JPS63198678A - 新規化合物、その製造方法及びその用途 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は有用な抗ウィルス活性及び項腫瘍活性を有す
る新規な環式有機化合物に関する。さらに詳細に言うと
、この発明は、海洋生物、すなわち海綿、トプセンチア
属の種（ＴｏｐｓｅｎＬｉａ、　ｓｐ）から誘導された
新規なビス−インドールアルカロイド抗腫瘍及び抗ウィ
ルス組成物並びにその使用方法に関する。

種々の腫瘍に関する疾病が人類を冒している。かなりの
研究か腫瘍学及び抗！！瘍手段に向けられた。腫瘍は種
々の哺乳動物において共通であり、哺乳動物における腫
瘍の予防、成長の制御及び減退は人類にとって重要であ
る。腫瘍という語は、元の組織又は宿主の身体の秩序に
対して全体として不整合な新しい組織成長の異常な塊を
言う。

腫瘍は、種々の形態のガン及びその結果もたらされるガ
ン性悪態症を包含する種々の疾病によって哺乳動物及び
人類を冒している。ガン性悪態症は、腫瘍によって哺乳
動物が冒された際に伴ねれる徴候性の不快さである。こ
れらの徴候は、例えば体重の減少によって立証される、
冒された哺乳動物の弱体状態である。ガンの重大さはよ
く知られている０例えば、ガンは心臓及び血管系疾病に
次ぐヒトの第２の死因である。

腫瘍学、及び化学治療を包含する抗腫瘍手段に対してか
なりの研究及び投資が行なわれている。腫瘍の成長を阻
害し、緩和し又は制御することを助けるいくつかの方法
及び化学組成物が開発されたけれども、新しい方法及び
抗腫瘍化学組成物か必要である。

ウィルス疾病もまた、人類、植物、昆虫及び動物を冒し
ている。ウィルス疾病の予防及び制御は健康及び経済的
観点から重要である。

ウィルス疾病は、一般的な風邪、ヘルペス及びガンを包
含するヒトの疾病に関与するのて、それを制御すること
が重要であることは朗らかである。また、動物における
ウィルス疾病の予防も。

経済的理由及びヒトに疾病を感染させるキャリアとなる
ことを防止する上ても重要である。植物のウィルス疾患
は、果樹、タバコ及び種々の野菜の栽培に壊滅的影響を
与えるものとして知られている。昆虫のウィルス疾病も
また、昆虫がウィルス疾病をヒトに移す能力を有するの
で重要である。

ウィルス疾病の予防及び制御はこのように人類にとって
最も重要なことであり、かなりの研究か抗腫瘍手段に対
して行なわれている。ウィルスを阻害し、制御し又は破
壊することを助けるいくつかの方法及び化学組成物が開
発されているが、抗ウィルス化学組成物がさらに必要で
ある。

海洋生物、特に海綿は、多様な化学的及び生物学的に興
味のある分子の潜在的な供給源である。海綿から誘導さ
れるいくつかのこのような分子はショイアー・ピー・ジ
ェイ編、ＭａｒｉｎｅＮａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔ
ｓ、　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａ
ｌＰｅｒＳｐｅｃｔｉｖｅｓ；　Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐ
ｒｅｓｓ；　ニュー　Ｑヨーク、１９７８−］！１８：
ｌ；　Ｖｏｗ、　ｒ−Ｖ；フォールフナ−・ディΦジェ
イ、Ｎａｔｕｒａｌ　Ｐｒｏｄｕｃｔｓ　Ｒｅｐｏｒｔ
ｓ　１９８４゜Ｖｏｌ、　１．５５１−５９８；及び１
９８６、Ｖｏｌ、　３．１−：ｌ：ｌ、つエムラ・ディ
、タカハシ・ケイ、ヤマモト・ティ、カタヤマ・シー、
タナ力・ジェイ、オフムラ・ワイ、ヒラタ・ワイ、Ｊ、
　Ａｖ、　ＣＩ＋ｅｓ＋、　Ｓｏｃ。

１９８５、１０７．４７９６−４７９８に記載されてい
る。

トプセンチア属に属する海綿の種の抽出物から誘導され
たあるビス−インドールアルカロイドか有用な抗腫瘍活
性及び抗ウィルス活性を有することが見出された。

従って、この発明の目的は、抗ウィルス剤及び抗腫瘍剤
として有用な新規物質及びそれを生産する方法を提供す
ることである。

この発明の他の目的及び利点は１部分的には以下の説明
に記載しであるし、部分的にはこの説明から自明である
し、また、この発明を実施することによって理解される
であろう、この発明の目的及び利点は特許請求の範囲に
記載した組成物。

方法及びその組合せによフて達成される。

この発明は下記一般式（１） （たたし、）ｊｌ　、　Ｒ２、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ
同−又は異なって水素、低級アルキル、又は低級アシル
基であり、Ｒ３は二重結合酸素、又は２つの単結合水素
、水酸基着しくは同−若しくは異なる低級アルコキシル
基若しくは低級アシロキシ基であり、Ｘは水素、水酸基
又はハロゲンである） で示される化合物を提供する。

