JPS63205564A - 過酸化水素定量用分析素子 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、過酸化作用を有する物質の存在下で過酸化水
素又は８酸化水素を′生成する物質を定量するに有用な
分析素子に関する。

〔発明の背景〕

グルコース、コレステロール、尿ａ等ヲ測定する方法と
して、一般にその酸化酵素、例えばグルコースオキシダ
ーゼ、コレステロールオキシグーゼ、ウリカーゼ等を作
用させて生成した過酸化水素を定量することにより目的
物を定量する方法が用いられている。

これらの過酸化水素の定量方法としては、過酸化作用を
有する物質の存在下に、色原体を酸化型に変化させたり
、１種又は２種の色原体を酸化縮合させて比色定量する
方法がよく知られている。

たとえば、次のような色原体が挙げられ、１種またはＷ
Ｌ種選んで用いられる。

１）　　ｏ−シアニジクン又はその塩 ２）　　ｏ−シリジン又はその塩 ３）グアヤク ４）　アドレナリン ５）フェノール７タレン ６）　７エロシアン化物 ７）　４−アミノアンチピリン及びその誘導体又はそれ
らの塩と、フェノール又はす７トール又はそれらの誘導
体との組み合わせ ８）アニリン及びその誘導体 ９）　　ｏ−）ルイジン、ｐ−トルイジン等のモノアミ
ン類 １０）　　ｏ−フェニレンジアミン、Ｎ、Ｎ−ツメチル
−ｐ−フェニレンジアミン、Ｎ、Ｎ−ノエチルフェニレ
ンジアミン、ベンツジン、ジアニシジン等のシアミン類 １１）フェノール、チモール、ｏ−、鎗−及びｐ−クレ
ゾール、ａ−す７トール、β−す７トール等の７二ノー
ル類 １２）　　カテコール、グアヤコール、オルシノール、
ピロガロール、９＋ｐ’−ジヒドロキシジフェニル、ク
ロログルシ／−ルのようなポリフェノール類 １３）サリチル酸、ピロカテキン酸、没食子酸のような
芳昏族のような酸 １４）　　ロイツマカライトグリーン、ロイコフェノー
ル７タレンのようなロイコ染料 １５）　　２．６−シクロロフエノールインドフエノー
ルのような着色染料 １６）エピネフリン、７ラボン類、チロシン、ジヒドロ
キシフェニルアラニン、トリゾ）７７ンのような種々の
生化学物質 １７）　　２．２’−アジツノ　（３−エチル−６−ス
ルホベンゾチアゾリン ノアミノベンジジンのような特殊染料 １８）　　２−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェノ
ール）−４．５−ビス　（ｐ−ノットキシアミ／７エ二
ル）イミダゾール １−９）　　ｐ−アニンジンと８−ヒドロキシアユ９ン
の組合わせ ２０）　　３−／チルー２ーベンゾチアゾリンヒドラゾ
ンとＮ，Ｎ−１７チルアニリンの組合わせ２１）　　そ
の他、グアヤツム、グアヤフン酸、ヨウ化カリウム、ヨ
ウ化ナトリウム及び他の水溶性ヨウ化物、並びにビリル
ビンのようす物質等。

上記のような化合物の組合せを色原体として用いる方法
は、従来公知の色原体に比べて定量感度も比較的高く有
用ではあるが、例えば生物学的流体試料（例えば血清）
中に存在する低レベルの床酸、クレアチニン、グルタミ
ン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（ＧＯＴ）、グル
タミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（ＧＰＴ）等を
過酸化水素に導いて定量する際には、定量すべき過酸化
水素の濃度が非常に低い為、これらの定量に対する識別
感度としてはまだ充分とは言い難い。

