JPS63129995A - ３−置換セフアロスポリンの酵素的製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 本発明は、３−置換セファロスポリンの製造方法に関す
るものである。具体的には、酵素、エクスパンダーゼ（
ｅｘｐａｎｄａｓｅ　）の′使用を含む、２α−置換ペ
ナムの３−置換−３−セフェム−４−カルボン酸への変
換のための酵素的方法に関する。

デアセトキシセファロスポリンＣシンテターゼとしても
知られているエクスパンダーゼ酵素は、セファロスポリ
ウム・アクレモニウム（Ｃｅｐｈａｌｏｓｐｏｒｉｕｍ
　ａｃｒｅｍｏｎｉｕｍ　）　　による、またその他の
微生物（こよるセファロスポリンＣの生合成に関与して
いる。エクスパンダーゼは、下に概略を示した生合成経
路で示される様に、ペニシリンＮをデアセトキシセファ
ロスポリンＣに変換スル。

δ−（Ｌ−α−アミノアジポイル）− Ｌ−システイニル−Ｄ−バリン ペニシリンＮ デアセトキシセファロスポリンＣ デスアセチルセファロスポリンＣ エクスパンダーゼは、シープツガ−等〔Ｓｃｈｅｉｄｅ
ｇｇｅｒ、　Ａ、　ｅｔ　ａｌ、　、　　ジャーナル中
オブ・アンティバイオティックス（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ）。

３７．５２２−５３１　（１９８４）　）およびクプカ
等［Ｋｕｐｋａ、　　Ｊ、　ｅｔ　ａｌ、、　ＦＥＭＳ
　　フィクロバイオロジー・レターズ（ＦＥＭＳ　Ｍｉ
ｃｒｏｂｉｏｌｇｙＬｅｔｔｅｒｓ）、　１６　（１９
８３）　ｐｐ、１−６　）　　によって単離され、研究
された。

本発明は、ペニシリンＮのα−アミノアジポイル基をｍ
−カルボキシフェニルアセチル基で置換することができ
、それにより、エクスパンダーゼ番こよって効率的にセ
ファロスポリンに変換されるペナム基質を得ることがで
きるという知見に基いている。例えば６β−（３−カル
ボキシフェニルアセチルアミノ）−２，２−ジメチルペ
ナム−３−カルボン酸は、効率的に７β−（３−カルボ
キシフェニルアセチルアミノ）−３−メチル−３−セフ
ェム−４−カルボン酸に変換される。また同様に、ペニ
シリンＮのα−アミノアジポイル基をアジポイル基で置
換し、エクスパンダーゼによって効率的に変換されるペ
ナム基質を得ることができる。

こレト対照的に、フェニルアセチル基はペニシリンＮの
α−アミノアジポイル基のための置換基として役立たな
いということがわかった。６−ＡＰＡの６−アミノ基に
結合している時にはエクスパンダーゼのためのペナム基
質とならないその他のアシル基は、フェノキシアセチル
、δ−（Ｌ−α−アミノアジポイル）および５−アミノ
バレリルである。

本発明は１式（１）： 〔式中、Ｒは３−カルボキシフェニルアセチルまたはア
ジポイルであり、ＲはＣ，−Ｃ３アルキル、ＩＣ−Ｃア
ルコキシ、Ｃ２−Ｃ４アルケニルまたはアレニルである
〕 で表わされる３−置換−３−セフェム−４−カルボン酸
の製造方法であって１式（２）：〔式中、ＲおよびＲは
上記と同意義を有する〕で表わされる２β−メチル−２
α−置換ペナムー３−カルボン酸とデアセトキシセファ
ロスポリンＣシンテターゼを：１１鉄イオン、アスコル
ベートおよびα−ケトグルタレートの存在下、水性媒質
中、約り０℃〜約４０℃の温度および約６〜約９のｐＨ
で接触させることからなる方法を提供するものである。

本方法は、酸素の存在下で行なわれる。小さな実験室規
模では、開口した反応容器を使用すること番こより十分
量の酸素が供給される。大規模において、特に大過剰量
の酵素を使用する時にはインキュベーション混合物中に
空気または酸素を通すことにより酸素を供給することが
できる。本方法中、インキュベーション混合物は攪拌ま
たは振盪によって十分攪拌される。

本方法で使用するエクスパンダーゼ酵素は、精製されて
いるのが好ましいが、一部精製された細胞不含エキスか
ら得られたような手積製酵素を使用することもできる。

エクスパンダーゼは、多数の微生物１例えばセファロス
ポリウム・アクレモニウム、ストレプトマイセス・クラ
ブリゲルス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｃｌａｖｕｌ
ｉｇｅｒｕｓ　）およびストレプトマイセス饅ノプマニ
（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｉ　ｉｐｍａｎｉｉ）か
ら得ることができる。高濃度のセファロスポリンＣを産
生ずるＣ、アクレモニウムの株（例えばＡＴＣＣ４８２
７２およびＡＴＣＣ３６２２５株）は、酵素の好適な供
給源である。酵素の細胞不含エキスは１例えばシープツ
ガ−等（Ａ、Ｓｃｈｅｉｄｅｇｇｅｒｅｔ　ａｌ、　、
前掲）によって記載された様な既知の方法に従って得ら
れる。酵素は、一部精製された細胞不含エキスから、ク
ロマトグラフィー的に酵素を分離することにより得られ
るような実質上純粋な形で使用するのが好ましい。

エクスパンダーゼは、ペニシリンをセファロスポリンに
変換するために必要す量より大過剰使用するのが好まし
い。

エクスパンダーゼによるペニシリンＮの変換について知
られている様に、酵素活性を最もよく発現させるために
はコファクターである第１鉄イオンおよびアスコルベー
ト、および補基質であるα−ケトグルタレートの使用が
必要である。従って本方法においては、これらのコファ
クターを使用する。酵素を活性化するために必要な最小
量の第１鉄イオンを使用する。第１鉄イオンの濃度は通
常、約２５μＭ〜約０．２ｍＭである。通常、酵素の純
度が高いほど、酵素効率を最大にするために必要な第１
鉄イオンの量は低い。第１鉄イオンの供給源は、塩化第
１鉄、硫酸第１鉄または炭酸第１鉄の様な塩類である。

硫酸第１鉄は１本方法での使用に好適な塩である。

コファクターであるアスコルベートは、Ｌ−アスコルビ
ン酸、またはＬ−アスコルビン酸ナトリウムまたはカリ
ウムが好ましく１通常、第１鉄イオン濃度にほぼ等しい
濃度で使用されるが、より高い濃度を使用することもで
きる。

補基質であるα−ケトグルタレートは−ナトリウムまた
は−カリウム塩の形であることが好ましく、約０．５ｍ
Ｍ〜約２ｍＭ、好ましくは約１ｍＭの濃度で含まれるの
が好ましい。

前記式（２）で表わされる基質、ペニシリンは１本方法
では通常約０．１ｍＭ〜約５ｍＭの濃度で使用される。

本方法は、約６〜約９．好ましくは約７．５〜約８のｐ
Ｈで行なわれる。炭酸アンモニウム、トリスバッファー
またはＭＯＰＳ　　バッファーの様な緩衝液でｐＨを維
持する。好ましい緩衝液はＴｒｉｓ（トリス）　−ＭＣ
Ｉ！（ｐＨ７，５）　　である。

本方法は、約２５℃〜３５℃の温度で行なわれるのが好
ましい。特に好ましい温度は約３０℃である。

ジチオトレイトール（ＤＴＴ）、ジチオエリトリトール
またはβ−メルカプトエタノールの様な還元剤を本方法
に使用することもある。この様な還元剤は、第１鉄イオ
ンの酸化を抑制することにより、および酵素に存在して
いるスルフヒドリル基の酸化を抑制することにより、酵
素の活性を保持するようである。

以下の表１に１式（２）で表わされる２α−置換ペナム
基質の例を示す。

表　　　１ ２α−置換ペナム １／ＣＰＡ＝３−カルボキシフェニルアセチル２ｆｉシ
ボイル＝ＨＯ２ｃ（ＣＨ２）４−Ｃｏ一本方法（こおけ
る好ましい基質は、Ｒが３−カルボキシフェニルアセチ
ル基である式（２）で表わされる化合物である。更に好
ましい基質は、Ｒが３−カルボキシフェニルアセチル基
であり　Ｒ１がメチル、メトキシまたはビニルである化
合物である。

ペナム基質は、以下の一般反応式に示される様に、２α
−置換−６β−アミノペナム−３−カルボン酸を３−カ
ルボキシ−保護−フェニル酢酸またはモノ−カルボキシ
−保護アジピン酸でアシル化すること１こよって製造す
ることができる。

Ｈ ｏ２Ｈ このＮ−アシル化は、ペニシリン類を製造するために通
常使用されている従来のカップリング法１こよって行な
うことができる。例えば、カルボキシ保護酸、ＲＣｏ２
Ｈを酸ハライド、酸アジドの様な遊離カルボキシ基の活
性誘導体または活性エステル１こ変換し、この活性誘導
体をアシル化１こ使用する。アシル化の間、ペニシリン
核の３−カルボキシ基を保護しておくのが好ましい。ア
シル化が終了した後カルボキシ基を脱保護し、所望の基
質を得る。例えば、３−（４−二トロペンジルオキシ力
ルボニル）フェニル酢酸を塩化オキサリルで酸クロリド
１こ変換し、この酸クロリドを、水混和性有機溶媒、お
よび炭酸アルカリ金属または重炭酸アルカリ金属の様な
水溶性の酸結合剤を含有している水性媒質中、６−ＡＰ
Ａをアシル化するため１こ使用する。同様１こ１例えば
アジピン酸モノ−４−ニトロベンジルエステルの様ナモ
ノ−（保護カルボキシ）アジピン酸を酸ハライドの様な
より手軽なアシル化試薬に変換し１次いでこれを６β−
アミノペナム核をアシル化するのに使用する。

２α−ビニル−６β−アミノ核は、１９８６年４月２９
日提出の本発明者の出願に係る米国特許出願第８５６，
９９７号の記載に従い、得ることができる。該明細書に
記載されている様に１式：で表わされるδ−（Ｌ−α−
アミノアジポイル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−乙δ−ジ
デヒドロインロイシンをイソペニシリンＮシンテターゼ
（１”ＰＮＳ）酵素と一緒に、鉄イオンおよびアスコル
ビン酸の存在下、約り０℃〜約４０℃の温度。

ｐＨ６〜９でインキュベートし、６β−（Ｌ−α−アミ
ノアジポイル）−２α−ビニル−２β−メチルペナム−
３−カルボン酸を製造する。生成物であるペナムのカル
ボキシ基をエステル化により保護し、このジエステルを
脱アシル化して、６β−アミノ−２α−ビニルペナムエ
ステルヲ得ル。

このカルボキシ−保護エステル基は、ｔ−ブチル、ハロ
アルキル、例えハトリクロロエチル、ベンジル、置換ベ
ンジル、例えばｐ−メトキシベンジルおよびｐ−二トロ
ベ／ジルの如き、ペニシリンエステルを製造するために
通常使用されるカルボキシ−保護エステル基であってよ
い。Ｌ−α−アミノアジポイル側鎖の脱アシル化は１例
えば米国特許第３，４９９，９０９号に記載の、または
モリン等（Ｒ，Ｂ、　Ｍｏｒｉｎ　ｅｔ　ａｌ、　）の
ジャーナル・オブ・アメリカン・ケミカル・ンサエテイ
（Ｊ、　Ａｍｅｒ。

Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　）、　８４　　、３４００に記
載の既知の方法によって達成される。その他のアルケニ
ル誘導体も同様に製造することができる。

式： で表わされる６β−アミノ−２α−アレニルペナム核は
、１９８６年７月２８日提出の本発明者の出願に係る米
国特許出願第８９１，４３４号の記載に従い、得ること
ができる。該明細書に記載された方法によれば、式： で表わされるトリペプチド基質とイソペニシリンＮシン
テターゼを％１鉄イオン、Ｌ−アスコルベートおよびジ
チオトレイトールの存在下、水性媒質中、約６〜約９の
ｐＨで混合し、式：で表わされる２α−アレニルペナム
を製造スる。

６β−アミノ−２α−ビニルペナム−３−カルボン酸の
製造のために上に記載した方法によりこの生成物をＮ−
説アシル化し、６β−アミ／−２α−アレニルペナム−
３−カルボン散積を得る。

２α−（Ｃ，−Ｃ３アルコキシ）ペナム核は１本発明者
のヨーロッパ特許公開第０１７４１２９号に記載の方法
により同様に得られる。該明細書の記載に従い１式： 〔式中、　ａｌｋはｃｌ−ｃ３　アルキルである〕で表
わされるトリペプチド基質とイソペニシリンＮシンテタ
ーゼを第１鉄イオン、Ｌ−アスコルビン酸、ジチオトレ
イトール、ウシ肝臓カタラーゼおよび重炭酸アンモニウ
ム緩衝液の存在下、水性媒質中、約６〜約９のｐＨで混
合し１式：〔式中、　ａｌｋはＣ，−Ｃ３アルキルであ
る〕で表わされるペナムを得る。