この発明の好ましい具体例においては、組成物は実質的
に純粋である。

この発明の好ましい具体例では、低級アルキル基、アシ
ル基、アルコキシル基及びアシロキシル基は１ないし５
債の炭素原子を有する。

この発明のさらに好ましい具体例では、一般式（Ｉ）で
示される化合物のＸが水素又は臭素であり、Ｒ１、ｆ１
２　、　Ｒｊ　、Ｒ４及びＲ５は以下のものを示す。

（１）Ｒゴ＝Ｈ１ＯＨ，Ｒ’　＝Ｒ”　＝Ｒ’　＝Ｒ’
　＝（２）Ｒ’　＝Ｈ，ＯＡｃ、Ｒ’　＝Ｒ２＝Ｒ’　
＝Ｒ’　＝Ｃ０ＣＨ。

（３）　　Ｒコ　　＝Ｃ，Ｒ’　　　＝Ｒ２＝Ｒ４、Ｈ
，Ｒ’　　　＝ＣＨ：１ （４）　　Ｒコ　　＝　０　、　　Ｒｌ　　　＝　　Ｒ
２＝　　ＲＪ　　　＝　　Ｒ’ｉ　　　＝Ｃ０ＣＨ。

（５）Ｒ″″　＝０．Ｒ’　　＝Ｒ”　＝Ｒ’　　＝Ｒ
’　　＝ＣＨユ この発明のさらに好ましい具体例の化合物は下記一般式
（ＩＩ）て表わされる。

ＩＩ （たたし、Ｘは水素又は臭素である） この発明はまた、無毒性の薬理的に許容できる担体又は
島駅剤中に、抗腫瘍又は抗ウィルスに効果のある量の上
記一般式（Ｉ）又は（Ｈ）で示される化合物を含む抗ウ
ィルス及び抗腫瘍組成物を提供する。

さらにまた、この発明は上記式（Ｔ）又は（ＩＩ）で示
される化合物の製造方法を提供する。

この方法は、海綿トプセンチアを回収する工程と、この
海綿を少なくとも１種の適名な重機溶媒と接触させて、
上記式（Ｉ）又は（ｎ）で示される化合物を含む抽出物
を得る工程と、該抽出物から式（Ｉ）又は（ＩＩ）て示
される化合物を単離する工程とを含む。

この発明の好ましい具体例ては、適当な有機溶媒はペン
タン、ヘキサン、メタノール、ブタノール、エタノール
、トルエン、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸エチ
ル、エタノール及びメチルイソツチルケトンから成る群
より得らればれる。

この発明はまた、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示されるｌ又
は２以上の抗腫瘍効果量の化合物を腫瘍と接触させるこ
とから成る、宿主中の腫瘍を阻害する方法及びガン性悪
態症の治療方法を提供する。

この発明はまた、式（Ｉ）又は（ＩＩ）て示される１又
は２以上の抗ウィルス効果量の化合物をウィルスと接触
させることから成る、ウィルスを阻害する方法及びガン
性悪態症の治療方法を提供する。

上記した一般的な説明及び下記の詳細な説明は、例示及
び説明のためのみのものであって、クレームされた発明
を限定する意図かないことが理解されるべきである。

以下、この発明の好ましい具体例を詳細に説明する。こ
の発明の実施例は以下の実施例部分に例示されている。

この発明は下記一般式（Ｉ） ■ （たたし、Ｒｌ　、　Ｒ２、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ同
−又は異なって水素、低級アルキル、又は低級アシル基
であり、Ｒ３は二重結合酸素、又は２つの単結合水素、
水酸基若しくは同−着しくは異なる低級アルコキシル基
若しくは低級アシロキシ基であり、Ｘは水素、水酸基又
はハロゲンである）て示される化合物を提供する。

この発明の好ましい具体例においては１組成物は実質的
に純粋である。

この発明の好ましい具体例では、低級アルキル基、アシ
ル基、アルコキシル基及びアシロキシル基は工ないし５
個の炭素原子を有する。

この発明のさらに好ましい具体例では、一般式＜ｒ）で
示される化合物のＸが水素又は臭素であり、Ｒ１，Ｒ２
，Ｒコ　Ｒ４及びＲ５は以下のものを示す。

（１）ＦＬ’　＝Ｈ，ＯＨ，Ｒ’　＝Ｒ’　＝Ｒ’　＝
Ｒ’　−（２）Ｒ″＝Ｈ１ＯＡｃ、Ｒ’　＝Ｒ２−Ｒ’
　＝Ｒ’　＝Ｃ０ＣＨ。

（３）Ｒ３＝０、Ｒ１＝Ｒ”　＝Ｒ’　＝Ｈ，Ｒ５＝Ｃ
Ｈ５ （４）Ｒ”　　＝Ｑ、Ｒ’　　＝Ｒ”　　＝Ｒ４＝Ｒ’
　　＝Ｃ０ＣＨ３ （５）Ｒ″　＝０、Ｒ１＝Ｒ２＝Ｒ４＝Ｒ％　　＝ＣＨ
３ この発明のさらに好ましい具体例の化合物は下記一般式
（ＩＩ）で表わされる。

■ （ただし、Ｘは水素又は臭素である） この発明はまた、無毒性の薬理的に許容できる担体又は
希釈剤中に、抗腫瘍又は抗ウィルスに効果のある量の上
記一般式ＣＩ）又は（ｎ）で示される化合物を含む抗ウ
ィルス及び抗腫瘍組成物を提供する。抗腫瘍組成物が用
いられる条件が異なるので、効果を発揮する量も異なる
が、１０５個の腫瘍細胞に対して必要な最少の投与量は
０．５ｔｔｇないし１．００ｇｇである。無毒性の薬理
的に許容できる担体又は希釈剤の例として、エタノール
、ジメチルスルフオキシド及びグリセロールを挙げるこ
とができる。

