JPS6181792A - 水痘−帯状疱疹ウイルスに対するワクチン - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 水痘は、ヘルペスウィルス群の一員でろろ水痘−帯状疱
疹ウィルス（ＶＺＶ）により起る。この病気は、前取て
ＶＺＶにだいする免疫をもたない人に生ずる。ＶＺＶ−
特異的抗体は、発病の直後に認められ、回復期に減少す
るが、多数年検出可能でアリ続け、この病気にだいする
免疫に関連している。水痘は非常に伝染性が高い；人口
の９０％以上が最初の２０年の間にＶｚＶにさらされる
。この病気は、免疫抑制のある人や、２０才を越えた人
には発症性が高い。全ての例ではないにしても、大部分
の例で、ｖｚｖはを髄神経後根の神経節細胞中に潜伏す
る。この潜伏状態から、恐らくは低下した細胞性免疫の
結果として、特異抗体の存在下でもＶＺＶは再活性化し
、帯状疱疹を起す。

ＶｚＶは、その表層に６種の主要塘たんば（ｇｐ１０５
．ｇｐ９２．ｇｐ８３＋ｇｐ６２　　、　ｇｐ５７　　
。

ｇｐ　５５を有する。これら糖たんぱくは明らかに３種
の遺伝子ｇＡ（ｇｐ１０５）　、　ｇＢ（ｇｐ６２．ｇ
ｐ５７）お工びｇＣ（ｇｐ９２　、　ｇｐ８３　、　ｇ
ｐ５５　）の産物である。

ｇＡおよびｇＢにたいするいくつかの単クロ−ン性抗体
は補体非依存性の中和活性を示し、ｇＣにたいする単ク
ローン性抗体は補体依存性の中和活性を示す。

ＶＺＶ感染に伴なう病気を防ぐ抗原を供給することが、
本発明の一つの目的である。他の目的は、ｖＺｖ抗体価
を測定する診断用に利用し得る抗原を供給することであ
る。さらに他の目的は、これらの抗原の調製法を供給す
ることである。さらに他の目的は、生体内および生体外
の両方でこの抗原を用いてＶＺＶにだいする抗体を生成
させる方法を提供することである。さらに他の目的は、
他の手段で合成されたり、他のベクター中で発現された
りするペプチド抗原を含むたんばく抗原の全配列を記載
することである。本発明のこれらならびに池の目的は以
下の記載により明らかになろう。

ｖ　ｚ　ｖ　ｇＣ遺伝子のＤＮＡ配列が同定された。宿
主生物中にあると、回復期の帯状疱疹血清およびｇＣに
たいする中和単クローン性抗体と反応するたんばくを発
現するＤＮＡ断片が、ベクター中にクローン化された。

これらたんばくは、Ｖｚｖにたいするワクチンの調製に
有用である。

本発明は、防御効果のある抗原側たんばくｇｐ９２．ｇ
ｐ８３　　お工びｇｐ　５５をコードするＶＺＶＤＮＡ
の同定を対象としている。より特定すれば、その各々の
ヌクレオチド配列およびアミノ酸配列が既知全ＶＺＶゲ
ノム内に位置づけされている２、　Ｏｋｂｐ　Ｄ　Ｎ　
ＡＶｆＴ片および０．９ｋｂｐＤＮＡ断片を対象として
いる。

本発明はまた、これら２．０および０．９　ｋｂｐＤＮ
Ａ断片の全てまたは一部を含むベクターも対象としてい
る。本発明はまた、これらベクターを保持する宿主細胞
で、この２．０および０．９　ｋｂｐ断片によりコード
されるペプチドの全てまたは一部を発現し得る細胞をも
対象としている。既知の技法によって、その分野の技術
者にとっては、前出のペプチドを化学的に合成するか、
修飾し、その免疫原性を保つことができることは明白で
あろう。それ故に、本発明はまた、これらたんぱくのド
メイン、特に周辺の親水性領域およびスレオニンまたは
せリンおよびアスパラギン−Ｘ−セリンまたはアスパラ
ギン−Ｘ−スレオニン残基（Ｘはどのアミノ酸でもよい
）を含むドメインの化学合成をも対象としている。これ
らドメインはウィルスの外側表層上に存在する可能性が
高いからである。

ＶＺＶを生産している細胞からＲＮＡが単離された。こ
れらＲＮＡはＨｉ　ｎｄ　ＩＩＩ　−Ｃ、Ｅｃ。

ＲＩ−Ａ、またはＥｃｏＲＩ−Ｅ　Ｄ　Ｎ　Ａ断片との
ハイブリダイゼーションにより前身て選択され、生体外
で翻訳された。ポリペプチド産物は、ｇＣポリペプチド
にだいする特異的な単クローン性抗体により免疫沈降さ
れた。これらＤＮＡ断片は、ｇｐ９２．ｇｐ８３お工び
ｇｐｓｓｇＣ中和抗原の７０　ｋｄ前、枢体に翻訳する
ＲＮＡを選択する。

ｇＣポリペプチドに翻訳可能なＲＮＡをコードするＤＮ
Ａ区分は以下のようにして明確に同定された。ＶＺｖＤ
ＮＡは非特異的に消化され、０．３−１．５　ｋｂｐ断
片がｐＯＲＦ２発現ベクター中に挿入された。その組み
換えプラスミドにより形質転換された細菌は、単クロ、
−ン性抗体によりｇＣ抗原の生産に関して検索された。