また酵素免疫測定法にパーオキシダーゼ、過酸化水素及
び４−メトキシ−１−す７トールを用いる方法（特開昭
６１−１０７７２号）或は４−クロロ−１−す７トール
を用いる方法（Ｂｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　１９
８Ｌ４、３７１〜３７３）が知られているが、感度、分
解能が不充分であり、色調が不鮮明である．且つこの分
野に於ては酵素の介在によって分析対象物の検知もしく
は定量が具現される必要があるが、前記方法に於ては酵
素の存在を俟たずに、過酸化水素もしくは空気等により
単純酸化を受は性能劣化を起し且つ分析方法の信憑性を
保証しえないという欠点がある。

〔発明の目的〕

本発明の目的は、過酸化作用を有する物質の存在下での
過酸化水素又は過酸化水素を生成する物質の定量におい
て、着しく優れた定量感度を有する分析素子を提供する
ことにある。

〔発明の構成〕

本発明者らは、上記目的を達成するために鋭意検討した
結果、４−フルコキシ−１−す７トールを色原体として
用いれば該４−フルコキシー１−す７トールは、自己カ
ップリングにより色素を形成するがアルコキシ基がメト
キシ基の場合は、不安定で、容易に自己カップリングし
、過酸化水素さえ存在すれば、過酸化作用を有する物質
の存在に関係なく、色素を形成する欠、αを有すること
を確認した。

この欠点を改良すべく更に検討した結果、本発明の上記
目的は、過酸化作用を有する物質及び酸化されることに
より自己カップリングし色素を生成する一般式［Ｉ］１
で表わされる化合物を含有することを特徴とする過酸化
水素定量用分析素子によって達成された。

一般式［Ｉ］１ ｎ＋１ り八 式中Ｒは炭素原子数が２＊たけ３個のアルキル基を表わ
す。

〔発明の具体的構成〕

本発明に係る前記一般式［Ｉ］１で表わされる化合物は
、４−二トキシ−１−す７トール（１）４−プロポキシ
−１−す７トール　（２）４−ｉ−プロポキン−１−す
７トール　（３）である。

本発明は先にのべた４−クロロ−ｘ−す７トー／ｋまた
は４−メトキシ−１−す７トールとは４位に炭素原子数
２または３個のフルコキシ基が特定されていることで異
り、且つこのことで特異反応を前提とする本技術分野の
分析法を意義あらしめることができる。また炭素原子数
が４個以上では発色効率が低下し好しくない。

これらの化合物は、有機合成化学協会誌第１７巻第１２
号ｐ＋ｐ、２７〜３０　（１９５９）に記載の方法に従
って合成できる。

本発明に係る過酸化作用を有する物質としては、種々も
のを用いることができるが、代表的なものとして例えば
、ペルオキシダーゼが挙げられる。

ペルオキシダーゼは、過酸化水素が別の物質を酸化する
際の反応を触媒するＷｔ、索である。このペルオキシダ
ーゼは一般に鉄ポルフィリンを含有する複合蛋白であり
、西洋わさび、じゃがいも、いちじくの樹液、カプラ　
（植物のペルオキシダーゼ）、牛乳（２クトベルオキシ
グーゼ）及び白血球（ベルドペルオキシダーゼ）中に存
在し、又微生物中にも存在し、抽出又は発酵により得る
ことができる。

又、「７クタ・ケミ力・セカンジナビ力、（＾ｅｔａＣ
ｈｅｓｓ、　５ｅｃａｎｄ、　）第４巻、第４２２−４
３４０．１９５０年、Ｔｈｅｏｒｅｌｌ及びＭａｅｈｌ
ｙ者」に開示されているような合成ペルオキシダーゼも
本発明において用いることができる。ペルオキシダーゼ
のはかメトヘモグロビン、オキシヘモグロビン、ヘモグ
ロビン、アルカリ性ヘマチン、ヘミン及びヘミン誘導体
等も本発明において用いることができる。

酵素以外に過酸化作用を示すものとしで、例えばチオシ
アン酸鉄、スズ酸鉄、７エロシアン酸第１鉄、シリカゾ
ルに吸着させた第ニクロム塩（例えば硫酸クロムカリウ
ム）等も用いることができる。