この発明はまた、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示されるｌ又
は２以上の抗腫瘍効果量の化合物を！１ｍと接触させる
ことから成る、宿主中の腫瘍を阻害する方法及びガン性
悪態症の治療方法を提供する。この発明の化合物の、腫
瘍及び腫瘍細胞を阻害する有効さは、哺乳動物を包含す
る宿主中の腫瘍を制御し、ガン性悪態症を治療するため
の有用性を示している。

この発明はまた、無毒性の薬理的に許容できる担体又は
希釈剤中に、抗ウィルスに効果のある量の上記一般式（
Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物を含む抗ウィルス組
成物を提供する。抗ウィルス組成物が用いられる条件が
異なるので効果を発揮する量は変わるが、ウィルスの２
５ないし８０プラ一ク形成単位に対する最少の投与量は
一般的に５０．ｇないし２０ｏ　ｇｇである。無毒性の
薬理的に許容できる担体又は希釈剤の例として、エタノ
ール、ヂメチＪレスフフオキシト及びグリセロールを挙
げることができる。

この発明によると、抗ウィルス効果量の式（Ｉ）又は（
ｎ　）で示される１又は２以上の化合物をウィルスと接
触させることから成る方法によってウィルスが阻害され
又は殺される。最少の効果量は、上述したように、ウィ
ルスの２５ないし８０プラ一ク形成単位に対して一般的
に５０ｐｇないし２０ｏルｇである０式（Ｉ）又は（Ｔ
Ｉ）で示される化合物は、多様なウィルスを阻害し又は
殺すことに有効であり、このようなウィルスの例として
、ＲＮＡウィルス、水痘性口内炎ウィルス（以下、ＶＳ
Ｖという）、アレナウィルス、コロナウィルス、リノウ
ィルス、インフルエンザウィルス及びＤＮＡウィルス、
単純ヘルペスウィルス−Ｉ（以下、Ｈ３Ｖ−Ｉという）
、他のヘルペスウィルス、アデノウィルス、コクサラキ
ーウィルス、ポリオウィルス及びバボバウィルスを挙げ
ることができる。

この発明の化合物の、ウィルスを阻害することについて
の有効性は、式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合物が
、ウィルスによって引き起こされる動物及び植物宿主に
おけるウィルス感染症を制御するのに有効であることを
示している。この発明の化合物を用いることによって制
御することができるウィルス感染症は、上述したＲＮＡ
ウィルス又はＤＮＡウィルスによって引き起こされる感
染症を包含する。この発明は、植物に一般的なウィルス
感染症を制御することにも有用である。

さらにまた、この発明は、海綿トプセンチアを回収する
工程と、この海綿を少なくとも１種の適当な有機溶媒と
接触させて、上記式（Ｉ）又は（ＩＩ）で示される化合
物を含む抽出物を得る工程と、該抽出物から式（Ｉ）又
は（ＩＩ）で示される化合物を単離する工程とを含む、
式（１）又は（ＩＩ）で示される化合物の製造方法を提
供する。

式（Ｉ）又は（ｎ）で示される化合物又はその還元誘導
体若しくは塩を製造する方法の好ましい具体例の詳細は
以下の通りである。バハマのボウルディング・ケイで１
１４９フイートの深さでスキューバダイビングで潜って
海綿トプセンチアを集める。この海綿を第１の溶媒とし
てメタノール−トルエン（３：１）で抽出して抽出物を
得、これを濃縮して粗残渣を得る。次にこの残渣を、ペ
ンタンと１０％メタノール水溶液とをｉｆの分配溶媒と
して用いて分配し、水性メタノール抽出物を得る。この
水性メタノール層を次に水て希釈して３０％の濃度とし
、その残渣を３０％メタノール水溶液とジクロロメタン
を第２の分配溶媒として用いて分配する。水性メタノー
ル層を次に濃縮し、残渣な、ブタノールと水を第３の分
配溶媒として用いて分配する。式（Ｉ）又は（ｎ）て示
される化合物を含むブタノール可溶画分を２０％メタノ
ール水溶液に溶解し、種々のクロマトグラフィ一方法に
よって実質的に純粋な式（Ｉ）又は（１）の化合物が得
られる。

メタノール−トルエンは第１の抽出溶媒として現在のと
ころ好ましい選択であるが、他の適当な溶媒を用いるこ
ともできる。適当な溶媒は、海綿の他の成分から式（Ｉ
）又は（ＩＩ）て示されるいずれかの化合物を抽出する
ことができるものである。第１、第２及び第３の分配溶
媒は、ペンタン、ジクロロメタン、ブタノール及びメタ
ノールで置き換えることができる０例えば、他のＣ１−
Ｃ＋Ｏのアルカンをペンタンに代えることができ、他の
低級アルカノールをブタノール又はメタノールに代える
ことができる。

この発明の方法において、あらゆる適当な分画及び単離
方法を用いることができる。適当な分画方法は、シリカ
ゲル、セファデックスＬｌ（−２０、アンモニア処理シ
リカゲル、及びリクロソープＮＨ２カラムを包含する当
業者によって知られた適当なカラムを用いた逆相液体ク
ロマトグラフィー（ＲＰＬＣ）及び高速液体クロマトグ
ラフィー（ＨＰＬＣ）を包含する。カラムは、当業者に
よって知られているように、ヘプタン、酢酸エチル、塩
化メチレン、メタノール、イソプロパツール及び種々の
混合比を有するこれらの組合せのような適当な溶離液て
溶離される。

