JPS63246335A - 肝炎ｂ抗原 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 明細θの浄書（１イ容に変更なし）　１↓Ｉｉ　”　ｌ
、　ｌ、ｈ＠３、発明の詳細な説明 本発明は肝炎Ｂに関するものである。より具体的には肝
炎Ｂのワクチンに関するものであり、かつ肝炎Ｂの抗原
をワクチンとして用いるために精製する方法に関するも
のである。

肝炎Ｂはウィルス性の肝炎の一種であって、全身性の感
染をうけるが、主たる病変は肝臓に現われる。この病気
は主に成人のものであって、主としてウィルスの長期保
有者からの感染の伝達によって維持されている。普通の
伝播経路は、輸血、感染された注射針や注射筒、切り傷
やひっかき傷のある皮膚、滅菌していない一科用器具、
唾液、性交、エアゾル化した感染血液との接触等である
。

肝炎Ｂの潜伏期は比較的長く、感染から臨床的発症まで
に６週間から６個月かかることもある。病気は普通疲労
と食欲不振から始まり、筋肉痛と腹部の不快を伴うこと
もある。

後に黄痘、黒い尿、軽い便、及び軽度の肝臓腫張が起る
こともある。ある場合には１発現は急激で１発熱、悪感
、白血球の増加を伴って開直が現れることもある。ある
場合には開直は決して現れず、患者はインフルエンザ様
の症状を感じるだけである。肝炎感染の多くは軽度の、
開直を伴わない症状になると考えられている。

本発明により精製された肝炎Ｂの表面抗原（ＨＢｓ抗原
）の出発物質は肝炎Ｂをもつ供与者から血漿搬出法（ｐ
ｌａｓｍａｐｈｏｒｅｓｉｓ）等によって得られた血漿
である。抗原の力価の測定は、ラジオイムノアッセイ、
受動的凝血反応、あるいは補体結合反応等の既知の方法
で行うことができる。血漿を冷却し、それによって生ず
る寒性沈殿（ｃｒｙｏｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅ）を軽度
の遠心分離て除く、清澄血漿中のＨＢｓ抗原は等密度バ
ンド化法（ｉｓｏｐｙｃｎｉｃ　ｂａｎｄｉｎｇｓｔｅ
ｐ）とそれに統〈速度ゾーンバンド化法（ｒａｔｅ　ｚ
ｏｎａｌ　ｂａｎｄｉｎｇ　５ｔｅｐ）によって単離さ
れる。

等密度ハント化法においては、部分精製した濃縮液を単
離される抗原と同じ密度を含む密度勾配を作った液体媒
体と接触せしめる。

ついで液体媒体を超遠心分離にかけることによって、血
清成分をそれぞれの密度によって密度勾配中に平衡な分
布に達せしめる。液体媒体の連続する分画を分離し、希
望する抗原を含む分画、即ろ、密度が約１．２１から約
１．２４ｇ／ｃｃである分画を分取する。この方法なＨ
Ｂｓ抗原の精製に応用することはドイツ特許明細帯温２
，０４９，５１５号及び合衆国特許ｔ５３，６３６，１
９１号に述べである。密度勾配を作る溶液の濃度は密度
範囲が約１．０から約１．４１ｇ／ｃｃになるように選
ぶ、液体媒体は直線勾配であっても、段階的勾配であっ
てもよい、より好ましくは５分画に対するその固有のよ
り高い能力のため、段階的勾配の形式で用いられる。

