JPS6252757B2

JPS6252757B2 -

Info

Publication number: JPS6252757B2
Application number: JP2564379A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Kodama; Masao Nakabayashi; Yoshifumi Nakajima; Takashi Nagai; Mikio Kawabata; Isao Myokan; Tetsuya Kajita; Masaaki Shibata; Kyoshi Goda; Takashi Sano
Original assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Current assignee: Toyama Chemical Co Ltd
Priority date: 1979-03-07
Filing date: 1979-03-07
Publication date: 1987-11-06
Also published as: JPS55118494A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、一般式〔式中、R¹およびR²は同一もしくは異なつて
水素原子、ハロゲン原子もしくはシアノ基で置換
されていてもよいアルキル基、ホルミル基、ハロ
ゲン原子またはカルボキシルもしくは低級アルキ
ルアミノ基で置換されていてもよいアルキルカル
ボニル基、アルケニルカルボニル基、低級アルキ
ルアミノチオカルボニル基またはアリール基を；
R³およびR⁴は同一もしくは異なつて水素原子、
カルボキシル基、アルキル基またはアリール基
を；R⁵はアルキル基を；Ａは酸素原子または硫
黄原子を；ｍは０，１または２を；およびｎは２
または３を表わす。〕で表わされる新規なホスホリン型化合物およびそ
の製造法並びにそれらを含有する抗腫瘍剤に関す
る。本発明者等は、長年、抗腫瘍効果を有する物質
を見出すべく鋭意研究した結果、一般式〔〕で
表わされる全く新規なホスホリルコリン型化合物
が、生体内での不活化、殺細胞効果の低下をきた
すことなく、より強い抗腫瘍作用を発揮し、ま
た、免疫賦活作用をも発揮するという有用な性質
を有することを見出し本発明を完成するに至つ
た。これら一般式〔〕で表わされる本発明化合物
について詳述する。 R¹およびR²におけるアルキル基としては、た
とえば、Ｃ_1-22アルキル基を、アルキルカルボニ
ル基としては、たとえば、Ｃ_1-22アルキルカルボ
ニル基を、アルケニルカルボニル基としては、た
とえば、二重結合を２つ以上有してもよいＣ_2-22
アルケニルカルボニル基を、アリール基として
は、たとえば、フエニルまたはナフチル基を、
R³およびR⁴におけるアルキル基としては、たと
えば、Ｃ_1-22アルキル基を、アリール基として
は、たとえば、フエニルまたはナフチル基を挙げ
ることができる。R⁵におけるアルキル基として
は、たとえば、Ｃ_1-7アルキル基を挙げることが
できる。本発明化合物中、R¹またはR²のいずれか一方
が炭素原子を14−20個有する基で、他方が炭素原
子を１−７個有する基、または水素原子である場
合が好ましく、更に好ましくはR¹またはR⁵のい
ずれか一方がＣ_14-20アルキル基である場合、他方
が水素原子、Ｃ_1-7アルキル基またはＣ_1-7アルキ
ルカルボニル基である場合が好ましく、さらに、
加わうるにｍ＝０およびR⁵がメチルまたはエチ
ル基である場合が好ましい。つぎに本発明化合物の製造法について述べる。一般式〔〕で表わされる本発明化合物は、次
に示す方法（製造法−１）により製造することが
でき、更に製造法−２に記載した方法でも製造す
ることができる。また、一般式〔〕で表わされ
る化合物の塩は常法により製造することができ
る。これらの塩としてはたとえば、−Ｏ−
CH₂CH₂N（R⁵）₃基とヒドロキシル基またはハロ
ゲンイオン（Br^-またはC1^-等）とから成る第４
級アンモニウム塩、さらにたとえば

