JPS6267457A - 血液試料中のグリコシル化ヘモグロビンの測定法及び測定試薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、血液試料中のグリコシル化ヘモグロビンを測
定する方法、それを実施する試薬並びにこのために好適
な化合物及びその製法に関する。

従来の技術 グリコシル化されたヘモグロビン（以後これヲクリコシ
ル化ヘモグロビンと称する）は、ヘモグロビンの非酵素
的グリコシル化により生じる。通例、血液中のグリコシ
ル化ヘモグロビンの濃度は、全ヘモグロビンに対して約
５％である。糖尿病患者においてにこの濃度は２〜４倍
に高められている。

全ヘモグロビンに対するグリコシル化分の測定は、近年
、槽尿病診断時に重要になっている。

（Ｌ、ゾヨパノビック（Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ　）及びＣ
，Ｍ。

ペーターソｙ　（Ｐｅｔｅｒｓｏｎ　）　ＫよるＡｍ、
　Ｊ、　Ｍｅｄ。

７０、（１９８１）、３３１〜５３８頁参照〕。

個々のヘモグロビン分子とグルコースとの間の反応は、
赤血球の全寿命の間、即ち約１００〜２００日の間残留
する安定な反応生成物が生じる。血儒含分の短時間の変
動は、グリコシル化ヘモグロビンの濃度には決定的には
影響しない。

従って、グリコシル化ヘモグロビンの濃度は、長時間に
わたジ、正確に患者の血液中の平均的グルコース濃度に
比例する濃度を示す。全ヘモビ グロズ＼ンのグリコシル化分の測定のための多くの方法
が公知である。臨床実験室では、クロマトグラフィによ
る分離法が最も広く普及している。この際、ヘモグロビ
ンのグリコシル化分は＼クロマトグラフィカラム、マイ
クロカラム又はＨＰＬＣ法（ＨＰＬＣ＝　ｌ湧圧液体ク
ロマトグラフィ）を用いて非グリコシルｆヒ分から分離
され、この際、このカラムにはイオン交換体例えばビオ
・レックス（Ｂｉｏ　Ｒｅｘ　）　７０が光填されてい
る◇しかしながら、これらすべての方法は、…１直、温
度及びイオン１度の変化に対して非常に敏感である。従
って、最適結果を得る定めには、この分離法を非常に注
１背深く実施しなければならない（＠記文状５５２頁参
照）。

西ドイツ特許第２９５０４５７号明細書から、血液試料
中のグリコシル化ヘモグロビンを測定する方法が公知で
あり、この方法では、アロステリック作１劾子の広加の
際の血液試料の分元学幻峙性の変化がグリコシル化ヘモ
グロビンＯＵＩＪ・このために利用される。この際には
、ヘモグロビンの非グリコシル化主要分のみが影・Ｊさ
れる。

この測定される吸″ｌｆＳ度差は重要な範囲で非常に小
さい。これはくに、全ヘモグロビンのグリコシル化分が
増大する際になお僅かになる。

ビ ハプトグロビンへの強力な結合能に基づきグリコシル化
ヘモグロビンを測定する方法は、西ドイツ＃許出願公ｄ
適３？４１１４６号明細書中Ｋ　４己成されている。ハ
プトグロビンに対するグリコシル（ヒヘモグロビン及び
非グリコシル化ヘモグロビンの結合挙動のちがｌＡは、
２．５−ジホスホグリセレート、イノジットヘキサホス
フェート又はメリット酸の６≦加〈よジ強化される。し
かしながら、いずれの場合にも、もっばら、このグルコ
シル化ヘモグロビンがハプトグロビンに結合する種度に
ははつきジしなＡ０ハプトグロビン−ヘモグロビン−複
合体の簡単な分元元度創定は、西げイノ特許出願公開第
３３１４５０４号明細書により、この複合体の偽ペルオ
キシダーゼ活注（Ｐｓｅｕｄｏｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ−
ａｋｔｉｖｉｔ屋ｔ）の測定によジ可能であり、この際
、遊離の非グリコシル化ヘモグロビンの活性は、界面活
注剤添卯及び適尚な色原性基質の選択知よジ抑制される
。

この技術水準の認識のもとでは、欠の３インキユベーシ
ヨン工程を包含するグリコシル化ヘモグロビンへの同質
試験（ｈｏｍｏｇｅｎ　Ｔｅ５ｔ　）に到達する： １、尋血及びグリコシル〔ヒヘモグロビン及び非グリコ
シル１ヒヘモグロビンのヘム基ｏ固胃のＲｆヒ段階の単
−配位子形（ｅｉｎｈｅｉｔｌｉｃｈ　１ｉｇａ−ｎｄ
ｉｅｒｔｅ　Ｆｏｒｍ　）、有利にニドａシルーヘモグ
ロビンへの変換、 ２、　ハプトグロビンとＯ反応、 ５、　例えば遊離ヘモグロビンの変性及びヘモグロビン
−ハプトグロビン−複合体の４／Ｌｉオキシダーゼ活性
の反応速度論的分光測定によるλグリコシル化ヘモグロ
ビンの測定。

現在の目動分析装置は、−役に、１又は最高２のインキ
ュベーションエ哩の実施に対してのみ設計されている。

従って、臨床上の実地における前記の反応経過は、完全
には自動ｒヒはできない。相方、このような少なくとも
４ピペット工哩を包ゴする反お昼過の人手による実施の
際には、この測定の、↑Ｉ確さは、訝るし〈実施者のへ
床変に依す央まる。更に、この従来公知のグリコシル化
ヘモグロビンの測定法に、非グリコシル１ヒヘモグロビ
ンに関しても、この試演のｌ感度を下げ、較正直線の準
λを強制する測定信号を与える。

発明が解決しようとする問題点 従って、本発明の課堰は、指示反応の精確・主及び特異
性に関連する、グリコシル化ヘモグロビンの測定の感度
を改良し、完全目功試倹実施のための可能性を得ること
であつ之。

問題点と解決するための手段 この、課題は、本発明の方法によジ解決され、これは、
血液試料の化学的又は物理的処理にょジ赤血球からヘモ
グロビンと遊離させ之凌、ハプトグロビンを用いるグリ
コシル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグロビンと
の分別（Ｄｉｆｆｅｒｅｎｚｉｅｒｕｎｇ　）　’（、
ハプトグロビンを用＾て、ハプトグロビンに対するグリ
コシル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグロビンの
結合性のち力；いを従来公知の′ＰＩＪ質（で比べて著
るしく高める化合物の存在で行ない、ヘモグロビンとハ
プトグロビンとの間の反応と反応速度論的に追跡するか
又はヘモグロビンのハプトグロビンに結合したもしくは
ハプトグロビン（／ｉ：よジ結合されなかった分子ｈ　
ｆｆ１ｌＪ定することよりなる。

、　　従って、本発明の目的は、差当り、血液試料の化
学釣又は物理的処理にニジグリコモル化及ヒ非クリコり
ルｒヒヘモグロビンを赤血球から遊端させ、その後、グ
リコシル化ヘモグロビン及び非グリコシル化ヘモグロビ
ンの分別ヲ７）ブトグロビンを用いて実施し、引続き、
ヘモグロビンのグリコシル化分を測定することニジなる
、血液試料中のグリコシル化ヘモグロビンの測定法であ
り、これは、ハプトグロビンを用いるグリコシル化ヘモ
グロビンと非グリコシル化ヘモグロビンの分別金、一般
式Ｉ： Ａ（ＢＲ）ｎ　　　　　　（１） 〔式中Ａば、１個以上のヘテロ原子で、オキシシクロア
ルキル基で又は芳香族基で中折されてよい飽和又に不飽
和の、直鎖又は分枝鎖の脂肪疾炭化水素基又は芳香族基
を表わし、Ｒはヒドロキシ−、ヒドロキシアルキル−、
ヒドロキシアルキシ基、アミノ基、反応性基Ｘ１酸残基
もしくはその基又ぼ１個以上の識残基もしくはその項又
は反応性基Ｘで作間され、ヘテロ原子テ中断されて匹て
もよいアルキル−、アルコキシ−、ヒドロキシアルキル
ー又はヒドロキシア・レコキシ基を表わし、Ｂは単結合
又は、非置換又は１個以上の包の基Ｒにより置換された
芳香疾縞を表わし、ｎは２〜２０の整数であジ、この除
重々の基ＢもＲも１物質内で異なって藝てよい〕の化合
物１１以上の存在で行なうことよりなる。

Ａの定４中の飽和又ぼ不飽和の、直鎖又は分枝鎖の脂肪
族炭化水素基は、有利に２〜３０特に２〜１０Ｉ！ｌの
炭素原子を有する。

脂肪疾炭（ヒ水素金中・ｌｉすることのできるヘテロ原
子は有利に酸素及び覚醒である。

オキシシクロアルコキシ基は５〜８１固の炭素原子より
成る。基例えばオキシンクロペントキン又はオキシシク
ロヘキソキシ基が有利である。

特にオキシシクロヘキソキシ基が有利である。

オキシシクロアルコキシ基は、各々のｔＪ　−Ｃ一原子
のところで他の基Ｂ−Ｒで置壊されていてよ− Ａ及びＢの定義における芳香族基は、例えばペンゾール
又はヘテロ芳香族基例えばピリジン、フラン又はピロー
ルであってよ＾。