［実施例］ 次にこの発明を実施例によって例示する。実施例によっ
てこの発明の範囲を限定する意図はない、上述の詳細な
説明及び一般的な説明と組み合わされて、実施例はこの
発明のさらなる理解を与え、この発明の化合物を製造す
る方法を説明する。

以下の実施例は、上述したこの発明の目的を達成するた
めの化合物、製造方法及び使用方法の好ましい具体例を
示すものである。実施例において、製造方法か記載され
ていない出発物質及び試薬は、化学会社のような、この
分野において知られた供給源から市販されているもので
ある。

及胤且土盈ｌユ ドブセンチン及びポロモトブセンチンの製造化合物１ ドブセンチン 化合物２ ブロモドブセンチン ハハマのボウルディング・ケイで１１４９フイートの深
さで採集した海綿トプセンチアの凍結試料（２６４ｇ）
をメタノール−トルエン（３：１）で２回抽出した。抽
出物を１つにまとめ、水浴上で３０℃で真空中で濃縮す
ると１１．３２　ｇの残液か得られた。この残渣（１１
，３２ｇ）をペンタンと１０％メタノール水溶液との間
で分配した。アルコール相を次に水で３０％に希釈し、
ＣＩｌ、ＣＩ□で抽出した。水性メタノール相を儂縮し
、ブタノールと水の間に分配した。単純ヘルペスウィル
ス１型（Ｈ３Ｖ−１，）活性ブタノール可溶画分の一部
（２００ｍｇ）を２０％メタノール水溶液（１ｍｌ）に
溶解し、逆相クロマトグラフィー用充填剤（アミコン・
シリカ−Ｃ８，２Ｏ−４５ｐ　ｍ）を充填したカラム上
てクロマトグラフィーを行なった。活性画分（１２３■
ｇ）を２０％メタノール水溶液で溶離し、逆相ＨＰＬＣ
（１８Ｍ５ｕＣ１８，１０ａｍ　ｘ　２５０　ｍｍ、　
２０％メタノール水溶液）で精製することによって２８
ｍｇの純粋なドブセンチン（１）及び６７ＩＩｇのブロ
モドブセンチン（２）が黄色粉末として得られた。

ドブセンチン（１）、黄色粉末：紫外線吸収、入ｗａｘ
　（ＭｅＯＨ）　２０８　ｕｎ　（１２，０００）、２
４６　ｓｈ　　（５１００）、２８５　（４Ｓ［ｌＯ）
及び　：１７５　（４１１００）；　ＩＲ（にＢｒ）　
：１３９５．３２７５、１６３５、１５９０、１５３０
、１４５５、１２７０、　　　１１６５．。

１１１５．１ｉ９５、及び８７６　ｃ＋＊−’；　’Ｈ
ＮＭＲ（３５０Ｍｔｌｚ、ＤＭＳＯ−ｄａ　”　　１％
　ＴＦＡ−）り　６．８４１　（０１，ｄｄＳＪ　−８
，６，１，８Ｈｚ）、７．９９７　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ　
−１，８Ｈｚ）、７．２０１　（２Ｈ，、ｍ）、７．５
２３　（１８，ｄ、　Ｊ　ｌ−７，９Ｈｚ）、７．９９
０　　（ＩＩＩ、　ｄ、　　Ｊ　　−７，６１（ｚ、　
８．０４１　　（ＩＨ，ｄ、　　　Ｊ　　−８，６Ｈｚ
）、８．１５５、（ＩＨ，ｄ　Ｊ　＝２．８　Ｈｚ）、
８．１５９（１（１、Ｓ）、　　８．４８７　　（ＩＮ
、　　　ｄ、　　　Ｊ　　＝　　３．２　　Ｈｚ）、　
　１１．７６２（１１１、Ｓ）、　　１２．３５５　　
（ＩＨ，ｄ、　Ｊ　　−２，２Ｈｚ）、　　　”コＣＮ
ＭＲ（９０Ｎ）ｌｚ、ＤＭＳＯ−１％　ＴＦＡ−）１）
９８．１１　　（ｄ）、１０２．７２　（ｓ）、１１２
．３８　（ｄ）、１１：１．１２　（ｄ）、１１３．９
５（ｓ）、１１６．ＱＯ（ｄ）、１１８．６７　（ｓ）
、１１９．４６　（ｄ）、１２０．５０　（ｄ）、１２
２．０２　（ｄ）、１２２．４４　（ｄ）、１２４．２
７（ｓ）、１２５．７４　（ｄ）、１３１．１１　Ｃ＝
、）、１：＋６．５３　（ｓ）、１３７．７８　（ｄ）
、１３８．３３　Ｃ５）、１４１．２３　（Ｓ）、１５
５．２５（Ｓ）、１７１．５　（ｓ）；　　ＨＲＥｆＭ
Ｓ　３４２　（１００％、（：２ｏ１１＋Ｊ４０ｚ、Ｍ
”）、２０９　（：＋９、Ｃ＋２ＨｙＮ３０）、１８３
（２８、Ｃ１５Ｌ　　Ｎ＊）、　１７１　　（１７、Ｃ
ｌ０１１７Ｎ２０　　）、　１６０（１４５、Ｃ９１１
６Ｎ　Ｏ□）　１３３　（５５、Ｃ，Ｈ？ＮＯ）及び１
０５（１５）。

