JPS62228281A - Hla−b27、それをコ−ドするdna及びその用途 - Google Patents
Hla−b27、それをコ−ドするdna及びその用途Info
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- JPS62228281A JPS62228281A JP61284078A JP28407886A JPS62228281A JP S62228281 A JPS62228281 A JP S62228281A JP 61284078 A JP61284078 A JP 61284078A JP 28407886 A JP28407886 A JP 28407886A JP S62228281 A JPS62228281 A JP S62228281A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
HLA−827は、ヒト組織適合抗原の中でクラスlヒ
ト抗原に属する。HLA−827の増大は、強直性を椎
炎が最も重要視されるリューマチ性疾患群において高度
の危険因子とみなされているo C(Tllomso
n、 G、、 Thcorct、 Pop、 Biol
、 20(1981)188−208 ) )。
ト抗原に属する。HLA−827の増大は、強直性を椎
炎が最も重要視されるリューマチ性疾患群において高度
の危険因子とみなされているo C(Tllomso
n、 G、、 Thcorct、 Pop、 Biol
、 20(1981)188−208 ) )。
適切なプローブ(HLAホモ接合性B細胞系(セルライ
ン) (R,A、 Gattl eL al、、 T
issueAntlgens、 13(1979)35
−44 )の3′ −非翻訳領域(CosIIlan、
D、、 et al、、 Nature 295(1
982)73−70 )由来〕の使用により、HLA−
827についてのcDNA及びゲノムDNAを分離し、
同定し、塩基配列を決めることが可能となった。ヌクレ
オチド配列は、表に示されている。表1は、ゲノムDN
A (コード鎖)及びエキソンにわたってのアミノ酸配
列を示す。表2は、ゲノムDNAのエキソン2〜7に相
当するcDNAのヌクレオチド配列を示す。表IAは、
表1のヌクレオチド配列I(DNA I)に対応する
が、DNAのみを示すものであって、対応アミノ酸(エ
キソンにわたって描かれたもの)も転写シグナルを示す
アンダーラインも示されていない。
ン) (R,A、 Gattl eL al、、 T
issueAntlgens、 13(1979)35
−44 )の3′ −非翻訳領域(CosIIlan、
D、、 et al、、 Nature 295(1
982)73−70 )由来〕の使用により、HLA−
827についてのcDNA及びゲノムDNAを分離し、
同定し、塩基配列を決めることが可能となった。ヌクレ
オチド配列は、表に示されている。表1は、ゲノムDN
A (コード鎖)及びエキソンにわたってのアミノ酸配
列を示す。表2は、ゲノムDNAのエキソン2〜7に相
当するcDNAのヌクレオチド配列を示す。表IAは、
表1のヌクレオチド配列I(DNA I)に対応する
が、DNAのみを示すものであって、対応アミノ酸(エ
キソンにわたって描かれたもの)も転写シグナルを示す
アンダーラインも示されていない。
これらの確認されたDNA配列を基礎にし、熟練者であ
れば例えばホスファイト法のような慣用的な化学的遺伝
子合成法を利用して遺伝子構造を再生することができる
。これらのヌクレオチド配列は公知であるため、プロー
ブを合成し、しかもそれらを用いて公知の方法により適
切なc DNAバンクまたはゲノムバンクからcDNA
またはゲノム配列を得ることもできる。化学的に合成す
る場合は、天然切断部位(表3)を利用することができ
る。
れば例えばホスファイト法のような慣用的な化学的遺伝
子合成法を利用して遺伝子構造を再生することができる
。これらのヌクレオチド配列は公知であるため、プロー
ブを合成し、しかもそれらを用いて公知の方法により適
切なc DNAバンクまたはゲノムバンクからcDNA
またはゲノム配列を得ることもできる。化学的に合成す
る場合は、天然切断部位(表3)を利用することができ
る。
このようにして得られたDNAは、公知の方法により、
ベクター中に、例えば公知の市販の大腸菌ベクターたと
えばpBR322もしくはpBR325またはpUCベ
クターたとえばpUC8,9,12,13,18もしく
は19に挿入し、しかも適切な宿主、例えば大腸菌中で
増幅させることができる。再分離されたDNAは、次い
で診断目的のために遺伝子プローブ(“十分な長さのプ
ローブm)として使用することができる。本発明は、こ
のように、診断補助物として及び診断補助物用としての
DNAの用途、並びに分離したヒト遺伝子物質がHLA
−827をコードする(適切であれば突然変異した)遺
