JPS62281897A - ペプチド類・抗体および測定法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 イ０発明の目的 〈産業上の利用分野〉 本発明は、ヒトインシュリン受容体蛋白質に関連する種
々のポリペプチドおよびその抗体を用いて免疫化学的に
ヒトインシュリン受容体エピトープまたはその構成蛍白
質を測定するための抗原・抗体および測定法を提供する
ものである。

〈従来の技術〉 ヒトインシュリン受容体蛋白質の構造は、（ＣｅｌｌＶ
ｏｌ、４０．７４７−７５８．１９８５　）や（Ｎａｔ
ｕｒｅ　３１３ニア５６−７６１．１９８５）に報告さ
れているように、インシュリン結合部位のある２本のα
サブユニットおよヒインシュリンによって活性化される
チロシンキナーゼ活性およびＡＴＰ結合部位がある２本
のβサブユニツト部分から構成されている。

インシュリン作用発現の第一歩はインシュリンがインシ
ュリン受容体に結合することが必須であり、この結合が
異常の場合は当然インシュリン作用の低下をきたし、糖
尿病症状を呈する。インシュリン受容体機能を解析する
ことは、糖尿病の病態を解明する上でも重要なことであ
り、従来より１！Ｊ・インシュリンを用いて、インシュ
リン受容体への結合能試験等が研究されている。

〈発明が解決しようとする問題点さ ヒトインシュリン受容体は前にも述べたように、インシ
ュリン結合部位のあるαサブユニットおよびインシュリ
ンがインシュリン受容体に結合することによって、活性
化されチロシンキナーゼ活性が発現するβサブユニツト
部位がら構成されている。

ヒトインシュリン受容体の異常による糖尿病を、ヒトイ
ンシュリン受容体自体に注目して、解析する場合、ヒト
インシュリン受容体のαサブユニットおよびβサブユニ
ットを構成する個々のアミノ酸配列中の機能の解析研究
が必要となってくる。

本発明は、ヒトインシュリン受容体異常に基づく糖尿病
や受容体異常疾患に関与する種々の病態の解析および診
断を可能とすることを目的として、ヒトインシュリン受
容体蛋白質に関連するペプチド断片の抗体およびその抗
体を用いるインシュリン受容体蛋白質および関連蛋白質
の測定法を提供するものである。

口１発明の構成 く問題点を解決するための手段〉 本発明者は、ヒトインシュリン受容体蛋白質の全アミノ
酸配列について、各種ペプチド断片をペプチド合成し、
これらペプチドフラグメント抗原群を免疫原として、各
種抗体を作製した。

各種ヒトインシュリン受容体蛋白質に関連するペプチド
断片抗原群およびこれらに対する抗体群の組合せにより
、ラジオイムノアッセイ法、ＩＲＭＡ法、エンザイムイ
ムノアッセイ法等の免疫化学的方法およびインシュリン
とインシュリン受容体の反応を用いて、ヒトインシュリ
ン受容体蛋白質または、その一部を構成する関連蛋白質
を測定することが可能となる。

〈作　用〉 ヒトインシュリン受容体蛋白質またはその一部を構成す
る蛋白質を測定するために、各種ヒトインシュリン受容
体蛋白質に対する抗体に、＋ｚｓＩ。

＋３１　（等の放射性同位元素または酵素等を標識した
、標識抗体および該抗体を適当な固相例えばポリエチレ
ン、ポリスチレン、ポリプロピレン等のプラスチック類
またはガラス類等をビーズ状、シート状またはチューブ
状等その他種々の形状に加工した担体上に保持した固相
化抗体を用いて、各種ヒトインシュリン受容体蛋白質に
関連するポリペプチドをサンドインチ法によるＩＲＭＡ
法により測定することが可能となる。

また、該測定に関しては、各種ヒトインシュリン受容体
蛋白質に関連するポリペプチドを直接放射性同位元素等
により標識した、トレーサー、該抗体および該フラグメ
ントを用いた競合反応系によるラジオイムノアッセイ法
やエンザイムノアソセイ法で測定することも可能である
。

ここで、該フラグメント中にヒスチジン基およびチロシ
ン残基を含まない旧Ｒ（９−２５）、　ＨＩＲ（４３６
−４６６）、　ＨＩＲ（５２５−５５８）、　ＨＩＲ（
７５６−７８４）、　ＨＩＲ（１２４７−１２６５）に
ついては、放射性同位元素による標識体の作製は困難で
あるがこれらフラグメントについてもパラヒドロキシフ
ェニルプロピオンｆｌを、フラグメント中に導入したペ
プチド合成により標識体の作製も可能となる。該合成フ
ラグメントおよび抗体が得られれば、その他抗原抗体反
応を利用した種々の免疫化学的測定法への応用が可能と
なる。またヒトインシュリンとヒトインシュリン受容体
の反応を用いた測定系も利用できる。さらに、本発明者
は、化学合成したヒトインシュリン受容体蛋白質に対す
る抗体を用いて、ＰＡＰ法により組織内インシュリン受
容体を検索し、ヒト肝臓および脳組織にヒトインシュリ
ン受容体の存在を確認した。

実施例１ ヒトインシュリン受容体蛋白質フラグメント〔ＨＩＲ（
３０−６１）　）の合成 （１１合成は、固相法の常法により行なわれる。

９９０Ｂ型”）の反応器に入れて開始され、順次アミノ
酸を合成される。保護基の脱離は、ＣＬＣ１ｚ中の２５
％トリフルオロ酢＃　（ＴＦＡ）及び１．２−エタンジ
チオールで３０分間処理して行ない、引続きＣＯ，Ｃ＊
、中の１０％トリエタノールアミン（Ｅｔ、Ｎ）で中和
される。

各アミノ酸（０，５０ｍｍｏＬ）の連続的カップリング
は、ＣＨ２Ｃβ２中、２時間でジシクロへキシルカルボ
ジイミド（ＤＣＣ）　（０，５０ｍｍｏｌ）によってな
される。檀媒量はＤＣＣ力月、０ｍ１ｌ　　（０，５Ｍ
）である以外は、３６ｍ１である。

