JPS6137733A - 肝疾患用医薬製剤 - Google Patents
肝疾患用医薬製剤Info
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- JPS6137733A JPS6137733A JP59162073A JP16207384A JPS6137733A JP S6137733 A JPS6137733 A JP S6137733A JP 59162073 A JP59162073 A JP 59162073A JP 16207384 A JP16207384 A JP 16207384A JP S6137733 A JPS6137733 A JP S6137733A
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- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
ｍ弘糺ＬＬＬ
本発明は、肝疾患用医薬製剤に関する。即ち肝障害、よ
り詳細には肝細胞（実質細胞）の変性及び壊死に起因す
る各種の肝疾患の予防及び治療に奏効する医薬製剤に関
する。
り詳細には肝細胞（実質細胞）の変性及び壊死に起因す
る各種の肝疾患の予防及び治療に奏効する医薬製剤に関
する。
にｍ
肝臓は、生体中で最も高度に分化の進んだ最大の原性器
官である。これは主に各種栄養素（糖質、蛋白質、脂質
、ビタミン、ホルモン等）の処理（代謝）、貯蔵、解毒
、分解、排泄等の重要な多種の機能を兼ね備えており、
中でも生体内中間代謝の中心的役割を果たすことが知ら
れている。
官である。これは主に各種栄養素（糖質、蛋白質、脂質
、ビタミン、ホルモン等）の処理（代謝）、貯蔵、解毒
、分解、排泄等の重要な多種の機能を兼ね備えており、
中でも生体内中間代謝の中心的役割を果たすことが知ら
れている。
肝炎とは種々の原因によって上記機能を担う肝細胞が障
害をきたした疾患であり、その慢性化、それらの終末像
としての肝硬変及び肝細胞癌等と併せ１．２等肝細胞障
害に基づく疾患は、極めて深刻なものとして捉えられて
いる。しかして、上記肝疾患の治療に際しては、障害さ
れた肝細胞・組織の修復及び低下した肝機能の改善、即
ち肝庇護を計ることが最も重要視されているが、斯かる
肝庇護を行なって上記肝疾患の有効、適切な予防及び治
療を計り得る医薬製剤は未だ開発されていない。僅かに
糖液、ビタミン類等の投与や高カロリー、高蛋白室によ
る食事療法が行なわれているに過ぎず、一般には肝血流
量を増加させ、生体による修復機能を促す効果を期待し
た横臥安静処置がとられる程度にとどまっている。
害をきたした疾患であり、その慢性化、それらの終末像
としての肝硬変及び肝細胞癌等と併せ１．２等肝細胞障
害に基づく疾患は、極めて深刻なものとして捉えられて
いる。しかして、上記肝疾患の治療に際しては、障害さ
れた肝細胞・組織の修復及び低下した肝機能の改善、即
ち肝庇護を計ることが最も重要視されているが、斯かる
肝庇護を行なって上記肝疾患の有効、適切な予防及び治
療を計り得る医薬製剤は未だ開発されていない。僅かに
糖液、ビタミン類等の投与や高カロリー、高蛋白室によ
る食事療法が行なわれているに過ぎず、一般には肝血流
量を増加させ、生体による修復機能を促す効果を期待し
た横臥安静処置がとられる程度にとどまっている。
１１東ｌ乱
本発明者らは、上記肝庇護を効果的且つ的確に行ない、
これに基づいて肝疾患の有効適切な予防及び治療を行な
い得る医薬製剤を提供することをその目的として鋭意研
究を重ねた結果、特定の二種の化合物の併用が上記目的
を達成する医薬製剤として有用であることを見出し、こ