伝子又は対応するmRNAの存否に関して試験される診
断方法にも関する。
ベクター中に、例えば公知の市販の大腸菌ベクターたと
えばpBR322もしくはpBR325またはpUCベ
クターたとえばpUC8,9,12,13,18もしく
は19に挿入し、しかも適切な宿主、例えば大腸菌中で
増幅させることができる。再分離されたDNAは、次い
で診断目的のために遺伝子プローブ(“十分な長さのプ
ローブm)として使用することができる。本発明は、こ
のように、診断補助物として及び診断補助物用としての
DNAの用途、並びに分離したヒト遺伝子物質がHLA
−827をコードする(適切であれば突然変異した)遺
伝子又は対応するmRNAの存否に関して試験される診
断方法にも関する。
本発明は、更に、一方では自体公知の方法(欧州特許第
A0,090.505号明細書)でコードDNAを発現
ベクターに挿入し、かつ後者を適切な宿主細胞中に導入
し、あるいは、他方で、ゲノムDNAを真核宿主細胞中
に直接導入し、次いでいずれの場合においてもその場で
ポリペプチドを発現させて同様に自体公知の方法でそれ
を分離することからなる、遺伝子操作によるHLA−B
27産生用としてのDNAの用途に関する。分離された
ゲノムDNAの代わりに、大きさが、6.5kbのEc
oRIフラグメントまたは使用された遺伝子バンク由来
の相当するクローンを用いることもできる。更には、真
核宿主細胞用として確認されたベクター系、特にウィル
スベクター又はかかる使用目的のために酵母閑細胞中で
特に産生されたベクター、を用いることもできる。
A0,090.505号明細書)でコードDNAを発現
ベクターに挿入し、かつ後者を適切な宿主細胞中に導入
し、あるいは、他方で、ゲノムDNAを真核宿主細胞中
に直接導入し、次いでいずれの場合においてもその場で
ポリペプチドを発現させて同様に自体公知の方法でそれ
を分離することからなる、遺伝子操作によるHLA−B
27産生用としてのDNAの用途に関する。分離された
ゲノムDNAの代わりに、大きさが、6.5kbのEc
oRIフラグメントまたは使用された遺伝子バンク由来
の相当するクローンを用いることもできる。更には、真
核宿主細胞用として確認されたベクター系、特にウィル
スベクター又はかかる使用目的のために酵母閑細胞中で
特に産生されたベクター、を用いることもできる。
本発明により得られるHLA−827は、診断補助物と
して、例えばヒト血清がHLA−827に対する抗体を
aaしているか否かについて調べるだめに使用すること
ができる。したがって、本発明は、HLA−827に対
する抗体の存否を調べるために、これら抗体の含有可能
性があるヒト血清をHLA−827と接触させることか
らなる診断方法にも関する。
して、例えばヒト血清がHLA−827に対する抗体を
aaしているか否かについて調べるだめに使用すること
ができる。したがって、本発明は、HLA−827に対
する抗体の存否を調べるために、これら抗体の含有可能
性があるヒト血清をHLA−827と接触させることか
らなる診断方法にも関する。
本発明により得られるHLA−827は、HLA−82
7特異抗体産生用の抗原として使用することもできる。
7特異抗体産生用の抗原として使用することもできる。
そのためには、マウス、ウサギ、ヒツジ又はヤギのよう
な実験動物を慣用的方法で免疫し、産生された抗体を含
有する血清を自体公知の方法により得る。
な実験動物を慣用的方法で免疫し、産生された抗体を含
有する血清を自体公知の方法により得る。
抗原は、モノクローナル抗体を産生させるために下記方
法で使用される。すなわち、HLA−827に対する抗
体を産生ずる細胞、例えばマウス細胞をミエローマ細胞
と融合させ、融合したハイブリッド細胞を公知の方法(
例えば、米国特許第4.196.265号、同第4.4
74,893号または同第4,451,570号明細書
に記載された方法)で培養する。
法で使用される。すなわち、HLA−827に対する抗
体を産生ずる細胞、例えばマウス細胞をミエローマ細胞
と融合させ、融合したハイブリッド細胞を公知の方法(
例えば、米国特許第4.196.265号、同第4.4
74,893号または同第4,451,570号明細書
に記載された方法)で培養する。
このようにして得られるポリクローナル及びモツクロー
ナル抗体は診断補助物として自体公知の方法で使用する
ことができて、その際には慣用的方法がこの目的のため
に適用される。このようにして、例えば、ヒト血清をこ
れら抗体と接触させることによりHLA−827の増加
量を確認することができる。したがって、慣用的細胞毒
性試験において、又は抗原抗体反応を利用し、マーカー
好ましくは蛍光色素又は酵素の助けでHLA −827
を検出する結合試験において、ヒト有核細胞、好ましく
はリンパ球、を使用することができる。
ナル抗体は診断補助物として自体公知の方法で使用する
ことができて、その際には慣用的方法がこの目的のため
に適用される。このようにして、例えば、ヒト血清をこ
