JPS62279841A - 粒状高分子吸着剤による生体材料の分離または精製方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ３、発明の詳細な説明 本発明は特に膜濾過による生体材料の分離または精製方
法に関し、そしてより詳細には、膜濾過に先立って担体
物質上に生体材料を吸着させる方法に関する。

限外１Ｉｔｉ！は生体材料の分離（濃縮を含む）および
／または精製に関して広く用いられる方法である。この
種の一方法はジーヘルおよびクーラ（Ｇｅａｈｅｌ　ａ
ｎｄ　Ｋｕｌａ）により「バイオテクノロジー。

レター（Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｌｅｔｔｅｒｓ
）　Ｊ　Ｖｏｌ、　６　ｆ８１．４８１−６．１９８４
年中に記載されている。その方法において、デヒドロゲ
ナーゼの溶液はそれを最初、高分子量の水溶性デキスト
ランに結合させ、次いでその溶液に限外濾過を施すこと
により精製される。

このデヒドロゲナーゼデキストラン錯体は限外濾過膜を
透過するには大きすぎるが、この溶液中の不純物はそう
ではなく、そのため、この錯体はフィルターによって保
持され、そして不純物は遇過吻となるという結果をもた
らす。このようにして不純物が溶液から除去されたとき
、溶液のイオン強度を増加させることによりデヒドロゲ
ナーゼはデキストランから遊離され、そして回収される
。

この方法は二つの基本的な短所を存している。

第一に、デキストランは媒質中に可溶であり、従って限
外Ｉｌハ過膜の細孔をすり抜ける可能性がある。

それはその細長い分子構造の故である。より小さな細孔
を備えた膜というのは成る種の救済策である。すなわち
、これは細孔をすり抜けるデキストラン分子の数を減少
させることになるが、これはまた、デキストラン−生成
物錯体から分離され得る不純物分子の寸法を制限するこ
とにもなり、それによって分離の効率を減少させること
にもなる。

第二に、高分子デキストラン錯体は濾過膜上に蓄積して
二次的膜乃至濃度分極層を形成し勝ちであり、これはフ
ィルターを通る流れを制限する。

米国特許第４．４７４，６９０号および１９８５年３月
２１日に出願された欧州特許出願第１２７．７３７号に
は、組合わせた親和カークロマトグラフィ積装および限
外濾過によるペプチド含有化合物の回収が記載されてお
り、この方法においてはペプチドに特をで、かつ高分子
の固体担体に結合された配位子にペプチドと錯体を形成
させ、そして溶液中のその錯体をして膜フィルターを通
過させて、透過に際し不純物を残留させるものである。

次いで、このペプチドを配位子および担体から分離させ
る。担体物質はアクリル系誘導体タイプの合成ラテック
スポリマーを含んでいる。この技法は、ペプチド特有配
位子の要件によって複雑なものとなっており、従って制
約された適用範囲を有している。

そして今や、主要錯生成剤として微細寸法とした粒状高
分子吸着剤を使用することにより前述の短所および制約
を克服乃至最小とし得ることが見出され、該吸着剤の使
用によって混合物から成る生体材料、すなわち他の生体
材料から精製乃至分離することを望むものを選択的に吸
着させるものである。この混合物を膜濾過させると、吸
着剤−生体材料錯体であって、不溶性であり、かつその
粒子が膜フィルターの細孔より大きいものはフィルター
により保持されるが、不純物および／またはその他の生
体材料はフィルターを１ｊｌｌ遇して透過物となり、そ
こでそれらは収集され、かつ回収される。次に、吸着さ
れた生体材料を吸着剤から、フィルターを通過し、かつ
回収された媒質中へ放出させることができるが、再生し
た吸着剤はフィルターにより保持され、かつ再使用する
ことが可能である。

その結果、本発明は生体材料、特に蛋白′１を物質に対
する新しい形式のクロマトグラフィー分離または精製を
提供するものである。標準のクロマトグラフィ法とは対
照的に、微細寸法とした高分子吸着剤は液体のように流
動し、また従来の吸着剤のようにカラム中には充填され
ない、従って、そこでは吸着剤粒子の重量から派生する
問題は情無である。すなわち、その自重によるカラムの
圧潰は全く見られず、また制限された流れおよび望まし
くない圧力降下を生ずる充填が行われることもない、従
って、この吸着剤は吸着容器への再循環および該容器内
の流出液の／！縮のために、生体材料を限外濾過カート
リッジ（不純物または非吸着生体物質がここを通過して
、ｉ！ｉ憑物となる）の微細な中空繊維の管腔を経由し
て容易に運ぶことができる。このようにして、この吸着
剤は多数のサイクルに亘って非限定的に再使用可能であ
る。