合成の一サイクルは、次の操作よりなる。

■　ＣＨ２１Ｚで洗浄（１，５分間、３回）■　２５％
ＴＦ八／ＣＨへＣＪｚ及び１％１．２−エタンジチオー
ルで脱保護基（１，５分間予備洗浄、ついで３０分間処
理） ■　ＣＨ２ＣＩ！、２で洗浄（１，５分間、６回）■　
１０％Ｅｔ３Ｎ　／　ＣＨｚＣｊ２　ｚで中和（１，５
分間、３回） ■　ＣＨ２ｆＪ２で洗浄（１，５分間、６回）■　Ｂｏ
ｃ−アミノ酸（０，５１ｍｅｑｕｉｖ、、ＣＩｌ、Ｃ１
！中、５分間）処理 ■　ろ過なしに、ＤＣＣ（０，５０ｍｅｑｕｉｖ、）を
添加し、１２０分間カップリングさせる。

■　Ｃｌ２Ｃｌ　ｚで洗浄（１，５分間、６回）■　そ
れぞれ０．５０　ｍｅｑｕｔｖ、のＢｏｃ−アミノ酸及
びＤＣＣで上記■〜■の工程をくりかえす。

二番目のサイクル以降において、くりかえし工程におけ
る反応は、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＩＩＯ
ＢＴ）　（０，５０ｍｍｏｌ、　　６８　ｍｇ）の存在
下に行なわれる。

一力ソプリング反応後、ペプチド−樹脂は、ＤＭＦ（３
６ｍｌ、１５分間、２回）、メタノール（３６ｍ７！、
１５分間、２回）及びＣＨｚＣｇ　ｚ（３６ｍｌ、１５
分間、２回）で洗浄される。

ＨＯＢ　を及びＢｏｃ−アミノ酸はＤＭＦ（１０ｍＮ）
及びＣＨｚＣｊ２ｇ（２０ｍＮ）に？容解される。Ｂｏ
ｃ−アミノ酸はＣ１ｌ□Ｃｎｚ（３０ｍｊりに溶解され
る。ただし、Ｂｏｃ　−Ｌｅｕ　−１ｔ、０はＤＭＦ（
１０ｍｊり及びＣＨ２Ｃｌ　２（２０ｍｌ）に？容解さ
れる。

Ｂｏｃ−Ｇｌｎ及びＢｏａ−八ｓｎは、ＤＭＦ（１０ｍ
Ｊ）及びＣＨｚＣｌｚ（２０ｍＡ’）に溶解され、等モ
ル量の１１０Ｂｔの存在下にカップリングされる。

反応容器は、空気による酸化を最小限にするために、合
成時に窒素雰囲気下に保持される。

各カップリング反応後に洗浄工程を行ない、未反応の遊
離アミノ基の存在をニンヒドリンチストによりモニター
する。

アミノ酸としては、次のような保護アミノ酸が使用され
る。

Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂ
ｚｌ）、　　Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚｌ）。

Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−Ｇｉｎ　　
　、　　Ｂｏａ−Ｐｒｏ　　　。

Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　　、　　Ｂｏｃ−−Ｍｅｔ　　　
、　　Ｂｏｃ−１ｉｅ−％Ｉ１．０゜Ｂｏｃ−Ｌｅｕ　
・Ｈ２Ｏ，Ｂｏｃ−Ｔｙｒ　（Ｃ１’ｚ−Ｂｚｌ）、　
　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ。

Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（（／！−Ｚ）、　Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔ
ｏｓ）＋　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）全サイクルを終
了し、１．７７０ｇの保護ペプチド−樹脂を得る。

その一部（１，２４０ｇ）をアニソール（５，０＋ｎｊ
り及びメチルエチルサルファイド（１，０ｍｎ）の存在
下に再蒸留しＨＦ　（６０ｍｆｆ）で０℃、６０分間、
常法により処理する。ＨＦは真空ポンプにより０℃で除
去される。生じる黄色の樹脂は、酢酸エチルで数回洗浄
される。

ペプチドを３Ｍ酢酸（２００＋＋＋７りで抽出し、つい
で凍結乾燥する。得られた粗ペプチドは０、６２５　ｇ
であった。

（２）次に、粗ペプチド（２３旧１をＯ，０ＩＮｔｌ（
／！　（５０ｍ／）に溶解し、高速液体クロマトグラフ
ィー（ＨＰＬＣ）に付して、分光光度計（２１０ｎｍ）
及びＨＰＬＣ（”ＴＳＫ　ＧＥＬ″００５−１２０　Ｔ
、カラム：０．４６　Ｘ　２５ｃｍ、　’ｌ容媒：　０
．０１　Ｎ　ＨＣＪ　／ＣＨ，ＣＮ＝７０／３０−５．
０１５０、直線濃度勾配、３０分、流速：　１　ｍ１１
分）でモニターされる。目的とするピークを分取し、凍
結乾燥すると３５．７　ａｇの白い粉末が得られた。Ｉ
ＩＰＬｃによると、１７．５分で？容出された。

（３）得られたペプチドのＲｆ値および比旋光度は次の
通りであった。

Ｒｆｌ　　　０．２０　　　、　　　Ｒｆ”　　　０．
４９溶媒系　Ｒｆ　’　：　Ｉ　　ＢｕＯＨ：　ＡｃＯ
Ｈ：　ＨｚＯ（４：　　１　　：　　５） Ｒｆ”　：　Ｉ　　ＢｕＯＨ：ピリジン：　ＡｃＯＨ：
　ＨｚＯ（３０：２０：６：２４） 〔α）　ｉ’　　　　１０４　”　　（Ｃ０，１，ＬＭ
　Ａｃ０Ｈ）（４）また、得られたペプチドのアミノ酸
組成は次のとおりであった。なお分析はペプチド加水分
解物（６ＮｌｌＣＮ、２４時間、１１０℃）について行
なった。

Ａｓｐ　３．０３　（３１Ｔｈｒ　１．９０　（２）　
　Ｓｅｒ　Ｏ，８６（１）Ｇｌｕ　３．１１　＋３１　
　Ｐｒｏ　２．０２　（２１、Ｇｌｙ　Ｏ，９７１１１
Ｍｅｔ　１．８９　＋２１　　ｌｉｅ　２．９５　（３
１Ｌｅｕ　６．２３　（６１Ｔｙｒ　Ｏ，９９ｆｉｌ　
　Ｐｈｅ　２．８９　＋３１　　Ｌｙｓ　２．０３１２
１１１ｉｓ　Ｏ，９６（１１Ａｒｇ　２．０３　（２１
実施例２ 実施例１の方法に準じ、以下のヒトインシュリン受容体
蛋白質のフラグメントを合成した。