これらのうちでは、ペルオキシダーゼが好ましν１゜ 本発明の分析素子は、分析に必要な試薬が素子中に乾燥
状態で組み込まれた乾式タイプのものをいう、これらの
分析素子としては、単層のもので試薬を担持する層の材
料として濾紙、メンブランフィルタ等を用いるもの（Ｗ
公明３６−４１９８号、米国特許３，６０７，０９３号
等）、また、単なる積層や剥離を前提とした非一体型多
層分析素子としてガラスフィルタやメンブランフィルタ
を用いたり　（特開昭４９−１１３９５号）、２枚の濾
紙の上に網をかけたもの（特開昭５４−１５１０９６号
、米国特許３，５２６，４８０号）などが挙げられる。

さらに本発明の分析素子として、好ましくは、液体不浸
透性、光透過性支持体上に少なくとも１つの試薬層及び
多孔性展開層を有する一体型多層分析素子（特公昭５３
−２１６７７号、特開昭５５−１８４３５９号、同５５
−９０８５９号、同５７−１９７４６６号、同５７−１
０１７６０号、同５７−１０１７６１号、同５８−９０
１６７号等）が挙げられる。

上記試薬層は水溶性ポリマ又は親水性かつ有機溶媒可溶
性のポリマをバインダとして支持体上に塗布することに
よって層として設けることができる。水溶性ポリマバイ
ンダとしてはゼラチン、７タル化ゼラチン等のゼラチン
誘導体、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチ
ルセルロースナＦリウム塩等の水溶性セルロース誘導体
、ポリビニルアルコール、ポリ　（Ｎ−ビニルピロリド
ン）、ポリアクリル７ミド、ポリメタクリル７ミド、ア
クリルアミドとアクリル酸エステルの共重合体、ポリ　
（モノ又はジアルキル置換）アクリルアミド、ポリ　（
モノ又はジアルキル置換）メタクリルアミド及びこれら
の水溶性共重合体等が挙げられ、好ましくはゼラチン、
ポリアクリルアミド及びアクリルアミドとアクリル酸エ
ステルの共重合体が用いられる。ａ水性かつ有機溶媒可
溶性ポリマバインダとしては、ポリ　（Ｎ−ビニルピロ
リドン）、ポリ　（Ｎ−ビニルイミダゾール）、ポリ　
（Ｎ−ビニルトリアゾール）及びこれらの誘導体又はそ
れらの共ｆｆｉ　合体、エチルセルロース、メチルセル
ロース等のセルロース誘導体等が挙げられる。これらの
ポリマバインダは主としてアルコール類、例えばエタノ
ール、プロパツール、ブタノール等に溶解し且つ親水性
の高分子物質である。

上記ポリマバインダは、選ばれる特定成分及びその分析
反応によって任意に選ぶことができる。

また、選ばれる分析反応が２種以上の試薬から構成され
ている場合、この試薬を同一試薬層内に一緒に混合して
含有させても、また、２１！以上の試薬を２つ又はそれ
以上の別々の試薬層として含有させてもよい、これらは
分析反応自体の作用８！溝によって決定されることもあ
り、好ましくない影響を及ぼさない限りにおいて、その
構成は任意である。