れら抗体と接触させることによりHLA−827の増加
量を確認することができる。したがって、慣用的細胞毒
性試験において、又は抗原抗体反応を利用し、マーカー
好ましくは蛍光色素又は酵素の助けでHLA −827
を検出する結合試験において、ヒト有核細胞、好ましく
はリンパ球、を使用することができる。
以上のように、極めて広汎な診断オプションが、HLA
−827及びそれをコードする遺伝子の存否について調
べるために、本発明によって提供される。したがって、
本発明はクラスIのヒト抗原に関する診断オプションを
豊富化させるものである。
−827及びそれをコードする遺伝子の存否について調
べるために、本発明によって提供される。したがって、
本発明はクラスIのヒト抗原に関する診断オプションを
豊富化させるものである。
例1
ベクターp T CF (Grosveld eL
at、、 NucleicAcids Re5earc
1110(1982)8715 、Gene 13(1
981)227 ) )を用い、ゲノムバンクを、HL
A型かHLA−A2/2、−B5/27、−Cw2/3
の健康な提供者の末梢白血球細胞から得た。このコスミ
ド(cosmid)バンクを、HLA−B遺伝子座に対
し特異的でかつHLA−88遺伝子の3′−非翻訳領域
から得られるcDNAプローブで選別した。完全なHL
A−827遺伝子ををしかつベクターptrc 13で
サブクローニングされた3’ −Bgluフラグメン
トのDNA配列分析を、実質的に、サンが−(Sang
er)のジデオキシ法により、しかも未確認のヌクレオ
チドを同定するために一部のみマキサム(Maxam
)及びギルバート(Gilbert )の化学的配列決
定法により行なった。
at、、 NucleicAcids Re5earc
1110(1982)8715 、Gene 13(1
981)227 ) )を用い、ゲノムバンクを、HL
A型かHLA−A2/2、−B5/27、−Cw2/3
の健康な提供者の末梢白血球細胞から得た。このコスミ
ド(cosmid)バンクを、HLA−B遺伝子座に対
し特異的でかつHLA−88遺伝子の3′−非翻訳領域
から得られるcDNAプローブで選別した。完全なHL
A−827遺伝子ををしかつベクターptrc 13で
サブクローニングされた3’ −Bgluフラグメン
トのDNA配列分析を、実質的に、サンが−(Sang
er)のジデオキシ法により、しかも未確認のヌクレオ
チドを同定するために一部のみマキサム(Maxam
)及びギルバート(Gilbert )の化学的配列決
定法により行なった。
マウスチミジンキナーゼ欠乏細胞(tk−細胞)即ちL
DI (H−2k)を、リン酸カルシウム・トランスフ
ァー法〔νIgler et al、、 Proe、
of’Nat1. Acad、 Set、 usA 7
G(19790373))により、ベクターp OP
F ((Grosvcld et al、、 Nucl
eicAcids l?cscarch 10.671
5 ) )中に含有されたコスミドDNA及びヘルペス
tk遺伝子でトランスフェクションさせた。形質転換さ
れた細胞群をヒポキサンチン/アミノプテリン/チミジ
ン選択法(HAT)により選択し、安定なLtk 形
質転換クローンを同定した。ヒトリンパ芽球様細胞系L
G−2(HLA−A2/2、−B27/27′、−Cw
l/1)をHLA−B27発現に際しての陽性コントロ
ールとして選択した。
DI (H−2k)を、リン酸カルシウム・トランスフ
ァー法〔νIgler et al、、 Proe、
of’Nat1. Acad、 Set、 usA 7
G(19790373))により、ベクターp OP
F ((Grosvcld et al、、 Nucl
eicAcids l?cscarch 10.671
5 ) )中に含有されたコスミドDNA及びヘルペス
tk遺伝子でトランスフェクションさせた。形質転換さ
れた細胞群をヒポキサンチン/アミノプテリン/チミジ
ン選択法(HAT)により選択し、安定なLtk 形
質転換クローンを同定した。ヒトリンパ芽球様細胞系L
G−2(HLA−A2/2、−B27/27′、−Cw
l/1)をHLA−B27発現に際しての陽性コントロ
ールとして選択した。
例2
ポリクローナル抗体を得るために、例えばウサギのよう
な実験動物を本発明により生産されたHLA−827で
免疫した。その際に、免疫応答性を増大させるために、
公知の方法で抗原を例えばタンパク質のような担体に結
合させておくことができる。改善された免疫応答性を得
るために、上記抗原又は担体タンパク質に結合した抗原
を、例えばシリケート、アルミネートのようなアジュバ
ント又はフロインドアジュバントのような含油アジュバ
ントと一緒に、例えば静注、筋注又は皮下性で実験動物
に注入することができる。
な実験動物を本発明により生産されたHLA−827で
免疫した。その際に、免疫応答性を増大させるために、
公知の方法で抗原を例えばタンパク質のような担体に結