ｉ　Ｒ（Ｄ定ａにおけるアルキル、アルコキシ、ヒドロ
キシアルキルもしくニヒドロキシアルコキシと・は、炭
素原子数１〜１０＃に１〜６よジなる基と解すべきであ
る。特に、炭素原子数２〜５の基が有利である。大抵、
６個又ぼ４個の炭素原子と有する基が使用される。

反応性基Ｘとは、付加的助削例えばジシクロへキシルカ
ルボジイミド又は高めた温度（４０℃以上）を用いるこ
となしに、アミノ基と共有結合することができる基と解
される。有利な基ｘく、例えばアルデヒド基又はその重
亜捷酸塩付加生成物又はチオシアネート−又ぼイソチオ
シアネート基である。特にアルデヒド基が有利である。

本発明における酸残基は、π判に一〇〇ＯＨ。

−８ｏ３Ｆ（、−０８０３Ｈ、−ｐｏ３Ｈ２、−０ＰＯ
３Ｈ２、−Ｐ２０６Ｈ３、−０−Ｐ２Ｏ，Ｈ３である。

これらの酸残基の塩とじてぼ、アルカリ金属−、アルカ
リ土類金属−及びアンモニウム塩が有利である。アルカ
リ金４塩とは、特にリチウム−、ナトリウム−及びカリ
ウム塩と解すべきである。アルカリ土類金属塩は、特に
マグネシウム−、カルシウム−又はバリウム塩である。

アンモニウム塩は非Ｒ？のアンモニウムイオンを含有し
ていてよいか又は、炭素原子数１〜５のアルキル基例え
ばメチル又はエチル基によって又はアラルキル基例えば
ベンジル基により置喫されて匹るものである。ここで、
これらの禮喚分は、同じもの又は異なるものであってよ
＾。

一般式Ｉの物質は、予め又、プハプトグロビンと一諸に
冷加することができ、非グリコシル化ヘモグロビンのハ
プトグロビンへの結合を完全に抑制して、試験がグルコ
シル化ヘモグロビンに対して特異的になるような肯想外
の効果と有する。しかしながら、この物質の存在では、
ヘム基を予め単−形に変える必ヅはもはやなく、完全自
助化可能で単に２インギュベーションエ程のみを包含す
る実験が実現可能をてなる。

全ヘモグロビンのグリコシル化分金測定するこの方法は
、首当ジ漬用方法で、示血球からグリコシル化及び非グ
リコシル化ヘモグロビンを遊・推させるようにして実施
する。溶血反応拭清と同時に、一般式ＩＯ化合物１・−
重以上？祭加することができる。血液試料全物理的に処
理してグリコシル化及び非グリコシル１ヒヘモグロビン
と示血球から遊離させる場合に、試料に、予め又（・匡
こＯ工程の間に一般式■の化合物と加えることができる
。溶血された血液試料を、次いでハプトグロビン含有溶
液に添加する。この条件下でヘモグロビンのグリコシル
化分は）・ブトグロビンに結合する。ハプトグロビン−
ヘモグロビン−Ｘｉ合体のｆｆ１ｌｌ定ζ、引例き、列
えば公知方法で、遊離の非グリコシル化ヘモグロビンの
変′狂の麦のペルオキシダーゼ活性の測定により、行な
うことができる。

不発明方法ぼ、適当な緩衝剤系の存在で実施するのが有
利である。好適な緩衝剤系としては、約４．０〜８．５
有利に６．０〜７．０のＰＨ領領域作用する緩衝剤を使
用することができる。特に、隣酸塩、モルホリノエタン
スルホン９　（ＭＥＳ　）　−及びビスートＩＪスー緩
衝剤が奏を効する。

本発明の方法の特別な１実施形では、ノ・ブトグロビン
を用いるグリコシル化及び非グリコシル１ヒヘモグロビ
ンの分別は、イオン結合を構成することのできる物質の
存在で実施される。これは、次の一般式■のｆヒ合物で
ある：Ａ’　（Ｒ’　）ｎ（ＩＩ） 〔式中Ａ’Ｕ１個以上のヘテロ原子又はオキシシクロア
ルコキシ基で中断されていてよい飽和又は不瓢和の直鎖
又ぼ分枝鎖の脂肪族炭化水素基又は芳香＠基を表わし、
Ｒ′はヒドロキシ−又はアミノ基、酸残基もしくほその
塩、１個以上の酸残基もしくはその塩で置換されたアル
キル−、アルコキシ−、ヒドロキシアルキル−又ハヒド
ロキシアルコキシ基を表わし、この際−物質中の基Ｒ′
は同じもの又は異なるものであってよく、ｎは２〜２０
の整数である〕。

Ａ′支びＲ′の定産に挙げられた基に関して、Ａ及びＲ
との関係で前記のことがこれにもあてはまる。

Ｒ′の定義に記載の酸残基は、一般式Ｈの化合物では特
に、多価のアニオンを形成することのできるものが有利
である。従って一〇ＰＯ３Ｈ７及び−ＰＯ３Ｈ２がまっ
たく特別に有利である。

一般式■の■↑１」な化合物は、し１１えば０３Ｈ２ ■ Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）、−ｃ−ｏＨ ０３Ｈ２ 又ハソのアルカリ金礪−、アルカリ土類金鴎−又はアン
モニウム塩である。

一般式Ｈの定義の中のＡ′が飽和の直鎖脂肪族炭化水素
基である場合、一般式１ｅａ ＣＨ２Ｒ’ （ＣＨＲ’　）ｎ（ｌｌａ） ＣＨ２Ｒ’ 〔式中Ｒ′及びｎは前記のものを表わす〕の化合物が本
発明方法にとって有利である。

一般式１ｒａの特に有利な化合物は、例えば、ＣＨ２０
ＰＯ５Ｈ２ ＨＣ−ＯＰ０３Ｈ２ Ｈ２Ｏ５Ｐ〇−ＣＨ Ｈ２Ｏ５ＰＯ−Ｃ’−Ｈ 遮 ＨＣ−ＯＰＯ３Ｈ２ ＨＣ−〇ＰＯ３Ｈ２ ＣＨ２０ＰＯ３Ｈ２ ＣＨ２０２０３Ｈ２ ■ Ｈ２Ｏ５ＰＯ−ＣＨ ０Ｐ０３Ｈ２ＨＣ−ＯＣＨ２−ＣＨ−ＣＨ２０ＰＯ３Ｈ
２ＨＣ−ＯＰＯ３Ｈ２ ０Ｈ２０Ｐ○３Ｈ２ 又はこれらのアルカリ金員−、アルカリ土類金稙−１又
はアンモニウム塩である。これら化合物は新規である。

一般式Ｈの定義中のＡ′がオキシシクロアルコキシ基で
中断された脂肪族炭化水素である場合、本発明方法にと
って一般式ｎｂの化合物が有利である： 〔式中Ｗはヒドロキシ基、アミノ基、酸残基もしくにそ
の塩を表わし、ここで基Ｗは１物質中で同じ又は異なる
ものであってよく、Ｇ１及び０２は、同一又は異なるも
のであってよく、１個以上の基Ｗに工って置喚されて＾
でよめアルキル−又はヒドロキシアルキル基金表わす〕
。

Ｒ″′の定義における酸残基もしくにその塩にぼ、只の
定義での記載に相応する残基がこれに該当する。

Ｇ１及びＧ２の定義におけるアルキル−又はヒドロキシ
アルキル基では、炭素原子数１〜３、有利に１〜４かも
の基を苛味する。大抵は、Ｃ−原子ａ５又は４の基が使
用される。

一般式■ｂの化合物は新規である。特に有利な代表は例
えば次のものである： 又はこれらのアルカリ金員−、アルカリ土類金＠　−又
ｉ２アンモニウム堰。

一般式■の定義の中でＡ′が芳香族基である場合に、本
発明にとって、一般式Ｉｎｃの化合物が〔式中Ｒ′は一
般式Ｈに記載のものと同じである〕。

一般式１１ｃの化合物は新規である◇特に有利な代表は
、例えば次のものである： 又はこれらのアルカリ金４１−、アルカリ土類金属−又
はアンモニウム塩。

一般式ＨＸ　ｎａｌｌｂ又はＨｃの１と金物の製造は、
自体公知の方法で行なう。相応するポリオールから出発
し、適当なホスホリル化剤例えばポリ燐酸、ハロゲン＠
酸化合物又にアミド燐酸誘導体？用イテ、０ＰＯ３Ｈ２
−又：ｒｌ　０Ｐ２０．Ｈ３−基又はこれらのアルカリ
金属−、アルカリ土類金属又はアンモニウム塩が導入さ
れる〔列えばＡｄｖ、　Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、　３Ｌ、
　　７５〜１５７　（１９６３）又はＡｎｇｅｗ、　Ｃ
ｈｅｍ、　７６．７０４〜７１２（１９６４）参照〕。

この反応は、有利に、溶剤なしでか又は溶剤中、例えば
ジクロルメタン、クロロホルム、ホルムアミド、ジメチ
ルホルムアミド、ペンゾール、四塩化炭素、アセトン、
アセトニトリル、ピリシン、ルチジン又瓜コリジン中で
実施される。

ホスホリル化は、反応助剤例えば銀塩、アンモニア、置
換又は非置換のアミノ例えばトリエチルアミノ、シクロ
ヘキシルアミノ、ピペリジン、ピペリジン又はビリシン
を添加して又は添加せずに行なう。

