JPS6251990A - 微生物菌体の処理方法 - Google Patents
微生物菌体の処理方法Info
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- JPS6251990A JPS6251990A JP19061285A JP19061285A JPS6251990A JP S6251990 A JPS6251990 A JP S6251990A JP 19061285 A JP19061285 A JP 19061285A JP 19061285 A JP19061285 A JP 19061285A JP S6251990 A JPS6251990 A JP S6251990A
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- microbial cells
- cell
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/26—Preparation of nitrogen-containing carbohydrates
- C12P19/28—N-glycosides
- C12P19/38—Nucleosides
- C12P19/40—Nucleosides having a condensed ring system containing a six-membered ring having two nitrogen atoms in the same ring, e.g. purine nucleosides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/066—Lysis of microorganisms by physical methods
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
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- Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野）
本発明は菌体内に有用物質を蓄積した微生物菌体の処理
方法に関し、さらに詳しくは、菌体にレーザー光を照射
することによって菌体内の有用物質を回収する方法に関
する。
方法に関し、さらに詳しくは、菌体にレーザー光を照射
することによって菌体内の有用物質を回収する方法に関
する。
（従来の技術）
細菌、酵母などの微生物菌体を用いる発酵法によって種
々の有用物質の生産が検討されている。
々の有用物質の生産が検討されている。
例えばトリプシン、アミラーゼ、セルラーゼ、リゾチー
ム、リゲヌクレアーゼ、チトクローム、インシ為リン、
（プシン、ＳＣＰなどのごとき酵素及びタンノ４り質、
リジン、グルタミン酸、ロイシン、トリプトファン、ア
ルギニン、ホモセリン、メチオニンなどのごときアミノ
酸、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド
、ＤＮＡ 、 ＲＮＡなどのごとき核酸類、ビタミンＢ
１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＨなどのご
ときビタミン類、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（以
下、ＳＡＭト称することがある）、Ｓ−アデノシルホモ
セリン、グルタチオン、インターフェロン、インターロ
イチンなどのごとき生理活性物質などがその具体例であ
る。
ム、リゲヌクレアーゼ、チトクローム、インシ為リン、
（プシン、ＳＣＰなどのごとき酵素及びタンノ４り質、
リジン、グルタミン酸、ロイシン、トリプトファン、ア
ルギニン、ホモセリン、メチオニンなどのごときアミノ
酸、ヌクレオシド、ヌクレオチド、オリゴヌクレオチド
、ＤＮＡ 、 ＲＮＡなどのごとき核酸類、ビタミンＢ
１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＨなどのご
ときビタミン類、Ｓ−アデノシル−Ｌ−メチオニン（以
下、ＳＡＭト称することがある）、Ｓ−アデノシルホモ
セリン、グルタチオン、インターフェロン、インターロ
イチンなどのごとき生理活性物質などがその具体例であ
る。
これらの有用物質を抽出するための菌体処理方法として
、従来から乳鉢、？−ルミル、ホモジナイザーなどを用
いる機械的磨砕法、超音波による磨砕法、自己消化によ