上記試薬層の膜厚は所望に応じて任意に選択することが
可能であるが、好ましくは１〜２ＱＯｐ鴨、更に好まし
くは５〜１００μ−である。

上記多孔性展開層は、（１）一定容量の流体試料を単位
面積当り試薬層に均′−に配布する機能を有するもので
ある。その上、更に、特公昭５３−２１６７７号に記載
された性能、すなわち（２）流体試料中の分析反応を阻
害する物質又は要因を除去するＷ１能及び／又は（３）
分光高度分析を行うときに支持体を経て透過する測定光
を反射するパックグランド作用を行う機能を有するもの
であれば好ましい、したがって、本発明に係る多孔性展
開層は、上記（１）のＷ１能のみを有する層、（１）に
加えて（２）及び／又は（３）の８１面を併せて有する
層のいずれかとすることができ、あるいは（１）を包含
する複数の機能を適宜分離し、各機能ごとに別の層を使
用することも可能である。更に（１）、（２）及び（３
）の８！能のうち、２つの機能を有する層と、残りの１
つの機能を有する屑を組合せで使用することもできる０
例えば、前述の特公昭５３−２１６７７号に記載された
二酸化チタン及び二酢酸セルロースから成るプラッシュ
ポリマと呼称される非繊維多孔質媒体の展開層、特−開
明５５−１６４３５６号に記載された親水化処理した織
物の展ｒａ層、特開昭５７−９４６５８号、同５７−１
２８４７号、同５７−１９７４６６号及び同５８−７０
１６１号等に記載された繊維構造層ｌ１１１待開昭５８
−９０１６７号に記載された粒子結合体構造板ｒｆＲ層
が挙げられる。特に、上記繊維摺造展開層及び粒子結合
体構造Ｆｌ開層は、血球部分も速やかに移送することが
可能な素材として特に有用である。

本発明の分析素子における７！閏層の膜厚は、その空隙
率によって決定されるべきであるが、好ましくは約１０
０〜６００μ麺、更に好ましくは約１５０〜４００μ艶
である。また、空隙率は好ましくは約２０〜８５％であ
る。

上記多孔性展開層には、選ばれる特定成分及びその分析
反応によっては、前述の試薬層の場合と同様、流体試料
中の特定成分と直接的又は間接的に関与する試薬を含有
することができる。

また他の付加的な添加剤として、例えば保恒剤、界面活
性剤等、種々の添加剤も所望に応じて添加することもで
きる。

特に界面活性剤は、流体試料を本発明の分析素子に適用
した際の浸透速度の調節等有効に用いることができる。

使用可能な界面活性剤としては、イオン性（アニオン性
又はカチオン性）、非イオン性を問わず使用することが
可能であるが、非イオン性界面活性剤が有効である。非
イオン性界面活性剤の例としでは、例えば２，５−ノー
ｔ−ブチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−オ
クチルフェノキシポリエチレングリコール、ｐ−イソノ
ニルフェノキシポリエチレングリコール等のアルキル置
換フェノールのポリアルキレングリコール誘導体、高級
脂肪酸のポリフルキレングリコールエステルなどが挙げ
られる。これらの界面活性剤は流体試料の試薬層への浸
透速度を調節し、同時に好ましからざる　「りａマドグ
ラフィー現象」発生を抑制する効果を有する。

上記界面活性剤は広範に選択された量を用いることが可
能であるが、塗布液の重量に対して２５重量％〜０，０
０５重１％、好ましくは１５重量％〜０．０５重量％用
いることができる。

上記の液体不浸透性の光透過性支持体（以下、本発明に
係る支持体と略す）は、液体不浸透性で、かつ光透過性
であればその種類を問わないが、例えば酢酸セルロース
、ポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート又は
ポリスチレンのような種々の重合体材料のみならず、ガ
ラスのごとき無機材料も用いることが可能である０本発
明に係る支持体の厚さは任意であるが、好ましくは５〜
２５０μ−である、また、本発明に係る支持体の観測側
の一側面は、その目的に応じて任意に加工することが可
能である。更に試薬層を積層する側の支持体面に、場合
によっては光透過性の下塗り層を使用して試薬と支持体
との接着性を改良することができる 上記の一体型多層分析素子は必要に応じて、例えば米国
特許３，９９２，１５８号記載の反射層、下塗り層、米
国特許４，０４２，３３５号記載の放射線ブロッキング
層、米国特許４，０６６．４０３号記載のバリヤ層、米
国特許４，１６６．０９３号記載のマイグレーション阻
止層、特開昭５５−９０８５９号記載のスカベンジャ層
、及び米国特許４，１１０，０７９号記載の破壊性ボッ
ド状部材等を任意に組合せて本発明の目的に合せた任意
の６１成とすることができる。

