JPS63258443A - 新規アルキルアルカノエートおよびその製法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は新規なアルキルアルカノエート、その製法およ
び抗原に対するまたは免疫反応調節用のアジュバントと
してのアルキルアルカノエートの水性乳液状態での使用
に関する。

該新規アルキルアルカノエートは、下記式ｌＲ１−ＣＯ
−０−Ｒ２Ｉ （式中、Ｒ１は５．７．９．１１．１３．１５または１
７個の炭素原子を有する線状アルキル基を表し、そして
Ｒ２は６．８．１０．１２．１４．１６または１８個の
炭素原子を有する線状アルキル基を表す）に相当する。

ワクチンおよび免疫調節剤の製造には、抗原の免疫原作
用にあずかりそして（または）微生物の免疫防御を増強
する生理学的に許容されかつ好ましくは減成されうる化
合物を使用する。

抗原の免疫原作用を増大することができる水中油および
油中水乳液はｒ　Ａｄｖ、　Ｔｕｂｅｒｃ、　Ｒｅｓ、
　Ｊ７．１３０（１９５６年）およびｆ”　Ｖａｃｃｉ
ｎｅ　Ｊ　、第３巻第１６７頁（１９８５）に記載され
ている。これらの乳液に用いるパラフィン油は、生理学
的に減成可能ではあるが相当困難である。

脂肪酸エチルエステル、イソプロピルエステルおよびイ
ソブチルエステルのアジュバント活性は「工ｍｍｕｎｏ
ｌ○ｇｙＪ４４．１８７　Ｃ１９８１）に記載されてい
る。

該出版物によれば、このようなエステルのアジュバント
活性は前記酸が１６個またはそれ以上の炭素原子を有す
る場合のみに見られる。

驚くべきことに、本発明によれば水中油形の乳液の１成
分としてのへキシルヘキサノエートがマウス試験モデル
において免疫刺激作用およびアジュバント作用を有する
こと並びにその乳液がモルモット試験モデルにおいて非
常によく許容されることが見出された。

すなわち、本発明の目的は新規なアルキルアルカノエー
トを製造すること、それらを乳化剤を用いて水中油彩乳
液に変換することおよび該乳液をアジュバントおよび免
疫調節剤として使用することである。

前記目的は前記の定義を有する式１の化合物を製造する
こと、それらを生理学的に許容しうる乳液に変換するこ
と並びにそれらをワクチンに対するアジュバントおよび
ヒトモデルの免疫系を刺激するためのアジュバントとし
ての許容性および効力について試験することによって達
成される。

本発明は前記特許請求の範囲に定義されているとおりで
ある。以下にさらに実施態様を記載する。

該アルキルアルカノエートは、エステル製造のための有
機化学において既知の方法で、例えばメチレンクロライ
ドまたはエーテルのような溶媒および例えばピリジンま
たはトリエチルアミンのような塩基の存在下においてア
ルカノイルハライドとりわけアルカノイルクロライドお
よびアルコールから製造される。

すなわち、本発明はまた前記定義を有する式■の化合物
の製造方法にも関する。その方法は　５一 式■ ＲＩＣＯ，Ｘ　　　　　ｎ （式中、Ｒ１は式Ｉの場合に示した定義を有しそしてＸ
はＣＯ基を活性化する原子であるかまたはそのような活
性化基である）の化合物を式■Ｒ２０ＨＩＩＩ （式中、Ｒ２は式Ｉの場合に示した定義を有する）の化
合物と反応させて式■の化合物を得ることからなる。

本発明の目的に適った安定な乳液は、１種またはそれ以
上の式Ｉの化合物、１種またはそれ以上の乳化剤および
水または生理学的緩衝溶液および（または）抗原溶液を
乳化することによって調製される。

適当な乳化剤、それらの化学的および物理的性質並びに
それらの使用は［Ａｒｚｎｅｉｆｏｒｍｅｌｌｅｈｒｅ
（Ｐｒｅｓｃｒｉｐｔｉｏｎ　Ｔｈｅｏｒｙ　）　Ｊ　
ＷｉｓｓｅｎｓｃｈａｆｔｌｉｃｈｅＶｅｒｌａｇｓｇ
ｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ　ｍｂＨＥｌｔｕｔｔｇａｒｔ
発行、１９８２年（１５７〜１６４頁）に記載されてい
る。