速度ゾーンバント化法においては、部分精製した濃縮液
を密度勾配をもつ液体媒体と接触せしめ超遠心分離を行
うが、今回は速度ゾーン法を用いる。即ち、平衡には達
しないような速度と時間で行い、）ＩＢｓ抗原及び他の
血清成分が媒体中での沈降定数によって媒体中に分布す
るようにする。勾配を作る溶液の濃度は密度範囲が約１
．０から約１．２８ｇ／ｃｃにわたるように選ぶ、速度
ゾーン法はＨＢｓ抗原が１．１３から１．１６の密度範
囲にくるまで行う、この時点で、ＨＢｓ抗原は粗血漿蛋
白の大部分から分離され、最も重要なことには、血漿中
のマクログロブリン補体から分離される。速度ゾーン法
工程を希望するＨＢｓ抗原が平衡の位置、すなわち、密
度にして約１．１８から１．２０ｇ／ｃｃに達するまで
行うと、血漿中のマクログロブリン分画が、希望するＨ
Ｂｓ抗原の分画中に不純物として混ってくることがわか
った。

等密度バンド化法及び速度ゾーン法工程において用いる
液体媒体は適当なる範囲の密度勾配なら何でもよい、ｖ
ｅ来の技術ではそのような溶液の溶質には地動、臭化カ
リウム、塩化セシウム、酒石酸カリウム等が含まれてい
た。

等密度バンド化法工程を簡便に行うには、エレクトロヌ
クレオニクスに等の遠心分離機を用い、動いていないロ
ーター中に塩溶液（ｓａｌｉｎｅ　５ｏｌｕｔｉｏｎ）
を満たし、ついで一定量（ａｌｉｑｕｏｔｓ）の順次密
度の大きくなる液体媒体溶液て塩溶液を押し上げて段階
的勾配を形成する。血漿は、底から最高密度の溶液を一
部分除くことによって、ローターの上から導入する。典
型的には、血漿の体積は段階勾配の体積の１５％から４
０％である。遠心分離機は、最初のりオリエンテーショ
ンフェース間に混ざるのを防ぐようにプログラムされた
速度制御システムによって速度をあげる。平衡に到達し
て生成物が適当なる密度の位置にある時に、元の配置に
リオリエンテーションする際に混ることがないように、
同じ速度制御システムによってローターの速度をおとす
。次いて勾配を下からぬいていき、適当なカットした密
度範囲を集める。同様の方法を速度ゾーン法においても
用いる。速度ゾーンバンド化法による適当なる密度範囲
の分画が所望の肝炎Ｂの抗原の濃縮液である。ＨＢｓ抗
原のサイズが２０ｎ、と小さいため１導布度バンド化工
程は時間がかかり、１８時間もの遠心分離処理を必要と
する。その結果、毎日２４時間、毎週７日間運転しても
、遠心分離機一台当り４バツチの清澄血漿な処理しつる
のみである。遠心分離機の台数を増やせば生産性は上が
るが、遠心分Ｓ機一台は約ｌＯ万トルもするので、厖大
な資本投資が必要となる。

等密度バンド化用勾配を多数回負荷（ｍｕｌｔ−ｉｐｌ
ｃ　ｌｏａｄｉｎｇ）することによって生産性が大きく
向上し、操作の費用が大幅に減少することかわかった。

多数回負荷とはＨＢｓ抗原を含む清澄血漿のサンプルを
、等密度バンド化の条件で、ＨＢｓ抗原の実質的に全部
が勾配の中に入るのには効果的であるか、平衡に到達す
るのには非効果的な時間たけ処理し、この工程をＨＢＳ
ｖＬ原を含む清澄血漿の別のサンプルを用いて少くとも
もう１回くり返した後、等密度バンド化処理を平衡に連
するのに充分な時間だけ行う、望ましい場合には、同一
の勾配を清澄血漿で６回まで負荷できる。

清澄血漿中の）ＩＢｓ抗原が勾配中に入るのに要する時
間は平衡に達するのに要する時間のごく一部であるから
、そしてまた、その後の平衡に達するのに要する時間は
、勾配を１回だけ負荷しても多数回負荷しても同じだか
ら時間が大幅に短縮でき、単位処理費用が安くなる。