この２α−アルコキシペナムのＮ−説アシル化は、モリ
ン（Ｒ８Ｂ、　Ｍａｒｉｎ、前掲）のニトロシルクロリ
ド法により、およびモリン法において通常使用されるギ
酸を酢酸で置き換えることにより、最も都合よく行なわ
れる。

また、Ｒが３−カルボキシフェニルアセチルであるペナ
ム基質（式２）は、１９８７年９月４日提出の本発明者
の出願に係る米国特斤出願第９０３．５４８号に記載の
方法によって得られる。この方法によれば、式： て表わされるＮ−（３−カルボキシフェニルアセチル）
−Ｌ−システイニル−Ｄ−バリン（又は修飾Ｄ−バリン
）ジペプチドを水性媒質中、約６〜約９のｐＨにおいて
、酸素、第１鉄イオンおよびＬ−アスコルビン酸の存在
下、インペニシリンＮシンテターゼ（ＩＰＮＳ）酵素で
処理し１式二Ｏ２Ｈ 〔式中　Ｒ１またはＲ２はメチル、他方はＣ１−０４ア
ルコキシ、ビニルまたはアレニルである〕で表わされる
ペニシリンを得る。

この方法の１つの例を挙げると、ジチオトレイトール、
　硫酸Ｒ１鉄、Ｌ−アスコルビン酸、カタラーゼを含有
し１重炭酸アンモニウムで緩衝されているＮ−（３−カ
ルボキシフェニルアセチル−Ｌ−システイニル−〇ーバ
リンの水性混合物をＴｒｉｓ−ＨＣＩバッファー中のイ
ンペニシリンＮシンテターゼで処理し，６β−（３−カ
ルボキシフェニルアセチルアミン）−２．２−ジメチル
ペナム−３−カルボン酸を得る。

同様に，適当に置換されているジペプチド基質ヲ用いる
と．６β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）
−２α−ビニル−２β−メチルペナム−３−カルボン酸
、６β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）−
２α−アレニル−２β−メチルペナム−３−カルボン酸
および６β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ
）−２α−メトキシ−２β−メチルペナム−３−カルボ
ン酸が得られる。

本発明の方法により得られた３−置換−３−セフェム−
４−カルボン酸（式（１））を以下の表２に例示する。

表２　　３−置換−３−セフェム−４−カルボン酸 １／ＣＰＡ＝３−カルボキシフェニルアセチル本発明の
酵素的方法で得られたセファロスポリン生成物は，既知
の方法により既知のセファロスポリン半合成抗生物質に
変換することができる。

例えば、生成物の３−カルボキシフェニルアセチル基お
よびアジポイル基を脱アシル化し，対応する３−置換７
β−アミノ−３−セフェム核ヲ得る。

次いでこれを再アシル化し，所望の７β−アシルアミノ
セファロスポリンを得る。これは、以下の一般反応式に
よって表わされる。

この脱アシル化および再アシル化は、式（１）の化合物
の遊離カルボキシ基を保護した後、行なわれるのが望ま
しい。酸のカルボキシ基の一時的な保護のために、セフ
ァロスポリン技術で通常使用されるエステル基でカルボ
キシ基を保護、即ちブロックすることができる。この様
な周知のエステル基としては、ペナムのカルボキシ基の
保護について既述した基が挙げられる。

Ｎ−説アシル化は、フエチヒ等（Ｆｅｃｈｔｉｇ　ｅｔ
ａｌ、）の米国特許第３，６９７，５１５号に記載の方
法に従って行なわれる。この脱アシル化は、ジエステル
としてのセファロスポリン（式（■））と１例えば三塩
化リンまたは五塩化リンの如きリンハライドの様なイミ
ノハライド生成試薬の反応によって達成される。このイ
ミノハライドを例えばメタノールまたはインブタノール
の様な低級アルコールで処理し、対応するイミノエーテ
ルを得る。これを加水分解または分解し、７β−アミノ
核化合物を得る。この方法の例を挙げると、ｐ−二）ロ
ベンジル′・７β−（３−（ｐ−二トロペンジルオキシ
力ルポニル）フェニルアセチルアミノＪ　−３−メチル
−３−セフェム−４−カルボン酸エステルを塩化メチレ
ン中、トリエチルアミンの存在下。

約５℃の温度にてＰＣｌ３で処理し、イミノクロリドを
得る。この混合物を冷却下、メチルアルコールまたはイ
ンブタノールで処理し、イミノエーテルを生成させる。

次に反応混合物を室温まで温め。

水を加えて、７β−アミノ核エステルを得る。この核を
常法により塩酸塩として単離することかできる。

得られたｐ−ニトロベンジル７β−アミノ−３−メチル
−３−セフェム−４−カルボン酸エステルを常法により
再アシル化し、所望の７β−アシルアミノ半合成セファ
ロスポリン抗生物質を得る。

例えば、クロルギ酸エチルおよびアセト酢酸エチルで形
成され１式： で表わされるエナミン−保護Ｄ−フェニルグリシンの混
合酸無水物で核をアシル化し１式：で表わされるセフア
レ千シンｐ−ニトロベンジルエステルのアミン保護誘導
体を得る。この誘導体を亜鉛および酸（ＨＣ／）で処理
し、エステル基およびエナミン−保護基の側基を除去し
１周知の経口で有効な抗生物質、セファレキシンを得る
。

その他の既知のセファロスポリン抗生物質も既知−アミ
ノ−３−セフェム核の例には、７−アミノ−３−メチル
−３−セフェム−４−カルボン酸（７−ＡＤＣＡ　）、
７−アミノ−３−エチル−３−セフェム−４−カルボン
酸、７−アミノ−３−メトキシ−３−セフェム−４−カ
ルボン酸、７．−アミノ−３−ビニル−３−セフェム−
４−カルボン酸および７−アミノ−３−アレニル−３−
セフェム−４−カルボン酸がある。

７−アミノ−３−セフェム核化合物は知られている。例
えば、７−ＡＤＣＡはステッドマン（Ｓｔｅｄｍａｎ　
）のジャーナル・オブ・メデイシナル・ケミストリー（
Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、　）、　　７．１１７（１
９６４）　　に、３−メトキシ核はチョウペット（Ｃｈ
ａｕｖｅｔｔｅ　）の米国特許第３，９１７，５８７号
に、３−ビニル核は米国特許第３，９９４，８８４号に
記載されている。

本発明はまた。上記の様な本発明の方法によって得られ
る３−アレニル−３−セフェム核化合物を提供するもの
である。これらの核は、式：〔式中、Ｒは水素またはカ
ルボキシ保護基である〕 て表わされる。好ましいカルボキシ保護基は　Ｒ３がｔ
−ブチル、ベンジル、４−メトキシベンジル。

４−ニトロベンジル、ジフェニルメチル、ｔｆ、＝Ｃｉ
トリメチルシリルまたはジメチル−ｔ−ブチルシリルの
様なトリー（Ｃ１−Ｃ４アルキル）シリル基である時に
表わされる。

以下に製造例および実施例を挙げて本発明を更に詳しく
説明するが、これらは本発明の範囲を制限するものでは
ない。

■、イソペニシリンＮシンテターゼによる２α−置換ペ
ナムの製造 製造例１　δ−（Ｌ−α−アミノアジポイル）−Ｌ−シ
ステイニル−Ｄ−ｒ、δ−ジデヒドロインロイシンの製
造 Ａ、ベンジル　２−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミ
ノ）−３−メチルペンテン酸（４１エステル臭化ベンジ
ル４．４ミリモル、重炭酸ナトリウム４．４ミリモルお
よびヨウ化ナトリウム１０１ｎ９を含んでいる乾燥ＤＭ
Ｆ１０ｍｆｆにバートレット等（Ｐ。

Ａ、　Ｂａｒｔｌｅｔｔ　ｅｔ　ａｔ、　）のジャーナ
ルＯオブ・オーガニック・ケミストリー（Ｊ、　Ｏｒｇ
、　Ｃｈｅｍ。

）、１９８２，４７　．３９３３　の方法によって製造
した２−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ）−３−
メチルペンテン酸＋４１（２Ｒ、３Ｓ　：　３Ｓ　。

２Ｒ）　４．４　ミＩＪモルを入れた混合物を２０℃で
１５分攪拌した。混合物を酢酸エチルに溶解し、溶液を
３回水洗し、硫酸ナトリウムで乾燥して沖過し。

蒸発させた。得られたエステル生成物をシリカゲルフラ
ッシュクロマトグラフィーによって精製し。

表題エステルを油状物として得た（８０％収率）。

ＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、ＣＨＣＩ　３　）　：δ１．
０１（３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６Ｈｚ、３−ＣＨ５）、１．４４
（９Ｈ。

ｓ、ｔ−ブチル）、２．５８−２．７１（ＩＨ，ｍ、３
−Ｈ）、４．３２−４．４０（ＬＨ，ｍ、２−Ｈ）、５
．０１−５．２７　（５Ｈ、ｒｎ　、５−　Ｈ、Ｎ　Ｈ
、ＣＨ２Ｃ６Ｈ５）　。

５．０５−５．３７（ＩＨ，ｍ、４−Ｈ）、７゜３３−
７．４１（５Ｈ，ｍ、Ｃ６Ｈ３−Ｈ）。

ＩＲ（ＣＨＣＩ　　）：λ　　　３００５ｍ、１７３０
ｓ３　　　　　　ｍａＸ （Ｃｏ　）、１７１０ｓ　（ＣＯ２）、１６００ｗ、１
５０２ｍ。

１２０５　ｓ、１１６０ｍｃｒＲ０ ｍ／ｅ　　（ＮＨ３＋デンープション・ケミカル・イオ
ナイゼーション）：　　３２０　　（ＭＨ”、１００％
）。

Ｂ、ベンジル　２−アミノ−３−メチルペンテン酸（４
）エステル・ギ酸塩 ベンジルエステル（工程Ａ、０．４０ミリモル）をギ酸
１ｍＱに溶解し、溶液を２０℃で２時間攪拌した。溶液
を蒸発させて粗製のギ酸塩を得、それ以上精製せずに次
工程に使用した。

Ｃ，ボールドウィン等（Ｊ、Ｅ、　Ｂａｌｄｗｉｎ　ｅ
ｔ　ａｌ。

）のジャーナル・オブ・ケミカル・ソサエティ・パーキ
：／　１　（Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　Ｐｅｙｋｉ
ｎ　１　）、１９８１．２２５３　　の記載に従い、Ｅ
ＥＤＱを用いる標準カップリング条件を使用し、ベンジ
ルエステル・ギ酸塩（工程Ｂ）を式： て表わされる保護α−アミノアジポイル−し−システイ
ニルジペプチドとカップリングさせた。Ｓ−ベンジル、
ＣＢｚ−保護された表題トリペプチドジベンジルエステ
ルを、対応するジアステレオマーであるアローイソロイ
シニルトリペプチドとの１：１混合物として得た（５０
％収率）。

シリカゲルプレートレイヤークロマトグラフィー（溶離
剤、酢酸エチル／ヘキサン４／’６（ｖ／ｖ））によっ
てジアステレオマー混合物から、保護された表題トリペ
プチドを分離した。この保護された表題トリペプチドを
酢酸エチル／ヘキサンから均質に結晶化した：融点、１
１６℃〜１１８℃。

ＩＲ（ＣＨＣＩ　　）：　λ　　　１７３０ｓ’（ＣＯ
２）　。

３　　　　　ｍａＸ １７００ｓ（ＣＯ２）、１５０８ｍ、１３７８ｍ、１２
０５ｗＯＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、ＣＨＣｌ　３）’δ
１．００（３Ｈ。

ｄ　、　Ｊ　＝　６　Ｈ２、’ＣＨ９ｂ）　、１．６１
−１．９２（４Ｈ。

ｍ、　３−ＣＨ，ＣＨ２Ｃｏ）　、　１．０７−１．２
５　（３Ｈ。

ｍ、　ＣＨ−Ｃｏ、　Ｃ旦ＣＨ３）、２．５８−２．８
８（２Ｈ。

ｍ、ＣＨＳ）、３．７５（２Ｈ，Ｓ、５ＣＨ２Ｃ６Ｈ５
）。

４．３６−４．４８（２Ｈ，ｍ、２ＸＮＨＣＨＣＯ）、
４．５７−４．６３　（ＩＨ，ｍ、ＮＨＣ旦Ｃｏ）　、
　４．９９−５．２１　（８Ｈ。

ｍ、　３　Ｘ　ＯＣＨ，Ｃ６Ｈ５，Ｃ＝３）　、　５．
５６−５．７５（２Ｈ，ｍ、Ｃ匹”ＣＨ２，ＮＨ）、６
．３５（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８　Ｈｚ、ＮＨ）、６．９１（
ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、ＮＨ）。