シ溶菌する方法、過塩素酸、硫酸、ｍ酸、酢酸、酢酸エ
チル、アセトン、トルエンなどの薬剤で処理する方法、
細胞壁溶解酵素で処理する方法などが知られている。
、従来から乳鉢、？−ルミル、ホモジナイザーなどを用
いる機械的磨砕法、超音波による磨砕法、自己消化によ
シ溶菌する方法、過塩素酸、硫酸、ｍ酸、酢酸、酢酸エ
チル、アセトン、トルエンなどの薬剤で処理する方法、
細胞壁溶解酵素で処理する方法などが知られている。
しかし、機械的磨砕法や超音波処理法では細胞壁が破壊
されるために菌体内の物質が全て排出されることになシ
、その後に有用物質を分離精製する操作がきわめて煩雑
化するという欠点があり、自己消化によシ溶菌する方法
や細胞壁溶解酵素で処理する方法は適用できる菌の種類
が限られ、さらに過塩素酸のごとき薬剤で処理すると菌
体内の有用物質をほぼ完全に抽出することが可能である
が、後に中和工程が必要となったり有用物質の分解や毒
性の原因となるといった問題があった。
されるために菌体内の物質が全て排出されることになシ
、その後に有用物質を分離精製する操作がきわめて煩雑
化するという欠点があり、自己消化によシ溶菌する方法
や細胞壁溶解酵素で処理する方法は適用できる菌の種類
が限られ、さらに過塩素酸のごとき薬剤で処理すると菌
体内の有用物質をほぼ完全に抽出することが可能である
が、後に中和工程が必要となったり有用物質の分解や毒
性の原因となるといった問題があった。
そこで本発明者らは、これらの課題を解決し、より簡単
な工程で多くの菌の種類に適用できる画体処理法につい
て鋭意検討した結果、レーザー光を菌体に照射すること
によって菌体内の有用物質を容易に菌体外に排出できる
ことを見い出し、本発明を完成するに到った。
な工程で多くの菌の種類に適用できる画体処理法につい
て鋭意検討した結果、レーザー光を菌体に照射すること
によって菌体内の有用物質を容易に菌体外に排出できる
ことを見い出し、本発明を完成するに到った。
（問題点を解決するだめの手段）
本発明の目的は広範囲の微生物菌体に対して簡単な操作
で画体内の有用物質を抽出することが可能な菌体処理方
法を提供することにあシ、かかる本発明の目的は菌体内
に有用物質を蓄積した微生物菌体にレーザー光を照射し
有用物質を菌体外へ排出せしめることによって達成され
る。
で画体内の有用物質を抽出することが可能な菌体処理方
法を提供することにあシ、かかる本発明の目的は菌体内
に有用物質を蓄積した微生物菌体にレーザー光を照射し
有用物質を菌体外へ排出せしめることによって達成され
る。
本発明を適用可能な微生物は広範にわたり、その具体例
として、例えばエシェリヒア属、シー−トモナス属、パ
シルス属、ブレビバクテリウム属、コリネパクテリクム
属、セラチア属、シトロノｆクター属などのごとき細菌
、アスベルギウス属、ベニシＩＪ ｆ）ム属、ムコール
属、ジベレラ属などのごときカビ、す、カロマイセス属
、キャンディダ属、ピキア属、ハンゼヌラ属、シゾサッ
カロマイセス属、リポミセス属、ロドトルラ属などのご
とき酵母、ストレグトマイセス属などのごとき放線−な
どが例示される。
として、例えばエシェリヒア属、シー−トモナス属、パ
シルス属、ブレビバクテリウム属、コリネパクテリクム
属、セラチア属、シトロノｆクター属などのごとき細菌
、アスベルギウス属、ベニシＩＪ ｆ）ム属、ムコール
属、ジベレラ属などのごときカビ、す、カロマイセス属
、キャンディダ属、ピキア属、ハンゼヌラ属、シゾサッ
カロマイセス属、リポミセス属、ロドトルラ属などのご
とき酵母、ストレグトマイセス属などのごとき放線−な
どが例示される。
これらの菌体が有する細胞壁の構造と強度は槙種異なる
ものであるが、照射するレーザー光の波長および強度を
適宜変えることによシ、細胞壁に適当な損傷を与えて菌
体内の有用物質を菌体外に排出せしめることが可能であ
る。
ものであるが、照射するレーザー光の波長および強度を
適宜変えることによシ、細胞壁に適当な損傷を与えて菌
体内の有用物質を菌体外に排出せしめることが可能であ
る。
本発明で用いるレーザー光は、通常、紫外域から赤外域
の範囲の特定波長であ）、その出力形態はＣＷ （４続
波）、・ンルスのいずれでもよい。有用物質が熱に弱い
物質の場合には、レーザー光をパルスにすることが好ま
しく、・セルス間の非照射時間によって物質の光吸収に
よる温度上昇を防ぐことができ、熱に弱い有用物質でも
安定状態で抽出可能となる。
の範囲の特定波長であ）、その出力形態はＣＷ （４続
波）、・ンルスのいずれでもよい。有用物質が熱に弱い
物質の場合には、レーザー光をパルスにすることが好ま
しく、・セルス間の非照射時間によって物質の光吸収に
