JPS62195361A - 新規なアミノ基標識試薬化合物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、アミノ基＃識（ラベル化）試薬として、また
キ２ル（ｃｈｉｒａｌ　）誘導体化試薬として有用であ
る新規な活性カルノ々モイル化合物に関する。

さらに詳しく言えば、本発明は各種のアミノ基含有化合
物の７ミノ基と選択的に反応することによシ核アミノ基
含有化合物を、液体クロマトグラフィー的に光字分割を
可能とするキラル誘導体化試薬であってしかも極めて低
濃度に存在していても検出し易い別の尿素誘導体に転化
できるキラル銹導体化試薬あるいはアミン基標識試薬と
して有用である新規な光学活性な活性Ｎ−（置換カルノ
々モイル）−サクシンイミデート類に関する。特に１本
発明は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によ
る光学分割法に際して利用するときは、水系溶媒中でア
ミノ基含有化合物と選択的に反応して該化合物の７ミノ
基を標識化すなわちラベル化することができ、しかもこ
れにより、低濃度でも分光分析で敏感に検出が容易で且
つキラル（ｃｈｉｒａｌ）な尿素誘導体を生成できるア
ミノ基標識試薬あるいはキラル誘導体化試薬として有用
である光学活性な活性Ｎ−（置換カルノ々モイル）サク
シンイミデート化合物に関する。

（従来の技術） ＨＰＬＣによる光学分割において、光学分割すべき化合
物と反応させてキラルな誘導体を生成させるために用い
るキラル誘導体化試薬について望まれる条件社、第１に
、生成されたキラル誘導体の検出能及び分離能が高いこ
とであり、第一に操作が簡便で、熟練を要しないことで
ある。これらの条件を満たすキラル誘導体化試薬として
開発されたものの例として、キラルな誘導体の生成反応
の際の異性化を防止するため常温でも反応するアセチル
化糖インチオシアネートがある（　「Ｃｊｈｅｍ。

Ｐｈａｒｍ、Ｂｕｌｌ、Ｊ　　２７．／　／　Ｊ　Ｏ（
／り７り参照）。

（発明が解決しようとする問題点） しかし未だ光学活性アミン類のＨＰＬＣによ　る光学分
割法において、水系溶媒中でラベル化反応を行い得る実
用的なキラル誘導体化試薬扛関発されていない。

本発明者らは、各種アミン基含有化合物例えばアミノ酸
類を、高速液体クロマドグ之フイ（ＨＰＬＯ）装置を用
い几光学分割において低濃度でも容易に分光分析法で検
出できる別の誘導体化合物に転化させうるアミノ基標識
試薬めるいはキラル誘導体化試薬について研究を進めた
。そして、次式 ％式％（ ＳＯと略称される）（「テトクヘドロン・レター」１９
７９年４７４５　ｊｉ［、参照）を適当表発色団を有す
る光学活性アミンと反応させて得られる後記の一般式Ｃ
Ｉ）のＮ−（置換カルバモイル）サクシンイミデート化
会物が水系溶媒１例えば含水アセトニトリルの如き含水
有機溶媒中で緩和な反応条件下でも第１アミン（エナン
チオマ一対）又は第一アミン仔ナンテオマ一対に選択的
に且つ実質的に定量的に反応して、前記第１アミン又は
第２アミンのキラルな尿素誘導体（ノアステレオマ一対
）を与え得ろこと、さらＫこの尿素誘導体（ノアステレ
オマ一対）は高速液体クロマトグラフィーで高い相互分
離性を示すのみならず、一般式（１）のサクシンイミデ
ート化合物との反応な介して該尿素誘導体中に導入され
た発色団が紫外線波長範囲の光を良く吸収するので該尿
素誘導体が極めて低濃度で存在していても分光分析法で
検出できること、すなわち高感度で検出できることを知
見した。従って、一般式（１）のｆヒ合物がアミノ基標
識試薬としてまた、光学分割く利用出来ろ水系溶媒中で
ラベル化可能なキラル誘導体化試薬として極めて秀れて
いることが本発明者により知見された。こうして本発明
を完成した。

（問題を解決するための手段） 本発明はアミノ基標識試薬として有用であり、またＨＰ
ＬＣによる光学分割において水系溶媒中でラベル化反応
が可能な実用的キラル誘導体試薬として有用である新規
化合物を提供するものである。

すなわち、本発明によると、次式（１）（式中Ｒはフェ
ニル基またはα−ナフチル基を示す）で示される化合物
が提供される０式ＣＤの化合物の具体例には次に示す光
学活性化合物が含まれる。

