JPS6272699A - 高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質 - Google Patents
高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質Info
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
発明の背景
本発明は、新規な高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質およ
びかかる抗生物質を産生ずる放線菌に関する。本発明は
、また、非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有効量のかかる抗
生物質および医薬上許容される不活性担体または希釈剤
からなることを特徴とする医薬組成物およびかかる腫瘍
細胞に罹患している宿主動物に非毒性かつ腫瘍細胞成長
抑制有効量のかかる抗生物質を投与することによるかか
る抗生物質に感受性の腫瘍細胞の治療法に関する。
びかかる抗生物質を産生ずる放線菌に関する。本発明は
、また、非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有効量のかかる抗
生物質および医薬上許容される不活性担体または希釈剤
からなることを特徴とする医薬組成物およびかかる腫瘍
細胞に罹患している宿主動物に非毒性かつ腫瘍細胞成長
抑制有効量のかかる抗生物質を投与することによるかか
る抗生物質に感受性の腫瘍細胞の治療法に関する。
発明の要約
本発明は以下の特性：
性状：白色無定形粉末
溶解性：水に可溶
安定性：水溶液中にて光に感受性、凍結乾燥粉末として
安定 分子量： ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより〜４２０００等電点
：ｐＩ＝２．９ 炭水化物含量：フェノール／硫酸法により１２％ＨＰＬ
Ｃ：保持時間１１．５分１ＴＳＫ−３０００ＳＷカラム
（−７，５ｍｒｎｘ ３０ｃｍ ） ；移動相０．０５
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，３） ；流：ｉＬ
１ ｍｌ ／ ｍｉｎ ；検出波長２２０ ｎｍおよび
２８０ ｎｍＵＶλｍａｘ（Ｅ１ｃｒｎ水中１％’）
： ２２０ ｎｍ （２１，６）ｉ２７５ｎｍ（３，０
） アミノ酸分析（ピコモル） ： Ａｓｒ （２８６２，
４） 。
安定 分子量： ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより〜４２０００等電点
：ｐＩ＝２．９ 炭水化物含量：フェノール／硫酸法により１２％ＨＰＬ
Ｃ：保持時間１１．５分１ＴＳＫ−３０００ＳＷカラム
（−７，５ｍｒｎｘ ３０ｃｍ ） ；移動相０．０５
Ｍリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６，３） ；流：ｉＬ
１ ｍｌ ／ ｍｉｎ ；検出波長２２０ ｎｍおよび
２８０ ｎｍＵＶλｍａｘ（Ｅ１ｃｒｎ水中１％’）
： ２２０ ｎｍ （２１，６）ｉ２７５ｎｍ（３，０
） アミノ酸分析（ピコモル） ： Ａｓｒ （２８６２，
４） 。
Ｇｌｕ（１５２４，４）、Ｓｅｒ（１１３５，８）、、
ＧＩｙ（１５０４，９）。
ＧＩｙ（１５０４，９）。
Ｈｉｓ（４１，３） 、Ａｒｇ（１０７，４） 、Ｔｈ
ｒ（２０９７，８） 、Ａｌａ（１７６５，７）、Ｐｒ
ｏ（７９３，８）、Ｔｙｒ（１３４，５）、Ｖａｌ（１
８２２，８）、Ｍｅｔ （２２３，９） 、 Ｉｌｅ（
４５６，３） 、Ｌｅｕ（３０７０）、Ｐｈｅ（２９８
，２）、Ｌｙｇ（４９，４）部分的アミノ酸配列： Ｎ
−Ａ巨岬−Ｔｈ ｒ −Ｖａ Ｉ −Ｔｈｒ−Ｖａｌ−
を有する腫瘍細胞成長抑制および細胞毒性抗生物質化合
物に関する。
ｒ（２０９７，８） 、Ａｌａ（１７６５，７）、Ｐｒ
ｏ（７９３，８）、Ｔｙｒ（１３４，５）、Ｖａｌ（１
８２２，８）、Ｍｅｔ （２２３，９） 、 Ｉｌｅ（
４５６，３） 、Ｌｅｕ（３０７０）、Ｐｈｅ（２９８
，２）、Ｌｙｇ（４９，４）部分的アミノ酸配列： Ｎ
−Ａ巨岬−Ｔｈ ｒ −Ｖａ Ｉ −Ｔｈｒ−Ｖａｌ−
を有する腫瘍細胞成長抑制および細胞毒性抗生物質化合
物に関する。
本発明は、また、ＡＴＣＣ５３２７０ならびにその活性
突然変異体および誘導体の同定特性を有する放線菌微生
物の生物学的に純粋な培養に関する。
突然変異体および誘導体の同定特性を有する放線菌微生
物の生物学的に純粋な培養に関する。
本発明は、また、非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有効量の
ＡＡＣ−３４５および医薬上許容される担体または希釈
剤からなることを特徴とする医薬組成物に関する。
ＡＡＣ−３４５および医薬上許容される担体または希釈
剤からなることを特徴とする医薬組成物に関する。
本発明は、また、非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制 ゛有
効量のＡＡＣ−３４５を該腫瘍細胞に罹患している動物
に投与することを特徴とするＡＡＣ−３４５に ・感受
性の動物腫瘍細胞の成長抑制方法に関する占発明の詳細 な説明の高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質ＡＡＣ−３４
５は、受託番号ＡＴＣＣ５３２７０のもとにアメリカン
・タイプ・カルチャー・コレクション、ロックビレ、メ
リーランド、Ｕ、Ｓ、Ａに１９８５年９月２０日に寄託
された未同定放線菌（詔そらくアクチ／７ドクラ種（Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ Ｓｐ、）の醗酵ブロスから
粗製ブロス、濃縮粗製ブロスまたは精製生成物として調
製できる。本明細書で用いる場合、「ＡＴＣＣ５３２７
０の粗製ブロス」なる語は、常法により該醗酵ブロスの
沖過または遠心分離後に残留する炉液などのＡＴＣＣ５
３２７０の清澄な醗酵ブロスを意味する。本明細書で用
いる場合、ｒＡＴｃｃ５３２７０の濃縮粗製ブロス」な
る語は、超遠心分離もしくは透析沖過またはクロマトグ
ラフィー分離を含む他の方法によりＡＴＣＣ５３２７０
の清澄粗製ブロスをさらに沖過した後に残留する清澄炉
液を意味する。例えば、後記実施例３参照。本明細書で
用いる場合、「ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分」な
る語は、後記実施例３の方法のようないずれかの適当な
方法によりＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロスを少なくと
も９５悌の純度に精製した後に残留する物質を意味する
。
効量のＡＡＣ−３４５を該腫瘍細胞に罹患している動物
に投与することを特徴とするＡＡＣ−３４５に ・感受
性の動物腫瘍細胞の成長抑制方法に関する占発明の詳細 な説明の高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質ＡＡＣ−３４
５は、受託番号ＡＴＣＣ５３２７０のもとにアメリカン
・タイプ・カルチャー・コレクション、ロックビレ、メ
リーランド、Ｕ、Ｓ、Ａに１９８５年９月２０日に寄託
された未同定放線菌（詔そらくアクチ／７ドクラ種（Ａ
ｃｔｉｎｏｍａｄｕｒａ Ｓｐ、）の醗酵ブロスから
粗製ブロス、濃縮粗製ブロスまたは精製生成物として調
製できる。本明細書で用いる場合、「ＡＴＣＣ５３２７
０の粗製ブロス」なる語は、常法により該醗酵ブロスの
沖過または遠心分離後に残留する炉液などのＡＴＣＣ５
３２７０の清澄な醗酵ブロスを意味する。本明細書で用
いる場合、ｒＡＴｃｃ５３２７０の濃縮粗製ブロス」な
る語は、超遠心分離もしくは透析沖過またはクロマトグ
ラフィー分離を含む他の方法によりＡＴＣＣ５３２７０
の清澄粗製ブロスをさらに沖過した後に残留する清澄炉
液を意味する。例えば、後記実施例３参照。本明細書で
用いる場合、「ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分」な