生成物の単離は、塩として有利にバリウム塩としての沈
殿によるか又にイオン交戻クロマトグラフィによ９行な
う。

７１半らａる（ヒ合物ハ、元２５Ｎ７？、１Ｆ（−１１
３Ｃ−及び”Ｐ　−ＮＭＲ−スペクトル法並びにセルロ
ース被覆がラスプレート上での適当な緩衝削系を用いる
ピロ＠酸塩（ＭｒｅＬ　＝　１　）に対するイ気泳助度
Ｍｒ　ｅ　１により特注付けることができる。

部分的にのみホスホリル化ヒされた生成物と得るべＤｐ
ｆＡには、相応するヒドロキシ基は、一時的に、ホスホ
リル（ヒ反応の間に、適当な保護基により深膚すべきで
ある。

適当な保、！基は、殊に、アセデル−、ベンゾイル−、
ベンジル−、インプロピリデン−、シクロヘキシリデン
−又はベンジリデン苓である。

ホスホリル化の後に、これら保護基を公知方法で脱離さ
せ、保護され之アルコール官能基を再び遊離させる。

ホスホン酸誘導体は常法で製造される。特に、双生のジ
ホスホン酸比合物が、相応するカルざニル化合物と亜燐
酸及び三塩比鳴との、高沸点塔削例えばクロルベンゾー
ル中での引続く反応及び生じる中間（ヒ合物の引続く酸
性加水分解にニジ得られる。

反応温度は有利に約７０〜１４０°Ｃにすべきである。

特に１００℃付近の温度が有利である。

このような＠度で、反応時間は数時間であジ、大抵の場
合に２〜７時間である。

化合物の単離は、有利【、有機の、水と混じジうる溶剤
例えばメタノール又はエタノール中での塩としての沈設
によるか又はイオン交換クロマトグラフィにより行なう
。

脂肪族性及び芳香族性部分へのスルホン酸基の導入は、
慣用のスルホン化反応により行なう。

クロルスルホンｄｋ用りるスルホン比μ％に好適である
と立証され念。芳香疾、１換分は、有利に高められた特
に４０〜８０℃の温度で良好な収率を得るため【有利で
ある。これに反して、出発化合物の脂肪族性アルコール
官能基Ｏ０８Ｏ３Ｈ−基への変換は、低い温度有利に０
〜２０℃で既に成巧する。

カルざン駿誘導本を製造するためには、カルボキン基を
、ポリオール中に、公知方法で、例えば１吸又は２級の
アルコール官能基の良好な離脱ｏＴ能６　（Ａｂｇａｎ
ｇｏｇｒｕｐｐｅ　）　ヘの変換、この流説６ｒ能基の
シアニドによる置換及び引硬くこのニトリルの加水分解
によジ導入することができる。

良好な雌Ｉ悦町距基としてぼ、例えばアセチル−、ペン
７４イル−、ドルオールスルホニル−１ｐ−ブロムペン
ゾールスルホニル−、メタンスルホニル−又ホトリフル
オルメタンスルホニル捕がこれに該当する。これらに、
簡単な方法で、ポリオールと列えば相応する酸クロリド
又は酸無水吻との反応により導入することができる。

シアニドとの酋喫反応のために、アルカリ金１−、アル
カリ土類金｝Ａ−又ぼアンモニラムーンアニドが使用さ
れる。溶剤及びＡ択されたシアニドにＬ６じて、この反
応は、均一（ｈｏｍｏｇｅｎ）又は不均一（ｈｅｔｅｒ
ｏｇｅｎ　）泊注下で一列えば相伝醪触媒のもとで行な
うことができる。

中１ＩＪ１体として生じるニトリルの７ワｕ水分解は、
酸性でも堰塙注でも可能である。塩基性条件をＡ択する
のが有利である。

生成物の単離は、塩、有利にバリウム塩としての沈殿又
はイオン交換クロマトグラフィによジ行なう。

部分的にのみカルざキシル化された生成物を得るべき際
には、相応するヒドロキシ基は、一時的に、ＯＨ基の良
好な離脱可能基への変換の間に、適当な保護基で保護す
べきである。好適な保護基とじては、殊に、ペンツルー
、インプロピリデンー、シクロヘキシリデン−又はベン
ジリデン苓がこれに該当する。置換すべきヒドロキシ基
を良好な離脱可能基への変換の後に＼この保護基？適当
な方法で再び、離脱させることができる。

本発明方法の督オリな実紬形で、・・ブトグロビン？用
いるグリコシル化及び非グリコシル化ヘモグロビンの分
別はイオン結合も共有結合も行なうことのできる物質の
存在で実施される。これに一般式■の化合物である： ｘ”−Ｂ’−Ａ′’　−Ｂ”−Ｘ”　　　　　　　（Ｉ
ＩＩ）〔式中！は１式中のＡと同じものを表わし、ここ
でＡ”は１個以上の基Ｒで置換されていてよく、Ｒは１
式のものと同じものを表わし　Ｂｌ及びＢ２ｆＩ同一又
は異なるものであってよく、１式中のＢと同じものを表
わし　ＸＩ及びｘ２は同一又は異なるものであってよく
、それぞれ反応性基を表わす〕。

反応性基Ｘｌ及びｘ２に関して、反応性基Ｘに関して行
なったと同じ態様が相応してあてはまる。

一役弐■の有利なｆヒ合物は、例えば 又Ｑ；このアルカリ金属−、アルカリ土類金橋−又はア
ンモニウム塩である。

一般式■の定義における！が、ヘテロ原子で中断され之
飽和脂肪疾炭化水素基で、Ｂ１及びＢ２がそれぞれ１１
固の単結合を表わす場合に、本発明の方法のために１一
般式１１［ａの化合物が有利である： Ｘｌ−（ＣＨ２）、−０−（ＣＨＦ／”）ｍ−０−（Ｃ
Ｈ２）ｘ−Ｘ２（Ｉｏｔａ） 〔式中ｗ′は水素、ヒドロキシ基、酸残基又はその塩又
は場合によ？）１個以上の鍍残基又はその塩で置換され
たアルキル−、アルコキシ−、ヒドロキシアルキル−又
はヒドロキシアルコキシ基を表わし、ｘｌ及びｘ２は反
応性４を表わし、ｐＸｍ、ｘはそれぞれ１〜１０の整数
であり、ここで、数闘のｗ′が１ｆヒ合物中に存在する
場合は、この基は同一又は異なるものであってよい〕。

Ｗ′の定義に関しては、Ｒとの関係で前記のものがあて
はまる〇 反応性基Ｘ１及びｘ２に関しては、反応性Ｘに関して前
記の幅様が相応してあてはまる。

大抵　、Ｉｌｌが酸残基又ぼその塩又は１１ｖＡ以上の
戚残基又にその堰で置換され乏アルキル−、アルコキシ
−、ヒドロキシアルキル−又、２ヒドロキシアルコキシ
基を表わす一般式■ａの化合物は新規である。

特に有利な代表は例えば次のものである：ＣＨ２０ＰＯ
３Ｈ。

Ｈ２Ｏ５ＰＯ−ＣＨ ０Ｈご−（ＣＨ２）、０−ＣＨ ＨＣ−０（ＣＨ２）−ＣＨＯ ≦ ＨＣ−ＯＰＯ３Ｈ２ （’Ｈ２０Ｐ０３Ｈｚ ＣＨ２０Ｐｏ３Ｈ２ Ｈ，０３ＰＯ−ＣＨ ０ＨＣ−（ＣＨ２）　４Ｏ−ＣＨ ＨＣ−０（ＣＨ２）４−ＣＨＯ ＨＣ−ＯＰＯ３Ｈ。

ＣＨ２０Ｐ０３Ｈ２ ＣＨ２−０（ＣＨ２）　３−ＣＨＯ Ｈ２Ｏ５ＰＯ−ＣＨ Ｈ２Ｏ５Ｐ○−Ｃ’Ｈ 区 ＨＣ−ＯＰ○３Ｈ２ ＨＣ−○Ｐ０３Ｈ。

ＣＨ２−０（ＣＨ２）３−ＣＨＯ 又はこれらのアルカリ金属−、アルカリ土類金禰−又は
アンモニウム塩。

一般式■の定義におけるλ′がオキシシクロアルコキシ
基により中断されている脂肪族炭化水素基であり　Ｂｌ
及びＢ２がそれぞれ１個の単結合である場合に、本発明
の方法のために、一般式［１ｂの化合物が有利である： 〔式中式″′は水素、酸残基又はその塩を表わし、この
際、Ｋ′ｖは１化合物内で同じものであっても異なるも
のであってもより、Ｇ３及びＧ４は同一又は異なるもの
で、それぞれ炭ｒヒ水素鎖であってよく、Ｘｌ及びＸ２
１．、同一又に異なるものであってよく反応性基を表わ
す〕。

買パ′Ｏ定義における酸残基もしくはその塩に関して１
　Ｒの定義における相応する基に関する前記のことがあ
てはまる。

Ｇ３及びＧ′の定義における炭化水素基は、炭素餓子１
〜７、可利に２〜５よ、！７なる。

反応性基Ｘ１及びＸ２に関して、反応性基Ｘに関する前
記の螺嵌が相応してあてはまる。

一般式ｌｂの１ヒ合物は新規である。特にＸ要な弐Ｓは
例えば欠のものである： 又はこれらのアルカリ金属−、アルカリ土類金嬌−又は
アンモニウム塩。

一般式’Ｊｌａ−又はｍｂの化合物の製造は、一般式ｎ
ａＸ　ＩＩｂ及びＩｌｃの化合物の製造に原理的に相当
する公知方法で行なう。

出発物質は、それぞれ、そのヒドロキシル基が一般式Ｉ
［、Ｉ［ａ、　Ｉｌｂ及びｌｉｅの化合物に対して記載
されたと同じ方法で酸基に変えることのできるポリオー
ルである。反応性基ＸＩ及びＸ２の導入は、この基の種
類に依り決まる。