【式】基とＭⁿ⁺（Ｍⁿ⁺はたとえば、Ｃ^２＋ _ａ，Ｚ^２＋ _ｏまたはＭ^２＋ _ｇ等の金属原子イオンを
表わ
す）とから成る

【式】型の塩または一般式〔〕で表わされる化合物がカルボキシル基等
の塩を形成できる基を有する場合、ナトリウム、
カリウム、カルシウム、マグネシウムもしくは亜
鉛等の金属原子のイオンとの塩またはトリエチル
アミン等の有機塩基との塩が挙げられる。また、
一般式〔〕で表わされる本発明化合物は、水和
物としても得ることができる。（上記式中、R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，Ａ，ｍお
よびｎは前記した意味を有し、Y¹およびY²はハ
ロゲン原子を表わす。）本発明の製造方法を更に詳記する。まず、本発明を実施するに当たり、原料となる
一般式〔〕で表わされる化合物は、自体公知の
方法により製造されるが、たとえば、ｍ＝０の場
合、エタノールアミン、Ｎ−メチルエタノールア
ミン、チオエタノールアミン、Ｎ−フエニルエタ
ノールアミン、セリン、システインもしくはＮ−
セチルエタノールアミンまたはそれらの置換体、
ｍ＝１の場合、プロパノールアミンもしくはチオ
プロパノールアミン、またはそれらの置換体、ｍ
＝２の場合、ブタノールアミンまたはその置換体
等の化合物等を原料にして製造される。次いで製造法−１および製造法−２では一般式
〔〕で表わされる化合物に、有機塩基（たとえ
ばトリエチルアミンまたはピリジン等）の脱ハロ
ゲン化水素剤の存在下もしくは不存在下に、一般
式〔〕で表わされる化合物または一般式〔〕
で表わされる化合物をそれぞれ反応させて、一般
式〔〕で表わされる化合物または一般式〔〕
で表わされる化合物を得る。用いられる一般式〔〕で表わされる代表的化
合物としては、たとえば、β−ブロモエチルジク
ロロホスフエート、β−クロロエチルジクロロホ
スフエートまたは２−クロロプロピルジクロロホ
スフエート（たとえば、２−クロロ−４−メチル
−１，３，２−ジオキサホスホランと塩素を反応
させて合成される）等が挙げられ、また、一般式
〔〕で表わされる代表的化合物としては、例え
ば、２−クロロ−１，３，２−ジオキサホスホラ
ン−２−オキサイド、２−クロロ−４−メチル−
１，３，２−ジオキサホスホラン−２−オキサイ
ドまたは２−クロロ−４−クロロメチル−１，
３，２−ジオキサホスホラン−２−オキサイド等
が挙げられる。これらの反応では特に溶媒を使用
する必要はないが、溶媒を使用する場合は反応に
関与しないもの、たとえばｎ−ヘキサンもしくは
シクロヘキサン等の炭化水素類、塩化メチレン、
クロロホルム、ジクロルエタンもしくは１，１，
２−トリクロロエタン等のハロゲン化炭化水素
類、ベンゼン、トルエン、クロロベンゼンもしく
は、トリクロロベンゼン等のハロゲン置換されて
いてもよい芳香族炭化水素類、ジエチルエーテ
ル、ジイソプロピルエーテル、ジオキサンもしく
はテトラヒドロフラン等のエーテル類、アセトン
もしくはメチルエチルケトン等のケトン類、ジメ
チルホルムアミド、ジメチルスルホキサイド等ま
たはこれらの二種以上の混合溶媒を用いてもよ
い。製造法−１においては、この様にして得られ
た一般式〔〕で表わされる化合物を、水の存在
下に氷冷下もしくは常温下で加水分解させ、一般
式〔〕で表わされる化合物を得、更に、この物
質を常圧もしくは加圧下で一般式〔〕で表わさ
れるアミン類と反応させて、一般式〔〕で表わ
される化合物を得る。次いで炭酸銀もしくは酢酸
銀等の重金属塩を用いて、脱ハロゲン化水素反応
を行なつて目的とする一般式〔〕で表わされる
化合物を得る。また、製造法−２においては、一般式〔〕で
表わされる化合物と、一般式〔〕で表わされる
アミン類を上記の製造法−１と同様に常圧もしく
は加圧下で反応させて目的とする一般式〔〕で
表わされる化合物を得る。そして、製造法−１お
よび製造法−２におけるコリン化反応では、特に
溶媒を使用する必要はないが、使用する場合は反
応に関与せず、原料化合物（一般式〔〕および
〔〕で表わされる化合物）は溶解するが反応生
成物（一般式〔〕および〔〕で表わされる化
合物）であるアンモニウム化合物は溶解しにくい
溶媒、たとえばアセトン、メチルエチルケトンも
しくはメチル−ｎ−プロピルケトン等のケトン
類、ベンゼンもしくはトルエン等の芳香族炭化水