る語は、後記実施例３の方法のようないずれかの適当な
方法によりＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロスを少なくと
も９５悌の純度に精製した後に残留する物質を意味する
。
ＡＡＣ−３４５の誘導体は公知の方法により調製でき、
かつ、全てのＡＡＣ−３４５の活性誘導体は本発明に包
含される。「ＡＡＣ−３４５の活性誘導体」なる語は、
ＡＡＣ−３４５の腫瘍細胞成長抑制活性を実質的に保持
しているＡＡＣ−３４５の活性誘導体を意味する。かか
る誘導体は、ＡＡＣ−３４５に含まれるいずれかのアミ
ノ酸の付加、欠失または置換により調製されるＡＡＣ−
３４５の腫瘍細胞成長抑制活性を実質的に保持している
誘導体、およびＡＡＣ−３４５と他の化合物または分子
の複合体であって、該複合体がＡＡＣ−３４５の腫瘍細
胞成長抑制活性を実質的に保持している誘導体を包含す
るが、それらに限定されるものではない。
かつ、全てのＡＡＣ−３４５の活性誘導体は本発明に包
含される。「ＡＡＣ−３４５の活性誘導体」なる語は、
ＡＡＣ−３４５の腫瘍細胞成長抑制活性を実質的に保持
しているＡＡＣ−３４５の活性誘導体を意味する。かか
る誘導体は、ＡＡＣ−３４５に含まれるいずれかのアミ
ノ酸の付加、欠失または置換により調製されるＡＡＣ−
３４５の腫瘍細胞成長抑制活性を実質的に保持している
誘導体、およびＡＡＣ−３４５と他の化合物または分子
の複合体であって、該複合体がＡＡＣ−３４５の腫瘍細
胞成長抑制活性を実質的に保持している誘導体を包含す
るが、それらに限定されるものではない。
以下ＡＴＣＣ５３２７０と称する本発明の微生物は、適
当な条件下にて培養した場合、以下Ａ’ｒＣＣ５３２７
０の醗酵ブロスと称する醗酵ブロスを産生ずる。「適当
な条件下にて培養」なる語は、ＡＴＣＣ５３２７０（７
）増殖およびＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブロスのその産
生を可能にする条件を意味する。代表的な適当な条件と
しては、深部好気性条件下同化できる炭素および窒素源
を含有する水性栄養培地中２５〜３０℃の間、好ましく
は２８℃の温度、７〜８の間のｐＨにて１０〜１００時
間、好ましくは５０〜８０時間、最も好ましくは７０〜
７７時間ＡＴＣＣ５３２７０を増殖させることが挙げら
れる。さらに好ましくは、ＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブ
ロスを産生ずるためのＡＴＣＣ５３２７０の培養の適当
な条件は、後記実施例１の条件と実質的に同じである。
当な条件下にて培養した場合、以下Ａ’ｒＣＣ５３２７
０の醗酵ブロスと称する醗酵ブロスを産生ずる。「適当
な条件下にて培養」なる語は、ＡＴＣＣ５３２７０（７
）増殖およびＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブロスのその産
生を可能にする条件を意味する。代表的な適当な条件と
しては、深部好気性条件下同化できる炭素および窒素源
を含有する水性栄養培地中２５〜３０℃の間、好ましく
は２８℃の温度、７〜８の間のｐＨにて１０〜１００時
間、好ましくは５０〜８０時間、最も好ましくは７０〜
７７時間ＡＴＣＣ５３２７０を増殖させることが挙げら
れる。さらに好ましくは、ＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブ
ロスを産生ずるためのＡＴＣＣ５３２７０の培養の適当
な条件は、後記実施例１の条件と実質的に同じである。
明らかなごとく、ＡＴＣＣ５３２７０培養の適当な条件
は、ＡＡＣ−３４５の産生のために最適化されうる。
は、ＡＡＣ−３４５の産生のために最適化されうる。
゛本発明は、ＡＴＣＣ５３２７０ならびにその活性突然
変異体および誘導体の同定特性を有する放線菌微生物の
生物学的に純粋な培養に関する。「活性な突然変異体お
よび誘導体」は、本発明の抗生導体 は、公知の方法、例えば化学的突然変異誘発、組み換え
ＤＮＡ手法、照射および淘汰により調製できる。
変異体および誘導体の同定特性を有する放線菌微生物の
生物学的に純粋な培養に関する。「活性な突然変異体お
よび誘導体」は、本発明の抗生導体 は、公知の方法、例えば化学的突然変異誘発、組み換え
ＤＮＡ手法、照射および淘汰により調製できる。
前記のごとく、本発明の抗生物質であるＡＡＣ−３４５
は、細胞毒性活性を有する。まず、ＡＴＣＣ５３２７０
の粗製ブロスおよびＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分
の細胞毒性活性を以下の検定に従ってｉｎ ｖｉｔｒ
ｏにてＢ１６メラノーマ細胞を用いて評価した。
は、細胞毒性活性を有する。まず、ＡＴＣＣ５３２７０
の粗製ブロスおよびＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分
の細胞毒性活性を以下の検定に従ってｉｎ ｖｉｔｒ
ｏにてＢ１６メラノーマ細胞を用いて評価した。
Ｂ１６・メラノーマ（高次転位連系、ＦＩＯ）を使用し
、１０％子クシ血清および１％抗生物質を補足した最小
必須培地にューヨーク州、グランド・アイランド、グラ
ンド・アイランド・バイオロジカ／Ｌ／−カンパニー（
Ｇｒａｎｄ ＩｓｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ（’
、Ｇｏ、、Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｄ、Ｎ。
、１０％子クシ血清および１％抗生物質を補足した最小
必須培地にューヨーク州、グランド・アイランド、グラ
ンド・アイランド・バイオロジカ／Ｌ／−カンパニー（
Ｇｒａｎｄ ＩｓｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ（’
、Ｇｏ、、Ｇｒａｎｄ ｌ５ｌａｎｄ、Ｎ。
Ｙ、）中、５％ＣＯ２雰囲気下、湿潤インキュベーター
中、３７℃で、単層培養として維持した。細胞の非同調
集団を採取し、６０ｍｔｙｒの滅菌ペトリ平板に５００
０細胞／平板で平板接種した。平板を一夜培養し、平板
に細胞を付着させた。細胞を無菌状態下ＡＴＣＣ５３２
７０（７）粗製フロスマタハＡ′ｒＣＣ５３２７０の精
製活性成分で処理し、１時間または２４時間作用させた
後、培地を吸引除去した。平板を一度、リン酸塩緩衝生
理食塩水（ＰＢＳ ） ５ 、／で洗浄した後、培地を
吸引除去した。平板を、Ｃ（）２ インキュベーター
中、新しい培地および血清を用いて３７℃で５日間培養
した。５０細胞以上のコロニーを形成する細胞の能力で
生育力を測定した。コロニーを９５％エタノール中、０
．５％クリスタルバイオレットで固定させた。平板を乾
燥し、ニュー・プランズクイック・サイエンティフィッ
ク・カンパニーのバイオトラン■オートマチック・カウ
ント・トータライザ−（Ｂｉｏｃｍｎ］１［Ａｕｔｏｍ
ａｔｉｃ Ｃｏｕｎｔ Ｔｏｔａｌｉｚｅｒ（ＮｅｗＢ
ｒｕｎｓｗｉｃｋ ５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ、
、Ｅｄｉｓｏｎ。
中、３７℃で、単層培養として維持した。細胞の非同調
集団を採取し、６０ｍｔｙｒの滅菌ペトリ平板に５００
０細胞／平板で平板接種した。平板を一夜培養し、平板
に細胞を付着させた。細胞を無菌状態下ＡＴＣＣ５３２
７０（７）粗製フロスマタハＡ′ｒＣＣ５３２７０の精
製活性成分で処理し、１時間または２４時間作用させた
後、培地を吸引除去した。平板を一度、リン酸塩緩衝生
理食塩水（ＰＢＳ ） ５ 、／で洗浄した後、培地を
吸引除去した。平板を、Ｃ（）２ インキュベーター
中、新しい培地および血清を用いて３７℃で５日間培養
した。５０細胞以上のコロニーを形成する細胞の能力で
生育力を測定した。コロニーを９５％エタノール中、０
．５％クリスタルバイオレットで固定させた。平板を乾
燥し、ニュー・プランズクイック・サイエンティフィッ
ク・カンパニーのバイオトラン■オートマチック・カウ
ント・トータライザ−（Ｂｉｏｃｍｎ］１［Ａｕｔｏｍ
ａｔｉｃ Ｃｏｕｎｔ Ｔｏｔａｌｉｚｅｒ（ＮｅｗＢ
