JPS6274279A - 微生物発酵工程中の泡止剤の除去方法 - Google Patents
微生物発酵工程中の泡止剤の除去方法Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
酵素の微生物的産生中の共通の問題は発泡であるために
、泡止剤が度々用いられる。これらの泡止剤並びに他の
望ましくない成分、例えば炭水化物及び顔料が酵素処理
中存続し、限外濾過膜を詰まらせる。本発明は酵素を含
有する全体の発酵液体培地（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｂｒｏｔｈ）または酵素溶液から、これに鉱物質粘土
の添加によって、泡止剤並びＫまた度々炭水化物及び顔
料の除去を意図するものである。
、泡止剤が度々用いられる。これらの泡止剤並びに他の
望ましくない成分、例えば炭水化物及び顔料が酵素処理
中存続し、限外濾過膜を詰まらせる。本発明は酵素を含
有する全体の発酵液体培地（ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ
ｂｒｏｔｈ）または酵素溶液から、これに鉱物質粘土
の添加によって、泡止剤並びＫまた度々炭水化物及び顔
料の除去を意図するものである。
泡、本例においては発泡した液体は連続液体相における
不連続相として空気または他のガスの分散体である。通
常、空気またはガスが泡の大きな容積をつくるために、
泡沫は薄い液体フィルム企てよってのみ分離される。不
必要な液体油は機械的または化学的原因による多くの非
常に小さい泡からなり、この泡は液体内に発生し、これ
らが衰えるよりも早く液体表面にたまる。泡の形成は酵
素を産生するために微生物を培養しているときに問題と
なりうる。適当に調節しない場合、泡が装置の容積を減
じ、処理時間及び費用を増加させ、他の障害、例えば生
物触媒活性の損失の原因となり得る。これらの理由のた
めに、泡止剤は、必要ではあるが、下流処理工種または
目的生成物中に存在する場合、度々望ましくないか、ま
たは有害である。
不連続相として空気または他のガスの分散体である。通
常、空気またはガスが泡の大きな容積をつくるために、
泡沫は薄い液体フィルム企てよってのみ分離される。不
必要な液体油は機械的または化学的原因による多くの非
常に小さい泡からなり、この泡は液体内に発生し、これ
らが衰えるよりも早く液体表面にたまる。泡の形成は酵
素を産生するために微生物を培養しているときに問題と
なりうる。適当に調節しない場合、泡が装置の容積を減
じ、処理時間及び費用を増加させ、他の障害、例えば生
物触媒活性の損失の原因となり得る。これらの理由のた
めに、泡止剤は、必要ではあるが、下流処理工種または
目的生成物中に存在する場合、度々望ましくないか、ま
たは有害である。
泡止剤を製造するのに利用できる種々な方法がある。例
えば［泡及びエマルジョン調節剤並びに処理Ｊ （”Ｆ
ｏａｍ ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｏｎ ＣｏｎｔｒｏｌＡ
ｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ″）、コルバ
ート（ｃｏｌｂｅｒｔ、 Ｊ、 Ｃ，） 、／ イｘ−
ｘ ・データ・コーポレイショ７ （Ｎｏｙｅｓ Ｄａ
ｔａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＵＳＡ、（１９８１
，）参照。インペリアル・ケミカル・インダストリース
・リミテッド（ＩｍｐｅｒｉａｌＣｈｅｍｉｃａｌ
Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｉｍ１ｔｅｄ、Ｅｎｇｌａｎ
ｄ）に委託されたジエイ・ビー・プラム（Ｊ、 Ｂ、
Ｐｌｕｍｂ）により１９７５竿２月１１日付り米国特許
第３３８６５．８５９号に記載された方法においては、
シリコーンベース重合体はオルガノクロロシランまたは
アルコキシシランをアルキレンまたはオキシアルキレン
ジーオルと反応させることＫよって製造される。これら
の重合体及び多くの他のシリコーンベース重合体は表面
活性剤として、殊に水性系における泡形成の抑制に対し
て極めて有用である。
えば［泡及びエマルジョン調節剤並びに処理Ｊ （”Ｆ
ｏａｍ ａｎｄ Ｅｍｕｌｓｉｏｎ ＣｏｎｔｒｏｌＡ
ｇｅｎｔｓ ａｎｄ Ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ″）、コルバ
ート（ｃｏｌｂｅｒｔ、 Ｊ、 Ｃ，） 、／ イｘ−
ｘ ・データ・コーポレイショ７ （Ｎｏｙｅｓ Ｄａ
ｔａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、ＵＳＡ、（１９８１
，）参照。インペリアル・ケミカル・インダストリース
・リミテッド（ＩｍｐｅｒｉａｌＣｈｅｍｉｃａｌ
Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ Ｌｉｍ１ｔｅｄ、Ｅｎｇｌａｎ
ｄ）に委託されたジエイ・ビー・プラム（Ｊ、 Ｂ、
Ｐｌｕｍｂ）により１９７５竿２月１１日付り米国特許
第３３８６５．８５９号に記載された方法においては、
シリコーンベース重合体はオルガノクロロシランまたは
アルコキシシランをアルキレンまたはオキシアルキレン
ジーオルと反応させることＫよって製造される。これら
の重合体及び多くの他のシリコーンベース重合体は表面
活性剤として、殊に水性系における泡形成の抑制に対し
て極めて有用である。
本発明は殊に酵素の工業的生産における泡形成を抑制す
るための泡止め剤の広範囲の用途に関する。酵素は生活
している生物に自然に起こる多くの化学反応を調節する
生物触媒として作用するために、単離した場合、酵素は
例えば皮なめし、洗剤及び食品工業において多くの用途
を有する。典型的な工業生産には塩、炭素源、窒素源及
び泡止剤を含む適当な培養媒質中で酵素産生微生物を培
養することが含まれる。バイオマス（ｂｉｏｍａｓｓ）
を分離した後、発泡剤が酵素を含む溶液と共に残り、こ
れを限外濾過膜面に当てた際に粘着層を形成し、濾過を
著しく遅くする。
るための泡止め剤の広範囲の用途に関する。酵素は生活
している生物に自然に起こる多くの化学反応を調節する
生物触媒として作用するために、単離した場合、酵素は
例えば皮なめし、洗剤及び食品工業において多くの用途
を有する。典型的な工業生産には塩、炭素源、窒素源及
び泡止剤を含む適当な培養媒質中で酵素産生微生物を培
養することが含まれる。バイオマス（ｂｉｏｍａｓｓ）
を分離した後、発泡剤が酵素を含む溶液と共に残り、こ
れを限外濾過膜面に当てた際に粘着層を形成し、濾過を
著しく遅くする。
一般に泡止剤は加温すると沈殿を生ずる傾向があること
がよく知られている。かくして、普通の酵素処理には、
度々限外濾過前に加熱工程を用いての泡止剤の除去が含
まれる。例えば全体の酵素溶液の温度を６０℃に数分間
上昇させるか、或いは同様の効果を与えるために、酵素
溶液を加熱されたコイル上に通す。加熱に続いて濾過し
て、沈殿した泡止剤を除去する。この工程はエネルギー
使用の見地から不経済であるのみならず、また熱−不安
定な酵素に対して適当でない。熱処理が適当でないか、
或いは加熱する容積が著しく減少した際に、処理の後の
段階まで熱処理が遂行されない場合の処理状況において
は、酵素溶液を冷却下に保持して泡止剤を溶液中にとど
め、そして限外濾過膜に通す。しかしながら、この工程
に典型的に用いられる中空繊維膜系において起こる大き
な摩擦が通常泡止剤の沈殿を生じさせるために十分な熱
を発生させ、結果としてヂ過膜を詰まらせる。
がよく知られている。かくして、普通の酵素処理には、
度々限外濾過前に加熱工程を用いての泡止剤の除去が含
まれる。例えば全体の酵素溶液の温度を６０℃に数分間
上昇させるか、或いは同様の効果を与えるために、酵素
溶液を加熱されたコイル上に通す。加熱に続いて濾過し
て、沈殿した泡止剤を除去する。この工程はエネルギー
使用の見地から不経済であるのみならず、また熱−不安
定な酵素に対して適当でない。熱処理が適当でないか、
或いは加熱する容積が著しく減少した際に、処理の後の
段階まで熱処理が遂行されない場合の処理状況において
は、酵素溶液を冷却下に保持して泡止剤を溶液中にとど
め、そして限外濾過膜に通す。しかしながら、この工程
に典型的に用いられる中空繊維膜系において起こる大き
な摩擦が通常泡止剤の沈殿を生じさせるために十分な熱
を発生させ、結果としてヂ過膜を詰まらせる。
本発明の目的は酵素含有系から泡止剤全除去することで
ある。更に詳細には、本発明は鉱物質粘土、例えばベン
トナイトを酵素全体液体培地または溶液に添加し、泡止
剤並びに度々炭水化物及び／または顔料を除去すること
を含む簡単且つ経済的な方法を提供する。
ある。更に詳細には、本発明は鉱物質粘土、例えばベン
トナイトを酵素全体液体培地または溶液に添加し、泡止
剤並びに度々炭水化物及び／または顔料を除去すること
を含む簡単且つ経済的な方法を提供する。
本発明は発酵液体培地に多陽イオン性泡止剤を加えた酵
