JPS63216487A - メバロン酸の製造方法 - Google Patents

メバロン酸の製造方法

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JPS63216487A
JPS63216487A JP4962387A JP4962387A JPS63216487A JP S63216487 A JPS63216487 A JP S63216487A JP 4962387 A JP4962387 A JP 4962387A JP 4962387 A JP4962387 A JP 4962387A JP S63216487 A JPS63216487 A JP S63216487A
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JP
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mevalonic acid
nrrl
culture
ifo
atcc
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Akira Endo
遠藤 章
Seiji Koike
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野〕 本発明はメバロン酸の製造方法、特に、メバロン酸を高
収率で得る方法に関するものである。
尚、メバロン酸は酸型とラクトン型の2通りの構造を示
すが、相互に変換することが公知であり、以下本明細書
では特に断らない限り、両型を総称してメバロン酸とい
う。
〔従来の技術及び発明が解決しようとする問題点メバロ
ン酸は、ライト等によって始めて単離さレタ物質テアリ
(JAC3,7B、5273.1956) :I l/
スf ロールを始めとする各種イソプレノイド化合物の
重要な中間体として知られている。
又、メバロン酸は、種々の微生物及び植物に対して成育
促進作用を有する等、生物の代謝に重要な役割を果たし
ているため、微生物、植物等の成長促進剤として用いら
れ、また、ピレスロイド系農薬、ユビキノン(呼吸系補
酵素)、ドリコール(多糖類の生合成必須因子)、及び
脂溶性ビタミン等の前駆体等に用いられる。
従来これらの研究には化学合成されたラセミ体が使用さ
れており、天然型のメバロン酸は入手し難いものであっ
た。
天然型のメバロン酸の醗酵法による製造は、アプライド
・マイクロバイオロジー(Applied Micr。
biology)  1旦、965 (1968)や米
国特許第3.617,447号明細書にサツカロマイコ
ブシス・フィブリゲラ NRRL  Y−9069を用
いた例が記載されているが、その収量は低く、700〜
11000I1/−にとどまり、工業的な生産には到っ
ていないのが現状である。
従って、本発明の目的は、工業的に実施可能な程度に収
量の良いメバロン酸の製造方法を提供することにある。
〔問題点を解決するための手段〕
本発明のメバロン酸の製造方法の必須の構成要件はサツ
カロマイコブシス・フィブリゲラ(Saccharon
+ycopsts fibuligera)  I F
 OO107、IFO0103、IFO0104、IF
O0105、IFO0106、IFO0109、IFO
0111、IFO1665、IFO1711、IFO1
745、AHU  4113、JAM  4247、O
UT  6071.HtJT7234、ATCC208
0,ATCC2082、ATCC208B、ATCC9
947、ATCC2015、ATCC24945、AT
CC44872、ATCC46252、ATCC462
53、ATCC46949、ATCC52921、NR
RL  Y−1060゜NRRL  Y−1064、N
RRL  Y−2385、NRRL  Y−7061、
NRRL  Y−7221、NRRL  Y−7324
、NRRL  Y−7464、DSM  70554及
びこれらの変異株からなる群から選択した1種以上の微
生物を培養し、好ましくはIFO0107を培養し、次
いでその培養物からメバロン酸を得ることであ尚、rF
o、ATCC,NRRL、DSM、AHU、IAM、O
UT、HUTはそれぞれ財団法人醗酵研究所保存菌株、
アメリカン・タイプカルチャー・コレクシラン保存菌株
、ARSノーザンレジョナル・リサーチセンター保存菌
株、トイチェ・ザンムルング・フォノ・ミクロオルガニ
ズメン保存菌株、北海道大学農学部保存菌株、東京大学
応用微生物研究所保存菌株、大阪大学工学部醗酵工学科
保存菌株、広島大学工学部醗酵工学科保存菌株を示す。
本発明により、即ち上記微生物を用いてメバロン酸を製
造するには、例えば、米国特許第3,6IT、447号
明細書に示される如く、公知の方法を用いることができ
るが、好ましくは以下の方法によるのが良い。
即ち、炭素源、有機態窒素源、細胞膜の可溶化作用を持
つ非イオン界面活性荊及び無機塩類を所定量含有する培
地に微生物を接種し、20〜40℃、好ましくは25〜
35℃で震盪培養するか、10(1−50Orpm、好
ましくは200〜400 rpm、0.2〜1.5VV
M、好ましくは0.5〜1、OVVMで通気攪拌培養し
、所定時間培養した後、培養物における培養液(培養物
の培養濾液)中の炭素源濃度の測定、培養物のpHの測
定又は溶存酸素量の測定により、前記基質を培養物に流
加(添加)する、このような基質の流加を必要回数行い
、それ以上メバロン酸の生産量が向上しないと判断した
時点で培養を終了する。培養終了後、培養物を遠心分離
、濾過等公知の方法で菌体を除き、逆浸透法、減圧蒸留
等により濃縮するか、ブタノールや酢酸エチルを用いた
向流分配法或いはシリカゲル、ダイヤイオン、イオン交
換樹脂等を使用したカラムクロマトグラフィ法、分子蒸
留法、結晶化法等の公知の精製技術の組合せにより処理
してメバロン酸を得ることができる。
尚、本発明の方法における培地には、本発明の目的の範
囲内で、所望により消泡剤等を添加することができる。
また培養液中の炭素源濃度の測定は、グルコースオキシ
ダーゼを用いる酵素法等により行い、上記の「培養液」
は、培養物を遠心分離、濾過等により菌体等を除いた溶
液部である。
〔実施例〕
以下に本発明の実施例を示すが、本発明はこれらに限定
されるものではない。
尚、実施例、比較例におけるメバロン酸の定量は以下の
ようにして行った。
〔メバロン酸の定量方法〕
試料溶液0.8−をスピッチ管に取り、lN−HCl1
液を用いてpHを2に調整する。これにNazsOa 
 1gを加え、更に酢酸エチル2.0−を加えて攪拌後
、上層を取る。下層に更に酢酸エチル2.0−を加えて
攪拌後、上層を取り前回の上層と合わせる。再度この操