適当な乳化剤は例えば慣用の乳化剤例えばレシチン類、
サポニン類、脂肪アルコール、糖おヨヒ糖アルコールの
脂肪酸エステル類、エチレンオキシド縮合物またはグリ
セロール縮合物であるが、これらは薬理学的および生理
学的に許容されることが必要である。

本発明による乳液は、下記ａ）〜ｄ） ａ）１種またはそれ以上のアルキルアルカノニー　ト　
　　０．１〜ｊ　　Ｏｄ／１　００ｄ　。

ｂ）　　１種またはそれ以上の乳化剤　０．０１〜４〇
−／１００ｍ、 Ｃ）水または緩衝溶液 および（または） ｄ）１ｍまたはそれ以上の抗原溶液５０〜９８−／１０
０ｍｊ、 を含有する。

前記エステルは液体であるか、または穏やかに加温する
ことにより液化されうる。

抗原を含有する乳液はアジュバントとして使用すること
ができ、そして抗原を含有しないそれはを推動物好まし
くは飼育用動物および家畜における免疫刺激剤として使
用することができる。ヒトへの使用はサルの場合の研究
に基づいて可能であると思われる。

このようにしてアジュバントを加えた抗原はウィルス、
バクテリア、細胞もしくは蛋白質抗原または遺伝子工学
によって製造される抗原とりわけよりＲ（ウシの感染性
鼻腔気管炎）抗原、ＢＡＶ　−３（ウシのアデノウィル
ス、血清型３）、ＦＭＤ　（足および口の疾患）ウィル
ス、アウジェスキー氏ウィルス（Ａｕｊｅｓｚｋｙ’ｓ
　ｖｉｒｕｓ　）、Ｐ工３（パラインフルエンザ、６型
）ウィルスまたはＲ８Ｖ　（ラウス肉腫ウィルス）が好
ましい。

以下に、本発明を実施例により詳記するが、゛それらは
本発明を限定するものではない。

実施例　１ アルキルアルカノエートの製造 オクチルヘキサノエート（化合物１） オクタツール１００９（０，７６８モル）ヲメチレンク
ロライド４０〇−中に溶解した。ピリジン３０〇−を添
加後その溶液なＯ″Ｃに冷却した。次いでメチレンクロ
ライド３００ゴ中に溶解したヘキサノイルクロライド１
１０．２４７（０，８１９モル）を攪拌下０℃で滴下し
て加えた。この反応溶液を引き続き室温で１４時間攪拌
した。反応の過程を薄層クロマトグラフィー（移動相：
ヘキサン／ジイソプロピルエーテル３：１；反応生成物
のＲｆ値０．７８）によりモニターした。反応混合物を
水ポンプ真空下（真空中）において蒸発させてシロップ
状物を得た。生成物を石油エーテル中に溶解し、水およ
び希塩酸で完全に洗浄した。真空中での蒸発後に得た生
成物を高真空（０，０１５ミリバール）下で蒸留した。

収量１４８ｇ（化合物１） 沸点＝８６℃（０，０１５ミリバールで）１５Ｃ−ＮＭ
Ｒ（９０ＭＨｚ　、　ＣＤＣｌ２、δ）　：　１７１．
４８（ｃｏｏ）、６５．１２　（ＣＨ２Ｏ）、３２．５
〜２１．４５　（１０Ｘ＋、ＣＨ２）、１４．６２　（
２ＸＣＨ３） 化合物１の化学純度はガスクロマトグラフィーにより確
認した。

実施例　２ 実施例１に従って下記のアルキルアルカノエート ｃＨ３−（ｃＨ２）ｎ−ｃｏｏ−（ｃＨ２）ｍ−ｃＨ５
が製造された。

表　　１ ３　　　　　　　　６　　　　　１０　　　　　１０１
（０，００４ミリノシール）４　　　　　　６　　　　
１２　　　１１Ｂ（０，００３ミリノシール）５　　　
　　　　　８　　　　　　　６　　　　　　　８５（０
，０１５ミリノシーヅレ）６　　　　　　　　８　　　
　　　　８　　　　　１０４（０，００３ミリノシール
）７　　　　　　　　８　　　　　１０　　　　１２４
（０，００３ミリノシール）化合物Ａｉ　　　ｎ　＋２
　　　ｍ　＋　１　　　　　　沸　点　（°Ｃ）ワクチ
ンに対するアジュバントの調製および添加に関する実施
例 使用される量は、ｍ／／１００ｍ水性緩衝溶液または懸
濁液で示されている。

