JPS6237614B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、ヒト尿中酸性プロテアーゼを有効成
分とする抗腫瘍作用を有する医薬組成物に関す
る。 従来より、極めて多くの抗腫瘍薬が開発されて
来た。これらの抗腫瘍薬は大別して次の２種に分
類される。すなわち、第１はいわゆる細胞毒であ
り、その作用により直接に腫瘍の増殖を抑制する
ものである。第２は、免疫賦活作用を有するもの
で、宿主の免疫防禦機能を賦活し、異物である腫
瘍の増殖を間接的に抑制するものである。しかし
ながら、前者に属する薬物は、腫瘍細胞に対する
選択毒性が充分でなく、生体の正常細胞に対して
も毒作用を発現するため、その使用総量にはかな
り制限が設けられている。一方、後者の免疫賦活
剤は副作用発現の頻度が少なく、安全性の高いも
のが多いが、本来、腫瘍は患者の正常細胞より派
生したものであるため、免疫防禦機能によつて
は、異物として充分認識されず、充分な抗腫瘍作
用は得にくいという本質的な問題を有する。 これらの観点から、本発明者らは充分な抗腫瘍
作用を有し、安全性も高い医薬を提供すべく、ヒ
ト由来の蛋白性物質について多年にわたり研究を
行つた結果、ヒト尿中酸性プロテアーゼに抗腫瘍
作用を見出し、本発明を完成させた。 本発明の有効成分である酸性プロテアーゼは公
知の酵素であるが〔ミルスキーら（Mirsky etal.
）、ジヤーナル オブ クリニカル インベステ
イゲーシヨン（J.Clin Invest.）27巻、818頁、
1948年〕、従来、腫瘍に対する治療剤としては用
いられたことがなかつた。この酸性プロテアーゼ
は蛋白質を精製する場合に用いる一般的方法、例
えば塩析法、無機吸着体による吸着クロマトグラ
フイー、イオン交換樹脂によるイオン交換クロマ
トグラフイー、分子ふるい効果を有するゲルクロ
マトグラフイーなどを適宜組み合わせることによ
りヒト尿から採取することができる。 例えば、ヒト尿をセイフアーら（Seijffers）の
方法〔アメリカン ジヤーナル オブ フイジオ
ロジー（Amer.Physiol.）206巻、1106頁、1964
年〕に準じ、0.1M酢酸緩衝液（PH5.3）にて平衡
化したDEAE−セルロースカラムを通過させるこ
とにより、酸性プロテアーゼを吸着させたのち、
0.3Mの塩化ナトリウムを含む同緩衝液にて溶出
する。溶出液を濃縮後、0.9％の生理食塩水に膨
潤せしめたセフアデツクスＧ−100によるゲルク
ロマトグラフイーにてさらに精製し、酸処理を行
うことにより本発明の酸性プロテアーゼを得るこ
とができる。 本法により得た酸性プロテアーゼは、セフアデ
ツクスＧ−100ゲルクロマトグラフイーによる分
析の結果、分子量32000−38000であり、アンフオ
ライン等電点電気泳動法による等電点は１〜３で
あり極大吸収278nm、ニンヒドリン反応陽性、水
に易溶、エーテルクロロホルムに不溶である。ま
た、この酸性プロテアーゼは、PH7.0以下の酸性
領域にて、ヘモグロビンに対して高い水解活性を
示すが、ペプスタチンによつて著明に抑制される
性質を有する。また、この酸性プロテアーゼはPH
7.0以下の酸性領域にて安定、PH8.0以上のアルカ
リ性にて不安定である。以下、この酸性プロテア
ーゼの有効性、毒性、用法および用量について説
明する。 実験例 １ ヒト乳癌細胞MX−１およびマウス白血病細胞
L1210の培養増殖におよぼす影響 培養可能なヒト乳癌細胞MX−１およびマウス
白血病細胞L1210を10⁵／mlの細胞濃度で、10％
仔牛血清添加イーグル培地および被検化合物の希
釈液を添加し、５％炭酸ガス下37℃で48時間培養
後、生細胞数をトリパンブルー染色法により測定
した。結果は次式により増殖抑制率を計算し、第
１表に示した。 増殖抑制率＝（１−処置群の生細胞数／対照群の生細
胞数）×100