アルデヒド官能基は、通例、１級アルコール官能基の酸
化によジ形成される。酸化剤としてに、二酸化マンガン
又はマンガン酸塩例えばマンガン酸バリウムが使用され
る。

ポリオールの特定のＯＨ−基の選択的酸ｒヒ？この条件
下で実施することができる乏めに、予め、侵されるべき
でぼｌｌＡヒドロキシ基と保護すべきである。このこと
は、適当な保護基例えばアセチル−、ベンゾイル−、ベ
ンジル−、インプロピリデン−、シクロヘキシリデン−
又はペンゾリデン苓【よジ行なう。アルデヒド官能基Ｏ
−３人の後に、保護基を公知方法で再び唯させ、再びア
ルコール官能基を遊端させる。引続き、これ？酸等に変
えることができる。

アルデヒドの重拒硫浚堰付加物は、亜＠Ｅ酸水Ｘナトリ
ウムとＯ反応によｆ）容易して製造可能であり、この際
、アルデヒドを例えば重亜蜘改塩母液中（でｍかす。こ
の反応混合ｌ＄ＩＪは、直接又は最終化５２物金単雌す
ることなしに、又は、付加生ｔｆｆｌ＋勿Ｏτ−青裂及
び単離の後に（グじめて、グリコシル比ヘモグロビンの
測定のための本発明方法に使用することができる。

イソチオシアネートｎＷ利に、１級アミノ及び炭ｆヒ′
流汝かも強塩基の存在で製造される。ここで、個項壱と
ぼ、特にアルカリ金属−及びアルカリ土類金・爲−水酸
ｆヒ物である。生じるＮ−アルキル−ジテオ−カルバミ
ド酸の４全引続きレリえばクロルギ［唆エステルと反応
させて所望の、イソチオシアネートにする。

一般式ｆＨの荷に１利な化合物は、一般式■のベンシル
化合物である： 〔式中Ｍは、単結合又ぽ、１個以上の酸残基又はその項
で置換されていてもよ１．Ａ飽和又は不飽和の炭比水基
？表わし、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ′は同一又は鶏なる
ものであってよ＜、ｉｎａ中のＲ′の定ａ？葺し　ＸＩ
及びＸ２は、同一又は異なるものであってよく、反応性
基と表わす〕。

Ｍの定義における飽和又は不飽和Ｏ炭化水素基とは、炭
素原子数１〜８有利に１〜４かもなる基と解される。

反１５性基ＸＩ及びＸ２に関して、反応性基Ｘに関して
前記の・法様が同様にあてはまる。

式中のＭが酸基又はその塩の１回以上で置換された炭化
水素である一般式■のｒと金物は、新規である。

特に■利な代表に、例えば次のものである：又はこれら
のアルカリ金属−、アルカリ土類金属−又はアンモニウ
ム塩。

一般式■の化合物の製遺す自体公刊の方法で行なう。

一般式■の持て有利な化合１は一般式Ｖの化合物である
： Ｒ′ 〔式中Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ′、Ｘｌ及びＸ２は■式中
に記載と同じものを表ｖ　Ｌ、Ｒ’　ｇｌびＲ５は同一
又はＡなるものであってよく酸残基又はその塩を表わす
〕。

Ｒ５及びＲ６の定義における酸残基としては、−０Ｐ０
３Ｈ，、−０Ｐ、Ｏ，Ｔ（３又Ｔ４−０８Ｏ３Ｈが有利
である。

グリコシルｒヒヘモグロビンの測定のための本発明方法
に特に好適に影爵を及ぼす化合物としては、１．２−ビ
ス（４−ホルミル−２−スルホニルフェニル）エタン及
び１，２−ビス（４−ホルミル）エタンジオール−１，
２−ジホスフェートが挙げられる。

一般式Ｖのベンジル化合物は新規である。これは、自体
公刊の方法で製造できる。１．２−ビス（４−ホルミル
フェニル）エタン−ｆ＃Ｘ！Ｈｚ、例工ば、ｐ−アルコ
キシカルざニルベンシルト−反応により得られる。ここ
でアルコキシ基とは、炭素原子６１〜５からの基と解す
る。特に、メトキシ−又（グエトキシ基が有利である。

生じるスチルベン？、例えばパラジウム／炭上で水素「
ヒする。双方のエステル−官能基金、引硬き公知方法で
列えばリチウムアルミニウムヒドリドき用いる還元によ
ジベンジルアルコ−／ｌ／Ｋ、かつ引例き褐石酸「ヒに
よジアルデヒドに変換する。

スルホン酸基は１貞用のスルホン化反応により導入され
る。高ユ特に４０〜８０℃で良好な収率ヲもたらすクロ
ルスルホン酸を用いるスルホン比が特に好適である。

カルぜキシ−及びカルボキシメチレンオキシ基は、相応
して適当な文献公知の出発化合物の選択により導入する
ことが゛できる。相応するスチルベンを差当り常法でエ
ポキシ化し、例えばメタークロル過安６香酸き用いて開
ｌさせてジオールにし、次いで文献に慣用のホスホリル
ｒヒ例えばオキシ塩比祷と反応させることにより、エチ
レン基の所にホスフェート基を導入する。

ビス（ホルミルフェニル）エタン−ｒヒ合物の重亜硫酸
塩付加物は、重亜硫酸ナトリウムとの反応により容易に
入手しうる。これらは特別に＃造できるか又は、テスト
で特別な単＠をせずに重亜硫酸アルカリ液中のジアルデ
ヒドの啓解によりその場で得ることができる。

本発明方法に好適な一般式Ｉの１８合物は、ヘモグロビ
ン含量に対して少なくとも当量で使用する。しかしなが
ら一般に、これら物質を過剰に、有利にに２〜２００倍
特に５〜５０倍のモル過剰で添加するのが有用である。

場合によっては、本発明方法の実施の際に、測定溶液に
ハプトグロビンとの接触の前に、イオン結合を安定ｆヒ
する薬剤？添加するのが有利であるが必ずしも必要では
ない。イオン結合に対して安定比作用を有するこのよう
な物質の例ハ、エチレンクリコール、ポリエチレングリ
コール又はサッカロースである〇 ハプトグロビンｉ’！、同ｍに、ヘモグロビンに対して
少なくとも当量で使用すべきである。しかしながら、こ
こでも過剰は有利に作用する。

１．２〜５０倍待に１．５〜５倍のモル量を使用するの
が有利である。

更に、ハプトグロビンを組木上に固定することができる
。この場合、この測定法は、ａ）ハプトグロビンを有す
る担＃−を溶血され、場合により前処理された血液試料
中に浸漬するか又は ｂ）前処理された血液試料特定叶全ノ・デトグロヒ９ン
担本上に温和するか又は Ｃ）＠処理された血液試料特定量でハプトグロビンを担
体から＠雌させる ことにより実施することができる。

組木材料としては、分析的検出反応に慣用の担体例えば
１１紙、セルロース、繊維フリース、多孔性プラスチッ
ク等が好適である。ノ・ブトグロビン負荷担体の製造は
、ノ１デトグロビン含有、ｄ液中への浸濱又ぼそれのス
プレーにニジ行なう。

二のグリコシル比ヘモグロビンハ、ソのノ１デトグロビ
ン負肯ラテックス粒子のハプトグロビン−誘導置県の抑
制能に基づき測定することもできる。このようなラテッ
クス凝渠テストは、当業者には免疫複合体の形成の良好
な認識のための手段として公凡であり、意外にも、・・
ブトグロビンへのグリコシル化ヘモグロビンのｇ合の定
量測定のためにも使用することができる。

このｆｌｌＪ　定Ｑ　ＩｊＸ理（＝、ヘモグロビン負荷
ラテックス粒子がハプトグロビンの存在で１庚東し、溶
液がｊ８ること（で基づく。グリコシル化ヘモグロビン
の同時存在の際には、ハブトグロビン：グ有利にこれと
反０し、・疑楽の減少が起こる。凝泉もしく（；副定濁
りの速度及び・湿度から、校正曲線を用いて試料中のグ
リコシル化ヘモグロビンの含分を測定することができる
。

グリコシル化ヘモグロビンによる］１デトグロピン負荷
ラテツクスの堤果をヘモグロビンに対する抗体■存在で
測定することにより、グリコシル（ヒ分のぷ（１定のｔ
めの矢の処置も可能である０このために、グリコシル比
又２非グリコシル化ヘモグロビン又はこれら双方形の８
：音の混合物に対するポリ−又はモノ−クロナール抗体
も使用できる。有利な実施形では、グリコシル化ヘモグ
ロビンのβ−鎖のグリコシル化アミノ末端に対するモノ
クロナール抗体を添加する（１３１えば米国、ｆｊ許、
Ａ４４７８７４４号明則書参照）０いずれ０場合にも、
１０−４〜１０−８モル／ｌつ１度での抗体の使用が有
利である。ラテックス粒子の有利な大きさは１０〜”、
　ＯＯｎｍである。当業者べ、粒子１度を、約４０口〜
１１０００ｎの有利な波長領域で、元号に敏感なラテッ
クス４．．１８００元測定が可能；（なるように選択す
ること、工知って＾る。