これら分析素子の種々の層は、本発明に係る支持体上に
所望の構成に従い、従来写真工業において用いられてい
るスライドホッパ塗布法、押出し塗布法、浸漬塗布法等
を適宜選択して用い、順次積層することで任意の厚みの
層を塗設することができる。

本発明の一般的［Ｉ］１で表わされる化合物を、本発明
に係る分析素子を形成するための液に添加する方法は、
上記化合物の化学構造等に応じて、適宜選択することが
できる。例えば、水、緩衝剤水溶液、有機溶媒等に溶解
して添加する方法、固体分散法、ラテックス分散法、水
中油滴型乳化分散法等種々の方法を用いることができる
。

水中油滴型乳化分散法は、従来写真工業において公知の
カプラ等の疎水性添加物を分散させる方法が適用でき、
通常、高沸点溶媒及び／又は定沸点溶媒に溶解し、７ニ
オン系界面活性剤及び／又はノニオン系界面活性剤を含
むゼラチン等の親水性コロイドを含む水溶液と混合し、
高速回啄ミキサ、コロイドミル、フロージェットミキサ
、超音波分散装置等で乳化分散して用いることができる
。

高沸点溶媒としては、例えば有機酸アミド類、カルバメ
ート類、エステル類、ケトン類、尿素誘導体等、特に、
シーｎ−ブチル７タレート、トリクレジルホスフェート
、トリフェニルホスフェート、ジイソオクチルアセテー
ト、ジ−ｎ−ブチルセパケート、トリーｎ−へキシルホ
スフェート、Ｎ、Ｎ−ノエチルカプリルアミドプチル、
Ｎ、Ｎ−７エチルラウリル７ミド、ｎ−ペンタデシルフ
ェニルエーテル、ジオクチル７タレート、ｎ−ノニルフ
ェノール、３−ペンタデシルフェニルエチルエーテル、
２．５−ジー９ｅｅ−アミルフェニルブチルエーテル、
モノフェニル−ジー〇−クロロフェニルホス７エートア
ルいは、フッ素パラフィン等が挙げられる。これらの中
でも、ジアルキル７タレート特に炭素原子ｒ＆１〜６の
アルキル基を有するものが好ましい。

低沸点溶媒としては、例えば、酢酸メチル、酢酸プロピ
ル、酢酸ブチル、プロピオン酸ブチル、シクロヘキサノ
ール、ジエチレングリコールモノアセテート、ニトロメ
タン、四塩化炭素、クロロホルム、シクロヘキサン、テ
トラヒドロ７ラン、メチルアルコール、アセトニトリル
、Ｎ、Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジオキサン、メチル
エチルケトン等が挙げられる。

７ニオン系界面活性剤としては、例えばフルキルベンゼ
ンスルホン酸、アルキルナフタレンスルホン酸等が、ノ
ニオン系界面活性剤としては、例えばソルビタンセスキ
オレイン酸エステル、ソルビタンモノラウリン酸エステ
ル等が挙げられる。

本発明の分析素子は、前記の過酸化作用を有する物質、
一般式［Ｉ］１で表わされる化合物以外に、分析すべき
成分の種類に応じて、過酸化水素を生成する酸化酵素及
び他の酵素、基質、ａ衝剤、保恒剤、界面活性剤、硬膜
剤等の種々の試薬を含有することができる。

過酸化水素を生成する酸化酵素としては、例えば、グル
コースオキシダーゼ、ウリカーゼ、コレステロールオキ
シグーゼ、グルコ−スオキシダーゼ、グリセリン−３−
リン酸オキシグーゼ、ザルコシンオキシグーゼ、ピルビ
ン酸オキシダーゼ、Ｄ−アスパラギン酸オキシダーゼ、
Ｄ（又はＬ）−アミノ酸オキシグーゼ、Ｌ−グａ／−γ
−ラクトンオキシグーゼ、Ｌ−ソルボースオキシダーゼ
、Ｌ−２−ヒドロキシ酸オキシダーゼ、６−ヒドロキシ
−Ｄ−ニコチンオキシダーゼ、６−ヒドロキシ−Ｌ−ニ
コチンオキシダーゼ、ピリドキサミンリン酸オキシグー
ゼ、ピリドキシンオキシダーゼ、ヘキソースオキシダー
ゼ、Ｏ−７ミノフエノールオキシダーゼ、アミンオキシ
ダーゼ（ピリドキサール含有、又は７ラビン含有）、キ
サンチンオキシグーゼ、アルコールオキシグーゼ、エタ
ノールアミンオキシグーゼ、Ｎａ−メチル−Ｌ−リジン
オキシグーゼ、コリンオキシダーゼ、アシルＣｏ＾オキ
シグーゼ、亜硫酸オキシダーゼ等の種々のものが挙げら
れる。