本明細書中で使用されるように、用語「生体材料」はそ
れが生物学的あるいは非生物学的起源によるものか、否
かに係わりなく凡ゆる水ン容性または水分散性生物関連
物質を意味するものである。

生体材料は化合物、分子、ポリマー、粒子、および単一
ならびに複合物質を包含し、それらは天然に存在し、あ
るいは生物学的または非生物学的方法により合成される
ものであってもよい、従って、この用語は蛋白買物質（
たとえば、アルブミンおよび酵素）、アミノ酸、核酸、
ペプチドおよびポリペプチド、抗体、抗原、スチロイド
・ホルモン・抗生物質、ビタミン、高分子炭水化物等を
包含し、これらは粒状高分子吸着剤と可逆的に錯体を形
成し、あるいはそうでなければ結合し、もしくはこれに
よって吸着され、または担持される。結合は静電気的引
力、ファンデルワールス力により生ずる親水性／疎水性
相互作用、特定の親和力、またはそれらの何らかの組合
わせに起因するものであってもよい。

非常に屡々、生体材料は液体媒質中で化学的合成または
醗酵により、あるいはこれら方法の咀合わせによって生
成され、そしてこれら生体材料は細胞、細胞砕片あるい
はその他の醗酵ブイヨンまたは細胞培地の固形物から溶
液または微細分散液として分離される。いずれの場合に
も、得られた生体材料含有媒質は一般に不純物および／
またはその他の生体材料であって、もし生体材料を市販
品または医学的純度基準に合致させるとすれば、最終的
には分離せねばならないものを伴っている。

便宜的および理解を容易にするために、用語「バイオプ
ロダクト（ｂｉｏｐｒｏｄｕｃｔ）　Ｊを随時本明細書
中で用いて、本発明の精製または分離工程から得られた
生体材料を同定する。

本発明方法において用いられる高分子吸着剤は粒状であ
って、その粒子はフィルター１グを通過することはない
が、中空繊維をして良好に流通させる程度の寸法を有し
ている。大部分の用途において、粒子はＯ，（１８）　
−５マイクロメーター、好ましくは０．　ｌ　−１，５
マイクロメーターの直径を有することになる。この粒子
は実質的に水不溶性であり、従って吸着剤および吸着剤
−生体材料錯体は膜フィルターの細孔を１ｆｆｉ遇する
ことはないし、また１ｌｆｆ上に分極層を形成すること
もない。

前述の基準に合成する如何なる粒状高分子吸着剤も、も
しそれが選択的にバイオプロダクトを吸着することはで
きるが、媒質中の不純物または他の生体材料を吸着せず
、そしてそのバイオプロダクトを変性することはないも
のであるか、あるいは不純物または他の生体材料を吸着
するが、バイオプロダクトを吸着も変性もしないもので
あれば、使用可能である。吸着剤粒子は帯電させてもよ
く、また帯電させなくてもよい、帯電状態は、生体材料
を含有する水性系に関連して、吸着剤の疎水性／親水性
特性を変性する官能基の存在により達成することができ
る。帯！吸着剤の代表的なものは粒状イオン交換樹脂で
あって、そこではイオン交換官能性がポリマーに対し表
面′ｒ４荷を付与している。

代表的な非帯電ポリマーはイオン交換樹脂前駆体、すな
わち未だ官能化されていない架橋もしくは非架橋固体ポ
リマーである。

もし、粒状高分子吸着剤が帯電物質であれば、生体材料
が錯体として結合される機構は主として静電的引力によ
る可能性がある。もし、吸着剤が帯電されておらず、そ
してたとえ若干の範囲であっても、この吸着剤が帯電さ
れれば、この結合機構は疎水性／親水性引力、特定の親
和力相互作用、およびその他の効果の１種類以上の点か
ら理解することができる。