ｒｕｎｓｗｉｃｋ ５ｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｃｏ、
、Ｅｄｉｓｏｎ。
Ｎ、 Ｊ、 ）：ｌで計数した。各薬剤濃度について３
連のサンプルの平均値および標準偏差を測定した。ブロ
ス希釈度または薬剤濃度に対する生存関数（薬剤処理平
板のコロニー数／対照のコロニー数）の対数をプロット
して、データを分析した。このプロットから５０悌抑制
濃度（ＩＣ５ｏ）を測定した。
連のサンプルの平均値および標準偏差を測定した。ブロ
ス希釈度または薬剤濃度に対する生存関数（薬剤処理平
板のコロニー数／対照のコロニー数）の対数をプロット
して、データを分析した。このプロットから５０悌抑制
濃度（ＩＣ５ｏ）を測定した。
ＡＡＣ−３４５は、ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分
の形態にて、細胞を該活性成分に１時間接触した場合、
０．５６μり／ｒｎｌの濃度におけるｉｎ ｖｉｔｒ。
の形態にて、細胞を該活性成分に１時間接触した場合、
０．５６μり／ｒｎｌの濃度におけるｉｎ ｖｉｔｒ。
Ｂ１６メラノーマ検定にてＢ１６細胞の生育力を５０％
まで減少させた。２４時間接触した場合の５０％細胞毒
性濃度は約０．０１μグ／−である。
まで減少させた。２４時間接触した場合の５０％細胞毒
性濃度は約０．０１μグ／−である。
したがって、本発明の抗生物質は腫瘍細胞に対し強力な
細胞毒性剤である。前記のごとく、本発明の抗生物質で
あるＡ−ＡＣ−３４５は腫瘍細胞成長抑制活性を有して
おり、多くの動物腫瘍モデルにて証明されている。
細胞毒性剤である。前記のごとく、本発明の抗生物質で
あるＡ−ＡＣ−３４５は腫瘍細胞成長抑制活性を有して
おり、多くの動物腫瘍モデルにて証明されている。
Ｐ３８８ ’）ンパ細胞白血病は近年、抗腫瘍剤のス
クリーニングおよび活性化合物の詳細な評価のための動
物腫瘍モデルに最も広く使用されている。
クリーニングおよび活性化合物の詳細な評価のための動
物腫瘍モデルに最も広く使用されている。
この腫瘍系は、事実上、全ての臨床上活性な抗新生物薬
に対して感受性があり、定量的で再現性があり、大規模
スクリーニングを行え、他の動物腫瘍モデルにおける活
性を予想出来るので抗腫瘍剤のスクリーニング材料とし
て広く受は入れられている。腹腔内接種（ｉＰ）Ｐ３８
８白血病モデルにおいて高活性の薬剤は一般的に他の腫
瘍モデルでも同様に活性である。ＡＴＣＣ５３２７０の
粗製ブロスおよびＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の
形態のＡＡＣ−３４５の抗腫瘍活性をつぎの実験方法を
用いてＰ３８８白血病マウスモデルで示す（ゲランら、
キャンサー・ケモセラピー・リポーツ（パー）Ｉｌｌ）
（Ｇｅｒａｎ ｅｔ ａ１ｃｍ、Ｃａｎｃｅｒ
Ｃｈｅｍｏｃｈｅｒ。
に対して感受性があり、定量的で再現性があり、大規模
スクリーニングを行え、他の動物腫瘍モデルにおける活
性を予想出来るので抗腫瘍剤のスクリーニング材料とし
て広く受は入れられている。腹腔内接種（ｉＰ）Ｐ３８
８白血病モデルにおいて高活性の薬剤は一般的に他の腫
瘍モデルでも同様に活性である。ＡＴＣＣ５３２７０の
粗製ブロスおよびＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の
形態のＡＡＣ−３４５の抗腫瘍活性をつぎの実験方法を
用いてＰ３８８白血病マウスモデルで示す（ゲランら、
キャンサー・ケモセラピー・リポーツ（パー）Ｉｌｌ）
（Ｇｅｒａｎ ｅｔ ａ１ｃｍ、Ｃａｎｃｅｒ
Ｃｈｅｍｏｃｈｅｒ。
Ｒｐｔｓ、（Ｐａｒｔ ｌ））、３．１〜１（１３（１
９７２）参照）。
９７２）参照）。
Ｐ３８８白血病細胞１０個をＢ ６ Ｄ ２ Ｆ１マク
スの腹腔内に接種する。２４時間後、接種物の細菌汚染
のないことが判明したら（チオグリコール酸塩ブロス中
、２４時間培養して調べる。）、動物をランダムに６群
に分け、シューボックス・ケージに入れる。ＡＴＣＣ５
３２７０の精製活性成分を適当な濃度にて０．９％Ｎａ
Ｃｌ溶液（標準生理食塩水、）に溶解して、所望の用量
を０．５ Ｔｎｌの容量中に配・分する。ＡＴＣＣ５３
２７０の粗製フロスは、希釈せずにまたは標準生理食塩
水で希釈して投与する。かかる生理食塩水溶液は、４℃
にてこはく色の瓶に貯蔵する。ＡＴＣＣ５３２７０の精
製活性成分の生理食塩水溶液、ＡＴＣＣ５３２７０の粗
製ブロスの生理食塩水溶液またはＡＴＣＣ５３２７０の
未希釈粗製ブロスを１日目から５日目まで腹腔内投与′
する（すなわち、腫瘍接種後２４時間目に処置を開始す
る）。各実験には、１群６匹の７クスからなる３群を非
処置対照群およびシスプラチン投与陽性対照群として含
む。１日目、５日目および９日目に群ごとに体重を測定
し、平均体重変化（△ｗｔ ）を毒性の目安とする。
スの腹腔内に接種する。２４時間後、接種物の細菌汚染
のないことが判明したら（チオグリコール酸塩ブロス中
、２４時間培養して調べる。）、動物をランダムに６群
に分け、シューボックス・ケージに入れる。ＡＴＣＣ５
３２７０の精製活性成分を適当な濃度にて０．９％Ｎａ
Ｃｌ溶液（標準生理食塩水、）に溶解して、所望の用量
を０．５ Ｔｎｌの容量中に配・分する。ＡＴＣＣ５３
２７０の粗製フロスは、希釈せずにまたは標準生理食塩
水で希釈して投与する。かかる生理食塩水溶液は、４℃
にてこはく色の瓶に貯蔵する。ＡＴＣＣ５３２７０の精
製活性成分の生理食塩水溶液、ＡＴＣＣ５３２７０の粗
製ブロスの生理食塩水溶液またはＡＴＣＣ５３２７０の
未希釈粗製ブロスを１日目から５日目まで腹腔内投与′
する（すなわち、腫瘍接種後２４時間目に処置を開始す
る）。各実験には、１群６匹の７クスからなる３群を非
処置対照群およびシスプラチン投与陽性対照群として含
む。１日目、５日目および９日目に群ごとに体重を測定
し、平均体重変化（△ｗｔ ）を毒性の目安とする。
各実験には、１０°〜１０５個のＰ３８８白血病細胞を
腹腔内接種した８匹のマクスからなる接種物力価測定群
も含む。
腹腔内接種した８匹のマクスからなる接種物力価測定群
も含む。
力価測定は薬剤の処理による細゛胞致死を計算するのに
使用する。マウスの死亡率を毎日調べ、４５日後に実験
を止める。終点は生存期間中央値（ＭＳ＝ｒ）および非
処置対照群に対するｕｓｒの増加百分率である延命率（
ＩＬＳ）となる。Ｐ３８８白血病細胞１０６個を腹腔内
接種した非処置対照群は、一般に、中央値として、９か
ら１１日間生存する。
使用する。マウスの死亡率を毎日調べ、４５日後に実験
を止める。終点は生存期間中央値（ＭＳ＝ｒ）および非
処置対照群に対するｕｓｒの増加百分率である延命率（
ＩＬＳ）となる。Ｐ３８８白血病細胞１０６個を腹腔内
接種した非処置対照群は、一般に、中央値として、９か
ら１１日間生存する。
ＩＬＳが２５％以上ならば、その薬剤は活性があるもの
と考えられる。
と考えられる。
ｉｎ ｖｉｖａ腹腔内Ｐ３８８−ＩＦデルにおけるＡ
ＴＣＣ５３２７０の精製活性成分およびＡＴＣＣ５３２
７０の粗製ブロスの評価の要約を次の第１表に示す。
ＴＣＣ５３２７０の精製活性成分およびＡＴＣＣ５３２
７０の粗製ブロスの評価の要約を次の第１表に示す。
第１表に示したデータか、ら、ＡＴＣＣ５３２７０の粗
製ブロスおよびＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の形
態のＡＡＣ−３４５は、全非毒性用量におけるｉｎ ｖ
ｉｖｏ腹腔内腹腔８８白血病腫瘍検定にて顕著な抗腫瘍
活性を示すことがわかる。
製ブロスおよびＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の形
態のＡＡＣ−３４５は、全非毒性用量におけるｉｎ ｖ
ｉｖｏ腹腔内腹腔８８白血病腫瘍検定にて顕著な抗腫瘍
活性を示すことがわかる。
同様に、ＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロスおよびＡＴＣ
Ｃ５３２７０の精製活性成分の形態のＡＡＣ−３４５を
以下の検定に従ってＡＤＪ−ＰＣ５形質細胞腫として公
知のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍モデルにてさらに試験した（