ｇＣ抗原を発現している大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ　）　
　より得たプラスミドＤＮＡは、　　゛ｖｚｖゲノムＤ
ＮＡの制限断片とハイブリダイズされ、ホモロジー（相
同性ｈｏｍｏｌｏｇｙ　）がＨｉｎｄ［［Ｔ−Ｃ断片中
に同足された。発現プラスミド内のＶＺＶＤＮＡのＤＮ
Ａ配列解析は、ＤＮＡ配列の知られているＨｉｎｄｌ［
−Ｃ所片内の０．９　ｋｂｐ区分と同一であることを示
した。

この０．９１ｃｂｐ区分は単一の長い２．０ｋｂｐのオ
ープンリーディング・フレーム（連続したアミノ酸に対
応する読み取り枠ｏｐｅｎ　ｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅ
　）の一部であり、そのＤＮＡ配列は知られており、７
０ｋｄの免疫原たんばくをコードする。

その０．９　ｋｂｐ　Ｄ　Ｎ　Ａ区分に由来するＶＺＶ
ｇＣ配列を含む雑種たんばくは血清学的な反応性につい
て特性づけされた。試験された１１種の回復期帯状疱疹
血清中８種ならびにＶＺＶｇＣにたいする８棟の中和単
りローン性抗体中７種と反応することが見出された。そ
れ故、このポリペプチド区分は中和エピトープ（抗原性
決定基ｅｐｉｔｏｐｅ　）ならびにｇＣポリペプチドに
伴なわれる抗原性の大部分を担っている。

ＶＺＶたんぱくの発現に適する宿主は、大腸菌（Ｅ、　
ｃｏｌｉ　）および枯草菌（Ｂ、　５ａｂｔｉｌｉｓ）
のような原核生物、およびＳ、セレビシェ（Ｓ、　ｃｅ
ｒｅｖｉｓｉａｅ　）　　およびチャイニーズ・バー　
ムスター卵巣細胞およびＷＩ−３８およヒＭＲＣ−５細
胞のような２倍体捕乳動物繊維芽細胞を含む継続的な哺
乳動物細胞系のような真核生物を包含する。

これらたんばくは、感受性補乳動物種個体に１投与量あ
たり約１０から５００μｍ好ましくは、■投与量あたり
約５０から２５０μ？量を投与された際、単独または例
えば、生理貧塩水または燐酸緩１匍化生理食塩水などの
生理的に受容可能な担体中におかれたときに併用で有用
である。ＶＺＶ病にだいする有効な防御を生ずるには１
またはそれ以上の投与が成され得る。このたんばくは、
注射、例えば皮下または筋肉内に投与される。これらた
んばくは、アデノ、ワクチニア、ヘルペス・シンプレッ
クス（単純疱疹）のような適当なウィルス発現ベクター
を用いることによりヒトの中で直接発現され得ることも
理解されるべきである。

以下の例示は本発明を説明する。しかしながら、それだ
けに限定するものではない。以下の例示中に指摘されて
いる各参考文献の開示は、ここに参考として取り入れら
れている。

実施例１ ｇＣ砧たんぱくの前世たんばくをコードする細胞質ポリ
アデニル化ＲＮＡは、ＶＺＶ−感染ＭＲＣ−５細胞から
記載された（生化学（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　）　
１８巻：　５２９４−５２９９頁、１９７９年）ように
調製された。Ｖ　Ｚ　ＶＤＮＡＨｉｎｄｌｌＴ−Ｃ＋　
ＥｃｏＲＩ−ＡおよびＥｃｏＲＩ　Ｅ断片によりコード
されたＲＮＡはニトロセルロースに結合した（ウィルス
学雑誌（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌｏｇｙ）３７＠：２８４−２
９４頁、１９８１年）クローン化したＶＺＶＤＮＡ　（
科学アカデミ−紀要（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａ
ｄ、　ＳＣ４，７９巻、１５６−１６０頁、１９８２年
）とのハイブリダイゼーション（雑種形成ｈｙｂｒｉｄ
ｉｚａｔｉｏｎ　）により選択された。これらＲＮＡは
家兎網状赤血球破砕液中で、以前に記載された（ヨーロ
ッパ生化学雑誌（Ｅｕｒ、　Ｊ、　Ｂｉｏｃｈｃｍ　）
　６７巻：２４７−２５４頁、１９７６年）ように翻訳
された。ポリペプチドは、ＶＺＶｇＣに特異的な中和単
クローン性抗体（ウィルス学雑誌（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌｏ
ｇｙ　）印刷中、１９８４年）および回復期帯状疱疹血
清で、以前に記載された（ウィルス学雑誌（Ｊ、　Ｖｉ
ｒｏｌｏｇｙ　）印刷中、１９８４年）ように免疫沈降
された。これらＤＮＡ断片は７０ｋｄｇＣ前駆体に翻訳
するＲＮＡを選択する（ウィルス学（Ｖｉ　ｒｏ　ｌｏ
ｇｙ　）１２９巻：３５７−３６８頁、１９８３年）。