ラテックス凝果によるハプトグロビンとグリコシル化ヘ
モグロビンとの複合本形成の測定の主要利点１丁、ペル
オキシダーゼ活性に基づく倹査に比べて、インキュペー
ション工程の節約であり、従って、本発明の物質を使用
しな＾でも、２インキユベーシヨンエ・程よジなる完全
自動化可能な方法と実現することができる。非グリコシ
ル１ヒヘモグロビンにより誘起さｎる測定信号と阻止す
るか又ぼ少なくとも明白て低減させる一般式■の前記化
合物及びラテックス礎果による倹食の岨合せ［要用は特
別な利点仝も之らす。

これに、Ｃジ、高い！異性の、１廼単な、最適の場合に
ぼ１インキユベーシヨンエ魔のみよりなる方法が可能に
なる。

更に本発明の目的物は、血液試料中のグリコシル化ヘモ
グロビンの自動化可能な測定のための、適当な緩衝剤系
中の赤血球のＧ血剤、遊離の又は担体結合ハプトグロビ
ン、一般式Ｉの化合物１帽以上並びに場合によってはイ
オン結合に対する安定化作用含有する物質を含有する試
薬である。

試験片の形の試薬の製造のために、吸着性担持材有利に
７紙、セルロース、繊維フリース、多孔性プラスチック
又は類似物を、適当な溶剤中の必要な試薬の溶液で含浸
させる。これは、１含浸工程で行なうことができる。し
かしながら、屡々この含浸を数工程で実施するのが有利
であジ、この際それぞれ試渓の１部分を含有する溶ｌｋ
使用する。この完成試゛倹片μ、そのまま使用すること
ができるか又（グ公知方法で把手に付着するか又は有利
にプラスチックと目の細かい網との間に、西ドイツ特許
第２１１８４５５号明細書に記載のように到入すること
ができる。

本発明のもう１つの目的物は、グリコシル化ヘモグロビ
ンと非グリコシル化ヘモグロビンとを分別するための、
ハプトグロビン及びヘモグロビン負荷うテックス粒子並
びに一般式Ｉの化合物１１以上を含有する試薬である。

グリコシル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグロビ
ンとを分別するためのハプトグロビン負荷ラテックス粒
子、グリコシル化又は非グリコシル化ヘモグロビンに対
するポリ−又はモノクロナール抗体並びに一般式Ｉの化
合物１橿以上を含有する試薬も同様に本発明の目的物で
ある。

実施例 次の実施例につき本発明を説明する。

例１ 純粋なヘモグロビン及びグリコシル化ヘモグロビンをイ
オン交換クロマトグラフィ〔トリヴエリ（Ｔｒｉｖｅｌ
ｌｉ　）等によるＮＫ、ＴＭ　２８Ａ、３５　′５〜３
５７頁（１９７１）参照〕により単離し、０〜５０％グ
リコシル化ヘモグロビンの混合物列の農造のために使用
する。こうして得た試料を、並行実験で下記の物質５０
ｍモル１モルホリンエタンスルホン酸緩衝液（ｐｉ−１
６，５）ノの溶液を用いて、それぞｎ　Ｏ，５ｍ９／　
、ｔのヘモグロビン濃度まで稀釈する。次いで、固体亜
ニチオン酸ナトリウム’ｋＥｌ’／−の濃度１でかつ固
体亜硝酸ナトリウムｔｏ、０５Ｔｎｇ／Ｉｍｇの濃度ま
で添加して溶かす。２５°Ｇでの６０分のインキュベー
ションの後に、こうして得た溶液を自動分析装置例えば
アボット（ＡｂＯｔｔ　）　ＶＰの試料容器中に充填す
る。この容器内でそｎぞｎ試料溶液２．５　μノ　を、
　　ト　リ　ス　−　緩衝ｆｔ　（ｐｉ（６，５）　　
１　０ｍモル／ノ、２．２′−アジノージ〔３−エチル
ベンズチアゾリン−スルホネート（６１１２ｍモル／〕
、ハプトグロビン０．０５　ｎｇ／　ｇｔｌ及びエチレ
ングリコール１１容量４を含有する試薬溶液２５０μノ
と溶合する。２５°Ｃで８０秒間インポ キュベートする。その後、す鷹ニン３ｇ／ノを含有する
クエン酸塩緩衝液（０，５モル／）、−３，８）中の過
ホウ盾ナトリウム２．２ｄ／−の添加により偽ペルオキ
シダーゼ活性（Ｐｓｅｕｄｏｐｅ−ｒｏｘｉｄａｓｅａ
ｋｔｉｖｉｔｉｔ　）　ｆ始励させ、適当なフィルター
相合せ例えばＪ１５／４５０ｎｍで測定する。第１図に
記載の較正曲線が得られ、この際、 直線１は式： の化合物１０ｍモル／ノを用いて得たものであり、 直線２は式： （式中［Ｆ］は０Ｆ０３Ｎａ２である）の化合物２ｍモ
ル／ノを用いて得たものであり、 直線３は式： （式中［Ｆ］はＯＦｏ　３Ｎａ　２である）の化合物１
ｍモル／ノを用いて得たものである。

例２ 全崩２０μノをビス−トリス−緩衝液（ＰＨ６−７）　
５０　ｍモル／ノ、サポニン０．２Ｅ／ノ及びａ）〜ｅ
）に記載の物質の変動量を含有する溶液５ｄ中で溶血さ
せる。２５°Ｃで２０分間のインキュベーションの後に
、２０μノの少量を取９出１１、ビス−トリス−緩衝剤
（ｐＨ６−７）７ｍモル／ノ、２．２′−アジノージ−
〔６−ニチルペンズチアゾリンースルホネート（６１）
　（ＡＢＴＥＩ）２ｍモル／ノ、ハプトグロビン２０ｒ
ｎ９／ノ及びサッカロース２　［１０ｇ／）を含有する
溶液２ｍを加える。２５°Ｃで正確に２分後に、ペルオ
キシダーゼ活性の反応速度論的測定を開始し、この際、
クエン酸塩緩衝剤（…３．８　）　０．５モル／ノ、過
ホウ酸ナトリウム３０ｍモル／ノ及びサポニン６ｇ／ｌ
よりなる溶液１ｄを加える。測定した速度から、種々の
湿合物の測定により純粋なグリコシル化及び非グリコシ
ル化ヘモグロビンを得る較正曲りを用いて、ヒト補液試
料のグＩＪコシル化へモグロ♂ンの含分を測定する。

次表は、次の変法で測定さｎた種々の試料のグリコシル
化ヘモグロビン含分を１慣用の参照法（イオン交換体ク
ロマトグラフィ）を用いて得らｎた値と比較して示して
いる。

グリコシル化ヘモグロビン（％） 参照法　　６．１　　　１２．４　　８，８　　１３．
７変法ａ）　　　６−９　　　１２．６　　８，４　　
１３．５変法’ｂ）　　　７．１　　　１１．５　　８
．９　　１３．３変法ｃ）　　　６．３　　　１２．０
　　９．２　　１２．８変法ａ）　　　５．８　　　１
２．６　　８．３　　１４．０変法Ｆ３）　　　６．０
　　　１２．８　　９．１　　１４．２ａ）溶面試薬は
、次式の化合物０．１　ｍモル／ノを含有： Ｈ２Ｏ５Ｐ　　ＰＯ３Ｈ２ ｂ）溶抑試薬は次式の化合物０．２　ｍモルフ１を含有
： Ｃ）溶面試薬は次式の化合物０．１　ｍモル／ノを含有
： ｄ）浴面試薬は次の化合物２ｍモル／Ｊを含有：ｅ〕溶
崩試薬は次式の化合物０．５　ｍモル／ノヲ含有； Ｈ２Ｏ５ＰＯ０ＰＯ３Ｈ２ に 付加的＼亜硝ｊｌナトリウム０．ＣＩ５！！／Ｉ！、及
び亜二チオン酸ナトリウム５ｇ／ノを含有。

種々の変法ａ）〜ｅ）のそれぞれの結果と参照法のそｎ
との聞に良好な一致が観察さｎる。

例３ 市販の活性エポキシド基を有する平均粒径１６０ｎｍの
ラテックス粒子５ｄを、精製オキシヘモグロビンＡ１１
０ｍ９／ｌｔｚ　燐酸ナトリウム緩衝液（ｐ）１７．８
）５０ｍモル／ノ及びＮａＯノ０．５モル／ノの溜液５
４と共に室温でかるい攪拌下に３時間インキュベートす
る。牛血清アルブミンの５％溶液１Ｑｍ／の添加の後に
更に１５時間インキュベートする。次いで、５０００［
１ｙで遠心分離し、ビス−）　ＩＪスス−衝剤（…６．
７）１０ｍモル／ノで２回洗浄した。最後にこの緩衝剤
で、７００ｎｍで０．４の吸光度ｔＶする懸濁液が得ら
ｎる程度に著るしく稀釈した。

このような懸濁液２１１Ｉｌに、ビス−トリス−緩衝剤
ＣＰＨ６，７）５０ｍモル／ノ、サポニン０．２　Ｆ／
ノ及び次の物質： １ｍモル／ノの溶液５ｄ中の全血２０μノの溶崩産物１
００μノを加えた。充分な混合の後に、ハプトグロビン
１．５’／ノの溶ｇ、２０μノを添加した。６０秒及び
１５０秒の後に、７０ｎｍでの吸光度全測定した。第１
回目の測定と第２回目の測定の間の吸光度差から、較正
曲線（グリコモル化ヘモグロピント非クリコシル化ヘモ
グロビりとからの混合物列）を用いてグリコシル化ヘモ
グロビンの含分ヲ硲認し、イオン交換クロマトグラフィ
により確認した値と比較する。