素類またはジエチルエーテル、ジオキサンもしく
はテトラヒドロフラン等のエーテル類等の使用が
好ましい。また、これらのコリン化反応は、常温
から150℃までの反応温度で加圧下に行なうのが
好ましく、更に一般式〔〕で表わされる化合物
がたとえばトリメチルアミン等の如く常温で気体
である場合は、その取り扱いが困難なので塩酸等
との鉱酸塩として使用し、トリエチルアミン等の
有機塩基による塩交換で目的とするアンモニウム
化合物と反応させて目的物を得ることもできる。尚、本発明方法を実施するに当つて、原料が反
応に無関係な箇所に活性基、たとえばアミノ基、
カルボキシル基もしくはヒドロキシル基等を有す
る場合は、反応を行なう前に当該分野で常用され
る保護基で該活性基を保護しておき、反応終了
後、常套手段により保護基を脱離することができ
る。次に本発明における代表的化合物の抗腫瘍効果
および免疫賦活効果について詳説する。 (A) イン・ビトロ（in vitro）における試験主な本発明化合物の抗腫瘍作用（癌細胞傷害
試験）および最小発育阻止濃度（MIC）につい
て検討した。 (イ) 癌細胞傷害試験（CIR）試験方法エールリツヒ腹水癌細胞および洗浄懸濁液
を種々の濃度の被検薬剤溶液と混合し、37℃
で１時間振盪させ、癌細胞が破壊されること
によつて細胞内容物が溶出するので、その反
応液の遠沈上清について260ｍμにおける吸
光度を測定し、破壊の程度を知るという方法
により試験した。尚、完全に癌細胞を破壊し
その内容物を溶出させることで知られている
塩化第二水銀125μｇ／ml生理食塩水溶液
を、被検薬剤溶液と同様に処理し、得られた
吸光度の増加分を100％とし、被検薬剤溶液
の癌細胞傷害作用の50％の傷害の場合の被検
薬剤の濃度をもつて癌細胞傷害作用の程度の
指標とした。試験結果を表−１に示す。 (ロ) 細胞最小発育阻止濃度（MIC）試験方法ヒーラ（Hela）S3株およびエールリツヒ
腹水癌細胞を各々２×10⁴個／mlを用いて次
の条件で、被検薬剤の抗腫瘍効果を測定し
た。 (i) 培養液イーグル（Eagie′s）MEM＋20
％牛胎児血清 (ii) マイクロプレート法（microplate
assay） 1000μｇ／mlより12段階希釈 (iii) 培養時間 120時間 (iv) 判定 Giemsa染色 50％以上細胞増殖が抑制され
た薬剤濃度とする（MIC）試験結果を表−２に示す。 (B) イン・ビボ（in vivo）における試験動物移植癌における治療実験をエーテルリツ
ヒ腹水癌およびザルコーマ180を用いて行なつ
た。 (イ) エールリツヒ腹水癌に対する効果試験方法エールリツヒ腹水癌細胞１×10⁶個をddN
系雄性マウスの腹腔内に接種し、24時間後に
被検薬剤40mg／Kgを腹腔内に投与した、癌接
種後10日目に腹水癌細胞容積を測定した、コ
ントロール群の平均腹水癌細胞容積を100％
とし、これに対して被検薬剤投与群の平均腹
水癌細胞容積の割合を算定し、活性を次の如
く表示する。Ｔ／Ｃ（％）100〜66％（−）40〜11％（＋
＋）65〜41％（＋）10〜０％（＋＋
＋）尚、※印を付してある被検薬剤は、７日間
連続投与した。試験結果を表−３に示す。 (ロ) ザルコーマ180固型癌に対する効果試験方法ザルコーマ180癌細胞１×10⁶個をddN系マ
ウス（体重18〜20ｇ）の鼠蹊部に接種し、24
時間後より１日１回７日間腹腔内に連続投与
し、癌接種後14日目に腫瘍重量を測定した。試験結果を表−４に示す。 (ハ) エールリツヒ腹水癌に対する前投与効果試験方法 ddN系雄性マウス癌接種前１，４または７
日前に被検薬剤20または40mg／Kgを腹腔内に
１回投与しておき、次いでエールリツヒ腹水
癌１×10⁶個を腹腔内に投与した、癌接種後
10日目に腹水癌細胞容積を測定した、コント
ロール群の平均腹水癌細胞容積を100％と
し、これに対して被検薬剤投与群の平均腹水
癌細胞容積の割合を算定し、活性を次の如く
表示する。Ｔ／Ｃ（％）100〜66％（−）40〜11％（＋
＋）65〜41％（＋）10〜０％（＋＋
＋）試験結果を表−５に示す。 (C) 急性毒性試験一群５匹のddyマウス（雄、４週齢）に、生
理食塩水に溶解させた被検化合物をそれぞれ腹
腔内に１回投与した。投与後７日目にマウスの
生死を判別し、LD₅₀を算出した。試験結果を
表−６に示す。