ブロモドブセンチン　（２）、黄色結晶、融点２９６−
７℃：紫外線吸収、入ｗａｘ　（ＭｅｔｌＯ）　２０９
　ｎｍ（１３，０００）、２：１６　（９，７００）、
２８７　（５０口０）及び３７４（５８（１０）；　Ｉ
Ｒ（ＫＢｒ）　３４（１０−３１００，２２５５，２１
２０，１６３５，１５９０，１５２０，１４４５，１２
６５，１２３０，１１６５，１０２８，１００５、及び
８７５ｃＩＩ−凰；’ＨＮＭＲ（３５０Ｍｌｌｚ。

ＣＤＣｌ３：ｌ；Ｆ３ＣＯＯＨ１：１）　７．０９８　
（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ　−８，６，２，４Ｈｚ）、７．１
９３　（１８，ｄ、　Ｊ　−２，４Ｈｚ）、７．２２７
（ＩＨ，ｄｄ、　Ｊ　−８，６，１，８Ｈｚ）、７．５
５８　（ＬＨｌｄ、Ｊ−８，６Ｈｚ）、７．６６８　（
ＩＨ，ｄ、　Ｊ　＝＝１．８　Ｈｚ）、７．８１２（１
、Ｓ）、７．９２７　（ＩＨｌｄ、、　Ｊ　ｌ＝３　）
＋ｚ）、８．２０２　（１８、ｄ、　Ｊ　−８，６１１
ｚ）、８．３７１　（ＩＨ，ｄ、　Ｊ　−３Ｈｚ）、９
．２７２　（ＩＨ，ｂｒｓ）、１０．４０９　（ＩＨ，
ｂｒｓ）；　”ＣＮＭＲ（９０ＭＨｚ、　ＣＤＣ１５：
ＣＦｓ：　Ｃ０ＯＨ］＋１）　１０１．６　（ｄ）、１
０１７　（ｓ）、１１６．７　（ｄ）、１１７．０　（
ｓ）、１１７．５　（ｄ）、１１８．２　（ｄ）、１１
９．６　（ｓ）、１２１．５　（ｄ）、１２２．６　（
ｓ）、１２５．２　　（ｓ）、１２．５．５　　（ｄ）
、１２７．７　　（ｄ）、１２８．０　　（ｄ）、１３
５．０　　（Ｓ）、　１３９．７　　（ｓ）、　１４０
．５　　（Ｓ）、　１４０．８　　（ｄ）、１４１．７
　（ｓ）、１５５．０　（ｓ）、１７２．４　（Ｓ）；
高分解能質量スペクトル（徐ＲＥＩＭＳ）　４２２／４
２０　（４０％、Ｃ２ｏＨ１：＋ＢｒＮ４０２、　Ｍ”
）、　３９４／３９２　　（１，３、Ｃ＋Ｊ＋＋ＢｒＮ
３０２）、　３４２　　（１３、Ｍ”−Ｂｒ）、２８９
／２８７　　（６％、Ｃ＋２１１ｄｒＮＪ）、２６３／
２６１　　（１００、Ｃ９Ｈ６ＢｒＮ２）、２２３／２
２１　　（＋３、　Ｃ９Ｈ６ＢｒＮ２）、　２０９／２
０７　　（９，５、ＣｇＨａＢｒＮＯ）、１８２　（１
５，２６１−Ｏｒ）及び１３３　（９４、Ｃ，Ｈ，Ｎｏ
）。

この発明の化合物の抗腫瘍活 実施例で得られた化合物ｌ（ドブセンチン）及び２（ポ
ロモトプセンチン）に対応する式（Ｉ）及び（ｎ）の化
合物の抗腫瘍効果を示すために以下の分析方法を用いた
。

Ｐ３８８３８８マウス白血病細 胞細胞の維持 １０％ウマ血清、４ｍＭグルタミン及び１０ｇｇ／ｉｌ
ゲンタマイシン（バイオログス・インコーボレーテット
）を含むダルベツコＭＥＭ＠地中てＰ３８８マウス白血
病細胞を培養した。

操作 １．２４穴プレート又はチューブのそれぞれのウェルに
化合物を加え、溶媒を蒸発乾固させる。

２、それぞれのウェル又はチューブに２　ｍｌ（１，２
ｘｌＯ″個）の細胞を加え、かきまぜる。

３．１０％ＣＯ，中で３７℃で４８時間インキュベート
する。

４、倒立顕微鏡でプレートを読み、ｌ＋から４千まで以
下のようにして活性に点数をつける。

ＮＤ：検出できず、生育制御　〉９０２１十：生育制御
７５％−９０％ ２＋：生育制御５０％−７４％ ３＋、生育制御２５％−４９％ ４＋−生育制御く２５％ 細胞係数はそれぞれのチューブについて行ない、結果は
制御の百分率で示されている。

陽性対照：ビンブラスチン又はビンクリスチン水溶液 ヒト腫瘍株細胞分析 株細胞の維持 ＨＣＴ−８ヒト結腸腫瘍細胞をＲＰＭＩ　ｌ［ｉ４０培
地（ギブコ社）中で生育した。　Ａ３４９ヒト肺ガン細
胞及びＴ４７Ｄヒト乳ガン細胞をダルベツコの培地（バ
イオログ・インコーホレーテッド）中で培養した。全て
の培地は１０％ウシ胎児血清及び５０ｐｇ／ｍｌのゲン
タマイシンを含んでいた。全てのヒト腫瘍株細胞は５％
ＣＯ，中で３７℃でインキュベートし、１週間に１＠継
代培養した。