クリアら、ジャーナル・オブ・バイオヒミ−（Ｃ１ｅａ
ｒｅ ｅＬ ａ１ｃｍ、 Ｊ、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ ）
。
Ｃ５３２７０の精製活性成分の形態のＡＡＣ−３４５を
以下の検定に従ってＡＤＪ−ＰＣ５形質細胞腫として公
知のｉｎ ｖｉｖｏ腫瘍モデルにてさらに試験した（
クリアら、ジャーナル・オブ・バイオヒミ−（Ｃ１ｅａ
ｒｅ ｅＬ ａ１ｃｍ、 Ｊ、Ｂｉｏｃｈｉｍｉｅ ）
。
卯、８３０〜８５０（１９７８）参照）。
腫瘍細胞をＢ Ａ Ｌ Ｂ／Ｃマクス（雌）で皮下に継
代して担持させ、約２１日月に無菌的に収集し、ハンク
ス液中で細切する。ついで、該細胞をホモジナイザーで
分散させ、血球計数器で細胞濃度を４Ｘ １０６ 生育
細胞（トリパンブルー排除）／ｄに調整する。合計０．
５ｄ（２Ｘ １０６細胞）を８匹からなる群のＢＡＬＢ
／Ｃマクス（雌）の右脇腹に皮下接種する。１目抜から
１０日目抜で腹腔内投与して、腫瘍接種後約３週目（１
８〜２１日目）に目抜スで垂直直径を測定して、腫瘍の
大きさを決める。一般に、７５％以上の腫瘍成長の抑制
で、顕著な抗腫瘍活性があるといえる。陽性対照化合物
のシスプラチンは、腫瘍成長を完全に抑制する。
代して担持させ、約２１日月に無菌的に収集し、ハンク
ス液中で細切する。ついで、該細胞をホモジナイザーで
分散させ、血球計数器で細胞濃度を４Ｘ １０６ 生育
細胞（トリパンブルー排除）／ｄに調整する。合計０．
５ｄ（２Ｘ １０６細胞）を８匹からなる群のＢＡＬＢ
／Ｃマクス（雌）の右脇腹に皮下接種する。１目抜から
１０日目抜で腹腔内投与して、腫瘍接種後約３週目（１
８〜２１日目）に目抜スで垂直直径を測定して、腫瘍の
大きさを決める。一般に、７５％以上の腫瘍成長の抑制
で、顕著な抗腫瘍活性があるといえる。陽性対照化合物
のシスプラチンは、腫瘍成長を完全に抑制する。
ＡＤＪ−ＰＣ６形質細胞腫検定の結果を第２表に示す。
第２表のデータから、ＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロス
の形態および特にＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の
形態のＡＡＣ−３４５は共に全非毒性用量におけるＡＤ
Ｊ−ＰＣ５形質細胞腫検定において７５％以上の腫瘍成
長の抑制を生じる顕著な抗腫瘍活性を示すことがわかる
。
の形態および特にＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の
形態のＡＡＣ−３４５は共に全非毒性用量におけるＡＤ
Ｊ−ＰＣ５形質細胞腫検定において７５％以上の腫瘍成
長の抑制を生じる顕著な抗腫瘍活性を示すことがわかる
。
本発明の医薬組成物は、非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有
効量の本発明の高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質ＡＡＣ
−３４５および医薬上許容される不活性担体または希釈
剤からなる。これらの組成物は非経口投与に適した投与
単位形に調製される。
効量の本発明の高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質ＡＡＣ
−３４５および医薬上許容される不活性担体または希釈
剤からなる。これらの組成物は非経口投与に適した投与
単位形に調製される。
本発明の非経口投与組成物には滅菌水溶液、非水溶液、
懸濁液またはエマルジョンを包含する。
懸濁液またはエマルジョンを包含する。
該組成物は、ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の必要
最少量のジメチルアセトアミドまたはエタノール溶液、
例えば、５％≠をピーナツ油または生理食塩水で所定の
容量にしたものでもよい。ポリエトキシ化ヒマシ油、例
えば２−５％≠を活性成分の溶解に使用してもよい。さ
らに、該組成物を、例えば、ヒドロキシプロピルセルロ
ースまたは他の適当な沈澱防止剤でスラリーの形にして
もよい。乳化剤として、例えば、レシチンを使用しても
よい。該組成物は、使用直前に滅菌注射用溶媒に溶解さ
せることのできる滅菌固体の形で提供することもできる
。
最少量のジメチルアセトアミドまたはエタノール溶液、
例えば、５％≠をピーナツ油または生理食塩水で所定の
容量にしたものでもよい。ポリエトキシ化ヒマシ油、例
えば２−５％≠を活性成分の溶解に使用してもよい。さ
らに、該組成物を、例えば、ヒドロキシプロピルセルロ
ースまたは他の適当な沈澱防止剤でスラリーの形にして
もよい。乳化剤として、例えば、レシチンを使用しても
よい。該組成物は、使用直前に滅菌注射用溶媒に溶解さ
せることのできる滅菌固体の形で提供することもできる
。
本発明の組成物に用いられる本発明の高分子抗生物質の
実際の好ましい薬量は、組成物の処方、投与法および治
療すべき部位、宿主および病態により変化する。腫瘍細
胞抑制有効量の本発明の抗生物質が確実に腫瘍へ接触す
るように内用投与経路を選択すべきである。与えられた
状況下での最適薬量は、前記実験データを参考にして、
公知の薬量決定法により定めることが出来る。非経口投
与で一般に使用される薬量は、１〜５日間に、１日当り
約１■〜約１０■／一体表面積の量であり、これを約４
週間ごとに４回繰り返す。
実際の好ましい薬量は、組成物の処方、投与法および治
療すべき部位、宿主および病態により変化する。腫瘍細
胞抑制有効量の本発明の抗生物質が確実に腫瘍へ接触す
るように内用投与経路を選択すべきである。与えられた
状況下での最適薬量は、前記実験データを参考にして、
公知の薬量決定法により定めることが出来る。非経口投
与で一般に使用される薬量は、１〜５日間に、１日当り
約１■〜約１０■／一体表面積の量であり、これを約４
週間ごとに４回繰り返す。
本発明の抗生物質に感受性の動物腫瘍細胞の成長抑制法
は、非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有効量の本発明の抗生
物質を該腫瘍細胞に罹患した宿主動物へ内用投与するこ
とからなる。前記したように、処置期間中、活性成分は
好ましくは非経口的に約１０〜〜約１００■／２の間で
選択した量を投与する。
は、非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有効量の本発明の抗生
物質を該腫瘍細胞に罹患した宿主動物へ内用投与するこ
とからなる。前記したように、処置期間中、活性成分は
好ましくは非経口的に約１０〜〜約１００■／２の間で
選択した量を投与する。
実施例
つぎに実施例を挙げて本発明をさらに詳しく説明するが
、これらに限定されるものではない。
、これらに限定されるものではない。
実施例において次の略号を用いる。
１、培地１３Ｈ
澱粉 １５ ｇ／Ｌシヨ糖
５ｇ／Ｌデキストロース
５ｇ／Ｌハイソイ（Ｈｙｓｏｙ ）
７．５ ｇ／Ｌコーン・ステイープ・
リカー ５ ｇ／ＬＫ２ＨＰＯ４１，５
ｇ／Ｌ ＮａＣＩ Ｏ，
５ｇ ／ Ｌミネラルｎ ５ｔｔ
５ ｇ ／ ＬＣａ ＣＯ３１，５ｇ
／ Ｌ ２、ミネラル″Ｓ″ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２（１２，８ｇ／ ＬＦｅ （ＮＨ４）２）（Ｃ６８５０７２，７ｇ／ＬＣ
ｕ Ｓ ０４ ・５ Ｈ２００−１２５ｇ ／ＬＭｎＳ
Ｏ，ａ 、）Ｉ２０ １．Ｏｇ／ＬＣｏ
ＣＩ２−６Ｈ２００，１ｇ／ ＬＮａ２Ｂ４０７−１０Ｈ２００，０９ｇ／ＬＮ３２Ｍ
ｏＯ４・２Ｈ２００，０５ｇ／Ｌ実施例ｌ ＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブロスの調製ＡＴＣＣ５３２
７０の寒天斜面からの全増殖物を４１のアスピレータ−
瓶中の培地１３Ｈ５００−に接種し、ついで２５０ ｒ
ｐｍおよび２インチ（５，０８ａｍ）の動程のロータリ
ー振盪機にュー・ブランズクイ・ンク・モデ／Ｌ／ （
Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ Ｍｏｄｅｌ）Ｇ５３）に