よる温度上昇を防ぐことができ、熱に弱い有用物質でも
安定状態で抽出可能となる。
レーザー光による菌体の処理は通常、水、緩衝液、有機
溶剤などの媒体中に菌体を懸濁させ、これにレーザー光
を照射することによって行われる。
溶剤などの媒体中に菌体を懸濁させ、これにレーザー光
を照射することによって行われる。
レーザー光による処理の形式は目的に応じて適宜選択す
ればよく、パッチ式、半連続式、連続式のいずれの方法
を用いることができる。
ればよく、パッチ式、半連続式、連続式のいずれの方法
を用いることができる。
例えばパッチ式の場合には、微生物菌体の懸濁液にレー
ザー光を照射すればよく、また半連続式または連続式の
場合にはレーザー光照射帯域に微生物菌体の懸濁液を断
続的または連続的に供給することによって行われる。上
記懸濁液の供給方法はとくに制限されず、例えばレーザ
ー光照射帯域の上部から供給し下部から抜き出す方法、
逆に下部から供給して上部から抜き出す方法、さらには
左右に流通させる方法などが例示される。
ザー光を照射すればよく、また半連続式または連続式の
場合にはレーザー光照射帯域に微生物菌体の懸濁液を断
続的または連続的に供給することによって行われる。上
記懸濁液の供給方法はとくに制限されず、例えばレーザ
ー光照射帯域の上部から供給し下部から抜き出す方法、
逆に下部から供給して上部から抜き出す方法、さらには
左右に流通させる方法などが例示される。
大量の菌体を効率よく処理したい場合には、これらの処
理形式のなかでも半連続式または連続式が好ましく、ま
た処理後の菌体懸濁液を再度レーザー光照射帯域に循環
することによりて処理効率を向上させることができる。
理形式のなかでも半連続式または連続式が好ましく、ま
た処理後の菌体懸濁液を再度レーザー光照射帯域に循環
することによりて処理効率を向上させることができる。
循環にあたっては、遠心などの常法に従って菌体を一旦
分離したのち、再度懸濁液を調製して供給することもで
きる。
分離したのち、再度懸濁液を調製して供給することもで
きる。
菌体懸濁液中の菌体含有量は１菌重量基準で、通常０．
０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜２０重量％であ
り、液温は目的とする有用物質が変成しないかぎシとく
に制限されないが、通常、０〜１００℃好ましくＦｉｏ
〜５０℃である。またレーザー光の照射量は菌体の種類
などによシ必ずしも一様でないが、簡単な予備実験を行
うことによって容易に決定することができる。
０１〜５０重量％、好ましくは０．１〜２０重量％であ
り、液温は目的とする有用物質が変成しないかぎシとく
に制限されないが、通常、０〜１００℃好ましくＦｉｏ
〜５０℃である。またレーザー光の照射量は菌体の種類
などによシ必ずしも一様でないが、簡単な予備実験を行
うことによって容易に決定することができる。
処理後の菌体懸濁液から目的とする有用物質を回収する
方法は常法に従えばよく、例えば、溶剤抽出によシ直接
取得する方法、遠心分離等により菌体残渣を除去して得
られた上清からイオン交換クロマトグラフィー、グル濾
過、電気泳動、溶剤沈澱、塩析などの手法により回収す
る方法などが例示される。
方法は常法に従えばよく、例えば、溶剤抽出によシ直接
取得する方法、遠心分離等により菌体残渣を除去して得
られた上清からイオン交換クロマトグラフィー、グル濾
過、電気泳動、溶剤沈澱、塩析などの手法により回収す
る方法などが例示される。
（発明の効果）
かくして本発明によれば、簡単な操作で多種類の微生物
菌体からきわめて効率よく、菌体内の有用物質を抽出す
ることが出来る。
菌体からきわめて効率よく、菌体内の有用物質を抽出す
ることが出来る。
（実施例）
以下に実施例を挙げて本発明をさらに具体的に説明する
。なお、以下の実施例において、ＳＡＭについては高速
液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと略称する）
（日本分光製ＴＲＩ−Ｖ型、カラム：ＴＳＫ−８Ｐ−２
Ｓｗ、 Ｄｅｔｓｃｔｓｒ ： ＵＶ２５８ｎｍ ）を
用いて測定した。また、タン・９りについてはＬｏｗｒ
ｙ法〔ジャーナル・オプ・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）第１９３巻、第２
６５〜２７５頁、（１９５１）参照〕によって定量した
。
。なお、以下の実施例において、ＳＡＭについては高速
液体クロマトグラフィー（以下、ＨＰＬＣと略称する）
（日本分光製ＴＲＩ−Ｖ型、カラム：ＴＳＫ−８Ｐ−２
