JPS62228281A - Hla−b27、それをコ−ドするdna及びその用途 - Google Patents

Hla−b27、それをコ−ドするdna及びその用途

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JPS62228281A
JPS62228281A JP61284078A JP28407886A JPS62228281A JP S62228281 A JPS62228281 A JP S62228281A JP 61284078 A JP61284078 A JP 61284078A JP 28407886 A JP28407886 A JP 28407886A JP S62228281 A JPS62228281 A JP S62228281A
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JP
Japan
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hla
diagnostic
dna
antibodies against
diagnostic aid
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JP61284078A
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ハンネローレ、スツェーツ
エリザベート、ワイス
クリスタ、デルナー
マーゴット、ラング
トマソ、メオ
ゲルト、リートミュラー
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Siemens Healthcare Diagnostics GmbH Germany
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Behringwerke AG
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    • GPHYSICS
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 HLA−827は、ヒト組織適合抗原の中でクラスlヒ
ト抗原に属する。HLA−827の増大は、強直性を椎
炎が最も重要視されるリューマチ性疾患群において高度
の危険因子とみなされているo  C(Tllomso
n、 G、、 Thcorct、 Pop、 Biol
、 20(1981)188−208 ) )。
適切なプローブ(HLAホモ接合性B細胞系(セルライ
ン)  (R,A、 Gattl eL al、、 T
issueAntlgens、 13(1979)35
−44 )の3′ −非翻訳領域(CosIIlan、
 D、、 et al、、 Nature 295(1
982)73−70 )由来〕の使用により、HLA−
827についてのcDNA及びゲノムDNAを分離し、
同定し、塩基配列を決めることが可能となった。ヌクレ
オチド配列は、表に示されている。表1は、ゲノムDN
A (コード鎖)及びエキソンにわたってのアミノ酸配
列を示す。表2は、ゲノムDNAのエキソン2〜7に相
当するcDNAのヌクレオチド配列を示す。表IAは、
表1のヌクレオチド配列I(DNA  I)に対応する
が、DNAのみを示すものであって、対応アミノ酸(エ
キソンにわたって描かれたもの)も転写シグナルを示す
アンダーラインも示されていない。
これらの確認されたDNA配列を基礎にし、熟練者であ
れば例えばホスファイト法のような慣用的な化学的遺伝
子合成法を利用して遺伝子構造を再生することができる
。これらのヌクレオチド配列は公知であるため、プロー
ブを合成し、しかもそれらを用いて公知の方法により適
切なc DNAバンクまたはゲノムバンクからcDNA
またはゲノム配列を得ることもできる。化学的に合成す
る場合は、天然切断部位(表3)を利用することができ
る。
このようにして得られたDNAは、公知の方法により、
ベクター中に、例えば公知の市販の大腸菌ベクターたと
えばpBR322もしくはpBR325またはpUCベ
クターたとえばpUC8,9,12,13,18もしく
は19に挿入し、しかも適切な宿主、例えば大腸菌中で
増幅させることができる。再分離されたDNAは、次い
で診断目的のために遺伝子プローブ(“十分な長さのプ
ローブm)として使用することができる。本発明は、こ
のように、診断補助物として及び診断補助物用としての
DNAの用途、並びに分離したヒト遺伝子物質がHLA
−827をコードする(適切であれば突然変異した)遺
伝子又は対応するmRNAの存否に関して試験される診
断方法にも関する。
本発明は、更に、一方では自体公知の方法(欧州特許第
A0,090.505号明細書)でコードDNAを発現
ベクターに挿入し、かつ後者を適切な宿主細胞中に導入
し、あるいは、他方で、ゲノムDNAを真核宿主細胞中
に直接導入し、次いでいずれの場合においてもその場で
ポリペプチドを発現させて同様に自体公知の方法でそれ
を分離することからなる、遺伝子操作によるHLA−B
27産生用としてのDNAの用途に関する。分離された
ゲノムDNAの代わりに、大きさが、6.5kbのEc
oRIフラグメントまたは使用された遺伝子バンク由来
の相当するクローンを用いることもできる。更には、真
核宿主細胞用として確認されたベクター系、特にウィル
スベクター又はかかる使用目的のために酵母閑細胞中で
特に産生されたベクター、を用いることもできる。
本発明により得られるHLA−827は、診断補助物と
して、例えばヒト血清がHLA−827に対する抗体を
aaしているか否かについて調べるだめに使用すること
ができる。したがって、本発明は、HLA−827に対
する抗体の存否を調べるために、これら抗体の含有可能
性があるヒト血清をHLA−827と接触させることか
らなる診断方法にも関する。
本発明により得られるHLA−827は、HLA−82
7特異抗体産生用の抗原として使用することもできる。
そのためには、マウス、ウサギ、ヒツジ又はヤギのよう
な実験動物を慣用的方法で免疫し、産生された抗体を含
有する血清を自体公知の方法により得る。
抗原は、モノクローナル抗体を産生させるために下記方
法で使用される。すなわち、HLA−827に対する抗
体を産生ずる細胞、例えばマウス細胞をミエローマ細胞
と融合させ、融合したハイブリッド細胞を公知の方法(
例えば、米国特許第4.196.265号、同第4.4
74,893号または同第4,451,570号明細書
に記載された方法)で培養する。
このようにして得られるポリクローナル及びモツクロー
ナル抗体は診断補助物として自体公知の方法で使用する
ことができて、その際には慣用的方法がこの目的のため
に適用される。このようにして、例えば、ヒト血清をこ
れら抗体と接触させることによりHLA−827の増加