実施例２ ＶＺＶＤＮＡクローンのライブラリー（科学アカデミ−
紀要（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、
　）７９巻：１５６−１６０頁、１９８２年）が、０、
１−２．５　ｋｂｐの大きさの範囲にあるＤＮＡを生成
させるためにＭｎ”＋の存在下で非特異的にＤ　Ｎ　ａ
ｓｅ　Ｉで消化された（核酸研究（Ｎｕｃｌ−ｅｉｃ　
Ａｃ１ｄｓ　Ｒｅ５ｅａｒｃｈ　）　９巻：　３０１５
−３０２７頁、１９８１年）っこれを集めたものから、
０、３−１．５　ｋｂｐの大きさのＤＮＡが精製され、
平滑末端化され、ｐＯＲＦ２発現ベクター（科学アカデ
ミ−紀要（Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃ
ｉ。

８０巻：　４４３２−４４３６、ｌ　９８：３年）のＳ
ｍａ　１部位にクローン化された。その組み換えプラス
ミドは、大腸菌（Ｅ、　ｃｏｌｉ　）　　Ｔ　Ｋ１０４
６（１０４８）中に導入された。ＶＺＶポリペプチドを
含む雑種たんばくを発現しているａ菌集落が選択され、
そしてそのような集落はｖ　ｚ　ｖ　ｇＣ抗原の発現に
関して単クローン性抗体により検索された。ｖ　ｚ　ｖ
　ｇＣ雑種たんばくを発現している集落が単離された。

そのＶＺＶ抗原はｇＣにだいする単りローン性抗体８種
中７棟および回復期帯状疱疹血清１１棟中８種により認
識された。この集落からのプラスミドＤＮＡが単離され
、ｖＺｖゲノムＤＮＡの制限酵素消化物とハイブリダイ
スされた（分子生物学雑誌（Ｊ、　Ｍｏ１．　Ｂｉｐｌ
。

９８巻二５０３−５２１頁、１９７５年）。

この方法により、細菌プラスミド中の■ｚｖ挿入物がＨ
４ｎｄｌＦ［−ＣＤ　Ｎ　Ａクローン中の０．９ｋｂｐ
　Ｄ　Ｎ　Ａ配列と相同であることが示された。

このＨ４ｎｄ［−ＣＤ　Ｎ　Ａ区分は、それ故、ｇＣ］
？工伝子の一部と同定された。

実施列３ ＶＺＶＤＮＡの０．９および２．０　ｋｂｐ区分のヌク
Ｖ　Ｚ　Ｖ　ＨｉｎｄｌＩＩ−ＣＤ　Ｎ　Ａ区分は数個
の大きなオープン・リーディング・フレーム（ｏｐｅｎ
ｒｅａｄｉｎｇ　ｆｒａｍｅ　）を含む（ＥＭＢＯ雑誌
（ＥＭＢＯＪｏｕｒｎａｌ　）　２巻：　２２０３−２
２０９．１９８３年）。

これらオープン・リーディング・フレームの一つは長さ
２．０’ｋｂｐで、７０　ｋｄたんばくをコードし、Ｖ
ＺｖｇＣ抗原をコードする実施例２に記載されている０
、９ｋｂｐをその中に含む。