素を含む発酵液体培地を準備し、酵素産生微生物の適当
な栄養増殖媒質中で培養することによる酵素を産生ずる
改善された方法を提供する。
素を含む発酵液体培地を準備し、酵素産生微生物の適当
な栄養増殖媒質中で培養することによる酵素を産生ずる
改善された方法を提供する。
該改善はε）発酵液体培地に鉱物質粘土を加えて、粘土
及び酵素間の反応生成物を生成させずに固体粘土／泡正
剤複合体分生成させ、一方、酵素を溶液中にとどめるｐ
Ｈ条件下で泡止剤との複合体を生成させ：そしてｂ）固
／′液分離技術によって発酵液体培地から粘土／泡止剤
複合体を分離することからなる。寸た本発明は、発酵液
体培地に多陽イオン性泡止剤を加えた酵素を含む発酵液
体培地を準備し、酵素産生微生物の適当な栄養増殖媒質
中で培養することＫよる酵素を産生する方法との組合せ
において、ａ）発酵液体培地に鉱物質粘土を加えて、固
体粘土／泡止剤複合体及び不溶性酵素／粘土反応生成物
の双方を生ずるような粘土及び酵素間の反応生成物の生
成をもたらすｐＨ条件下で、泡止剤との複合体を生成さ
せ：ｂ）ｐｉ（ｒ直を、酵素及び粘土が反応生成物を生
じ、これによって酵素が溶液中に移行する範囲外に調節
し；そしてＣ）固／液分離技術によって発酵液体培地か
ら粘土／泡止剤複合体を分離することからなる改善を提
供する。また該方法を、全体の発酵液体培地からバイオ
マスの除去後ＫＸ細胞を含まぬ戸液または上澄液に用い
ることもできる。
及び酵素間の反応生成物を生成させずに固体粘土／泡正
剤複合体分生成させ、一方、酵素を溶液中にとどめるｐ
Ｈ条件下で泡止剤との複合体を生成させ：そしてｂ）固
／′液分離技術によって発酵液体培地から粘土／泡止剤
複合体を分離することからなる。寸た本発明は、発酵液
体培地に多陽イオン性泡止剤を加えた酵素を含む発酵液
体培地を準備し、酵素産生微生物の適当な栄養増殖媒質
中で培養することＫよる酵素を産生する方法との組合せ
において、ａ）発酵液体培地に鉱物質粘土を加えて、固
体粘土／泡止剤複合体及び不溶性酵素／粘土反応生成物
の双方を生ずるような粘土及び酵素間の反応生成物の生
成をもたらすｐＨ条件下で、泡止剤との複合体を生成さ
せ：ｂ）ｐｉ（ｒ直を、酵素及び粘土が反応生成物を生
じ、これによって酵素が溶液中に移行する範囲外に調節
し；そしてＣ）固／液分離技術によって発酵液体培地か
ら粘土／泡止剤複合体を分離することからなる改善を提
供する。また該方法を、全体の発酵液体培地からバイオ
マスの除去後ＫＸ細胞を含まぬ戸液または上澄液に用い
ることもできる。
本発明は細胞内及び細胞外酵素の双方またはその混合物
に対して十分に適用される。かくして、酵素は発酵中に
分泌される細胞外タイプであることができるか、或いは
酵素はよく知られた方法、例えば高周波音による分解ま
たは洗剤を加えて細胞を崩壊させ、これによって酵素を
細胞外にすることによってｂ］浴化される細胞内タイプ
であることができる。成る種の微生物は適里な条件下で
双方の欅の酵素を産生ずる。
に対して十分に適用される。かくして、酵素は発酵中に
分泌される細胞外タイプであることができるか、或いは
酵素はよく知られた方法、例えば高周波音による分解ま
たは洗剤を加えて細胞を崩壊させ、これによって酵素を
細胞外にすることによってｂ］浴化される細胞内タイプ
であることができる。成る種の微生物は適里な条件下で
双方の欅の酵素を産生ずる。
粘土と全体の発酵液体培地に直接加えることができる。
発酵液体培地とは、発酵ｉｒＬ後に存在する全ての生成
物、例えば酵素（複数）、バイオマス及び酵素ｖ’ｌ生
工程からの残存発酵栄養累を意味する。
物、例えば酵素（複数）、バイオマス及び酵素ｖ’ｌ生
工程からの残存発酵栄養累を意味する。
粘土を加えた後、酵素を溶液中に残しながら、酵嵩産生
工程から残っている泡止削と共に粘土が複合体を生成す
る。この複合体は凝固し、反応容器の底に沈降する。か
くして、バイオマスを液体培地から分離する際、また粘
土／泡止剤複合体も除去されよう。粘土の添加後、いず
れかの固／液分離技術、例えば濾過または遠心分離、続
いてデカンテーションを用いて、発酵液体培地から複合
体を分離することができる。
工程から残っている泡止削と共に粘土が複合体を生成す
る。この複合体は凝固し、反応容器の底に沈降する。か
くして、バイオマスを液体培地から分離する際、また粘
土／泡止剤複合体も除去されよう。粘土の添加後、いず
れかの固／液分離技術、例えば濾過または遠心分離、続
いてデカンテーションを用いて、発酵液体培地から複合
体を分離することができる。
ま走水発明は個々の微粒子からなる粘土の添加前に、酵
素含有発酵液体培地からバイオマスを分ａすることを意
図する。全ての固／液分離技術、例えば濾過または遠心
分離法を用いてバイオマスを除去することができ、これ
によって１鋪胞を含１ぬ酵素含有溶液が得られる。次に
、粘土を酵素含有溶液、即ち培養Ｆ液またＬ丈上古液に
加え、粘土／泡止剤複合体を生成させ、このものを固／
液分離技術によって液体から分離することができる。
素含有発酵液体培地からバイオマスを分ａすることを意
図する。全ての固／液分離技術、例えば濾過または遠心
分離法を用いてバイオマスを除去することができ、これ
によって１鋪胞を含１ぬ酵素含有溶液が得られる。次に
、粘土を酵素含有溶液、即ち培養Ｆ液またＬ丈上古液に
加え、粘土／泡止剤複合体を生成させ、このものを固／
液分離技術によって液体から分離することができる。
他の具体例においては、バイオマスを（＋１」えば水溶
液中で再びスラリにすることができ、Ｊ亥スラリを遠心
分離または濾過してバイオマスを汁離し、次に第二の上
澄液または涙液シζ更に粘土を加えることができる。こ
の方法は、残存酵素を捕集するためにバイオマス中の細
胞を「すすぐ」ことによって、最終酵素収率を高めるで
あろう。この方法を全体の発酵液体培地を用いて行う限
りでは、粘土／残存泡止剤複合体を生成する。複合体が
凝固し、これを例えば濾過または遠心分離によって分離
することができる。これによって追加の酵素が回収され
る。
液中で再びスラリにすることができ、Ｊ亥スラリを遠心
分離または濾過してバイオマスを汁離し、次に第二の上
澄液または涙液シζ更に粘土を加えることができる。こ
の方法は、残存酵素を捕集するためにバイオマス中の細
胞を「すすぐ」ことによって、最終酵素収率を高めるで
あろう。この方法を全体の発酵液体培地を用いて行う限
りでは、粘土／残存泡止剤複合体を生成する。複合体が
凝固し、これを例えば濾過または遠心分離によって分離
することができる。これによって追加の酵素が回収され
る。
粘土を全体の発酵液体培地て加えることからなる具体例
によって、泡止剤の１０％以上をバイオマスと共に分離
し得ることが示される。一方、発酵液体培地を例えば濾
過または遠心分離によって゛まず処理し、てドイオマス
を除去または分離する場合、実質的に全ての泡止剤、即
ち、９０％またはこればトを分離することができる。従
って、細胞を含まぬ酵素含有溶液を得るため（で、発酵
液体培地と粘土の添加前（で処理することが好ましい。
によって、泡止剤の１０％以上をバイオマスと共に分離
し得ることが示される。一方、発酵液体培地を例えば濾
過または遠心分離によって゛まず処理し、てドイオマス
を除去または分離する場合、実質的に全ての泡止剤、即
ち、９０％またはこればトを分離することができる。従
って、細胞を含まぬ酵素含有溶液を得るため（で、発酵
液体培地と粘土の添加前（で処理することが好ましい。
酵素発酵には度々炭水化物原料、例えば糖または殿粉（
このものは酵素処理中に発酵液体培地の粘度を増加させ
る）及び顔料（このものンｉ９終生我物に望ましくない
色を与える）が青まれる。またこれらのものは度々粘土
とＣ複合体？生成し、かくして、固／′液分離技′＃九
よって、このものを泡ＩＥ剤と共に分離及び除去するこ
とができる。例えばアルカリ性蛋白酵素を産生ずるため
に沼株バチルス拳リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｌｉｃｈｅｎｉ−ｆｏｒｍｉ＝）を培養し７た後の炭
水化物の除去を後記の実施例１に説明する。
このものは酵素処理中に発酵液体培地の粘度を増加させ
る）及び顔料（このものンｉ９終生我物に望ましくない
色を与える）が青まれる。またこれらのものは度々粘土
とＣ複合体？生成し、かくして、固／′液分離技′＃九
よって、このものを泡ＩＥ剤と共に分離及び除去するこ
とができる。例えばアルカリ性蛋白酵素を産生ずるため
に沼株バチルス拳リケニホルミス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ
ｌｉｃｈｅｎｉ−ｆｏｒｍｉ＝）を培養し７た後の炭
水化物の除去を後記の実施例１に説明する。
粘土／泡止剤複合体の生成はｐＨ依存性でなりことに注
目すべきでちる。妙・〈シて、粘土上に固定化されるタ
イプの酵素によって本発明を実行する場合、−具体例に
おいては、粘土及び酵素間に反応生成物の生成をもたら
さぬｐＨ条件下で粘土を添加することができる。例えば
適当なｐＨ値で粘土はその間の不溶性反応生成物の生成
によって成る酵素を固定化する。かかる酵素はトランス