好ましいのは粒状高分子吸着剤が、イオノゲン基の存在
により特徴づけられ、そしてマイクロメーターまたはサ
ブマイクロメーターの粒度を有するイオン交換樹脂を含
んで成り、バイオプロダクト上の電荷と反対の電荷を有
することである。イオン交換樹脂として、吸着剤はアニ
オン交換官能性を伴う単一樹脂、アニオンおよびカチオ
ン官能性双方（両性樹脂ンを嬬える単一樹脂を含んで構
成すればよく、あるいはアニオンまたはアニオンおよび
カチオン交１奥特性の双方を備える混合、ハイブリッド
、キレート化あるいは複合樹脂であってもよい。

更に、ゲルおよび高分子網状両樹脂も有用である。

本発明において有用なイオン交換用脂の代表的なものは
、米国特許第３，０３７，０５２号、第３．６３７，０
５２号、第３，８４３．５６６号、第３．７９１．８６
６号、第３，２７５，５４８号および第３．３５７．１
５８号中に記載される高分子網状ビニル芳香族炭化水素
またはアクリル樹脂吸着剤および交換体、米国特許第３
，９９１．０１７号中に記載されるハイブリッド樹脂、
米国特許第３．６４５．９２２号中に記載される複合樹
脂、米国特許第４．２０２，７３７号中に記載される両
性樹脂、そしてジェー・マリンスキー（Ｊ、Ｍａｒｉｎ
ｓｋｙ）　Ｂ　ｒイオン交ｔｌｋ　（ＪｏｎＥｘｃｈａ
ｎｇｅ）　Ｊ　Ｖａｔ、　Ｈ、第６章（１，９６９年、
ニューヨーク）中に記載されるその他のものである。

具体的な吸着剤は、ビニリデンモノマー、たとえばアク
リルおよびメタクリル酸ならびにエステル、そして他の
モノエチレン的不飽和モノマーあるいはそれらの混合物
、たとえば単環式および多環式芳香桟上ツマ−５たとえ
ばスチレンおよび置換スチレン等から生成されたホモポ
リマーならびにコポリマーである。モノエチレン的不飽
和モノマーは、架橋を伴わずに重合させてもよいし、あ
るいはその場でポリエチレン的不飽和モノマー、たとえ
ばポリビニル芳香族炭化水素（ジビニルトンゼン、ジビ
ニルトルエン等）、グリコールジメタクリレート、たと
えばエチレングリコールジメタクリレート、あるいは多
価アルコールのポリビニルエーテル、たとえばジビノキ
シエタンおよびトリピノキンプロパンにより架橋させて
もよい。

高分子吸着剤は塊状、溶液、懸濁および乳化重合を含む
従来の方法において調製される。もし、重合方法が乳化
重合であれば、チョン（Ｃｈｏｎｇ）の米国特許第４．
３５９，５３７号および第４　、３８０゜５９０号、チ
ヨン、アイサコフ（Ｔｓａｃｏ［）および二−リイ（Ｎ
ｅｅｌｙ）の米国特許第４．２（１４），６９５号、そ
してアイサコフおよびニーすイの米国特許第４．５３７
．６８３号であって、これら特許のそれぞれがここに参
考として引用されるものに示されているように、所望の
小粒度範囲を直接得ることができる。重合が懸濁または
他の形式であれば、粒状生成物ポリマーは当該技術分野
において周知の暦砕技法により寸法を減少させることが
できる。不規則に形成された粒子（たとえば、磨砕樹脂
）は、本発明の目的のためには上述した直径制限に関し
て最長の寸法を有するものと推定される。

水不溶性、非架橋乃至部分的官能化物質もまた、本発明
で用いるのに適している。たとえば、粒子表面近傍、た
とえばビード外縁周囲のイオン交換基から成る単分子層
のイオノゲン基で官能化されたイオン交換ポリマーは有
用である。軽度に架橋され、もしくは表面架橋されたビ
ードであって、低水溶性のものもまた、効果的である。

前述のチッソ、チッン他ならびにアイサコフ他の特許に
よる吸着剤は、一般的に言えば、モノマ一単位当たり官
能基約１．５個まで、たとえば０．１乃至１．５個を有
する球状ビードの形態の架橋ポリマーから成るイオン交
換樹脂である。

これらの基は強い酸性（たとえば、−Ｈ５（ｈ基）、弱
い酸性（たとえば、−ＣＯＯＩＩ基）、強い塩基（たと
えば、第四アンモニウム基）、または弱い塩基（たとえ
ば、第三アミン基）であってもよい。