Ａ、　　ｇＣ糖たんぱくをコードする全２．０ｋｂｐ区
分のヌクレオチド配列が以下に与えられＡＧＡ　ＧＣＡ
　ＧＴＣＣＡＴ　ＧＧＴ　ＴＴＴ　ＡＧＡ　ＣＣＴ　Ｃ
ＧＧ　ＧＣＧ　ＡＡＴ　ＴＧＣＧＴＧＧＴＴ　　ＴＴＡ
　　ＡＧＴ　　ＧＡＣＴＡＴ　　ＡＴＴ　　ＣＣＧ　　
ＡＧＧ　　ＧＴＣＧＣＣＴＧＴ　　ＡＡＴ　　ＡＴＧＧ
ＧＧ　ＡＣＡ　ＧＴＴ　ＡＡＴ　ＭＡ　ＣＣＴ　ＧＴＧ
　ＧＴＧ　ＧＧＧ　ＧＴＡ　ＴＴＧ　ＡＴＧ　ＧＧＧＴ
ＴＣＧＧＡ　ＡＴＴ　ＡＴＣＡＣＧ　ＧＧＡ　ＡＣＧ　
ＴＴＧ　ＣＧＴ　ＡＴＡ　ＡＣＧ　ＡＡＴ　ＣＣＧＧＴ
ＣＡＧＡ　ＧＣＡ　ＴＣＣＧＴＣＴＴＧ　ＣＧＡ　ＴＡ
ＣＧＡＴ　ＧＡＴ　ＴＴＴ　ＣＡＣＡＣＣＧＡＴ　ＧＡ
Ａ　ＧＡＣＡＡＡ　ＣＴＧ　ＧＡＴ　ＡＣＡ　ＡＡＣＴ
ＣＣＧＴＡ　ＴＡＴ　ＧＡＧ　ＣＣＴＴＡＣＴＡＣＣＡ
Ｔ　ＴＣＡ　ＧＡＴ　ＣＡＴ　ＧＣＧ　ＧＡＧ　ＴＣＴ
　ＴＣＡ　ＴＧＧ　ＧＴＡ　ＡＡＴＣＧＧ　ＧＧＡ　Ｇ
ＡＧ　ＴＣＴ　ＴＣＧ　ＣＧＡ　ＡＡＡ　ＧＣＧ　ＴＡ
ＣＧＡＴ　ＣＡＴ　ＡＡＣＴＣＡＣＣＴ　　ＴＡＴ　　
ＡＴＡ　　ＴＧＧ　　ＣＣＡ　　ＣＧＴ　　ＡＡＴ　　
ＧＡＴ　　ＴＡＴ　　ＧＡＴ　　ＧＧＡ　　ＴＴＴ　　
ＴＴＡＧＡＧ　ＡＡＣＧＣＡ　ＣＡＣＧＡＡ　ＣＡＣＣ
ＡＴ　ＧＧＧ　ＧＴＧ　ＴＡＴ　ＡＡＴ　ＣＡＧ　ＧＧ
ＣＣＧＴ　ＧＧＴ　ＡＴＣＧＡＴ　ＡＧＣＧＧＧ　　Ｇ
ＡＡ　ＣＧＧ　ＴＴＡ　ＡＴＧ　ＣＡＡ　ＣＣＣＡＣＡ
ＣＡＡ　　ＡＴＧ　ＴＣＴ　ＧＣＡ　ＣＡＧ　ＧＡＧ　
ＧＡＴ　ＣＴＴ　ＧＧＧ　ＧＡＣＧＡＴ　ＡＣＧ　ＧＧ
ＣＡＴＣＣＡＣＧＴＴ　ＡＴＣＣＣＴ　ＡＣＧ　ＴＴＡ
　ＡＡＣＧＧＣＧＡＴ　ＧＡＣＡＧＡ　ＣＡＴＡＡＡ　
ＡＴＴ　ＧＴＡ　ＡＡＴ　ＧＴＧ　ＧＡＣＣＡＡ　ＣＧ
Ｔ　ＣＡＡ　ＴＡＣＧＧＴ　ＧＡＣＧＴＧＴＴＴ　　Ａ
ＡＡ　　ＧＧＡ　　ＧＡＴ　　ＣＴＴ　　ＡＡＴ　　Ｃ
ＣＡ　　ＡＡＡ　　ＣＣＣＣＡＡ　　ＧＧＣＣＡＡ　Ａ
ＧＡＣＴＣＡＴＴ　ＧＡＧ　ＧＴＧ　ＴＣＡ　ＧＴＧ　
　ＧＡＡ　ＧＡＡ　ＡＡＴ　ＣＡＣＣＣＧ　ＴＴＴ　Ａ
ＣＴＴＴＡ　ＣＧＣＧＣＡ　ＣＣＧ　ＡＴＴ　ＣＡＧ　
ＣＧＧ　ＡＴＴ　ＴＡＴ　ＧＧＡ　ＧＴＣＣＧＧ　ＴＡ
ＣＡＣＣＧＡＧ　ＡＣＴ　ＴＧＧ　ＡＧＣＴＴＴ　ＴＴ
Ｇ　ＣＣＧ　ＴＣＡ　ＴＴＡ　ＡＣＣＴＧＴ　ＡＣＧＧ
ＧＡ　　ＧＡＣＧＣＡ　ＧＣＧ　ＣＣＣＧＣＣＡＴＣＣ
ＡＧ　ＣＡＴ　ＡＴＡ　ＴＧＴ　ＴＴＡ　ＡＡＡＣＡＴ
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Ｇ　ＧＴＧ　ＧＴＧ　ＧＡＴ’　ＧＴ’Ｇ　ＧＡＴＴＧ
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　　ＧＡＴ　　ＧＡＡ　　ＣＴＣＧＡＡ　ＴＴＡ　ＧＡ
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Ｇ　　ＴＣＴ　　ＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡＣＧ　ＴＴＴ　
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ＡＴ　ＧＴＡ　ＴＴＴ　ＴＣＡＧＴＴ　　ＧＧＴ’　　
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ＡＧ　　ＴＧＧＴＴＧ　ＴＡＴ　ＧＴＣＣＣＣＡＴＣＧ
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ＧＴＴ　ＧＣＡ　ＡＧＣＡＣＡ　ＧＴＧ　ＴＡＴ　ＣＡ
ＡＡＡＴ　ＴＧＴ　ＧＡＡ　ＣＡＴ　ＧＣＡ　ＧＡＴ　
ＡＡＣＴＡＣＡＣＣＧＣＡ　ＴＡＴ　ＴＧＴ　ＣＴＧＧ
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Ｔ　ＡＧＣＴＴＴ　ＧＧＴ　ＣＴＡ　ＡＴＣＴＴＡＣＡ
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　ＴＴＴ　ＧＴＡ　ＧＡＴ　ＡＣＡ　ＣＣ’ＣＧＡＧ　
　ＡＧＴ　　ＴＴＧ　　ＴＣＧ　ＧＧＡ　　ＴＴＡ　　
ＴＡＣＧＴＴ　ＴＴＴ　ＧＴＧ　ＧＴＧ　　ＴＡＴ　Ｔ
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ＴＡ　ＧＣＡ　ＴＡＣＡＣＴ　ＧＴＴ　ＧＴＡ　ＴＣＣ
ＡＣＡ　ＧＴＡ　ＧＡＴ　ＣＡＴ　ＴＴＴ　ＧＴＡ　Ａ
ＡＣＧＣＡ　ＡＴＴ　ＧＡＡ　ＧＡＧ　ＣＧＴ　ＧＧＡ
ＴＴＴ　ＣＣＧ　ＣＣＡ　ＡＣＧ　ＧＣＣＧＧＴ　ＣＡ
Ｇ　ＣＣＡ　ＣＣＧ　ＧＣＧ　ＡＣＴ　ＡＣＴ　ＡＡＡ
ＣＣＣＡＡＧ　ＧＡＡ　ＡＴＴ　ＡＣＣＣＣＣＧＴＡ　
ＡＡＣＣＣＣＧＧＡ　ＡＣＧ　ＴＣＡ　ＣＣＡＣＴＴ　
ＣＴＡ　ＣＧＡ　ＴＡＴ　ＧＣＣＧＣＡ　ＴＧＧ　ＡＣ
ＣＧＧＡ　ＧＧＧ　ＣＴＴ　ＧＣＡ　ＧＣＡＧＴＡ　　
ＧＴＡ　　ＣＴＴ　　ＴＴＡ　　ＴＧＴ　　ＣＴＣＧＴ
Ａ　　ＡＴＡ　　ＴＴＴ　　ＴＴＡ　　ＡＴＣＴ’ＧＴ
　　ＡＣＧＧＣＴ　ＡＡＡ　ＣＧＡ　ＡＴＧ　ＡＧＧ　
ＧＴＴ　ＡＡＡ　ＧＣＣＴＡＴ　ＡＧＧ　ＧＴＡ　ＧＡ
ＣＡＡＧＴＣＣＣＣＧ　ＴＡＴ　ＡＡＣＣＡＡ　ＡＧＣ
ＡＴＧ　ＴＡＴ　ＴＡＣＧＣＴ　ＧＧＣＣＴＴ　ＣＣＡ
ＧＴＧ　　ＧＡＣＧＡＴ　　ＴＴＣＧＡＧ　　ＧＡＣＴ
ＣＧ　　ＧＡＡ　　ＴＣＴ　　ＡＣＧ　　ＧＡＴ　　Ａ
ＣＧ　　ＧＡ八へＡＡ　　ＧＡＧ　　ＴＴＴ　　ＧＧＴ
　　ＡＡＣＧＣＧ　　ＡＴＴ　　ＧＧＡ　　ＧＧＧ　　
ＡＧＴ　　ＣＡＣＧＧＧ　　ＧＧＴＴＣＧ　　ＡＧＴ　
ＴＡＣＡＣＧ　ＧＴＧ　ＴＡＴ　Ａ’Ｉ’Ａ　ＧＡＴ　
ＡＡＧ　ＡＣＣＣＧＧ　ＴＧＡ上述のヌクレオチド配列
は以下のアミノ酸配列をコードする： ＭＦＹＥＡＬＫＡＥＬ ＶＹＴＲＡＶＨＧＦＲ ＰＲＡＮＣＶＶＬＳＤ Ｙ　　　　Ｉ　　　　Ｐ　　　　ＲＶ　　　　Ａ　　　
　ＣＮ　　　　Ｍ　　　　ＧＴＶＮＫＰＶＶＧＶＬ Ｍ　　　　Ｇ　　　　Ｆ　　　　Ｇ　　　　Ｘ　　　　
Ｉ　　　　Ｔ　　　　Ｇ−Ｔ　　　　ＬＲｒＴＮＰＶＲ
ＡＳＶ ＬＲＹＤＤＦＨＴＤＥ ＤＫＬＤＴＮＳＶＹＥ ＰＹＹＨ５ＤＪ（ＡＥＳ ＳＷＶＮＲＧＥＳＳＲ ＫＡＹＤＨＮＳＰＹＩ ＷＰＲＮＤＹＤＧＦ［。