【表】

〔薄層板：メルク社アルミナＦ−254（typeE）〕

Claims

【特許請求の範囲】１一般式〔式中、R¹およびR²は同一もしくは異なつて
水素原子、ハロゲン原子もしくはシアノ基で置換
されていてもよいアルキル基、ホルミル基、ハロ
ゲン原子またはカルボキシルもしくは低級アルキ
ルアミノ基で置換されていてもよいアルキルカル
ボニル基、アルケニルカルボニル基、低級アルキ
ルアミノチオカルボニル基またはアリール基；
R³およびR⁴は同一もしくは異なつて水素原子、
カルボキシル基、アルキル基またはアリール基
を；R⁵はアルキル基を；Ａは酸素原子または硫
黄原子を；ｍは０，１または２を；およびｎは２
または３を表わす。〕で表わされるホスホリルコリン型化合物およびそ
れらの塩並びにそれらの水和物。２一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴，R⁵およびｎは前記
した意味を有する。〕で表わされる特許請求の範囲第１項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびそれらの塩並びにそれ
らの水和物。３一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴およびR⁵は前記した
意味を有する。〕で表わされる特許請求の範囲第２項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびそれらの塩並びにそれ
らの水和物。４一般式〔式中、R¹，R⁵およびｍは前記した意味を有
し、R⁷は水素原子またはハロゲン原子またはカ
ルボキシルもしくはアルキルアミノ基で置換され
ていてもよいアルキル基を表わす。〕で表わされる特許請求の範囲第１項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびそれらの塩並びにそれ
らの水和物。５式で表わされる特許請求の範囲第４項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。６式で表わされる特許請求の範囲第４項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。７式で表わされる特許請求の範囲第４項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。８式で表わされる特許請求の範囲第４項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。９式で表わされる特許請求の範囲第４項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。１０式で表わされる特許請求の範囲第４項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。１１式で表わされる特許請求の範囲第３項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。１２式で表わされる特許請求の範囲第３項記載のホスホ
リルコリン型化合物およびその塩並びにそれらの
水和物。１３ (a) 一般式〔式中、R¹およびR²は同一もしくは異なつ
て水素原子、ハロゲン原子もしくはシアノ基で
置換されていてもよいアルキル基、ホルミル
基、ハロゲン原子またはカルボキシルもしくは
低級アルキルアミノ基で置換されていてもよい
アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル
基、低級アルキルアミノチオカルボニル基また
はアリール基を；R³およびR⁴は同一もしくは
異なつて水素原子、カルボキシル基、アルキル
基またはアリール基を；Ａは酸素原子または硫
黄原子を；ｍは０，１または２を；およびｎは
２または３を表わす。〕で表わされる化合物と、一般式 Y¹（CH₂）nOP（０）Ｙ^２ _２〔〕〔式中、Y¹およびY²はハロゲン原子を、ｎ