実施例　６ 不活化ＩＢＲ（ウシの感染性鼻腔気管炎）抗原について 抗原としてＩＢＲウィルスを用いて下記組成からなるワ
クチンを調製した。よりＲウィルスは組織培養例えば子
牛の腎臓培養中で増殖される。

細胞が完全に破壊した後にウィルスを採取し、遠心分離
にかけ、濾過し次いで６７℃で２４時間ホルマリン１：
１０００で不活化する。この不活化されたウィルスはワ
クチン抗原でありそしてこれをＵｌ　ｔｒａｔｕｒａｘ
処理の下、一定の順序でアジュバントに加え次いでモル
モットおよび無毛マウスで試験する。

ワクチン１：ドデシルデカノエート　　　　　　４．０
トウイーン（登録商標）８１乳化剤　　　　１．０バイ
エルＢ６１Ｅ　１８８１／１１消泡剤　　　　０．５Ｉ
ＢＲ抗原　　　　　　　　　　　９４．５ワクチン２ニ
ドウイーン（登録商標）８１　　　　　　　１．０バイ
エル：Ｆ６１Ｆ　１８８１／１１消泡剤　　　０，５Ｉ
ＢＲ抗原　　　　　　　　　　　９８．５ワクチン３　
：　ＩＢＲ抗原　　　　　　　　　　　　１００．０ワ
クチン４：ヘキサデシルパルミテート　　　　　　ｔ５
トウイーン（登録商標）８１　　　　　　　０．５ＩＢ
Ｒ抗原　　　　　　　　　　　９８．０ワクチン５：オ
クチルオクタノエート　　　　　　　５．０トゥイーン
（登録商標）　８１　　　　　　　　１．０バイエルＥ
６１Ｅ　１８８１／１１消泡剤　　　Ｃ１，５ＩＢＲ抗
原　　　　　　　　　　　９４．５ワクチン６：ドデシ
ルデカノエート　　　　　　　　　５．０トウイーン（
登録商標）　８１　　　　　　　　１．０バイエルＥ６
１Ｅ１８８１／１１消泡剤　　　　０．５ＩＢＲ抗原　
　　　　　　　　　　９３，０サポニン　１０ｍ／１０
０イ溶液　　　　　　０．５ワクチｙ７　：　Ａｚ（ｏ
Ｈ）３２９／１０Ｃ１ｒｒｄｌ懸濁液　　　　６９０Ｉ
ＢＲ抗原　　　　　　　　　　　６１．０許容性の試験 モルモットおよび無毛マウスで前記各ワクチンの許容性
を試験した。６匹のモルモットからなる各群にイントラ
プランタリリー（１ｎｔｒａ　−ｐｌａｎｔａｌｌｙ　
）に各ワクチンを注射しそして６匹の無毛マウスからな
る各群に各ワクチンを皮下注射した。動物１匹当たりの
投与量は０．２−であった。無毛マウスでは、前記ワク
チン１〜５のいずれの場合にも局所反応およびまた一般
的なワクチン注射反応は全く検出されなかった。

ワクチン６および７は明瞭なワクチン注射による小節を
生じそしてそれらはワクチン乙の場合では１４日後にも
はや検出されなかったが、ワクチン７の場合では２１日
後依然として見ることができた。モルモットでは、前記
ワクチン１．４および５は短期の炎症反応を生じた。こ
の反応は、ワクチン６および７では相当により顕著であ
りそしてワクチン７では接種後２１日目に依然として肉
眼で見ることができた。

効力の試験 １３〜１５ｇ体重のＮＭＲＩマウス１０匹に、１口当た
り０．２−を用いて各ワクチンを皮下注射した。ワクチ
ン注射後６週開目にこれらの動物に上記と同一の投与量
を再注射した。ワクチン再注射後１週間目に各動物から
全採血しそして血清を得た。各動物の血清中に検出され
得た中和抗体力価は下記のとおりである。