グルコシダーゼ（ｔｒａｎｓｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）
Ｔあり、ｐｆ（値３〜５で粘土上へのその固定化はｚ
国特許第３． Ｏ、ｓ ２．５８４号に開示されてｂる
。またベントナイトはｐＨ値４〜６で脂Ｑ７ｊ分解酵素
によって不溶性反応生成物を生成することが米国特許第
３゜８９９、３９５号に開示されている。従って、粘土
及び酵素間１ｃ反応生成物を生成せぬｐＨ条件下で粘土
を加えることができる。粘土（て固定化されるタイプの
酵素による他の具体例においては、不溶性酵素、／粘土
反応生成物の生成をもたらすｐＨ条件下で粘土を加える
ことができる。このものは粘土／泡止剤複合体と共に反
応容器の底に沈降する。
目すべきでちる。妙・〈シて、粘土上に固定化されるタ
イプの酵素によって本発明を実行する場合、−具体例に
おいては、粘土及び酵素間に反応生成物の生成をもたら
さぬｐＨ条件下で粘土を添加することができる。例えば
適当なｐＨ値で粘土はその間の不溶性反応生成物の生成
によって成る酵素を固定化する。かかる酵素はトランス
グルコシダーゼ（ｔｒａｎｓｇｌｕｃｏｓｉｄａｓｅ）
Ｔあり、ｐｆ（値３〜５で粘土上へのその固定化はｚ
国特許第３． Ｏ、ｓ ２．５８４号に開示されてｂる
。またベントナイトはｐＨ値４〜６で脂Ｑ７ｊ分解酵素
によって不溶性反応生成物を生成することが米国特許第
３゜８９９、３９５号に開示されている。従って、粘土
及び酵素間１ｃ反応生成物を生成せぬｐＨ条件下で粘土
を加えることができる。粘土（て固定化されるタイプの
酵素による他の具体例においては、不溶性酵素、／粘土
反応生成物の生成をもたらすｐＨ条件下で粘土を加える
ことができる。このものは粘土／泡止剤複合体と共に反
応容器の底に沈降する。
次にｐＨ値を、酵素及び粘土が反応生成物を生成する範
囲外に調節することができる。これにより酵素は粘土か
ら離れて、溶液中にもどる。次に固体粘土／！止剤複合
体を上記の如き固／液分離技術によって分離することが
できる。勿論、酵素（複数）が粘土とほとんどまたは全
く反応生成物を生成せぬタイプである場合、望ましくな
い程度に酵素（複数）の活性に影響を及ぼさぬようにｐ
Ｈ値を選ぶ限り、あらゆるｐＨ値で粘土を加えることが
できる。更に下記の如くして、特定の酵素またはその複
数のｐＨ感応性に従って、ｐＨ値を当咳分野に８＋通せ
る者にとっては容易に決定することができる。
囲外に調節することができる。これにより酵素は粘土か
ら離れて、溶液中にもどる。次に固体粘土／！止剤複合
体を上記の如き固／液分離技術によって分離することが
できる。勿論、酵素（複数）が粘土とほとんどまたは全
く反応生成物を生成せぬタイプである場合、望ましくな
い程度に酵素（複数）の活性に影響を及ぼさぬようにｐ
Ｈ値を選ぶ限り、あらゆるｐＨ値で粘土を加えることが
できる。更に下記の如くして、特定の酵素またはその複
数のｐＨ感応性に従って、ｐＨ値を当咳分野に８＋通せ
る者にとっては容易に決定することができる。
粘土及び泡止剤間の親和性は表面作用であると思われ、
かくして、本方法は粘土の固まり上に発酵液体培地また
は酵素含有溶液を通すことによって簡単に行うことがで
きる。しかしながら、粘土の表面積が増加するにつれて
、粘土は泡止剤を除去する際により有効となる。かくし
て、粘土は個々の微粒子からなる形態であるべきである
。望ましい具体例においては、粘土の粒径は、粘土の約
６０％〜８０％が約１４０メツシュ（１０６μｍ）乃至
２３０メツシュ（６３μｍ）範囲の米国メツシュサイズ
を有するふるいを通過するものである。
かくして、本方法は粘土の固まり上に発酵液体培地また
は酵素含有溶液を通すことによって簡単に行うことがで
きる。しかしながら、粘土の表面積が増加するにつれて
、粘土は泡止剤を除去する際により有効となる。かくし
て、粘土は個々の微粒子からなる形態であるべきである
。望ましい具体例においては、粘土の粒径は、粘土の約
６０％〜８０％が約１４０メツシュ（１０６μｍ）乃至
２３０メツシュ（６３μｍ）範囲の米国メツシュサイズ
を有するふるいを通過するものである。
最小粒径は必要でないが、実質的に全ての粒子が約２７
０メツシュ（５３μｍ）のふるいに残ることが好ましい
。
０メツシュ（５３μｍ）のふるいに残ることが好ましい
。
あらゆる鉱物質粘土を本発明に従って用いることができ
る。水和したアルミナシリケート、例えばモントモリロ
ナイト、ベントナイト、アタパルジャイト、イライト（
ｉｌｌｉｔｅ） 及びカオリンが好ましい。殊に適す
る粘土はボーク・イ■（ｖ・１・１・ｙ■）であり、こ
のものは−・−キイ（Ｓｋｏｋｉｅ 、 ｌ１ｌｉｎｏ
ｉｓ） ｃｒ）７ 、ｔリカン・コロイド・カンバニイ
（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏ１１ｏｉｄ Ｃｏｍ−ｐａｎ
ｙ）から市販の西洋ベントナイトである。その技術的説
明は次の通りである： ５ヤ、Ｖイ■ 一般的説明：高粘度スラリを必要とする場合に用いる多
産出ワイオミング・ベントナ イト−典型的にスラリ・トレンチ。
る。水和したアルミナシリケート、例えばモントモリロ
ナイト、ベントナイト、アタパルジャイト、イライト（
ｉｌｌｉｔｅ） 及びカオリンが好ましい。殊に適す
る粘土はボーク・イ■（ｖ・１・１・ｙ■）であり、こ
のものは−・−キイ（Ｓｋｏｋｉｅ 、 ｌ１ｌｉｎｏ
ｉｓ） ｃｒ）７ 、ｔリカン・コロイド・カンバニイ
（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｃｏ１１ｏｉｄ Ｃｏｍ−ｐａｎ
ｙ）から市販の西洋ベントナイトである。その技術的説
明は次の通りである： ５ヤ、Ｖイ■ 一般的説明：高粘度スラリを必要とする場合に用いる多
産出ワイオミング・ベントナ イト−典型的にスラリ・トレンチ。
外観： 軽い淡黄色粉末。
組成： 微量の石英、石こう等を有する主としてモ
ントモリロナイトからなる。
ントモリロナイトからなる。
物理特性： 水分最大１０％。細かさ、最小７０％が２
００メツシュ（７５μｍ）を 通過。１％懸濁液中ｐＨ値８〜１０゜ バルク密度６７ボンド／立方フイー ト。
００メツシュ（７５μｍ）を 通過。１％懸濁液中ｐＨ値８〜１０゜ バルク密度６７ボンド／立方フイー ト。
えよ： ｇ ＃ ｐツィ■２０００ヨｙｈ”ｔ’）
、当な粘性スラリ最大１８０バレル （４２ガロン）。
、当な粘性スラリ最大１８０バレル （４２ガロン）。
取扱い注意：特に危険なし。粉じんの吸入は鼻及び気管
の乾燥を起こさせ得る。
の乾燥を起こさせ得る。
包装： １００ボンド及び５０ボンド多重紙包
装及びばら荷。
装及びばら荷。
粘土を発酵液体培地または、細胞を含１ぬ酵素含有溶液
の容積に対して粘土的０．０１〜１０重量％、好ましく
は約０．１〜５重量％、更に好捷しくは約１５〜３重量
％の最終ｉｔＫ加えるべきである。一般；て、粘土を特
定の方法または特定の温度で加える必要はない。しかし
ながら、粘土を所望の濃度に達するまで、実質的に均一
に攪拌しながら少しづつ増清しなから徐々洸加えること
が好ましい。
の容積に対して粘土的０．０１〜１０重量％、好ましく
は約０．１〜５重量％、更に好捷しくは約１５〜３重量
％の最終ｉｔＫ加えるべきである。一般；て、粘土を特
定の方法または特定の温度で加える必要はない。しかし
ながら、粘土を所望の濃度に達するまで、実質的に均一
に攪拌しながら少しづつ増清しなから徐々洸加えること
が好ましい。
攪拌を均一分散体が得られるまで続けることが望ましい
。また、温度を好ましくは約５℃〜３５℃に保持する。
。また、温度を好ましくは約５℃〜３５℃に保持する。
一般に、約１９℃〜２８℃の温度を用いることができる
が、しかし、勿論、冷時における攪拌は、泡止剤が粘土
／泡止剤複合体を生成する前に、独力で沈殿せぬことを
確実にするための助けとして、有利である。粘土と泡止
剤並びに他の成分、例えば顔料及び炭水化物との十分な
接触を確実にするために、攪拌を３時間まで続けること
が望ましい。例えば好ましい具体例においては、粘土の
添加後、攪拌を５℃で４５分間続け、泡止剤、顔料及び
／または炭水化物を粘土と接触させる。
が、しかし、勿論、冷時における攪拌は、泡止剤が粘土
／泡止剤複合体を生成する前に、独力で沈殿せぬことを
確実にするための助けとして、有利である。粘土と泡止
剤並びに他の成分、例えば顔料及び炭水化物との十分な
接触を確実にするために、攪拌を３時間まで続けること
が望ましい。例えば好ましい具体例においては、粘土の
添加後、攪拌を５℃で４５分間続け、泡止剤、顔料及び
／または炭水化物を粘土と接触させる。
また、特定の酵素に応じて、酵素活性を保持するために
ｐＨ値を調節することができる。活性がｐＨ値によって
影響され得ることは酵素処理においてよく知られている
。調節のための試薬はよく知られており、特定の酵素に
従って選ばれる。典量的な試薬は塩基、例えばＫＯＨ及
びＮａＯＨ，並びに酸、例えば塩化水素酸及び酢酸であ
る。また、微生物の培養中に典型的に用いられるｐＨ試
薬のために、ｐＨ値がすでに十分なレベルであることも