て、２８℃、５日間培養した。ついで、５日目の種を１
０ｉ！の培地１３Ｈを入れた１４／のファーメンタ−（
二ニー・ブランズクイック・モデ／Ｌ／ （Ｎｅｗ Ｂ
ｒｕｎｓｗｉ ｃｋ Ｍｏｄｅ ｌ ）１９ ）に移し
た。
５ｇ／Ｌデキストロース
５ｇ／Ｌハイソイ（Ｈｙｓｏｙ ）
７．５ ｇ／Ｌコーン・ステイープ・
リカー ５ ｇ／ＬＫ２ＨＰＯ４１，５
ｇ／Ｌ ＮａＣＩ Ｏ，
５ｇ ／ Ｌミネラルｎ ５ｔｔ
５ ｇ ／ ＬＣａ ＣＯ３１，５ｇ
／ Ｌ ２、ミネラル″Ｓ″ ＺｎＳＯ４・７Ｈ２（１２，８ｇ／ ＬＦｅ （ＮＨ４）２）（Ｃ６８５０７２，７ｇ／ＬＣ
ｕ Ｓ ０４ ・５ Ｈ２００−１２５ｇ ／ＬＭｎＳ
Ｏ，ａ 、）Ｉ２０ １．Ｏｇ／ＬＣｏ
ＣＩ２−６Ｈ２００，１ｇ／ ＬＮａ２Ｂ４０７−１０Ｈ２００，０９ｇ／ＬＮ３２Ｍ
ｏＯ４・２Ｈ２００，０５ｇ／Ｌ実施例ｌ ＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブロスの調製ＡＴＣＣ５３２
７０の寒天斜面からの全増殖物を４１のアスピレータ−
瓶中の培地１３Ｈ５００−に接種し、ついで２５０ ｒ
ｐｍおよび２インチ（５，０８ａｍ）の動程のロータリ
ー振盪機にュー・ブランズクイ・ンク・モデ／Ｌ／ （
Ｎｅｗ Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ Ｍｏｄｅｌ）Ｇ５３）に
て、２８℃、５日間培養した。ついで、５日目の種を１
０ｉ！の培地１３Ｈを入れた１４／のファーメンタ−（
二ニー・ブランズクイック・モデ／Ｌ／ （Ｎｅｗ Ｂ
ｒｕｎｓｗｉ ｃｋ Ｍｏｄｅ ｌ ）１９ ）に移し
た。
４１！／分で曝気し、４００ｒｐｍで攪拌しながら、２
８℃にて醗酵を行なった。エッチ・エフ・バータスラ、
アンチマイクロバイアル・エージエンツ・ケモセラピ−
（ＨｌＦ、Ｂａｒｔｕｓ ｅｔ ａｔ、、Ａｎｔｉｍｉ
ｃｒｏｂ。
８℃にて醗酵を行なった。エッチ・エフ・バータスラ、
アンチマイクロバイアル・エージエンツ・ケモセラピ−
（ＨｌＦ、Ｂａｒｔｕｓ ｅｔ ａｔ、、Ａｎｔｉｍｉ
ｃｒｏｂ。
Ａｇｅｎｔｓ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ−）、 ２Ｓ＋
６２２〜６２５（１９８４）に記載されているようなバ
イオケミカル・インダクション・アッセイ（ＢＩ・Ａ）
活性に基づいて７７時間で醗酵物を採取した。第１図は
ＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブロスの醗酵特性を示すグラ
フであり、時間（ｐＨ測定を含む）に対するＡＴＣＣ５
３２７０の増殖および時間に対するＡＴＣＣ５３２７０
の醗酵ブロスの活性、すなわち、該醗酵ブロスがＢＩＡ
にて活性を保持している最高希釈度を比較している。
６２２〜６２５（１９８４）に記載されているようなバ
イオケミカル・インダクション・アッセイ（ＢＩ・Ａ）
活性に基づいて７７時間で醗酵物を採取した。第１図は
ＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブロスの醗酵特性を示すグラ
フであり、時間（ｐＨ測定を含む）に対するＡＴＣＣ５
３２７０の増殖および時間に対するＡＴＣＣ５３２７０
の醗酵ブロスの活性、すなわち、該醗酵ブロスがＢＩＡ
にて活性を保持している最高希釈度を比較している。
実施例２
ＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロスの調製前記実施例１と
同様にして調製したＡｒＣＣ５３２７０の醗酵ブロスを
１４０００ ｘＧにて１５分間遠心分離し、生じたペレ
ットを廃棄した。残った上清がＡＴＣＣ５３２７０の粗
製ブロスである。
同様にして調製したＡｒＣＣ５３２７０の醗酵ブロスを
１４０００ ｘＧにて１５分間遠心分離し、生じたペレ
ットを廃棄した。残った上清がＡＴＣＣ５３２７０の粗
製ブロスである。
実施例３
ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の調製前記実施例２
と同様に１で調製したＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロス
を２つの分子量３００００分離カートリッジを取り付け
た限外沖過装置（アミコンＤＣ−２）に付し、約２５０
−に濃縮した。ついで残留物を等蚤の水で４回透析濾過
した。透析沖過終了後、残留物は次の精製工程に進む前
に凍結して貯蔵した。凍結した貯蔵物を解凍後、８００
０ｘＧにて３０分間遠心分離していずれの沈澱物も除去
した。得られた清澄残留物はＡＴＣＣ５３２７０の濃縮
粗製ブロスである。清澄残留物（ＡＴＣＣ５３２７０の
濃縮粗製ブロス）を暗室中４℃にて、予め０．０５Ｍ）
リス−酢酸塩緩衝液（ｐＨ８，３）を用いて平衡にした
ＤＥＡＥ−トＩＪスアクリルＭ。
と同様に１で調製したＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロス
を２つの分子量３００００分離カートリッジを取り付け
た限外沖過装置（アミコンＤＣ−２）に付し、約２５０
−に濃縮した。ついで残留物を等蚤の水で４回透析濾過
した。透析沖過終了後、残留物は次の精製工程に進む前
に凍結して貯蔵した。凍結した貯蔵物を解凍後、８００
０ｘＧにて３０分間遠心分離していずれの沈澱物も除去
した。得られた清澄残留物はＡＴＣＣ５３２７０の濃縮
粗製ブロスである。清澄残留物（ＡＴＣＣ５３２７０の
濃縮粗製ブロス）を暗室中４℃にて、予め０．０５Ｍ）
リス−酢酸塩緩衝液（ｐＨ８，３）を用いて平衡にした
ＤＥＡＥ−トＩＪスアクリルＭ。
イオン交換カラム（ＬＫＢ１内径５ ｃｍ （ＩＤ）
ｘ長さ１５ｃｍ）に付した。カラムを８．ｎｌ／分の流
量にて流し、溶出液をＵＶ検出器により、２２０ ｎｍ
、２アブソーバンス・ユニット・フル・スケール（ＡＵ
ＦＳ）にて追跡した。カラムを引き続きトリス−酢酸塩
緩衝液５６０ｍ／、）ＩＪスス−酸塩緩衝液中５ Ｑ
ｍＭ ＮａＣ１５２０ｍ１ｃｍトリス−酢酸塩緩衝液中
１００ｍＭ ＮａＣ１３５０ｍ１ｃｍ トリス−酢酸
塩緩衝液中１５０ｍＭＮａＣ１３５０ｍｌおよび最後に
トリス−酢酸塩緩衝液中２００ ｍＭ ＮａＣ１２７０
４にて溶出した。生物活性生成物は生物検定（後記実施
例４Ｃと同様にして）および２００ｍＭ ＮａＣ１＋ト
リス−酢酸塩溶出液中高圧液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）により検出した。生物活性フラクションは、２
個のｌＱＫＭＷ分離カートリッジを取り付けた限外沖過
装置（アミコンＤＣ−２）を用いて該フラクションを等
量の水で１５回透析ｒ過することにより脱塩した。つい
で脱塩した残留物を凍結乾燥した。ついで凍結乾燥粉末
（２７５１１９）をｐＨ６，３にて０．０５ＭＩＪン酸
カリウム緩衝液に溶解し、アルテックス・スフエロゲル
（ＡｌｔｅｘＳｐｈｅ ｒｏｇｅ ｌ（！１ｌｌ） Ｔ
ＳＫ−３０００ＳＷ ｔ） ５ Ａ （ヘ”）クマン・
インストルメンツ社製、２１．５ｍｇｘ ６０、（長さ
））に１／４ずっ注入し、溶出液を５−／ ｍ ｉ ｎ
の流量で２２０ ｎｍ 、 ２ＡＵＦＳにてＵＶ検出
器により追跡した。ついで生物活性フラクションを１０
ｇＭＷ分離膜を用いて４８時間水（２Ｘ２ｔ）で透析す
ることにより脱塩した。脱塩した残留物を凍結乾燥し約
４５キの純粋（〉９５％）な生物活性生成物を得た。生
成物（すなわち、ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分）
の均質性は、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、ＨＰＬＣ、アミ
ノ末端アミノ酸分析および等電点電気泳動により測定し
た。
ｘ長さ１５ｃｍ）に付した。カラムを８．ｎｌ／分の流
量にて流し、溶出液をＵＶ検出器により、２２０ ｎｍ
、２アブソーバンス・ユニット・フル・スケール（ＡＵ
ＦＳ）にて追跡した。カラムを引き続きトリス−酢酸塩
緩衝液５６０ｍ／、）ＩＪスス−酸塩緩衝液中５ Ｑ
ｍＭ ＮａＣ１５２０ｍ１ｃｍトリス−酢酸塩緩衝液中