上に示したように、好ましい高分子吸着剤はイオン交換
樹脂であり、凡ゆる与えられた状況におけるその選択は
、第一に精製もしくは選択すべき生体材料の電荷に左右
されるものである。もし、生体材料の電荷が陰であれば
、陽に帯電した（塩基性）樹脂が用いられ、一方もし、
電荷が陽であれば、陰に帯電した（酸性）樹脂が使用さ
れる。

いずれの場合にも、その選択は当業者がイオン交換化学
の原則を用いることにより容易に行うことができる。

高分子吸着剤の使用量は、その系内のバイオプロダクト
の大部分を吸着するために足るものでなければならない
が、媒質が粘稠となり、その結果取り扱いおよび濾過が
困難となる稈長くはないものとする。殆どの場合、吸着
剤はその媒質中のバイオプロダクトの重量に略等しい量
、たとえば同一重量のバイオプロダクトを含有する媒質
中で約０．０１乃至１０重量％使用される。

本発明の方法は、もしその媒質が固形分を含んでいれば
先ず、遠心分離、従来の濾過またはその他の固形物質分
離技法によってバイオプロダクト含有媒質から大部分の
粒状物質を除去することにより実施される６次に、適切
な量をもって選択された吸着剤を、濾液または生体材料
およびその生体材料から分離すべき他の成分を含有する
液体媒質に添加する。次いで、得られた混合物を、吸着
剤粒子に対しバイオプロダクトを吸着させるに足る時間
・大体数分間攪拌する０次に、この混合物をして濾過膜
を通過させるのであるが、好ましくは中空繊維タイプの
モジュールを経由してそれを再循環させることにより行
うものとする。その膜は選択されているので、それは不
純物、バイオプロダクト以外の生体材料および非吸着バ
イオプロダクトを通過させるが、バイオプロダクトを担
持する吸着剤粒子は通過させない、典型的には、この膜
フィルターは半透過性膜から成るものであって、溶解乃
至分散物質を限外濾過またはマイクロ′ＩＢ過（ｍｉｃ
ｒｏｆｉＮｒａｔｉｏｎ）によって除去するが、逆浸透
として知られる技法による溶解塩類の分離は除外される
ものである、それらの能力については当該技術分野にお
いて知られているものである。

吸着７ｆｌ＋−バイオプロダクト錯体はフィルターによ
り保持され、そして不純物または他の生体材料を含有す
る透過物が収集され、かつそのユニフトから除去される
。次に、そのバイオプロダクトは知られた脱着法により
吸着剤から解放される。バイオプロダクトの性質によっ
て、これはその媒質のｐＨを変化させることにより、そ
の電解質バランスを変化させることにより、あるいは親
和力クロマトグラフィーまたは関連分野において知られ
る何らかの他の適切な方法により達成される。

脱着されたバイオプロダクトを含有する媒質として、次
に同一の膜フィルターを通過させ、そしてこれを収集す
る。再生された吸着剤を保持し、そしてこれは再使用可
能である。

当業者は以下に例示する実施例を参照した後に、本発明
の効率良い実施が可能となるであろう。それらの技術者
は、開示されたテーマに関する数多くの変形、たとえば
成分の量を僅かに変更はするが１．明示したところから
大幅には変化させないとか、無害な物質を添加したり、
あるいは明示したものと均等または略均等な成分で置換
するというような変形を構成することが可能であろう。

これは全ての変更乃至変形は、本発明概念の部分である
と考えられる。

実施例において、全ての部およびパーセントは特に注記
しない限り、重量によるものとする。

ス」Ｌ匠−」一 本実施例は、陰に帯電した生体材料（ウシの血清アルブ
ミン）から陽に帯電した生体材料（チトクロームＣ）を
分離するための陰に帯電した吸着剤の効力を示すもので
ある。

（Ａ）及１工旦又ｌ： ウシ血清アルブミン（“ＢＳＡ”）　　２（１４）■を
ｉｌ＆過、脱イオン水中の０．０１Ｍ　りん酸カリウム
緩衝液（”ＰＰＩＩ溶ｌ佼”）２（１４）ｓｌ中に溶解
した。次に、得られた溶液を０．２２マイクロメーター
の「ミリボア（Ｍｉｌｌｐｏｒｅ）　Ｊフィルターを介
して濾過した。