量を確認することができる。したがって、慣用的細胞毒
性試験において、又は抗原抗体反応を利用し、マーカー
好ましくは蛍光色素又は酵素の助けでHLA −827
を検出する結合試験において、ヒト有核細胞、好ましく
はリンパ球、を使用することができる。
以上のように、極めて広汎な診断オプションが、HLA
−827及びそれをコードする遺伝子の存否について調
べるために、本発明によって提供される。したがって、
本発明はクラスIのヒト抗原に関する診断オプションを
豊富化させるものである。
例1 ベクターp T CF  (Grosveld eL 
at、、 NucleicAcids Re5earc
1110(1982)8715 、Gene 13(1
981)227 ) )を用い、ゲノムバンクを、HL
A型かHLA−A2/2、−B5/27、−Cw2/3
の健康な提供者の末梢白血球細胞から得た。このコスミ
ド(cosmid)バンクを、HLA−B遺伝子座に対
し特異的でかつHLA−88遺伝子の3′−非翻訳領域
から得られるcDNAプローブで選別した。完全なHL
A−827遺伝子ををしかつベクターptrc 13で
サブクローニングされた3’  −Bgluフラグメン
トのDNA配列分析を、実質的に、サンが−(Sang
er)のジデオキシ法により、しかも未確認のヌクレオ
チドを同定するために一部のみマキサム(Maxam 
)及びギルバート(Gilbert )の化学的配列決
定法により行なった。
マウスチミジンキナーゼ欠乏細胞(tk−細胞)即ちL
DI (H−2k)を、リン酸カルシウム・トランスフ
ァー法〔νIgler et al、、 Proe、 
of’Nat1. Acad、 Set、 usA 7
G(19790373))により、ベクターp OP 
F ((Grosvcld et al、、 Nucl
eicAcids l?cscarch 10.671
5 ) )中に含有されたコスミドDNA及びヘルペス
tk遺伝子でトランスフェクションさせた。形質転換さ
れた細胞群をヒポキサンチン/アミノプテリン/チミジ
ン選択法(HAT)により選択し、安定なLtk  形
質転換クローンを同定した。ヒトリンパ芽球様細胞系L
G−2(HLA−A2/2、−B27/27′、−Cw
l/1)をHLA−B27発現に際しての陽性コントロ
ールとして選択した。
例2 ポリクローナル抗体を得るために、例えばウサギのよう
な実験動物を本発明により生産されたHLA−827で
免疫した。その際に、免疫応答性を増大させるために、
公知の方法で抗原を例えばタンパク質のような担体に結
合させておくことができる。改善された免疫応答性を得
るために、上記抗原又は担体タンパク質に結合した抗原
を、例えばシリケート、アルミネートのようなアジュバ
ント又はフロインドアジュバントのような含油アジュバ
ントと一緒に、例えば静注、筋注又は皮下性で実験動物
に注入することができる。
艶 a)細胞毒性試験用の診断補助物を製造するために、本
発明により得たポリクローナル又はモノクローナル抗体
を、NIH細胞毒性試験に際してのそれらの応答性が最
適となるように、保護コロイド含有緩衝液で希釈する。
b)細胞毒性試験に使用される試薬を製造するために、
本発明により得たポリクローナル又はモノクローナル抗
体を例えばテラサキマイクロテストプレートのようなプ
ラスチックテストプレート上に吸着させることにより結
合させる。
も 結合試験用の診断補助物を製造するために、本発明によ
り得たポリクローナル又はモノクローナル抗体を、例え
ばフルオレスセインインチオシアネート(FITC)も
しくはテトラメチルローダミンインチオシアネート(T
RITC)のような蛍光色素、又は例えばペルオキシダ
ーゼもしくはアルカリホスファターゼのような酵素に結
合させる。
例5 ヒト血清中のHLA−827検出用の診断補助物を製造
するために、本発明により得たポリクローナル又はモノ
クローナル抗体を例えば微量滴定プレートのようなプラ
スチックテストプレート上に吸石結合させる。例3で得
た酵素結合ポリクローナル又はモノクローナル抗体を用
いて、例えばELISA原理により操作される試験系を
製造する。
例6 ヒト又は動物抗血清中のHLA−827に対する抗体検
出用の診断補助物を製造するために、本発明により得た
HLA−827をプラスチックテストプレートの表面に
例えば吸着させて結合し、検出すべきHLA−827に
対する抗体を例えばヒト又は動物免疫グロブリン即ちI
gGに対する酵素結合抗体により例えばEL I SA
原理によって調べる。
jLl 工a −の ζ   −口   リ   −   リ   リ   
−一(0u口Ll 0 (り0 Cj 0 L) el
 L) 0トC) CIIT 0 (!II(j   
 Ll    1−    CI+1−    LI 
   CIl    ロ   U<    <    
((j    <    <    u    <  
  ←■   ■   ヒ   ω   l−L)  
  Ll    1−    口■   く   Cロ
   く   ←   く   口   くLILI 
   口   (J   ←   υ   Q   く
   OQ   く   ω   <    <   
 Ll    (L)    <ト   ←   (<
    <    (J    (J    (j  
  ←ロ   ロ   く   く   ロ   C5
u    L)    (Jl−<    <    
<    1−   ロ   く   ω   ト(1
−Ll    ((j    ト(ロ   くLl  
  (Ll    ω   LI    Cり    
ト(Lll−)−<:    (J    L)   
 Cり    CI)    <    LIC!IL
I    L)    <    1−    ■  
 <<<LI    LI    L)    ω  
 Oヒ   く   u   ω表3 : cDNAの
切断部位 エンドヌクレアーゼ 下記魔のヌクレオチド/トリプレ
ット(コード鎖) の後の切断部位 TaqI       107/36 HinfII      ’123/41BglII 
      194/65BglII       3
18/106Kpnl       3’39/113
SacI       394/132Sau3A  
    422/141Bg l I       4
54/152PvuII       465/155
Pstl       539/180Sau3A  
    635/212PvuII       73
6/246Sacl       937/313手続
補正書(方式) 昭和62年3月266 1、事件の表示 昭和61年 特許願 第284078号2、発明の名称 HLA−827、それをコードするDNA及びその用途
3、補正をする者 事件との関係  特許出願人 ベーリングベルケ、アクヂエンゲゼルシャフト4、代理
人 昭和62年2月4日