Ｓｗ、 Ｄｅｔｓｃｔｓｒ ： ＵＶ２５８ｎｍ ）を
用いて測定した。また、タン・９りについてはＬｏｗｒ
ｙ法〔ジャーナル・オプ・バイオロジカル・ケミストリ
ー（Ｊ、 Ｂｉｏｌ、 Ｃｈｅｍ、）第１９３巻、第２
６５〜２７５頁、（１９５１）参照〕によって定量した
。
実施例１
シェレンク（５ｃｈｌｅｎｋ、 Ｆ−）らの培地〔ジャ
ーナル・オツ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ。
ーナル・オツ・バイオロジカル・ケミストリー（Ｊ。
Ｂｉａｌ、 ｃｈｅｍ、 ） ２２９巻、１０３７頁（
１９５７）参照〕チーＩＪ−ッカロマイセス・セレビシ
ェ（５ａｃｃｈａｒｏｎｙｃｅｓ・ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ） ＩＦＯ−２０４４を培養して得られたＳ−７デノ
シルメチオニン（ＳＡＭ ）含有菌体１．９（湿潤重量
）を９９ゴの蒸留水に懸濁させる。その後、懸濁液３ｍ
ｌをガラスセルに入れ、スターラーで攪拌しながら、Ｙ
ＡＧレーザ−（波長２６６ｎｍ、１５ｎｘＪ ）を１０
分間照射する。照射後の液を遠心分離にかけ菌体残渣を
除き、得られた上清中のＳＡＭをＨＰＬＣで定量したと
ころ、４２．９■であった。
１９５７）参照〕チーＩＪ−ッカロマイセス・セレビシ
ェ（５ａｃｃｈａｒｏｎｙｃｅｓ・ｃｅｒｅｖｉｓｉａ
ｅ） ＩＦＯ−２０４４を培養して得られたＳ−７デノ
シルメチオニン（ＳＡＭ ）含有菌体１．９（湿潤重量
）を９９ゴの蒸留水に懸濁させる。その後、懸濁液３ｍ
ｌをガラスセルに入れ、スターラーで攪拌しながら、Ｙ
ＡＧレーザ−（波長２６６ｎｍ、１５ｎｘＪ ）を１０
分間照射する。照射後の液を遠心分離にかけ菌体残渣を
除き、得られた上清中のＳＡＭをＨＰＬＣで定量したと
ころ、４２．９■であった。
同じ培養菌体ｌ１１（湿潤型１ｋ）を１．５Ｎ過塩素酸
４１１７ＫＩｌ！濁し３７℃で１時間振とり抽出を行い
、遠心分離によシ菌体残渣を除去した抽出液に炭酸水素
カリウムを加えて…５．０に調整し、生じた過塩素酸カ
リウムの沈澱を遠心分離と濾過により除去した後、ＨＰ
Ｉ、Ｃによ、９ ＳＡＭの定ｉｋ行ったところ、５５．
０■であった。
４１１７ＫＩｌ！濁し３７℃で１時間振とり抽出を行い
、遠心分離によシ菌体残渣を除去した抽出液に炭酸水素
カリウムを加えて…５．０に調整し、生じた過塩素酸カ
リウムの沈澱を遠心分離と濾過により除去した後、ＨＰ
Ｉ、Ｃによ、９ ＳＡＭの定ｉｋ行ったところ、５５．
０■であった。
この結果、レーザー照射によるＳＡＭの抽出率は次式に
よＦ）７８．０％でちりた。
よＦ）７８．０％でちりた。
実施例２
グルコース１ ｇ／ｄｉ、ペプトン１．５ＩＩ鷹、酵母
エキス０．３ ｇ／ｄｉ 、 Ｋ２ＨＰＯ４０，３ＥＡ
、ＮａＣ４０，２１／ｄｉ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，
０２ｇ／ｄｉからなシ、ＰＩ−１７，０に調整、加熱滅
菌した液体培地にエシェリヒア・コーリー（Ｅｓｃｈａ
ｒｉｃｈｉａ−ｃｏｌ ｉ） ＡＴＣＣ−１４９４８を
植菌し、２８℃で１６時間振盪培養した。培養液を遠心
分離して得られた菌体ＩＮ（湿潤型ｉ）を、ノチオスレ
イトール（以下、ＤＴＴと略称する） ５ ｍＭを含む
０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液（Ｐ）１７．５）９９
−に懸濁した。その後、懸濁液３−を石英セルに入れ、
スターラーで攪拌しなからＹＡＧレーザ−（波長２８０
ｎｍ 、 １１ ｍＪ ）を１０分間照射処理した。
エキス０．３ ｇ／ｄｉ 、 Ｋ２ＨＰＯ４０，３ＥＡ
、ＮａＣ４０，２１／ｄｉ、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００，
０２ｇ／ｄｉからなシ、ＰＩ−１７，０に調整、加熱滅
菌した液体培地にエシェリヒア・コーリー（Ｅｓｃｈａ
ｒｉｃｈｉａ−ｃｏｌ ｉ） ＡＴＣＣ−１４９４８を
植菌し、２８℃で１６時間振盪培養した。培養液を遠心
分離して得られた菌体ＩＮ（湿潤型ｉ）を、ノチオスレ
イトール（以下、ＤＴＴと略称する） ５ ｍＭを含む
０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液（Ｐ）１７．５）９９
−に懸濁した。その後、懸濁液３−を石英セルに入れ、
スターラーで攪拌しなからＹＡＧレーザ−（波長２８０
ｎｍ 、 １１ ｍＪ ）を１０分間照射処理した。
次いで処理液を遠心分離にかけて菌体残渣を除去し、得
られた無細胞抽出液中のタン・ぐり質濃度を定量したと