合させておくことができる。改善された免疫応答性を得
るために、上記抗原又は担体タンパク質に結合した抗原
を、例えばシリケート、アルミネートのようなアジュバ
ント又はフロインドアジュバントのような含油アジュバ
ントと一緒に、例えば静注、筋注又は皮下性で実験動物
に注入することができる。
艶
a)細胞毒性試験用の診断補助物を製造するために、本
発明により得たポリクローナル又はモノクローナル抗体
を、NIH細胞毒性試験に際してのそれらの応答性が最
適となるように、保護コロイド含有緩衝液で希釈する。
発明により得たポリクローナル又はモノクローナル抗体
を、NIH細胞毒性試験に際してのそれらの応答性が最
適となるように、保護コロイド含有緩衝液で希釈する。
b)細胞毒性試験に使用される試薬を製造するために、
本発明により得たポリクローナル又はモノクローナル抗
体を例えばテラサキマイクロテストプレートのようなプ
ラスチックテストプレート上に吸着させることにより結
合させる。
本発明により得たポリクローナル又はモノクローナル抗
体を例えばテラサキマイクロテストプレートのようなプ
ラスチックテストプレート上に吸着させることにより結
合させる。
も
結合試験用の診断補助物を製造するために、本発明によ
り得たポリクローナル又はモノクローナル抗体を、例え
ばフルオレスセインインチオシアネート(FITC)も
しくはテトラメチルローダミンインチオシアネート(T
RITC)のような蛍光色素、又は例えばペルオキシダ
ーゼもしくはアルカリホスファターゼのような酵素に結
合させる。
り得たポリクローナル又はモノクローナル抗体を、例え
ばフルオレスセインインチオシアネート(FITC)も
しくはテトラメチルローダミンインチオシアネート(T
RITC)のような蛍光色素、又は例えばペルオキシダ
ーゼもしくはアルカリホスファターゼのような酵素に結
合させる。
例5
ヒト血清中のHLA−827検出用の診断補助物を製造
するために、本発明により得たポリクローナル又はモノ
クローナル抗体を例えば微量滴定プレートのようなプラ
スチックテストプレート上に吸石結合させる。例3で得
た酵素結合ポリクローナル又はモノクローナル抗体を用
いて、例えばELISA原理により操作される試験系を
製造する。
するために、本発明により得たポリクローナル又はモノ
クローナル抗体を例えば微量滴定プレートのようなプラ
スチックテストプレート上に吸石結合させる。例3で得
た酵素結合ポリクローナル又はモノクローナル抗体を用
いて、例えばELISA原理により操作される試験系を
製造する。
例6
ヒト又は動物抗血清中のHLA−827に対する抗体検
出用の診断補助物を製造するために、本発明により得た
HLA−827をプラスチックテストプレートの表面に
例えば吸着させて結合し、検出すべきHLA−827に
対する抗体を例えばヒト又は動物免疫グロブリン即ちI
gGに対する酵素結合抗体により例えばEL I SA
原理によって調べる。
出用の診断補助物を製造するために、本発明により得た
HLA−827をプラスチックテストプレートの表面に
例えば吸着させて結合し、検出すべきHLA−827に
対する抗体を例えばヒト又は動物免疫グロブリン即ちI
gGに対する酵素結合抗体により例えばEL I SA
原理によって調べる。
jLl
工a
−の
ζ −口 リ − リ リ
−一(0u口Ll 0 (り0 Cj 0 L) el
L) 0トC) CIIT 0 (!II(j
Ll 1− CI+1− LI
CIl ロ U< <
((j < < u <
←■ ■ ヒ ω l−L)
Ll 1− 口■ く Cロ
く ← く 口 くLILI
口 (J ← υ Q く
OQ く ω < <
Ll (L) <ト ← (<
< (J (J (j
←ロ ロ く く ロ C5
u L) (Jl−< <
< 1− ロ く ω ト(1
−Ll ((j ト(ロ くLl
(Ll ω LI Cり
ト(Lll−)−<: (J L)
Cり CI) < LIC!IL
I L) < 1− ■
<<<LI LI L) ω
Oヒ く u ω表3 : cDNAの
切断部位 エンドヌクレアーゼ 下記魔のヌクレオチド/トリプレ
ット(コード鎖) の後の切断部位 TaqI 107/36 HinfII ’123/41BglII
194/65BglII 3
18/106Kpnl 3’39/113
SacI 394/132Sau3A
422/141Bg l I 4
54/152PvuII 465/155
Pstl 539/180Sau3A
635/212PvuII 73
6/246Sacl 937/313手続
補正書(方式) 昭和62年3月266 1、事件の表示 昭和61年 特許願 第284078号2、発明の名称 HLA−827、それをコードするDNA及びその用途
3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ベーリングベルケ、アクヂエンゲゼルシャフト4、代理
人 昭和62年2月4日