７．３１−７．３７（２０Ｈ，ｍ、アリールＨ）。

ｍ／ｅ　　（フィールド・デソープションつ７７９（Ｍ
＋）。

〔（Ｃ６Ｈ５）３Ｐ〕３ＲｈＣＩ　を使用し、ベンゼン
中、１気圧にて水素で１時間還元することにより、ボー
ルドウィン等のジャーナル・オブ・ケミカル・ンサエテ
イ（Ｊ、　Ｃｈｅｍ、　Ｓｏｃ、　）　、ケム・コムン
（Ｃｈｅｍ、　Ｃｏｍｍｕｎ、　）、１９８４．１１６
７　　およびその引用文献に記載の対応するアローイソ
ロイシニルトリペプチドに導くことによっても表題化合
物の構造を確認した。

００表題トリペプチドの脱保護 Ｎ−ＣＢｚＳ−ベンジル保護トリペプチドジベンジルエ
ステル（工程Ｃ）をボールドウィン等のジャーナル・オ
ブ・ケミカル・ンサエテイ、パーキン１，１９８１．２
２５３に記載の条件下、ナトリウム／液体アンモニア中
で脱保護し、表題トリペプチドを得た。

次いでこの脱保護トリペプチドを、希水酸化アンモニウ
ム中、ｐＨ８にて溶液に酸素ガスを２時間通すことによ
ってジスルフィドに酸化した。このジスルフィドをプレ
パラテイブ亀気泳動（ｐＨ３，５，４ＫＶ、８０分間）
および陽極へ５〜１０Ｇ移動したニンヒドリン活性バン
ドを抽出することによって精製し、精製ジスルフィドを
７７Ｘ収率で得た。

ＮＭＲ（３００ＭＨ２，Ｄ２０　、ＨＯＤ＝４．６３ｐ
、ｐ、ｍ。

）：δ０．８７　（３Ｈ，ｄ、Ｊ　＝５．５Ｈｚ、ＣＨ
ＣＨ３）　。

１．５１−１．７４（４Ｈ，ｍ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ
０）。

２、０８−２．２６　（２Ｈ１ｍ　、ＣＨ２ＣＯ）　、
２．５５−２．５７　（ＩＨ、ｍ、　ＣＨＣＨ３）　、
　２．７７−３．０３　（２Ｈ。

ｍ　、　ＣＨ２Ｓ）　、３．４７−３．５８　（Ｌ　Ｈ
９ｍ　、ＮＨＣＨＣＯ）　。

＋、１４（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝５．５Ｈｚ、ＮＨＣＨＣＯ）
、４．９１−４．９６（２Ｈ，ｍ、Ｃ＝ＣＨ２）、５．
６０−５．６７　（Ｉ　Ｈ、ｍ　、　ＣＨ−ＣＨ２）。

ｍ／ｅ　　（正のアルゴンＦ、Ａ、Ｂ、、　　ジチオト
レイトールの存在下）　３７６　（ＭＨ＋、　１２％）
。

ム遣患ヱ　６β−（Ｌ−α−アミノアジポイル）−２β
−メチル−２ｃｔ−ビニルペナム−３−カルボン酸 製造例１の記載に従って調製したδ−（Ｌ−α−アミノ
アジポイル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−ｒ、δ−ジデヒ
ドロインロイシン・ジスルフィド（２８ｍＭ、０．１０
０ｍ１２）の水溶液を、ジチオトレイトール（１００ｍ
Ｍ、　０．１００ｍｆｆ１）、　Ｌ、−アスコルビン酸
（５０ｍＭ、　０．１００ｍｅ）　、硫酸第１鉄（５ｍ
Ｍ、　０．１００ｍｆｆ１）、ウシ肝臓カタラーゼ（１
ｏｏｏｏ単位／ｍＱ、０．０５０ｍρ）および重炭酸ア
ンモニウム（５０ｍＭ、３．５ｍＱ）の水溶液と混合し
た。混液のｐＨをモニターし、必要な場合。

希水酸化ナトリウム（１００ミリモル）を添加して８に
調節した。この混液を２７℃で５分間振盪し、炭酸アン
モニウムの５０ｍＭＩＷ液中の、セファロスポリウム・
アクレモニウムから単離されたインペニシリンＮシンセ
ターゼ製ｌｌ　（５１，Ｕ、／ｍｆ２　。

１ｍｌ　）を加えた。このインキュベーション混合物を
２個のＩｏｎ（！バイヤルに入れ、２７℃で４５分間振
派し１次いで、アセトン７ｒｎＱでタンパクｔを沈澱さ
せることにより反応を終止させた。遠心して沈澱を分離
した。上清を減圧下で蒸発させてアセトンを除き、残留
物を凍結乾燥して１式：で表わされる粗製２α−ビニル
ペナムを得た。

この粗生成物を逆相オクタデシルシランＨＰＬＣ（２５
０Ｘ４．６調カラム）によって精製した：移動相：１０
ミリモル重炭酸アンモニウム水溶液；流速１ｍｆｆ１／
分；保持時間＝７〜８分間。

ＮＭＲ（５００ＭＨｚ　、　Ｄ２０　、３−　）リメチ
ルシリルプロピオネート［２，２，３，３−Ｈ４）　Ｔ
ＳＰ　＝ｏ、　ｏｏ　ｐ、ｐ８ｍ、　）　：δ１．５３
−１．７７（４Ｈ，ｍ。

ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃｏ）、１．５９　（３Ｈ，Ｓ、３
β−ＣＨ５）、２．２５−２．３８（２Ｈ９ｍ、ＣＨ２
Ｃ０）、３．５６−３．５９（ＩＨ，ｍ、ＣＨ（ＣＨ２
）３）、４．１８（ＩＨ。

Ｓ・２−Ｈ）１５．０３（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１０．５Ｈｚ
　。

ＣＨ＝ＣＨ２）　、　５．２２（ＩＨ−ｄ　　、　Ｊ＝
１７Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）　、５．３５．５．４５　（
２Ｈ、ＡＢｑ、　Ｊ＝４Ｈｚ、５　。

６−Ｈ）、５．９１（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１０．５．１７
Ｈｚ、ＣＨ＝ＣＨ２）。

２β−メチル基の化学シフトの測定は、核オーバーハウ
ザー実験に従って行なった。その結果。

δＨ１，５９における２β−ＣＨ３の放射は２−Ｈを高
める（１２％）が、５−Ｈを高めず、δＨ５゜９１にお
けるＣＨ＝ＣＨ２プロトンの放射は５−Ｈを高めた（３
％）。

ｍ／ｅ　　（正のアルゴン高速原子たたき出し）３７２
（ＭＨ＋）。

製造例３６β−アミノ−２α−ビニル−２β−メチルペ
ナム−３−カルボン酸 製造例２の６β−（Ｌ−α−アミノアジポイル）−２β
−メチル−２α−ビニルペナム−３−カルボン酸をＮ−
フタロイル誘導体に変換し、この誘導体のナトリウム塩
を乾燥塩化メチレンに懸濁する。懸濁液をピリジンの存
在下、トリメチルク・ロロシランで処理し、トリメチル
シリルエステルを生成させる。このシリルエステル誘導
体を約−５℃で五塩化リンと反応させ、対応するイミノ
クロリドを生成させる。反応混合物を約−２０℃に冷却
し、メチルアルコールで処理して対応するイミノエーテ
ルを得る。この混合物を約θ℃に温め。

水を加えて表題の核化合物を得る。混合物を水とメチル
アルコールの冷混合液に注ぎ、水層を分離する。ｐＨを
約４に調節した後、溶液を約５℃で放置し１表題の核化
合物を沈殿させる。

２α−アレニル−２β−ペナム 製造例４ 以下の様にして、６β−アミノ−２α−アレニル−２β
−メチルペナム−３−カルボン酸を得る。

２Ｒ，３Ｒ−２−（ｔ−ブチルオキシカルボニルアミノ
）−２−ヨード酪酸ジフェニルメチルエステルを乾燥脱
気ベンゼン中、過剰量のトリフェニルプロパルギルスズ
およびアゾどス（インブチロニトリル）（ＡＩＢＮ）と
混合し、この溶液を窒素雰囲気下、還流温度で約１８時
間加熱する。この混合物を冷却し、蒸発乾固し、残留物
をアセトニトリルにとってヘキサンで洗浄する。蒸発後
。

生成物の残留物をシリカゲルクロマトグラフィーにかけ
、ジフェニルメチル　２−（ｔ−ブチルオキシカルボニ
ルアミノ）−３−メチル−４，５−へキサジエン酸エス
テルを得る。

冷エタノール中、無水ｐ−）ルエンスルホン酸を用いて
生成物からアミノ−保１ｔ−ＢＯＣ基を除去し、この遊
離アミノエステルを式：〔式中、ｐＭＢ　はｐ−メトキ
シベンジルである〕で表わされるアミノ−保護およびＳ
−保護されたδ−（Ｌ−α−アミノアジポイルアミノ）
−Ｌ’−システィンジエステルとカップリングさせる。

カツブリングは、窒素霊囲気下、乾燥ジクロロメタン中
、室温にて、トリエチルアミンの存在下で１−エトキシ
カルボニル− ヒドロキノリン（ＥＥＤＱ）を用いて行なう。

得られた保護トリペプチド生成物をトリフルオロ酢酸お
よびアニソールと一緒に還流温度で約３０分加熱するこ
とによって脱保護し、式：で表わされるトリペプチドを
得る。

このトリペプチドを、ジチオトレイトール、Ｌ−アスコ
ルビン酸、硫酸第１鉄およびウシ肝臓カタラーゼを含有
している水性媒質（ｐＨ７．７〜８．０）中，約２７℃
で過剰量のイソペニシリンＮシンテターゼと一緒にイン
キュベートする。約１時間後，アセトンを添加して反応
を止める。沈殿したタンパク質を遠心によって分離し、
生成物を含んでいる上清を蒸発させてアセトンを除去し
，残留した水溶液を凍結乾燥して，式： で表わされる生成物の凍結乾燥物を得る。

得られた２α−アレニルペナムを製造例３の方法に従い
，脱アシル化する。

製造例５　δ−（Ｌ−α−アミノアジポイル）−Ｌ−シ
ステイニル−（２Ｒ　、３Ｒ）−２−アミノ−３−メト
キシ酪酸 （１１２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ，３Ｓ　　−２−ブロモ
−３−メトキシ酪酸 クロトン酸（８．６ｇ，１００ミリモル）をメタノール
（５０ｍｆ）に溶解し％Ｎーブロムアセトアミド（１３
．８ｇ，１０ミリモル）を少量ずつ３０分かけて加える
。溶液を２５℃で１５時間攪拌し。

次いで溶媒を蒸発させ、残留物をジエチルエーテルと水
に分配する。エーテル層を乾燥（Ｎａ　２　ＳＯ２）し
、濾過し、蒸発させ，残留物を蒸留して，表題化合物を
無色油状物（１４．３ｇ，７２％）として得る：　ｂ．
ｐ．　ｓｓ〜８９°１０．５順。

（２１　２　Ｒ　、　３　Ｒ−および２Ｓ，３Ｓ−２−
アミノ−３−メトキシ酪酸 ２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ，３Ｓ−２−ブロモ−３−メト
キシ酪酸（１４ｇ，７１ミリモル）をアンモニア（比重
０．８　８％２　５　０ｍｆｆｉ）に溶解し，こ、の混
合物をオートクレーブ中，９５℃で８時間加熱する。混
合物を２５℃に冷却し，蒸発させ，残留物をアセトンに
懸濁する。生成した無色の固形物を濾過してアセトンで
洗浄し，表題化合物を。

残留した臭化アンモニウムを含んでいる無色固形物（１
２．１ｇ）として得る：’ｍ．ｐ．１８０〜１８４℃（
分解）。

＋３＋２Ｒ．３Ｒ−および２Ｓ，３Ｓ−Ｎ−ベンジルオ
キシカルボニル−２−アミノ−３−メトキシ酪酸ベンジ
ルエステル ２Ｒ　、３Ｒ−および２Ｓ．３Ｓ−２−アミノ−３−メ
トキシ酪酸（３．１ｇ）を１Ｍ水酸化ナトリウム（２７
ｍｆｆｉ）、水（２０ｍＱ）およびジオキサン（４０ｍ
Ｑ）の混液に溶解する。この溶液にジオキサン（２０ｍ
ｆｆｉ）中のベンジルクロルギ酸エステル（　３．８ｍ
Ｑ，２　２ミリモル）および１Ｍ水酸化ナトリウム（２
７ｍＱ）を別々に各々同じ添加速度で２５分かけて加え
る。この混合物を１時間攪拌し，酢酸エチル（３ｘ２０
０ｍｆｆｉ）に抽出し％２Ｎ塩酸でｐＨ１に酸性化し，
次いで酢酸エチル（　３　Ｘ　２００ｍｆｆｉ）に再抽
出する。合した有機抽出液を乾燥し。