グリコシル化ヘモグロビンＣ％） 双方の方法の結果の一致は非常に良好である。

例４ 例３の方法と同様に、馬−ハプトグロビンで負荷された
ラテックス粒子の懸濁液を製造する。

得られた懸濁液は、６３０ｎｍでの吸光度０．４になる
まで稀釈され、更に次に挙げられた純粋工ｇＧとしての
抗−ヘモグロビンー抗体１種ｔ−含有する： ａ）ヒトヘモグロ♂ンに対するポリクロナール抗体０．
０４〜／ｄ； ｂ）　　グリコシル化ヒトヘモグロビンのβ−鎖に対す
るポリクロナール抗体０．１■／ｄ；Ｃ）グリコシル化
ヒトヘモグロビンのβ−鎖のアミノ末端部に対するモノ
クロナール抗体０．５〜／　Ｗ　Ｏ 更にこの懸濁液は、次の物質０．２　ｍモル／ノを含有
する： このような２５℃まで熱処理さｎた懸濁液２ｄに、ビス
−トリス−緩衝剤（ＰＨ１，７）５０？ＦＬモル／ノ及
びサポニン０．２ｆ！／ノの溶液５ゴ中の全ｍ２０μノ
の溶ＩＩＩＩＩ産物５０μノを混合する。

６３０　ｎｍでの１２０秒以内の吸光度増加を測定スる
。グリコシル化ヘモグロビンの含分を較正曲線でＷｔ２
する。次の表は、ヒト崩清試料に関して、イオン交換ク
ロマトグラフィにより確認した値との比較を示す： グリコシル化へモク四ビン（％） 参照法及びラテックス凝集試験４　ａ）〜４　ｃ）の変
法からの結果は、ここでも非常に良好な一致を示す。

例５ ベルセイトールへブタホスフェート ポリ燐酸ＣＩ＋）中のベルセイトール（ｏ、５１！、２
．４ｍモル）の溶液ｔ−１５０℃で６時間加熱し、冷却
し、水８０．ｗｊ中に入れる。１ＯＮ塩Ｗ１２０ｄの添
加の後に、この溶液を３０分間１００℃に加熱し、冷却
し、アンモニアの添加によりアルカリ性にし、約２０ｄ
まで濃縮する。

濃アンモニア水（約１２０ｍ）の添加及び５°Ｃでの保
持により無機燐酸塩が沈殿される。この濾液を再び約２
０−まで濃縮し、アンモニアで−８に調節し、飽和酢酸
バリウム溶液を添加する。バリウム塩としての表題化合
物の完全沈殿のために、エタノールを添加し、沈殿を吸
引し、乾燥させる。

融点〉６５０℃、Ｍｒｅｌ　１．２　（０，０３Ｍ蓚醪
塩緩衝剤ｐＨ４）を肩する白色の、水に難溶性の粉末と
してのベル上イトールＢａ−塩１．５ｇ（収率：理論量
の３６チ）が得られる。

例６ ３．６−ビス−〇−（４−ヒドロキシブチルクーミオ−
イノジットへキサホスフェートジメチルホルムアミド５
の、ｗ７中のポリオール、３．６−ビス−〇−（４−ヒ
ドロキシブチル）−ミオ−イノジット（０，５１，１，
５ｍモル）、Ｎ−ベンゾイルホスホルアミジン酸（７，
５＆、３７．３　ｍモル）及びトリエチルアミノ（５，
２ｍｇ、３７．３　ｍモル）の混合物ｔ−１４０℃に２
４時間加熱する。冷却及び水１０ｍの添加の後に１、蒸
発乾固させる。残分を水２５ｄ中に入ｎ１ベンズアミＹ
の除去のために、エーテルで数回抽出する。６Ｎ坦酸を
水浴液に添加の後に、ｉｏ口’ｃに３０分間加熱し、冷
却の後にアンモニア水を加える。引続く後処理は例５の
記載と同様に行なう。６．６−ビス−〇−（４−ヒドロ
キシブチル）−ミオ−イノジットへキサホスフェートバ
リウム塩１．２ｇが、融点〉３５０℃、Ｍｒｅｌｌ、４
　（０，０３Ｍ蓚醪塩緩衝剤、−４）を有する無色粉状
物質として得らｎる。収率：理論量の５０％。

前記例６に対する出発物質として使用さｎた化合物は次
のようにして得らｎる： 無水ジメチルホルムアミド４０の、１１中の１，２：４
．５−ビスー〇−シクロヘキシリデンーミオーイノシッ
ト（１４Ｆ！、４０ｍモル）に、０℃で週剰の水素化ナ
トリウム（７０％、６．８６Ｐ、２００ｍモル）を添加
する。水素発生終了後（約１０分）に、ベンジルオキシ
ブチルプロミド（沸点１４８〜１５０℃、０．３鵡ａｇ
、９７Ｎ、４００ｍモル）を添加し、２５°Ｃで２０時
間攪拌する。その後、このバッチを氷／水上に加え、酢
酸エステルで数回抽出する。有機相を乾燥させ、濃縮し
、残分をシリカゲルでのクロマトグラフィにより、塩化
メチレン／メタノール（−９８：　２　（ｖ／ｖ）　）
を用いて精製する。相応するフラクション（ｎｆ−Ｃ１
，５）の濃縮により、６，６−♂スーＱ−（４−ベンジ
ルオキシブチル）−１，２：４．５−ビスー〇−シクロ
ヘキシリデンーミオーイノシット１９．９　、！ｉ’が
、無色油状物として得られる。収率：理論量の８４俤。

濃アンモニア水〔５ｄ〕の添加のもとにおけるエタノー
ル２ノ中のこうして得た化合物（２０ｇ、５Ｃ１ｍモル
）の接触的水素添加（１０チＰｄ／ｃ　、　４０°Ｃ１
水素気５０バール、６時間〕で、１．２：４．５−ビス
−ローシクロヘキシリデン−６，６−♂スー〇−（４−
ヒドロキシブチル）−ミオ−イノジット７ｇが得られる
。融点：１０８〜１１０°Ｃ１収率：理論量の４４チ。

このビスシクロへキシリデン化合物（５ｇ、１０ｍモル
）の酸性加水分解（１，４−ジオキサン５０ｍ／中の０
．４係硫酸５０ｙ、　１０００ｃｓ２時間）により、炭
酸水素ナトリウムを用いる中和、溶剤の除去、残分のメ
タノールでの抽出及び抽出溶液のａ廊の後に、６．６−
ビス−〇−（４−ヒドロキシブチル）−ミオ−イノシラ
）３ｇが得らｎる。融点７４〜７６℃、収率：理論量の
９３条。

例７ ５−アミノ−１−ヒ１０キシペンタン−１゜１−ジホス
ホン酸 クロルベンゾール６〇−中に５−アミノバレリアン酸１
４ｇ並びに亜燐１Ｗ１３．５５”ｅ加え、１００℃に１
０分間加熱する。油浴の除去の後に、徐々に三塩化燐１
５．７ｄｅ滴加し、更に１００℃に５時間加熱する。冷
却の後に、クロルベンゾールｔデカンテーション除去し
、残分を６Ｎｍ酸と共に還流下に５時間加熱し、引続き
真空中で濃縮する。残留する黄色油状物を水１００ｄ中
に溶かし、２Ｎ苛性ソーダでｐ）１５にし、メタノール
２００ｄｔ−添加する。沈殿を吸引濾過し、真空中で乾
燥させる。相対的移動度０．４５ｔ−ｍする１ナトリウ
ム塩としての所望化合物２４．５　ｇ（理論量の６７係
）が得られる。

このナトリウム塩の水溶液の６Ｎｍ酸での酸性化により
、水から再結晶可卵な遊離ジホスホン酸（徹点２４０〜
２４５°Ｃ（分解））が得られる。

例８ ６−アミノ−１−ヒドロキシヘキサン−１゜例７に記載
の方法と同様にして、６−アミノ−へ命サン酸から出発
して、６−アミノ−１−ヒドロキシヘキサン−１，１−
ジホスホン酸が相対易動度０．４２及び融点２１８〜２
２１℃〔分解〕を肩して、４３％の収率で得られる。

例９ ３．６−ビス−〇−（４−オキソブチル）−ミオ−イノ
ジット エタノール３０ｄ１水６ＭＩ及び濃塩酸１ｄ中の１．２
−４．５４”スー０−シクロへキシリデン−３，６−ビ
ス−〇−（４−オキソブチル）−ミオ−イノジット（１
−５１ｓ　３−１　ｍモル〕の溶液ｔ−６０℃に加温す
る。溶剤の蒸発の後に、シリカゲル上を通すクロマトグ
ラフィにかけ、差当り、迅速流出性不純物の除去のため
に塩化メチレンで、引続き塩化メチレン／メタノール（
４：　１　ｖ／ｖ　）を用いる。相応するフラクション
（ｘｔ　Ｏ，０８）を濃縮する。無色油状物としての３
．６−♂スー〇−（４−オキソブチル）−ミオ−イノジ
ット０．３ｇ、収率、理論量の０ｔｓ０ この使用された出発物質は、１．２：４．５−ビス−ロ
ーシクロヘキシリデン−３，６−Ｖスーｏ−（４−ヒド
ロキシデチル〕−キオーイノシット（２Ｊｉ’　、４−
１　ｍモル）ｔ−ドルオール１００ｄ中のマンガン酸バ
リウム（３０ｇ、１１７ｍモル）ｔ−用いる１２時間の
沸＃温度での酸化により得られる。沈殿の濾過及び濾液
の濃縮の後に、シリカゾルでのクロマトグラフィにより
ドルオール／氷水（１：　１　ｖ／ｖ　）　ｔ−用いて
鞘層する。Ｒｆ　０．４のフラクションを濃縮する。