ＣＩＩＩＲ（９−２５）　）の合成 （１１使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−八ｓｎ　　
　　　　　、　　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−
Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　　ＢｏｃＬＰｒｏ　　　　　、
　　Ｂｏｃ−ＧｌｙＢｏｃ−Ｍｅｔ　　　　　、　　Ｂ
ｏｃ−１１ｅ−’ＡＨｚＯ，Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−Ｈ，０Ｂ
ｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）、　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ
）（２）高速液体クロマトグラフィー（ＩＩＰＬｃ）に
よる精製条件 カラム：ＴＳＫ　ＧＥＬ”　００Ｓ１２０Ｔ、　０．４
６Ｘ２５ｃｍ溶媒：　０．ＯＩＮ　ＨＣ１／ＣＨｆｆＣ
Ｎ　＝８０／２０−６５／３５゜直線、３０分 流　速：１．Ｏｎ＋ｊ！／分、溶出時間：１４．５分（
３１Ｒｆ値および比旋光度 Ｒｆｌ　　Ｏ，０、ＲｆｒｉＯ，０ 〔α）　ｉ’　　−２５”　（Ｃ１，０，ＬＭ　Ａｃ０
Ｈ）（４）　　酸加水分解におけるアミノ酸比Ａｓｐ　
３．９８　（４１，Ｔｈｒ　Ｏ，９８ｆｉｌ、　　Ｇｌ
ｕ　２．０３　Ｆ２）Ｐｒｏ　１．０２　（１１，Ｇｌ
ｙ　Ｏ，９９（１）、　　門ｅＬ　Ｏ，９６（１１１ｉ
ｅ　１．００　（１１，Ｌｅｕ　３．０８　（３）、　
　ｆｉｔｓ　Ｏ，９６（１１Ａｒｇ　２．００　（２１ 〔ＨＩＲ（４８−７７）　）の合成 （１）　　使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂ
ｚｌ）　　＋　　Ｂｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏａ−Ｇ
ｌｕ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　　　　、　　
Ｂｏｃ−ＧｌｙＢｏｃ−Ｖａｌ　　　　　、　　Ｂｏｃ
−Ｍｅｔ　　　　　＋　　Ｂｏｃ−１１ｅ−！４ＨｚＯ
Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＪＯ＋　　　Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃ１ｚ
−Ｂｚｌ）、　　Ｂｏｃ−ＰｈｅＢｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｃ
１−Ｚ）　、　Ｂｏｃ−Ａｒｇ　（Ｔｏｓ）（２）高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による精製条件 カラム：　”　ＴＳＮ　ＧＥＬ”　ＯＤＳ　　１２０Ｔ
、　０．４６Ｘ２５（Ｊ１１溶媒：　０．ＯＩＮ　ＨＣ
Ｎ　／ＣＩｈＣＮ　＝６０／４０−４０／６０゜直線、
３０分 流　速：１．０ｍ４１７分、溶出時間：１６．７分（３
）・Ｒｆ値および比旋光度 ＲｆＩＯ，０、Ｒｆｎ　　Ｏ，０ （α）　：’　　−１６’　　（Ｃ１，Ｏ，ＤＭＦ）（
４）酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　３．０
０　（３１，Ｔｈｒ　Ｏ，８９（１１，Ｓｅｒ　１．８
８　Ｆ２１Ｇｌｕ　１．０７　（１１，Ｐｒｏ　２．０
５　（２１，Ｇｌｙ　１．０１　（１１Ｖａｌ　Ｏ，９
５ｆｌ）、　　Ｍｅｔ　Ｏ，９５（１１，ｌｉｅ　１．
８２　（２１Ｌｅｕ　８．３８　Ｆ８）、　　Ｔｙｒ　
１．９０　＋２１．　　Ｐｈｅ　３．０２　（３１Ｌｙ
ｓ　１．９１　（２１，Ａｒｇ　１．０５　（１）〔Ｈ
ＩＲ（７８−１０９）　）の合成 ＋１１　　使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）
　、　Ｂｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　　、　Ｂｏａ−Ａｌａ
Ｂｏｃ−Ｖａｌ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｍｅｔ　　　　、
　Ｂｏｃ−１１ｅ−％ＨｚＯＢｏｃ−Ｌｅｕ・ＩＩｚＯ
，Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（ｆｌｚ−Ｂｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｐｈ
ｅＢｏａ−Ｌｙｓ（Ｃ／−Ｚ）、Ｂｏａ−Ｈｉｓ（Ｔｏ
ｓ）、　　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（２）高速液体
クロマトグラフィー（ＩＩＰＬＣ）による精製条件 カラム：　”　ＴＳＫ　ＧＥＬ”ＯＤＳ　−１２０Ｔ、
　０．４６　Ｘ　２５ｃｍ）容　　媒　：　０．ＯＩＮ
　　ＨＣβ／Ｃ１１３ＣＮ　　＝７０／３０−５０１５
０゜直線、３０分 流　速：１．ＯｍＪ／分、溶出時間：１７．５分（３１
Ｒｆ値および比旋光度 Ｒｆｌ　　Ｏ，０、Ｒｆ”　　０．５８〔αＢ’　　−
３ｔ”　　（Ｃ１，０，５０％Ａｃ０Ｈ）（４）酸加水
分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　３．１１　（３１
，Ｔｈｒ　Ｏ，９６［１１，Ｓｅｒ　Ｏ，８８（１）Ｇ
ｌｕ　２．０３　（２１，Ｇｌｙ　１．８９　（２１，
Ａｌａ　Ｏ，９９（１）Ｖａｌ　２．６６　（３］、　
　Ｍｅｔ　Ｏ，９６（１１，ｌｉｅ　１．７０　（２１
Ｌｅｕ　７．５５　　（７１，Ｔｙｒ　２．０５　　（
２）、　　Ｐｈｅ　２．９７　　（３１Ｌｙｓ　Ｏ，９
８（１１，Ｈｉｓ　１．０９　（ＩＬ　　Ａｒｇ　２．
１５　（２１〔ＨＩＲ（９５−１２５）　）の合成 ＋１１　　使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）
　＋　Ｂｏａ−Ｓｅｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢ
ｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｖａｌ
Ｂｏｃ−Ｍｅｔ　　　　、　Ｂｏｃ４１ｅ−ｚ１１□Ｏ
，Ｂｏａ−Ｌｅｕ・１１．０Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃ７！ｚ
−Ｂｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ　　、　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ
（Ｃ６−Ｚ）Ｂｏｃ−１１ｉｓ（Ｔｏｓ）、　　Ｂｏｃ
−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（２）高速液体クロマトグラフィー
（ＩＩＰＬｃ）による精製条件 カラム：　”ＴＳＫ　ＧＥＬ’　００５−１２０Ｔ、０
．４６Ｘ２５ｃｍ溶媒：　０．０１Ｎ　）Ｉｉ　／ＣＨ
：ＩｃＮ　＝８０／２０−６０／４０゜直線、４０分 流　速：１．０ｍＡ／分、溶出時間：２７．０分（３１
Ｒｆ値および比旋光度 １１ｆＴ　　Ｏ，１９、Ｒｆ”　　０．４２〔α〕Ｈ−
３７″　（Ｃ０，１，５０％Ａｃ０Ｉｌ）（４）酸加水
分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　４．１９　（４１
，Ｔｈｒ　１．００　（ＩＬ　　Ｓｅｒ　Ｏ，９７ｆｉ
ｌＧｌｕ　４．０８　（４１，Ｇｌｙ　２．１９　　（
２１，Ｖａｌ　　１．８１　　（２）Ｍｅｔ　１．８３
　（２１，Ｉｌｅ　２．９０　　（３１，Ｌｅｕ　５．
１１　　（５）Ｔｙｒ　１．０５　（１１，Ｐｈｅ　Ｏ
，９０（１１，Ｌｙｓ　　１．９５　（２１Ｈｉｓ　Ｏ
，９２ｆｉｔ、　　Ａｒｇ　２．０７　（２１（ＨｒＲ
（１２７−１５４）　）の合成（１）使用した保護アミ
ノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　
　、　　Ｂｏａ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂ
ｚｌ）　、　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ
−ＡｌａＢｏｃ−Ｖａｌ　　　　、　Ｂｏｃ−１１ｅ−
Ｖ２ＨｚＯ，Ｂｏａ−Ｌｅｕ・ＨｚＯＢｏｃ−Ｔｙｒ　
（ＣＩＩ　ｚ−Ｂｚｌ）　、　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｃ１
−Ｚ）　、　Ｂｏｃ−Ｈｉｓ　（Ｔｏｓ）　。

Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ） （２）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による
精製条件 カラム：　”ＴＳＫ　ＧＥＬ”　０ＤＳ−１２０Ｔ、　
０．４６Ｘ２５ｃｍ？容　　媒　：　０．０ＩＮ　　Ｈ
Ｃｌ　／Ｃｌｌ５ＣＮ　　＝７０／３０−５０１５０゜
直線、３０分 流　速：１．Ｏｍｆ／分、溶出時間：２２．５分Ｆ３１
　　Ｒｆ値および比旋光度 Ｒｆｌ　　０．０　　、　　Ｒｆｎ０．０〔α〕２４−
４０°　（Ｃ０，１，５０％Ａｃ０ＩＩ）（４）酸加水
分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　７．９０　（８Ｌ
　　Ｔｈｒ　Ｏ，９７（１１，Ｓｅｒ　１．８５　（２
１Ｇｌｕ　　３．１０　　（３Ｌ　　　八ｌａ　　１．
０６　　（１）、　　　Ｖａｔ　　１．９２　　（２１
！１ｅ　２．７５　＋３１．　　Ｌｅｕ　３．０６　（
３１，Ｔｙｒ　１．０６　（１１Ｌｙｓ　１．１２　ｆ
ｉｌ、　　Ｈｉｓ　１．０６　ｆｌｌ、　　Ａｒｇ　１
．０Ｏｆｉｔ（１１１Ｒ（７３６−７６０）　］の合成
（１）　　使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　Ｂｏａ−Ａｓｎ　　　
　、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（ＯＢｚｌ）Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂ
ｚｌ）　＋　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｇｌ
ｙＢｏｃ−Ａｌａ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｖａｌ　　　　
、　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＨｚＯＢｏｃ−Ｐｈｅ （２）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による
精製条件 カラム：“ＴＳＫ　ＧＥＬ”ＯＤＳ　−１２０Ｔ、　０
．４６　Ｘ　２５印？容　　媒：　０．０１Ｎ　　ＨＣ
ｊ！　／ＣＨ３ＣＮ　　＝８０／２０−６０／４０゜直
線、３０分 流　速：１．Ｏｎ／ｌ／分、溶出時間：１８．０分（３
１Ｒｆ値および比旋光度 ＲｆＴ　　Ｏ，１３、Ｒｆｎ　　Ｏ，３−８〔αＢ’　
　−１ｏｓ″　（Ｃ０，１，５０％Ａｃ０１ｌ）（４）
酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　３．１６　
（３１，Ｔｈｒ　３．７９　（４１，Ｓｅｒ　３．６６
　（４１Ｐｒｏ　２．０９　（２）、　　Ｇｌｙ　２．
０４　（２１，Ａｌａ　２．９１　＋３１Ｖａｔ　５．
１１　（５Ｌ　　Ｌｅｕ　Ｏ，９６（ＩＬ　　Ｐｈｅ　
Ｏ，９４（１）Ｃｌ（ＩＲ（７５６−７８４）　）の合
成（１）　　使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）
　、　　Ｂｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　　　　、　　Ｂｏｃ−Ｇ
ｌｙＢｏｃ−Ｖａｌ　　　　、　Ｂｏｃ−［１ｅ−％Ｈ
ｚＯ，Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＨｚＯＢｏｃ−Ｐｈｅ　　　　
、　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｊ！−Ｚ）、　Ｂｏｃ−Ｈｉｓ
（Ｔｏｓ）。