１．２４穴ブレートのそれぞれのウェルに１厘１の種細
胞（５０００個の）ＩＣＴ−８細胞、８０００個のＡ３
４９細胞、１２０００個の７４７Ｄ細胞）を植える。

２、Ｃｏ２インキュベーター中で４８時間インキュベー
トする。

３、それぞれのウェルに化合物を加え、さらに１２０時
間インキュベートする。

４、培地を捨て、メチレンブルー（ＨＣＴ−８）又はク
リスタルバイオレット（Ａ５４９及びＴ４７Ｄ）て染色
する。

５、薬剤で処理したウェルと対照（薬剤を加えていない
）のウェルにおける細胞密度を比較し、以下のように点
数をつける。

ＮＤ：検出せず、対照の生育の〉９０％１＋：対照の生
育の７５％−９０％ ２＋：対照の生育の５０％−７４％ ３＋：対照の生育の２５％−４９％ ４＋：対照の生育のく２５％ ビンブラスチン又はビンクリスチン対照（２ｇｌ／分析
を用いる）の最終濃度 溶液濃度　　添加量　試験に３ける最終濃度５０　ｍｇ
／■ｌ　　　２ｐｌ　　　　　　５０　　戸ｇ／璽１２
０　　ｍｇ／ｍｌ　　　　　　２ｐ、］　　　　　　　
　　　　　２０　　　ｐｇ／ｍ１５．０ｍｇ／ｍｌ　　
２ｇ！　　　　　　５．０　７ｚｇ／ｍ１０．５　ｍｇ
／■ｌ　　２ＪＬＩ　　　　　　Ｏ，５戸ｇ／ｍｌ備考 １、水以外の溶媒については、溶媒をチューブ又はウェ
ルからフードをかぶせて蒸発させた。

２、クロロホルム及びブタノールはプラスチック２４穴
プレートでは用いることができない、ガラス管を用いる
。

それぞれのプレートの最後の２つのウェルでは溶媒対照
を２つ行ない、又はそれぞれのラックの７２以下のチュ
ーブの最後の４本で溶媒対照を常に行なう。また、各プ
レート又はチューブにおいて、４つのウェル又はチュー
ブは培地及び細胞のみを入れる。２００ｐ＋を超える体
積の水溶液を用いる場合には、試料を乾燥し培地中で所
望の濃度とする。

上記分析の結果が第１表にまとめられている。

第１表は、化合物ｌ及び２が少なくとも２０ｆｉｇ／ｍ
ｌの濃度において良好な抗腫瘍活性を有することを示し
ている。

Ｐ３８８生体内実験の手順 ＤＢＡ／２マウスから得たＰ３８８白血病細胞をＢＤＰ
Ｉマウスに腹腔内接軸した。接種物の濃度は０．１■ｌ
中に１０６個細胞であった。腫瘍の細菌学的チェックか
陰性であったので、第１日（ｍ種２４時間後）にマウス
を６匹の群に無作為抽出した。

被検物質を、絶対エタノール及びＴｗｅｅｎ　８０の助
けを借りて０．９＄　　ＮａＣｌ中に溶解又は懸濁し、
０，５１／マウスの投与量でマウスに腹腔内投与した（
　ｇＤｌ−５）。毒性の証拠を与えるために第１日及び
第５日にマウスの体重を測定し、死亡は毎日記録した。

それぞれの実験は適当な数の未処理対照マウス、１投与
量の５−フルオロウラシルから成る陽性対照及び４投与
量の被検物質を含む。被検物質は第１日に新鮮なものを
調製し、５日間毎日投与した。量か十分て被検物質か変
化しないのて、毎日新鮮な投与物を調製する必要はなか
った。治療評価の最終時点で平均生存時間及びメジアン
生存時間並びに第３０日における長期間生存個体数を調
べた。寿命の増加百分率（＄　ＩＬＳ）が２５あれば有
意な活性を有する証拠である。

第１表及び第２表に示す生体外及び生体内試験の結果か
ら明らかなように、この発明の物質は腫瘍を阻害し又は
破壊するのに有効てあり、従って、ガン性悪態症のよう
な、腫瘍によって引き起こされる又は腫瘍に関連する疾
病を制御するのに有効であり、この発明の目的を達成す
る。

この　明の物　の打つィルス活 実施例で得られた化合物ｌ及び２（ドブセンチン及びブ
ロモドブセンチン）に対応する式（Ｉ）又は（ｎ）で示
される化合物の生体内抗ウィルス効果を示すために以下
の分析方法を採用した。

Ａ、細胞培養物の維持 １、ウィルス ａ、単純ヘルペスウィルス１　塁（Ｈ３Ｖ−１）はＣＶ
−１株細胞中で複製する。　ＣＶ−１は一次アルリカミ
ドリザル細胞から誘導されるフィブロブラスト様細胞培
養物である。

２　、　ＣＶ−ＩＩＩＩ胞の生育 ａ、１５０ｃ■２の組織培養フラスコ中で、１０％ウシ
胎児血清を含む４０１１のＥＭＥＭ　（生育培地）中ニ
１０　ｘ　ＩＤ’４ｆ４ノＣＶ−１ｍＰＭを植エル。

