JPS63149565A - 免疫測定法 - Google Patents
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- JPS63149565A JPS63149565A JP29641286A JP29641286A JPS63149565A JP S63149565 A JPS63149565 A JP S63149565A JP 29641286 A JP29641286 A JP 29641286A JP 29641286 A JP29641286 A JP 29641286A JP S63149565 A JPS63149565 A JP S63149565A
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Landscapes
- Investigating Or Analysing Materials By The Use Of Chemical Reactions (AREA)
- Investigating Or Analysing Materials By Optical Means (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は、検体中に存在する抗原または抗体を。
免疫凝集反応により測定する免疫測定法に関する。
（従来の技術）
体液中の微量成分などの測定方法として、目的とする被
測定物質（抗原または抗体）に該物質と抗原抗体反応し
うる物質（抗体または抗原）を作用させ、生じる抗原−
抗体結合物による凝集の度合を測定する方法が採用され
ている。それには。
測定物質（抗原または抗体）に該物質と抗原抗体反応し
うる物質（抗体または抗原）を作用させ、生じる抗原−
抗体結合物による凝集の度合を測定する方法が採用され
ている。それには。
例えば、上記被測定物質を含む検体と上記抗原抗体反応
しうる物質とを直接反応させる免疫比濁法や上記抗原抗
体反応しうる物質を不溶性担体に担持させた試薬を検体
に作用させる方法（例えば。
しうる物質とを直接反応させる免疫比濁法や上記抗原抗
体反応しうる物質を不溶性担体に担持させた試薬を検体
に作用させる方法（例えば。
ラテックス凝集反応法）がある。いずれの場合にも液体
媒体中で反応を行い、生じた抗原−抗体結合物による凝
集の度合は１通常、■抗原抗体反応終了後もしくは反応
開始から所定時間経過時において９例えば反応系に光を
照射し該光の透過光強度を測定（免疫比濁法など）もし
くは散乱光強度を測定（免疫比ろう法）シ、これを上記
抗原−抗体結合物の生成量の指標とする方法；または、
−■抗原抗体反応開始から所定時間経過後２以上の時点
において１例えば上記■と同様に光透過光強度もしくは
散乱光強度を測定し、これらの２以上の値から上記抗原
−抗体結合物の生成速度を求める方法；により測定され
る。
媒体中で反応を行い、生じた抗原−抗体結合物による凝
集の度合は１通常、■抗原抗体反応終了後もしくは反応
開始から所定時間経過時において９例えば反応系に光を
照射し該光の透過光強度を測定（免疫比濁法など）もし
くは散乱光強度を測定（免疫比ろう法）シ、これを上記
抗原−抗体結合物の生成量の指標とする方法；または、
−■抗原抗体反応開始から所定時間経過後２以上の時点
において１例えば上記■と同様に光透過光強度もしくは
散乱光強度を測定し、これらの２以上の値から上記抗原
−抗体結合物の生成速度を求める方法；により測定され
る。
特に抗原抗体反応しうる物質を不溶性担体に担持させた
試薬（ラテックス試薬など）を被測定物質を含む検体に
作用させる場合においては２反応系自体の吸光度または
散乱光強度が大きいため。
試薬（ラテックス試薬など）を被測定物質を含む検体に
作用させる場合においては２反応系自体の吸光度または
散乱光強度が大きいため。
抗原抗体反応に起因する吸光度もしくは散乱光強度の変
化を正確に測定するのが困難である。特に上記反応開始
後のある１時点において測定を行う■の方法の場合には
、特にこの影響が大きい。このように反応系自体の吸光
度または散乱光強度の大きい場合には９例えばこの反応