沖過し，蒸発させて，油状物を得る。この油状物を乾燥
ジメチルホルムアミド（２０ｍＱ）に溶解し。

溶液に炭酸水素ナトリウム（３．１４ｇ，４１ミリモル
）、臭化ベンジル（　３．８ｍＬ　３　３ミリモル）。

無水硫酸ナトリウム（２００〜）およびヨウ化ナトリウ
ム（　１　０＃ＩＰ）を加え、全体を２５℃で２４時間
攪拌する。次に，この混合物をジクロ口メタン（２００
＋ｎＱ）に抽出して水（４ｘ３００ｍＱ）で洗浄し、乾
燥（硫酸す）　ＩＪウム）して濾過し、蒸発させる。シ
リカゲルクロマトグラフィー（酢酸エチルおよび石油エ
ーテルを順次溶離剤として使用）によって精製し１表題
化合物を放置すると固化する無色油状物（４，２ｇ、６
５％）として得る：ｍ、ｐ、４４℃。

（４１２Ｒ，３Ｒ−および２Ｓ、３Ｓ−２−アミノ−３
−メトキシ酪酸ベンジルエステル２Ｒ，３Ｒ−および２
Ｓ　、３Ｓ−Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−２−アミ
ノ−３−メトキシ酪酸ベンジルエステル（５００〜、１
．４ミリモル）を乾燥ジクロロメタン（３ｍＱ）に溶解
し、臭化水素酸（酢酸中４５％、２ｍＱ、）を加える。

この混合物をアルゴン雰囲気下、２０分間攪拌し１次い
で蒸発させる。残留物をジクロロメタン（３×３ｍＱ）
に溶解して蒸発（３Ｘ）させて更に残留物を得、これを
キシレン（２×３ｍ、Ｍ）に溶解して蒸発（２×）させ
る。次いで１石油エーテル（５ｍｆｆｉ）を加えて生成
物を５分間細かくした後母液を捨て、固形残留物をジク
ロロメタン（５ｍｅ）に溶解する。

このジクロロメタン溶液にトリエチルアミン（１ｍＱ）
を加え、２分間攪拌して蒸発させる。残留物をジクロロ
メタン（３×５ｍＱ）に溶解して蒸発（３ｘ）させ、更
に残留物を得、これをジエチルエーテル（５ｍＱ）で細
かくする。得られた固形物を濾過し、ジエチルエーテル
で抽出しく２×５ｍＱ）。

エーテル層を合して蒸発させ１表題化合物を無色油状物
（２９０〜、９３％）として得る。

（５１（Ｎ−ベンゾイルオキシカルボニル−α−ベンジ
ル−δ−Ｌ−アミノアジポイル）−３−ベンジル−し−
システイニル−（２Ｒ，３Ｒ−２−アミノ−３−メトキ
シ酪酸）ベンジルエステル２Ｒ，３Ｒ−および２８．３
Ｓ−２−アミノ−３−メトキシ酪酸ベンジルエステル（
１７７η、０．７９ミリモル）を乾燥ジクロロメタン（
１０ｍＱ）に溶解し、２−エト牛シーＮ−エトキシカル
ボニル−１，２−ジヒドロキノリン（１９５■、０．７
９ミリモル）およびＮ−ペンジルオ牛ジカルボニルーα
−ベンジル−δ−（Ｌ−α−アミノアジポイル）−８−
ベンジル−し−システィン（４５６■、０゜７９ミリモ
ル）（ボールドウィン等のジャーナル・オブ・ザ・ケミ
カル・ソサエティ、パーキン１（Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ
　ｔｈｅ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　　５ｏｃｉｅｔｙ。

Ｐｅｒｋｉｎ　１　）　　１９８１　、２２５３の記載
に従って調型したもの）、および硫酸ナトリウム（１０
０ｒｎ９）を加え、この混合物を２４時間攪拌する。こ
の溶液を蒸発させて残留物を酢酸エチル（１５０ｒｎり
に溶解し、この酢酸エチル溶液を２Ｍ塩酸（５０ｍｆｆ
）、飽和炭酸水素す）　ＩＪウム溶液（５０ｍｆｆｉ）
および食塩水（５０ｍｊりで順次洗浄し１次いで乾燥し
て濾過し、蒸発させる。酢酸エチルおよびヘキサンを順
次溶離剤として使用するシリカゲルクロマトグラフィー
によって精製し、表題化合物を無色固形物（１８０〜、
２９％）として得る二ｍ、ｐ、　１１６〜１１８°：　
〔α都−１１．７°（三１、ＣＨＣｌ３）（２Ｒ，３Ｒ
異性体は２Ｓ、３Ｓ異性体より極性が少ない）。

（６）δ−（Ｌ−α−アミノアジポイル）−Ｌ−システ
イニル−（２Ｒ，３Ｒ−２−アミノ−３−メトキシ酪酸 Ｎ−ベンジルオキシカルボニル−α−ベンジル−δ−（
Ｌ−α−アミノアジポイル）−３−ベンジル−し−シス
テイニル−（２Ｒ，３Ｒ−２−アミノ−３−メトキシ酪
酸）ベンジルエステルの電気泳動（ｐＨ３，５，３ＫＶ
、２ｆｌＷ間）の結果１表題化合物をそのジスルフィド
形（１０■、２６％）で無色固形物として得る。’Ｈｎ
、ｍ、ｒ、（Ｄ２０＋外部ＴＭＳ標準）６１．５−１．
８（４Ｈ，ｍ）　、２．２５（２Ｈ，ｔ　、Ｊ＝７．０
Ｈｚ　）２．７３（２Ｈ，ｍ）、３．１９（３Ｈ，ｓ）
、３．６５（２Ｈ，ＡＢＸ、ＪＡＢ＝１０．５ＪＡＸ　
＝３．９　、　ＪＢＸ　＝５．５Ｈ２）　、　３．８４
　（ＬＨ，ｔ　。

Ｊ＝６．２Ｈ２）、４．４０ＣＩＨ，ｔ、Ｊ＝５．８Ｈ
ｚ）、４．４７（ＩＨ，ｍ）。

製造例６６−δ−（Ｌ−α−アミノアジパミド）−２α
−メトキシ−２β−メチルペナム−３−カルボン酸 トリス−ＨＣｌ　　バッファー（５０ｍＭ、　ｐＨ７，
５ニドリスは２−アミノ−２−ヒドロキシメチルプロパ
ン１，３−ジオールを表わす）に入れて総容量１ｍ！ｌ
としたコファクター、ジチオトレイトール（２，１１ｍ
Ｍ）、アスコルビン酸（１，０６ｍＭ）。

硫酸第１鉄（０，１１ｍＭ）およびカタラーゼ（ウシ肝
臓、１８００　　シグマ単位）の存在下、δ−（Ｌ−α
−アミノアジポイル）−Ｌ−システイニル−（２Ｒ，３
Ｒ−２−アミノ−３−メトキシ酪酸）（２１０μｇ　）
　ヲＮＩＪイソペニシリンＮシンテターゼ（１，１単位
）と−緒に振盪器（２５Ｏｒ、ｐ、ｍ。

）中、空気にさらしながら２７℃で３０分間インキュベ
ートした。アセトンの７０容量％濃度までアセトンを添
加して混合物からタンパク質を沈殿させ、次いで遠心し
て分離し、上清を凍結乾燥する。この凍結乾燥物質を水
（５００μりに再溶解し、ＨＰＬＣ（ウォータース（Ｗ
ａｔｅｒｓ）　ニラシアル−パックＣ，８１０カートリ
ツジ（Ｒａｄｉａｌ−Ｐａｋ　ＣＢ　１０　ｃａｒｔｒ
ｉｄｇｅ　）を備えたＺモジュール・ラジアル・コンプ
レッション・セパレーター・システム（Ｚ　Ｍｏｄｕｌ
ｅ　　Ｒｅｄｉａｌ　　ＣｏｍｐｒｅｓｓｉｏｎＳｅｐ
ａｒａｔｏｒ　Ｓｙｓｔｅｍ　）　（溶離”溶媒として
９０容量％５０ｍＭ　ＫＨ２ＰＯ４／１０容量％メタノ
ールを使用し、２２０℃ｍにおけるその吸収によって抗
生物質を検出する）によって生成物を精製した。

この様にして得た生成物を直ちに凍結乾燥し１表題化合
物を得る。

製造例７６β−アミノ−２ｃｔ−メトキシ−２β−メチ
ルペナム−３−カルボン酸 アセトニトリル（０，３ｍ！！、）に製造例６で得た２
α−メトキシ−２β−メチルペナム（１，１５’＋７゜
３．１マイクロモル）を入れた溶液に、窒素雰囲気下、
０℃で酢酸中の塩化ニトロシル（０，６１Ｍ。

０．０２５ｍρ）を加えた。０℃で５分間放置した後。

溶液を室温で蒸発乾固した。メタノール（０，４ｍＱ）
を加えて溶液を５分間放置し、メタノールを減圧留去し
た。塩酸／塩化カリウムバッファー（０゜０４Ｍ　ＨＣ
Ｉ　、０．１６Ｍ　ＫＣＩ、　　ｐＨ２，０，４ｍｌり
を加え、溶液を室温で３分間放置した。溶液を重炭酸ナ
トリウム（７０ｍＭ、０．３ｍＱ）で中和し。

凍結乾燥した。ＨＰＬＣ（逆相オクタデシルシランカラ
ム、溶離剤として５　ｒｎ　Ｍ　Ｎ　ａ　Ｈ２Ｐ　Ｏ４
／Ｎａ２ＨＰＯ４／ＫＣ／　ｐＨ７バツフアー：メタノ
ール（１９：１）を使用）によって精製し、表題化合物
（０，０５０ｍ９％７％）を得た。

■、イソペニシリンＮシンテターゼによる６β−（３−
カルボキシフェニルアセチルアミノ）−２α−置換−２
β−メチルペナム−３−カルボン酸の製造 製造例８　　Ｎ−（３−カルボキシフェニルアセチル）
−Ｌ−システイニル−Ｄ−バリンＡ、　　イソフタル酸
モノベンジルエステルメチルアルコール（２００ｍＱ）
および水（１０ｍｇ、）にイソフタル酸（１１，２ｇ、
０．１モル）を入れた懸濁液に、水酸化カリウム（１１
，２ｇ、　０．２モル）のメチルアルコール（１００ｍ
ｆｆｉ）溶液ヲ加え、この混合物を室温で一夜攪拌した
。溶媒を減圧留去し、ＤＭＦ　（２５０＋ｎＱ）および
臭化ベンジ／ｌ／　（１３，５ｍＱ、　１．１　ｇ　）
を加えた。この混合物を１００℃で２時間加熱し、重炭
酸ナトリウム水溶液（水５００ｄ中１０ｇ）に注ぎ、酢
酸エチルで抽出した。水層を酸性化（濃Ｉ（ＣＩ）して
酢酸エチルで抽出し、沈殿したイソフタル酸を沖過によ
り除去した。酢酸エチル層を食塩水で洗浄し、乾燥（Ｎ
ａ２Ｓ０４）し、蒸発させた。残留物（モノベンジルエ
ステルおよびイソフタル酸）をシリカゲルクロマトグラ
フィーにかけ１表題のモノベンジルエステル３．７３ｇ
（１５％）を得た。

’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、　ＣＤＣｌ　３）　：δ
５．４２（２Ｈ，ｓ）、７．３０−７．５０（５Ｈ，ｍ
）、７．５９（ＩＨ，ｔ　、Ｊ＝７．７Ｈｚ　）、８．
３２（２Ｈ，ｔ　、Ｊ＝４．５Ｈｚ）、８．８１（ＩＨ
，ｓ）。

ＩＲ（ＣＨＣＩ３）：　２７００−３４００　（ＣＯＯ
Ｈ）。

１７２０（Ｓ）、１７００（Ｓ）ｃａ−’。

Ｂ、２，２．２−トリクロロエチル　３−（ベンジルオ
キシカルボニル）フェニル酢酸エステル上のイソフタル
酸モノベンジルエステル（２，６ｇ）、乾燥ベンゼン（
８ｍｆｆｉ）および精製塩化チオニル（２，６ｍＬ３当
量）の混合物を８０℃で１時間加熱した。溶媒を減圧留
去し１次いで微量の未反応の塩化チオニルを除去するた
めに乾燥ベンゼン（１０＋ｎＮ）を加え、溶媒を再び減
圧留去した。

得られた酸クロリドを乾燥ベンゼン（２０ｍｆｆｉ）に
溶解し、溶液を０℃でジアゾメタンのエーテル溶液（過
剰量）に注いだ。溶液を０℃で２０分間。

次に室温で一夜攪拌した。減圧下、溶媒および過剰量の
ジアゾメタンを除いた。得られたジアゾケトンに２．２
．２−トリクロロエタノール１２ｍＱを加え、この温混
合物（５０〜６０℃）に酸化銀（０゜３ｇ）を加えた。