ころ、７７１ｇ・湿潤菌体であったロ一方、同じ菌体５
，９（湿潤重量）をＤＴＴ ５ ｍＭを含む０．０２Ｍ
リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，５）１０１に懸濁し、
２〜１５℃で１０分間超音波破砕処理した。次に処理液
を遠心分離して菌体残渣を除去し、得られた無細胞抽出
液中のタン・！り質濃度を定量したところ、７８（ｌ・
湿潤菌体であった。
られた無細胞抽出液中のタン・ぐり質濃度を定量したと
ころ、７７１ｇ・湿潤菌体であったロ一方、同じ菌体５
，９（湿潤重量）をＤＴＴ ５ ｍＭを含む０．０２Ｍ
リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，５）１０１に懸濁し、
２〜１５℃で１０分間超音波破砕処理した。次に処理液
を遠心分離して菌体残渣を除去し、得られた無細胞抽出
液中のタン・！り質濃度を定量したところ、７８（ｌ・
湿潤菌体であった。
この結果よシ、レーザー照射によりて抽出されたタンノ
Ｊ？り質の抽出率は超音波破砕法に対して９８．７俤で
あった。
Ｊ？り質の抽出率は超音波破砕法に対して９８．７俤で
あった。
実施例３
グルコース５ＩＩ／ｄｔ、””グトン０．５１ｉ僧、酵
母エキス０．１１廖、肚２ｐ０４０．２９／ｃｔｅ 、
Ｋ２ＨＰＯ４０，１貴ｔ、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０２１／ｄｉからなシ、ｐＨ６，５に調整、加熱滅菌
した液体培地にペニシリウム・オギザリカＡ （ＰＩｎ
ｌｃｌｌｌｉｕｍ−ｏｘａｌｉｃｍｍ） ＩＦＯ−５７
４８を植菌し、２８℃で４８時間振盪培養した。培養液
を遠心分離して得られた菌体１，９（湿潤型ｉ′）を、
ＤＴＴ ５ ｍＭを含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝
液（ｐ）１７．５）９９ｍに懸濁した後、３ｄを石英セ
ルに入れ、スターラーで攪拌しなからＹＡＧレーザ−（
波長２６６ ｎｒｎ 、 １５ ｍＪ ）を１５分間照
射処理した。次いで処理液を遠心分離にかけて菌体残渣
を除去し、得られた無細胞抽出液中のタンパク質濃度を
定量したところ、３４１ｎ９Ａｌ・湿潤菌体であった。
母エキス０．１１廖、肚２ｐ０４０．２９／ｃｔｅ 、
Ｋ２ＨＰＯ４０，１貴ｔ、 ＭｇＳＯ４・７Ｈ２００
，０２１／ｄｉからなシ、ｐＨ６，５に調整、加熱滅菌
した液体培地にペニシリウム・オギザリカＡ （ＰＩｎ
ｌｃｌｌｌｉｕｍ−ｏｘａｌｉｃｍｍ） ＩＦＯ−５７
４８を植菌し、２８℃で４８時間振盪培養した。培養液
を遠心分離して得られた菌体１，９（湿潤型ｉ′）を、
ＤＴＴ ５ ｍＭを含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝
液（ｐ）１７．５）９９ｍに懸濁した後、３ｄを石英セ
ルに入れ、スターラーで攪拌しなからＹＡＧレーザ−（
波長２６６ ｎｒｎ 、 １５ ｍＪ ）を１５分間照
射処理した。次いで処理液を遠心分離にかけて菌体残渣
を除去し、得られた無細胞抽出液中のタンパク質濃度を
定量したところ、３４１ｎ９Ａｌ・湿潤菌体であった。
一方、同じ菌体ＩＦ（湿潤型Ｊｌ）をＤＴＴ ５ ｍＭ
を含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液９ｍｌに懸濁し
、と九に石英砂１ｙを入れ乳鉢で十分に磨砕した。
を含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液９ｍｌに懸濁し
、と九に石英砂１ｙを入れ乳鉢で十分に磨砕した。
次に、この処理液を遠心分離して菌体残渣と石英砂を除
去し、得られた無細胞抽出液中のタンパク質濃度を定量
したところ、３６ Ｗｌ／・湿潤菌体であった。
去し、得られた無細胞抽出液中のタンパク質濃度を定量
したところ、３６ Ｗｌ／・湿潤菌体であった。
この結果より、レーザー照射によるタンパク質の抽出率
は磨砕法に対して９４．４％であった。
は磨砕法に対して９４．４％であった。
実施例４
ペプトン１１／ｄｉ、肉エキスＱ、５ ｌ／ｄｉ、酵母
エキス０．１ ｉ／ｄｔ、ＮａＣｔＯ，５１７ｄｔから
なり−７，０に調整、加熱滅菌した液体培地に、ストレ
プトマイセス・バイグロスコピカス（Ｓｔｒａｐｔｏｍ
ｙｃｓａ・ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ＩＦＯ−３１
９２を植菌し、３４℃、７２時間振盪培養した。培養液
を遠心分離して得られた菌体ＩＩ（湿潤重量）を、ＤＴ