光　２ １　　　１：２より小　　　　１：２２４２　　　１＝
２より小　　　　１：　１２４　　　　　　　　　　　
　１：５４９５　　　　　　　　　　　　１＝１９８６
　　　１：２より小　　　　１：６９７７　　　　　　
　　　　　１：　２に の実施例よりはっきり示されることは、マウスおよびモ
ルモットでは試験したエステル全てがＡｔ（ｏＨ）３よ
りもよく許容されるということである。マウスでは、試
験したエステル全てはまたＡ２（ＯＨ）３よりも有効で
ある。ワクチンの効力は前記エステル＋サポニンの組合
せによってかなり増強される（ワクチン１およびワクチ
ン６を比較されたい）。

実施例　４ 下記６種のワクチンを不活化ＩＢＲ抗原を用いて調製し
次いで畜牛について許容性および効力を試験した。

ワクチンＡ（対照）は下記成分を含有した。

サポニン　１　Ｄｍ／１００ｄ　　　　　　　　　　　
０．５ＩＢＲ抗原　　　　　　　　　　　　　　９９５
ワクチンＢは下記成分を含有した。

ヘキシルヘキサノエート　　　　　　　　　　　　　　
５．０トウイーン（登録商標）８１　　　　　　　　　
　　　　ｔ。

サポニン　１０ｍ／１００ｄ　　　　　　　　　　　　
０．５パイｘｙ　Ｅ６１Ｅ　１８８１／１１消泡剤　　
　　　　（１，５ＩＢＲ抗原　　　　　　　　　　　　
　　９３．０ワクチンＣは下記成分を含有した。

ドデシルデカノエート　　　　　　　　　　　　５．０
トウイーン（登録商標）　８１　　　　　　　　　　　
　１．０−４’ｉ’− サポニン　１０づ／１００ｍ　　　　　　　　　ｏ、ｓ
パイｘルＥ６１Ｆｉ　１８８１／１１消泡剤　　　　　
０．５ＩＢＲ抗原　　　　　　　　　　　　９３．。

抗よりＲ抗原不含の畜生２匹からなる各群に各ワクチン
５．０−を用いて３週間間隔で２回皮下注射した。ワク
チン再注射後１週間目に血液試料を前記動物から採取し
次いでその血清中においてＩＢＲウィルスに対する中和
抗体を測定した。

その際測定された抗体力価は下記のとおりである。

表　　３ Ａ　　　ｊ：　２５７ １：　３８２ Ｂ１：８７６ １：１１４９ Ｃ１：　９９４ １：２０４４ 前記３種すべてのワクチンの許容性は良好であった。ワ
クチンＢおよびＣの抗体力価は明らかにワクチンＡのそ
れよりも高い。

実施例　５ 不活化よりＲ抗原から下記のワクチンを調製した。

ワクチン１： レシチン、２０９／１００＋＋＋７！懸濁液　　　１０
．０ＩＢＲ抗原　　　　　　　　　　　　９０．０ワク
チン２： ドデシルデカノエート　　　　　　　　　５．０レシチ
ン、２０９／１００ゴ懸濁液　　　１０．ＯよりＲ抗原
　　　　　　　　　　　８５．００ワクチン３： ドデシルデカノエート　　　　　　　　　５．０ｋｔｃ
ＯＨ）５２９／１００ゴ懸濁液　　　５．０ＩＢＲ抗原
　　　　　　　　　　　　９０．０ワクチン４： Ａｔ（ＯＨ）　５．２ｇ／１００−懸濁液　　　５．０
レシチン、２０９／１ｏｏ艷懸濁液　　　１００ＩＢＲ
抗原　　　　　　　　　　　８５．０モルモット２匹か
らなる各群に、前記４種のワクチン各々を０．５コ用い
て皮下に注射した。これら全ワクチンの許容性は良好で
あった。ワクチン注射後１０日日には局所反応はもはや
感じられなかった。これらのワクチン注射した動物の血
清中において中和抗体を測定することによって効力は証
明された（表４）。