本発明による多数回バント化法による生産性の向上と費
用の削減は、適龜なる勾配のいずれを用いても行いうる
が、望ましくは勾配は臭化ナトリウムによるものである
。

等密度バンド化法は約４０，０００ｇから約８０．００
０ｇで約１０時間以上遠心分離して平衡に達するまで行
う、しかしながら、血漿を約４時間遠心分離するとほと
んど全てのＨＢｓ抗原か等密度バンド他用勾配中に入る
がわかっている１次いで用いた血漿のサンプルを除き、
最初に用いたのと同じ体積の血漿標品な勾配の上に重層
する。その後前と同様の条件で約１０時間以上遠心分離
して両方の標品中のＨＢｓ抗原が勾配中の平衡密度領域
（約１．２１から約１．２４ｇ／ｃｃ）　ニ入りバンド
形成を完了させることができる。あるいは別法として、
遠心分離を４時間行い、用いた血漿を除き、３＃目の新
しい血漿を勾配上に重層することができる。この多数回
負荷法を６回あるいはそれ以上行ってから約１８時間遠
心分離してからバンド形成を完了してもよい。

チャージする血漿の体積と勾配の体積の比は約１．３か
ら約１．６である。血漿を１回たけ勾配にチャージして
等密度バンド形成条件下で遠心分離すると（例えば、Ｋ
＝■遠心遠心分離筒分：１０，０００回転、約１６時間
から約２０時間遠心分離処理）、最初の血漿中の蛋白看
によるが、生成物は普通１．０文の容量中に約４−１０
−ｇ／ｍｌの蛋白質含有量となる。

血漿を２回勾配にチャージし、等密度バンド形成条件下
で遠心分離すると（毎分３０，０００回転で約１６時間
から約２０時間）、最初の血漿中の蛋白質量によるが、
生成物中の蛋白質量は行ったチャージ回数について加算
的になり、典型的には１．０文の容量中に約８８−２０
ｖ／ｍｌとなる。蛋白質量はこのように勾配に血漿をチ
ャージする毎に増大する。

生成物は次いで速度ゾーンバンド化法を行う、速度ゾー
ンバンド化はＨＢｓ抗原が約１．１３から１．１６ｇ／
ｃｃの密度領域にくるまで行う、典型的にはこれは約１
６時間から約２０時間を要し、より好ましくは、約３０
，０口Ｏｇから約６０，０００ｇで約１７箸間ないし、
約１８時間である。

本発明の一面によると、多数回負荷法を用いるか否かは
別として、勾配は臭化ナトリウムを用いて作る。これま
で用いられている材料に比して臭化ナトリウムには明白
な利点かある。臭化ナトリウムの溶解度は冷蔵温度（２
〜６℃）で勾配を作る際に高密度溶液を使うのに適して
いる。塩化セシウムのような塩を使う場合に比して、残
存のあるいはＨＢｓ抗原に結合したセシウムイオンによ
る人体への毒性の問題を解決する必要がないのみならず
、経済的にも明らかに有利である。

臭化ナトリウムの勾配中では、生成物物理学的性質によ
ってＨＢｓ抗原に結合するイオンは全てナトリウムイオ
ンであり１人体の生物学的系には充分受容可能であり、
毒性の問題を起さない。

ＨＢｓ抗原の生物物理学的性質については既に充分な報
告かあり（臨床研究雑誌 （Ｊ、Ｃｌ１ｎｉｃａｌ　　Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏ
ｎ）第５２４．１１７６頁（１９７３年）ウィルス学雑
誌、（、ｏｆ　　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）第１θ巻、４６９
　　頁（１９７２年））、ｖｉ電荷をもった粒子である
。陽電荷をもつナトリウムイオンか高濃度に存在すると
、ナトリウム−ＨＢｓ抗原の塩分子か形成される。従前
の技術によって得られる製品に比して、本発明を実施す
るのに好ましい方法で得られるＨＢｓ抗原は他の陽イオ
ン、殊に外から加えたセシウムとカリウムイオンを実質
的に含まない。

