JPS63102667A - 培養装置 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、中空糸膜表面に細胞を付着させて培養する新
規な培養装置に関する。

（従来の技術） ハウジングの内部に装填した中空糸膜表面に細胞を付着
させて細胞を培養する培養器具は従来から使用されてい
る。

この培養器具を用いて細胞の培養を行なう培養装置７０
の一例を第３図に示す。

図中６１は、中空糸膜６２を装填した培養容器で、６３
は培地導入口、６４は培地導出口６５は細胞導入口、６
６は細胞導出口である。

細胞導入口６５よりピペット等で細胞を培養容器６１中
に導入し、中空糸膜６２表面に付着させた後、培地供給
容器７３中の培地をポンプ６７を駆動させて培地導入回
路６８から培養容器６１中に導入し、中空糸膜６２表面
にあらかじめ付着させた細胞と充分に接触させ培地導出
回路６９を経て、培地供給容器７３中に回収する。

以上のように培地をリサイクルさせて中空糸＋１Ｑ６２
表面に付着した細胞と幾度も接触を繰り返しながら細胞
を増殖させる。途中で培地は新鮮なものと交換される。

培養終了後、細胞導入口６５と細胞導出口６６にそれぞ
れ洗浄液の導入ライン７１と導出ライン７２を接続し、
洗浄液供給容器７０中の洗浄液を導入ライン７１、細胞
導入口６５から培養容器６１中に導入して、中空糸膜６
２表面に付着している細胞と接触させて細胞を洗浄、剥
離して細胞導出口６６、回収ライン７２を経て洗浄液供
給容品７０中に回収して使用に供するものである。

（発明が解決しようとする問題点） しかしながら、これらの培養装置では、増殖した細胞を
一度に回収するため増殖の進んだ細胞と増殖の不完全な
細胞が共存し実際の利用に際しては、さらに増殖の程度
に応じて分画する必要があった。この分画操作はその操
作毎に試験管に移してその後、遠心分＃機にかけて行な
うためその都度大気と接触する機会が多くなり、細胞中
に雑菌等が混入したりしてせっかく増殖した細胞を無駄
にしてしまうことがしばしばあった。

また細胞を直接、細胞導入口からシリンジ、ピペット等
で導入するために導入中に細胞が外気と接っする機会が
多くなり、前述した如く雑菌、ゴミ等が細胞に付着した
りすると細胞の増殖が阻害される原因となっていた。

さらに培地容器は、ガラス製容器、金属性タンク等で形
成されているので取扱いが不便で培地の交換作業は容器
の蓋の開閉、回路の接続交換等を実施しなければならな
いので面倒であった。

（問題点を解決するための手段） そこで、本発明は以上の問題点を解決するために、中空
糸膜を装填した培養容器に、コネクターを介して、細胞
供給バッグ、培地供給バッグ、細胞の分離バッグを一体
に接続して形成した培養装置を提供するものである。

（作用） 培養容器にコネクターを介して細胞供給バッグ、培地供
給バッグ、細胞の分離バッグを一体に接続した後、細胞
供給容器から細胞を培養容器中に導入し中空糸膜表面に
付着させる。

培地供給バッグより培地を培養容器中に導入し中空糸膜
表面に付着した細胞と接触させる。

適宜培地供給バッグを交換し新鮮な培地を供給して細胞
を培養させる。

培養終了後、培地供給バッグを洗浄液供給バッグと交換
し洗浄液を培養容器中に導入して増殖した細胞を洗浄剥
離し、細胞の分離バッグに採集し、遠心分離処理を施し
て所望の成分に分画する。

（実施例） 第１図は、本発明の培養袋２ｉ１を示す概略図である。

図中、２は培養容器で、ハウジング３の外円周に、細胞
導入口４と細胞導出口５が形成され、両端には培地の導
入口６を有するキャップ７と導出口８を有するキャップ
９が取付られている。ハウジング３の内部には、再生セ
ルロースからなる中空糸膜１０が装填されている。