注意する。かくして、ｐＨ値が望ましくない程度に酵素
活性に影響を与えぬように、ｐＨ値を選ぶべきである。
ｐＨ値を調節することができる。活性がｐＨ値によって
影響され得ることは酵素処理においてよく知られている
。調節のための試薬はよく知られており、特定の酵素に
従って選ばれる。典量的な試薬は塩基、例えばＫＯＨ及
びＮａＯＨ，並びに酸、例えば塩化水素酸及び酢酸であ
る。また、微生物の培養中に典型的に用いられるｐＨ試
薬のために、ｐＨ値がすでに十分なレベルであることも
注意する。かくして、ｐＨ値が望ましくない程度に酵素
活性に影響を与えぬように、ｐＨ値を選ぶべきである。
操作するｐｆ（値は含まれる特定のｐ）ｆ感応性に依存
するが、しかし、不必要な実験を行わずに、当該分野に
精通せる者によって容易に決定することができる。
するが、しかし、不必要な実験を行わずに、当該分野に
精通せる者によって容易に決定することができる。
泡止剤ヲシリコーンベース重合体エマルジョン泡正剤か
ら選ぶことができる。適当な泡止剤はガーニ−（Ｇｕｒ
ｎｅｅ 、 ｌ１ｌｉｎｏｉｓ）のメーザ−拳ケミカル
、（（Ｍａｚｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ、）に
よって供給され、＝ッ、■（ＭＡＺＵ■）泡止剤、並び
ょタンバリー（Ｄａｎｂｕｒｙ、 Ｃｏｎｎｅｃｔｔｃ
ｕｔ）ノユニオン・カーバイド（Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂ
ｉ ｄｅ ）によって供給されるサツシ■（ＳＡＧ■
）及びセ・ツリー［有］（ＳＥＮＴＲＹ＠））泡□剤ア
あ、。
ら選ぶことができる。適当な泡止剤はガーニ−（Ｇｕｒ
ｎｅｅ 、 ｌ１ｌｉｎｏｉｓ）のメーザ−拳ケミカル
、（（Ｍａｚｅｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ Ｉｎｃ、）に
よって供給され、＝ッ、■（ＭＡＺＵ■）泡止剤、並び
ょタンバリー（Ｄａｎｂｕｒｙ、 Ｃｏｎｎｅｃｔｔｃ
ｕｔ）ノユニオン・カーバイド（Ｕｎｉｏｎ Ｃａｒｂ
ｉ ｄｅ ）によって供給されるサツシ■（ＳＡＧ■
）及びセ・ツリー［有］（ＳＥＮＴＲＹ＠））泡□剤ア
あ、。
実施例に用いた泡止剤はＭＡＺＵ ＤＦ ６０００、
分子量２０００〜６０００のポリグロビレングリコール
ーシリコーン（ＰＰＧＳ）エマルジョンである。この泡
市剤に選んだ検出法はＰＰＧ５の比濁計による測定であ
る。ＰＰＧ５の測定は、次の化学式によって示されるＰ
ＰＧ５がヨウ化水銀カリウムと複合化した際、測定可能
な沈殿物の生成に基ずく：に、ＨｇＩ、＋ ＰＰＧ５−
＋に、ＨｇＩ、、ＰＰＧ５ＰＰＧ５は溶解及び温度間に
逆の関係を示し、そして室温に近いその曇り点（温度を
上昇させた際に、非イオン性溶液の濁り突然開始）を有
するために、試料を加熱して感度及び再現性を改善する
。
分子量２０００〜６０００のポリグロビレングリコール
ーシリコーン（ＰＰＧＳ）エマルジョンである。この泡
市剤に選んだ検出法はＰＰＧ５の比濁計による測定であ
る。ＰＰＧ５の測定は、次の化学式によって示されるＰ
ＰＧ５がヨウ化水銀カリウムと複合化した際、測定可能
な沈殿物の生成に基ずく：に、ＨｇＩ、＋ ＰＰＧ５−
＋に、ＨｇＩ、、ＰＰＧ５ＰＰＧ５は溶解及び温度間に
逆の関係を示し、そして室温に近いその曇り点（温度を
上昇させた際に、非イオン性溶液の濁り突然開始）を有
するために、試料を加熱して感度及び再現性を改善する
。
この方法はエム・ムツソ（Ｍ、 Ｍｕｓｈｏ ）により
、アナリテイカル・リサーチ・プロシーデユア（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅ）、Ｎｏ。
、アナリテイカル・リサーチ・プロシーデユア（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌ Ｒｅ５ｅａｒｃｈ Ｐｒｏｃｅｄｕｒ
ｅ）、Ｎｏ。
１−２−１−１６．０に記載されている。
粘土及び泡止剤は相互に親和性を有している。
正確な機構は未公知であるが、しかし、一般に、多階イ
オン性である泡止剤が一般に陰イオン性である粘土粒子
によって静電的に保持され、その結果として、沈殿し且
つバイオマスと共に全体の発酵液体培地から、或いはす
でに処理してバイオマスを除去した酵素含有溶液から固
／液分離技術、例えば濾過によって容易に分離される複
合体を生ずるものと仮定する。
オン性である泡止剤が一般に陰イオン性である粘土粒子
によって静電的に保持され、その結果として、沈殿し且
つバイオマスと共に全体の発酵液体培地から、或いはす
でに処理してバイオマスを除去した酵素含有溶液から固
／液分離技術、例えば濾過によって容易に分離される複
合体を生ずるものと仮定する。
全炭水化物を測定するために、フェノール−硫酸法を用
いた〔モンコメリ−（Ｍｏｎ ｔｇｏｒｎｅ ｒｙ 。
いた〔モンコメリ−（Ｍｏｎ ｔｇｏｒｎｅ ｒｙ 。
Ｒ１）、ビオヒミカ・ビオフイジ力・アクタ（Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ、 、 Ｂｆｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ）、４８．
５９１（１９６１）］。
ｈｅｍ、 、 Ｂｆｏｐｈｙｓ、 Ａｃｔａ）、４８．
５９１（１９６１）］。
全蛋白質をリッチモンド（Ｒｉｃｈｍｏｎｄ 、 Ｃａ
ｌ １−ｆｏｒｎｉａ）のバイオ−ラッド・ラボラトリ
ーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に
よる出版Ｎｏ。
ｌ １−ｆｏｒｎｉａ）のバイオ−ラッド・ラボラトリ
ーズ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）に
よる出版Ｎｏ。
８４−００４７／２８４に記載された如きバイオ−ラッ
ド・プロティン・アッセイ・ダイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ａｓ５ａｙ ｄｙｅ） 法を用いて測
定し、この方法は迅速蛋白質測定法である。この方法は
ブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）の方法、アナリ
テイカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ、Ｂｉｏ−ｃ
ｈ、ｅｍ、）、第７２巻、２４８（１９７６）に基ずく
蛋白質の種々な濃度に反応して染料の異なる色調変化に
基ずく染料−結合分析である。典型的な分析においては
、適当に希釈した試料０．１ ｄを染料試薬５．０ ｍ
ｌ、と混合する。青−緑色を生じ、これは分光光度計に
よって５９５ ｎｍで示される。γ−グロブリン１０〜
１５０μ２を用いて標準曲線を作図する。
ド・プロティン・アッセイ・ダイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ Ｐ
ｒｏｔｅｉｎ Ａｓ５ａｙ ｄｙｅ） 法を用いて測
定し、この方法は迅速蛋白質測定法である。この方法は
ブラッドフォード（Ｂｒａｄｆｏｒｄ）の方法、アナリ
テイカル・バイオケミストリー（Ａｎａｌ、Ｂｉｏ−ｃ
ｈ、ｅｍ、）、第７２巻、２４８（１９７６）に基ずく
蛋白質の種々な濃度に反応して染料の異なる色調変化に
基ずく染料−結合分析である。典型的な分析においては
、適当に希釈した試料０．１ ｄを染料試薬５．０ ｍ
ｌ、と混合する。青−緑色を生じ、これは分光光度計に
よって５９５ ｎｍで示される。γ−グロブリン１０〜
１５０μ２を用いて標準曲線を作図する。
色調（領料）を下記の実施例において試験する場合、適
当に希釈した試料を分光光度計において４００ ｎｍで
測定した。
当に希釈した試料を分光光度計において４００ ｎｍで
測定した。
本発明はあらゆる酵素を用いて行われる。以下の実施例
にはバチルス・リケニホルミス及びバチルス・アミロリ
ケファシエンス（Ｂ、 ａｒｎｙｌｏｌｉ−ｑｕｅｆａ
ｃｉｅｎｓ ）による酵素（複数）を用いる。
にはバチルス・リケニホルミス及びバチルス・アミロリ
ケファシエンス（Ｂ、 ａｒｎｙｌｏｌｉ−ｑｕｅｆａ
ｃｉｅｎｓ ）による酵素（複数）を用いる。
菌株バチルス・リケニホルミスからバクテリア性のアル
カリ性蛋白分解酵素（ＡＰ）を産生させる発酵は、発酵
器にしょう油媒質、塩（複数）、殿粉（ｊａ数）、α−
アミラーゼ〔殿粉（複数）を可溶性デキストリンに加水
分解するため〕、泡止剤及び水を加え、次にこの媒質を
菌株バチルス・リケニホルミスの生活力のある細胞と共
に培養することによって行うことができる。発酵を３５
〜４０℃で１〜２日間続ける。次に、液体培地全体を通
常水で希釈し、ｐＨ値をやや塩基性に調節する。適当な
凝集剤を加えてバイオマスの凝集を助ける。
カリ性蛋白分解酵素（ＡＰ）を産生させる発酵は、発酵
器にしょう油媒質、塩（複数）、殿粉（ｊａ数）、α−
アミラーゼ〔殿粉（複数）を可溶性デキストリンに加水
分解するため〕、泡止剤及び水を加え、次にこの媒質を