１．２：４．５−ビス−ローシクロヘキシリデン−３，
６−−スー〇−（４−オキソブチル）−ミオ−イノジッ
ト０．８ｇが無色油状物として得られる。

収率：理論量の４１％ 例１０ ３．６−ビス−〇−（４−オキソブチル）−ミオーイノ
ジットテトラホスフェート ジメチルホルムアミド５０ＭＩ中の例９からの３．６１
’スー０−（４−オキソブチル）−ミオ−イノジット（
０，６ｇ、１．８７ｍモル）、Ｎ−ペンゾイルホスホル
アミジνｍｃ７．２５９１３６ｍモル）及びトリエチル
アミノ（５ｄ。

３６ｍモル〕の混合物を２４時間１４０℃に加熱する。

冷却及び水１０Ｍｌ０添加の後に蒸発濃縮させる。残分
を水２５ｄ中に入れ、ベンズアミドの除去のためにエー
テルで数回抽出する。

６Ｎ塩酸６ｄｋ水溶液に添加の後に、３０分間１００℃
に加熱し、冷却の後に、アンモニアの添加によりアルカ
リ性にし、約２０ｄｌで濃縮する。濃アンモニア水溶液
１２０ｄｋ添加し、５℃で保持することにより、無機燐
酸塩を沈殿させる。濾液を再び約２０−まで濃縮し、ア
ンモニアでｐＨ８にし、飽和酢酸バリウム水溶液を加え
る。バリウム塩としての表題化合物の完全沈殿のために
、少量のエタノールを加える。沈ｌｉを吸引しく１．０
５Ｉｉ１　Ｄ、８９ｍモル）、水５の、１１中に懸濁さ
せ、カチオン交換体アンバーライトエＲ１２０（Ｈ”−
型）Ｃ５＝ｄ）で、２５℃で３０分間処理する。イオン
交換体樹脂の濾過の後に、濾液に０．１Ｍナトリウムメ
チレート溶Ｍ１．Ｂｄｔ−加え、濃縮する。３．６−ビ
ス−〇−（４−オキソブチル）−ミオ−イノジットテト
ラホスフェートナトリウム塩０．５７　Ｉｉが水中に易
溶性の白色粉末として得られる。融点〉６５０℃、Ｍｒ
ｅｌ　１．３（０，０３Ｍ　Ｂ酸塩緩衝剤ｐＨ４）、収
率：理論量の６７チ。

例１１ １．２−ぎス（４−ホルミル−２−スルホニルフェニル
）エタン ａ）４−フロムメチル安息香Ｗエチルエステル４−メチ
ル安息香酸エチルエステルｓｏｙ全Ｎ−ブロムスクシン
イミド６０ｇ及び過酸化ジベンゾイル６スパーテル量と
共に四塩化炭素１００ｄ中で還流下に３時間加熱する。

室温でなお１２時間攪拌し、次いで吸引濾過し、沈殿を
四塩化炭素で洗浄し、濾液を蒸発濃縮する。

油状残分を０．３ｍバールで蒸溜する。１０５°Ｃでの
フラクションｔ−ｎ−ヘキサン５０ｄかう結晶させる。

収量：　５２．３　＆。融点：２４〜２９℃。

ｂ）トリフェニル−（４−エトキシカルボニルベンジル
）ホスホニウムプロミド 例１１ａ）からのブロムメチル化合物５０．Ｆ及ヒドリ
フェニルホスフィン５４ｇＴｈ）＃、を一ル２００−７
中で還流下に３時間加熱する。生成物を吸引濾過し、ド
ルオールで後洗浄し、乾燥させる。収量：　９２．８　
ｇ、融点：２６３〜２３６°Ｃ０ ｃ）４−エトキシカルボニル−４′−メトキシカルボニ
ルスチルベン 無水１，４−ジオキサン１５０＋Ｅ／中に前記のホスホ
ニウムプロミド４３．５　ｇ及びカリウム−１−ブトキ
シド１０．６３　ｇを溶かす。室温で１０分攪拌の後に
、１．４−ジオキサン１５０ｄ″に添加し、次いで、１
．４−ジオキサン８０ｄ中に溶かした４−ホルミル安息
香酸メチルエステル１４．１９　ｋ滴加する。室温で１
夜攪拌し、蒸発濃縮し、メタノール１５の、Ｌｌで浸漬
する。

生成物’を濾取し、メタノールでなお３回洗抄する。収
量：　２２．２　ｇ。

ＩＨ−ＮＭＲ：　（ＣＤ６］−ＤＭＳＯ）　：ａ−１，
３４（ｔｓ　、Ｔ−６，９Ｈｚ、　３Ｈ）　；３．８６
（８％　３Ｈ）ｉ４−３２（ｑｓ　、ｒ−６，９Ｈｚｓ
３Ｈ）；７．４５（ｓ、２Ｈ）ニア、７４及び７．９４
　ｐｐｍ　（各ｄ、Ｊ−９Ｅ！Ｚ、３ＥＩ）。

ａ）１−（４−エトキシカルボニルフェニル〕−２−（
４−メ）キシカルボニルフェニル）エタン 前記のスチルベン２０ｇ”５−ジメチルホルムアミぜ４
００＊及びメタノール１００ｄ中に入江、活性炭上のパ
ラジウム１ｇを用い、大気圧で水素化する。２．５時間
後に、理論量の水素が消費される。触媒を濾去し、蒸発
ａ縮し、メタノールから晶出させる。

収量：　１４．４　ｇ、融点６０〜６２°Ｃ１ａ−ＮＭ
Ｒ（［：ｎ、］−ＤＭｓｏ）　：δ−１−３１（ｔＳＪ
−６−９Ｈｚ、　３Ｈ）　；２−９９（’１１４Ｈ）　
；３−８３（ａ、３Ｈ）；４．４８　（’ｌ５Ｊ−６．
９Ｈｚｓ　２Ｈ）　；７−り１及び７．８５　ｐｐｍ　
（各々ａ、Ｊ−９Ｈｚ。

８Ｅ（）。

ｅ）１．２−ビス（４−ヒドロキシメチルフェニル〕エ
タン 無水１．４−ジオキサン１５０４中に溶かした１−（４
−エトキシカルボニルフェニル）−２−（４−メ）キシ
カルボニルフェニル）−二タンＩＤ１ａ−無水エーテル
２００＝＝ｊ中のリチウムアルミニウムヒト３．６５　
＆の懇濁液に徐々に滴加する。３０分攪拌の後に、酢酸
エステル５０．１−徐々に滴加し、１５分間攪拌する。

その後なお冷飽和硫酸ナトリウム水浴液２０−を滴加す
る。水の結合のために、なお固体ｆｃ酸ナトリウムを加
え、濾過する。硫酸ナトリウム沈殿物を酢酸エステル各
３０ｄで３回振出し、濾過する。集めた有機−ｇを蒸発
濃縮し、メタノールから晶出させる。

収ｉ　：　５．６２　ｇ、融点：１４５〜１４９℃。

ＩＨ−ＮＭＲ（［Ｄ６）−ＤＭＳＯ）　：δ−２，８４
（ｓ、４Ｈ）；４．４３（ａ、、Ｊ−６Ｈ２，ＡＨ）；
４．９７（ｔＳＪ＋ｗ６Ｈｚ。

２Ｈ）；７．１３及び７．１７　ｐｐｍ　（各々ｄ１Ｊ
＝　８　Ｈｚ　１８　Ｈ） ｆ）１．２−ビス（４−ホルミルフェニル）工タン 例１１θ）の記載のビスベンジルアルコール４．２７ｇ
ｋｖ温で７日間、石油エーテル（沸点６０〜９０°Ｃ）
２００−ｚ中の福石２５．５　ｇと共に攪拌する。濾過
し、蒸発濃縮させ、シリカゲルのクロマトグラフィにか
ける（展開剤：クロロホルム／酢酸エステル９：１、シ
リカデル−ＤＣでの生成物のＲｆ−値：　０．７８　）
。

収量：１．４７、 ＩＨ−ＮＭＲ（［：Ｄ６）−ＤＭＳＯ）　：δ−３，０
４（ｓ、４Ｅり；７．４４及び７．８０（各ｈｄＳ、Ｔ
−８Ｅ（ｇ、８Ｈ）；９−８７ｐ戸（θ、２Ｈ）。

ｇ）重亜硫酸塩−付加生成物 例１１ｆ）からのジアルデヒド２０ＯＷｕｉｔ−エタノ
ール２０．１中に溶かす。これに、１Ｍ重亜硫酸ナトリ
ウム４ｄを温和する。沈殿を濾過し、乾燥させる。