ｂ、フラスコでの植えつけ７日後に細胞数は約４０−５
０　ｘ　１０’個であるべきである。これらの、数字に
基づき、ＣＶ〜１の倍増時間は７２時間である。

３、トリプシン処理 ａ、培地を無菌的に除去する。

ｂ、Ｃａ”及びＭｇ２＋を含まないダルベツコのリン酸
緩衝食塩水１０１で細胞シートを２回すすぐ。

ｃ、　１．ｓ　ｍｌないし２．０１のトリプシン−ＥＤ
ＴＡ混合物を加える。

ｄ、フラスコを室温で１０分間インキュベートする。

ｅ、クラスを振盪する。

ｆ、１０ｍ１のＥＭＥＭ生育培地を加え、細胞塊をピペ
ッティングにより破壊する。

ｇ、細胞を計数する。

Ｂ、ウィルス分析のためのプレートの調製ｌ、細胞濃度 ａ、細胞をＥＭＥＭで４　ｘ　１Ｇ’細胞／ｍｌニ希釈
スる。

ｂ、２４穴のトレーに、各ウェルに０．５１づつ植える
。各ウェルの細胞濃度は２　ｘ　１０’細胞である。

ｃ、５％　ＣＯ２中で３７℃でインキュベートする。

ｄ、ウェルは植えつけ後数日（好ましくは２．３又は４
日）後まで使用できる。

ｃ、ｃｖ−ｉ細胞中（７）Ｈ３Ｖ−１（７）分析１、プ
レート中のＧＶ−１のウィルスによる感染ａ、培地をウ
ェルから除去する。

ｂ、少なくとも２５プラ一ク形成単位（ＰＦＬＩ）で８
０　ＰＦＵ以下のウィルスをウェルに感染させる。

Ｃ０感染細胞を３７°Ｃで１．５時間培養する。

ｄ、インキュベーション期間の最終時点て上清を注ぎ出
す。

ｅ　、　０．５　Ｌｌｌのメチルセルロース被覆培地（
Ｍｃｏ）を加える。

１）ＭＣＯは、１％の４０００センチボイズのメチルセ
ルロースから成る、フェノールレッドを含まない維持培
地である。ウシ胎児血清を５％の濃度で用いる。

２、薬剤評価 ａ、薬剤評価のために１円形のろ紙（直径６■）を０．
０２　ｍｌの海綿抽出物又は被検化合物で濡らす。

ｌ）溶媒を室温で２０分ないし３０分で蒸発させる。

２　）　ＣＶ−１細胞、ウィルス及びＭＣＯを含むウェ
ル中にろ紙を置く。

ｂ０組織培養プレートを３７℃て４８時間インキュベー
トする。

Ｃ９４８時間後、０．５１のＮＲＭＣＯを各ウェル上に
置く。

１　）　ＮＲ鱈ＣＯは、０．１飄ｇ／■ｌのニュートラ
ルレット染料と２％の１５センチボイスのメチルセルロ
ースを含み、フェノールレッドを含まない維持被覆培地
である。

ｄ、プレートを３７°Ｃで培養し、次の日に読む。

１）抗ウィルス活性は２つのパラメー ターから観察されるべきである。１つはプラーク数の現
実の減少であり、もう１つはプラークの直径の縮小であ
る。

３、薬剤活性の点数付け ａ、抗ウィルス活性（ＡＶＡ）は０から＋＋＋までの間
で点数付けする。

＋＋＋：ブラーク形成の完全な阻害 ＋＋：部分的阻害 ＋　　：部分的阻害 ０　　：防御なし す、細胞毒性（Ｃｙｔ） ０：可視的又は顕微鏡的細胞毒性がない１６：完全な細
胞破壊 ８．１Ｏ１１２，１４：部分的細胞毒性上記分析の結果
が第３表にまとめられている。

第３表 化合物ｌ及び２の抗ウィルス活性 第３表は、化合物ｌ及び２が１００　ｍｇ／電【及び／
又は２００　ｍｇ／ｍｌの濃度で抗ウィルス活性を有す
ることを示している。

上記生体外試験から明らかなように、この発明の化合物
はウィルスの生育阻害に有効であり。

従って、ヘルペス及び一般的な風邪のようなウィルスに
関連する疾病の制御に有効てあり、この発明の目的を達
成する。

この発明の範囲は、上記説明、実施例及び示唆された用
途によって限定されず、この発明の精神から逸脱するこ
となく修飾することが可使である。例えば、実施例１及
び２で得られた化合物の、アシル又はフッ素化誘導体の
ような誘導体も、上記好ましい具体例と同様な抗ｍ瘍及
び抗ウィルス活性を有し得る。さらに、ここで記載した
化合物は、例えば鎮痛剤のような他の有用な用途を宥す
るかもしれない、この発明の化合物の投与は、当業者に
よって現在知られ又は予想されるあらゆる適当な方法及
び技術によって行なうことができる。従って、この発明
は、特許請求の範囲及びその均等の範囲に入るこの発明
の修飾及び変形をカバーすることを意図する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 （１）下記一般式（ I ） ▲数式、化学式、表等があります▼ （ I ） （ただし、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾４及びＲ＾５はそれぞ
   れ同一又は異なって水素、低級アルキル、又は低級アシ
   ル基であり、Ｒ＾３は二重結合酸素、又は２つの単結合
   水素、水酸基若しくは同一若しくは異なる低級アルコキ
   シル基若しくは低級アシロキシ基であり、Ｘは水素、水
   酸基又はハロゲンである）で示される化合物。 （２）式（ I ）中のＸが水素又は臭素であり、Ｒ＾１
   、Ｒ＾２、Ｒ＾３、Ｒ＾４及びＲ＾５は以下のものを示
   す特許請求の範囲第１項記載の化合物。 （ｉ）Ｒ＾３＝Ｈ、ＯＨ、Ｒ＾１＝Ｒ＾２＝Ｒ＾４＝Ｒ
   ＾５＝（ｉｉ）Ｒ＾３＝Ｈ、ＯＡｃ、Ｒ＾１＝Ｒ＾２＝
   Ｒ＾４＝Ｒ＾５＝（ｉｉｉ）Ｒ＾３＝Ｏ、Ｒ＾１＝Ｒ＾
   ２＝Ｒ＾４＝Ｈ、Ｒ＾５＝（ｉｖ）Ｒ＾３＝Ｏ、Ｒ＾１
   ＝Ｒ＾２＝Ｒ＾４＝Ｒ＾５＝（ｖ）Ｒ＾３＝Ｏ、Ｒ＾１
   ＝Ｒ＾２＝Ｒ＾４＝Ｒ＾５＝（３）下記一般式（II） ▲数式、化学式、表等があります▼（II） （ただし、Ｘは水素又は臭素である）で示される特許請
   求の範囲第１項記載の化合物。 （４）実質的に純粋である特許請求の範囲第１項記載の
   化合物。 （５）実質的に純粋である特許請求の範囲第３項記載の
   化合物。 （６）無毒性の薬理的に許容できる担体又は希釈剤中に
   、抗腫瘍又は杭ウィルスに効果のある量の１又は２以上
   の特許請求の範囲第１項記載の化合物を活性成分として
   含む抗腫瘍組成物。 （７）無毒性の薬理的に許容できる担体又は希釈剤中に
   、抗腫瘍又は抗ウィルスに効果のある量の１又は２以上
   の特許請求の範囲第２項記載の化合物を活性成分として
   含む抗腫瘍組成物。 （８）無毒性の薬理的に許容できる担体又は希釈剤中に
   、抗腫瘍に効果のある量の１又は２以上の特許請求の範
   囲第２項記載の化合物を活性成分として含む抗腫瘍組成
   物。 （９）抗腫瘍効果量の１又は２以上の特許請求の範囲第
   １項記載の化合物を腫瘍と接触させることから成る宿主
   中の腫瘍の阻害方法。 （１０）抗腫瘍効果量の１又は２以上の特許請求の範囲
   第３項記載の化合物を腫瘍と接触させることから成る宿
   主中の腫瘍の阻害方法。 （１１）宿主は哺乳動物である特許請求の範囲第９項記
   載の方法。 （１２）宿主は哺乳動物である特許請求の範囲第９項記
   載の方法。 （１３）無毒性の薬理的に許容できる担体又は希釈剤中
   に、抗ウィルスに効果のある量の１又は２以上の特許請
   求の範囲第１項記載の化合物を活性成分として含む抗ウ
   ィルス組成物。 （１４）無毒性の薬理的に許容できる担体又は希釈剤中
   に、抗ウィルスに効果のある量の１又は２以上の特許請
   求の範囲第２項記載の化合物を活性成分として含む抗ウ
   ィルス組成物。 （１５）無毒性の薬理的に許容できる担体又は希釈剤中
   に、抗ウィルスに効果のある量の１又は２以上の特許請
   求の範囲第３項記載の化合物を活性成分として含む抗ウ
   ィルス組成物。 （１６）抗ウィルス効果量の１又は２以上の特許請求の
   範囲第１項記載の化合物をウィルスと接触させることか
   ら成るウィルスの阻害方法。 （１７）抗ウィルス効果量の１又は２以上の特許請求の
   範囲第２項記載の化合物をウィルスと接触させることか
   ら成るウィルスの阻害方法。 （１８）抗ウィルス効果量の１又は２以上の特許請求の
   範囲第３項記載の化合物をウィルスと接触させることか
   ら成るウィルスの阻害方法。 （１９）海綿トプセンチアを回収する工程と、この海綿
   を少なくとも１種の適当な有機溶媒と接触させる工程と
   、 該海綿の抽出物と溶媒の混合物を得る工程 と、 該抽出物から特許請求の範囲第１項記載の化合物を単離
   する工程とを含む特許請求の範囲第１項記載の化合物の
   製造方法。 （２０）海綿トプセンチアを回収する工程と、この海綿
   を少なくとも１種の適当な有機溶媒と接触させる工程と
   、 該海綿の抽出物と溶媒の混合物を得る工程 と、 該抽出物から特許請求の範囲第３項記載の化合物を単離
   する工程とを含む特許請求の範囲第３項記載の化合物の
   製造方法。 （２１）抗腫瘍効果量の特許請求の範囲第１項記載の化
   合物を腫瘍と接触させることから成る、宿主中の腫瘍の
   存在によって引き起こされるガン性悪態症の治療方法。 （２２）抗腫瘍効果量の特許請求の範囲第２項記載の化
   合物を腫瘍と接触させることから成る、宿主中の腫瘍の
   存在によって引き起こされるガン性悪態度の治療方法。 （２３）抗腫瘍効果量の特許請求の範囲第３項記載の化
   合物を腫瘍と接触させることから成る、宿主中の腫瘍の
   存在によって引き起こされるガン性悪態度の治療方法。