系内のこの時点における合計容量は１７５ｍ１であった
。次に、強酸、乳化重合したスチレン−ジビニルベンゼ
ン・ゲル・コポリマー（架Ｗ剤７．３％）樹脂ビードで
あって、平均直径０．２６±０．０２マイクロメーター
およびカチオン交喚能−５，１ｍｅｑ／ｇ−乾燥を有す
るもの１／２ｇをＢＳＡ　／　ＰＰＢ溶液１９５ｍ１に
添加した。得られた懸濁液にチトクロームＣ、タイプ［
ｆｆ１４６．２ｍｇを添加した。

（Ｂ）−限」臼１１−： 次にｌｌ５ＡおよびチトクロームＣ配合物を混合し、そ
してこれを［アミコン（Ａｍｔｃｏｎ）　ｔｌｌＭＰ（
１８）−４３Ｊ中空繊維限外濾過システムの膜であって
、カートリッジ高さ２０ｃ１１を有し、この場合その鐵
維は細孔直径０．１マイクロメーターおよび有効表面積
２８０−を備える１、　１　ｍｍ１．Ｄ、を有するもの
を経由して１５分間循環させた。この透過物を収集し、
そして回収した。残留した樹脂懸濁液をＰＰＢ溶液によ
る５容１置換のために完全に濾過し、次いで容ｔ２（１
４）ｍｌに再構成した。

分析はチトクロームＣ９７，４■が樹脂上に残ったこと
、およびチトクロームＣの４８．８■と［ＩＳＡの８８
％が透過物中へ通過したことを示した。

（Ｃ）　　　　　　　　の　　　　１沖　　）　　：１
．０ＭＫＣｌ　水溶液２（１４）ｍ１を懸濁ン夜に添加
し、次いでこれを限外濾過膜を介して１５分間再ｖ８環
させた。この透過物を収集し、１．０ＭＫＣｌ　による
７容ｉｔ　ｉ！　ＩＡのために完全にｉｆｆ過し、そし
て２（１４）ｍ１に再構成した１分析はチトクロームＣ
Ｉ　０２．０■を溶離したことを示した。ｉ８Ｍ効率は
以下のように計算された。

充填された９７．４　■ ノロ虹１ 本実施例は、陰に帯電した吸着剤によるチトクロームＣ
（陽に帯電した生体材料）とペニシリンＣ（陽に帯電し
た生体材ｆ４）との有効な分離を示すものである。

（Ａ）　ｌ■見立犬ｌ： ペニシリン（“ＰＧ”）２（１４）■をＰＴ’Ｂン８液
（実施例１）２（１４）ｍｌ中に？容解した。

この時点における合計容量は２（１４）ｍ１であった。

次に、実施例１で使用した強酸イオン交換樹脂１７２ｇ
をＰＧを含有するＰＰＢ溶ｉ＆１９５ｍ１に添加した。

得られた懸濁液にチトクロームＣ、タイプ■１４６．２
ｎ＋ｇを添加した。

（Ｂ）−限」ヨ１４−： ＰＧおよびチトクロームＣ配合物を混合し、そしてこれ
を実施例１で使用したのと同一の限外濾過システムの膜
を経由して１５分間循環させた。この透過物を収集し、
そして回収した。残留した樹脂懸濁液をＰＰＢ溶液によ
る５容量置換のために完全にａ！過し、次いで容量２（
１４）ｍ１に再構成した。

分析はチトクロームＣＩ　０５．６　曙が樹脂上に残っ
たこと、およびチトクロームＣの４０．６　ａｗとＰＣ
の９２％が通過物中へ通過したことを示した。

（Ｃ）　　ロ　−ｆ　　の　　　　　’Ｌ（ご輝」−：
１．０ＭＫＣｌ　水ｉ＄７＆　２（１４）　ｍｌを樹脂
懸濁液に添加し、次いでこれを限外濾過膜を介して１５
分間再循環させた。この透過物を収集し、１゜Ｏ）’Ｉ
ＫｃＩ　による７容量置換のために完全に濾過し、そし
て２（１４）ｍ１に再構成した。分析はチトクロームＣ
，１１０９８Ｉ１を溶離したことを示して、以下のよう
に計算された溶離効率を示した。