臭化カリウムに比して、臭化ナトリウムの低温での溶解
度が大きいので生体物質の安定性のために助けになる低
温を用いることか可能であ委０段階的勾配を用いる方が
線形勾配に比して１段階の界面に不純物が集まり、１つ
の勾配でより大量の血漿を処理できるので望ましい。

本発明の抗原はそのままで肝炎Ｂの抗原として用いるこ
とかでき１会衆国特許第 ：ｌ、６３６，１９１号に述べであるように使用できる
１本発明によるＨＢｓ抗原は高度に精製されたものであ
る０等密度バンド化によりてＨＢｓ抗原は正常血漿蛋白
質に比して約１００倍精製される。速度ゾーン工程でＨ
Ｂｓ抗原は正常血漿蛋白質に関し更に２０倍精製される
。２つの工程を組合せることによってＨＢｓｖＬｊ；（
は正常血漿蛋白質について２０００倍生成される。得ら
れる生成物は、血清学や電気泳動の方法では血液層物質
Ａ及びＢを実質的に含まないことが示された。更に、本
発明の抗原は１９７５年５月１４日出願の同時係属中の
特許出願第５７７．４８３号の肝炎Ｂ抗原の出発物質と
して使用できる。

以下の実施例によって本発明をより具体的に説明するが
、これらは本発明の範囲を限定するものではない。

実施例１ 遠心機、エレクトロヌクレオニクスに、のローターを８
４００ｍ１の燐酸バッファーで充たす、脱気のためにロ
ーターを毎分１０，０００回転まで回転させた後、下記
の段階的勾配をとまっているローターの底部に注入する
。

１、　１０％臭化ナトリウム　ρ＝　１．０８　２４０
０ｓ＋１２．２０％臭化ナトリウム　ρ＝　１．１７　
１０００ｇ＋１３．３０％臭化ナトリウム　ρ＝　１．
２８　１５００ｍ１４．４０％臭化ナトリウム　ρ＝　
１．４１　　コラ００１オーストラリア抗原（ＨＢｓ抗
原）を含む血漿１７５０ｇｅｌを、ローターの底部から
４０％臭化ナトリウム１７５１１ｍｌを除きつつ、静Ｉ
Ｆシているローターの上部に加える。ローターを毎分３
０，０００回転に加速し、この速度で１８時間運転する
。ローターをとめた後、１．２１−１．２４の密度領域
のＨＢｓ抗原に富んだ部分５００　ｍｌを集め、燐酸バ
ッファーに対して透析する。

次いでローターを燐酸バッファーて充たし、上述と同様
に脱気し、下記の段階的勾配を静止したローターの底部
に注入する。

１、　５％庶地動ρ＝　１．０２　２４００ｍ１２．１
５％庶糖地動＝　１．０６　１７５０ｓ＋１３．２５％
庶糖地動＝　１．１０　１７５０ｍ１４．５０％庶糖地
動＝　１．２３　２５００ｍｌ臭化ナトリウム中てのバ
ンド化工程で得られたＨＢｓ抗原に富む分画５００　ｍ
ｌを、５０％庶糖地動０　ｍｌをローターの底部から除
去しつつ、ローターの上部に加える。その後ローターは
毎分ｚａ、ｏｏｏ回転で１８時間運転する。ローターを
とめてから、　１．１３５〜１．１［ｉ５密度領域にあ
るＨＢｓ抗原に富む分画５００１を集める。