菌株バチルス・リケニホルミスの生活力のある細胞と共
に培養することによって行うことができる。発酵を３５
〜４０℃で１〜２日間続ける。次に、液体培地全体を通
常水で希釈し、ｐＨ値をやや塩基性に調節する。適当な
凝集剤を加えてバイオマスの凝集を助ける。
菌株バチルス・リケニホルミスから熱安定なバクテリア
性α−アミラーゼ（ＡＡ）を産生させる発酵は、発酵器
に大豆粉、綿実粉、塩（複数）、塘（複数）、泡止剤及
び水を加え、次にこの媒質を菌株バチルス・リケニホル
ミスの生活力のある細胞と共に培養すること釦よって行
うことができる。
性α−アミラーゼ（ＡＡ）を産生させる発酵は、発酵器
に大豆粉、綿実粉、塩（複数）、塘（複数）、泡止剤及
び水を加え、次にこの媒質を菌株バチルス・リケニホル
ミスの生活力のある細胞と共に培養すること釦よって行
うことができる。
発酵を４０〜４５℃で、ｐＨ値をほぼ中性に保持しなが
ら、３〜４日間続ける。適当な凝集剤を全体の発酵液体
培地に加えて、バイオマスの凝集を助ける。
ら、３〜４日間続ける。適当な凝集剤を全体の発酵液体
培地に加えて、バイオマスの凝集を助ける。
菌株バチルス・アミロリケファシエンスからバクテリア
性の中性蛋白分解酵素（ＮＰ）を産生させる発酵は、発
酵器に適当な窒素源、塩（複数）、炭水化物（複数）、
泡止剤及び水を加え、次にこの媒質を菌株バチルス・ア
ミロリケファシェンスの生活力のある！胞と共に培養す
ることによって行うことができる。発酵を２５〜３５℃
で、ｐ１■値を５．５乃至７，５間に保持しながら、２
〜４日間続ける。適当な凝集剤を全体の発酵液体培地に
加えて、バイオマスの凝集を助ける。またこの発酵は有
効レベルのα−アミラーゼ、β−グルカナーゼ、ヘミセ
ルラーゼ及びセルラーゼを産生ずることが注目に価する
。
性の中性蛋白分解酵素（ＮＰ）を産生させる発酵は、発
酵器に適当な窒素源、塩（複数）、炭水化物（複数）、
泡止剤及び水を加え、次にこの媒質を菌株バチルス・ア
ミロリケファシェンスの生活力のある！胞と共に培養す
ることによって行うことができる。発酵を２５〜３５℃
で、ｐ１■値を５．５乃至７，５間に保持しながら、２
〜４日間続ける。適当な凝集剤を全体の発酵液体培地に
加えて、バイオマスの凝集を助ける。またこの発酵は有
効レベルのα−アミラーゼ、β−グルカナーゼ、ヘミセ
ルラーゼ及びセルラーゼを産生ずることが注目に価する
。
以下の実施例は本発明の好ましい具体例を説明するため
のものであ抄、これによって本発明の範囲を限定するも
のではない。
のものであ抄、これによって本発明の範囲を限定するも
のではない。
実施例１
上記の如くして調製したバチルス・リケニホルミスによ
るアルカリ性の蛋白分解酵素を含む発酵液体培地を濾過
してバイオマスを除去し、これによって細胞を含まぬ培
養ろ液を得た。この培養ｐ液から各々２００ ｒｎｌの
種々な被検液を１０％Ｗ／Ｖ（重ｆ／容り水性ＫＯＨを
用いて、それぞれｐＨ値７．７．８．５．９．０及び９
．５に調節した。被検液（ｐＨ値７．７）を対照として
保持１〜、ポルクレイ■ベントナイトを他の被検液忙一
定に攪拌しながら少しづつ増加する看で、最終濃度２％
Ｗ／Ｖになるまで加えた。この懸濁液を５℃で４５分間
攪拌した。冷却は泡止剤が独力で沈殿せぬことを保証す
るが、しかし、むしろ溶液中にとどまり、粘土と接触し
て粘土−泡止剤複合体を生成することを保証した。凝集
した複合体を戸別した。生じた炉液を泡止剤な有量、全
炭水化物及び酵素活性について分析した。その結果はわ
ずかな酵素活性須失のみを伴って、培養炉液から泡止剤
及び炭水化物を除去する際にベントナイトが有効である
ことを示し、これを第１表に示した。活性をフィル、ｌ
’ −５ｙｆ（ラドリース（Ｍｉ ｌｅｓ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ 。
るアルカリ性の蛋白分解酵素を含む発酵液体培地を濾過
してバイオマスを除去し、これによって細胞を含まぬ培
養ろ液を得た。この培養ｐ液から各々２００ ｒｎｌの
種々な被検液を１０％Ｗ／Ｖ（重ｆ／容り水性ＫＯＨを
用いて、それぞれｐＨ値７．７．８．５．９．０及び９
．５に調節した。被検液（ｐＨ値７．７）を対照として
保持１〜、ポルクレイ■ベントナイトを他の被検液忙一
定に攪拌しながら少しづつ増加する看で、最終濃度２％
Ｗ／Ｖになるまで加えた。この懸濁液を５℃で４５分間
攪拌した。冷却は泡止剤が独力で沈殿せぬことを保証す
るが、しかし、むしろ溶液中にとどまり、粘土と接触し
て粘土−泡止剤複合体を生成することを保証した。凝集
した複合体を戸別した。生じた炉液を泡止剤な有量、全
炭水化物及び酵素活性について分析した。その結果はわ
ずかな酵素活性須失のみを伴って、培養炉液から泡止剤
及び炭水化物を除去する際にベントナイトが有効である
ことを示し、これを第１表に示した。活性をフィル、ｌ
’ −５ｙｆ（ラドリース（Ｍｉ ｌｅｓ Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｉｅｓ 。
Ｉｎｃ、）、バイオテクノロジー・クオーリティ・アシ
二ランス・グロシーデュア（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙＱｕａｌｉｔｙ Ａｓ５ｕｒａｎｃｅ Ｐｒｏｃｅｄ
ｕｒｅ）Ｎｏ。
二ランス・グロシーデュア（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇ
ｙＱｕａｌｉｔｙ Ａｓ５ｕｒａｎｃｅ Ｐｒｏｃｅｄ
ｕｒｅ）Ｎｏ。
４００、２３ ：ｃ記載された方法を用いて測定し、こ
の方法はデルフト（Ｄｅｌｆｔ 、Ｈｏ１ｌａｎｄ）の
ロイヤル・ネーザーランズ・ファーメンテ−ジョン・イ
ンダストリーズ（Ｒｏｙａｌ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓＸ
Ｌｔｄ、）Ｋよって開発されたデルフト・アッセイ法（
ｆ、）ｅｌｆｔＡｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ）に基ずく。
の方法はデルフト（Ｄｅｌｆｔ 、Ｈｏ１ｌａｎｄ）の
ロイヤル・ネーザーランズ・ファーメンテ−ジョン・イ
ンダストリーズ（Ｒｏｙａｌ Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ
Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ ＩｎｄｕｓｔｒｉｅｓＸ
Ｌｔｄ、）Ｋよって開発されたデルフト・アッセイ法（
ｆ、）ｅｌｆｔＡｓｓａｙ ｍｅｔｈｏｄ）に基ずく。
活性はアルカリ性蛋白分解酵素単位／ｍ７！とじて示し
た。１欠水化物をｍｑ／ｍｔとして示し、そして泡止剤
をｐｐｍ として示した。
た。１欠水化物をｍｑ／ｍｔとして示し、そして泡止剤
をｐｐｍ として示した。
１、ＡＰ＋Ｑ％ ７．７ １０００ ２５ ８４
４０２、ＡＰ＋２９イ ７．７ ３０ １５ ７７０
０３、−起Ｐ＋２％ ８．５ ３６ −−
７７００４、ＡＰ＋２％ ９．０ ４０ −−
７７００５、 ＡＰ ＋ ２％ ９．５ ５３
−− ７７００実施例２ 泡止削を除去する六めに培養Ｐ液に加えるベントナイト
の最適レベルを、培養Ｐ液の被検液２００９、を、Ｈ値
７．５ Ｔｇｈ ） ｖ−（■、ｙ）−＋（）−０，５
％〜３９／ ｗ ／ ｖと混合することによってコＩＩ
定することを除いて、実施例１の方法をアルカリ性蛋白
分解酵素培養炉液に対してくり返し行った。その結果を
下記の第■表に示した。
４０２、ＡＰ＋２９イ ７．７ ３０ １５ ７７０
０３、−起Ｐ＋２％ ８．５ ３６ −−
７７００４、ＡＰ＋２％ ９．０ ４０ −−
７７００５、 ＡＰ ＋ ２％ ９．５ ５３
−− ７７００実施例２ 泡止削を除去する六めに培養Ｐ液に加えるベントナイト
の最適レベルを、培養Ｐ液の被検液２００９、を、Ｈ値
７．５ Ｔｇｈ ） ｖ−（■、ｙ）−＋（）−０，５
％〜３９／ ｗ ／ ｖと混合することによってコＩＩ
定することを除いて、実施例１の方法をアルカリ性蛋白
分解酵素培養炉液に対してくり返し行った。その結果を
下記の第■表に示した。
第脛表
ｐＨＨＩ３５．２５℃でバチルス・リケニホルミスから
誘導されたアルカリ性蛋白分解酵素培養Ｆ液から泡止剤
の除去におけるベントナイト濃度効果 ベントナイト濃度 泡止剤残存％ 対照 ０ １００ ０．５ ２６１．０
２３ １．５８ ２．０４ ２．５３ ３．０３ 第「表はベントナイトのレベルが増加すれば、それだけ
泡止剤を除去することを示している。最適レベルはベン
トナイト１．５〜３％Ｗ／Ｖと思われ、その理由は、ベ
ントナイト１．５％Ｗ ／ Ｖレベルで培養ろ液中に残
存油止剤のレベルが１０％以下に減じられ、一方、ベン
トナイト３．０％ｗ ／ ｖの添加後、残存油止剤は３
％のみであるためである。
誘導されたアルカリ性蛋白分解酵素培養Ｆ液から泡止剤
の除去におけるベントナイト濃度効果 ベントナイト濃度 泡止剤残存％ 対照 ０ １００ ０．５ ２６１．０
２３ １．５８ ２．０４ ２．５３ ３．０３ 第「表はベントナイトのレベルが増加すれば、それだけ