本発明に係る過酸化作用を有する物質は広範に選択され
た量を用いることが可能であるが、例えＩｆ　ヘルｔ　
キシｒ　−セｆ）　場合ハ、１００−１，０００，００
０１１／−２、好＊　Ｌ　＜　ｌ！　１−０００−１０
０ｙ　００００／　ｍ”　ｆ）範囲テ用ｗｓることがで
きる。

本発明に係る一般式［Ｉ］１で表わされる化合物は広範
に選択された量を用いることが可能であるが、０．１−
１００ミ９　モアし／ＩＩ”１好＊　Ｉ、　＜　１！０
．５−５０ミリモル／−２の範囲で用いることができる
。

本発明の分析素子において、過酸化水素又は酸化酵素の
作用により生成した過酸化水素は、過酸化作用を有する
物質の作用により、本発明に係る一般式［Ｉ］１で表わ
される化合物は酸化され、自己カップリングして青い色
素が形成されこの色素は、極めて高感度に発色を呈する
。

従って、本発明の分析素子は、検体が例えば人血清中の
微量成分（例えば尿酸、クレアチニン、ＧＯＴ、　Ｃｒ
２等）に対しても鋭敏に反応し、微量成分の定量に特に
有用である。

本発明において、本発明に係る過酸化作用を有する物質
、一般式［Ｉ］１で表わされる化合物は、例えば、一体
型多層分析素子の場合、試薬層、多孔性展開層及びその
他の層のいずれの層に含有させることもできる。

本発明の分析素子を用いて、過酸化水素又は過酸化水素
を生成する物質を定量するにあだ−っでは、分析素子を
検体である流体試料中に浸漬するか流体試料を分析素子
上に滴下し、反射スペクトロ７す１メトリーにより初速
魔法又は反応終点法に従って測定することができる。こ
のようにして得られた測定値は、あらかじめ作成してお
いた検量線に当てはめることで過酸化水素又は過酸化水
素を生成する物質の量を決定することができる。

本発明の分析素子に適用される流体試料は生物学的、非
生物学的流体試料であれ、過酸化水素又は過酸化水素を
生成する物質を含むものであればよい０例えば、血液（
血漿・血清を含む）、リンパ液、尿等が挙げられる。

又、用いる流体試料の量は、試験片の場合には試薬を含
む吸収性担体に流体試料が十分含浸される１以上であれ
ば任意である。一方、一体型多層分析素子の場合も任意
であるが、好ましくは約５０μｌ〜約５μ！であり、更
に好ましくは約２０μｌ〜約５μ！である０通常約１０
μｌの流体試料を適用することが好ましい。

〔実施例〕

以下、実施例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。

実施例−１（化合物の安定性） （１）　　３＋ｓｇの４−７トキシー１−す７トールを
０．５ｍｌのＤＭＦに溶解し、５．５ｍｌの０．０５Ｍ
　）リス塩酸緩衝液（ｐｉ＋７．４．２００ｍＮ　Ｎａ
Ｃｌ含有）を加えＡｔとした。