こに本発明を完成するに至った。
これに基づいて肝疾患の有効適切な予防及び治療を行な
い得る医薬製剤を提供することをその目的として鋭意研
究を重ねた結果、特定の二種の化合物の併用が上記目的
を達成する医薬製剤として有用であることを見出し、こ
こに本発明を完成するに至った。
ｌ
即ち、本発明は、し−プロリン（以下、「Ｐｒｏ」と略
記する）及び表皮成長因子（Ｅ ｐｌｄｅｒｉａｌＧ
ｒｏｗｔｈ Ｆ ａｃｔｏｒ 、以下ｒＥＧＦＪと略
記する）を有効成分として含有する肝疾患用医薬製剤に
係わる。
記する）及び表皮成長因子（Ｅ ｐｌｄｅｒｉａｌＧ
ｒｏｗｔｈ Ｆ ａｃｔｏｒ 、以下ｒＥＧＦＪと略
記する）を有効成分として含有する肝疾患用医薬製剤に
係わる。
本発明の上記製剤は、Ｐｒｏ及びＥＧＦの併用を必須の
要件とすることに基づいて、肝細胞を極めて良好に増殖
させ、障害された肝組織の再生乃至幡新生を促進し、本
来の肝機能を根本的に正常に回復させることができる。
要件とすることに基づいて、肝細胞を極めて良好に増殖
させ、障害された肝組織の再生乃至幡新生を促進し、本
来の肝機能を根本的に正常に回復させることができる。
また本発明の医薬製剤は、肝細胞に対する上記特有の作
用の他に、肝の非実質細胞に対しては、逆にその増殖を
抑制する特徴をも有しており、慢性肝炎、肝硬変、肝癌
等における過度の結合！ｌＨ増生、肝内繊維化の問題の
点からも肝疾患用医薬製剤として極やで好ましいもので
ある。
用の他に、肝の非実質細胞に対しては、逆にその増殖を
抑制する特徴をも有しており、慢性肝炎、肝硬変、肝癌
等における過度の結合！ｌＨ増生、肝内繊維化の問題の
点からも肝疾患用医薬製剤として極やで好ましいもので
ある。
本発明医薬製剤において有効成分とするｐｒｏ及びＥＧ
Ｆは、いずれも公知であり、容易に入手することができ
る。即ちＰｒｏとしては通常市販されているものを使用
できる。またＥＧＦは、上皮組織に作用して、その成長
を特異的に促進する因子として知られており、常法に従
い調整される〔例えばＪ、 Ｂｌｏｌ 、 Ｃｈｅｇ＋
、 、 ２４７．７６０９−７６１１ （１９７２）
、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 、 Ａｃａｄ 。
Ｆは、いずれも公知であり、容易に入手することができ
る。即ちＰｒｏとしては通常市販されているものを使用
できる。またＥＧＦは、上皮組織に作用して、その成長
を特異的に促進する因子として知られており、常法に従
い調整される〔例えばＪ、 Ｂｌｏｌ 、 Ｃｈｅｇ＋
、 、 ２４７．７６０９−７６１１ （１９７２）
、Ｐｒｏｃ 、 Ｎａｔｌ 、 Ａｃａｄ 。
Ｓｃｉ、ＵＳＡ、、７２．１３１７（１９７５）等参照
〕。該ＥＧＦとしてはまた一部市販されており、本発明
では該市販品をも利用することができる。
〕。該ＥＧＦとしてはまた一部市販されており、本発明
では該市販品をも利用することができる。
本発明において用いられる上記ＥＧＦはその由来等にも
特に限定はないが、本発明医薬製剤をヒトに適用するこ
とを考慮すれば、該ＥＧＦはＦＬｊ！性等の面よりヒト
由来のものであるのが好ましい。
特に限定はないが、本発明医薬製剤をヒトに適用するこ
とを考慮すれば、該ＥＧＦはＦＬｊ！性等の面よりヒト
由来のものであるのが好ましい。
ヒト由来のＥＧＦは、また現在ウロガストロン（ｕ「ｏ
ｇａｓｔｏｒｏｎ ）としても知られている（ Ａ ｎ
ｎ。
ｇａｓｔｏｒｏｎ ）としても知られている（ Ａ ｎ
ｎ。
Ｒｅｖ、Ｂｌｏｃｈｅｍ、、４８，１９３ （１９７９
））。
））。
これは例えばヒトの尿、母乳、唾液等より、常法に従い