泡止剤を除去することを示している。最適レベルはベン
トナイト１．５〜３％Ｗ／Ｖと思われ、その理由は、ベ
ントナイト１．５％Ｗ ／ Ｖレベルで培養ろ液中に残
存油止剤のレベルが１０％以下に減じられ、一方、ベン
トナイト３．０％ｗ ／ ｖの添加後、残存油止剤は３
％のみであるためである。
実施例３
前記の如くしてバチルス・リケニホルミスによって産生
じたα−アミラーゼを含む発酵液体培地をまず濾過して
バイオマスを除去し、本実施例に対する細胞を含まぬ培
養Ｆ液を得た。また２種の液体培地全体を試験した。熱
安定性α−アミラーゼ発酵培養炉液か、らの各１００ゴ
の被検液に実施例１と同様にして、泡止剤及び炭水化物
における効果を測定するために２及び３にｗ ／ ｖの
濃度でボークレイ０ベントナイトを加え、そして全体の
液体！、１ｔｈＥよ。−カよ５，２ツイ■６７、カイ。
じたα−アミラーゼを含む発酵液体培地をまず濾過して
バイオマスを除去し、本実施例に対する細胞を含まぬ培
養Ｆ液を得た。また２種の液体培地全体を試験した。熱
安定性α−アミラーゼ発酵培養炉液か、らの各１００ゴ
の被検液に実施例１と同様にして、泡止剤及び炭水化物
における効果を測定するために２及び３にｗ ／ ｖの
濃度でボークレイ０ベントナイトを加え、そして全体の
液体！、１ｔｈＥよ。−カよ５，２ツイ■６７、カイ。
３％ｗ ／ ｖを加えた。また液体培地全体及び培養Ｆ
液（ｃＦ）の対照試料（ベントナイトなし）をｐＨＨＩ
３５で試験した。泡止剤及・び炭水化物含有量を実施例
１と同様にして測定した。また試料を顔料の存在につい
て比色計で試験した。総蛋白質を上記のパイオーラッド
法を用いてチェックし、■／葱で示した。その結果を次
の第１表に集約した。
液（ｃＦ）の対照試料（ベントナイトなし）をｐＨＨＩ
３５で試験した。泡止剤及・び炭水化物含有量を実施例
１と同様にして測定した。また試料を顔料の存在につい
て比色計で試験した。総蛋白質を上記のパイオーラッド
法を用いてチェックし、■／葱で示した。その結果を次
の第１表に集約した。
ベントナイトはＡＰ培培養液液全く同様に、ＡＡｆ＠養
戸液か炉液止剤を除去する際に極めて有効であった。ま
た、ベントナイトは望ましくない着色物の一部を効果的
に除去した。しかしながら、実施例１における如（、Ａ
Ｐ培培養液液ら残存炭水化物の除去と比較して、ＡＡ培
培養液液ら残存炭水化物を除去する際にベントナイトは
無効であると思われる。
戸液か炉液止剤を除去する際に極めて有効であった。ま
た、ベントナイトは望ましくない着色物の一部を効果的
に除去した。しかしながら、実施例１における如（、Ａ
Ｐ培培養液液ら残存炭水化物の除去と比較して、ＡＡ培
培養液液ら残存炭水化物を除去する際にベントナイトは
無効であると思われる。
液体培地全体に関しては、ベントナイトは泡止剤１３％
以上及び一部の色素を除去するが、しかし、炭水化物を
除去するには無効であった。
以上及び一部の色素を除去するが、しかし、炭水化物を
除去するには無効であった。
実施例４
前記のバチルス・リケニホルミスのα−アミラーゼ産生
発酵を本実施例に対する全液体培地を得るために行った
。濾過の代りに、α−アミラーゼ含有液体を遠心分離、
次に上澄液のデカンテーションによってバイオマスから
分離した。実施例３と同様の方法を用いて、ボーク・イ
■べ・トナイト２％ｗ ／’ ｖを上澄液に加えること
Ｋよって油止剤の除去を調べた。油止剤２０％が上澄液
中にあり、かくして、全液体培地の遠心分離後、バイオ
マスと共に油止剤８０％が残ったことがわかった。
発酵を本実施例に対する全液体培地を得るために行った
。濾過の代りに、α−アミラーゼ含有液体を遠心分離、
次に上澄液のデカンテーションによってバイオマスから
分離した。実施例３と同様の方法を用いて、ボーク・イ
■べ・トナイト２％ｗ ／’ ｖを上澄液に加えること
Ｋよって油止剤の除去を調べた。油止剤２０％が上澄液
中にあり、かくして、全液体培地の遠心分離後、バイオ
マスと共に油止剤８０％が残ったことがわかった。
次に、バイオマスを水に再懸濁させて全液体培地の初期
容量にし、遠心分離し、続いて上澄液をデカンテーショ
ンし、残存酵素を抽出した。この第二の上澄液を同様に
してポークレイ■ベントナイト２％ｗ／ｖで処理し、ま
た残存泡止剤のほとんどがバイオマスからこの第二のデ
カンテーションした上澄液中に抽出されたことがわかっ
た。
容量にし、遠心分離し、続いて上澄液をデカンテーショ
ンし、残存酵素を抽出した。この第二の上澄液を同様に
してポークレイ■ベントナイト２％ｗ／ｖで処理し、ま
た残存泡止剤のほとんどがバイオマスからこの第二のデ
カンテーションした上澄液中に抽出されたことがわかっ
た。
最初の上澄液のベントナイト処理は残存泡止剤の９０％
より大を除去し、ＰＰＧ５１５ ｐｐｍ ｔＤみを有す
る酵素液を生じた。第二の上澄液のベントナイト処理は
残存泡止剤のほとんどを除去し、ＰＰＧ５２５ ｐｐｍ
のみを有する酵素液を生じた。
より大を除去し、ＰＰＧ５１５ ｐｐｍ ｔＤみを有す
る酵素液を生じた。第二の上澄液のベントナイト処理は
残存泡止剤のほとんどを除去し、ＰＰＧ５２５ ｐｐｍ
のみを有する酵素液を生じた。
実施例５
高レベルのα−アミラーゼ並びに有効レベルのβ−グル
カナーゼ、ヘミセルラーゼ及びセルラーゼ活性を含む上
記の如くして調製したバチルス・アミロリケファシエン
スによるバクテリア性の中性蛋白分解酵素に対する全体
の発雷液体培地を試１また。濾過によってバイオマスを
分離した後、最初のＰ液の被検液５０．ｄをｐＨ値６．
２にて種７セななレベルのポルクレイ■ベントナイトで
、そしてまた異なるｐＨ値にでベントナイト０．５％ｗ
／ ｖテ処Ｌｆｆｉｔ、り。ｉ”Ｈ’ｔＬヲ１０ ％
ｗ ／ ｖ水性ＫＯＨで調節した。ベントナイトの添
加は実施例１における如くして行った。泡止剤除去の有
効性を実施例１と同欅の方法で測定した。またｐＨ値６
．２を有する試料を比色計で試験した。その結果を次の
第ｖ表に示した。
カナーゼ、ヘミセルラーゼ及びセルラーゼ活性を含む上
記の如くして調製したバチルス・アミロリケファシエン
スによるバクテリア性の中性蛋白分解酵素に対する全体
の発雷液体培地を試１また。濾過によってバイオマスを
分離した後、最初のＰ液の被検液５０．ｄをｐＨ値６．
２にて種７セななレベルのポルクレイ■ベントナイトで
、そしてまた異なるｐＨ値にでベントナイト０．５％ｗ
／ ｖテ処Ｌｆｆｉｔ、り。ｉ”Ｈ’ｔＬヲ１０ ％
ｗ ／ ｖ水性ＫＯＨで調節した。ベントナイトの添
加は実施例１における如くして行った。泡止剤除去の有
効性を実施例１と同欅の方法で測定した。またｐＨ値６
．２を有する試料を比色計で試験した。その結果を次の
第ｖ表に示した。
第Ｖ表
実験 ベントナイト 泡 止 剤
ｓ ｖベルｐＨＰＰＧ５ （ｐｐｍ：１．０
％ ６．２ ５１，０００２、
０．１％ ６．２ ４８，０００３
、 ０．５％ ６．２ ３５
，２００４、 １．０％ ６．２
３０，０００５、 １．５％
６．２ ５，５００６、 ２．０
％ ６．２ ２．１００７、
３．０９イ ６．２ １，２００
８、 ０．５％ ５．０ ２
８，８００９、 ０．５％ ６．０
２８，８００１０、 ０．５％
７，０ ２４，０００１１、
０．５％ ８．０ ２１，２５０１２、
０．５％ ９．０ ２１．２
５０”無効 泡止剤 色 除去％ （４００ｎｍ ） ０ ０．４７５（ＸＩＯ） ５．９ ０．４４７（ｘｌＯ） ３１．０ ０．４３６（ＸＩＯ） ４１．２ ０．４３６（ＸＩＯ） ８９゜２ ０．３７０（ｘｌｏ） ９５．９ ０．３６８ （Ｘｉ Ｏ）９７．７ ０
．３３９（ｘｉ Ｏ） ４５．６ Ｎ／Ａ＊ ４５．６ Ｎ／Ａ ５２．９ Ｎ／Ａ ５８．５ Ｎ／Ａ ５８．５ Ｎ／Ａ 酸ｐＨ値６．２で中性蛋白分解酵素に対して、ベントナ
イト トの濃度で最も有効であり（被検液５、６及び７）、一
方、ｏ．ｓ％Ｗ ／ Ｖベントナイトの低レベルで泡止
剤の除去はアルカＩＪ 性ｐＨ値で明白に改善された（
被検液８〜１２）。
ｓ ｖベルｐＨＰＰＧ５ （ｐｐｍ：１．０
％ ６．２ ５１，０００２、
０．１％ ６．２ ４８，０００３
、 ０．５％ ６．２ ３５
，２００４、 １．０％ ６．２
３０，０００５、 １．５％
６．２ ５，５００６、 ２．０
％ ６．２ ２．１００７、
３．０９イ ６．２ １，２００
８、 ０．５％ ５．０ ２
８，８００９、 ０．５％ ６．０
２８，８００１０、 ０．５％
７，０ ２４，０００１１、
０．５％ ８．０ ２１，２５０１２、
０．５％ ９．０ ２１．２
５０”無効 泡止剤 色 除去％ （４００ｎｍ ） ０ ０．４７５（ＸＩＯ） ５．９ ０．４４７（ｘｌＯ） ３１．０ ０．４３６（ＸＩＯ） ４１．２ ０．４３６（ＸＩＯ） ８９゜２ ０．３７０（ｘｌｏ） ９５．９ ０．３６８ （Ｘｉ Ｏ）９７．７ ０
．３３９（ｘｉ Ｏ） ４５．６ Ｎ／Ａ＊ ４５．６ Ｎ／Ａ ５２．９ Ｎ／Ａ ５８．５ Ｎ／Ａ ５８．５ Ｎ／Ａ 酸ｐＨ値６．２で中性蛋白分解酵素に対して、ベントナ
イト トの濃度で最も有効であり（被検液５、６及び７）、一
方、ｏ．ｓ％Ｗ ／ Ｖベントナイトの低レベルで泡止
剤の除去はアルカＩＪ 性ｐＨ値で明白に改善された（