１００ｍＭ ＮａＣ１３５０ｍ１ｃｍ トリス−酢酸
塩緩衝液中１５０ｍＭＮａＣ１３５０ｍｌおよび最後に
トリス−酢酸塩緩衝液中２００ ｍＭ ＮａＣ１２７０
４にて溶出した。生物活性生成物は生物検定（後記実施
例４Ｃと同様にして）および２００ｍＭ ＮａＣ１＋ト
リス−酢酸塩溶出液中高圧液体クロマトグラフィー（Ｈ
ＰＬＣ）により検出した。生物活性フラクションは、２
個のｌＱＫＭＷ分離カートリッジを取り付けた限外沖過
装置（アミコンＤＣ−２）を用いて該フラクションを等
量の水で１５回透析ｒ過することにより脱塩した。つい
で脱塩した残留物を凍結乾燥した。ついで凍結乾燥粉末
（２７５１１９）をｐＨ６，３にて０．０５ＭＩＪン酸
カリウム緩衝液に溶解し、アルテックス・スフエロゲル
（ＡｌｔｅｘＳｐｈｅ ｒｏｇｅ ｌ（！１ｌｌ） Ｔ
ＳＫ−３０００ＳＷ ｔ） ５ Ａ （ヘ”）クマン・
インストルメンツ社製、２１．５ｍｇｘ ６０、（長さ
））に１／４ずっ注入し、溶出液を５−／ ｍ ｉ ｎ
の流量で２２０ ｎｍ 、 ２ＡＵＦＳにてＵＶ検出
器により追跡した。ついで生物活性フラクションを１０
ｇＭＷ分離膜を用いて４８時間水（２Ｘ２ｔ）で透析す
ることにより脱塩した。脱塩した残留物を凍結乾燥し約
４５キの純粋（〉９５％）な生物活性生成物を得た。生
成物（すなわち、ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分）
の均質性は、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）、ＨＰＬＣ、アミ
ノ末端アミノ酸分析および等電点電気泳動により測定し
た。
実施例４
ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分の特性本発明の新規
な高分子腫瘍細胞成長抑制および細胞毒性抗生物質ＡＡ
Ｃ−３４５は、いくつかの顕著な特性を有している。か
かる特性として以下のものが挙げられる。
な高分子腫瘍細胞成長抑制および細胞毒性抗生物質ＡＡ
Ｃ−３４５は、いくつかの顕著な特性を有している。か
かる特性として以下のものが挙げられる。
ａ）性状
ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分は白色無定形粉末で
ある。この特性は目視観察により調べた。
ある。この特性は目視観察により調べた。
ｂ）溶解性
本発明の抗生物質は水に可溶である。この特性はＡＴＣ
Ｃ５３２７０の精製活性成分１■を水、１艷に溶解させ
ることにより調べた。
Ｃ５３２７０の精製活性成分１■を水、１艷に溶解させ
ることにより調べた。
Ｃ）安定性
本発明の抗生物質は水溶液中で光に感受性であるが、凍
結乾燥粉末として安定である。これらの特性は、前記実
施例２のＡＴＣＣ５３２７０の活性成分の精製の工程の
間の活性カラムフラクションの不安定性により調べた。
結乾燥粉末として安定である。これらの特性は、前記実
施例２のＡＴＣＣ５３２７０の活性成分の精製の工程の
間の活性カラムフラクションの不安定性により調べた。
かかる不安定性は、バチルス・ズブチリス（Ｂ、５ｕｂ
ｔｉ目ｓ ） （ＡＴＣＣ６６３３）を接種し、３７℃
にて一夜培養した寒天平板を用いてディスクカラムフラ
クション（ディスク６．３５ＩＩＮ中２５μｌ）により
行なうバチルス・ズブチリス（Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ
）に対する生物活性検定により判定した。
ｔｉ目ｓ ） （ＡＴＣＣ６６３３）を接種し、３７℃
にて一夜培養した寒天平板を用いてディスクカラムフラ
クション（ディスク６．３５ＩＩＮ中２５μｌ）により
行なうバチルス・ズブチリス（Ｂ、 ５ｕｂｔｉｌｉｓ
）に対する生物活性検定により判定した。
ｄ）分子量
本発明の抗生物質は約４２０００ダルトンの分子量を有
する。この特性はラエムリ（Ｌａｅｍｍｌ ｉ ）１２
．５％ゲルを用いてドデシル硫酸ナトリウムポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（５０５＋ＰＡＧＥ）により測定
した（ラエムリ、ネイチャー（Ｌａｅｙｎｍｌｉ 。
する。この特性はラエムリ（Ｌａｅｍｍｌ ｉ ）１２
．５％ゲルを用いてドデシル硫酸ナトリウムポリアクリ
ルアミドゲル電気泳動（５０５＋ＰＡＧＥ）により測定
した（ラエムリ、ネイチャー（Ｌａｅｙｎｍｌｉ 。
Ｎａｔｕｒｅ ） 、 ２７７ 、６８０ （１９７０
）参照）。
）参照）。
ｅ）等電点
本発明の抗生物質の等電点（ＮＩ）は２．９である。
この特性は高性能分析用電気泳動用ＬＫＢ １８１８
Ｐインストラクションシートを用いて測定した。
Ｐインストラクションシートを用いて測定した。
ｆ）炭水化物含量
本発明の抗生物質の炭水化物含量は１２％である。この
特性は、メソツズ・イン・エンザイモロジ−（Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 、 （ＪＪ、
９３ （１９５７）、コロクイックら（編）、アカデミ
ツク・プレス（Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ｅｔ ａ（、（Ｅｄ
、）、 Ａｃａｄｅｍｉｃ ＰｒｅｓｓχＮ、Ｙ、に記
載されたフェノール／硫酸法により測定した。
特性は、メソツズ・イン・エンザイモロジ−（Ｍｅｔｈ
ｏｄｓ ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ 、 （ＪＪ、
９３ （１９５７）、コロクイックら（編）、アカデミ
ツク・プレス（Ｃｏｌｏｗｉｃｋ ｅｔ ａ（、（Ｅｄ
、）、 Ａｃａｄｅｍｉｃ ＰｒｅｓｓχＮ、Ｙ、に記
載されたフェノール／硫酸法により測定した。
ｇ）高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）本発明の
抗生物質は、ベックマン・モデル３４５／１６５ＨＰＬ
Ｃ装置を用い、０．０５Ｍリン酸カルシクム緩衝液（ｐ
Ｈ６，３）によりアルテックス・スフエロゲルＴＳＫ−
３０００ＳＷカラム（保護カラムを有する通し番号４に
７９３ ） （７，５ｔｘｔｘｘ ３００ｇ）から溶出
した。１−７分の流量にて１１．５分後、２２０ ｎｍ
および２８０ ｎｍ 、 ０． Ｉ ＡＵＦＳニテｔ’
−クを検出した。
抗生物質は、ベックマン・モデル３４５／１６５ＨＰＬ
Ｃ装置を用い、０．０５Ｍリン酸カルシクム緩衝液（ｐ
Ｈ６，３）によりアルテックス・スフエロゲルＴＳＫ−
３０００ＳＷカラム（保護カラムを有する通し番号４に
７９３ ） （７，５ｔｘｔｘｘ ３００ｇ）から溶出
した。１−７分の流量にて１１．５分後、２２０ ｎｍ
および２８０ ｎｍ 、 ０． Ｉ ＡＵＦＳニテｔ’
−クを検出した。
ｈ）吸光係数
本発明の抗生物質は、２２０ｎｍ（ＵＶλｔｎａＸ）に
て２１．６および２７５ ｎｍ （Ｕｖ２ｍａｘ ）に
て３・０の吸光係数を有する。この特性は、１−の水に
ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分１■を溶解し、ベッ
クマンＤＵ−７分光光度計にてＩＣＩＩ＋の光路長のセ
ルを用いてＵＶ分光を行なうことにより測定した。
て２１．６および２７５ ｎｍ （Ｕｖ２ｍａｘ ）に
て３・０の吸光係数を有する。この特性は、１−の水に
ＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成分１■を溶解し、ベッ
クマンＤＵ−７分光光度計にてＩＣＩＩ＋の光路長のセ
ルを用いてＵＶ分光を行なうことにより測定した。
ｉ）アミノ酸分析
本発明の抗生物質は以下のアミノ酸含量を有する。
アミノ酸 ピコモルアスパ
ラギン酸（ａ８Ｐ） ２８６２．４グ
ルタミン酸（ｇｌｕ） １５２４．
４セリン（ｓｅｒ ） １１３５
．８グリシン（ｇｌｙ ） １５
０４．９ヒスチジン（ｈｉｓ ）
４１．３アルギニン（ａｒｇ ）
１０７．４スレオニン（ｔｈｒ ）
２０９７．８アラニン（ａｌａ ）
１７６５．７プロリ７ （ｐｒｏ ）
７９３．８チロシン（【γｒ
） １３４．５アミノ酸
ピコモルバリン（ｖａｌ ）
１８２２．８メチオニン（ｍｅｔ