は２または３を表わす。〕で表わされる化合物を、脱ハロゲン化水素剤の
存在下または不存在下に反応させ、一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴，Ａ，Y¹，Y²，ｍ
およびｎは前記した意味を有する。〕で表わされる化合物を得、ついで (b) 一般式〔〕で表わされる化合物を加水分解
させて、一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴，Ａ，Y¹，ｍおよ
びｎは前記した意味を有する。〕で表わされる化合物を得、さらに、 (c) 一般式〔〕で表わされる化合物と一般式Ｎ（R⁵）₃ 〔〕〔式中、R⁵はアルキル基を表わす。〕で表わされるアミン類を反応させ、一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴，R⁵A，Y¹，ｍお
よびｎは前記した意味を有する。〕で表わされる化合物を得、しかる後、 (d) 一般式〔〕で表わされる化合物を、脱ハロ
ゲン化水素反応に付して、一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，Ａ，ｍおよ
びｎは前記した意味を有する。〕で表わされるホスホリルコリン型化合物および
それらの塩並びにそれらの水和物の製造法。１４ (a) 一般式〔式中、R¹およびR²は同一もしくは異なつ
て水素原子、ハロゲン原子もしくはシアノ基で
置換されていてもよいアルキル基、ホルミル
基、ハロゲン原子またはカルボキシルもしくは
低級アルキルアミノ基で置換されていてもよい
アルキルカルボニル基、アルケニルカルボニル
基、低級アルキルアミノチオカルボニル基また
はアリール基を；R³およびR⁴は同一もしくは
異なつて水素原子、カルボキシル基、アルキル
基またはアリール基を；Ａは酸素原子または硫
黄原子を；およびｍは０，１または２を表わ
す。〕で表わされる化合物を、脱ハロゲン化水素剤の
存在下または不存在下に、一般式〔式中、Y¹はハロゲン原子を；およびｎは
２または３を表わす。〕で表わされる化合物を反応させ、一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴，Ａ，ｍおよびｎ
は前記した意味を有する。〕で表わされる化合物を得、ついで (b) 一般式〔〕で表わされる化合物を、一般式Ｎ（R⁵）₃ 〔〕〔式中、R⁵はアルキル基を表わす。〕で表わされるアミン類と反応させ、一般式〔式中、R¹，R²，R³，R⁴，R⁵，Ａ，ｍおよ
びｎは前記した意味を有する。〕で表わされる
ホスホリルコリン型化合物およびそれらの塩並
びにそれらの水和物の製造法。１５一般式〔式中、R¹およびR²は同一もしくは異なつて
水素原子、ハロゲン原子もしくはシアノ基で置換
されていてもよいアルキル基、ホルミル基、ハロ
ゲン原子またはカルボキシルもしくは低級アルキ
ルアミノ基で置換されていてもよいアルキルカル
ボニル基、アルケニルカルボニル基、低級アルキ
ルアミノチオカルボニル基またはアリール基を；
R³およびR⁴は同一もしくは異なつて水素原子、
カルボキシル基、アルキル基またはアリール基
を；R⁵はアルキル基を；Ａは酸素原子または硫
黄原子を；ｍは０，１または２を；およびｎは２
または３を表わす。〕で表わされるホスホリルコリン型化合物もしくは
それらの塩またはそれらの水和物を含有する抗腫
瘍剤。１６一般式〔式中、ｍ，R¹，R²およびR⁵は前記した意味
を有する。〕で表わされる特許請求の範囲第１５項記載のホス
ホリルコリン型化合物もしくはそれらの塩または
それらの水和物を含有する抗腫瘍剤。１７一般式〔式中、R¹およびR²は前記した意味を有す
る。〕で表わされる特許請求の範囲第１６項記載のホス
ホリルコリン型化合物もしくはそれらの塩または
それらの水和物を含有する抗腫瘍剤。１８注射剤形態にある特許請求の範囲第１５〜
１７項いずれかの項記載のホスホリルコリン型化
合物もしくはそれらの塩またはそれらの水和物を
含有する抗腫瘍剤。