系への不溶性担体を担持させた試薬を操作時において非
常に正確に分注する操作が必要となる。
化を正確に測定するのが困難である。特に上記反応開始
後のある１時点において測定を行う■の方法の場合には
、特にこの影響が大きい。このように反応系自体の吸光
度または散乱光強度の大きい場合には９例えばこの反応
系への不溶性担体を担持させた試薬を操作時において非
常に正確に分注する操作が必要となる。
特開昭５４−１０８６９４号報には、平均粒径が１．６
μｍ以下の不活性担体粒子に抗体または抗原を担持させ
た試薬を用い、特定波長（０，６〜２．４μｎ＋）の多
色光（反応系に照射したときに吸光度が経時的に増加す
る性質を有するもの）を照射して測定を行う抗原抗体反
応の測定法が開示されている。この方法において該■法
による測定方法を使用し。
μｍ以下の不活性担体粒子に抗体または抗原を担持させ
た試薬を用い、特定波長（０，６〜２．４μｎ＋）の多
色光（反応系に照射したときに吸光度が経時的に増加す
る性質を有するもの）を照射して測定を行う抗原抗体反
応の測定法が開示されている。この方法において該■法
による測定方法を使用し。
抗原抗体反応物を測定する場合には、極めて精度の良い
分注が必要となる。
分注が必要となる。
（発明が解決しようとする問題点）
本発明は上記従来の欠点を解決するものであり。
その目的とするところは１反応系自体の吸光度または散
乱光強度が大きい場合にも抗原抗体反応による抗原−抗
体結合物の生成量もしくは生成速度を正確に測定し、検
体中の被測定物質を正確に定量しうる免疫測定法を提供
することにある。
乱光強度が大きい場合にも抗原抗体反応による抗原−抗
体結合物の生成量もしくは生成速度を正確に測定し、検
体中の被測定物質を正確に定量しうる免疫測定法を提供
することにある。
（問題点を解決するための手段）
発明者らは、（１）抗原抗体反応による抗原−抗体結合
物の粒径（平均粒径）と１反応液中の抗原および抗体量
とは相関関係を有すること；および（２）懸濁液中の懸
濁物質の粒径（平均粒径）と、該懸濁液の透過光強度ま
たは散乱光強度を２波長において測定（例えば吸光度を
測定）したときの測定値の比とは相関関係を有すること
；を基本的な考え方とし９本発明を完成するに至った。
物の粒径（平均粒径）と１反応液中の抗原および抗体量
とは相関関係を有すること；および（２）懸濁液中の懸
濁物質の粒径（平均粒径）と、該懸濁液の透過光強度ま
たは散乱光強度を２波長において測定（例えば吸光度を
測定）したときの測定値の比とは相関関係を有すること
；を基本的な考え方とし９本発明を完成するに至った。
それゆえ本発明の免疫測定法は、（ａ）抗原もしくは抗
体を含む検体と、該抗原もしくは抗体に抗原抗体反応し
うる抗体もしくは抗原とを液体媒体中で反応させて抗原
−抗体結合物を生成させる工程。
体を含む検体と、該抗原もしくは抗体に抗原抗体反応し
うる抗体もしくは抗原とを液体媒体中で反応させて抗原
−抗体結合物を生成させる工程。
（ｂｌ該反応系に所定の波長を有する第１波長光および
第２波長光をそれぞれ個別にあるいは同時に照射し、そ
の透過光強度もしくは散乱光強度をそれぞれ測定する工
程、 （ｃ）３ｇ第１波長光による測定値ａ、と該第２
波長光による測定値ａ２との比へを算出する工程、およ
び（ｄ）該Ａを該抗原−抗体結合物の生成量の指標とし
、該検体中の抗原もしくは抗体量を求める工程を包含し
、そのことにより上記目的が達成される。
第２波長光をそれぞれ個別にあるいは同時に照射し、そ
の透過光強度もしくは散乱光強度をそれぞれ測定する工
程、 （ｃ）３ｇ第１波長光による測定値ａ、と該第２
波長光による測定値ａ２との比へを算出する工程、およ
び（ｄ）該Ａを該抗原−抗体結合物の生成量の指標とし
、該検体中の抗原もしくは抗体量を求める工程を包含し
、そのことにより上記目的が達成される。
さらに本発明の免疫測定法は、（ａ）抗原もしくは抗体
を含む検体と、該抗原もしくは抗体に抗原抗体反応しろ
る抗体もしくは抗原とを液体媒体中で反応させて抗原−
抗体結合物を生成させる工程。
を含む検体と、該抗原もしくは抗体に抗原抗体反応しろ
る抗体もしくは抗原とを液体媒体中で反応させて抗原−
抗体結合物を生成させる工程。