ＥＮＡＨＥＨＨＧＶＹ ＮＱＧＲＧＩＤＳＧＥ ＲＬＭＱＰＴＱＭＳＡ ０ＥＤＬＧＤＤＴＧｒ ＨＶＩ　　　　ＰＴＬＮＧＤＤ ＲＨＫＩＶＮＶＤＱＲ ＱＹＧＤＶＦＫＧＤＬ ＮＰＫＰＱＧＱＲＬＩ ＥＶＳＶＥＥＮＨＰＦ ＴＬＲＡＰ　　　　ＩＱＲｒＹ ＧＶＲＹＴＥＴＷＳＦ ＬＰＳＬＴＣＴＧＤＡ ＡＰ　　　　　八　　　　　ＩＱＨ工　　　　ＣＬＫＨ
ＴＴＣＦＱＤＶＶＶ ＤＶＤＣＡＥＮＴＫＥ ＤＱＬＡＥＩＳＹＲＦ ＱＧＫＫＥＡＤＱＰＷ ＩＶＶＮＴＳＴｒ、ＦＤ ＥＬＥＬＤＰＰＥＩＥ ＰＧＶＬＫＶＬＲＴＥ ＫＱＹＬＧＶＹＩＷＮ ＭＲＧＳＤＧＴＳＴＹ ＡＴＦｆ、ＶＴＷＫＧＤ ＥＫＴＲＮＰＴＰＡＶ ＴＰＱＰＲＧＡＥＰＨ ＭＷＮＹＨ５ＨＶＦＳ ＶＧＤＴＦＳＬＡＭＨ ＬＱＹＫＩＨＥＡＰＰ ＤＬＬＬＥＷＬＹＶＰ ｒＤＰＴｃＱＰＭＲＬ ＹＳＴＣＬＹＨＰＮＡ ＰＱＣＬＳＨＭＮＳＧ ＣＴＦＴＳＰＨＬＡＱ ＲＶＡＳＴＶＹＱＮＣ ＥＨＡＤＮＹＴＡＹＣ ＬＧＩＳＨＭＥＰＳＦ ＧＬＩＬＨＤＧＧＴＴ ＬＫＦＶＤＴＰＥＳＬ ＳＧ（、ＹＶＦＶＶＹＦ ＮＧＨＶＥＡＶＡＹＴ’ ＶＶＳＴＶＤＨＦＶＮ ＡＩＥＥＲＧＦＰＰＴ Ａ　　　　　Ｇ　　　　　Ｑ　　　　　Ｐ　　　　　Ｐ
、　　　　　Ａ　　　　　Ｔ　　　　　Ｔ　　　　　Ｋ
　　　　　　ＰＫＥＩＴＰＶＮＰＧ’Ｔ ＳＰｆ、ＬＲＹＡＡＷＴ ＧＧＬＡＡＶＶ［、Ｌ　　　Ｃ ［、ＶｒＦＬＺＣＴＡＫ ＲＭＲＶＫＡＹＲＶＤ ＫＳＰＹＮＱＳＭＹＹ ＡＧｒ、ＰＶＤＤＰＥＤ ＳＥＳＴＤＴＥＥＥＦ ＧＮＡＩＧＧＳＨＧＧ ＳＳＹＴＶＹＩＤＫＴ 上述ならびに後述の配列中で、文字は以下のアミノ酸を
代表する： Ａ　　　　　　Ａｌａ　　　　　　アラニンＥ　　　　
　　Ｇｌｕ　　　　　　グルタミン酸Ｆ　　　　　　Ｐ
ｈｅ　　　　　　　フェニルアラニンＧ　　　　　Ｇｌ
ｙ　　　　　　グリシンＨＨｉｓ　　　　　　ヒスチジ
ン Ｉ　　　　　　Ｉｌｅ　　　　　　イソロイシンＫ　　
　　　　Ｌｙｓ　　　　　　リジンＬ　　　　　　Ｌｅ
ｕ　　　　　　ロイシンＭ　　　　　　Ｍｅｔ　　　　
　　メチオニンＮ　　　　　　Ａｓｎ　　　　　　アス
パラギンＰ　　　　　　Ｐｒｏ　　　　　　プロリンＱ
　　　　　Ｇｉｎ　　　　　　グルタミンＲＡｒｇ　　
　　　　アルギニン Ｓ　　　　　Ｓｅｒ　　　　　セリン Ｔ　　　　　　Ｔｈｒ　　　　　　スレオニンｖ　　　
　　Ｖａｌ　　　　　バリン ’ｃｌ　　　　　　Ｔｒｐ　　　　　　トリプトファン
Ｙ　　　　　　Ｔｙｒ　　　　　　チロシンＢ、　　０
．９　ｋｂｐ区分の各末端の６０塩基についてのヌクレ
オチド配列が決定され出版されている６、２ｋｂｐＤＮ
Ａ配列と並べられた。