Ｂｏａ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ） （２）高速液体クロマトグラフィー（ＩＩＰＬｃ）によ
る精製条件 カラム：　”ＴＳＫ　ＧＥＬ’　０ＤＳ−１２０Ｔ、　
　０．ｌＸ３０ｃｍ溶媒：　０．０１Ｎ　ＨＣｊ！　／
Ｃ）１３ＣＮ　＝８５／２５−５０１５０゜直線、３０
分 流　速：１．Ｏｍｍ！／分、溶出時間：１７．５分（３
１Ｒｆ値および比旋光度 Ｒｆｌ　　０．０　　、　　Ｒｆ”　　０．０〔αＢ４
　　−　９３　″　　（Ｃ（）、１．　　５０　　％へ
ｃＯ）１）（４）酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａ
ｓｐ　Ｏ，９１（１）、　　Ｔｈｒ　２．８６　（３１
，Ｓｅｒ　５．６Ｌ　（６１Ｇｌｕ　３．７９　（４１
，Ｐｒｏ　３．１１　（３）、　　Ｇｌｙ　１．００　
（１１Ｖａｌ　４．２３　（４）、　　ｌｉｅ　Ｏ，９
８（１１，Ｌｅｕ　１．０８　（１１Ｐｈｅ　１．０９
　ｆｌｙ、　　Ｌｙｓ　１．９９　（２１，Ｈｉｓ　Ｏ
，９８（１）Ａｒｇ　Ｏ，９８＋１１ Ｃ１１１Ｒ（９５７−９８０）　）の合成（１１使用し
た保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−八ｓｎ　　
　　　　　、　　Ｂｏｃ−５ｅｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−Ｇ
ｌｕ（ＯＢｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　　　　、　Ｂｏ
ｃ−ＧｌｙＢｏｃ−Ａｌａ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｖａｌ
　　　　、　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＨｚＯＢｏｃ−Ｔｙｒ（
Ｃｊ！　２−Ｂｚｌ）　、　Ｂｏｃ−Ｐｈｅ（２）高速
液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による精製条件 カラム：　Ｃｈｅｍｏｓｏｒｂ−３００ｔｃ＋ａ、０．
４６Ｘ２５ｃｍ溶媒：　０．０１Ｎ　ＨＣＩ　／ＣＨ，
ＣＮ　＝８０／２０”−６０／４０゜直線、３０分 流　速：１．２ｍ＋２／分、溶出時間：１９．０分（３
１Ｒｆ値および比旋光度 ＲｆＩ　　Ｏ，１７、Ｒｆｎ０．３４ 〔α）ｒ　　−９１１（Ｃ０，１，ｓｏ％Ａｃ０Ｈ）（
４）　　酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　２
．８４　（３）、　　Ｓｅｒ　３．６９　（４）、　　
Ｇｌｕ　Ｏ，９７［１１Ｐｒｏ　５．３１　（５１，Ｇ
ｌｙ　１．９３　（２１，Ａｌａ　２．０１　（２１Ｖ
ａｌ　Ｏ，９６（１）、　　Ｌｅｕ　３．０２　（３）
、　　Ｔｙｒ　１．９６　（２１Ｐｈｅ　１．００　（
１１ 〔旧Ｒ（１０１２−１０４２）　）の合成ｆｉｌ　　使
用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−八ｓｎ　　
　　　　　、　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−５
ｅｔ（Ｂｚｌ）　、　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　
Ｂｏｃ−ＧｌｙＢｏｃ−Ａｌａ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｖ
ａｔ　　　　、　Ｂｏｃ−１１ｅ−Ｖ２ＨｚＯＢｏｃ−
Ｌｅｕ−ＨｚＯ＋　　　　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃ７！−Ｚ
）、Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（２）高速液体クロマト
グラフィー（ＨＰＬＣ）による精製条件 カラム：　Ｃｈｅｍｏｓｏｒｂ−３００ｔｃ＋ｓ、０．
４６Ｘ２５ｃｍ溶媒：　Ｑ、ＯＩＮ　ＩＣｆｆｉ　／Ｃ
）１３ｃＮ　＝９０／１Ｏ−Ｔｏ／３０゜直線、３０分 流　速：１．２ｍｌ／分、溶出時間：２０．７分子３１
　　Ｒｆ値および比旋光度 ＲｆＩ　　Ｏ，０、Ｒｆ”　　０．０ ［α〕二４−１０７°　（ＣＯ，１、Ｉ　Ｍ　Ａｃ０）
ｌ）（４）　　酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａｓ
ｐ　２．９８　（３１，Ｔｈｒ　１．９２　（２）、　
　Ｓｅｒ　１．８６　（２１Ｇｌｕ　５．１８　（５Ｌ
　　Ｇｌｙ　２．０２　（２１，Ａｌａ　４．１１　（
４１Ｖａｌ　　２．９５　　（３１，Ｉｌｅ　　２．９
６　　＋３１．　　　Ｌｅｕ　　１．０１　　ｆｉｌＬ
ｙｓ　１．９７　［２）、　　Ａｒｇ　３．９０　＋４
）〔ＨＩＲ（１１３９−１１７１）　］の合成ｆｌｌ　
　使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−八５ｐ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂ
ｚｌ）　　、　　　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）Ｂｏｃ
−Ｇｌｙ　　　　、　Ｂｏｃ−Ａｌａ　　　　＋　　Ｂ
ｏｃ−ＶａｔＢｏｃ−Ｍｅｔ　　　　　　　＋　　Ｂｏ
ｃ−２１ｅ−’ＡＬＯ，Ｂｏｃ−Ｌｅｕ・ｌＩｚ。

Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃ６ｔ−Ｂｚｌ）、　　Ｂｏｃ−Ｐｈ
ｅ　　　　、　　Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（Ｃｆ−Ｚ）Ｂｏｃ−
ｔｌｉｓ（丁ｏｓ）　　、　　Ｂｏａ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ
）（２）　　高速液体クロマトグラフィー（）ＩＰＬｃ
）による精製条件 カラム：　”　ＴＳＫ　ＧＥＬ″０ＤＳ−１２０Ｔ、　
０．４６Ｘ２５ｃｍ−ン容　　媒　：　０．０１Ｎ　　
ＨＣｊ！　／Ｃｌ３ＣＮ　　＝８０／２０→６０／４０
゜直線、３０分 流　速：１．Ｏｍｊ！／分、溶出時間：１９．３分（３
１Ｒｆ値および比旋光度 Ｒｆｌ　　　Ｏ，０３、ｌ？ｆｎ　　　Ｏ，４１〔α）
　ｉ’　　−８６”　　（Ｃ０，１，ＬＭ　Ａｃ０Ｈ）
（４）酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　３．
９２　（４１，Ｔｈｒ　２．９６　（３１，Ｇｌｕ　１
．００　（１１Ｇｌｙ　５．１３　＋５１．　　Ａｌａ
　Ｏ，９９（１１，Ｖａｌ　１．９３　（２１Ｍｅｔ　
１．８６　（２１，Ｔｌｅ　２．０３　＋２）、Ｌｅｕ
　２．０８　（２）Ｔｙｒ　３．１０　（３１，Ｐｈｅ
　１．９８　（２１，Ｌｙｓ　３．０５　ｆ３１１１ｉ
ｓ　Ｏ，９８ｉｌ）　　Ａｒｇ　１．９９　（２１ＣＩ
＋１Ｒ（１２０１−１２３３）　］の合成（１）　　使
用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　
　＋　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−３ｅｒ（Ｂｚ
ｌ）　、　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｇ
ｉｎＢｏｃ−Ｐｒｏ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｇｌｙ　　　
　、　ＢｏＣ−ＡｌａＢｏｃ−Ｖａｔ　　　　、　Ｂｏ
ｃ−Ｍｅｔ　　　　、　Ｂｏｃ−１１ｅ−％Ｉ（２０Ｂ
ｏｃ−Ｌｅｕ−！（２０，Ｂｏｃ−Ｔｙｒ（Ｃ７！ｚ−
Ｂｚｌ）＋Ｂｏｃ−Ｐｈｅ［１ｏｃ−Ｌｙｓ　（Ｃｊ！
　−Ｚ） （２）高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による
精製条件 カラム：　”ＴＳＫ　ＧＥＬ”００Ｓ−１２０７、Ｑ、
４６Ｘ２５０ン容　　媒　：　０．０ＩＮ　　ＨＣＩ　
／ＣＨ３ＣＮ　　＝７０／３０−５０１５０゜直線、３
０分 流　速：１．０ｍ１７分、溶出時間：＋３．Ｓ分子３）
　　Ｒｆ値および比旋光度 １？ｆｌ　　Ｏ，１５、Ｒｆ”　　０．０〔α〕孟４−
３１°　（Ｃ０，１，５０％＾ｃＯＨ）（４）酸加水分
解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　５．０７　＋５）、
　　Ｔｈｒ　Ｏ，９３ｆｉｌ、　　Ｓｅｒ　１．８７　
（２）Ｇｌｕ　６．８５　（７１，Ｐｒｏ　１．９８　
（２１，Ｇｌｙ　３．１５　ｆ３１Ａｌａ　Ｏ，９９（
１１，Ｖａｌ　２．０６　Ｌ２Ｌ　　Ｍｅｔ　１．０１
　ＬＬ）ＩＩｓ　０．９８　（１１，Ｌｅｕ　４．０３
　＋４１　　Ｔｙｒ　１．９４　（２１Ｐｈｅ　１．０
２　ｆｉｌ、　　Ｌｙｓ　Ｏ，９９（１１（ＨＥＲ（１
２４７−１２７７）　）の合成（１）　　使用した保護
アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＢｚｌ）、　　Ｂｏｃ−八ｓｎ　　
　　　　　、　　　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）Ｂｏｃ−
３ｅｒ（Ｂｚｌ）　＋　Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）、
　　Ｂｏｃ−ＧｉｎＢｏａ−Ｐｒｏ　　　　、　Ｂｏａ
−Ｖａｌ　　　　、　　Ｂｏｃ−ＭｅｔＢｏｃ−１１ｅ
−ηＨｚＯ，Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＨｚＯ，Ｂｏｃ−Ｐｈｅ
Ｂｏａ−Ｌｙｓ（Ｃｆ−ｚ）、Ｂｏｃ−Ｈ４ｓ（Ｔｏｓ
）　、　　Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）（２）高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）による精製条件 カラム：“ＴＳＫ　ＧＥＬ″ＯＤＳ　−１２０Ｔ、０．
４６　Ｘ　２５ｃ１１溶媒：　０．０１Ｎ　）Ｉｃ　ｅ
　／ＣＩ（ＩＣＮ　＝９０／１０−６５／３５゜直線、
３０分 流　速：１．０ｍｌ／分、溶出時間：ｔ３．Ｓ分（３１
９ｆ値および比旋光度 Ｒｆｌ　　０．１５　　、　　Ｒｆｎ　　Ｏ，０〔α〕
Ｈ４−２６”　（ＣＯ，ｌ、ｓｏ％Ａｃ０１１）（４）
酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ　５．２１　
＋５１．　　Ｔｈｒ　Ｏ，９１（１１，Ｓｅｒ　１．８
５　ｆ２）Ｇｌｕ　２．９０　（３）、　　Ｐｒｏ　４
．０４　（４１，Ｖａｌ　２．０５　（２１Ｍｅｔ　Ｏ
，９０（１１，Ｉｌｅ　Ｏ，９６ｆｌｌ、　　Ｌｅｕ　
３．８４　（４１Ｐｈｅ　５．１６　（５１，Ｌｙｓ　
Ｏ，９７（１）、　　Ｈｉｓ　１．０８　（１１＾ｒｇ
　Ｏ，９８ｔｌｌ （Ｈ１１？（１３２７−１３５５）　）の合成＋１１　
　使用した保護アミノ酸 Ｂｏｃ−Ａｓｎ　　　　、　Ｂｏｃ−Ｔｈｒ（Ｂｚｌ）
　＋　　Ｂｏｃ−Ｓｅｔ（Ｂｚｌ）Ｂｏａ−Ｇｌｕ（Ｏ
Ｂｚｌ）、　Ｂｏｃ−Ｐｒｏ　　　　、　　Ｂｏｃ−Ｇ
ｌｙＢｏｃ−Ｍｅｔ　　　　＋　Ｂｏｃ−［１ｅ−！４
１１ｚＯ＋　　Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ｆｌｚｏ。

Ｂｏａ−Ｔｙｒ　（Ｃ１ｚ−Ｂｚｌ）　、　Ｂｏｃ−Ｌ
ｙｓ　（Ｃｉｔ　−Ｚ）　、　Ｂｏｃ−１１ｉｓ　（Ｔ
ｏｓ）Ｂｏｃ−＾ｒｇ　（Ｔｏｓ） （２）高速液体クロマトグラフィー（ＩＩＰＬｃ）によ
る精製条件 カラム：ＴＳＫ　ＧＥＬ”　ＯＤＳ　　Ｌ２０Ｔ、、０
．４６Ｘ２５ｃｍ溶媒：　０．ＯＩＮ　ＨＣ１／ＣＨ３
ＣＮ　＝８５／１５−６５／３５゜直線、３０分 流　速：１．０ｍ１７分、溶出時間：１９．５分（３１
Ｒｆ値および比旋光度 Ｒｆｌ　　Ｏ，０、Ｒｆｎ０．０ （ｃｒ）：’　　−９５’　　（Ｃ０，１，５０％＾ｃ
ＯＨ）（４）酸加水分解におけるアミノ酸分析値Ａｓｐ
　２．９３　＋３１．　　Ｔｈｒ　１．９２　（２）、
　　Ｓｅｒ　２．８２　（３１Ｇｌｕ　１．９７　ｆ２
Ｌ　　Ｐｒｏ　３．１９　（３１，Ｇｌｙ　３．１８　
＋３１Ｍｅｔ　０．９１　（１１，ｌｉｅ　１．９７　
（２１，Ｌｅｕ　１．９５　ｆ２１Ｔｙｒ　２．０８　
＋２１−、　　Ｌｙｓ　１．９６　（２１，Ｈｉｓ　１
．９１　Ｆ２１Ａｒｇ　２．０３　（２＋ 実施例３ く免　疫〉 実施例１で得られたポリペプチド）ｔｉｌｌ　（３０−
６１）（］、５ｎｖ）を５０％ＰＶＰ生理食塩水（１，
５ｎ／りおよびフロイント（Ｆｒｅｕｎｄ）の完全アジ
ュバント（１，５ｎ／りで懸濁し、懸濁；夜（１ｍ／り
を３羽のニソボン白ウサギ（２，５〜３．０ｋｆ）に皮
内注射した。注射は、最初の注射の２の量で２週間毎に
くり返し行い抗血清を得た。

〈標識抗原〉 実施例１で得られたポリペプチドＩＩＩＲ（３０−６１
）をハンター（Ｈｕｎｔｅｒ）とグリーンウッド（Ｇｒ
ｅｅｎｗｏｏｄ）（Ｎａｔｕｒｅ、　１９４．４９５−
４９６．１９６２）のクロラミンＴ法によりヨード化し
た。すなわち、１．ＯＦ　リン酸緩衝液（ｐＨ７，４，
２０μｌ）に精製水（１０μ２）中のペプチド（３μｇ
）、　　５００　ｐｃｉのＣＩ２’　Ｉ　〕Ｎａおよび
精製水（１０μＩり中のクロラミンＴ（２０μｇ）を連
続的に添加し、混合物を３０秒間振とうし、精製水（５
０μｍ）中のメタ重亜硫酸ナトリウム（１００μｇ）を
加えて反応を停止した。ついで混合物を、１Ｍ酢酸を溶
離液とする“セファデックスＧ１０”のカラムクロマト
グラフィー（１，ＯＸ３Ｑｃｍ）により、精製した。

くラジオイムノアッセイ〉 希釈剤として、ＢＳＡ（０，５％）　、　ＥＤＴＡ（０
，０２５Ｍ）およびＮａＣ１（０，１４Ｍ）を含むリン
酸緩衝液（０，０１１’ｌ。

ｐＨ７，４）を使用した。

希釈剤（０，４ｍＡ）、標準品または検体（０，１１１
Ｉｌ）、希釈（最終；７，０００倍）した本発明に係る
抗血清ＲＯ２０３（０，１ｍｌ）および標識抗原（５，
０００〜１０．ＯＯＯｃｐｍ）　（０，１ｍ（１）をイ
ンキュヘーションチューブ中で混和した。混合物を４°
Ｃで４８時間インキユヘーションし、希釈（使用時＝８
０倍）した正常家兎血清（０，１ｍ１）、希釈（使用時
；２０倍）した抗家兎γ−グロブリン山羊血清（０，１
ｍｊりおよびポリエチレングリコール＃６θ００（１０
％）ン容液（０，５ｍ＋２）をカロえた。４℃で３時間
インキユヘートした後、遠心分離（４’Ｃ，３，ＯＯＯ
ｒｐｍ、　　３０分間）し、上清を分離し、続いてカウ
ントした。

第１図は、このようにして得られた標準曲線である。

ハ３発明の効果 インシュリンのホルモン作用発現のためには、インシュ
リンがインシュリン受容体に結合する事が第一の段階で
あり、インシュリン結合後、細胞内への情報伝達が行な
われると考えられている。

しかしながら、インシュリン受容体蛋白質の構造につい
ては、最近になって、そのアミノ酸配列が決定された結
果受容体蛋白質の全部または一部のアミノ酸配列を含む
合成ポリペプチドの利用が可能になってきた。インシュ
リンが糖尿病の病態と密接な関係にあるのと同様に、イ
ンシュリン受容体の機能についても重要な臨床的意義が
示唆されている。

本発明は、インシュリン受容体蛍白質の全アミノ酸配列
またはその一部分を含む蛋白質抗原群を、分析すること
により、インシュリン受容体の詳細な機能および病態に
ついて解明することを目的としている。この目的の達成
を目ざし１、インシュリン受容体蛋白質に関連する各部
のポリペプチドを、化学合成し、それらの抗血清を作製
したのち、これら材料を用いて免疫化学的測定法を駆使
することによりまたインシュリンとインシュリン受容体
の反応を利用することによりインシュリン受容体に関連
する全アミノ酸配列またはその一部を含む蛋白質または
ポリペプチドを、測定することが可能となった。以上の
ように、本発明は、インシュリン受容体機能に関与する
糖尿病をはじめとする種々の病態の解明および診断に役
立つものである。