口）　　Ｎ−（Ｎ’−Ｒ−（→〜１−フェニルエチルカ
ルノ４モイル〕サクシンイミｆ−）（以下、■−ｐｚｃ
ｓｔと略す）。

（２）　Ｎ−［Ｎ’−８−（→−１−フェニルエチルカ
ルバモイル］サクシンイミデート（以下、■−ＰＥＣ３
Ｉと略す）ａ １３１　　Ｎ−ＣＮ’−Ｒ−（ト）−１−（α−ナフチ
ル）エチルカルバモイル〕サクシンイミデート（以下、
（Ｒ）　−ＮＥＣ８Ｉと略す）。

１４１　　Ｎ−（Ｎ’−８−（−）−１−（α−ナフチ
ル）エチルカルバモイル〕サクシンイミデート（以下、
（Ｓ）　−ＮＥＣ８Ｉと略す）。

本発明による一般式（Ｉ）の化合物は通常の反応条件で
は水酸基やチオール基とは反応しないからアミノ基との
反応の選択性がよく、式（Ｉ）の化合物自身も安定が良
いため、検出すべきアミノ基含有化合物を含む分析試料
が水またはアルコールを含むものＫも適用可能である利
点がある。

一般式（Ｉ）の本発明化合物と第１アミン又は第２アミ
ンとの反応（標識化すなわちラベル化反応）は次の反応
式の如く進む＠ ネ 但し、上記の式中でＡ及びＢは有機基である。

一般式（１）の本発明化合物を７ミノ基標識試薬としで
あるいはキラル誘導体化試薬として使用する場合には、
該化合物（りをアセトニトリルにとかしてアセトニトリ
ル溶液とし、これと、標識すべきアミノ基含有化合物又
は各種アミン基含有化合物の混合物を含む水又は含水有
機溶媒溶液及び０．３Ｍホウ酸緩衝液を混和し、標識化
（ラベル化）反応を行わせる。その後に、その混和液の
一部を直接に高速液体クロマドグ２フイ（ＨＰＬＣ）装
置に注入する。

該アミノ基含有化合物に対するサクシンイミデート化合
物ＣＩ）の反応は室温で５分間程度で完了する。こうし
て生成するキラルな尿素誘導体は、光に対するモル吸収
係数が比較的大きい（２２０〜２７０　ｎｍ波長の光で
ｌｏｇ　ｇ）ａ　）ので、元のアミノ基含有化合物の濃
度に換算して１ｍｇ当りナノモル（１０モル）程度まで
の濃度で存在しても、ＨＰＬＣで光の吸収ビークにより
分光分析法で検出が可能である。

さらに１一般式（Ｄの本発明化合物のうち、（Ｒ）　−
ＮＥＣ８Ｉ及び（Ｓ）　−ＮＥｃｓｘを用いた場合には
、ラベル化された尿素誘導体の螢光分析による検出も可
能であり、励起波長２７０ｎｍ　及び螢光波長３４０　
ｎｍ　で測定するとき、ラベル化された尿素誘導体はぎ
コモル（１０モル）程度までの濃度でも検出できる・ なお、一般式（Ｉ）の本発明化合物の製造は、ノサクシ
ンイミジル・カーボネート（ＤＳＣ）をＲ−（ト）−１
−フェニルエチルアミン、　　５−（−）−１−フェニ
ルエチルアミン、Ｒ−（ト）−（α−ナフチル）エチル
アミン又はＳ　−（−）　−１−（α−ナフチル）エチ
ルアミンをアセトニトリル中で室温で反応させることに
よって、本発明化合物（Ｉ）である（Ｒ）−ｐｇｃｓ工
、　　（Ｓ）　−ＰＥＣ８１，（Ｒ）　−ＮＥＣ８Ｉ又
は（Ｓ）−ＮＥＣ８１を夫々に生成させて行ない得る。

（発明の効果） 一般式（Ｉ）の本発明化合物は、アミノ基標識試薬とし
て、またキラル誘導体化試薬として、利用でき、水系溶
媒中でラベル化反応が可能であり、ＨＰＬＣＫ、よる光
学分割法で利用することＫより、容易に光学異性体の分
離を行なうことができる。