窒素を放出させ、２時間後、更に酸化銀（０，３ｇ）を
加え、３０分間加熱し続けた。酸化銀を更に０．２ｇ加
えたところ、３０分後。

ジアゾケトンは消費されていた（ＴＬＣによる）。

この混合物をクロロホルムで希釈し、活性炭で処理し、
濾過し、蒸発によって濃縮した。残留物をフラッシュク
ロマトグラフィー〔ベンゼン−石油エーテル（１／１）
Ｊによって精製した。２．２．２−トリクロロエチルエ
ステル３．６ｇ（８８％収率）を得た。使用したジアゾ
メタンは、Ｎ−二）ロソメチル尿素を用いて得た。

’ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ　３，３００　ＭＨｚ　）　：δ
３．８３（２Ｈ，ｓ）、４．７６（２Ｈ，ｓ）、５．３
７（２Ｈ，ｓ）。

７．３０−７．６０　（７Ｈ、ｍ）　、　８．０４　（
２Ｈ、ｍ）。

ＩＲ（ＣＨＣ１３）：　３０２０　（ｍ）　、　２９６
０（ｗ）。

１７５５（ｓ）、１７４０（ｓ）、１６１０（ｗ）、１
５９０（ｗ）、１５００（ｗ）、１４５０　（ｍ）、１
３７５（ｍ）。

１２８０（ｓ）ｃｍ　　　０ ＭＳ　ｍ／ｅ：　９１（１００）、２２５　（２２，Ｍ
−（ＣＩ　３ＣＨ２ＱＣ（０）　）　、　２９３　（４
５、Ｍ−ｐｈ（Ｈ２ｏ）３　、２９５　（４２）　、　
２９７（１４）　、　４００　（７，７、Ｍ＋３５ＣＩ
３）、　４０２　（６，９、Ｍ＋２　）、　４０４　（
２，８゜Ｍ＋４）。

Ｃ，ａ−（ベンジルオキシカルボニル）フェニル酢酸 テトラヒドロフラン（３６ｍＱ）に上記の様にして調製
した２、　２．２−トリクロロエチルエステル（３，６
ｇ）を入れ、激しく攪拌した溶液に、室温で亜鉛粉末（
７，２ｇ）１次いでＩ　Ｍ　ＩＪン酸二水素カリウム（
ＫＨ２ＰＯ４）水溶液（７，２ｍＱ）を加えた。

１５分後、ＴＬＣにより１反応が起こらなかったことが
わかった。亜鉛を更に７．２ｇ加えた。数分後、温度が
上昇した。３０分後、亜鉛を濾過し。

溶媒を減圧留去した。残留物をクロロホルムに溶解し、
２Ｎ　ＨＣＩ　（２Ｏｎ＋ｆ）を加え、この混合物を１
時間攪拌した。クロロホルム層を分離し、水層をクロロ
ホルムで抽出した。抽出液をクロロホルム層と合し、食
塩水で洗浄して硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させた。

残留物をフラッシュクロマトグラフィー（酢酸エチル）
によって精製し、３−（ベンジルオキシカルボニル）フ
ェニル酢酸８６９η（３７％収率）を得た：　ｍ、ｐ、
　９５〜９６°　（エーテルから）。

元素分析（Ｃ８６Ｈ１４０４として） ＣＨ 理論値　　　７１．１０　　　　５．２２実測値　　　
７１．２２　　　５．２７’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、
ＣＤＣｌ　３）’６３．７２（２Ｈ，ｓ）、５．３７（
２Ｈ，ｓ）、７．３０−７．５５（７Ｈ。

ｍ）、７．９８−８．０’９　（２Ｈ，ｍ）。

ＭＳ　ｍ／ｅ：　　９１　（３４）、１６３（１００，
Ｍ−ｐｈ（ＨＯ）Ｅ　、２５２　（６，７，Ｍ−Ｈ２Ｏ
）、２７０（Ｍ＋。

１０）。

ＩＲ（ＣＨＣＩ３）：　２８００〜３４００　（ＣＯＯ
Ｈ）。

１７１５　（ｃｍｏ　）０１−１０ Ｄ、５−（４−メトキシベンジル）−Ｌ−システイニル
−［）　−バリンジフェニルメチルエステルのアシル化 乾燥塩化メチレン１０ｍＱに３−（ベンジルオキシカル
ボニル）フェニル酢酸（４２７〜、１．５８ミリモル）
、ＥＥＤＱ　（３９０ｍ９．　１当量）および５−（４
−メトキシベンジル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−バリン
ジフェニルメチルエステル（１当量）を入れた混合物を
室温で一夜攪拌した。溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エ
チル８０ｎ＋４！に溶解した。溶液を重炭酸す）　ＩＪ
ウム水溶液、食塩水。

１０％クエン酸水溶液、再び食塩水で洗浄し、硫酸ナト
リウムで乾燥した。溶媒を蒸発させ、残留物をフラッシ
ュクロマトグラフィー（２０％酢酸エチル−石油エーテ
ル）によって精製し、Ｎ−（３−（ベンジルオキシカル
ボニル）フェニルアセチルＪ−３−（４−メトキシベン
ジル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−バリンジフェニルメチ
ルエステル１．００５ｇを得た（ジエチルエーテル）：
融点約り３６℃〜約１３７℃。

元素分析（Ｃ４，Ｈ４６Ｎ２ｏ７Ｓとして）ＣＨＮ 理論値　　７１．２２　　６．１１　　　３．６９実測
値　　７１．１２　　６．０２　　３．５９’ＨＮＭＲ
（ＣＤＣＩ　３．３００ＭＨｚ）’δ０．７３および０
．８５（各々３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ）、２．２３（
ＩＨ，ｍ）、２．６２（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝１４．０．７
．５Ｈｚ　）、２．８２（ＩＨ，ｄｄ　、Ｊ＝１４．０
．５．４Ｈｚ　）。

３．５６（２Ｈ，ｓ）、３．６９（２Ｈ，ｓ）、３．７
６（３Ｈ。

ｓ）、４．５２（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ＝７．５．５．４Ｈｚ
）。

４．６３（ＩＨ，ｄｄ、Ｊ　＝８．５．４．４Ｈｚ）、
、５−３５（２Ｈ。

ｓ）、６．３５（ＩＨ，ｄ、Ｊ　＝７．５Ｈｚ）、６．
７０　（ＩＨ。

ｄ　、　Ｊ　＝８．５Ｈｚ　）　、　６．８３および７
．１６（各々２Ｈ。

ｄ　、　Ｊ　＝８．０Ｈｚ）、　６．９１　（ＩＨ，ｓ
　）、、　７．２８〜７．４８（１７Ｈ，ｍ）、７．９
６（２Ｈ，ｍ）。

ＩＲ（ＣＨＣＩ３）：　３４００，３０１０，２９６０
゜１７２０．１６７０．１６１０，１５１５．１５００
Ｃ＋ｌ　　　０ＭＳ　：　７５８　（Ｍ＋）。

上の３保ｆｉＮ−アシル化生成物（１５０ｍｇ、０．２
ミリモル）を塩化メチレン３耐に溶解し、アニソール０
．３６ｍＱを加えた。溶液を水浴中で冷却し、ニトロメ
タン中塩化アルミニウムのｏ、ｓＭｉ液を加えた。この
混合物を０℃で２時間、次いで室温で３時間攪拌した。

反応混合物を酢酸エチルで希釈してＩＮ塩酸で洗浄し、
５％重炭酸ナトリウム水溶液で抽出した。抽出液を酢酸
エチルで洗浄して塩酸で酸性化し、得られた脱保護ペプ
チドを酢酸エチルで抽出した。抽出液を食塩水で洗浄し
、乾燥し、蒸発させて１表題化合物７０〜（９３％収率
）（アセトンから）を得た：融点的１９６℃〜約１９７
℃（分解）。

元素分析（ｃ、□Ｈ２□Ｎ２０６Ｓとして）理論値　　
５３．３９　　　５．８０　　　７．３２実測値　　５
３．５５　　５．８２　　７．２３１ＨＮＭＲ（３００
ＭＨｚ　、ＣＤａＯＤ）’　　δ０．８９および０．９
４（各々３Ｈ，ｄ、Ｊ＝６．９Ｈｚ）。

２．１５（ＩＨ，ｍ）：２．８１および２．９０（各々
ＩＨ。

ｄｄ、Ｊ＝１４．０．６．５Ｈ２）、３．６７（２Ｈ，
Ｓ）。

４．３１（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝５．４Ｈｚ）、４．５８（Ｉ
Ｈ，ｔ。

Ｊ＝６．５Ｈｚ）、７．４２（ＩＨ，ｔ　、Ｊ＝７．７
Ｈｚ）。

７．５６（ＩＨ，ｄ　、Ｊ＝７．７Ｈｚ）、７゜９０（
ＩＨ，ｄ　。

Ｊ＝７．７Ｈｚ　）、　８．０１　（Ｉ　Ｈ、ｓ　）。

ＭＳ　（ＦＡＢ　　ＥＸ、　グリセロール／シュウ酸）
ｍ／ｅ　：　３８３　（Ｍ＋１　）。

ＩＲ（ＫＢｒ）：　　３３００．　２８００〜３３００
　　（ブロード）、２６８０　（ｗ）、２５６０（ｗ）
、１７３０．　１７００゜１６５０．１６０５Ｃ＋＋１
　　０ 製造例９　１ＰＮＳ　による６β−（３−カルボキシフ
ェニルアセチルアミノ）−２，２−ジメチルペナム−３
−カルボン酸 Ｎ−（３−カルボキシフェニルアセチル）−Ｌ−システ
イニル−Ｄ−バリン（１，４＃ｖ％３．６６　Ｘ１０−
３ミリモル）、１００ミリモルジチオ　トレイトール１
００μｌ、　５　ミ１７モル硫酸第１鉄１００μｌ、５
０ミリモルＬ−アスコルビン酸１００ｉｔｌ。

カタラーゼ（１／１０希釈）５０μｌ、５０ミリモル重
炭酸アンモニウム１ｍＱおよび５０ミリモル重炭酸アン
モニウム中のインペニシリンＮ−シンテターゼ溶液［Ｔ
ｒｉｓ・ＨＣｌ　　バッファー中のＩＰＮＳ１’ｍＱか
ら調製したもの（活性２７００　Ｃ，Ｕ。

ｍｌ＝　、　１０９．８　Ｃ，Ｕ、ｍＦ’の比活性）１
３．５ｍＱの混合物を２等容量に分け、各半分を開ロパ
イヤルに入れた。各バイヤルの内容物を３０℃にて（外
気にさらして）　２５　Ｏｒｐｍ　でインキュベートし
た。３０分後、１００ミリモルジチオトレイトール５０
μｊおよび５ミリモル硫酸第１鉄５０μｌを各バイヤル
に加え、インキュベーションを３０分続けた。インキュ
ベーション混合物を合してアセトン１２ｍｆｆ１を加え
、混合物を遠心した。上清をデカンテーションして蒸発
広面し、生成物の残留物を凍結乾燥した。この生成物を
、３％アセトニトリル−９０％１０ミリモル重炭酸アン
モニウムを使用し、逆相Ｃ１８分析用カラムによって精
製した。

’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、　Ｄ２０　）　’　　δ
１．３０　　（３Ｈ，ｓ）、１．３８　（３Ｈ，ｓ）、
３．５５および３，６３（各々ＩＨ，ｄ、Ｊ＝１５．０
Ｈｚ　）、４．０７（ＩＨ，ｓ）。

５．２５および５．３５（各々ＩＨ，ｄ、Ｊ＝３．８Ｈ
ｚ）。

７．３５（２Ｈ，ｍ）、７．７１（２Ｈ，ｍ）。

β−ラクタムの測定のために、生成物をトリメチルシリ
ルプロピオン酸ナトリウム−ｄ４（１，８３×１０−４
ミリモル）を使用するＮＭＲ試験に付した。生成物、６
β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）ペニシ
ラン酸の収量は６８％であった。

製造例１０ 製造例９の方法に従い、基質であるＮ−（３−カルボキ
シフェニルアセチル）−Ｌ−システイニル−Ｄ−へδ−
ジデヒドロインロイシン、およびＩＰＮＳを使用して６
β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミノ）−２α
−ビニル−２β−メチルペナム−３−カルボン酸を得る
。

製造例１１ 製造例９の方法に従い、基質であるＮ−（３−カルボキ
シフェニルアセチル）−Ｌ−システイニルー（２Ｒ，３
Ｒ）−２−アミノ−３−メトキシ酪酸、およびＩＰＮＳ
を使用して６β−（３−カルボキシフェニルアセチルア
ミノ）−２α−メトキシ−２β−メチルペナム−３−カ
ルボン酸を得る。