ＥＧＦの物理化学的性質等を利用する各種の処理手段、
例えば抽出、分子ふるいクロマトグラフィ（ゲル濾過）
、イオン交換クロマトグラフィ、遠心分離、電気泳動、
透析法等の単独又は組合せにより容易に調整される（Ｎ
ａｔｕｒｅ 、 ２５７゜本発明製剤における上記ｐｒ
ｏ及びＥＧＦの配合割合は、特に限定はないが、通常Ｅ
ＧＦに対してｐｒｏを過剰量、例えばＥＧＦ１重量部に
対してｐｒｏを約７５０〜１２００００重量１１８度、
好まφくは約１５００〜１２０００重量部程度とするの
がよい。。
ＥＧＦの物理化学的性質等を利用する各種の処理手段、
例えば抽出、分子ふるいクロマトグラフィ（ゲル濾過）
、イオン交換クロマトグラフィ、遠心分離、電気泳動、
透析法等の単独又は組合せにより容易に調整される（Ｎ
ａｔｕｒｅ 、 ２５７゜本発明製剤における上記ｐｒ
ｏ及びＥＧＦの配合割合は、特に限定はないが、通常Ｅ
ＧＦに対してｐｒｏを過剰量、例えばＥＧＦ１重量部に
対してｐｒｏを約７５０〜１２００００重量１１８度、
好まφくは約１５００〜１２０００重量部程度とするの
がよい。。
本発明医薬製剤は、上記ｐｒｏ及びＥＧＦを必須成分と
して、通常之等と共に適当な医薬製剤担体を配合して製
剤組成物の形態に調製される。該製剤担体としては使用
形態に応じた製剤を調製するのに通常慣用される充填剤
、増量剤、結合剤、付根剤、崩壊剤、表面活性剤等の賦
形剤乃至は希釈剤をいずれも使用できる。製剤組成物の
形態は、之が上記２種の有効成分を効果的に含有する状
態であれば、特に限定はないが、通常液剤、懸濁剤、乳
剤等の注射剤形態とするのが好適である。また之は使用
前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品と
することもできる。上記製剤組成物には、また必要に応
じて通常の各種の添加剤、例えば溶解補助剤、緩衝剤、
無痛化剤、保存剤、着色剤等を添加配合でき、更に他の
医薬品を添加配合することもできる。殊に、本発明者ら
の研究によれば、本発明医薬製剤有効成分の肝細胞に対
する作用は、その内因性コラーゲン合成に極めて密接に
関与することが確認されており、従ってコラーゲン合成
促進剤、例えばし−アスコルビン酸くビタミンＣ）、乳
酸ナトリウム等の本発明製剤中への配合が特に好ましい
。該コラーゲン合成促進剤の配合割合としては、特に限
定はないが、通常有効成分合計１！量部に対してし一ア
スコルビン酸は約１０〜４０重量部程度、乳酸ナトリウ
ムは約１００〜２００重量部程度とするのが好ましい。
して、通常之等と共に適当な医薬製剤担体を配合して製
剤組成物の形態に調製される。該製剤担体としては使用
形態に応じた製剤を調製するのに通常慣用される充填剤
、増量剤、結合剤、付根剤、崩壊剤、表面活性剤等の賦
形剤乃至は希釈剤をいずれも使用できる。製剤組成物の
形態は、之が上記２種の有効成分を効果的に含有する状
態であれば、特に限定はないが、通常液剤、懸濁剤、乳
剤等の注射剤形態とするのが好適である。また之は使用
前に適当な担体の添加によって液状となし得る乾燥品と
することもできる。上記製剤組成物には、また必要に応
じて通常の各種の添加剤、例えば溶解補助剤、緩衝剤、
無痛化剤、保存剤、着色剤等を添加配合でき、更に他の
医薬品を添加配合することもできる。殊に、本発明者ら
の研究によれば、本発明医薬製剤有効成分の肝細胞に対
する作用は、その内因性コラーゲン合成に極めて密接に
関与することが確認されており、従ってコラーゲン合成
促進剤、例えばし−アスコルビン酸くビタミンＣ）、乳
酸ナトリウム等の本発明製剤中への配合が特に好ましい
。該コラーゲン合成促進剤の配合割合としては、特に限