０．９（ｋｂｐ）ＤＮＡ配列および実質止金てのｇＣの
主要抗原性ならびに中和エピトープをコードする３５ｋ
ｄｇＣたんばく区分が以下に与えられている： ＴＧＧ　　ＧＴＡ　　ＡＡＴ　　ＣＧＧ　　ＧＧＡ　　
ＧＡＧ　　ＴＣＴ　　Ｔ’ＣＧ　　ＣＧＡ　　ＡＡＡ　
　ＧＣＧ　　ＴＡＣＧＡＴＣＡＴ　　ＡＡＣＴＣＡ　　
ＣＣＴ　　ＴＡＴ　　ＡＴＡ　　ＴＧＧ　　ＣＣＡ　　
ＣＧＴ　　ＡＡＴ　　ＧＡＴ　　ＴＡＴ　　ＧＡＴＧＧ
Ａ　ＴＴＴ　ＴＴＡ　ＧＡＧ　ＡＡＣＧＣＡ　ＣＡＣＧ
ＡＡ　ＣＡＣＣＡＴ　ＧＧＧ　ＧＴＧ　ＴＡＴＡＡＴ　
ＣＡＧ　ＧＧＣＣＧＴ　ＧＧＴ　ＡＴＣＧＡＴ　ＡＧＣ
ＧＧＧ　ＧＡＡ　ＣＧＧ　　ＴＴＡ　　ＡＴＧＧＧＣＣ
ＡＡ　ＡＧＡ　ＣＴＣＡＴＴ　ＧＡＧ　ＧＴＧ　ＴＣＡ
　ＧＴＧ　ＧＡＡ　ＧＡＡ　　ＡＡＴ　ＣＡＣＣＣＧ　
　ＴＴＴ　ＡＣＴ　　ＴＴＡ　ＣＧＣＧＣＡ　ＣＣＧ　
　ＡＴＴ　ＣＡＧ　ＣＧＧ　　ＡＴＴ　ＴＡＴ　ＧＧＡ
ＧＴＣＣＧＧ　　ＴＡＣＡＣＣＧＡＧ　　ＡＣＴ　　Ｔ
ＧＧ　　ＡＧＣＴＴＴ　　ＴＴＧ　　ＣＣＧ　　ＴＣＡ
　　ＴＴＡＧＡＴ　ＧＴＧ　ＧＡＴ　ＴＧＣＧＣＧ　　
ＧＡＡ　ＡＡＴ　ＡＣＴ　ＡＡＡ　ＧＡＧ　　ＧＡＴ　
ＣＡＧ　　ＴＴＧＧＣＣＧＡＡ　　ＡＴＣＡＧＴ　ＴＡ
ＣＣＧＴ　ＴＴＴ　ＣＡＡ　ＧＧＴ　ＡＡＧ　　ＡＡＧ
　　ＧＡＡ　ＧＣＧＧＡＣＣＡＡ　　ＣＣＧ　ＴＧＧ　
　ＡＴＴ　ＧＴＴ　ＧＴＡ　　ＡＡＣＡＣＧ　　ＡＧＣ
ＡＣＡ　ＣＴＧ　　ＴＴＴＧＡＴ　　ＧＡＡ　　ＣＴＣ
ＧＡＡ　　ＴＴＡ　　ＧＡＣＣＣＣＣＣＣＧＡＧ　　Ａ
ＴＴ　　ＧＡＡ　　ＣＣＧ　　ＧＧＴＧＴＣＴＴＧ　　
ＡＡＡ　ＧＴＡ　ＣＴＴ　ＣＧＧ　　ＡＣＡ　ＧＡＡ　
ＡＡＡ　ＣＡＡ　ＴＡＣＴＴＧ　ＧＧＴＧＴＧ　　ＴＡ
ＣＡＴＴ　ＴＧＧ　ＡＡＣＡＴＧ　ＣＧＣＧＧＣＴＣＣ
ＧＡＴ　ＧＧＴ　ＡＣＧ　ＴＣＴＡＣＣＴＡＣＧＣＣＡ
ＣＧ　ＴＴＴ　ＴＴＧ　（’：ＴＣＡＣＣＴＧＧ　　Ａ
ＡＡ　ＧＧＧ　ＧＡＴ　ＧＡＡＡＡＡ　　ＡＣＡ　ＡＧ
Ａ　　ＡＡＣＣＣＴ　ＡＣＧ　ＣＣＣＧＣＡ　ＧＴＡ　
ＡＣＴ　ＣＣＴ　ＣＡＡ　ＣＣＡ列をコードする： ＦＨＴＤＥＤＫＬＤＴ ＮＳＶＹＥＰＹＹＨ５ ＤＨＡＥＳＳＷＶＮＲ ＧＥＳＳＲＫＡＹＤＨ ＮＳＰＹＩＷＰＲＮＤ ＹＤＧＦＬＥＮＡＨＥ ＨＨＧＶＹＮＱＧＲＧ Ｉ　　　　ＤＳＧＥＲＬＭＱＰ ＴＱＭＳＡＱＥＤＬＧ ＤＤＴＧＩＨＶｒＰＴ ＬＮＧＤＤＲＨＫＩＶ ＮＶＤＱＲＱＹＧＤＶ ＦＫＧＤＬＮＰＫＰＱ ＧＱＲＬＩＥＶＳＶＥ ＥＮＨＰＦＴＬＲＡＰ ＩＱＲＩＹＧＶＲＹＴ ＥＴＷＳＦＬＰＳＬＴ ＣＴＧＤＡＡＰＡＩＱ ＨＩＣＬＫＨＴＴＣＦ ＱＤＶＶＶＤＶＤＣＡ ＥＮＴＫＥＤＱＬＡＥ ＩＳＹＲＦＱＧＫＫＥ ＡＤＱＰＷＩＶＶＮＴ ＳＴＬＦＤＥＬＥＬＤ ＰＰＥＩＥＰＧＶＬＫ ＶＬＲＴＥＫＱＹＬＧ ＶＹ　　　　ＩＷＮＭＲＧＳＤ ＧＴＳＴＹＡＴＦＬＶ Ｔ　　　誓　　　ＫＧＤＥＫＴＲＮ ＰＴＰＡＶ’ＴＰＱＰＲ 上述のペプチドのどちらかを、生理学的に受容可能な担
体と混合し、感受性哨乳動物種内に、中和を含む防御抗
体の形成を誘導するために非経口的に投与することによ
ってワクチンに公式化することができる。投与量は、約
１から３投与で約５から２００μｍ　であろう。

実施例４ 精製ｖＺｖウィルスｇｃ　ポリペプチドは、生体外でＶ
ＺＶ感染性を中和する抗体を誘導する。

ｖ　ｚ　ｖ　ｇＣ糖たんぱくが、ＭＢＣ−５細胞から、
Ｋｅｌｌｅｒ　　ほか、ウィルス学雑誌（Ｊ。

Ｖｉｒｏｌ、　）５２巻：　２９３−２９７頁、１９８
４年により記載されたように、ｖｚｖｇＣにたいする単
クローン性抗体を用いた免役−アフィンティー・クロマ
トグラフィーの手法によって精製された。この梢製糖た
んぱくをドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミド
ゲル電気泳動（５ＤＳ−ＰＡＧＥ　）解析にかけた銀染
色による分析の結果は、Ｋｅｌｌｅｒ　　ほか（前出）
に記載されたのと同じ分子量を有する基本的に均質なり
　ｚ　ｖ　ｇｃであることを示した。てんじくねずみが
フロイントの（Ｆ’ｒｅｕｎｄ’ｓ　）完全アジュバン
ト中のＶ　７．　Ｖ　ｇＣ２０μｍを筋肉内投与され、
続いて１ケ月後に２週間間隔で２回フロイントの不完全
アジュバント中のｖｚｖｇＣ各１０μ７を投与された。