【表】 以上の結果から明かなように酸性プロテアーゼ
は低濃度で腫瘍削胞の増殖を抑制した。 実験例 ２ ヌードマウスに移植したヒト乳癌細胞MX−１
の増殖におよぼす影響 ヌードマウス（BALB／Ｃ系、nu／nu）にて継
代されたヒト乳癌細胞MX−１ ２mm角を、１群
５匹の同系ヌードマウス背部皮下に移植２週後よ
り、被検物質を１日２回18日間静脈内投与した。
被検物質投与18日目に腫瘍を摘出し、その重量を
測定した。結果を第２表に示した。

【表】 的に有意
酸性プロテアーゼは低用量で明らかな抗腫瘍作
用を示した。 実験例 ３ 白血病細胞P388を移植したマウスにおける延
命効果 一群５匹のBDF₁雄マウスの腹腔内に白血病細
胞P388 10⁵個を移植し、翌日より動物が死亡する
まで１日２回、被検物質を静脈内投与した。被検
物質の延命効果を次式より算出し、百分率で表し
た。 延命効果（％） ＝被検物質投与群の平均生存日数／対照群の平均生
存日数×100 結果を第３表に示す。

【表】 学的に有意
本実験においても、酸性プロテアーゼは明らか
な抗腫瘍作用を示した。 実験例 ４ 急性毒性試験 体重20−25ｇのddY系雄マウスを１群10匹と
し、生理食塩水に溶解した酸性プロテアーゼ２
ｇ／Kgを静脈内または腹腔内にそれぞれ投与した
後、１週間にわたつて症状を観察したが、何ら異
常を認めなかつた。 以上の実験例で明らかなように、本発明の主成
分である酸性プロテアーゼは、強力な抗腫瘍作用
を有し、その用量は、急性毒性実験の結果から、
充分安全な用量である。また、ヒト由来の蛋白質
であるために、抗原性に起因するアナフイラキシ
ーシヨツクなどの重篤な副作用を招来する危険性
も少ないと考えられ、諸種の腫瘍に対し、臨床上
極めて有用な薬剤と考えられる。 本発明の治療剤は通常注射剤として、静脈内、
動脈内、皮下、筋肉内および腫瘍局所などに投与
されるが、経口剤、吸入剤、直腸用坐剤として用
いることもできる。酸性プロテアーゼの成人の治
療量は１日当り１〜1000mg好ましくは50〜500mg
であるが、症状あるいは用法に応じて適宜増減す
ることができる。 本酸性プロテアーゼは任意、慣用製薬用担体あ
るいは賦形剤とともに慣用の方法で医薬用製剤に
調製することができる。 注射剤としては用時溶解して用いる凍結乾燥製
剤あるいは注射液剤、経口投与剤としてはカプセ
ル剤、錠剤、顆粒剤、散剤あるいは経口用液体製
剤、吸入剤としては凍結乾燥剤、直腸内投与剤と
しては直腸用坐剤とするのが好ましい。 次に本発明の実施例を示す。 実施例 １ 酸性プロテアーゼ100mgを10mlの生理食塩水に
溶解し、メンブレンフイルターを用いて無菌的に
過する。液を滅菌したガラス容器に10mlずつ
充填して凍結乾燥し、これを密栓して凍結乾燥粉
末製剤とする。 実施例 ２ 凍結乾燥した酸性プロテアーゼ100ｇ、乳糖97
ｇおよびステアリン酸マグネシウム３ｇをそれぞ
れ秤量したのち均一に混合する。これをNo.２のゼ
ラチンカプセルに200mgずつ充填したのち腸溶皮
膜を施し、腸溶カプセル剤とする。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ ヒト尿中酸性プロテアーゼを有効成分とする
   抗腫瘍作用を有する医薬組成物。