元素分析：　の、６Ｊ４Ｎａ２Ｓ２０ＢＸＨ２０計算値
：０４１．６　　Ｈ３，５Ｎａ１０．０測定値：　ｃ　
４０．２　　Ｈ３，４９Ｎａ　１０．７ｈ）１．２−ビ
ス（Ａ−ホルミル−２−スルホニルフェニル）エタン クロルスルホン酸１００−に攪拌下に１．２−ビス（４
−ホルミルフェニル）エタン１０ｇを加え、８５℃で２
時間攪拌する。バッチを熱時に氷水上に加える。この際
に生じる沈殿を濾過し、水で洗浄する。沈殿’１２　Ｎ
ＨＯノ１００ｄ中に懸濁させ、還流下に２時間加熱する
。蒸発濃縮後に粗生成物をシリカゾルのクロマトグラフ
ィにかける（展開剤ブタノール／氷酢酸／水４　：　０
．５　：　１　）。生成物を含有するこのフラクション
を蒸発濃縮し、シアイオン（Ｄｉａｉｏｎ　）（溶離剤
水）で脱塩する。

収量：１．５ｇ、 Ｒｔ　：　（シリカゾル−ＤＣ１展開剤ブタノール／氷
酢酸／水　４　：　０．５　：　１　）　：　０．３４
゜

【図面の簡単な説明】

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、差当り血液試料の化学的又は物理的処理により、グ
   リコシル化ヘモグロビン及び非グリコシル化ヘモグロビ
   ンを赤血球から遊離させ、場合によりこのヘモグロビン
   をメトヘモグロビンに変じその後、グリコシル化ヘモグ
   ロビンと非グリコシル化ヘモグロビンの分別をハプトグ
   ロビンを用いて実施し、引続き、ヘモグロビンのグリコ
   シル化分を測定することにより血液試料中のグリコシル
   化ヘモグロビンを測定する方法において、ハプトグロビ
   ンを用いるグリコシル化ヘモグロビンと非グリコシル化
   ヘモグロビンの分別を、適当な緩衝剤系及び一般式 I
   ： Ａ（ＢＲ）＿ｎ　（ I ） 〔式中Ａは、１個以上のヘテロ原子で、オキシシクロア
   ルキル基で、又は芳香族基で中断されていてよい飽和又
   は不飽和の、直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基又は芳
   香族基を表わし、Ｒはヒドロキシ−、ヒドロキシアルキ
   ル−、ヒドロキシアルコキシ基、アミノ基、反応性基Ｘ
   、酸残基もしくはその塩又は１個以上の酸残基もしくは
   その塩で又は反応性基Ｘで置換され、ヘテロ原子で中断
   されていてもよいアルキル−、アルコキシ−、ヒドロキ
   シアルキル−又はヒドロキシアルコキシ基を表わし、Ｂ
   は単結合又は、非置換の又は１個以上の他の基Ｒにより
   置換された芳香族基を表わし、ｎは２〜２０の整数であ
   り、この際、種々の基ＢもＲも１物質内で異なつていて
   よい〕の物質１種以上の存在で、行なうことを特徴とす
   る、血液中のグリコシル化ヘモグロビンを測定する方法
   。 ２、グリコシル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグ
   ロビンの分別を、イオン結合を形成することのできる物
   質の存在でハプトグロビンを用いて実施する、特許請求
   の範囲第１項記載の方法。 ３、物質として、一般式II： Ａ′（Ｒ′）＿ｎ　（II） 〔式中Ａ′は１個以上のヘテロ原子又はオキシシクロア
   ルコキシ基で中断されていてよい飽和又は不飽和の、直
   鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基又は芳香族基を表わし
   、Ｒ′はヒドロキシ−又はアミノ基、酸残基もしくはそ
   の塩、１個以上の酸残基もしくはその塩で置換されたア
   ルキル−、アルコキシ−、ヒドロキシアルキル−又はヒ
   ドロキシアルコキシ基を表わし、ここで基Ｒ′は１物質
   内で同一又は異なるものであつてよく、ｎは２〜２０の
   整数である〕の化合物を使用する特許請求の範囲第２項
   記載の方法。 ４、グリコシル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグ
   ロビンの分別を、イオン性で共有結合を形成することの
   できる物質の存在で実施する、特許請求の範囲第１項記
   載の方法。 ５、物質として、一般式III： Ｘ＾１−Ｂ＾１−Ａ″−Ｂ＾２−Ｘ＾２　（III）〔式
   中Ａ″は I 式中のＡと同じものを表わし、この際Ａ″
   は１個以上の基Ｒで置換されていてよく、ここでＲは
   I 式中に記載の定義と同じものを表わし、Ｂ＾１及びＢ
   ＾２は同一又は異なるものであつてよく、それぞれ反応
   性基を表わす〕の化合物を用いる、特許請求の範囲第４
   項記載の方法。 ６、一般式IV： ▲数式、化学式、表等があります▼（IV） 〔式中Ｍは単結合又は１個以上の酸残基もしくはその塩
   で置換されていてもよい飽和又は不飽和の炭化水素鎖を
   表わし、Ｒ＾１、Ｒ＾２、Ｒ＾３及びＲ＾４は同一又は
   異なるものであつてよく、水素、ヒドロキシ基、酸残基
   もしくはその塩又は１個以上の酸残基又はその塩で置換
   されていてもよいアルキル−、アルコキシ−、ヒドロキ
   シアルキル−又はヒドロキシアルコキシ基を表わし、Ｘ
   ＾１及びＸ＾２は同一又は異なるものであつてよく、反
   応性基を表わす〕の化合物を用いる、特許請求の範囲第
   ５項記載の方法。 ７、ヘモグロビンのグリコシル化分の測定をラテックス
   凝集試験を用いて行なう、特許請求の範囲第１項〜第６
   項までのいずれか１項に記載の方法。 ８、血液試料中のグリコシル化ヘモグロビンを測定する
   ための、赤血球の溶血剤、適当な緩衝剤系、遊離の又は
   担体結合したハプトグロビン及び場合によりイオン結合
   に対する安定化作用を有する物質を含有する試薬におい
   て、この試薬は付加的に一般式 I ： Ａ（ＢＲ）＿ｎ　（ I ） 〔式中Ａは、１個以上のヘテロ原子で、オキシシクロア
   ルキル基で又は芳香族基で中断されていてよい飽和又は
   不飽和の、直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基又は芳香
   族基を表わし、Ｒはヒドロキシ−、ヒドロキシアルキル
   −、ヒドロキシアルコキシ基、アミノ基、反応性基Ｘ、
   酸残基もしくはその塩又は１個以上の酸残基もしくはそ
   の塩で又は反応性基Ｘで置換され、ヘテロ原子で中断さ
   れていてもよいアルキル−、アルコキシ−、ヒドロキシ
   アルキル−又はヒドロキシアルコキシ基を表わし、Ｂは
   単結合又は、非置換の又は１個以上の他の基Ｒにより置
   換された芳香族基を表わし、ｎは２〜２０の整数であり
   、この際、種々の基ＢもＲも１物質内で異なつていてよ
   い〕の化合物１種以上を含有することを特徴とする、血
   液試料中のグリコシル化ヘモグロビンを測定する試薬。 ９、グリコシル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグ
   ロビンの分別のための、ハプトグロビン及びヘモグロビ
   ン−負荷ラテックス粒子を含有する試薬において、これ
   は付加的に一般式 I ： Ａ（ＢＲ）＿ｎ　（ I ） 〔式中Ａは、１個以上のヘテロ原子で、オキシシクロア
   ルキル基で又は芳香族基で中断されていてよい飽和又は
   不飽和の、直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基又は芳香
   族基を表わし、Ｒはヒドロキシ−、ヒドロキシアルキル
   −、ヒドロキシアルコキシ基、アミノ基、反応性基Ｘ、
   酸残基もしくはその塩又は１個以上の酸残基もしくはそ
   の塩又は反応性基Ｘで置換され、ヘテロ原子で中断され
   ていてもよいアルキル−、アルコキシ−、ヒドロキシア
   ルキル−又はヒドロキシアルコキシ基を表わし、Ｂは単
   結合又は、非置換又は１個以上の他の基Ｒにより置換さ
   れた芳香族基を表わし、ｎは２〜２０の整数であり、こ
   の際種々の基ＢもＲも１物質内で異なつていてよい〕の
   化合物１種以上を含有することを特徴とする、グリコシ
   ル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグロビンとを分
   別するための試薬。 １０、グリコシル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモ
   グロビンとを分別するための、ハプトグロビン−負荷ラ
   テックス粒子及びグリコシル化又は非グリコシル化ヘモ
   グロビンに対するポリ−又はモノクロナール抗体を含有
   する試薬において、これは、付加的に、一般式 I ：Ａ
   （ＢＲ）＿ｎ　（ I ） 〔式中Ａは、１個以上のヘテロ原子で、オキシシクロア
   ルキル基で又は芳香族基で中断されていてよい飽和又は
   不飽和の、直鎖又は分枝鎖の脂肪族炭化水素基又は芳香
   族基を表わし、Ｒはヒドロキシ−、ヒドロキシアルキル
   −、ヒドロキシアルコキシ基、アミノ基、反応性基Ｘ、
   酸残基もしくはその塩又は１個以上の酸残基もしくはそ
   の塩又は反応性基Ｘで置換され、ヘテロ原子で中断され
   ていてもよいアルキル−、アルコキシ−、ヒドロキシア
   ルキル−又はヒドロキシアルコキシ基を表わし、Ｂは単
   結合又は、非置換又は１個以上の他の基Ｒにより置換さ
   れた芳香族基を表わし、ｎは２〜２０の整数であり、こ
   の際、種々の基ＢもＲも１物質内で異なつていてよい〕
   の化合物１種以上を含有することを特徴とするグリコシ
   ル化ヘモグロビンと非グリコシル化ヘモグロビンとを分
   別するための試薬。