充填された１０５．６　曙 フロ虹」Ｌ−」工 本実施例は、生体材料を分離するための非帯電吸着剤の
利用を例示し、そしてまた、精製または分離すべき生体
材料を含有する媒質中の電解質レベルの増加が吸着剤の
充填容量、すなわち生体材料に結合するための、その能
力を減することを示している。

ａ）（実施例１に記載された）　Ｏ，ＬＭ　ＰＰＢ溶液
１９５１に、ＫＣＩ　を添加して、ＭＣＩ　濃度を０．
１門とし、更にアクリル酸ヒドロキンエチル５０％およ
びトリメタクリル酸トリメチロールプロパン５０％から
成るエマルジョン・コポリマー２．０ｇ（乾ｔｉ準）を
添加した。このものに対し、０．１ＭＰＰＢ１０．１Ｍ
ＫＣｌ緩衝液２０（１＋＋１中のチトクロームＣ（実施
例１中に記載）１５０■を添加し、そして溶離剤として
ＸＭ　ＫＣｌ１０．　ＯＩＭ　ＰＰＩＩ溶１伎全１伎て
、このコポリマーの充填容量を実施例１におけるように
測定した。コポリマーのグラム当たり１．６■のチトク
ロームＣが、この条件下で結合され、そしてその９６．
９％が溶離された。

ｂ）蒸留水１９５…１に、上記ａ）に記載したエマルジ
ョン・コポリマー２．０ｇ（乾量基準）を添加した。こ
のものに対し、チトクローム０１５０■および蒸留水２
（１４）ｍ１を添加し、そして充填容量は実施例１にお
けるように限外濾過により決定された。コポリマーのグ
ラム当たり６７．２　Ｎ−のチトクロームＣが結合され
、そしてその９９，５％がＬＭ　ＭＣｌ１０．　ＯＩＭ
　ＰＰＢン容液によって？８離された。

ｌｌ１−工 本実施例は、本発明の方法を利用する酵母菌〜細胞へキ
ソキナーゼに関する限外濾過クロマトグラフ法を示すも
のである。

乾燥した酵母菌細胞〔シグマ　ケミカル・カンバ＝　−
（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、）、ＣａＬ
、Ｎｏ、ＹＳＣ−１３を０．１２７１の水酸化アンモニ
ウム中に懸濁させることによりｉ１ｇ解した。＋８解が
完了したら、酢酸を添加して懸濁液のｐＨを４６５に戎
した。最終容量は１、６リツトルであり、そして固形分
は９％であった。この懸濁液を、脱イオン水によって更
に２．６リツトルに希釈し、かつロミコン（Ｒｏｍｉｃ
ｏｎ）ＩＩＰＩ−４７ＭＰＯ＋カートリッジを備えた濾
過ユニット内でマイクロ濾過（層１ｃｒｏｆｉｌｔｅｒ
）　Ｌ、て、細胞砕片をヘキソキナーゼ（！（Ｋ）を含
む可溶性酵素から分離する。

この懸ＩＡ液を５（１４）ｍ１に濃縮し、次いでこれを
ｐｌ（５，０のＯ，Ｌｌｌ酢酸ナトリウム１０容量の置
換物に対して完全に濾過した。Ｌｌｊ物中のへキソキナ
ーゼの回収率は）容解懸濁液の当初酵素含存量の７３％
であった。

ヘキソキナーゼ１Ｍ位および蛋白’１０．９６弯／ｍ１
を含有するマイクロ濾過した’ｄｌ　ｉ＆　２リツトル
からのへキソキナーゼは、強酸、乳化重合したスチレン
−７，３％ジビニルベンゼン・ゲル樹脂であって、平均
粒径０，２６マイクロメーターおよびカチオン交換能５
．１　ｍｅｑ／ｇ　−乾燥樹脂を有するものの上に吸着
により濃縮された。次に、このψ脂を最終濃度２１（１
４）ｐｐｍをもって懸濁液に添加した。

