１６時間放置
後、８〜１０分間、８，０００〜１０．００Ｏｒｐｍで
遠心分離する。上清液がＮＣＡが除かれた精製抗ヒトＣ
ＥＡ血清として得られる。凍結乾燥物は抗ヒト血清に対
して１：１〜１０の割合で用いる。
）に溶解し、抗ヒト血清と４℃で混合し、１６時間放置
後、８〜１０分間、８，０００〜１０．００Ｏｒｐｍで
遠心分離する。上清液がＮＣＡが除かれた精製抗ヒトＣ
ＥＡ血清として得られる。凍結乾燥物は抗ヒト血清に対
して１：１〜１０の割合で用いる。
得られた抗ヒトＣＥＡ血清は、癌細胞および好中球を含
有する組織を対象として用いて、免疫組織染色（消化器
と免疫１２ ｉ ２０７−２１４．１９８４＞ により
ＮＣＡの反応産物の不在を確認する。
有する組織を対象として用いて、免疫組織染色（消化器
と免疫１２ ｉ ２０７−２１４．１９８４＞ により
ＮＣＡの反応産物の不在を確認する。
以下本発明の実施例を示す。
実施例１
屠殺直後の牛牌１ｉｉ１！Ｌｏｇに２０ｍ１の生理食塩
水を加え、ブレンダーを用いて３．００Ｏｒｐｍで１０
分間ホモジナイズした。これに３Ｑｍｌの１．２モル過
塩素酸を氷冷下加え、１１００ｒｐで３０分間攪拌して
ＮＣＡを抽出した。抽出物を８．００Ｏｒｐｍで３０分
間遠心分離し、得られた上澄液を蒸留水で３回（３昼夜
）、５ｍＭ炭酸水素す）ＩＩウムで１回く１昼夜）およ
び蒸留水で１回（１昼夜）透析を行った。透析夜を１０
．００Ｏｒｐｍで２０分間遠心分離し、上澄液を凍結乾
燥（−３０℃、７６０ｍｇＨｇ、約３日間）した。
水を加え、ブレンダーを用いて３．００Ｏｒｐｍで１０
分間ホモジナイズした。これに３Ｑｍｌの１．２モル過
塩素酸を氷冷下加え、１１００ｒｐで３０分間攪拌して
ＮＣＡを抽出した。抽出物を８．００Ｏｒｐｍで３０分
間遠心分離し、得られた上澄液を蒸留水で３回（３昼夜
）、５ｍＭ炭酸水素す）ＩＩウムで１回く１昼夜）およ
び蒸留水で１回（１昼夜）透析を行った。透析夜を１０
．００Ｏｒｐｍで２０分間遠心分離し、上澄液を凍結乾
燥（−３０℃、７６０ｍｇＨｇ、約３日間）した。
凍結乾燥粉末を１ｍｌのリン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，２
）に溶かし、４℃で家兎抗ヒトＣＥＡ血清（ＤＡＫＯ社
製）に１：１および１；５の割合で加えた。混合液を１
夜放置後１０． ＯＯＯｒｐｍで１０分間遠心分離を行
った。
）に溶かし、４℃で家兎抗ヒトＣＥＡ血清（ＤＡＫＯ社
製）に１：１および１；５の割合で加えた。混合液を１
夜放置後１０． ＯＯＯｒｐｍで１０分間遠心分離を行
った。
上澄液を、最終希釈濃度がｉ、ｏｏｏ倍になるようにリ
ン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，２）（以下ＰＢＳという）で
希釈して、パラフィン包埋した直腸癌の免疫組織染色を
下記のとおり行った。
ン酸緩衝食塩水（ｐＨ７，２）（以下ＰＢＳという）で
希釈して、パラフィン包埋した直腸癌の免疫組織染色を
下記のとおり行った。
パラフィン包埋した直腸癌の免疫組織片をキシレン、エ
タノールで処理して脱パラフィンし、水洗した。０．３
％過酸化水素を加えたメタノールに浸した後水洗した。
タノールで処理して脱パラフィンし、水洗した。０．３
％過酸化水素を加えたメタノールに浸した後水洗した。
ＰＢＳにて洗浄し、ＮＣＡをあらかじめ吸収した抗ヒト
ＣＥＡを反応させ、ＰＢＳ洗浄後、パーオキシダーゼ標
識抗家兎ＩｇＧと反応させた。ＰＢＳで洗浄後、３．３
′−ジアミノベンチジン・４塩酸塩の発色基質液と反応
させた。水洗後、１％メチルグリーンで核染色を行い、
エタノール、キシレンで脱水、封入後顕微鏡観察した。
ＣＥＡを反応させ、ＰＢＳ洗浄後、パーオキシダーゼ標
識抗家兎ＩｇＧと反応させた。ＰＢＳで洗浄後、３．３
′−ジアミノベンチジン・４塩酸塩の発色基質液と反応
させた。水洗後、１％メチルグリーンで核染色を行い、
エタノール、キシレンで脱水、封入後顕微鏡観察した。