【図面の簡単な説明】

第１図：インシュリン受容体蛋白質フラグメント〔ＨＩ
Ｒ（３０−６１）　）の標準曲線。

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の式［１］〜［４２］のいずれかの一つで示
   されるアミノ酸配列を有するペプチド類。 ［１］【アミノ酸配列があります】 ［２］【アミノ酸配列があります】 ［３］【アミノ酸配列があります】 ［４］【アミノ酸配列があります】 ［５］【アミノ酸配列があります】 ［６］【アミノ酸配列があります】 ［７］【アミノ酸配列があります】 ［８］【アミノ酸配列があります】 ［９］【アミノ酸配列があります】 ［１０］【アミノ酸配列があります】 ［１１］【アミノ酸配列があります】 ［１２］【アミノ酸配列があります】 ［１３］【アミノ酸配列があります】 ［１４］【アミノ酸配列があります】 ［１５］【アミノ酸配列があります】 ［１６］【アミノ酸配列があります】 ［１７］【アミノ酸配列があります】 ［１８］【アミノ酸配列があります】 ［１９］【アミノ酸配列があります】 ［２０］【アミノ酸配列があります】 ［２１］【アミノ酸配列があります】 ［２２］【アミノ酸配列があります】 ［２３］【アミノ酸配列があります】 ［２４］【アミノ酸配列があります】 ［２５］【アミノ酸配列があります】 ［２６］【アミノ酸配列があります】 ［２７］【アミノ酸配列があります】 ［２８］【アミノ酸配列があります】 ［２９］【アミノ酸配列があります】 ［３０］【アミノ酸配列があります】 ［３１］【アミノ酸配列があります】 ［３２］【アミノ酸配列があります】 ［３３］【アミノ酸配列があります】 ［３４］【アミノ酸配列があります】 ［３５］【アミノ酸配列があります】 ［３６］【アミノ酸配列があります】 ［３７］【アミノ酸配列があります】 ［３８］【アミノ酸配列があります】 ［３９］【アミノ酸配列があります】 ［４０］【アミノ酸配列があります】 ［４１］【アミノ酸配列があります】 ［４２］【アミノ酸配列があります】
2. （２）ペプチド類が特許請求の範囲第（１）項記載のペ
   プチド類の全アミノ酸配列またはその一部を含むペプチ
   ド抗原群。
3. （３）ヒトインシュリン受容体蛋白質のアミノ酸配列の
   一部を含むポリペプチド〔ＨＩＲ（９−２５）〕、〔Ｈ
   ＩＲ（３０−６１）〕、〔ＨＩＲ（４８−７７）〕〔Ｈ
   ＩＲ（７８−１０９）〕、〔ＨＩＲ（９５−１２５）〕
   、〔ＨＩＲ（１２７−１５４）〕、〔ＨＩＲ（３１３−
   ３３２）〕、〔ＨＩＲ（３３８−３７０）〕、〔ＨＩＲ
   （３６０−３９６）〕、〔ＨＩＲ（３７３−４０２）〕
   、〔ＨＩＲ（４０２−４３４）〕、〔ＨＩＲ（４３６−
   ４６６）〕、〔ＨＩＲ（４６９−５０２）〕、〔ＨＩＲ
   （４９４−５２３）〕、〔ＨＩＲ（５２５−５５８）〕
   、〔ＨＩＲ（５４５−５７５）〕、〔ＨＩＲ（５６０−
   ５９２）〕、〔ＨＩＲ（５７８−６１３）〕、〔ＨＩＲ
   （６０９−６４４）〕、〔ＨＩＲ（６４８−６８０）〕
   、〔ＨＩＲ（６８６−７１６）〕、〔ＨＩＲ（７０４−
   ７３１）〕、〔ＨＩＲ（７３６−７６０）〕、〔ＨＩＲ
   （７５６−７８４）〕、〔ＨＩＲ（７７８−８０６）〕
   、〔ＨＩＲ（８０８−８３５）〕、〔ＨＩＲ（８３２−
   ８６２）〕、〔ＨＩＲ（８５４−８８３）〕、〔ＨＩＲ
   （８７７−９０５）〕、〔ＨＩＲ（８９７−９２９）〕
   、〔ＨＩＲ（９５７−９８０）〕。 〔ＨＩＲ（９９１−１０１５）〕、〔ＨＩＲ（９９６−
   １０４０）〕、〔ＨＩＲ（１０１２−１０４２）〕、〔
   ＨＩＲ（１０２３−１０３６）〕、〔ＨＩＲ（１１３９
   −１１７１）〕、〔ＨＩＲ（１１５７−１１６７）〕、
   〔ＨＩＲ（１２０１−１２３３）〕、〔ＨＩＲ（１２４
   ７−１２７７）〕、〔ＨＩＲ（１２４９−１２５９）〕
   、〔ＨＩＲ（１３０９−１３４０）〕および〔ＨＩＲ（
   １３２７−１３５５）〕を免疫用抗原として、そのまま
   もしくはポリビニルピロリドンなどに吸着または、アル
   ブミン等の高分子量担体蛋白と結合して、哺乳動物に投
   与免疫して得られる抗体群。
4. （４）抗体群が通常の免疫法により得られるポリクロー
   ナル抗体群または細胞融合技術によって得られるモノク
   ローナル抗体群の中から選ばれた、特許請求の範囲第（
   ３）項記載の抗体群。
5. （５）インシュリン受容体蛋白質に関連するポリペプチ
   ド〔ＨＩＲ（９−２５）〕、〔ＨＩＲ（３０−６１）〕
   、〔ＨＩＲ（４８−７７）〕、〔ＨＩＲ（７８−１０９
   ）〕、〔ＨＩＲ（９５−１２５）〕、〔ＨＩＲ（１２７
   −１５４）〕、〔ＨＩＲ（３１３−３３２）〕、〔ＨＩ
   Ｒ（３３８−−３７０）〕、〔ＨＩＲ（３６０−３９６
   ）〕、〔ＨＩＲ（３７３−４０２）〕、〔ＨＩＲ（４０
   ２−４３４）〕、〔ＨＩＲ（４３６−４６６）〕、〔Ｈ
   ＩＲ（４６９−５０２）〕、〔ＨＩＲ（４９４−５２３
   ）〕、〔ＨＩＲ（５２５−５５８）〕、〔ＨＩＲ（５４
   ５−５７５）〕、〔ＨＩＲ（５６０−５９２）〕、〔Ｈ
   ＩＲ（５７８−６１３）〕、〔ＨＩＲ（６０９−６４４
   ）〕、〔ＨＩＲ（６４８−６８０）〕、〔ＨＩＲ（６８
   ６−７１６）〕、〔ＨＩＲ（７０４−７３１）〕、　〔
   ＨＩＲ（７３６−７６０）〕、〔ＨＩＲ（７５６−７８
   ４）〕、〔ＨＩＲ（７７８−８０６）〕、〔ＨＩＲ（８
   ０８−８３５）〕、〔ＨＩＲ（８３２−８６２）〕、〔
   ＨＩＲ（８５４−８８３）〕、〔ＨＩＲ（８７７−９０
   ５）〕、〔ＨＩＲ（８９７−９２９）〕、〔ＨＩＲ（９
   ５７−９８０）〕、〔ＨＩＲ（９９１−１０１５）〕、
   〔ＨＩＲ（９９６−１０４０）〕、〔ＨＩＲ（１０１２
   −１０４２）〕、〔ＨＩＲ（１０２３−１０３６）〕、
   〔ＨＩＲ（１１３９−１１７１）〕、〔ＨＩＲ（１１５
   ７−１１６７）〕、〔ＨＩＲ（１２０１−１２３３）〕
   、〔ＨＩＲ（１２４７−１２７７）〕、〔ＨＩＲ（１２
   ４９−１２５９）〕、〔ＨＩＲ（１３０９−１３４０）
   〕、〔ＨＩＲ（１３２７−１３５５）〕およびこれらに
   対する抗体群を用いた免疫化学的測定法。
6. （６）免疫化学的測定法がラジオイムノアッセイ法、エ
   ンザイムイムノアッセイ法、ＩＲＭＡ法等の抗原抗体反
   応およびインシュリンとインシュリン受容体の反応を応
   用した、特許請求の範囲第（５）項記載の免疫化学的測
   定法。