作を行い、酢酸エチル層計6.0 mを得、これを蒸発
乾固する。この乾固物を3,4−ジメトキシベンズアル
デヒドを内部標準としてガスクロマトグラフィにより定
量した。
尚、ガスクロマトグラフィの条件は以下の通り。
カラムサイズ:直径3鶴長さ10100Oステンレス製
) カラム液相:10%Thermon−3000カラムサ
ボー):chromosorb  WAW−0MC38
0〜100メツ シユ カラム温度=180℃ インジェクション温度:230℃ キャリアーガス二N□ (40m/分)〔実施例1、比
較例1〕 グルコース10重量%、マルトエキストラクト1重量%
、ペプトン0.51重量%、イーストエキストラクト0
.1重量%、KHt PO40,3重量%、Mg5Oa
  ・7Ht 00.05重量%、Cacos1重量%
、トライトン X−100(膜の可溶化作用を持つ非イ
オン界面活性剤)0.05重量%、残部水からなる培地
201と20(ldを用意し、該200−の培地にサツ
カロマイコブシス・フィブリゲラIFO0107を1白
金耳接種し28℃で3日間震盪培養しておいたものを、
上記201の培地に接種し、28℃、回転数300rp
m、通気@2017分でグルコース濃度、pH,溶存酸
素量を測定しつつ通気攪拌培養した。
培養3日目に培養液中のグルコース濃度が5%以下とな
り、その直後にpHが7を越え、溶存酸素量が極小値を
通過したことを確認し、この時点でグルコースの50重
量%水溶液を2.0賭流加し、培養を継続した。更に、
培養6日目及び培養9日目にそれぞれグルコースの50
重量%水溶液を2゜0kgを流加し、計12日間培養を
継続し培養を終了した。培養終了後、培養物から得たメ
バロン酸を、前記定量法により測定したところ、メバロ
ン酸の量は12100μg/−であった。
〔実施例2、比較例1〕 グルコース10重量%、マルトエキストラクト1重量%
、ペプトン0.5重量%、イーストエキストラクト0.
1重量%、KHt PO40,3重量%、Mg5O< 
 −IHz 00.05重量%、Ca COx1重量%
、塩化アンモニウム0.3重量%、残部水からなる培地
2(lと200−を用意し、該200−の培地にサツカ
ロマイコブシス・フィブリゲラIFO0107を1白金
耳接種し28℃で3日間震盪培養しておいたものを、上
記20Jの培地に接種し、28℃、回転数30Orpm
、通気量201/分で通気攪拌培養した。
6日間培養を41′IItして得られたメバロン酸の量
は3010μg/−であった。
また、サツカロマイコブシス・フィブリゲラのIFO0
107をNRRL  Y−9069に替えたほかは同様
にして培養した場合(比較例1)には、6日間培養を継
続して得られたメバロン酸の量は780μg/−であっ
た。
〔実施例3〕 実施例1の培地の1(ldを試験管に入れ、121’C
I5分で殺菌しサツカロマイコブシス・フィブリゲラの
、表−1に示した通りの菌株をそれぞれ1白金耳接種し
28℃、回転数25Orpmで震盪培養した。4日目、
8日目に50℃1%グルコース水溶液を1.Ogづつ流
加して12日間培養後、2500 r p m 10分
間遠心分離し、濾過液中のメバロン酸を定量した。この
ようにして得られたメバロン酸の量を表−1に示す。
表−1 〔実施例4〕 実施例1で得た培養物221を回転数5000rpmで
遠心分離し濾液15fを得た。これを逆浸透膜を用いて
51に?14縮後5OIC量%リン酸水を用いてpH2
とし、5j!の酢酸エチルで3回抽出し、酢酸エチル層
151を得た。これを0.02N水酸化ナトリウム水5
1に転溶し、50重壁量リン酸水にてpH2とした後、
ダイヤイオンHP−20カラム(11)を通した。この
流出液を、51の酢酸エチルで3回抽出し、酢酸エチル
層151を得た。これを無水硫酸ナトリウムにて脱水後
蒸発乾固させた。この乾固物を少量のアセトン/ベンゼ
ン(1/7)に溶解させ、シリカゲルカラムクロマトグ
ラフィー(150g)により分離した。その後メバロン
酸を含む両分を乾固し、無色の油状物1i91.4gを
得た。
比旋光度〔α〕iゝ−−22.0゜ (C−3,20、エタノール)であった。
〔発明の効果〕
本発明のメバロン酸の製造方法によれば、工業的に実施
可能な程度に高収量でメバロン酸を得ることができる。
手続補正書 昭和63年 2月20日 1、事件の表示 特願昭62−49623号 2、発明の名称 メバロン酸の製造方法 3、補正をする者 事件との関係  特許出願人 (038)旭電化工業株式会社 4、代理人 東京都港区赤坂九丁目6番29号 パシフィック乃木坂601号 自発補正(出願臼から1年3ケ月以内の補正)、6.補
正の対象 明細書の特許請求の範囲の欄及び発明の詳細な説明の欄
7、補正の内容 (1)特許請求の範囲の記載を別紙添付の通り補正。
(2)第2頁15行のr (JACS、 78.527
3.1956)Jを「(ジャーナル・オブ・ジ・アメリ
カン・ケミカル・ソサイエテイ(Journal of
 the AmericanChemical 5oc
iety) 78巻、5273〜5275頁、1956
年)」と補正。
(3)第4頁9行のrATCC9947、」を削除。
(4)第6頁13行の「ダイヤイオン」を[ポーラスポ
リマー樹脂」と補正。
(5)第8頁8行の「〔実施例1、比較例1〕」を「〔
実施例1〕」と補正。
(6)第11頁の表−1を別紙添付の通り補正。
(7)第12頁8行〜9行の「ダイヤイオンHP−20
」を「ダイヤイオンHP−20(登録商標)」と補正。
(8)第12頁13行〜14行の「シリカゲルカラムク
ロマトグラフィー(150g)Jを「シリカゲルカラム
クロマトグラフィー(ワコーゲルC−200(登録商標
)、1500g)Jと補正。
以上 2、特許請求の範囲 (11サツカロマイコブシス・フィブリゲラ(Sacc
haromycopsis fibuligera) 
 I F OO107、IFO0103、IFO010
4、IFO0105、IFO0106、IFO0109
、IFO0111、IFO1665、IFO1711、
IFO1745、AHU  4113、IAM  42
47、OUT  6071、)(UT7234、ATC
C2080SATCC2082、ATCC208B、A
TCC20145、ATCC24945、ATCC44
872、ATCC46252、ATCC46253、A
TCC46949、ATCC52921、NRRL  
Y−1060、NRRL  Y−1064、NRRL 
 Y−2385、NRRL  Y−7061、NRRL
  Y−7221、NRRLY−7324、NRRL 
 Y−7464、DSM  70554及びこれらの変
異株からなる群から選択した1種以上の微生物を培養し
、次いでその培養物からメバロン酸を得ることを特徴と
するメバロン酸の製造方法。