定はないが、通常有効成分合計１！量部に対してし一ア
スコルビン酸は約１０〜４０重量部程度、乳酸ナトリウ
ムは約１００〜２００重量部程度とするのが好ましい。
本発明医薬製剤は、該製剤組成物の形態に応じた適当な
投与経路で投与され、その投与方法も特に限定はない。
投与経路で投与され、その投与方法も特に限定はない。
例えば注射剤の形態に調製された本発明医薬製剤は、こ
れを単独で又はリンゲル液、ブドウ糖液等の一般的補液
と併用して静脈内投与され得る。また上記製剤は必要に
応じて単独で筋肉内、皮下、皮肉、腹腔内投与等を行な
うこともできる。
れを単独で又はリンゲル液、ブドウ糖液等の一般的補液
と併用して静脈内投与され得る。また上記製剤は必要に
応じて単独で筋肉内、皮下、皮肉、腹腔内投与等を行な
うこともできる。
本発明製剤中に配合される有効成分の量及び該製剤の投
与量は、該製剤の投与方法、投与形態、使用目的、之を
適用される患者の症状等に応じて適宜選択され、一定で
はないが、通常有効成分を合計約１〜８０重量％程度含
有する製剤形態に調製して、この製剤をこれに含有され
る有効成分総量が一日成人一人当り約０．１〜１０ｇ程
度となる範囲で投与するのが望ましい。該投与は、−日
１回である必要はなく一日３〜４回に分けることもでき
る。
与量は、該製剤の投与方法、投与形態、使用目的、之を
適用される患者の症状等に応じて適宜選択され、一定で
はないが、通常有効成分を合計約１〜８０重量％程度含
有する製剤形態に調製して、この製剤をこれに含有され
る有効成分総量が一日成人一人当り約０．１〜１０ｇ程
度となる範囲で投与するのが望ましい。該投与は、−日
１回である必要はなく一日３〜４回に分けることもでき
る。
１貝ｍ
本発明の肝疾患用医薬製剤は、障害された肝細胞、組織
の再生乃至新生を促進し、之等を生理的に回復させ、そ
の肝機能を根本的に正常回復化させ得る。従って本発明
製剤は、各種肝疾患例えば急性反び慢性肝炎、肝硬変等
の予防及び治療剤として、また肝硬変及び肝癌等の手術
後の予後改善剤として非常に有用である。
の再生乃至新生を促進し、之等を生理的に回復させ、そ
の肝機能を根本的に正常回復化させ得る。従って本発明
製剤は、各種肝疾患例えば急性反び慢性肝炎、肝硬変等
の予防及び治療剤として、また肝硬変及び肝癌等の手術
後の予後改善剤として非常に有用である。
以下、本発明製剤及びその効果を明らかにする実施例を
挙げ、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、之に
限定されるものではない。
挙げ、本発明を更に詳細に説明するが、本発明は、之に
限定されるものではない。
実施例１
ウィスター系雄ラット（体重的２００１１）を用い、コ
ラ−ゲナーゼ還流法（Ｊ 、 Ｂ １ｏｃｈｅｉ。
ラ−ゲナーゼ還流法（Ｊ 、 Ｂ １ｏｃｈｅｉ。
（Ｔｏｋｙｏ）、８４．９３７〜９４６ （１９７８）
）に従い、肝細胞（実質細胞）を分離Ｉｌ製した。
）に従い、肝細胞（実質細胞）を分離Ｉｌ製した。
ラットの尾の鍵コラーゲンを３％酢酸水溶液に溶解し、
これを内径２４１１１の１２ウエルプラスチツクデイツ
シユ（リンプロ社）に注ぎ、５分間放置後、リン酸塩緩
衝液（ＰＢＳ）で２回洗浄してコラーゲンをコートした
ディツシュを調製した。
これを内径２４１１１の１２ウエルプラスチツクデイツ
シユ（リンプロ社）に注ぎ、５分間放置後、リン酸塩緩
衝液（ＰＢＳ）で２回洗浄してコラーゲンをコートした
ディツシュを調製した。
上記でｉｍ＠シた肝細胞を５％牛血清、１０−８Ｍデキ
サメサゾン及び１０−９Ｍインスリンを含む下記■〜■