■、イソペニシリンＮシンテターゼによる６β−（５−
カルボキシペンタンアミド）−２α−置換−２β−メチ
ルペナム−３−カルボン酸の製造製造例１２　アジポイ
ル−（Ｌ）−システイニル−（Ｄ）−バリン １）アジピン酸モノベンジルエステル アジピン酸（２，９２ｇ、２０．０ミリモル）をジブチ
ルホルムアミド（２５ｍｆｆｉ）に溶解して７０℃に温
め１次いでジシクロヘキシルアミン（４ｍρ）を加えた
。７０℃で１５分間攪拌した後、臭化ベンジル（３，４
２ｇ、　２０．０ミリモル）を加え、得られた懸濁液を
７０℃で更に２０分間攪拌して２０℃に冷却したつ酢酸
エチル（Ｌｏｏｍ（りを加え。

懸濁液をｒ過し、ｒ液を水（３×２００ｍＲ）で洗浄し
、水層を重炭酸す）　ＩＪウム水浴液で塩基性（ｐＨ１
１まで）にした。水層を分離し、酢酸エチル（２×１０
０ｍＱ）で洗浄し、２ＮＨＣ／で酸性化（ｐＨ２まで）
し、酢酸エチル（２×１００ｍＱ）で抽出奈≠孝呑した
。該有機抽出液を合し、水（３×１００ｍＱ）で洗浄し
、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）して−過し、蒸発乾固した。ク
ロマトグラフィー〔フラッシュシリカ（酢酸エチル）〕
によって１）の化合物を油状物（８９０４，１９％）と
して得た。

ＴＬＣ（酢酸エチＰＬ’）　：　Ｒｆ　Ｏ，８゜１ＨＮ
ＭＲ（６０ＭＨｚ、ＣＤＣＩａ）’δ１．４８−１．８
３　（２Ｈ，ｍ、　ＣＨ２Ｃ豆２ＣＨ２Ｃｏ）、　２．
１５−２．５１　（４Ｈ，ｍ、ＣＨ２Ｃｏ）、５．０５
（２Ｈ，ｓ。

ＣＨ２Ａｒ、）　７．２５−７．２８（５Ｈ，ｍ、　Ａ
ｒ　−Ｈ）　。

１０．９１（ＩＨ，ｓ、Ｃｏ□Ｈ）。

ｍ／ｅ　（電子衝撃）：　２３６（Ｍ＋、５％）、　９
１　（ＣＨ２Ｐｈ、１００％）。

２）Ｎ−（５−（ベンジルオキシカルボニル）ペンタノ
イル）−Ｓ−ベンジル−し−システイニル）　−（Ｄ）
−バリンベンジルエステルカップリング法のための文献
二ボールドウィン等のジャーナル・オブ・ケミカル・ン
サエテイ、パーキンエ、１９８１．２２５３゜ １）の化合物（７８７■、３．３３ミリモル）をＳ−ベ
ンジル−し−システィンとカップリング（トリエチルア
ミン／イソブチルクロルギ酸エステルを使用）させて粗
製Ｎ−アシル化Ｓ−ベンジル−Ｌ−システィン（１，５
３ｇ、）１００％）を得。

精製せずにバリンベンジルエステル（１−エトキシカル
ボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキノリン）と
カップリングさせて粗製の（２）の化合物を得た。クロ
マトグラフィー〔フラッシュシリカ（酢酸エチル／ジク
ロロメタン）〕により。

２）の化合物を油状物（３０９■、５０％）として得た
。

ＴＬＣ（１０％酢酸エチル／ジクロロメタン）：ＲｆＯ
６４５゜ ’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、ＣＤ３ＣＮ）’　δ０．
８７（３Ｈ，ｄ　、Ｊ　　７　Ｈｚ、ＣＨＣＨ３）　、
０．８８（３Ｈ。

ｄ、　Ｊ　７Ｈｚ、ＣＨＣＨ３）、１．５６−１．６１
　（４Ｈ。

ｍ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ０）、２．１０−２．１７　
（３Ｈ，ｍ。

ＣＨＣＯ，ＣＨＣＨ３）、２．３３−２．３７　（２Ｈ
、ｍ　。

ＣＨ２Ｃｏ）、２．６３−２．８３（２Ｈ，ＡＢＸ系の
ＡＢ部分の８線、　ＣＨ２Ｈ２Ｓ）　、３．７５　（２
Ｈ、ｓ　。

ＳＣＨ，Ａｒ）、　４．３１−４．３６（ＩＨ，ｍ、Ｎ
Ｃ旦）。

４．５１−４．５８（ＩＨ，ｍ、ＮＣＲ）、５．０９　
（２Ｈ。

ｃａ　ｓ、　ＣＨ２Ａｒ）、５．１１　、５．１５　（
２Ｈ、ＡＢｑ。

Ｊ　＝１２　Ｈｚ、ＣＨ２Ａｒ）、　６．７０（ＩＨ，
ｄ　、ユ＝７．５Ｈｚ、ＮＨ）、７．０３（ＩＨ，ｄ、
Ｊ＝８　Ｈｚ、ＮＨ）。

７．２４−７．３７　（１５Ｈ，ｍ、Ａｒ−Ｈ）。

ｍ／ｅ　（デソープション・ケミカル・イオナイゼーシ
ョン）：　　６１８　（ＭＨ＋）。

脱保護法のための参考文献：ボールドウィン等のジャー
ナル・オブ・ケミカル・ソサエティ、パーキンＩ、１９
８１．２２５３゜ アルゴン雰囲気下、ナトリウム上で還流することにより
液体アンモニアを乾燥し、２）の化合物（２５０η、０
．４０ミリモル）の乾燥ＴＨＦ（５ｍＱ）溶液を含んで
いるフラスコに、−７８℃で蒸留した（５０〜１００ｍ
Ｑ）。次いで、生じた青色が１０分間持続するまで、−
７８℃で攪拌下のこの反応混合物に、新たに切断したナ
トｌ）ラムを少量ずつ加えた。次ぎに、青色が消失する
まで無水硫酸アンモニウムを加え、その後、アルゴン気
流下、アンモニアおよびＴＨＦを蒸発させた。残留物を
５０ミリモル硫酸水溶液（２０ｍｌりに懸濁し、溶液を
沖過した。沈殿を更に５０ミリモル水性硫酸（１０＋＋
＋４りで洗浄した。次いで沈殿が終了するまで１合した
涙液と洗液にホプキンス試薬（Ｈｏｐｋｉｎｓ’　　ｒ
ｅａｇｅｎｔ　）　（０，４０ｍｌｌ　）　　を加えた
。

遠心して沈殿を集め、水（３ｘｌＯｍｌりで洗浄した。

得られた固形物を水に懸濁し、この溶液に約４０分間硫
化水素を吹き込んだ。得られた黒色の混合物を沖過（セ
ライト）シ、水（１０ｍｇ、）で洗浄した。次いで涙液
と洗液を合し、蒸発乾固させて表題化合物（８５ｒｎ９
．６０％）を得た。

’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、　ＣＤａＯＤ　）　’δ
０．９０（３Ｈ，ｄ、　Ｊ　＝　７　Ｈｚ、　ＣＨＣ旦
３　）、０．９５（３Ｈ，ｄ。

ユ＝７　Ｈｚ、ＣＨＣＨ３）、　１．５８−１．７４　
（４Ｈ。

ｍ、Ｃ旦２ＣＨ２ＣＨ２Ｃｏ）、２．０８−２．２３　
（ＩＨ。

ｍ、ＣＨＣＨ）、２．２４−２．４０（４Ｈ，ｍ、Ｃ旦
２Ｃ〇）　、　２．７７−２．９４　（２Ｈ、ＡＢＸ系
のＡＢ部分の８線。

ＣＨＣ旦２　Ｓ　）　、４．２０　（Ｉ　Ｈ−ｄ　、Ｊ
　＝　５　Ｈｚ　、Ｃ旦ＣＨ（ＣＨ３）２）　＝　４．
４９−４．５８　（ＩＨｌｍ、　ＣＨＣＨ２Ｓ）。

ｍ／ｅ（高速原子衝撃）：　３４９（ＭＨ”）。

製造例１３６β−（５−カルボキシペンタンアミド）−
２，２−ジメチルペナム−３−カルボン酸 １）［’ＮＳのための一般インキュベーション法 基質（約３■）の水溶液をジチオトレイトール（１００
ｍＭ、　　０．１００ｍ（１）％Ｌ−アスコルビン酸（
５０ｍＭ、　　０．１００ｍＱ）　、ウシ肝臓カタラー
ゼ（１００００単位／ｍれ０．０５０ｍｅ）およびＮ　
Ｈ４ＨＣＯ３俗液（５０ｍＭ、３．５ｍＱ）　　と混合
した。ｐＨ値を調べ、必要な場合、希Ｎａ０Ｈ（Ｚｏ。

ｍＭ　）を添加して８に調節した。溶液を２７℃で５分
間振盪し、ＮＨ４ＨＣＯ３溶液（５０ｍＭ）中の、セフ
ァロスポリウム・アクレモニウムＣｏ　７２８から単離
されたインペニシリンＮシンテターゼ製品（約５１．Ｕ
、／ｍＱ、　　１ｍＱ）を加えた。このインキュベーシ
ョン混合物を２個の１０ｍＱバイヤルに入れて２７℃で
４５分間振盪し、アセトン（７ｍＱ）でタンパク質を沈
殿させることにより反応を止め、遠心して沈殿を分離し
た。アセトンを減圧留去して残留物を凍結乾燥した後、
プロトンＮＭＲ（５００ＭＨｚ）により未精製の反応生
成物を調べた。

２）上の一般法に従い、アジポイル−（Ｌ）−システイ
ニル−（Ｄ）−バリンをＩＰＮＳ　と−緒にインキュベ
ートした。

未精製インキュベーション混合物のＨＰＬＣによって単
離された化合物： （２Ｓ、５Ｒ，６Ｒ）−６−（５−カルボキシペンタン
アミド）−３，３−ジメチル−７−オ千ソー１−アザ−
４−チアビシクロ［３，２，Ｏ，］へ］ブタンー２−カ
ルボン 酸ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、Ｄ２０　）　’δ１．３
５−Ｌ　５５　（４Ｈ−ｍ　、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＯ
）　、１−３６　（３Ｈ。

ｓ、３−Ｍｅ　）、１．４８（２Ｈ，ｓ、３−Ｍｅ）、
２．０５−２．３２（４Ｈ，２ｘｍ、ＣＨ２Ｃｏ）、４
．０８（ＩＨ。

ｓ、２−Ｈ）、および５．２９．５．３９（２Ｈ，２ｘ
ｄ。

Ｊ　Ｈｚ、５−Ｈ，６−Ｈ）。

精製：逆相オクタデシルシランＨＰＬＣ（２５０Ｘ４．
６＋ｎカラム）、移動相：　５０　ｒｎ　Ｍ　ＮＨ４Ｈ
ＣＯ３（水性）、流速１ｍｆｆ／分、保持時間＝６．１
分。

生物検定：スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐ
ｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ　）　　に対して
陽性。

また、凍結乾燥したインキュベーション混合物を水（２
ｍＱ）に懸濁し、ｐＨ１に酸性化（２Ｎ　ＨＣ／）シ、
酢酸エチル（３Ｘ５ｍ（りで抽出した。次いで、エーテ
ル中の過剰量のジアゾメタンを加えた。

１０分間攪拌した後、溶液を蒸発乾固した。クロマトグ
ラフィー〔プレパラテイブ・レイヤー・クロマトグラフ
ィー（酢酸エチル／ジクロロメタン）〕により表題化合
物を油状物として得た。

ＴＬＣ（酢酸エチル／ジクロロメタン、１：１）：Ｒｆ
Ｏ，８゜ １ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、ＣＤＣｌ　ａ、）　’δ
１．５１（３Ｈ，ｓ　、（ＣＨ３）］、１．５８（３Ｈ
，ｓ、（ＣＨ３）Ｊ　。

１．６６−１．７４（４Ｈ，ｍ、Ｃ旦２ＣＨ，、ＣＨ２
Ｃｏ）　。

２．２６−２．３８（４Ｈ１ｍ、ＣＨ２Ｃ０）、３．７
９（３Ｈ。

ｓ、０ＣＨ３）、４．４４　（ＩＨｌｓ、２−Ｈ）、５
．５５（ＩＨ９Ｈｚ、６−Ｈ）、６．１４（ＩＨ，ｄ、
Ｊ＝８．５　Ｈｚ、６−Ｈ）。

ｍ／ｅ　　（デソープション・ケミカル・イオナイゼシ
ョン）：　３７３　（ＭＨ＋、、３１％）、２００（１
５Ｘ）。

１７４（１００％）。

製造例１４　６−ＡＰＡを経由する６β−（５−カルボ
キシペンタンアミド）−２，２−ジメチルペナム−３−
カルボン酸の別途製造 １）アジピン酸モノ−ｐ−ニトロベンジルエステル 臭化ヘンシルの代わりにｐ−ニトロベンジルフロミドを
使用する以外、上のモノ−ベンジルエステルの製造のた
めに使用した方法と同じ方法によって、アジピン酸から
化合物１）を製造した。粗製物質の再結晶後の収量はア
ジピン酸（２，９２ｇ。