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. (1)サッカロマイコプシス・フィブリゲラ(Sacc
    haromycopsis fibuligera)I
    FO 0107、IFO 0103、IFO 0104
    、IFO 0105、IFO 0106、IFO 01
    09、IFO 0111、IFO 1665、IFO 
    1711、IFO 1745、AHU 4113、IA
    M 4247、OUT 6071、HUT 7234、
    ATCC 2080、ATCC 2082、ATCC 
    2088、ATCC 9947、ATCC 20145
    、ATCC 24945、ATCC 44872、AT
    CC 46252、ATCC 46253、ATCC 
    46949、ATCC 52921、NRRL Y−1
    060、NRRL Y−1064、NRRL Y−23
    85、NRRL Y−7061、NRRL Y−722
    1、NRRL Y−7324、NRRL Y−7464
    、DSM 70554及びこれらの変異株からなる群か
    ら選択した1種以上の微生物を培養し、次いでその培養
    物からメバロン酸を得ることを特徴とするメバロン酸の
    製造方法。
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AT88103319T ATE86664T1 (de) 1987-03-04 1988-03-03 Verfahren zur herstellung von mevalonischer saeure.
ES88103319T ES2053596T3 (es) 1987-03-04 1988-03-03 Un proceso para la produccion de acido mevalonico.
DE8888103319T DE3878946T2 (de) 1987-03-04 1988-03-03 Verfahren zur herstellung von mevalonischer saeure.
EP88103319A EP0281143B1 (en) 1987-03-04 1988-03-03 Process for producing mevalonic acid
US07/629,184 US5149641A (en) 1987-03-04 1990-12-17 Process for producing mevalonic acid
GR930400328T GR3007316T3 (ja) 1987-03-04 1993-03-11

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021041361A1 (en) * 2019-08-28 2021-03-04 Danisco Us Inc Methods for recovering mevalonic acid or salts or lactones thereof from aqueous solutions using water solvent crystallization and compositions thereof

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WO2021041361A1 (en) * 2019-08-28 2021-03-04 Danisco Us Inc Methods for recovering mevalonic acid or salts or lactones thereof from aqueous solutions using water solvent crystallization and compositions thereof

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