（２）　４−エトキシ−１−す７トールについても同様
に捏作しＢ［とした。

次いでＡ及びＢ１１１液に夫々３％過酸化水素２０μ！
を加え、室温で放置し色素生成の有無を観察した。

その結果、Ａ液については経時で色素が生成したが、Ｂ
液についてはみちれなかった。

よって本発明の化合物４−二トキシ−１−す７トールは
、安定性のよい化合物であることがわかる。

４−メトキシ−１−す７トールは、過酸化作用を有する
物質が存在しなくても、過酸化水素と反応し、本発明の
目的に適さない。

実施例−２（クレアチニン用分析素子）膜厚１８０μ−
の透明な下引済ポリエチレンテレフタレート支持体上に
以下に示す組成の試薬層、中間層及び展開層を順次設け
、表−２に示す本発明の実施例分析素子１〜３及び比較
例分析素子−（１）を作成した。

実施例試料 試薬層　（Ｒ−１） ４−エトキシ−１−す７トール　　　　　０．７８ｇ７
／＋”ゼラチン　　　　　　　　　　　　　１９．０ｇ
／ｍ”クレアチニナーゼ　　　　　　　１２５０００Ｕ
／ｍ”フレ７　＋　＋−４ｔ　　　　　　　　　　６４
０００１Ｊ／ｍ”ザルコシンオキシダーゼ　　　　　９
６００υ／膿２ヘルオキシクーセ９，０ＯＯｕ／ｌ６２
７スコルビン酸オキシグーゼ　　　７．５００Ｌｌ／論
２リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ＝７．４〜７．５）３．
２２７１１／ＩＩ２ アルカノールＸＣ（商品名；デュ・ボン製）２５０ａ＋
ｇ／ｍ２ １．２−ビス　（ビニルスルホニル）エタン０、１０ｇ
／ｍ２ 試薬層　（Ｒ−２） ４−二トキシ−１−す７トールのかわりに４−プロポキ
シ−１−す７トール０．８４ｇ／＠２を用いた以外はＲ
−１と同様に調整。

試薬層　（Ｒ−３） ４−二トキシ−１−す７トールのがわりに、４−１−プ
ロポキシ−１−す７トール０．８４ｇ／ｍ２を用いた以
外はＲ−１と同様にｌ！整。

比較例試料 試薬層（Ｒ−４＞ ４−二トキシ−１−す７トールのかわりに、４−アミノ
アンチピリン塩酸塩０．８２３ｇ／働”、１．７−シヒ
ドロキシナ７タレン０．６１２ｇ／ｍ’を用いた以外は
Ｒ−１と同様に調整。

アスコルビン酸オキシグーゼはキュウリ起源のものを使
用。

中間層（１−１） Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体（重量比２
　：　８　）　　　　　　　　　　　１．２５ｇ／鋤２
廣開層　（Ｓ　−１） 濾紙原材料用繊維 ［東洋濾紙（株）、４０〜１００／　ｙ　Ｅｙ　ｘ　］
　９１．Ｏｇ／ｍ”スチレン−グリシツルメタクリレー
ト共重合体（重量比９　：　１　）　　　　　　　　　
　　２３．０ｇ／論２トリトンＸ−１００（和光純薬婁
）　　　　　９．１ｇ／鵠２ジメドン　　　　　　　　
　　　　　１．３５ｇ／ｍ”７スコルビン酸オキシダー
ゼ　　　フ、５０００７−”牛血清アルブミン　　　　
　　　　　１．１０ｇ／論２上記展閏層はキシレン溶媒
にて塗設。

アスコルビン酸オキソダーゼ（キュウリ起源）は牛血清
アルブミンと一緒に水に溶解し、凍結乾燥後微粉末化し
たものを添加して塗設。

表−２ 上記本発明の分析素子−１〜３並びに比較分析素子−（
１）に対して、各種尿酸濃度のヒト血清を１０μｍ辰閏
層１に滴下し、３７℃で７分間インキュベージ１ンを行
った後、６５０ｎｍ　（ただし比較分析素子については
５４６ｎ曽）のフィルタを用いて反射濃度を支持体側か
ら測定し、表−３の結果を得た。