被検液８〜１２）。
実施例６
ｃ − ム− ７ ７ドー バー ス（Ｒｏｈｍ ａｎ
ｄ Ｈａａｓ ）社提供の７ミη■（Ａｍｉ ｃ ｏ
ｎ”） ７ ６ 、、Ｊ円板Ｉ）Ｍ−１０膜を用いる限
外濾過試験は、対照の蛋白分解酵素ｐ液と比較して、実
施例５に述べた如き１、５πｗ／ｖｆヤ，ツイの、７ト
ナイト処理した中性蛋白分解酵素炉液に対しては、１時
間に捕集した透過液の量を測定した際、流速、容量／時
間においてＩＥぼ３倍増加を示した。その結果を次の第
４表に示した。
ｄ Ｈａａｓ ）社提供の７ミη■（Ａｍｉ ｃ ｏ
ｎ”） ７ ６ 、、Ｊ円板Ｉ）Ｍ−１０膜を用いる限
外濾過試験は、対照の蛋白分解酵素ｐ液と比較して、実
施例５に述べた如き１、５πｗ／ｖｆヤ，ツイの、７ト
ナイト処理した中性蛋白分解酵素炉液に対しては、１時
間に捕集した透過液の量を測定した際、流速、容量／時
間においてＩＥぼ３倍増加を示した。その結果を次の第
４表に示した。
第４表
１、５ ９（、 ｗ ／ ｖ 対照ベントナ
イト （ベントナイトなし）出発容ｔ ５
００ゴ ５００献ｐＨ値 ６， ２
６． ２温度 ５℃
５℃攪拌 ３００ＲＰＭ ３００ＲＰＭ圧
力 ３．８ ４ ５ｋｇ／Ｃｒｎ２３．８ ４
５に９／ｚ”（４０ｐ３ｉ） （４０ｐＳ
ｉ）１時間後に 捕集した透 過客ｔ ２４ｄ ７０ｎ！。
イト （ベントナイトなし）出発容ｔ ５
００ゴ ５００献ｐＨ値 ６， ２
６． ２温度 ５℃
５℃攪拌 ３００ＲＰＭ ３００ＲＰＭ圧
力 ３．８ ４ ５ｋｇ／Ｃｒｎ２３．８ ４
５に９／ｚ”（４０ｐ３ｉ） （４０ｐＳ
ｉ）１時間後に 捕集した透 過客ｔ ２４ｄ ７０ｎ！。
特許出願人 マイルス・ラボラドリース・インフーボレ
ーテツド
ーテツド
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、酵素産生微生物を適当な栄養増殖培地中で培養して
、発酵液体培地に多陽イオン性泡止剤を加えた酵素を含
む発酵液体培地を準備することにより酵素を産生する方
法と組合せて、 ａ）発酵液体培地に鉱物質粘土を加えて、 粘土と酵素との間の反応生成物が生成せずに固体粘土／
泡止剤複合体が生成し、一方、酵素は溶液中にとどまる
ｐＨ条件下で泡止剤との複合体を生成させ；そして ｂ）固／液分離技術によつて発酵液体培地から粘土／泡
止剤複合体を分離することを特徴とする方法。 ２、発酵液体培地に鉱物質粘土を添加する前に、バイオ
マスを発酵液体培地から分離し、これによつて酵素含有
溶液を準備することを特徴とする特許請求の範囲第１項
記載の方法。 ３、（ａ）において、粘土を実質的に均一に攪拌しなが
ら加え、攪拌を３時間まで続け、そして（ｂ）において
、該分離を濾過または遠心分離、続いてデカンテーシヨ
ンすることによつて行う特許請求の範囲第２項記載の方
法。 ４、粘土がモントモリロナイト、水和したアルミナシリ
ケート、アタパルジヤイト、イライト、カオリンまたは
それらの混合物であり、そして該粘土を酵素含有溶液の
容量に対して約０．０１〜１０重量％の量で加える特許
請求の範囲第３項記載の方法。 ５、約６０％〜８０％の粘土が約１４０メッシュ乃至２
３０メッシュの範囲の米国メッシュサイズを有するふる
いを通るような粒径を有する特許請求の範囲第４項記載
の方法。 ６、泡止剤がシリコーンベース重合体エマルジョンであ
る特許請求の範囲第５項記載の方法。 ７、泡止剤が分子量範囲２０００〜６０００を有するポ
リプロピレングリコール−シリコーンエマルジョンであ
る特許請求の範囲第６項記載の方法。 ８、酵素が微生物によつて分泌され、従つて最初に細胞
外である特許請求の範囲第１項記載の方法。 ９、酵素が最初に細胞内であり、そして溶解し、これに
よつて酵素を酵素産生微生物の細胞壁の外にもたらす特
許請求の範囲第１項記載の方法。 １０、発酵液体培地が、粘土と複合体を生成することが
でき、従つて粘土を加えた後に固／液分離技術によつて
発酵液体培地から分離し得る炭水化物材料及び顔料を含
有する特許請求の範囲第２項記載の方法。 １１、（ａ）において、粘土を実質的に均一に攪拌しな
がら加え、攪拌を３時間まで続け、そして（ｂ）におい
て、該分離を濾過または遠心分離、続いてデカンテーシ
ヨンすることによつて行う特許請求の範囲第１０項記載
の方法。 １２、粘土がモントモリロナイト、水和したアルミナシ
リケート、アタパルジヤイト、イライト、カオリンまた
はそれらの混合物であり、そして該粘土を酵素含有溶液
の容量に対して約０．１〜１０重量％の量で加える特許
請求の範囲第１１項記載の方法。 １３、約６０％〜８０％の粘度が約１４０メッシュ乃至
２３０メッシュ範囲の米国メッシュサイズを有するふる
いを通るような粒径を有する特許請求の範囲第１２項記
載の方法。 １４、泡止剤がシリコーンベース重合体エマルジョンで
ある特許請求の範囲第１３項記載の方法。 １５、泡止剤が分子量範囲２０００〜６０００を有する
ポリプロピレングリコール−シリコーンエマルジョンで
ある特許請求の範囲第１４項記載の方法。 １６、酵素が微生物によつて分泌され、従つて最初に細
胞外である特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １７、酵素が最初に細胞内であり、そして溶解し、これ
によつて酵素を酵素産生微生物の細胞壁の外にもたらす
特許請求の範囲第１５項記載の方法。 １８、（ｃ）該分離したバイオマスを水溶液中で再スラ
リー化し、 （ｄ）残存酵素の溶液を得るためにバイオマスを再分離
し、 （ｅ）固体粘土／残存泡止剤複合体を生成するように水
溶液に追加の鉱物質粘土を加え、そして （ｆ）溶液から粘土／残存泡止剤複合体を分離すること
により追加の酵素を回収することを更に含む特許請求の
範囲第２項記載の方法。 １９、（ａ）において、粘土を実質的に均一に攪拌しな
がら加え、攪拌を３時間まで続け、そして（ｂ）におい
て、該分離を濾過または遠心分離、続いてデカンテーシ
ヨンすることによつて行う特許請求の範囲第１項記載の
方法。 ２０、粘土がモントモリロナイト、水和したアルミナシ
リケート、アタパルジヤイト、イライト、カオリンまた
はそれらの混合物であり、そして該粘土を液体培地の容
量に対して約０．０１〜１０重量％の量で加える特許請
求の範囲第１９項記載の方法。 ２１、約６０％〜８０％の粘土が約１５０メッシュ乃至
２３０メッシュ範囲の米国メッシュサイズを有するふる
いを通るような粒径を有する特許請求の範囲第２０項記
載の方法。 ２２、泡止剤がシリコーンベース重合体エマルジョンで
ある特許請求の範囲第２１項記載の方法。 ２３、泡止剤が分子量範囲２０００〜６０００を有する
ポリプロピレングリコール−シリコーンエマルジョンで
ある特許請求の範囲第２２項記載の方法。 ２４、酵素が微生物によつて分泌され、従つて最初に細
胞外である特許請求の範囲第２３項記載の方法。 ２５、酵素が最初に細胞内であり、そして溶解し、これ
によつて酵素を酵素産生微生物の細胞壁の外にもたらす
特許請求の範囲第２３項記載の方法。 ２６、発酵液体培地が、粘土と複合体を生成することが
でき、従つて粘土を加えた後に、固／液分離技術によつ
て発酵液体培地から分離し得る炭水化物材料及び顔料を
含有する特許請求の範囲第１項記載の方法。 ２７、（ａ）において、粘土を実質的に均一に攪拌しな
がら加え、攪拌を３時間まで続け、そして（ｂ）におい
て、該分離を濾過または遠心分離、続いてデカンテーシ
ヨンすることによつて行う特許請求の範囲第２６項記載
の方法。 ２８、粘土がモントモリロナイト、水和したアルミナシ
リケート、アタパルジヤイト、イライト、カオリンまた
はそれらの混合物であり、そして該粘土を液体培地の容
量に対して約０．０１〜１０重量％の量で加える特許請
求の範囲第２７項記載の方法。 ２９、約６０％〜８０％の粘土が約１５０メッシュ乃至
２３０メッシュ範囲の米国メッシュサイズを有するふる
いを通るような粒径を有する特許請求の範囲第２８項記
載の方法。 ３０、泡止剤がシリコーンベース重合体エマルジョンで
ある特許請求の範囲第２９項記載の方法。 ３１、泡止剤が分子量範囲２０００〜６０００を有する
ポリプロピレングリコール−シリコーンエマルジョンで
ある特許請求の範囲第３０項記載の方法。 ３２、酵素が微生物によつて分泌され、従つて最初に細
胞外である特許請求の範囲第３１項記載の方法。 ３３、酵素が最初に細胞内であり、そして溶解し、これ
によつて酵素を酵素産生微生物の細胞壁の外にもたらす
特許請求の範囲第３１項記載の方法。 ３４、酵素産生微生物を適当な栄養増殖培地中で培養し
て、発酵液体培地に多陽イオン性泡止剤が加えられる酵
素を含む発酵液体培地を準備することにより酵素を産生
する方法と組合せて、ａ）発酵液体培地に鉱物質粘土を
加えて、 固体粘土／泡止剤複合体及び不溶性酵素／粘土反応生成
物の双方が生ずるような粘土と酵素との間の反応生成物
を生成せしめるｐＨ条件下で、泡止剤との複合体を生成
させ； ｂ）ｐＨ値を、酵素及び粘土が反応生成物を生成し、こ
れによつて酵素が溶液中に移行する範囲外に調節し；そ
して ｃ）固／液分離技術によつて発酵液体培地から粘土／泡