１１は、培養細胞を収納した細胞供給バッグで、先端に
コネクター１２を装着した細胞導入チューブ１３が形成
されている。

１４は、培養終了後の細胞を回収するための細胞導出チ
ューブで、さらにその延長線上に接続管１５ａ、１５ｂ
を介して親バツグ１６ａ、１６ｂと子バッグ１７ａ、１
７ｂを対に形成してなる細胞分離バッグ２６．２７が形
成されている。

２８は細胞回収バッグである。

細胞導出チューブ１４の先端には、コネクター１８が取
付られており、該チューブ１４の途中には、サンプリン
グ部材１９が取付られている。

細胞供給バッグ１１は、コネクター１２を介して培養容
器２の細胞導入「１４と接続され、細胞導出チューブ１
４は、コネクター１８を介して培養容器２の細胞の導出
口５と接続されている。

コネクター２４．２５を介して培養容器の培地導入口６
には、培地導入チューブ２０、培地導出口８には培地導
出チューブ２１が取付られた培地供給バッグ２２と接続
される。

２３は送液ポンプを示す。

細胞供給バッグ１１、培地供給バッグ２２、細胞の分離
バッグ２６．２７、回収バッグ２８は例えば、ポリ塩化
ビニル、エチレン−酢酸ビニル等の可とう性の合成樹脂
より成る２枚のシ−トを重ね合せて袋状に形成したもの
である。

細胞供給バッグ１１中には、マウス繊維細胞（Ｌ−９２
９）の１０％牛脂仔血清加のＭＥＭ（Ｅ）（最小必須培
地）溶液が収納されている。ｔ＋Ｘｉ１！ｌ！供給バッ
グ２２中には、１０％牛脂仔血清加のＭＥＭ　（Ｅ）（
最小必須培地）溶液が収納されている。

次に本発明の培養装置ｌの使用方法について説明する。

細胞導入チューブ１３、細胞導出チューブ１４、培地導
入チューブ２０、培地導出チューブ２１の途中には、ジ
ュラクランプ３１．３２．３３．３４．３５．３６．３
７が付設されている。

クランプ３３．３４．３５．３６を閉にして培地導入口
６と培地導出口８を閉、クランプ３１．３２．３７を開
いて細胞導入口４と細胞導出口５を開にして、細胞収納
容器ｌｌ中の細胞を培地溶液と共に、ハウジング３内に
導入し、中空糸膜１０表面に付着させる。

付着しきれなかった細胞は、細胞導出口５、細胞導出チ
ューブ１４を経て回収バッグ２８中へ回収される。

次に、クランプ３１．３２を閉じて細胞導入口４と導出
口５を閉、クランプ３３．３４を開いて、培地導入口６
と導出口８を開にして、送液ポンプ２３を駆動させる。

培地は、培地供給バッグ２２から培地導入チューブ２０
、培地導入口６を経てノ＼ウジング３内に導入され中空
糸膜１０の内部を通過しつつ、中空糸膜１０の表面に付
着した細胞と接触しながら培地導出口８、細胞導出チュ
ーブ２１を経て培地供給バッグ２２中に回収され再び培
地導入チューブ２０を経て中空糸膜１０中へ導入されリ
サイクルして使用される。

培地供給バッグ２２中の培地は、適宜新鮮な培地と交換
される。

以上のようにして、所定温度で所定期間培養を行なった
後、細胞導入口４に洗浄液の入った洗浄液バッグ（図示
せず、前述の細胞収納バッグ１１と同じ構成）をコネク
ターを介して接続し、クランプ３３．３４．３６を閉じ
て培地導入口６．８を閉、クランプ３１．３２を開し〜
て細胞導入口４、細胞導出口５を開にして、洗浄液を細
胞導出口４から導入して、該洗浄液により中空糸膜１０
表面に付着している１ｆＩＢ胞を洗い落し細胞導出口５
から細胞導出チューブ１４を経て親バツグ１６ａ中へ細
胞と洗浄液を回収する。