（ｂｌ該反応系に所定の波長を有する第１波長光および
第２波長光をそれぞれ個別にあるいは同時に照射し、そ
の透過光強度もしくは散乱光強度をそれぞれ測定する工
程、（ｃ）該（ｂｌ工程における測定の所定時間後に該
（ｂｌ工程と同一の操作を行う工程、（ｄ）該（ｂ）工
程および（ｃ１工程で得られた該第１波長光による測定
値ａ、およびａ′１ と該第２波長光による測定値ａ２
およびａ２’との比Ａ（すなわちａｔ／ａｚ）およびＡ
’ （すなわちａｌ 、／ａｌ ２）をそれぞれ算出す
る工程。
第２波長光をそれぞれ個別にあるいは同時に照射し、そ
の透過光強度もしくは散乱光強度をそれぞれ測定する工
程、（ｃ）該（ｂｌ工程における測定の所定時間後に該
（ｂｌ工程と同一の操作を行う工程、（ｄ）該（ｂ）工
程および（ｃ１工程で得られた該第１波長光による測定
値ａ、およびａ′１ と該第２波長光による測定値ａ２
およびａ２’との比Ａ（すなわちａｔ／ａｚ）およびＡ
’ （すなわちａｌ 、／ａｌ ２）をそれぞれ算出す
る工程。
（ｅ）該ＡおよびＡ”から該測定値の時間による変化率
を求める工程、および（ｆ）該変化率を該抗原−抗体結
合物の生成速度の指標とし、該検体中の抗原もしくは抗
体量を求める工程を包含し、そのことにより上記目的が
達成される。
を求める工程、および（ｆ）該変化率を該抗原−抗体結
合物の生成速度の指標とし、該検体中の抗原もしくは抗
体量を求める工程を包含し、そのことにより上記目的が
達成される。
本発明方法により測定しろる被測定物質には。
抗原抗体反応を利用して測定が可能なあらゆる物質が包
含される。それには例えば、臨床検査において検出され
るＩｇＧ、 ＩｇＡ、 ＩｇＭ、 フィブリノーゲン、
ＦＤＰ−Ｄ、 ＦＤＰ−Ｅ、 リューマチ因子（Ｒ
Ｆ）、Ｃ反応性蛋白質（ｃＲＰ） 、抗ストレプトリジ
ン−〇 （ＡＳＯ）。
含される。それには例えば、臨床検査において検出され
るＩｇＧ、 ＩｇＡ、 ＩｇＭ、 フィブリノーゲン、
ＦＤＰ−Ｄ、 ＦＤＰ−Ｅ、 リューマチ因子（Ｒ
Ｆ）、Ｃ反応性蛋白質（ｃＲＰ） 、抗ストレプトリジ
ン−〇 （ＡＳＯ）。
α−フェトプロティン（ＡＦＰ）、 ＨＣＧ、 ＣＥＡ
等がある。
等がある。
上記被測定物質（抗原または抗体）と抗原抗体反応しう
る抗体または抗原（免疫試薬）は、一般的な免疫・精製
などの公知の方法により得られる。
る抗体または抗原（免疫試薬）は、一般的な免疫・精製
などの公知の方法により得られる。
例えば、ヒトＡＦＰをヤギに免疫して抗ヒトＡＦＰヤギ
抗体が得られる。これらの物質は、使用する液体媒体に
実質的に不溶な不溶性担体粒子に担持されていてもよい
。不溶性担体粒子としては無機物質微粒子および有機高
分子物質微粒子のいずれもが使用され得る。無機物質微
粒子としては、シリカ粉末のような無機酸化物微粒子、
アルミナ粉末のような金属酸化物微粒子、カオリンやベ
ントナイトのような無ａ／金属酸化物微粒子、各種鉱物
微粒子などが用いられる。有機高分子物質微粒子として
は、生物体の細胞（例えばニワトリ赤血球）や合成樹脂
微粒子（例えばスチレン系樹脂）が用いられる。特にポ
リスチレンやスチレン系共重合体粒子を均一に懸濁させ
たラテックスが好適に用いられる。ラテックス粒子に上
記既知の抗体または抗原を担持させたラテックス試薬が
市販されており、これを利用することもできる。
抗体が得られる。これらの物質は、使用する液体媒体に
実質的に不溶な不溶性担体粒子に担持されていてもよい
。不溶性担体粒子としては無機物質微粒子および有機高
分子物質微粒子のいずれもが使用され得る。無機物質微
粒子としては、シリカ粉末のような無機酸化物微粒子、
アルミナ粉末のような金属酸化物微粒子、カオリンやベ
ントナイトのような無ａ／金属酸化物微粒子、各種鉱物
微粒子などが用いられる。有機高分子物質微粒子として
は、生物体の細胞（例えばニワトリ赤血球）や合成樹脂
微粒子（例えばスチレン系樹脂）が用いられる。特にポ
リスチレンやスチレン系共重合体粒子を均一に懸濁させ
たラテックスが好適に用いられる。ラテックス粒子に上
記既知の抗体または抗原を担持させたラテックス試薬が
市販されており、これを利用することもできる。
本発明方法において、抗原抗体反応の測定に用いられる