止剤複合体を分離することを特徴とする方法。 ３５、発酵液体培地に鉱物質粘土を添加する前に、バイ
オマスを発酵液体培地から分離し、これによつて酵素を
含む溶液を準備し、これに工程（ａ）において粘土を加
える特許請求の範囲第１項記載の方法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US779504 | 1985-09-24 | ||
| US06/779,504 US4931397A (en) | 1985-09-24 | 1985-09-24 | Method for removing antifoaming agents during processing of microbial fermentations |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6274279A true JPS6274279A (ja) | 1987-04-06 |
Family
ID=25116665
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61222224A Pending JPS6274279A (ja) | 1985-09-24 | 1986-09-22 | 微生物発酵工程中の泡止剤の除去方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4931397A (ja) |
| EP (1) | EP0216270A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6274279A (ja) |
| CN (1) | CN86106687A (ja) |
| DK (1) | DK453886A (ja) |
| FI (1) | FI863810A (ja) |
| MX (1) | MX168694B (ja) |
Families Citing this family (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| GB8825183D0 (en) * | 1988-10-27 | 1988-11-30 | Atomic Energy Authority Uk | Recovery of substances |
| US5078888A (en) * | 1989-04-06 | 1992-01-07 | Dow Corning Corporation | Method for processing aqueous fermentation broths |
| US5024937A (en) * | 1989-04-06 | 1991-06-18 | Dow Corning Corporation | Method for processing aqueous fermentation broths |
| DE4037530A1 (de) * | 1990-11-26 | 1992-05-27 | Henkel Kgaa | Faellungsverfahren fuer exocellulaere proteine |
| ZA200800988B (en) | 2005-09-23 | 2009-08-26 | Unilever Plc | Aerated products with reduced creaming |
| ZA200800987B (en) | 2005-09-23 | 2009-08-26 | Unilever Plc | Low pH aerated products |
| BRPI0816506A2 (pt) * | 2007-10-18 | 2014-10-14 | Unilever Nv | "método para produzir um agente espumante" |
| AU2009304092B2 (en) | 2008-10-16 | 2013-09-05 | Unilever Plc | Hydrophobin solution containing antifoam |
| CN102245628B (zh) | 2008-12-16 | 2014-05-28 | 荷兰联合利华有限公司 | 从溶液中提取疏水蛋白的方法 |
| US8357420B2 (en) | 2009-05-29 | 2013-01-22 | Conopco, Inc. | Oil-in-water emulsion |
| US8394444B2 (en) | 2009-05-29 | 2013-03-12 | Conopco, Inc. | Oil-in-water emulsion |
| RU2577146C2 (ru) * | 2013-09-17 | 2016-03-10 | Открытое акционерное общество "Всероссийский научный центр молекулярной диагностики и лечения" (ОАО "ВНЦМДЛ") | Способ удаления пеногасителя из культуральной жидкости после ферментации |
| CN114615896A (zh) * | 2019-09-04 | 2022-06-10 | 杜邦营养生物科学有限公司 | 从包含人乳寡糖和相关组合物的溶液中去除消泡剂的方法 |
| BR112023003778A2 (pt) | 2020-09-04 | 2023-03-28 | Basf Se | Método para separar uma molécula de interesse de um agente antiespumante em um caldo de fermentação, e, processo para purificar uma molécula de interesse de um caldo de fermentação |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| US2291624A (en) * | 1935-06-05 | 1942-08-04 | Firm A G Fur Bier Und Weinprod | Process for improving beer or similar liquids |
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| US3414479A (en) * | 1967-12-28 | 1968-12-03 | Standard Brands Inc | Process for the preparation of bacterial alpha-amylase |
| FR2359076A1 (fr) * | 1976-07-22 | 1978-02-17 | Ouest Union Chimique Indle | Procede d'epuration des eaux d'alimentation a usages domestiques ou industriels, des eaux usees et de l'air par mise en contact avec des substances epurantes |
| BR8104047A (pt) * | 1981-06-26 | 1983-02-01 | Dow Corning | Composicao utilizavel para evitar ou restringir espumacao indesejavel e processo para obtencao de alcool a partir de canade-acucar aplicando a mesma |
| HU188425B (en) * | 1983-02-11 | 1986-04-28 | Richter Gedeon Vegyeszeti Gyar Rt,Hu | Process for the treatment of fermantation liquors containing vitamine b down 12 and other corrinoids and for preparing vitamine b down 12 concentrates |
| US4548803A (en) * | 1983-12-15 | 1985-10-22 | Internorth, Inc. | Continuous flow separation with moving boundary sorption |
-
1985
- 1985-09-24 US US06/779,504 patent/US4931397A/en not_active Expired - Lifetime
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1986
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