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1、HLA−B27をコードしかつヌクレオチド配列
    I 及びIIを有するゲノムDNA及びcDNA。 2、宿主細胞中でヌクレオチド配列 I 又はIIのDNA
    を発現させることからなるHLA−B27の生産方法。 3、DNA I もしくはII又はこれらDNA配列の特徴
    的部分を含有する診断補助物。 4、HLA−B27を含有する診断補助物。 5、HLA−B27に対する抗体を含有する診断補助物
    。 6、実験動物をHLA−B27で免疫し、抗体含有血清
    を得ることからなる、HLA−B27に対する抗体の生
    産方法。 7、HLA−B27に対する抗体を産生する細胞をミエ
    ローマ細胞と融合させることからなる、HLA−B27
    に対するモノクローナル抗体の生産方法。 8、ヒト遺伝物質を特許請求の範囲第3項記載の診断補
    助物と接触させることからなる診断方法。 9、ヒト血清を特許請求の範囲第4項記載の診断補助物
    と接触させることからなる診断方法。 10、ヒト血清を特許請求の範囲第5項記載の診断補助
    物と接触させることからなる診断方法。
JP61284078A 1985-11-28 1986-11-28 Hla−b27、それをコ−ドするdna及びその用途 Pending JPS62228281A (ja)

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DE19853542024 DE3542024A1 (de) 1985-11-28 1985-11-28 Hla-b 27, dafuer codierende dna und ihre verwendung
DE3542024.3 1985-11-28
DE3545576.4 1985-12-21

Publications (1)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110923307A (zh) * 2019-12-12 2020-03-27 福建医科大学附属第一医院 用于检测hla-b*27等位基因的试剂盒、组合物及方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110923307A (zh) * 2019-12-12 2020-03-27 福建医科大学附属第一医院 用于检测hla-b*27等位基因的试剂盒、组合物及方法

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