投与の前後にそのてんしくねずみから血清が得られた。

各てんしくねずみ血清は記載された（Ｋｅｌｌｅｒほか
前出）ように生体外でのＶＺＶ中和俣定に用いられた。

この検定に工す、免疫後の血清はＶＺＶ中和抗体を引出
したが、免疫前の血清にはなかった。

実施例５ 組み換え大腸ｌ！４　（Ｅ、　ｃｏｌｔ　）−由来ｇＣ
楯たんばくは生体外でＶＺＶ感染性を中和する抗体を誘
導する。

ｖ　ｚ　ｖ　ｇＣたんばくが、Ｅｌｌｉｓホか、ウィル
ス学雑洟（Ｊ、　Ｖｉｒｏｌ、　’）　　５３巻：　８
１−８８頁、１９８５年に工す記載されたように大腸菌
（Ｅ、　ｃｏｌｉ　）中に生産された。４０μｍの大腸
丙（Ｅ、　ｃｏｌｔ　）−由来ｖ　ｚ　ｖ　ｇＣが０．
１５　Ｍ　ＮａＣｔ。

、０１　Ｍ　Ｎａ２ＨＰＯ４，ｐＨ７，２中の５％アル
ヒドロゲル（ａｌｈｙｄｒｏｇｅｌ　）上に吸着された
。アルヒドロゲル上の６μｍ　のｖ　ｚ　ｖ　ｇＣが、
２週間間隔で２匹の各てんじくねすみに３回筋肉内投与
された。血清が投与前および最終投与の２週間後に採取
された。てんしくねずみの各血清が、（Ｋｅｌｌｅｒほ
か）ウィルス学雑誌（Ｊ。

Ｖｉｒｏｌ、　）５２巻：２９３−２９７頁、１９８４
年に記載されたように生体外のＶＺＶ中和検定に用いら
れた。この検定により、免疫後の血清がＶＺＶ中和抗体
を引出したが、免役前の血清にはなかった。それ故、ｖ
ＺｖｇＣはウィルス中和抗体を引出すことができる。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、水痘−帯状疱疹ウィルス（ＶＺＶ）糖たんぱくＣの
   少なくとも一部をコードする ＤＮＡ区分。 ２、ヌクレオチド配列 【ヌクレオチド配列があります】 を有する特許請求の範囲第１項記載のＶＺＶＤＮＡの２
   ．０ｋｂｐ断片。 ３、ヌクレオチド配列 【ヌクレオチド配列があります】 を有する特許請求の範囲第１項記載のＶＺＶＤＮＡの０
   ．９ｋｂｐ断片。 ４、特許請求の範囲第２項のＤＮＡ断片によりコードさ
   れ、アミノ酸配列 【アミノ酸配列があります】 を有するポリペプチド。 ５、特許請求の範囲第３項のＤＮＡ断片によりコードさ
   れ、アミノ酸配列 【アミノ酸配列があります】 を有するポリペプチド。 ６、特許請求の範囲第１項のＤＮＡ区分が挿入された転
   移ベクターからなる組換えＤＮＡ７、特許請求の範囲第
   ２項の２．０ｋｂｐＶＺＶＤＮＡ断片の全てまたは一部
   を含むベクタ ーで適当な宿主内でＶＺＶＤＮＡ断片によ りコードされるｇＣのたんぱくの少なくと も一部を発現するように適応したベクター。 ８、宿主が原核または真核生物である場合の特許請求の
   範囲第７項記載のベクター。 ９、特許請求の範囲第３項の０．９ｋｂｐＶＺＶＤＮＡ
   断片の全てまたは一部を含むベクタ ーで適当な宿主内でＶＺＶＤＮＡ断片によ りコードされるｇＣのたんぱくの少くとも 一部を発現するように適応したベクター。 １０、宿主が原核または真核生物である場合の特許請求
   の範囲第９項記載のベクター。 １１、第７項によるベクターを含む適当な原核または真
   核宿主で、２．０ｋｂｐＶＺＶＤＮＡ断片によりコード
   されるｇＣのたんぱくの 少くとも一部を発現することに適応した宿 主。 １２、第９項によるベクターを含む適当な原核または真
   核宿主で、０．９ｋｂｐＶＺＶＤＮＡ断片によりコード
   されるｇＣのたんぱくの 少くとも一部を発現することに適応した宿 主。 １３、特許請求の範囲第４項のポリペプチドまたはその
   サブユニットを適当な担体中に含 む組成物。 １４、特許請求の範囲第５項のポリペプチドまたはその
   サブユニットを適当な担体中に含 む組成物。 １５、当該たんぱくの全てまたは一部が哺乳動物種中で
   直接発現する場合の特許請求の範 囲第７項記載のウィルス起源発現ベクター。 １６、当該たんぱくの全てまたは一部が哺乳動物種中で
   直接発現する場合の特許請求の範 囲第９項記載のウィルス起源発現ベクター。