表　　４ １　　　　１：２より小　　　　１：１２１：２より小
　　　　１：２８ ２　　１：１　　１１７ １：２１：８５ ３　　１：２　　１＝７８ １’２　　１：５２ ４　　１：２　　１：２７ １：２１：１４ これより明らかに示されることは、ドデシルデカノエー
ト含有ワクチンがＡｚ（ＯＨ）　５および（または）レ
シチン含有ワクチンよりも高い抗体保護（ワクチン２＋
３）を生起するということである。

実施例　６ ＩＢＲ抗原の代りに不活化ＰＩ３抗原を用いて実施例１
のように操作した。

ワクチン１：ドデシルデカノエート　　　　　　　４．
０トウイーン（登録商標）８１乳化剤　　　１．４バイ
エルＥ６１Ｂ／１１消泡剤　　　　　０．５ＰＩ３抗原
　　　　　　　　　　９４．５ワクチン２ニドウイーン
（登録商標）　８１　　　　　　１．０バイエルＥ６１
Ｅ／１１消泡剤　　　　　０．５ＰＩｓ抗Ｋ　　　　　
　　　　　　９ａ５ワクチン３　：　Ｐ工３抗原　　　
　　　　　　　　１００．０ワクチン４：ヘキサデシル
パルミテート１．５トウイーン（登録商標）８１　　　
　　０゜５ＰＩ４抗原　　　　　　　　　　９８．Ｏワ
クチン５：オクチルオクタノエート　　　　　　５．０
トウイーン（登録商標）　８１　　　　　　１．０パイ
エ＃　Ｅ６１Ｅ　１８１１／１１消泡剤　　　０．５ｐ
ｒ５抗原　　　　　　　　　　９４．５ワクチン６：ド
デシルデカフェート５．０トウイーン（登録商標）１　
　　　　　１．０バイエルＥ６１Ｅ　１８ｊ１／１を消
泡剤　　　０．５ＰＩ３抗原　　　　　　　　　　９３
６０サポニン、１０ｒｎｌ／１００−溶液　　　０．５
ワクチン７　ｊ　Ａｔ（ＤＨ）５．２９／１００−懸濁
液　　６９０Ｐ工３抗原　　　　　　　　　　６１．０
効力の試験 １３〜１５ｇ体重のＮＭＲエマウス１０匹に、１匹当た
り０．２７！を用いて各ワクチンを皮下注射した。ワク
チン注射後６週間口にこれらの動物に上記と同一の投与
量を再注射した。ワクチン再注射後１週開目に各動物か
ら全採血し、そして血清を得た。各動物の血清中に検出
され得た中和抗体力価は下記のとおりである。

表５ ＰＩ３ウィルスに対する中和抗体の力価１　　　１：２
より小　　　　１１７０２　　　１：２より小　　　　
１：　２４３　　　１：２より小　　　　１：　１４４
　　　１：２より小　　　　１：１９５　　　１：２よ
り小　　　　１：２１５６　　　１：２より小　　　　
１：４９７７　　　１：２より小　　　　１　：１１０
この実施例よりはっきり示されることは、マウスでは試
験したエステル全てがＡｚ（ＯＨ）３よりも有効である
ということである。ワクチンの効力はエステル／ホポニ
ンの組合せによってかなり増強される（ワクチン１およ
びワクチン６を比較されたい）。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １）下記式 I Ｒ＾１−ＣＯ−Ｏ−Ｒ＾２　 I （式中、Ｒ＾１は５、７、９、１１、１３、１５または
   １７個の炭素原子を有する線状アルキル基を表しそして
   Ｒ＾２は６、８、１０、１２、１４、１６または１８個
   の炭素原子を有する線状アルキル基を表す）を有するア
   ルキルアルカノエート。 ２）請求項１記載の式 I を有するアルキルアルカノエ
   ートの製造方法において、下記式II Ｒ＾１ＣＯ．Ｘ　II （式中、Ｒ＾１は請求項１記載の定義を有しそしてＸは
   ＣＯ基を活性化する原子であるかまたは活性化基である
   ）の化合物を下記式III Ｒ＾２ＯＨ　III （式中、Ｒ＾２は請求項１記載の定義を有する）の化合
   物と反応させることからなる式 I の化合物の製造方法
   。 ３）免疫刺激のための、請求項１記載の化合物の使用。 ４）ワクチンに対するアジュバントとしての、請求項１
   記載の化合物の使用。