途中で、サンプリング部材１９より洗浄液を抜き出し細
胞の濃度を血球計数板等で測定し、細胞の増殖程度を調
べること１ドもできる。

分離バッグ２６．２７をＡの箇所でウェルダーにより切
断し、親バツグ１６ａ中の培養終了後の細胞を分画する
ために遠心分離処理を行ない、Ａ層とＢｆｉの二層に分
離する。

上澄のＡ層を子バツグ１７ａ中に移行してＡ層とＢ層を
分離する。

さらに親バツグ１６ａ中のＢ層を細分するために、子バ
ッグ１７ａｔ−Ｂの箇所でウエルダ−して切断し、親バ
ッグ１６ａ、１６ｂ、子バツグ１７ｂを遠心処理して０
層とＤ層に分離する。

さらに０層を分画するために０層を細胞導出チューブを
介して子バツグ１６ｂ中へ移行させて前述と同様の方法
で遠心分離処理を行ないＥ層とＦ層に分離する。

以上説明したように本発明では、培養終了後の細胞を最
低６つの各成分に分画することができる。さらに正確な
分画を実施したい場合は、分離バッグ２６．２７の数を
増やせばよい。

本発明では、培養容器２の代わりに第２図に示すように
、外円周に細胞の導出口４１と導入口４２を形成し、端
部に培地の導出口４３と導入口４４を宥するキャー２プ
４５．４６を取付たハウジング４７を有し、該ハウジン
グ４７の内部に多数の孔４８を形成した中空状のコア４
９を設置し、その円周面の中空糸膜５０を装填してなる
培養容器４０を使用してもよい、５１は洗浄液の導入口
、５２は洗浄液の導出口である。

また中空糸膜１０．５０の材質としては、再生セルロー
スの他にジエチルアミノセルロース（商品名、ＨＥＭＯ
ＰＨＡす、ポリアクリロニトリル、ポリメチルメタクリ
レート等の材質も使用できる。

特に、ジエチルアミノエチルセルロースは、昭和６１年
８月２９日付の特許出願で述べたように、中空糸膜への
細胞付着効率が良いために単位面績りりの細胞の増殖数
を確保でき、本発明においても有効に使用できる。

（発明の効果） 以」−説明したように本発明では、 （１）培養した細胞を無菌的に分画処理でき、利用目的
に合致した培養細胞を採取できる。

（２）分画処理を無菌的に実施できるので、汚染される
危険性がなく純度の高い培養細胞を採取できる。

（３）細胞供給バッグ、培地供給バッグ、細胞の分離バ
ッグは、培養容器にコネクターを介してワンタッチで、
着脱、交換できるので取付や交換の操作が簡単に実施で
きる。

（４）細胞供給バッグ、細胞の分離バッグは可とう性の
プラスチックバッグで形成されているので、細胞の供給
、回収分離、分画処理は細胞を傷つけることなくなめら
かに実施できる。

等の優れた効果を有する。

【図面の簡単な説明】

第１図は本発明の培養装置の概略図、第２図は本発明の
培養装置に使用されるその他の培養容器、第３図は、従
来の培養装置を示す培養装置の概略図を示す。 図中、ｌは培養装置、２．４０は培養容器、３．４７は
ハウジング、４．４２は細胞導入口、５．４１は細胞導
出口、６．４４は培地の導入口、７．９．４５．４６は
キャップ、８．４３は培地の導出口、１０．５０は中空
糸膜、１１は細胞供給バッグ、１２．１８．２４．２５
はコネクター、１３は細胞導入チューブ、１４は細胞導
出チューブ、１５は接続管、１６ａ、１６ｂは親バツグ
、１７ａ、１７ｂは子バツグ、２０は培地導入チューブ
、２１は培地導出チューブ、２２は培地供給バッグ、２
３は送液ポンプ、２６．２７は分離バー２グ、２８は細
胞回収バッグ、３１〜３７はジュラクランプ、４８は孔
、４９はコア、５１は洗浄液の導入口、５２は洗浄液の
導出口を示す。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ハウジングの内部に中空糸膜を有する培養容器にコネク
   ターを介して細胞供給バッグ、培地供給バッグ、細胞の
   分離バッグを一体に形成したことを特徴とする培養装置
   。