Ｔ ５ ｍＭ ｆ含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７，５）９９−に懸濁した。その後、愁濁液３
ｍｌを石英セルに入れ、スターラーで攪拌しなからＹＡ
Ｇレーザ−（波長２６６ ｎｍｌ １５ｍＪ）を１０分
間照射処理した。次いで処理液を遠心分離にかけて菌体
残渣を除去し、得られた無細胞抽出液中のタンパク質濃
度を定量したところ２９１１・湿潤菌体であった。
エキス０．１ ｉ／ｄｔ、ＮａＣｔＯ，５１７ｄｔから
なり−７，０に調整、加熱滅菌した液体培地に、ストレ
プトマイセス・バイグロスコピカス（Ｓｔｒａｐｔｏｍ
ｙｃｓａ・ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ）ＩＦＯ−３１
９２を植菌し、３４℃、７２時間振盪培養した。培養液
を遠心分離して得られた菌体ＩＩ（湿潤重量）を、ＤＴ
Ｔ ５ ｍＭ ｆ含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液
（ｐＨ７，５）９９−に懸濁した。その後、愁濁液３
ｍｌを石英セルに入れ、スターラーで攪拌しなからＹＡ
Ｇレーザ−（波長２６６ ｎｍｌ １５ｍＪ）を１０分
間照射処理した。次いで処理液を遠心分離にかけて菌体
残渣を除去し、得られた無細胞抽出液中のタンパク質濃
度を定量したところ２９１１・湿潤菌体であった。
一方、同じ菌体５１１（湿潤ＸＸ＞をＤＴＴ ５ ｍＭ
を含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液１０′ＩＬｌに
懸濁し、２〜１５℃で１０分間超音波破砕処理した。次
に処理液を遠心分離して菌体残渣を除去し、得られた無
細胞抽出液中のタンノ臂り質濃度を定量したところ、３
２．１ ｍｌ／ｌ・湿？１１菌体であった。
を含む０．０２Ｍリン酸カリウム緩衝液１０′ＩＬｌに
懸濁し、２〜１５℃で１０分間超音波破砕処理した。次
に処理液を遠心分離して菌体残渣を除去し、得られた無
細胞抽出液中のタンノ臂り質濃度を定量したところ、３
２．１ ｍｌ／ｌ・湿？１１菌体であった。
この結果よシ、レーザー照射によるタンパク質の抽出率
は、超音波破砕法に対して９０．３％であった。
は、超音波破砕法に対して９０．３％であった。
実施例５
実施例１と同様に培養して得られたす、カロマイセス・
セレビシェの菌体１ｇ（湿潤重量）ヲ９９ｍ１の蒸留水
に懸濁し、ＹＡＧレーザ−（波長２６６ ｎｍ 、 １
５ ｍＪ ）の照射下にある縦型の石英製フローセル（
２Ｘ１０Ｘ１００１１１）へ定量ポンプを用いて下部か
ら流速０．４ ｍ４／ｍｉ ｎで流した。７０−セルの
上部から流出する処理液を回収し、遠心分離して菌体残
渣を除去し、得られた上清中のＳＡＭをＨＰＬＣで定量
したところ、３８．９■であった。
セレビシェの菌体１ｇ（湿潤重量）ヲ９９ｍ１の蒸留水
に懸濁し、ＹＡＧレーザ−（波長２６６ ｎｍ 、 １
５ ｍＪ ）の照射下にある縦型の石英製フローセル（
２Ｘ１０Ｘ１００１１１）へ定量ポンプを用いて下部か
ら流速０．４ ｍ４／ｍｉ ｎで流した。７０−セルの
上部から流出する処理液を回収し、遠心分離して菌体残
渣を除去し、得られた上清中のＳＡＭをＨＰＬＣで定量
したところ、３８．９■であった。
実施例１において菌体中のＳＡＭ含有量は５５．０〜で
あることから、この方法による抽出率は７０．７チであ
った◎
あることから、この方法による抽出率は７０．７チであ
った◎
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、菌体内に有用物質を蓄積した微生物菌体にレーザー
光を照射し、有用物質を菌体外に排出せしめることを特
徴とする微生物菌体の処理方法。 ２、レーザー光が連続波またはパルスである特許請求の
範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19061285A JPS6251990A (ja) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | 微生物菌体の処理方法 |
| DE8686306599T DE3680172D1 (de) | 1985-08-29 | 1986-08-27 | Verfahren zur behandlung von protistezellen. |