光の波長は３００ｎｍ以上であり１通常、 ３００〜１
１０００ｎである。第１波長光と第２波長光との波長の
差は５０ｎｍ以上に設定する。第２波長光と第１波長光
との波長の差が小さいと、第１波長光による測定値と第
２波長光による測定値との差が小さいため、被測定物質
の正確が測定が困難となる。
光の波長は３００ｎｍ以上であり１通常、 ３００〜１
１０００ｎである。第１波長光と第２波長光との波長の
差は５０ｎｍ以上に設定する。第２波長光と第１波長光
との波長の差が小さいと、第１波長光による測定値と第
２波長光による測定値との差が小さいため、被測定物質
の正確が測定が困難となる。
次に２本発明方法を１反応系の吸光度を測定することに
より検体中のＣＲＰを定量する場合を例に挙げて説明す
る。
より検体中のＣＲＰを定量する場合を例に挙げて説明す
る。
まず、血清などの検体を適当な緩衝液もしくは水で希釈
する。これに抗ＣＲＰ抗体感作ラテックス液を加え、所
定温度で所定時間（例えば１５分間）反応させる。この
反応液に所定の波長（例えば５５０ｎｍ）の波長を有す
る第１波長光を照射し、その吸光度ａ、を測定する。次
に第１波長光とは異なる波長（例えば７５０ｎｍ）の波
長を有する第２波長光を照射し、その吸光度ａ２を測定
し＋ａｌとａｔとの比へを算出する。あらかじめ既知濃
度のＣＲＰと上記比の値との関係から検量線を作成して
おき、これに上記へを代入すると検体中のＣＲＰ ｔｙ
ｐ度（量）が算出される。
する。これに抗ＣＲＰ抗体感作ラテックス液を加え、所
定温度で所定時間（例えば１５分間）反応させる。この
反応液に所定の波長（例えば５５０ｎｍ）の波長を有す
る第１波長光を照射し、その吸光度ａ、を測定する。次
に第１波長光とは異なる波長（例えば７５０ｎｍ）の波
長を有する第２波長光を照射し、その吸光度ａ２を測定
し＋ａｌとａｔとの比へを算出する。あらかじめ既知濃
度のＣＲＰと上記比の値との関係から検量線を作成して
おき、これに上記へを代入すると検体中のＣＲＰ ｔｙ
ｐ度（量）が算出される。
別法としては、上記第１波長光および第２波長光による
測定後、さらに所定時間後（例えば、ラテックス液を混
合した点を基点として１５分３０秒後）に再び上記と同
様に第１波長光および第２波長光による測定を行う方法
がある。この方法においては、２回目の第１波長光によ
る測定値、＋ と第２波長光による。ｌ との比Ａ゛
を算出し、上記Ａおよび該Ａ゛から単位時間あたりの吸
光度比の変化量（時間による吸光度比の変化率）を算出
する。あらかじめ既知濃度のＣＲＰと上記比の値の変化
率との関係から検量線を作成しておき、これに上記Ａお
よび八”から算出した吸光度比の変化率を代入すると検
体中のＣＲＰｔＷ度（量）が算出される。
測定後、さらに所定時間後（例えば、ラテックス液を混
合した点を基点として１５分３０秒後）に再び上記と同
様に第１波長光および第２波長光による測定を行う方法
がある。この方法においては、２回目の第１波長光によ
る測定値、＋ と第２波長光による。ｌ との比Ａ゛
を算出し、上記Ａおよび該Ａ゛から単位時間あたりの吸
光度比の変化量（時間による吸光度比の変化率）を算出
する。あらかじめ既知濃度のＣＲＰと上記比の値の変化
率との関係から検量線を作成しておき、これに上記Ａお
よび八”から算出した吸光度比の変化率を代入すると検
体中のＣＲＰｔＷ度（量）が算出される。
上記変化率を測定する方法においては、３回以上の測定
を行い、それぞれの比の値（Ａ、 Ａ’、Ａ−・・）を
算出し１例えばその平均値をとる方法も有利に採用され
得る。上記各方法において、第１波長光と第２波長光と
は、これらを含む連続波長の光を用い、その成分を回折
格子で分離して取り出し。
を行い、それぞれの比の値（Ａ、 Ａ’、Ａ−・・）を
算出し１例えばその平均値をとる方法も有利に採用され
得る。上記各方法において、第１波長光と第２波長光と
は、これらを含む連続波長の光を用い、その成分を回折
格子で分離して取り出し。
これを照射することにより第１波長と第２波長を同時に
測定することも可能である。
測定することも可能である。
さらに、上記いずれの方法においても、第１および第２