２０．０ミリ、モル〕から０．５ｇ、９Ｘであった。

ＴＬＣ（酢酸エチル）ＲｆＯ，５゜ １ＨＮＭＲ（６０ＭＨｚ　、　ＣＤＣＩ　３　）　：δ
１．６５−２．０４　（４Ｈ、ｍ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２
Ｃｏ）、２．２６−２．７０　（４Ｈ、ｍ、ＣＨ２Ｃｏ
）　、５．２３　（２Ｈ、ｓ　、　ＣＨ２Ａｒ）、７．
５２−８゜１５　（４Ｈ，２ＸＡＢｑ、Ｊ＝９Ｈｚ。

Ａｒ−Ｈ）　、　９．８５　（ＩＨ、ｂｓ、　Ｃ０２Ｈ
）。

２）６β−（５−（４−二トロペンジルオキシカルボニ
ル）ペンタンアミド）−２，２−ジメチルペナム−４−
カルボン酸４−ニトロベンジルニス酸ｐ−ニトロベンジ
ルエステル（１７２／７１９．０．５０ミリモル）をジ
クロロメタン（１０ｍＱ）に俗解し。

１−エト牛ジカルボニルー２−エトキシ−ジヒドロキノ
リン（ＥＥＤＱ）（１２４■−０，５０ミリモル）、化
合物１）（１４０〜、０．５０ミリモル）および無水硫
酸ナトリウム（５０〜）を加えた。反応物を不活性雰囲
気下、２４時間攪拌し、その後。

蒸発乾固した。残留物を酢酸エチル（５０ｍρ）に溶解
して２Ｎ塩酸（２５ｍｆｆｉ）、重炭酸ナトリウム水溶
液（２５ｍｌりおよび食塩水（２５＋ｎＱ）で洗浄し、
乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）　して濾過し、蒸発乾固した。残
留物をクロマトグラフィー〔フラッシュシリカ（ジエチ
ルエステル／ジクロロメタン）〕に付し１表題生成物２
）を得た。

’　ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、ＣＤＣＩ　３）　：δ
１．５６（３Ｈ９ｓ、ＣＨ３）、２．１２（３Ｈ−ｓ、
ｃＨ３）　。

１．６８−１．７３　（４Ｈ、ｍ　、　ＣＨ２ＣＨ２Ｃ
Ｈ２Ｃｏ　）　。

２．２６−２．３０　（２Ｈ１ｍ　、ＣＨ２Ｃｏ）、２
．４１−２、４６　（２Ｈ９ｍ　、ＣＨ２Ｃｏ　）　、
４．４９　（Ｉ　Ｈ、ｓ　。

２−Ｈ）、５．２１（２Ｈ，ｃａ　　ｓ、ＣＨ２Ａｒ　
）、５．２８゜５．２９（２Ｈ，ＡＢｑ、　Ｊ　＝１３
　Ｈｚ、　ＣＨ２Ａｒ　）　、５．５４（ＩＨ，ｄ、Ｊ
　＝　４Ｈｚ、５−Ｈ）、５．７３　（ＩＨ、ｄｄ。

Ｊ−９，４Ｈｚ、６−Ｈ）、６．１０（１’Ｈ，ｄ　、
Ｊ　＝９Ｈｚ、６−Ｈ）、７．４９−７．５６（４Ｈ，
ｍ、Ａｒ−Ｈ）、８．２１−８．２８（４Ｈ，ｍ、Ａｒ
−Ｈ）。

ｍ／ｅ　（電子衝撃）：　　６１４（Ｍ＋）。

このジエステル生成物を以下の様にして脱エステル化し
、表題化合物を得た： テトラヒドロフラン（１５ｍＱ）に上のジエステル（１
６０■、０．１７ミリモル）を入れた溶液に。

重炭酸ナトリウム（２９〜、０．３４ミリモル）水溶液
および１０％パラジウム炭素（ｘｏｏｍｇ）を加えた。

反応混合物を１時間接触水素添加し、その後、沖過（セ
ライト）シた。ｒ液を酢酸エチル（２０ｍρ）で洗浄し
て蒸発乾固し１表題化合物を得た。

’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ　、　　Ｄ２０　）は１表題
化合物の生合成例について報告されたものと同一である
。

ｍ／ｅ　（高速原子衝撃）：　３４５（ＭＨ＋）。

製造例１５　６−ＡＰＡを経由する６β−（３−カルボ
キシフェニルアセチルアミノ）−２，２−ジメチルペナ
ム−３−カルボン酸の別途製造１）イソフタル酸モノｐ
−ニトロベンジルエステ゛ル 酢酸エチル（６５ｍＱ）にイソフタル酸（３，２２ｇ、
２８ミＩＪモル）、ｐ−ニトロベンジルプロミド（６，
０ｇ、２８ミリモル）およびトリエチルアミン（７，７
ｍｌ、　５６　ミＩＪモノリを入れた混合物を６時間加
熱還流した。これを濃縮し、化合物１）とイソフタル酸
の混合物（約１：１）（４，６ｇ、約２５Ｘ）である沈
殿を得た。この混合物を精製せずに更に変換した。

１ＨＮＭＲ（ＣＤＣＩ　ａ　、　６０　ＭＨｚ　）　：
δ５．５３（２Ｈ，Ｓ　、ＣＨ２Ｃ６Ｈ４Ｎｏ２）、７
．４２−７．８５　。

８．０８−８．０および８．４７−８．５２（８Ｈ，３
Ｘｍ。

Ａｒ−Ｈ）。

２）３−（ｐ−ニトロベンジルオキシカルボニル）フェ
ニル酢酸 ベンゼン（１６ｍＱ）に上で得た未精製のモノエステル
１）（４ｇ、’純度約５０％、約１３ミリモル）を入れ
た溶液を塩化チオニル（１６ｍＱ）で処理し、８０℃で
１．５時間加熱した。冷却後、溶媒を減圧留去し、残留
している塩化チオニルを除くためにベンゼン（１５ｍＱ
）を加えて再び減圧にした。得られた粗製酸クロリドを
ベンゼン（２０ｍＱ）に再俗解し、０℃にてジアゾメタ
ン（過剰量〕のエーテル溶液で処理し、２０分間攪拌し
た。次いで反応混合物を蒸発乾固し、ｐ−メ！・キシベ
ンジルアルコール（６ｍ（りで処理した。得られた混合
物を５０〜６０℃に温め、Ａｇ２Ｏを少量ずつ（３Ｘ０
．３ｇ）２０分かけて添加し、更に３０分間攪拌した。

反応混合物を冷却し、クロロホルム（３０ｍＱ）で希釈
して活性炭（約０．５ｇ）で処理し。

沖過（セライト）して蒸発乾固した。クロマトグラフィ
ー〔フラッシュシリカ（メタノール／ジクロロメタン）
〕により、化合物２）（０，７７ｇ、イソフタル酸から
１０％）を得た。

ＴＬＣ（メタノール／ジクロロメタン、３：９７）：Ｒ
ｆＯ，５゜ ｍ、ｐ、：　１４８−１４９℃（クロロホルムから）。

ｉ、ｒ、（ＫＢｒディスク）：　２６００−３３００（
ｂ）。

１７２８（ｓ）、１７０７（ｓ）、１６０７（ｍ）、１
５２２（ｍ）。

１４２５（ｍ）、１３７８（ｓ）、１３５１（ｍ）、１
２８４（ｍ）。

１２３１　（ｍ　）　、１１９８　（ｍ　）ｃｍ　　　
。

’ＨＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ　３）：δ３，７
４（２Ｈ，ｓ、ＡｒＣＨ２Ｃ０２）、５．４７（２Ｈ，
ｓ　。

Ｃｏ。ＣＨ２Ａｒ　）、７．４６（ＩＨ，ｔ、Ｊ＝９　
　Ｈｚ、Ａｒ一旦）、７．５１（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝９　Ｈ
ｚ、Ａｒ−Ｈ）、７．６１　（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝９Ｈｚ、
Ａｒ−Ｈ）、８．０１（ＩＨ，ｓ、Ａｒ−Ｈ）、８．０
２　（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝９　　Ｈｚ、Ａｒ−Ｈ）。

８．２６（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝９　Ｈｚ、Ａｒ−Ｈ）。

ｍ／ｅ　　（デソープション・ケミカル・イオナイゼー
ション）：３３３ＣＭ＋ＮＨ）、２８８，１９８（１０
０％）。

元素分析（Ｃ１６Ｈ１３Ｎ０６として）理論値　　６０
．９５　　４．６１　　４．４４実測値　　６０，９０
　　４．１１　　４．３１３）６β−（３−（４−ニト
ロベンジルオキシカルボニル）フェニルアセチルアミノ
）−２，２−ジメチルペナム−３−カルボン酸４−ニト
ロベンジルエステル ジクロロメタン（３ｍ（りに上で得た化合物（１４２Ｉ
Ｎｉ、０．４５ミリモル）、６−アミツペニシロ酸ｐ−
ニトロベンジルエステル・ｐ−）ルエンスルホン酸塩（
２３１，０，４５ミリモル）、トリエチルアミン（６３
μ／、０．４５　　ミリモル）および１−エトキシカル
ボニル−２−エトキシ−１゜２−ジヒドロキノリ：／　
（ＥＥＤＱ）（１１１ｍ９゜０．４５ミＩＪモル）を入
れた溶液を不活性雲囲気下、２０℃で１５時間攪拌した
。混合物を酢酸エチル（５０ｍＱ）で希釈し１重炭酸ナ
トリウム水溶液（２５ｍｆ）、食塩水（２５ｍｎ）、１
０％クエン酸溶ｉ’＆（２５ｍＱ）１食塩水（２５ｄ）
で洗浄し、乾燥（Ｎａ２Ｓ０４）して蒸発乾固した。ク
ロマトグラフィー〔フラッシュシリカ（酢酸エチル／４
ｏ〜６０石油エーテル）〕により、化合物３）（１８６
■。

６４％）を得た。

ｉ、ｒ、（Ｃ）（Ｃ１３）：　３４２０（ｍ）、３０３
０Ｃｍ）。

２９７０（ｗ）、２９３０（ｗ）、１７８５（ｓ）、１
７５０（ｓ）。

１７４０（ｓ）、１６９０（ｓ）、１６１０（ｓ）、１
５２５（ｓ）ａ−！。

’ＨＮＰｖＩＲ（３００ＭＨｚ　、ＣＤＣ１ａ　）　：
δ１．３９゜１．４９　（２Ｘ　３Ｈ９２Ｘ　ｓ　、２
ＸＣＨ３）−３，７０（２Ｈ。

ｓ、ＡｒＣ旦２ＣＯ）、４．４５（ＩＨ９ｓ、２−Ｈ）
、５．２５゜５．３０　（２Ｈ，ＡＢｑ　、　Ｊ　＝　
１３　Ｈｚ　、　ＣＨＡｒＮＯ２）　。

５，４７（２Ｈ，ｃａ　ｓ、　Ｃ旦２ＡｒＮＯ２）　、
５．５２（ＩＨ。

ｄ、Ｊ＝４　Ｈｚ、５−Ｈ）、５゜６８（ＩＨ，ｄｄ、
Ｊ＝９．４　Ｈｚ、６−Ｈ）、６．０７（ＩＨ，ｄ　、
Ｊ＝９　Ｈｚ。

ＮＨ）、７．４５−７．６３（６Ｈ，ｍ、Ａｒ−Ｈ）　
、７．９９−８．０６（２Ｈ，ｍ、Ａｒ−Ｈ）、８．２
０−８．４６（４Ｈ。

ｍ、Ａｒ−Ｈ）。

ｍ／ｅ　　（デンープション・ケミカル・イオナイゼー
ション）：　３５５　（１０％）、２９５（１２％）。

〔αＪ　　＝＋９９．９°（Ｃ＝　０．９６　、　ＣＨ
Ｃ／３）。

得られたジエステルを以下の様にして脱エステル化し１
表題化合物を得た： 炭酸水素ナトリウム（５，２η、６．２Ｘ１０−２ミリ
モル）を含有している５０Ｘテトラヒドロフラン水溶液
に上のジエステル（２０η２３．１×１０−２ミリモル
）を入れた溶液を１０％パラジウム炭素（２０■）上で
３０分間接触水素添加した。反応混合物を沖過（セライ
ト）シ、酢酸エチル（５−）で洗浄して蒸発乾固し、表
題化合物（１１＃＋９゜８４％）をニナトリウム塩とし
て得た。