表−３ 実施例−３（総コレステロール用分析素子）膜厚１８０
μ鵠の透明な下引済ポリエチレンテレフタレート支持体
上に以下に示す組成の試薬層、中間層及び７ｉ１ｒｌ’
ｉ層を順次設け、表−４に示す本発明の分析素子−４〜
６並びに比較分析素子−（２）を作成した。

実施例試料 試薬層（Ｒ−５） ４−二　ト　キ　シ　−１−す　７　ト　−　ル　　　
　　　　　００７８ｇ／ｍ２　　’ゼラチン　　　　　
　　　　　　　　１６．５ｇ／ｍ２・ヘルｔ　キシｒ　
−セ１２５０００／ｍ”リン酸カリウム緩衝剤ｐＨ（６
，８）　　　　３．２５ｇ／論２アルカノールＸＣ（商
品名；デエ・ボン製）２５０ｍｇ／曽２ １．２−ビス（ビニルスルホニル）エタン０、ｌ１ｇ／
論２ アジ化ナトリウム　　　　　　　　　０．１８ｇ／−”
試薬層　（Ｒ−６） ４−二トキシ−１−す７トールのかわりに４−プロポキ
シ−１−す７トール０，８４ｇ／−宜を用いた以外はＲ
−４と同様に１１９１゜ 試薬層　（Ｒ−７） ４−エトキシ−１−ナラトールのかわりに４−ｉ−プロ
ポキン−１−す７トール０．８４ｇ／ａ＋２を用いた以
外はＲ−５と同様に調整し塗設。

比較例試料 試薬層　（Ｒ−８） ４−二トキシ−１−す７トールのかわりに４−７ミノア
ンチピリン塩酸塩、０．８２３ｇ／ｓ’ｔ　１　＊７ノ
ヒドロキシナ７タレン０．６１２ｇ／ｍ”を用いた以外
はＲ−５と同様にｙ４整し塗設。

中間層　（１−２） Ｎ−ビニルピロリドン−酢酸ビニル共重合体く重量比２
　：８　）　　　　　　　　　　　１．２５ｇ／−”展
開層　（Ｓ　−２） 濾紙原材料用繊維 ［東洋濾紙（株）４０〜１００メツシユ］　　９１，０
１７ｍ２スチレン−グリシジルツタアクリレート共重合
体く重量比９　：　１　）　　　　　２３．Ｏｇ／ｓ＋
２ポリオキシエチレンモノラ９レート　１１．７ｇ／ｍ
”ジメドン　　　　　　　　　　　　　１．７５ｇ／簡
２コレステロールエステラーゼ　　　２，５００ｔ１／
論２コレステロールオキシグーゼ　　　２＊５００Ｕ／
ｓ”牛血清アルブミン　　　　　　　　　２．５ｇ／簡
２コレステロール二ステラーゼ及びコレステロールオキ
シダーゼは牛血清アルブミンと一緒に水に溶解し、凍結
乾燥後微粉末化したものを添加して塗設。

表−４ 上記本発明の分析素子−４〜６並びに比較分析素子−（
２）に対して、各種総コレステロール濃度のヒト血清を
ＬＯｐｌＦｌ開層上に滴下し、３７℃で７分間インキエ
ベーシ磨ンを行った後、６５０ｎ醜（比較分析素子につ
いては、５４６ｎ曽）のフィルタを用いて反射濃度を支
持体側から測定し、表−５の結こノ 表−５ 上記表−５の結果から明らかなように、本発明の分析素
子−４〜６は、比較分析素子−（２）に比し、総コレス
テロール濃度の差に対して良好な発色濃度差を示し、識
別能力つまり定量感度が商いことがわかる。

〔発明の効果〕

以上詳細に説明したよ）に、本発明の分析素子では、定
量感度が着しく改善されるという顕萱な効果が奏せられ
る。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 過酸化作用を有する物質及び酸化されることにより自己
   カップリングし色素を生成する一般式［ I ］で表わさ
   れる化合物を含有することを特徴とする過酸化水素定量
   用分析素子。 一般式［ I ］ ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｒは、炭素原子数が２または３個のアルキル基を
   表わす。〕