波長光とは異なる波長における測定を行うことも可能で
ある。例えば第３波長光（９００ｎｍ）による測定を行
い、得られた吸光度ａ３を用いてａ ３ ／ ａ Ｉ
＋ａ２／ａ３などを算出して、これを指標とする。この
ように、３以上の複数波長光を用いると、より高精度の
測定がなされ得る。
波長光とは異なる波長における測定を行うことも可能で
ある。例えば第３波長光（９００ｎｍ）による測定を行
い、得られた吸光度ａ３を用いてａ ３ ／ ａ Ｉ
＋ａ２／ａ３などを算出して、これを指標とする。この
ように、３以上の複数波長光を用いると、より高精度の
測定がなされ得る。
反応系の抗原−抗体反応物を測定するための装置として
は９通常の分光光度計や光の散乱強度を測定するための
装置が用いられる。生化学自動分析装置、免疫比濁法に
用いられる専用装置、ラテックスの凝集反応を測定する
ための専用装置など分光光度計が組み込まれた機器も有
利に利用される。このほか、抗原抗体反応をマイクロタ
イタープレートのウェルで反応させ、このプレートをプ
レートリーダーにかけ、その吸光度を測定する方法も採
用され、この方法によれば小型の２Ｈで短時間のうちに
大量の検体を処理することが可能となる。
は９通常の分光光度計や光の散乱強度を測定するための
装置が用いられる。生化学自動分析装置、免疫比濁法に
用いられる専用装置、ラテックスの凝集反応を測定する
ための専用装置など分光光度計が組み込まれた機器も有
利に利用される。このほか、抗原抗体反応をマイクロタ
イタープレートのウェルで反応させ、このプレートをプ
レートリーダーにかけ、その吸光度を測定する方法も採
用され、この方法によれば小型の２Ｈで短時間のうちに
大量の検体を処理することが可能となる。
（作用）
本発明においては、波長が５０ｎｍ以上異なる２種また
はそれ以上の波長を用いて反応系の光の透過もしくは散
乱を測定するようにしたため、従来の１種の波長による
測定の場合に比較すると特に不溶性担体に担持された抗
原または抗体を用い、その抗原抗体反応が反応開始後１
点で測定される場合、好適に利用される。
はそれ以上の波長を用いて反応系の光の透過もしくは散
乱を測定するようにしたため、従来の１種の波長による
測定の場合に比較すると特に不溶性担体に担持された抗
原または抗体を用い、その抗原抗体反応が反応開始後１
点で測定される場合、好適に利用される。
（実施例）
以下に本発明の実施例につき説明する。
１考貫
粒径０．１μ面のポリスチレン製ラテックスの蒸留水懸
濁液（０，２５％）を調製し、これを光路長２龍のセル
に入れた。これに５５０ｎｍの光（第１波長光）を照射
し、その吸光度ａ、を測定した。次に７５０ｎｎ＋の光
（第２波長光）を照射し、その吸光度ａ２を測定しｒ
ａｌとａ、との比（Ａｔ＝ａ＋／ａｘ）を算出した。
濁液（０，２５％）を調製し、これを光路長２龍のセル
に入れた。これに５５０ｎｍの光（第１波長光）を照射
し、その吸光度ａ、を測定した。次に７５０ｎｎ＋の光
（第２波長光）を照射し、その吸光度ａ２を測定しｒ
ａｌとａ、との比（Ａｔ＝ａ＋／ａｘ）を算出した。
次にラテックスの粒径を０．２μ鴎としく濃度０．１％
）、同様の方法で第１波長光による吸光度す、および第
２波長光による吸光度ｂｚを測定し、ｂＩとす。
）、同様の方法で第１波長光による吸光度す、および第
２波長光による吸光度ｂｚを測定し、ｂＩとす。
との比（Ａｔ ＝ ｂｌ ／ｂｚ）を算出した。ラテッ
クスの粒径を０．４５μｍ（’？Ｍ度０．０３６％）＋
１．０μｍ（ｔＭ度０．０１７％）、 １．９７μｍ
（濃度０．００８％）とし、同様の方法でＡ３ （ｃＩ
／Ｃ２） 、 Ａ４ （ｄ＋／ｄｚ）およびＡｓ （ｅ
＋／ｅｘ）を算出した。ラテックスの粒径と吸光度の比
（Ａ。
クスの粒径を０．４５μｍ（’？Ｍ度０．０３６％）＋
１．０μｍ（ｔＭ度０．０１７％）、 １．９７μｍ
（濃度０．００８％）とし、同様の方法でＡ３ （ｃＩ
／Ｃ２） 、 Ａ４ （ｄ＋／ｄｚ）およびＡｓ （ｅ
＋／ｅｘ）を算出した。ラテックスの粒径と吸光度の比
（Ａ。
〜Ａｓ）との関係を第３図に示す。
第３図から、ラテックスの粒径と吸光度の比（Ａ、〜＾
、）とは一定の相関関係を有し、ラテックスの粒径が大
きくなる程、上記２波長（５５０ｎｍおよび７５０ｎｍ