以下、本発明化合物（Ｉ）の製造例を実施例として示す
。

実施例Ｉ Ｎ−［：Ｎ’−Ｒ−（ホ）−１−フェニルエチルカル／
ぐモイル〕サクシンイミデートの製造・ ゾサクシンイミノルカルボネート（ＤＳＣ）５．１２９
　（０，０２モル）を２００−のアセトニトリルに溶解
し、攪拌下に５０−のアセトニトリルに溶解させたＲ−
（→−フェニルエチルアミン１．２１９　（０，０１モ
ル）の溶液を滴下ロートで８〜１０時間室温あるいはや
や加温下調下した。更に２４時間攪拌後、反応液を減圧
下に濃縮し、クロロホルム（酢酸エチルエステルでもよ
い）を加え、ｌＮ−１（Ｃ１，水、４チ重炭酸ナトリク
ム水溶液、飽和食塩水で次々洗浄した。洗浄中、未反応
のＤａＣの結晶が析出した場合はｒ過で除き、そのｒ液
について洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥
し濃縮すると、表題化合物の結晶が得られた。エーテル
−アセトンより再結晶して収１１．５５．９（５９，２
嚢）で表題の目的化合物が得られた・融点　＋５３−１
５５°Ｃ ＫＢｒ　　　　−１。

ＩＲ，Ｕ　　　　（ｆｆｉ　　）　、　３３５０　（Ｎ
Ｈ）　ＩＩ！００．　１７８０（イｍ＆Ｘ ミド）＋７４０（ウレタン） 元素分析値（Ｃ１３Ｈ１４Ｎ２０４として）：理論値、
　　Ｃ５９，５４，１−１５，３８，Ｎ　１０．６８　
％測定値、　　Ｃ５９，６０，Ｈ５，４＋、　Ｎ　１０
．７０係実施例２ Ｎ　−（Ｎ’−８−（−）−１−フェニルエチルカルバ
モイル〕サクシンイミデートの製造。

ＤＳＣの５．＋　２ｇ　＜　０．０２モル）と８−（−
１１−フェニルエチルアミンの１．２１．９　（０，０
１モル）を実施例１と同様な方法でアセトニトリル中で
反応させて表題化合物を得た。収ｉ　１．６２．９　（
６１，８融点　１５４〜１５５°Ｃ ＩＲ：　　ｖＫＢ”　　（ｃｍ−’）：　　３３５０　
　（Ｎ）ｌ）　　１８００．１７８０　（４ｍ＆Ｘ ミ　ド）１７４０（ウレタン） 元素分析値（Ｃ１５Ｈ１４Ｎ２０４　として）三理論値
、　　Ｃ５９，５４，Ｈ５，３ｇ、　Ｎ　ＩＯ，，６８
＊測定値、　　Ｃ５９，ＳＬ　）ｌ　５．４２．Ｎ　　
１０．７３　％実施例３ Ｎ−（Ｎ’−Ｒ−（→−１−（α−ナフチル）エチルカ
ルバモイル〕サクシンイミテートの製造。

ＤＥＣの５．１２ｇ（０，０２モル）とＲ−（イ）−１
−（α−ナフチル）エチルアミンの１．７１Ｎ（０，０
１モル）を実施例１と同様な方法で反応させて表題化合
物を得た・ 融点　１８１〜１８２°Ｃ ＩＲ，ｖＫＢ”　（３−’）：　　３３００　（Ｎｕ）
１７８０　Ｃイミｌ’）ａｘ ＋７３０　（ウレタン） 元素分析値（Ｃ１７Ｈ１６Ｎ２０４として）：理論値、
　　Ｃ６５，３Ｌ　Ｈ５，＋６．　Ｎ　Ｃ９７チ測定値
、　　Ｃ６５，５０，Ｈ５，１５，Ｎ　９．００チ実施
例４ Ｎ−ＣＮ’−８−（−）−１−（α−ナフチル）エチル
カルバモイル〕サクシンイミデートの製造・ ＤＥＣ５，Ｉ２．９（０，０２モル）と８−（う−（α
−ナフチル）エチルアミン１．７１１Ｉ（０，０１モル
）を実施例１と同様な方法で反応させて表題化合物を得
た。

融点　１８０〜１８２°Ｃ ＩＲ，ｕＫＢｒ（３−’）：　　３３１０　　（Ｎｕ）
１７９０　　（（ミＰ）ａｘ ｌフコ０（ウレタン） 元素分析値（Ｃ１，Ｈ１６Ｎ２０４として）：理論値、
　　Ｃ６５，３Ｂ、　Ｈ５，１６，Ｎ　Ｃ９７１測定値
、　　Ｃ６５，４３，Ｈ５，１０，Ｎ　８．９＋　−次
に本発明化合物の応用例な試験例で示す。