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Oヒ く u ω表3 : cDNAの
切断部位 エンドヌクレアーゼ 下記魔のヌクレオチド/トリプレ
ット(コード鎖) の後の切断部位 TaqI 107/36 HinfII ’123/41BglII
194/65BglII 3
18/106Kpnl 3’39/113
SacI 394/132Sau3A
422/141Bg l I 4
54/152PvuII 465/155
Pstl 539/180Sau3A
635/212PvuII 73
6/246Sacl 937/313手続
補正書(方式) 昭和62年3月266 1、事件の表示 昭和61年 特許願 第284078号2、発明の名称 HLA−827、それをコードするDNA及びその用途
3、補正をする者 事件との関係 特許出願人 ベーリングベルケ、アクヂエンゲゼルシャフト4、代理
人 昭和62年2月4日
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 1、HLA−B27をコードしかつヌクレオチド配列
I 及びIIを有するゲノムDNA及びcDNA。 2、宿主細胞中でヌクレオチド配列 I 又はIIのDNA
を発現させることからなるHLA−B27の生産方法。 3、DNA I もしくはII又はこれらDNA配列の特徴
的部分を含有する診断補助物。 4、HLA−B27を含有する診断補助物。 5、HLA−B27に対する抗体を含有する診断補助物
。 6、実験動物をHLA−B27で免疫し、抗体含有血清
を得ることからなる、HLA−B27に対する抗体の生
産方法。 7、HLA−B27に対する抗体を産生する細胞をミエ
ローマ細胞と融合させることからなる、HLA−B27
に対するモノクローナル抗体の生産方法。 8、ヒト遺伝物質を特許請求の範囲第3項記載の診断補
助物と接触させることからなる診断方法。 9、ヒト血清を特許請求の範囲第4項記載の診断補助物
と接触させることからなる診断方法。 10、ヒト血清を特許請求の範囲第5項記載の診断補助
物と接触させることからなる診断方法。
Applications Claiming Priority (3)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
DE19853542024 DE3542024A1 (de) | 1985-11-28 | 1985-11-28 | Hla-b 27, dafuer codierende dna und ihre verwendung |
DE3542024.3 | 1985-11-28 | ||
DE3545576.4 | 1985-12-21 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
JPS62228281A true JPS62228281A (ja) | 1987-10-07 |
Family
ID=6287050
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
JP61284078A Pending JPS62228281A (ja) | 1985-11-28 | 1986-11-28 | Hla−b27、それをコ−ドするdna及びその用途 |
Country Status (2)
Country | Link |
---|---|
JP (1) | JPS62228281A (ja) |
DE (1) | DE3542024A1 (ja) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110923307A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-03-27 | 福建医科大学附属第一医院 | 用于检测hla-b*27等位基因的试剂盒、组合物及方法 |
-
1985
- 1985-11-28 DE DE19853542024 patent/DE3542024A1/de not_active Withdrawn
-
1986
- 1986-11-28 JP JP61284078A patent/JPS62228281A/ja active Pending
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN110923307A (zh) * | 2019-12-12 | 2020-03-27 | 福建医科大学附属第一医院 | 用于检测hla-b*27等位基因的试剂盒、组合物及方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
DE3542024A1 (de) | 1987-06-04 |
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