）で測定した吸光度の比が小さくなることがわかる。こ
の事実は、抗原抗体反応により抗原−抗体結合物が生成
して反応系に含まれる粒子径（平均粒径）が太き（なる
程、上記比が低下することを意味する。
、）とは一定の相関関係を有し、ラテックスの粒径が大
きくなる程、上記２波長（５５０ｎｍおよび７５０ｎｍ
）で測定した吸光度の比が小さくなることがわかる。こ
の事実は、抗原抗体反応により抗原−抗体結合物が生成
して反応系に含まれる粒子径（平均粒径）が太き（なる
程、上記比が低下することを意味する。
去膳炭
粒径０．２μｍのポリスチレン製ラテックスに抗ＣＲＰ
抗体を吸着させ、ラテックス固形分０．５％の抗ＣＲＰ
抗体感作ラテックス液（水懸濁液）を調製した。別に、
ＣＲＰを所定濃度で含有するＣＲＰ水溶液を準備し
た。上記ラテックス液４０μｌおよびＣＲＰ水溶液２０
μｌを光路長５鰭のガラス製透明セルに入れ、３７℃で
１５分間反応させた。これにウシ血清アルブミン１％を
含むリン酸食塩緩衝液（ｐＨ７，０）１３００μｉを加
え、 ５５０ｎｍにおける吸光度ａ、および７５０ｎ
ｍにおける吸光度ａ、を測定した。上記ＣＲＰの濃度は
第１図に示すＯ〜２００μｇの６種類とし。
抗体を吸着させ、ラテックス固形分０．５％の抗ＣＲＰ
抗体感作ラテックス液（水懸濁液）を調製した。別に、
ＣＲＰを所定濃度で含有するＣＲＰ水溶液を準備し
た。上記ラテックス液４０μｌおよびＣＲＰ水溶液２０
μｌを光路長５鰭のガラス製透明セルに入れ、３７℃で
１５分間反応させた。これにウシ血清アルブミン１％を
含むリン酸食塩緩衝液（ｐＨ７，０）１３００μｉを加
え、 ５５０ｎｍにおける吸光度ａ、および７５０ｎ
ｍにおける吸光度ａ、を測定した。上記ＣＲＰの濃度は
第１図に示すＯ〜２００μｇの６種類とし。
それぞれについてａｔ／ａｘの値へを算出した。ＣＩ？
Ｐ濃度とＡとの関係を第１図に示す。
Ｐ濃度とＡとの関係を第１図に示す。
第１図においてＣＲＰ濃度がＯ〜４０μｇ／ｄの範囲に
おいては、 ＣＲ１’１！度の上昇とともに上記吸光
度の比へは低下する。このことは抗原抗体反応により反
応液中の平均粒径が大きくなっていることを示す。この
領域は１反応系に加えられた抗ＣＲＰ抗体が過剰に存在
する抗体過剰領域である。例えば、血中に存在するＣＲ
Ｐ？Ｗ度は通常、５μｇ／ｙｎｌｌ以下であるため、
ＣＲＰｉｌが一義的に定まる。ＣＲＰ濃度が４０μｇ
／ｗｄを越えると、抗ＣＲＰ抗体との抗原抗体反応はよ
り進行するが、ＣＲＰ（抗原）による抗原−抗体架橋効
果が低下するため抗原−抗体結合物の平均粒径は小さく
なる。従って、２波長における吸光度比へは徐々に上昇
する。そのため。
おいては、 ＣＲ１’１！度の上昇とともに上記吸光
度の比へは低下する。このことは抗原抗体反応により反
応液中の平均粒径が大きくなっていることを示す。この
領域は１反応系に加えられた抗ＣＲＰ抗体が過剰に存在
する抗体過剰領域である。例えば、血中に存在するＣＲ
Ｐ？Ｗ度は通常、５μｇ／ｙｎｌｌ以下であるため、
ＣＲＰｉｌが一義的に定まる。ＣＲＰ濃度が４０μｇ
／ｗｄを越えると、抗ＣＲＰ抗体との抗原抗体反応はよ
り進行するが、ＣＲＰ（抗原）による抗原−抗体架橋効
果が低下するため抗原−抗体結合物の平均粒径は小さく
なる。従って、２波長における吸光度比へは徐々に上昇
する。そのため。
第１図において吸光度比Ａが２．０の場合には、対応す
るＣ ＲＰ ９８度が２種存在する。このような場合に
は１例えば検体を２倍に希釈し、 ＣＲＰ 濃度を１
７２として測定を行うと、もとのＣＲＰ ｔａ度がＯ〜
４０μｇ／−のときには、吸光度は低下し、２波長にお
ける吸光度比Ａは上昇する。４０μｇ／−以上の場合は
逆にＡは低下する。このようにして吸光度比ＡからＣＲ
Ｐ濃度が求められる。
るＣ ＲＰ ９８度が２種存在する。このような場合に
は１例えば検体を２倍に希釈し、 ＣＲＰ 濃度を１
７２として測定を行うと、もとのＣＲＰ ｔａ度がＯ〜
４０μｇ／−のときには、吸光度は低下し、２波長にお
ける吸光度比Ａは上昇する。４０μｇ／−以上の場合は
逆にＡは低下する。このようにして吸光度比ＡからＣＲ
Ｐ濃度が求められる。
参考のために、各ＣＲＰ濃度の検体の７５０ｎｍにおけ