試験例１ 本例は、アζノ酸の一種であるアラニン（Ｄ体。

Ｌ体温合物）を本発明の（ｓ）　−ＰＥＣ３Ｉと反応さ
せてラベル化し且つＨＰＬＣで光学分割する試験を示す
。

アラニン（Ｄ、Ｌ体）の０．ＩＮ塩酸溶液（０，！ｗＩ
／−）の、２０　μＬ　にｏ、３ＭＭホウ酸緩衝液　ｐ
Ｈり、ｊ　）のＪ　０１ｔｔ　及びｊ　ｍＭ　（Ｓ）−
ＰＥＣ８Ｉのアセトニトリル溶液の３Ｑμｔを加え５分
間反応させた。その後、さらに過剰試薬を除去する目的
でよＯｍＭ　タフリンの２０μｔを加え１分間反応させ
た。その反応液の１０μｔ　をＨＰＬＣに注入した。

溶出は０．１％リン酸溶液／メタノール（Δｌ：３ｊ）
、流速１２４７分で行ない２２０　ｎｍで検出した。Ｈ
ＰＬＣ装置としては、４ンゾＬＣ−Ｊ　Ａ（島津製作所
）、バルブインジェクター（サヌキ工業）、カラＡ　Ｄ
ｅｖｅｌｏｓｉｌ　ＯＤＳ　　−７（野村化学。

１００×６．０　　内径■）、検出器ＥＲＣ−１７１０
紫外部モニター（エルマ光学）、を用い、カラムは室温
で操作した。この）ＩＰ　ＬＣクロマトグラムを見るに
、Ｄ−アラニ／と（８）−ＰＥＣ８Ｉとの反応で生成し
たＤ−７２二ン誘導体が先づ溶出し、次いでＬ−アラニ
ンと（Ｓ）−ＰＥＣ８Ｉとの反応で生成したＬ−アラニ
ン誘導体が溶出して、クロマトグラムに表わさｎた夫々
の吸収ピークは明確に分離した吸収曲線上に現われた。

試験例コ （Ｓ）−ＰＥＣ８Ｉに代えて（ＦＬ）　−ＮＥＣ８Ｉ　
ｔ−用いて試験例１と同様に試験したが、溶出はｏ、ｉ
％リン酸／メタノール（／：／）で行い、また検出はＪ
　７０　ｒｌｍで行った。先づＬ−アラニン誘導体が溶
出し、次ＫＤ−アラニン誘導体が溶出し、クロマトグラ
ムＩｃは、相互に分離した分光吸収曲線が表わされた。

試験例３ 上記の試験例１と同様に、但し、アラニンに代えて、β
−アミノアルコール類の一種であるイソプロテレノール
（１ｓｏｐｒｏｔｅｒｅｎｏｌ　）　を用いて試験した
。すなわち、イソプロテレノールの０．Ｉ　Ｎ塩酸溶液
（ｏ、ｚ■／―）のλＯμｔに０．３　Ｍホウ酸緩衝液
（ｐＨり、ｊ　　）の３０μを及びｊ　ｍＭの（ｉｔ）
−Ｎｇｃｓｒのアセトニトリル溶液の３０μｔを加え１
分間反応させた後、さらに３０ｍＭタウリン２０μｔを
加え１分間反応させ、その１０μｍ１ＨＰＬＣに注入し
た。溶出は０．Ｉ　Ｘ　ＩＪン酸溶液／メタノール（／
：／）、流速／−／分で行ない、検出は２７０ｎｍで行
なった。

（ＦＬ）−ＮＥＣ８Ｉと反応した（→−インプロテレノ
ール誘導体が先づ溶出し、次いで、これと明確に分かれ
た分画として、（Ｒ）−ＮＥＣ８Ｉと反応した（→−イ
ンプロテレノール誘導体が溶出されたことがＨＰＬＣク
ロマトダラムで認められた。

（１’Ｌ）−ＮＥＣ８Ｉに代えて（８）　−ＰＥＣａ　
Ｉ　　を用いイソプロテレノールに反応させて同様に試
験すると、先づ←）イソゾロテレノール誘導体が溶出し
、次いで←）−インプロテレノール誘導体が溶出した。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、次式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ I ） （式中、Ｒはフエニル基またはα−ナフチル基を示す）
   で示される化合物。 ２、式中の＊印を付されたメチン炭素がＲ配置であり光
   学活性を示す特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ３、式中の＊印を付されたメチン炭素がＳ配置であり光
   学活性である特許請求の範囲第１項記載の化合物。