実施例２ 遠心機、エレクトロヌクレオニクスｋ、のローターを燐
酸バッファー、８４００ｍ１で充たす、脱気するために
、最高毎分ｔｏ、ｏｏ。

回転でローターを回転させてから、下記の段階的勾配を
静止したローターの底部に注入する。

１、　１０％臭化ナトリウム　ρミ１．０８　２４００
＋＊１２．２０％臭化ナトリウム　ρ冨１．１７　１０
００ｍ１３、３０％臭化ナトリウム　ρ暑１．２８　１
５００ｍ１４．４０％臭化ナトリウム　ρ±１．４１　
３ＳＯＯｍｌＨＢｓ抗原を含む血漿１７５０ｍ１を、　
４０％臭化ナトリウム１７５０ｍ１をローターの底部か
ら除きつつ、静止したローターの上部に加える。ロータ
ーは毎分３０，０００回転に加速し、この速度で４時間
運転する０次いでローターをとめ、４０％臭化ナトリウ
ム１７５０讃１をローターの底部に注入することによつ
て血漿を上から押し出す、更に１７５０層ｌのＨＢｓ抗
原を含む新しい血漿を、ローターの底部から同型の４０
％臭化ナトリウムを除きつつ、ローターの上に加える。

その後ローターは毎分３０，０００回転で１８時間回す
、ローターを止めてから、１．２１−１．２４の密度領
域にあるＨＢｓ抗原に富む分画１００Ｇ＋ｓｌを集め、
燐酸バッファーに対して透析する。

ローターを燐酸バッファーで充たし、上述と同様に脱気
し、下記の段階的勾配を静止したローターの底部に注入
する。

１、　　Ｓ％庶地動ρ＝１．０２　２４００謙１２．１
５％庶糖地動−１，０６１７５０寵１３．２ｓ％庶糖　
ρ＝　１．１（１１７５（１＊１４．５０％庶糖地動　
＝　１．２３　２５００ｍ１臭化ナトリウム中での等密
度バンド化工程で得られたＨＢｓ抗原に富む分画１０１
００Ｏを、５０％庶糖地動１００Ｏをローターの底部か
ら除きつつ、ローターの上部に注入する。

次いでローターを毎分２８，０００回転で１８時間運転
する。ローターをとめてから。

１．１３５〜１．１６５密度領域にあるＨＢｓ抗原に富
む分画１０１００Ｏを集める。

実施例３ 遠心機、エレクトロヌクレオニクスｋ、のローターを８
４０（１ｍ＋の燐酸バッファーで充たす、脱気のため、
ローターを最高毎分ｔｏ、ｏｏｏ回転で回してから、下
記の段階的勾配を静止したローターの底部に注入する。

１、　１０％臭化ナトリウム　ρ−１，０８２４００ｍ
１２．２０％臭化ナトリウム　ρ富１．１７　１０００
ｍ１３、　３０％臭化ナト！Ｊ　’ｌ　Ａ　　Ｐ　”　
１．２８　１５００ｔ１４．４０％臭化ナトリウム　ρ
＝　１．４１　３５００ｍｌＨＢｓ抗原を含む血漿１７
ｓＯｓ＋を、４０％臭化ナトリウム１７５０ｍ１をロー
ターの底部から除きつつ、静止したローターの上部に注
入する。ローターは毎分：ｌＯ，０００回転に加速して
この速度で４時間運転する。ローターをとめ、４０％臭
化ナトリウム１７５０ｍ１をローターの底部に注入する
ことによって血漿をローターのを上部から押し出す、更
に１７５０ｍ１のＨＢｓ抗原を含む新しい血漿を。

ローター底部から同量の４０％臭化ナトリウムを除きつ
つ、ローターの上部に加える。ローターを毎分３０，０
００回転に加速し、この速度で４時間運転する。ロータ
ーをとめ、更に３回目のＨＢｓ抗原を含む新しい血漿１
７５０ｍ１を、ローターの底部から同量の４０％臭化ナ
トリウムを除きつつ、ローターの上部に注入する。ロー
ターは毎分３０，０００回転で１８時間回す、ローター
をとめてから、１．２１〜１．２４の密度領域にあるＨ
Ｂｓ抗原に富む分画１ｓＯＯｓ＋を集め、燐酸バッファ
ーに対して透析する。