る吸光度を測定した結果を第２図に示す。
る吸光度を測定した結果を第２図に示す。
（発明の効果）
本発明によれば、不溶性担体に担持された抗原または抗
体を用いる場合（ラテックス試薬）に特に好適である。
体を用いる場合（ラテックス試薬）に特に好適である。
また、その抗原抗体反応が反応開始後、１点で測定され
る場合、特に正確な測定が可能となる。
る場合、特に正確な測定が可能となる。
４、 ′ の な蕾゛
第１図は２本発明方法により測定を行なったときの検体
中のＣＲＰ Ｔ’Ｓ度と異なる２波長の吸光度比との関
係を示すグラフ；第２図は、従来法により測定を行った
ときの検体中のＣＲＰ ｊｍ度と所定の波長における吸
光度との関係を示すグラフ；そして第３図は、ラテック
ス懸濁液中のラテックス粒径と異なる２波長の吸光度比
との関係を示すグラフである。
中のＣＲＰ Ｔ’Ｓ度と異なる２波長の吸光度比との関
係を示すグラフ；第２図は、従来法により測定を行った
ときの検体中のＣＲＰ ｊｍ度と所定の波長における吸
光度との関係を示すグラフ；そして第３図は、ラテック
ス懸濁液中のラテックス粒径と異なる２波長の吸光度比
との関係を示すグラフである。
以上
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、（ａ）抗原もしくは抗体を含む検体と、該抗原もし
くは抗体に抗原抗体反応しうる抗体もしくは抗原とを液
体媒体中で反応させて抗原−抗体結合物を生成させる工
程、 （ｂ）該反応系に所定の波長を有する第１波長光および
第２波長光をそれぞれ個別にあるいは同時に照射し、そ
の透過光強度もしくは散乱光強度をそれぞれ測定する工
程、 （ｃ）該第１波長光による測定値ａ＿１と該第２波長光
による測定値ａ＿２との比Ａを算出する工程、および（
ｄ）該Ａを該抗原−抗体結合物の生成量の指標とし、該
検体中の抗原もしくは抗体量を求める工程。 を包含する、 免疫測定法。 ２、前記第１波長光および第２波長光の波長が３００ｎ
ｍ以上であり、かつ該第１波長光と第２波長光との波長
の差が５０ｎｍ以上である特許請求の範囲第１項に記載
の免疫測定法。 ３、前記測定値が、透過光強度から計算された吸光度あ
るいは透過率である特許請求の範囲第１項に記載の免疫
測定法。 ４、前記抗体もしくは抗原が前記液体媒体に実質的に不
溶な有機高分子物質微粒子または無機物質微粒子でなる
担体に担持された特許請求の範囲第１項に記載の免疫測
定法。 ５、前記有機高分子物質微粒子が合成樹脂微粒子または
生物体の細胞である特許請求の範囲第４項に記載の免疫
測定法。 ６、前記合成樹脂がスチレン系樹脂である特許請求の範
囲第５項に記載の免疫測定法。 ７、前記無機物質が金属酸化物および／または無機酸化
物である特許請求の範囲第４項に記載の免疫測定法。 ８、前記透過光強度の測定が、吸光度計；または吸光度
計が組み込まれた生化学自動分析装置、免疫比濁法専用
測定装置またはラテックス凝集反応専用測定装置でなさ
れる特許請求の範囲第１項に記載の免疫測定法。 ９、前記抗原抗体反応をマイクロタイタープレート上で
行い、前記透過光強度をプレートリーダーで測定する特
許請求の範囲第１項に記載の免疫測定法。 １０、（ａ）抗原もしくは抗体を含む検体と、該抗原も
しくは抗体に抗原抗体反応しうる抗体もしくは抗原とを
液体媒体中で反応させて抗原−抗体結合物を生成させる
工程、 （ｂ）該反応系に所定の波長を有する第１波長光および
第２波長光をそれぞれ個別にあるいは同時に照射し、そ
の透過光強度もしくは散乱光強度をそれぞれ測定する工
程、 （ｃ）該（ｂ）工程における測定の所定時間後に該（ｂ
）工程と同一の操作を行う工程、 （ｄ）該（ｂ）工程および（ｃ）工程で得られた該第１
波長光による測定値ａ＿１およびａ’＿１と該第２波長
光による測定値ａ＿２およびａ＿２’との比Ａ（すなわ
ちａ＿１／ａ＿２）およびＡ’（すなわちａ’＿１／ａ
’＿２）をそれぞれ算出する工程、 （ｅ）該ＡおよびＡ’から該測定値の時間による変化率
を求める工程、および （ｆ）該変化率を該抗原−抗体結合物の生成速度の指標
とし、該検体中の抗原もしくは抗体量を求める工程、を