| EP19860306599 EP0218352B1 (en) | 1985-08-29 | 1986-08-27 | A process for treating protista cells |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP19061285A JPS6251990A (ja) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | 微生物菌体の処理方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6251990A true JPS6251990A (ja) | 1987-03-06 |
Family
ID=16260966
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP19061285A Pending JPS6251990A (ja) | 1985-08-29 | 1985-08-29 | 微生物菌体の処理方法 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0218352B1 (ja) |
| JP (1) | JPS6251990A (ja) |
| DE (1) | DE3680172D1 (ja) |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HU204856B (en) * | 1987-08-12 | 1992-02-28 | Orszagos Mueszaki Fejlesztesi | Process for releasing cell mixtures and tissues from undesired populations and for producing monoclonal antibody - hematoporphyrin conjugates |
| AT389889B (de) * | 1988-05-03 | 1990-02-12 | Langenecker Bertwin Dr | Verfahren und vorrichtung zum inaktivieren von in einem traegermedium enthaltenen viren |
| FR2815640B1 (fr) * | 2000-10-19 | 2004-01-30 | Centre Nat Rech Scient | Procede de production de proteines par electropulsation de levures |
| JP3973606B2 (ja) * | 2003-07-04 | 2007-09-12 | 本田技研工業株式会社 | 無段変速機用ベルト |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2558750C3 (de) * | 1975-12-24 | 1980-04-03 | Kernforschungsanlage Juelich Gmbh, 5170 Juelich | Herstellung einer Masse von in einer physiologischen Lösung suspendierten, eine Zellwand aufweisenden lebenden Zellen von Lebewesen |
| EP0137504B1 (en) * | 1983-10-13 | 1991-01-16 | Rikagaku Kenkyusho | Method and apparatus of implanting living cells with a foreign substance |
-
1985
- 1985-08-29 JP JP19061285A patent/JPS6251990A/ja active Pending
-
1986
- 1986-08-27 EP EP19860306599 patent/EP0218352B1/en not_active Expired
- 1986-08-27 DE DE8686306599T patent/DE3680172D1/de not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DE3680172D1 (de) | 1991-08-14 |
| EP0218352A1 (en) | 1987-04-15 |
| EP0218352B1 (en) | 1991-07-10 |
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