酵素および樹脂の懸濁液を１５分間緩慢に撹拌したが、
この時点の濾過分別部分の分析は上澄み液中に酵素活性
の何らの形跡も示さなかった。撹拌を停止すると、樹脂
がビーカーの底に惣激に沈降するので、種々の方法で回
収することができた０本実施例の場合には、全権１Ｉｉ
ｌｉ懸濁液を上に示したマイクロ濾過カートリッジを備
えた濾過ユニットの再循環タンク内に泥面した。１５分
の再循環後、ｌ１Ｓｔ＆の分析は樹脂に当初結合された
酵素の５０％が該ＩＩ！／＆中に存在することを示した
。この）ε濁液は５（１４）ｍ１に濃縮され、かつ吸着
剤緩ＩＪｉ液２リットルと共に完全に濾過された。最終
完全濾液中では、酵素活性は全く検出されなかった。４
ＭＮａＣ１が保持タンク中に添加され、そして１５分間
再循環された０次に、この懸濁液を５（１４）ｍ１に濃
縮した。

この手順を更に２度繰り返した。２ＭＮａＣ１濾液の分
析は、この工程において吸着された酵素の６０％が回収
されたことを示した。

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. （１）第一の液体媒質と共に、不純物、他の生体材料お
   よび前記不純物と他の生体材料との混合物から選択され
   る他の成分を含有する生体材料の分離または精製方法に
   おいて、 （Ａ）第一の液体媒質を、そこから生体材料を優先的に
   吸着することのできる粒状高分子吸着剤と接触させる、
   この場合該吸着剤が平均粒度０．０１乃至５ミクロンを
   有しており、それによって吸着剤が生体材料を可逆的に
   結合して錯体を形成する工程と、 （Ｂ）上記錯体および他の成分を含有する媒質を膜濾過
   させる際、該膜が前記他の成分に関し透過可能であるの
   に対し、上記錯体に関しては不可能であり、それによっ
   て錯体と他の成分とを分離させる工程と、 を含むことを特徴とする粒状高分子吸着剤による生体材
   料の分離または精製方法
2. （２）（Ｃ）錯体である高分子粒子から生体材料を第二
   の液体媒質中へ解放させる付加的工程を含む特許請求の
   範囲第１項記載の方法。
3. （３）（Ｄ）生体材料および高分子粒子を含有する第二
   の液体媒質を上記工程（Ｂ）におけるように膜濾過させ
   、それによって透過物中に生体材料を蓄積させるが、ポ
   リマー粒子はさせない付加的工程を含む特許請求の範囲
   第２項記載の方法。
4. （４）生体材料用の吸着剤が、モノマー単位当たり官能
   基約１．５個を有するイオン交換樹脂を含んで構成され
   る特許請求の範囲第１項記載の方法。
5. （５）イオン交換樹脂の粒子が略球形のビードを含んで
   構成される特許請求の範囲第４項記載の方法。
6. （６）イオン交換樹脂の粒子が磨砕粒子を含んで構成さ
   れる特許請求の範囲第４項記載の方法。
7. （７）樹脂が酸性である特許請求の範囲第４項記載の方
   法。
8. （８）樹脂が塩基性である特許請求の範囲第４項記載の
   方法。
9. （９）生体材料が陽に帯電されており、そしてイオン交
   換樹脂が酸性である特許請求の範囲第４項記載の方法。
10. （１０）生体材料が陰に帯電されており、そしてイオン
    交換樹脂が塩基性である特許請求の範囲第４項記載の方
    法。
11. （１１）生体材料用の吸着剤が非帯電ポリマーを含んで
    構成される特許請求の範囲第１項記載の方法。
12. （１２）ポリマーおよび生体材料が疎水性である特許請
    求の範囲第１１項記載の方法。
13. （１３）非帯電ポリマーがイオン交換樹脂前駆体を含ん
    で構成される特許請求の範囲第１１項記載の方法。
14. （１４）生体材料が蛋白質物質である特許請求の範囲第
    １項記載の方法。
15. （１５）生体材料が蛋白質、アミノ酸、核酸、抗生物質
    またはビタミンである特許請求の範囲第１項記載の方法
    。
16. （１６）工程（Ｃ）において、生体材料が電解質による
    錯体の処理により解放される特許請求の範囲第２項記載
    の方法。
17. （１７）生体材料および他の成分が媒質中に懸濁または
    溶解されている特許請求の範囲第１項記載の方法。
18. （１８）他の生体材料が１以上の蛋白質、アミノ酸、核
    酸、抗生物質またはビタミンを含んでいる特許請求の範
    囲第１項記載の方法。