’ＨＮＭＲ，ｍ／ｅおよびＨＰＬＣ保持時間は。

天然の生合成経路によって得られた化合物のものと同じ
であった。

製造例１６　デアセト午シセファロスポリンＣシンテタ
ーゼの精製：アクレモニウム・クリソゲヌム（Ａｃｒｅ
ｍｏｎｉｕｍ　Ｃｈｒｙｓｏｇｅｎｕｍ　）　（セファ
ロスポリウム・アクレモニウム）からのリング・エクス
パンダーゼ活性 １、微生物の生育 アクレモニウム・クリソゲヌム株Ｃ０７２８を化学的に
規定された培地で生育させた。ライ・ユニカム（Ｒｙｅ
　Ｕｎｉｃａｍ）　ＳＰ　６−５５０　　分光光度計を
使用し、５５０ｎｍで増殖を追跡した。菌糸体を集め、
−７０℃で貯蔵した。

２、細胞不含エキスの調製 連続流動法およびＤＴＴ（１ｍＭ）とアジ化ナトリウム
（０，０１５％）を含有しているトリス／ＨＣ／　バッ
ファー（５０ｍＭ）　、　ｐＨ７，４を使用し、ダイノ
ーミル（Ｄｙｎｏ　−Ｍｉ　ＩＩ　　）　　グラインダ
ー　（Ｇｌｅｎ　　Ｃｒｅｓｔｏｎ、　　Ｓｔａｎｍｏ
ｒｅ、　Ｍｉｄｄｘ、　、　Ｇ。

Ｂ、　）　　を用いて細胞不含エキスを調製した。

３、酵素の精製 （ａｌ初期工程 全工程を４℃で行なった。細胞不合エキスに硫酸プロタ
ミンを０．５％の終濃度まで加えた。

１２０００　ｇで３０分間遠心した後、上清に硫酸アン
モニウムを５５Ｘの終濃度まで加えた。平衡化して遠心
（１２０００ｇ、３０分間）した後、上清を硫酸アンモ
ニウム中７５％ニＬ、１２０００ｇで３０分間遠心する
ことによって沈殿を集めた。

この物質を抽出バッファーに再浴解し、セファデックス
Ｇ−７５ゲル濾過カラム（１３０Ｘ５α）にローディン
グし、抽出バッファーで平衡化した。

４℃で一夜溶離した後、フラクションをエクスパンダー
ゼ活性について生物検定により試験した。

活性フラクションを集めてＤＥＡＥ−セファロース・フ
ァースト・フロー（Ｆａｓｔ　Ｆｌｏｗ　）のカラム（
１０Ｘ５ｃｍ）に付しく流速＝２４ｒｎＱ１時）。

４℃にて抽出バッファーでプレ平衡化した。酵素活性部
を０．０５〜ＩＭＮａＣｌの直線グラジェント、５００
ｍＱ以上を用いて２４ｍＱ／時の流速で溶出した。生物
検定によって試験した活性なフラクションを集め、この
物質を初期研究のために使用した。

ｆｂ）染色リガンド、イオン交換ＦＰＬＣおよびゲル沖
過ＦＰＬＣクロマトグラフィー はぼ均質に精製するために、セファデックスＧ−７５カ
ラムクロマトグラフイー後に集めた活性フラクションを
アガロース（Ｐｖｌａｔｒｅｘ　Ｇｅｌ　Ｒｅｄ　Ａ　
。

Ａｍ１ｃｏｎ　Ｃｏｒｐ、　、　Ｍａｓｓ　、　、　Ｕ
、　Ｓ、　Ａ、　）に結合しているプロジオン・レッド
（Ｐｒｏｃｉｏｎ　Ｒｅｄ　）ＨＥ３Ｂのカラム（３０
Ｘ２．５ｃｍ）に付した（流速＝１０ｍ（！／時）。予
備実験において、プロジオン・レッド（０，１ｍＭ）は
エクスパンダーゼ活性を完全に阻害することがわかった
。３５０ｎ＋（！の抽出バッファーを用いて２４ｍＱ／
４の流速でカラムを洗浄し、Ｏ〜１．５ＭＫＣｌの直線
グラジェント。

５００ｍＱ以上を用いて、同じ流速で酵素を溶離した。

活性フラクションを集め、ＦＰＬＣ用モノ（Ｍｏｎｏ　
）　Ｑ　１６／１０強陰イオン交換カラム（ファルマシ
ア社製）にかけた（流速−８ｍＱ１分）。この酵素を、
ＤＴＴ（２ｍＭ）を含有しているトリスＨＣＩ　バッフ
ァー（２０ｍＭ）、ｐＨ８，０中の８０〜４００ｍＭ　
ＮａＣ１の直線グラジェントを用い、同じ流速で溶出し
た。活性フラクションを集めて濃縮し、スペロース（５
ｕｐｅｒｏｓｅ　）　　１２ＦＰＬＣゲル濾過カラムに
付した（流速＝０．２５ｍＱ、／分）。この酵素を、Ｄ
ＴＴ（２ｍＭ）を含有しているトリス／ＨＣＩ　　バッ
ファー（０，１Ｍ）、ｐＨ８，０で溶出した。活性フラ
クションを集めて濃縮し、変換の実験に使用した。

実施例　エクスパンダーゼ−基質のインキュベーション
のための一般法 精製後、エクスパンダーゼを５０ミリモル、ｐＨ７，４
，７ｒｉｓ−ＨＣｌバッファー中懸濁欣（約０．５〜Ｉ
　Ｉ　、　Ｕ、　／ｍＱ　）として得た。基質０．２　
ｍＬ！のインキュベーションのために以下の方法を使用
した。水（３ｍｌり中に硫酸第１鉄（０，４２Ｉｎ９．
　１．５　Ｘ　１０−３ミリモル）きＬ−アスコルビン
酸（４，３■、２．４×１０−２ミリモル）を含有して
いる溶液をα−ケトグルタル酸塩（５，３η）に加えた
。次ぎにこの混合物のｐＨを水酸化ナトリウム水浴液（
１００ミリモル）でｐＨ７，６に調節した。次いで５０
ミリモルトリスーＨＣｌ　にエクスパンダーゼ酵素を入
れた溶液（１，６５ｍ１２．約Ｉ　１．Ｕ、　）にコフ
ァクター溶液（０，２５モル）を加え、この混合物を２
７Ｏｒｐｍにて２７℃で５分間ブレインキュベートした
。次に水０．１　ｍＲ中の基質を加え、混合物を２時間
インキュベートした。タンパク質の除去および後処理は
、ＩＰＮＳ酵素を使用するインキュベーションのための
方法と同じ方法を行なった。

実施例１７β−（５−カルボキシペンタンアミド）−３
−メチル−３−セフェム−４−カルボ７酸 上の一般法に従い、製造例１３の記載の様にして得た６
β−（５−カルボキシペンタンアミド）−２，２−ジメ
チルペナム−３−カルボン酸をエクスパンダーゼと一緒
にインキュベートした。不純なインキュベーション混合
物をＨＰＬＣすることにより、化合物を単離した。

’ＨＮＭＲ（Ｄ２０　、５００　ＭＨｚ　）　：δ１．
４６−１．５３　（４Ｈ，ｍ、　ＣＨ２ＣＨ，ＣＨ２Ｃ
Ｈ２）、　１．７９　（３Ｈ，ｓ、Ｍｅ　）、　２．０
９−２．１０　、２．２２−２．３０（４Ｈ，２Ｘｍ、
ＣＨ２Ｃ０）、３．１２．３．４７　（２Ｈ。

ＡＢｑ、Ｊ　＝　１３．４−Ｈ）、５．９６，５．４４
（２Ｈ。

ＡＢｑ、Ｊ＝４．５．６−８．７−Ｈ）。

精製：　ＨＰＬＣの詳細は、保持時間が６．８分である
以外製造例１３の記載と同じである。

以下の方法を使用し、生成物を変換した：ＨＰＬＣによ
って得た生成物のサンプルを２ＮＨＣＩ　（２ｍ１２）
　　に溶解し、酢酸エチル（２×１０ｍ１２）で抽出し
た。次いで有機層を約５ｍＱに濃縮した。

攪拌下の溶液にエーテル中過剰量のジアゾメタノを加え
た。１０分間攪拌した後、溶液を蒸発乾固し、粗製ジエ
ステルを得た。

’ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ　、ＣＨＣｌ　３）　：δ１
．４３−１．７１（４Ｈ，ｍ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ
２）、１．７０（３Ｈ，ｓ、ＣＭｅ　）２．２９−２．
３５（４Ｈ，ｍ、２　ｘＣＨ２Ｃｏ　）、　３．２４　
、３．５０　（２Ｈ、ＡＢｑ　、　Ｊ　＝１８Ｈｚ、４
−Ｈ）、３．６８．３．８５（６Ｈ，２ｘｓ、２ｘＯＭ
ｅ　）、４．９８（ＩＨ，ｄ、Ｊ　＝４．５　Ｈｚ、６
−Ｈ）。

５．７９（ＬＨ，ｄｄ、Ｊ＝４．５　Ｈｚ、８．５．７
−Ｈ）。

６．１８（ＩＨ，ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、ＮＨ）。

ｍ／ｅ　（ＮＨ３、デソープション・ケミカル・イオナ
イゼーション）：　　３８８　（３２，Ｍ十ＮＨ４＋）
、３７１（３４，Ｍ＋＋１）。

実施例２７β−（３−カルボキシフェニルアセチルアミ
ノ）−３−メチル−３−セフェム−４−カルボン酸 一般法に従い％６β−（３−カルボキシフェニルアセチ
ルアミノ）−２，２−ジメチルペナム−３−カルボン酸
をエクスパンダーゼと一緒にインキュベートした。

不純なインキュベーション混？ｑＤ　Ｐ　Ｌ　Ｃにより
単離された化合物：　（６Ｒ，７Ｒ）−１−アザ−３−
メチル−７−（ｍ−カルボキシフェニルアセチル）−８
−オキソ−５−チアビシクロ（４，２，Ｏ。

Ｊヘキサ−２−エンカルボン酸。

’ＨＮＭＲ（５００ＭＨｚ　、　Ｄ２０　）　’δ１．
７７　（３Ｈ。

２、　ＣＨ３）、　３．０６．３．３７　（２Ｈ，ＡＢ
ｑ、ユ＝１８Ｈｚ、５ＣＨ２）、３．５７．３．６３（
２Ｈ，ＡＢｑ。

Ｊ＝　１５　　Ｈｚ　、ＣＨ２Ａｒ）　、４．８９およ
び５．３９　（２Ｈ。

２　ｘｄ　、Ｊ＝４．５Ｈｚ、６−Ｈ，７−Ｈ）、７．
３１−７．４３（２Ｈ，ｍ、Ａｒ−Ｈ）、７．７４−７
．７７（２Ｈ。

ｍ、Ａｒ−Ｈ）。

ｍ／ｅ　（高速原子衝撃）：　３９９　（Ｍ　＋Ｎａ）
精製：　ＨＰＬＣの詳細は、移動相が２％ＣＨ３ＣＮ／
９８％１０　ｒｎ　Ｍ　Ｎ　Ｈ，４ＨＣＯ３であり保持
時間が８．５分であること以外、製造例１３の記載と同
じである。

Ｍ許出１ｉ人　ザ・チャンセラー・マヌターズ・アンド
・スカラーズ・オブ・ザ・ユニバーシティ・オプ・オッ
クスフォード

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒは３−カルボキシフェニルアセチルまたはア
   ジポイルであり、Ｒ＾１はＣ＿１−Ｃ＿３アルキル、Ｃ
   ＿１−Ｃ＿３アルコキシ、Ｃ＿２−Ｃ＿４アルケニルま
   たはアレニルである〕 で表わされる化合物の製造方法であつて、 式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、ＲおよびＲ＾１は上記と同意義を有する〕で表
   わされる２β−メチル−２α−置換ペナム−３−カルボ
   ン酸とデアセトキシセフアロスポリンＣシンテターゼを
   、酸素、第１鉄イオン、アスコルベートおよびα−ケト
   グルタレートの存在下、水性媒質中、約２０℃〜約４０
   ℃の温度および約６〜約９のｐＨで接触させることから
   なる方法。 ２、Ｒが３−カルボキシフェニルアセチルである第１項
   に記載の方法。 ３、Ｒ＾１がＣ＿１−Ｃ＿３アルキル、Ｃ＿１−Ｃ＿３
   アルコキシ、ビニルまたはアレニルである第１項に記載
   の方法。 ４、Ｒ＾１がメチルである第２項に記載の方法。 ５、式： ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ＾３は水素またはカルボキシ保護基である］ で示される化合物。 ６、Ｒ＾３が水素、ｔ−ブチル、ジフェニルメチルまた
   は４−メトキシベンジルである第５項に記載の化合物。