次いでローターを燐酸バッファーで充たし、上述と同様
に脱気し、下記の段階的勾配を静止したローターの底部
に注入する。

１、　　Ｓ％庶地動ρ＝１．０２　２４００１２．１５
％庶糖地動＝　１．０６　１７５０ｍ１３．２５％庶糖
地動＝　１．１０　１７５０ｍ１４．５０％庶糖地動　
＝　１．２３　２５ＱＯｍ１等密度ハント化工程で得ら
れたＨＢｓ抗原に富む分画１５００ｍｌを、５０％庶糖
地動００１１をローター底部から除きつつ、ローター上
部に注入する０次いでローターを毎分２８，０００回転
で１８時間運転する。ローターをとめてから、１．１：
１５〜１．１６５の密度領域にあるＨＢｓ抗原に富む分
画ｌ５ＯＯ＊Ｉを集める。

実施例４ 下記の表は、本発明による多数回負荷法を用いた場合（
実施例２及び３）、唯１回負荷した場合（実施例１）に
比して、単位時間当りの収量がずっとよくなることを示
している。

２　　　１０００　　　　　　４０　　　　　　　１１
．１％　　　　　１００％３　　　１５００　　　　　
　４４　　　　　　　２２．２　％　　　　２００　％
本発明の態様は例えば次のとおりである。

１、人間の肝炎Ｂ供給者の清澄血漿からＨＢｓ抗原を濃
縮する方法において、清澄血漿を臭化ナトリウム密度勾
配中で等密度バンド化させて、ＨＢｓ抗原に富む分画を
得ることを特徴とする方法。

２、密度勾配が段階的勾配である第１項による方法。

３、　臭化ナトリウム密度勾配中で等密度バンド化させ
た血漿からＨＢｓ抗原を精製する方法において、密度領
域が約１．２１ｇ／ｃｃから約１．２４ｇ／ｃｃの間で
ある等密度バンド分画を、ＨＢｓ抗原が約１．１３ｇ／
ｃｃから約１．１６ｇ／ｃｃの密度領域にくるまで、速
度ゾーン分画にかけることを特徴とする改良法。

４、人間肝炎Ｂ供給者の清澄血漿からＨＢｓ抗原を濃縮
する方法において、清澄血漿を臭化ナトリウム密度勾配
中で等密度バンド化せしめて得られた。ＨＢｓ抗原に富
む生成物をＨＢｓ抗原が約１．１３ｇ／ｃｃから約１．
１６ｇ／ｃｃの密度領域にくるまで、速度ゾーン分画法
にかけることを特徴とする改良法。

５、　８Ｂｓ抗原を含む清澄血漿を、ＨＢｓ抗原の実質
的に全部が清澄血漿から密度勾配に入るのには効果的で
あるが、ＨＢｓ抗原の等密度バンド化を完成するには非
効果的な条件下で、密度勾配中での部分的等密度バンド
化法にかけ、ＨＢｓ抗原の無くなった清澄血漿を取除き
、第一の工程を清澄血漿の新しいサンプルを用いて、少
くとももう一同くり返すことを特徴とする密度勾配を多
数回負荷する方法。

６、密度勾配が臭化ナトリウムからできている第５項に
よる方法。

７、　８Ｂｓ抗原を含む清澄血漿を、ＨＢｓ抗原の実質
的に全部が清澄血清から密度勾配に入るのには効果的で
あるが、ＨＢｓ抗原の等密度バンド化を完成するには非
効果的な条件下で、密度勾配中での部分的等密度バンド
化法にかけ、ＨＢｓ抗原の無くなった清澄血漿を取除き
、第一の工程を清′Ｆｅｉ血漿の新しいサンプルを用い
て少なくとももう一回くり返すことを特徴とする密度勾
配を多数回負荷する方法により得られる密度勾配。