の各培地に懸濁させ、上記ディツシュに１ウェル当り１
−（細胞濃度２．０Ｘ１０５細胞／ＩＱ）で撒き込み、
５％Ｃ０２及び３０％０２の存在下、３７℃にて培養し
た。
サメサゾン及び１０−９Ｍインスリンを含む下記■〜■
の各培地に懸濁させ、上記ディツシュに１ウェル当り１
−（細胞濃度２．０Ｘ１０５細胞／ＩＱ）で撒き込み、
５％Ｃ０２及び３０％０２の存在下、３７℃にて培養し
た。
〈培地〉
■ Ｌ−１５培地：Ｌ−１５（成分として、ｐｒ。
を含まない＝フローラボラトリー社）
■ ３０ ｍａ／ Ｑのｐｒｏを添加したし一１５培地
■ 最小必須培地：ＭＥＭ（成分としてｐｒｏを含まな
い；日水産業社） ■ ３０８ｇ／ ＱのＰｒｏを添加したＭＥＭ培地■
ダルベツコ改質ＭＥＭ ： ＤＭＥ （成分としてＰｒ
ｏを含まない二日水産業社） ■ ３０ ｍｇ／ ＱのＰｒｏを添加したＤＭＥ培地培
地上記培養２問 及びＥＧＦ２０ｎｇ／ＩＩｇを更に添加した同培地（Ｅ
ＧＦ添加群）又は非添加の同培地（対照群）に変換した
。
■ 最小必須培地：ＭＥＭ（成分としてｐｒｏを含まな
い；日水産業社） ■ ３０８ｇ／ ＱのＰｒｏを添加したＭＥＭ培地■
ダルベツコ改質ＭＥＭ ： ＤＭＥ （成分としてＰｒ
ｏを含まない二日水産業社） ■ ３０ ｍｇ／ ＱのＰｒｏを添加したＤＭＥ培地培
地上記培養２問 及びＥＧＦ２０ｎｇ／ＩＩｇを更に添加した同培地（Ｅ
ＧＦ添加群）又は非添加の同培地（対照群）に変換した
。
尚、この試験においてＥＧＦとしては、マウス顎下線よ
りサベージ及びコーエンの方法（Ｊ。
りサベージ及びコーエンの方法（Ｊ。
Ｂｉｏｌ 、Ｃｈｅｌ！１．、２４７．７６０９ 〜７
６１１。
６１１。
１９７２年〕により調製したものを用いた。
上記培地変換の１４詩間後に３Ｈ−チミジン（０．３鳳
Ｃ＋／μｍｏｌ ；アマジャム社）の１、２５μＣＩ
／ウエルを添加し、３４時間培養した。尚、上記３Ｈ−
チミジンによるラベル時に、アフィディコリン（１０μ
ｇ／ｍ）を添加して、ＤＮＡ合成を止めたものをコント
ロール群とした。
Ｃ＋／μｍｏｌ ；アマジャム社）の１、２５μＣＩ
／ウエルを添加し、３４時間培養した。尚、上記３Ｈ−
チミジンによるラベル時に、アフィディコリン（１０μ
ｇ／ｍ）を添加して、ＤＮＡ合成を止めたものをコント
ロール群とした。
上記３４時間の培養によるラベル後、細胞を冷ＰＢＳで
２回洗浄し、冷１０％トリクロル酢酸（ＴＣＡ）水溶液
１ＷＩＪに浸した。細胞を１ウェル当り０．５ｍの０．
５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液によって可溶化し、一部を
取って蛋白量をローリ−法に従って測定した。残液を冷
５％ＴＣＡ水溶液で処理し、不溶性画分を遠心沈澱によ
り集め、５％ＴＣＡ水溶液で洗浄後、１０％ＴＣＡ水溶
液０、５−を加え、９０℃、１５分間加熱し、上溝両分
の放射活性をトルエン−エタノール系シンチレータ−に
より測定した。
２回洗浄し、冷１０％トリクロル酢酸（ＴＣＡ）水溶液
１ＷＩＪに浸した。細胞を１ウェル当り０．５ｍの０．
５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液によって可溶化し、一部を
取って蛋白量をローリ−法に従って測定した。残液を冷
５％ＴＣＡ水溶液で処理し、不溶性画分を遠心沈澱によ
り集め、５％ＴＣＡ水溶液で洗浄後、１０％ＴＣＡ水溶
液０、５−を加え、９０℃、１５分間加熱し、上溝両分
の放射活性をトルエン−エタノール系シンチレータ−に
より測定した。
詳細ｍＤＮＡに取り込まれたｓＨ−チミジン量をコント
ロールとのカウントの差として求め、これを肝細胞１１
１１）蛋白−当りに換算してