JPS631968A - ビタミン類分析装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

（イ）産業上の利用分野 この発明は、ビタミン類の分析装置に関りる。 さらに詳しくは、脂溶性ビタミンと水溶性ビタミンを分
離分析するビタミン類分析装置に関する。 （Ｉ］）従来の技術 ビタミン類は、脂溶性ビタミンと水溶性ビタミンに大別
され、例えば前者に属す−るものとしＣレチノール類、
カルシフエ［１−ル類、トーゴ］ノ１［１−ル類等が挙
げられ、後者に属するものとしＣに］チン酸類、ヂアミ
ン、リボフラビン、ピリドキシン類、パン１へテン酸、
コリン、Ｉス］ルピン酸等が挙げられる。これら種々の
ビタミン類を高速液体クロマトグラフィにより分離分析
する場合、脂溶性ビタミンと水溶性ビタミンの分離条件
か異なるため通常別々に分析装置や分析条件を設定して
行なわれている。 （ハ）発明が解決しようとづる問題点 しかし、脂溶性どタミンと水溶性ビタミンか同一試料中
に共存しこれらを各々分析したい場合、上記の如く分離
条件が異なるため一つの分離分析装置を用いる際には一
回に分＋ｊで、例えば水溶竹ビタミンの分析後に分析条
例を変えて脂溶性ビタミンの分析を行なう必要があり操
作が繁紺である。 また分離分析装置を二台用彦して脂ン８　’ｌ’ｌビタ
ミンと水溶性ビタミンを別々に分析覆ることも完えられ
るが、この場合には、水溶性ビタミン分離条ｆ１では８
斤溶性ビタミンがカラムから溶Ｎ１され＜−ｒいため、
水溶性ビタミン分析装置側のカラムに試１′Ｎｉ中に共
存する脂溶性ビタミンが残留し、分析毎にカラムの洗浄
が必要となる不都合がある。 この発明は、かかる状況に鑑みなされたものであり、こ
とに脂溶性ビタミンと水溶性ビタミンを共存する試料に
ついてのビタミン類の分画１介析を効率良く行なうこと
ができる分析装置を提供しようとするものである。 （ニ）問題点を解決するための手段 かくしてこの発明によれば、（ａ）水溶性ビタミン溶離
液供給部と試料導入部と逆相液体り［」マドグラフィ用
カラムをこの順に接続してなる水溶性ビタミン分離流路
と、山）脂溶性ビタミン溶離液供給部と逆相液体クロマ
トグラフィ用カラムをこの順に接続してなる脂溶性ビタ
ミン分離流路と、（ｃ）脂溶性ビタミンのトラップ用カ
ラムを、上記分離流路（ａ）の試１．１１３人部と逆相
液体クロマ１−グラフィ用カラムとの間及び上記分離流
路＋ｂ＋の溶離液供給部と逆相液体クロマトグラフィ用
カラムとの間のいずれかに切換可能に流路接続する切換
流路と、（ｄ＋上記分離流路（ａｌ及び（ｂ）の各々の
逆相液体り［１７１−グラフィ用カラムの下流の一方を
検出部に接続し他方をドレインに接続覆る切換弁、を備
えでなるビタミン類分析装置が提供される。 この発明に用いる水溶性ビタミン溶ｌｖＩ液としては酸
性イオンベア剤を含有する酸性〜中性の緩衝液（例えば
、酢酸やリン酸緩衝液）が適している。 酸性イオンベア剤としてはアルキルスルホンＭ石等のス
ルホン酸系イオンペア剤が好ましく、その濃度は０．１
〜５０１１１Ｍ程度が適しでいる。これらの水溶性ビタ
ミン溶離液には、溶出を速めるための親水性有機溶媒が
含有されていてもよいが、この石が多いと脂溶性ビタミ
ンも溶出さゼる倶れがあるため３０容量％未満とすべき
であり、０〜２０容量％とするのが好ましい。かかる親
水性有機溶媒としてはメタノール、エタノール、アセト
ニトリル等が挙げられる。 この発明に用いる脂溶性ビタミン溶離液どしでは通常、
親水性有機溶媒が用いられその例としては、メタノール
、エタノール、アセト二］〜リル等が挙げられる。これ
ら有機溶媒中には溶出速度の調整のための水が含有され
ていＣもよいが、その量はθ〜２０容量％とするのが適
している。 この発明に用いる逆相液体クロマ１−グラフィ用カラム
としては、汎用の逆相用カラムが使用でき例えば、シリ
カゲルにオクタデシル基、オクチル基などの炭化水素を
化学結合さじた充填剤を用いたものや、疎水性ポリマー
を用いたものが挙げられる。−方、脂溶性ビタミントラ
ップ用カラムとしては、これらと同様に汎用の逆相液体
り［１マドグラフイ用カラムが使用できるが、トラップ
能及び水溶性ビタミン類をできるだけ迅速に溶出さ１１
る点で、テトラメチロールメタントリアクリレート系樹
脂等のエステル系逆相液体クロマトグラフイ用カラムを
用いるのが好ましい。 この発明における切換流路（ｃ）は六方切換バルブ等を
介して切換可能に分離流路（出、山）のいずれかに接続
されるよう構成するのが適している。−方、切換弁（小
は四方切換バルブ等で構成するのが適している。 （ホ）作　用 この発明の装置において、試料導入部から導入された脂
溶性ビタミン及び水溶性ビタミン含有試料は、切換流路
（ｃ）を分離流路＋ａｌ側に設定した状態でトラップ用
カラムに移送されるが、水溶性ビタミン溶離液供給下で
あるので脂溶性ビタミン類は該トラップ用カラムでトラ
ップされ水溶性ビタミン類が逆相液体クロマトグラフィ
用カラムへ導入されて分離され、切換弁を介して検出部
へ順次移送されて検出・測定等が行なわれる。この後、
切換流路ｔｅｌを分離流踏出）側に切換えることにより
トラップ用カラムへ脂溶性ビタミン溶離液が導入されそ
こで保持されていた脂溶性ビタミン類が溶離して逆相液
体クロマトグラフィ用カラムへ導入され−（分離され、
切換弁の切換えにより検出部へ順次移送されて検出・測
定等が行なわれる。従つ０分Ｎ１流路（ａｉ側の逆相液
体り

【］？ｊ・グラフィ用カラムへ脂溶性ビタミン類の
導入が防止され該”カラムの洗浄を行イｆうことなく次
分析を行なうことが可能となる。 くべ）実施例 第１図は、この発明の［ブタミン類分析装］ｔ“ｌの一
実施例を示づ一構成説明図ひある。図にａ３いＣビタミ
ン類分析装置１は、基本的に水溶性ビタミン分離流路Ａ
、脂溶性ビタミン分離流路［３及び切換流路Ｃとから流
路構成され−Ｃいる。水溶↑）１ビタミン分離流路Ａは
、水溶性ビタミン溶離液槽２１ど高Ｌ１−ポンプ２２ど
からなる水溶性ビタミン溶Ｍ液供給部２と試料導入部３
と逆相液体りｒｊＶｔ〜グラフィ用カラム４とをこの順
に備えてなる。脂溶性ビタミン分離流路Ｂは、脂溶性ビ
タミン溶離液槽５１と高圧ボン１５２とからなる脂溶性
ビタミン溶離液供給部５ど逆相液体り目７１〜グフフイ
用カラム６どをこの順に備えてなる。切換流路（ｃは脂
溶性ビタミントラップ用カラム７を備え、六／ｊ　ｌ、
ｌＪ換バルブ８により分離流路Ａ及び［３にリンクされ
−Ｃ１・ラップ用カラム７を分離流路Ａの試料導入部３
とカラム４との間か、分離流路［３の供給部５とカフム
ロとの間に流路接続するように構成されてなる。 一方、分離流路Ａ及びＢの下流（よ四方切換バルブ９に
接続され、この四方切換バルブを介し−Ｃ各分離流路の
一方は（ＪＶ吸光検出器１０及び蛍光検出器１２を備え
た検出流路に接続され他方がドレイン１１へ接続されて
おり、バルブ９の切換えによりこれらの接続は逆転され
る。なお、１３はデータ処理機であり１４は廃液槽′Ｃ
ある。 １５はシステムコントローラぐあり、六り切換バルブ８
、四方切換バルブ９、検出器１０．１２を制御づる。ま
た１６はカラム恒温槽ぐある。 上記ビタミン類分析装置１におい（、システム下］ンｌ
へｌＴ、Ｉ−ラ１５によりバルブ８，９が実線の位置に
設定された状態ぐ、試料導入部３から、ビタミン類含有
試料が注入される。試料成分はバルブ８を介しＣカラム
７へ導入されそこで脂溶性ビタミン類は保持され主とし
て水溶性ビタミン類かカラム４へ移送されＣ各成分に分
離される。各分離成分は次いて・電磁弁９を介して検出
器１０．１２へ移送されイこで吸光測定及び／又は蛍光
測定に付されて排出される。次いで］ン１〜ローラ１５
はバルブ８，９を切換えで破線位置とづ−る。これによ
り供給部５から脂溶性ビタミン溶り＋液が電磁弁８を介
し−Ｃカラム７へ導入されそこで保持されＣいた脂溶性
ビタミン類が溶離されてカラム６へ移送され各成分に分
離される。各分離成分は−）二記と同様に検出器１０．
１２により測定に供され１７Ｆ出される。−方、脂溶性
ビタミン類がカラム７から溶離し−Ｃづ−ぺてカラ７．
６へ移送された時点（゛−］ン１〜「】−ラ１５はバル
ブ８を実線位置に切換え０次の分析に備え］ンディシ〕
ニングが行へわれ、脂溶性ビタミン類測定後おいてす−
ぐに次の試料の？Ｊ−人・分析が行なわれることとイす
る。 −１記装買を用いて種々の水溶性及び脂溶性ビタミンを
含む試Ｈの分析を行なった。分析条ｆ１は以−１・の通
りぐある。 水溶性ビタミン溶離液２１： オクタンスルホン酎ノー１〜リウム　ｉ、２ｍ　Ｍを含
む１００１１１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ２，１）　　９容
量部と、アセトニトリル１容石部の混合液（流量　１．
５ｙｌ／分） ノコラム４； Ｓｈｉｍ−ｐａｃｋ　　ＣＩ　Ｃ−０ＤＳカラ１ｚ（６
，０印φＸ１５ｃａ＋、■島津製作所製） （カラム温度４０℃） 脂溶性ビタミン溶離液５１； メタノール（流量Ｌ５ｙ１／分） カラム６； ゾルパックスＯＤＳカラム（４，６ｍｍφ×１５１、デ
ュポン社製） （カラム温度４０℃） トラップカラム７； ３ｈｉｍ−ｐａｃｋ　　５ＰＣ−ＲＰｌ　（４，０ｍｍ
φ×３．８ＣＩＩｌ；テトラメチロールメタンｌ−リア
クリレート系樹脂カラム、（株島津製作所製）〔なお、
検出はＵｖ吸光検出器１０のみを用い、水溶性−ビタミ
ンについては２１０ｎｍ　、　ＩＪ斤溶す牛ビタミンに
ついては２５４１１１１での吸光度変化を］シト１−］
−ラ１５による自動切換により測定した〕この結果を第
２図及び第３図に示した。第２図は水溶性ビタミンにつ
いての結果を、第３図は脂溶性ビタミンについての結果
を示すものである。 図中のピーク番号は下記に示すビタミン類に対応するも
のである。 （水　溶　性） ■・・・・・・ニコチン酸 ■・・・・・・ニコチン酸アミド ■・・・・・・パントテン酸 ■・・・・・・リン酸リボフラビン ■・・・・・・ピリドキシン ■・・・・・・カフェイン（非ビタミン）■・・・・・
・チアミン ■・・・・・・リボフラビン （脂　溶　性） ■・・・・・・酢酸レチノール ■・・・・・・トコノェロール ０・・・・・・メナテトレノン ０・・・・・・酢酸トコフェロール Ｏ・・・・・・パルミチン酸しヂノールこのように水溶
性、脂溶性ビタミン共に明瞭に分離されていることがわ
かる。 （ト）発明の効果 この発明のビタミン類分析装置によれば、脂溶性ビタミ
ンと水溶性ビタミンを共存する試料を１回の試料導入操
作で効率良く簡便に分１Ｉｉｌ１分析することができる
。さらに分析毎に各々のカラムの洗浄操作ごとに脂溶性
ビタミンの除去操作を必要どせず、単なるコンディショ
ニング程度で連続的にかかる共存試料の分析が可能とな
り多聞の試料の分析用として有利であり、カラムの寿命
の点からも有利である。そして装置構成上も一台の検出
器を共用する利点を有している。