ＮＣＡによる吸収の対照として未吸収の抗ＣＥＡ抗体を
使用した。
使用した。
この結果、１：１および１：５とも癌組織のみが染色さ
れ、好中球を指標としたＮＣＡの反応産物（まδ忍めら
れなかった。
れ、好中球を指標としたＮＣＡの反応産物（まδ忍めら
れなかった。
実施例２
屠殺直後の馬肺臓１０ｇを用い実施例１と同様の操作を
行い、凍結乾燥粉末を得た。
行い、凍結乾燥粉末を得た。
凍結乾燥粉末を、家兎抗ヒトＣＥＡ血清に対し１：１，
１：５および１：１０の割合で用いる以外は実施例１と
同様に行った。
１：５および１：１０の割合で用いる以外は実施例１と
同様に行った。
その結果、１：１０において癌組織のみが染色され、好
中球を指標としたＮＣＡの反応産物は認められなかった
。しかし１：１．ｌ：５においてＮＣＡの反応が僅かに
認められた。
中球を指標としたＮＣＡの反応産物は認められなかった
。しかし１：１．ｌ：５においてＮＣＡの反応が僅かに
認められた。
Claims (3)
- （１）ヒト以外の動物臓器の非特異的交差反応抗原（以
下ＮＣＡという）または該ＮＣＡ含有物質を用いて抗ヒ
ト癌胎児性抗原（以下ＣＥＡという）血清中の抗ＮＣＡ
抗体の吸収、除去を行うことを特徴とする抗ヒトＣＥＡ
血清の精製法。 - （２）ヒト以外の動物が、牛、馬、羊および山羊から選
ばれる特許請求の範囲第１項の方法。 - （３）臓器が、肺臓および脾臓から選ばれる特許請求の
範囲第１項の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18055886A JPS6337257A (ja) | 1986-07-31 | 1986-07-31 | 抗ヒトｃｅａ血清の精製法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18055886A JPS6337257A (ja) | 1986-07-31 | 1986-07-31 | 抗ヒトｃｅａ血清の精製法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6337257A true JPS6337257A (ja) | 1988-02-17 |
Family
ID=16085378
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18055886A Pending JPS6337257A (ja) | 1986-07-31 | 1986-07-31 | 抗ヒトｃｅａ血清の精製法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6337257A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0434363A (ja) * | 1990-05-31 | 1992-02-05 | Hitachi Chem Co Ltd | 微生物に対する抗体検出方法 |
| JP2010243430A (ja) * | 2009-04-09 | 2010-10-28 | Japan Health Science Foundation | 抗体精製方法 |
-
1986
- 1986-07-31 JP JP18055886A patent/JPS6337257A/ja active Pending
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0434363A (ja) * | 1990-05-31 | 1992-02-05 | Hitachi Chem Co Ltd | 微生物に対する抗体検出方法 |
| JP2010243430A (ja) * | 2009-04-09 | 2010-10-28 | Japan Health Science Foundation | 抗体精製方法 |
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