） ２２３．９イソロイシフ
（ｉｌｅ ） ４５６．３０イシン
（置ｅｕ） ３０７．０フエニ
ルアラニン（ｐｈｅ ） ２９８．２リ
ジン（ｌｙｓ ） ４９．
４アミノ酸分析は、クオーターズ・アソシエイッ・オペ
レーターズ・マニュアル＃ ８６７４６ （１９８４年
５月）および＋ ８８１４０ （１９８４年６月）に記
載されている［ピコタッグ（ｐｉｃｏ ｔａｇ ） Ｊ
法を用いることにより測定した。
ラギン酸（ａ８Ｐ） ２８６２．４グ
ルタミン酸（ｇｌｕ） １５２４．
４セリン（ｓｅｒ ） １１３５
．８グリシン（ｇｌｙ ） １５
０４．９ヒスチジン（ｈｉｓ ）
４１．３アルギニン（ａｒｇ ）
１０７．４スレオニン（ｔｈｒ ）
２０９７．８アラニン（ａｌａ ）
１７６５．７プロリ７ （ｐｒｏ ）
７９３．８チロシン（【γｒ
） １３４．５アミノ酸
ピコモルバリン（ｖａｌ ）
１８２２．８メチオニン（ｍｅｔ
） ２２３．９イソロイシフ
（ｉｌｅ ） ４５６．３０イシン
（置ｅｕ） ３０７．０フエニ
ルアラニン（ｐｈｅ ） ２９８．２リ
ジン（ｌｙｓ ） ４９．
４アミノ酸分析は、クオーターズ・アソシエイッ・オペ
レーターズ・マニュアル＃ ８６７４６ （１９８４年
５月）および＋ ８８１４０ （１９８４年６月）に記
載されている［ピコタッグ（ｐｉｃｏ ｔａｇ ） Ｊ
法を用いることにより測定した。
ｊ）部分的アミノ酸配列
本発明の抗生物質は、次の部分アミノ酸暗号配列（Ｎ末
端から開始） ： ａｓｐ−ｔｈｒ−ｖａｌ−ｔｈｒ−
ｖａｌを有する。かかる部分的配列は、ジ・オペレータ
ーズ・マニュアル・オブ・モデル・４７０Ａ・プロティ
ン・シークエンサー（アプライド・バイオシステムズ・
インコーポレーテイッド） （ｔｈｅＯｐｅｒａｔｏｒ
’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｏｄｅｌ ４７ＱＡ
ＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅｒ （Ａｐｐ目ｅｄ
Ｂ＋ｏｓｙｓｉｅｍｓ、 Ｉｎｃ−） ）より決定し
た。
端から開始） ： ａｓｐ−ｔｈｒ−ｖａｌ−ｔｈｒ−
ｖａｌを有する。かかる部分的配列は、ジ・オペレータ
ーズ・マニュアル・オブ・モデル・４７０Ａ・プロティ
ン・シークエンサー（アプライド・バイオシステムズ・
インコーポレーテイッド） （ｔｈｅＯｐｅｒａｔｏｒ
’ｓ Ｍａｎｕａｌ ｏｆ Ｍｏｄｅｌ ４７ＱＡ
ＰｒｏｔｅｉｎＳｅｑｕｅｎｃｅｒ （Ａｐｐ目ｅｄ
Ｂ＋ｏｓｙｓｉｅｍｓ、 Ｉｎｃ−） ）より決定し
た。
実施例５
医薬組成物
本発明の組成物の代表的具体例としては、前記実施例３
と同様にして調製したＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成
分を滅菌水溶液に溶解し、ＡＡＣ−３４５に感受性の腫
瘍細胞に罹患している宿主動物に対し１用ｆｆ１ｌＯ■
／ｒｒｔを非経口投与する。
と同様にして調製したＡＴＣＣ５３２７０の精製活性成
分を滅菌水溶液に溶解し、ＡＡＣ−３４５に感受性の腫
瘍細胞に罹患している宿主動物に対し１用ｆｆ１ｌＯ■
／ｒｒｔを非経口投与する。
第１図はＡＴＣＣ５３２７０の醗酵ブロスの醗酵特性を
示すグラフである。 ｐａｔｅｍ願人 ヌミヌクライン・ベックマン・コーポ
レインヨン − 代理人弁理士 青白 葆ほか２名 第１図 呵 閾
示すグラフである。 ｐａｔｅｍ願人 ヌミヌクライン・ベックマン・コーポ
レインヨン − 代理人弁理士 青白 葆ほか２名 第１図 呵 閾
Claims (17)
- （１）ＡＴＣＣ５３２７０またはその活性突然変異体も
しくは誘導体を、高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質の回
収可能量が産生されるまで深部好気性条件下、同化でき
る炭素および窒素源を含有する水性栄養培地中にて培養
し、かかる培養により産生された醗酵ブロスから該抗生
物質を単離することにより産生される高分子腫瘍細胞成
長抑制抗生物質。 - （２）ＡＡＣ−３４５である前記第（１）項の抗生物質
。 - （３）ＡＴＣＣ５３２７０またはその活性突然変異体も
しくは誘導体を、ＡＡＣ−３４５の回収可能量が産生さ
れるまで深部好気性条件下同化できる炭素および窒素源
を含有する水性栄養培地中にて培養し、かかる培養によ
り産生された醗酵ブロスから粗製ブロスを単離すること
により産生されるＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロス。 - （４）ＡＴＣＣ５３２７０またはその活性突然変異体も
しくは誘導体を、ＡＡＣ−３４５の回収可能量が産生さ
れるまで、深部好気性条件下同化できる炭素および窒素
源を含有する水性栄養培地中にて培養しおよびかかる培
養により産生された醗酵ブロスから濃縮粗製ブロスを単
離することにより産生されるＡＴＣＣ５３２７０の濃縮
粗製ブロス。 - （５）以下の特性： 性状：白色無定形粉末 溶解性：水に可溶 安定性：水溶液中にて光に感受性、凍結乾燥粉末として
安定 分子量：ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより〜４２０００等電点：
ｐＩ＝２．９ 炭水化物含量：フェノール／硫酸法により１２％ＨＰＬ
Ｃ：保持時間１１．５分；ＴＳＫ−３０００ＳＷカラム
（７．５ｍｍ×３０ｃｍ）；移動相Ｏ０．０５Ｍリン酸
カリウム緩衝液（ｐＨ６．３）；流量１ｍｌ／ｍｉｎ；
検出波長２２０ｎｍおよび２８０ｎｍ ＵＶλｍａｘ（Ｅ＿１＿ｃ＿ｍ水中１％）：２２０ｎｍ
（２１．６）；２７５ｎｍ（３．０） アミノ酸分析（ピコモル）：Ａ＿Ｓ＿Ｐ（２８６２．４
）、Ｇｌｕ（１５２４．４）、Ｓｅｒ（１１３５．８）
、Ｇｌｙ（１５０４．９）、Ｈｉｓ（４１．３）、Ａｒ
ｇ（１０７．４）、Ｔｈｒ（２０９７．８）、Ａｌａ（
１７６５．７）、Ｐｒｏ（７９３．８）、Ｔｙｒ（１３
４．５）、Ｖａｌ（１８２２．８）、Ｍｅｔ（２２３．
９）、Ｉｌｅ（４５６．３）、Ｌｅｕ（３０７．０）、
Ｐｈｅ（２９８．２）、Ｌｙｓ（４９．４）部分的アミ
ノ酸配列：【アミノ酸配列があります】を有する高分子
腫瘍細胞成長抑制抗生物質 ＡＡＣ−３４５。 - （６）ＡＴＣＣ５３２７０ならびにその活性突然変異体
および誘導体の同定特性を有する微生物の生物学的に純
粋な培養。 - （７）非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有効量の高分子腫瘍
細胞成長抑制抗生物質および医薬上許容される不活性担
体または希釈剤からなり、該抗生物質が、ＡＴＣＣ５３
２７０またはその活性突然変異体もしくは誘導体を、該
抗生物質の回収可能量が産生されるまで深部好気性条件
下同化できる炭素および窒素源を含有する水性栄養培地
中にて培養しおよびかかる培養により産生された醗酵ブ
ロスから該抗生物質を単離することにより産生されるこ
とを特徴とする医薬組成物。 - （８）該抗生物質がＡＡＣ−３４５である前記第（７）
項の医薬組成物。 - （９）非毒性かつ腫瘍細胞成長抑制有効量のＡＡＣ−３
４５および医薬上許容される不活性担体または希釈剤か
らなり、該ＡＡＣ−３４５が以下の特性：性状：白色無
定形粉末 溶解性：水に可溶 安定性：水溶液中にて光に感受性、凍結乾燥粉末として
安定 分子量：ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより〜４２０００等電点：
ｐＩ＝２．９ 炭水化物含量：フェノール／硫酸法により１２％ＨＰＬ
Ｃ：保持時間１１．５分；ＴＳＫ−３０００ＳＷカラム
（７．５ｍｍ×３０ｃｍ）；移動相０．０５Ｍリン酸カ
リウム緩衝液（ｐＨ６．３）；流量１ｍｌ／ｍｉｎ；検
出波長２２０ｎｍおよび２８０ｎｍ ＵＶ＿λ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ＿１＿ｃ＿ｍ水中１％）：２
２０ｎｍ（２１．６）；２７５ｎｍ（３．０） アミノ酸分析（ピコモル）：Ａ＿Ｓ＿Ｐ（２８６２．４
）、Ｇｌｕ（１５２４．４）、Ｓｅｒ（１１３５．８）
、Ｇｌｙ（１５０４．９）、Ｈｉｓ（４１．３）、Ａｒ
ｇ（１０７．４）、Ｔｈｒ（２０９７．８）、Ａｌａ（