包含する、 免疫測定法。 １１、前記第１波長光および第２波長光の波長が３００
ｎｍ以上であり、かつ該第１波長光と第２波長光との波
長の差が５０ｎｍ以上である特許請求の範囲第１０項に
記載の免疫測定法。 １２、前記測定値が、透過光強度から計算された吸光度
あるいは透過率である特許請求の範囲第１０項に記載の
免疫測定法。 １３、前記抗体もしくは抗原が前記液体媒体に実質的に
不溶な有機高分子物質微粒子または無機物質微粒子でな
る担体に担持された特許請求の範囲第１０項に記載の免
疫測定法。 １４、前記有機高分子物質微粒子が合成樹脂微粒子また
は生物体の細胞である特許請求の範囲第１３項に記載の
免疫測定法。 １５、前記合成樹脂がスチレン系樹脂である特許請求の
範囲第１４項に記載の免疫測定法。 １６、前記無機物質が金属酸化物および／または無機酸
化物である特許請求の範囲第１３項に記載の免疫測定法
。 １７、前記透過光強度の測定が、吸光度計；または吸光
度計が組み込まれた生化学自動分析装置、免疫比濁法専
用測定装置またはラテックス凝集反応専用測定装置でな
される特許請求の範囲第１０項に記載の免疫測定法。 １８、前記抗原抗体反応をマイクロタイタープレート上
で行い、前記透過光強度をプレートリーダーで測定する
特許請求の範囲第１０項に記載の免疫測定法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29641286A JPS63149565A (ja) | 1986-12-12 | 1986-12-12 | 免疫測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP29641286A JPS63149565A (ja) | 1986-12-12 | 1986-12-12 | 免疫測定法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63149565A true JPS63149565A (ja) | 1988-06-22 |
Family
ID=17833210
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP29641286A Pending JPS63149565A (ja) | 1986-12-12 | 1986-12-12 | 免疫測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63149565A (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0269526A2 (en) * | 1986-11-28 | 1988-06-01 | Shimadzu Corporation | Method of quantitative determination of antigens and antibodies |
| JP2014139571A (ja) * | 2008-03-20 | 2014-07-31 | Abaxis Inc | ゾル粒子特異的結合アッセイの多波長分析 |
-
1986
- 1986-12-12 JP JP29641286A patent/JPS63149565A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0269526A2 (en) * | 1986-11-28 | 1988-06-01 | Shimadzu Corporation | Method of quantitative determination of antigens and antibodies |
| JP2014139571A (ja) * | 2008-03-20 | 2014-07-31 | Abaxis Inc | ゾル粒子特異的結合アッセイの多波長分析 |
| JP2016106223A (ja) * | 2008-03-20 | 2016-06-16 | アバクシス， インコーポレイテッド | ゾル粒子特異的結合アッセイの多波長分析 |
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