【図面の簡単な説明】

第１図はこの発明のビタミン類分析装置の一実施例を示
す構成説明図であり、第２図及び第３図は実施例で得ら
れた分析チャートを示すグラフ図である。 １・・・・・・ビタミン類分析装置、 ２・・・・・・水溶性ビタミン溶離液供給部、３・・・
・・・試料導入部、 ４．６・・・・・・逆相液体クロマトグラフィ用カラム
、５・・・・・・脂溶性ビタミン溶離液供給部、７・・
・・・・脂溶性ビタミントラップ用カラム、８・・・・
・・六方切換バルブ、　９・・・・・・四方切換バルブ
、１０・・・・・・Ｕｖ吸光検出器、１１・・・・・・
ドレイン、１２・・・・・・蛍光検出器。 第２図 の イ呆お芋Ｂ寺間　（分） 第３図 イ呆キ予日寺開　（５ジ

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １、（ａ）水溶性ビタミン溶離液供給部と試料導入部と
   逆相液体クロマトグラフィ用カラムをこの順に接続して
   なる水溶性ビタミン分離流路と、（ｂ）脂溶性ビタミン
   溶離液供給部と逆相液体クロマトグラフィ用カラムをこ
   の順に接続してなる脂溶性ビタミン分離流路と、（ｃ）
   脂溶性ビタミンのトラップ用カラムを、上記分離流路（
   ａ）の試料導入部と逆相液体クロマトグラフィ用カラム
   との間及び上記分離流路（ｂ）の溶離液供給部と逆相液
   体クロマトグラフィ用カラムとの間のいずれかに切換可
   能に流路接続する切換流路と、（ｄ）上記分離流路（ａ
   ）及び（ｂ）の各々の逆相液体クロマトグラフィ用カラ
   ムの下流の一方を検出部に接続し他方をドレインに接続
   する切換弁、を備えてなるビタミン類分析装置。