１７６５．７）、Ｐｒｏ（７９３．８）、Ｔｙｒ（１３
４．５）、Ｖａｌ（１８２２．８）、Ｍｅｔ（２２３．
９）、Ｉｌｅ（４５６．３）、Ｌｅｕ（３０７０）、Ｐ
ｈｅ（２９８．２）、Ｌｙｓ（４９．４）部分的アミノ
酸配列：【アミノ酸配列があります】を有することを特
徴とする医薬組成 物。 - （１０）該組成物が非経口投与用の投与単位形である前
記第（９）項の組成物。 - （１１）該非経口投与単位が約１〜約１０ｍｇ／ｍ＾２
体表面積の投与用である前記第（１０）項の組成物。 - （１２）ＡＴＣＣ５３２７０またはその活性突然変異体
もしくは誘導体を、高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質の
回収可能量が産生されるまで深部好気性条件下同化でき
る炭素および窒素源を含有する水性栄養培地中にて培養
しおよびかかる培養により産生された醗酵ブロスから該
抗生物質を単離することを特徴とする高分子腫瘍細胞成
長抑制抗生物質の製造法。 - （１３）該抗生物質がＡＡＣ−３４５である前記第（１
２）項の抗生物質の製造法。 - （１４）ＡＴＣＣ５３２７０またはその活性突然変異体
もしくは誘導体を、ＡＡＣ−３４５の回収可能量が産生
されるまで深部好気性条件下同化できる炭素および窒素
源を含有する水性栄養培地中にて培養しおよびかかる培
養により産生された醗酵ブロスから粗製ブロスを単離す
ることを特徴とするＡＴＣＣ５３２７０の粗製ブロスの
製造法。 - （１５）ＡＴＣＣ５３２７０またはその活性突然変異体
もしくは誘導体を、ＡＡＣ−３４５の回収可能量が産生
されるまで、深部好気性条件下同化できる炭素および窒
素源を含有する水性栄養培地中にて培養しおよびかかる
培養により産生された醗酵ブロスから濃縮粗製ブロスを
単離することを特徴とするＡＴＣＣ５３２７０の濃縮粗
製ブロスの製造法。 - （１６）ＡＴＣＣ５３２７０またはその活性突然変異体
もしくは誘導体を、高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質Ａ
ＡＣ−３４５の回収可能量が産生されるまで深部好気性
条件下同化できる炭素および窒素源を含有する水性栄養
培地中にて培養しおよびかかる培養により産生された醗
酵ブロスから該抗生物質を単離することを特徴とする以
下の特性： 性状：白色無定形粉末 溶解性：水に可溶 安定性：水溶液中にて光に感受性、凍結乾燥粉末として
安定 分子量：ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより〜４２０００等電点：
ｐＩ＝２．９ 炭水化物含量：フェノール／硫酸法により１２％ＨＰＬ
Ｃ：保持時間１１．５分；ＴＳＫ−３０００ＳＷカラム
（７．５ｍｍ×３０ｃｍ）；移動相０．０５Ｍリン酸カ
リウム緩衝液（ｐＨ６．３）；流量１ｍｌ／ｍｉｎ；検
出波長２２０ｎｍおよび２８０ｎｍ ＵＶ＿λ＿ｍ＿ａ＿ｘ（Ｅ＿１＿ｃ＿ｍ水中１％）：２
２０ｎｍ（２１．６）；２７５ｎｍ（３．０） アミノ酸分析（ピコモル）：Ａ＿Ｓ＿Ｐ（２８６２．４
）、Ｇｌｕ（１５２４．４）、Ｓｅｒ（１１３５．８）
、Ｇｌｙ（１５０４．９）、Ｈｉｓ（４１．３）、Ａｒ
ｇ（１０７．４）、Ｔｈｒ（２０９７．８）、Ａｌａ（
１７６５．７）、Ｐｒｏ（７９３．８）、Ｔｙｒ（１３
４．５）、Ｖａｌ（１８２２．８）、Ｍｅｔ（２２３．
９）、Ｉｌｅ（４５６．３）、Ｌｅｕ（３０７．０）、
Ｐｈｅ（２９８．２）、Ｌｙｓ（４９．４）部分的アミ
ノ酸配列：【アミノ酸配列があります】を有する高分子
腫瘍細胞成長抑制抗生物質 ＡＡＣ−３４５の製造法。 - （１７）ＡＴＣＣ５３２７０ならびにその活性突然変異
体および誘導体の同定特性を有する微生物の生物学的に
純粋な培養の製造法。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US78129285A | 1985-09-27 | 1985-09-27 | |
| US781292 | 1985-09-27 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6272699A true JPS6272699A (ja) | 1987-04-03 |
Family
ID=25122277
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP61229476A Pending JPS6272699A (ja) | 1985-09-27 | 1986-09-26 | 高分子腫瘍細胞成長抑制抗生物質 |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0217621A3 (ja) |
| JP (1) | JPS6272699A (ja) |
| KR (1) | KR870003204A (ja) |
| AU (1) | AU6316486A (ja) |
| DK (1) | DK458386A (ja) |
| ES (1) | ES2002000A6 (ja) |
| FI (1) | FI863900A (ja) |
| GR (1) | GR862419B (ja) |
| NO (1) | NO863842L (ja) |
| PT (1) | PT83435B (ja) |
-
1986
- 1986-09-22 GR GR862419A patent/GR862419B/el unknown
- 1986-09-23 EP EP86307303A patent/EP0217621A3/en not_active Withdrawn
- 1986-09-25 PT PT83435A patent/PT83435B/pt unknown
- 1986-09-25 DK DK458386A patent/DK458386A/da not_active Application Discontinuation
- 1986-09-26 KR KR1019860008075A patent/KR870003204A/ko not_active Application Discontinuation
- 1986-09-26 NO NO863842A patent/NO863842L/no unknown
- 1986-09-26 FI FI863900A patent/FI863900A/fi not_active Application Discontinuation
- 1986-09-26 AU AU63164/86A patent/AU6316486A/en not_active Abandoned
- 1986-09-26 ES ES8602213A patent/ES2002000A6/es not_active Expired
- 1986-09-26 JP JP61229476A patent/JPS6272699A/ja active Pending
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| GR862419B (en) | 1987-01-23 |
| NO863842L (no) | 1987-03-30 |
| PT83435A (en) | 1986-12-01 |
| KR870003204A (ko) | 1987-04-15 |
| EP0217621A3 (en) | 1988-10-05 |
| DK458386A (da) | 1987-03-28 |
| EP0217621A2 (en) | 1987-04-08 |
| PT83435B (en) | 1988-10-24 |
| AU6316486A (en) | 1987-04-02 |
| FI863900A0 (fi) | 1986-09-26 |
| ES2002000A6 (es) | 1988-07-01 |
| FI863900A (fi) | 1987-03-28 |
| NO863842D0 (no) | 1986-09-26 |
| DK458386D0 (da) | 1986-09-25 |
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