８、）ＩＢｓ抗原を含む清澄血漿を、）ＩＢｓ抗原の実
質的に全部が清澄血清から密度勾配に入るのには効果的
であるが、ＨＢｓ抗原の等密度バンド化を完成するには
非効果的条件下で、密度勾配中での部分的等密度バンド
化法にかけ、ＨＢｓ抗原の無くなった清澄血漿を取除き
、第１の工程を清澄血漿の新しいサンプルを用いて、少
くとももう一回くり返すことを特徴とする密度勾配を多
数回負荷し、ついで平衡に達するのに効果的な条件下で
等密度バンド化法を続けることを特徴とする清澄血漿か
らＨＢｓ抗原を等密度バンド化させる方法。

９、密度勾配が臭化ナトリウムである第８項による方法
。

］０．ＨＢｓ抗原を含む清澄血漿を、ＨＢｓ抗原の実質
的に全部か清澄血清から密度勾配に入るのには効果的で
あるが、ＨＢｓ抗原の等密度バンド化を完成するには弊
効果的条件下で、密度勾配中での部分的等密度バンド化
法にかけ、ＨＢｓ抗原の無くなった清澄血漿を取除き、
第一工程を清澄血漿の新しいサンプルを用いて、少くと
ももう一回くり返すことを特徴とする密度勾配を多数回
負荷し、ついで、平衡に達するのに効果的な条件下で等
密度バンド化法を続けることを特徴とする清澄血漿から
ＨＢｓ抗原を等密度バンド化させる方法によって得られ
る密度勾配。

＋＋、密度勾配に起因するセシウム及びカリウムイオン
を実質的に含まないＨＢｓ抗原のナトリウム塩分子。

＋２．臭化ナトリウム溶液中に溶けた第１１項の生成物
を含む組ｒＩＬ物。

１３、溶液か臭化ナトリウムの段階勾配である第１２項
による組Ｊ＆物。

１４、臭化ナトリウムの密度か約１．２１に／ｃｃから
約１．２４ｇ／ｃｃである第１２項による組成物。

１５、臭化ナトリウムの密度が約１．１３ｇ／ｃｃから
約１．１６ｇ／ｃｃである第１２項による組成物。

１６、本質的に臭化ナトリウムの水溶液に溶けたＨＢｓ
抗原からなる組成物。

手続補正書 昭和６２年ｌＯ月１６日 ２、発明の名称　　肝炎Ｂ抗原 ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 ４、代理人 （１）「特許請求の範囲」を別紙の通り訂正する。

（２）明細書第１３頁第１７行目の 「ない、」の次に 「実施例２−４は参考例である。」を加入する。

（３）同上第７頁第１８行目の 「等密度バント」の前に 「なお参考のため述べると、」を加入する。

２、特許請求の範囲 １．　人間の肝炎Ｂ供給者の清澄血漿を臭化ナトリウム
密度勾配中で等密度ハント化せしめて得られた。　ＨＢ
ｓ抗原に富む生成物を精製する方法におし）て、 該清澄血漿の１回負荷による等密度バンド化によって密
度領域が約１．２１ｇ／ｃｃから約１．２４ｇ／ｃｃの
間である等密度バンド分画を得、これをＨＢｓ抗原が約
１．１３ｇ／ｃｃから約１．ｔ６ｇ／ｃｃの密度領域に
くるまで、速度ゾーン分画にかけることを特徴とする方
法。

２、　８度勾配が段階的勾配である特許請求の範囲Ｍ４
を項による方法。

手続補正書（放） 昭和６３年４月２０日

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、人間の肝炎Ｂ供給者の清澄血漿を臭化ナトリウム密
   度勾配中で等密度バンド化せし めて得られた、ＨＢｓ抗原に富む生成物を精製する方法
   において、 密度領域が約１．２１ｇ／ｃｃから約１．２４ｇ／ｃｃ
   の間である等密度バンド分画を、ＨＢｓ抗原が約１．１
   ３ｇ／ｃｃから約１．１６ｇ／ｃｃの密度領域にくるま
   で、速度ゾーン分画にかける ことを特徴とする方法。 ２、密度勾配が段階的勾配である特許請求の範囲第１項
   による方法。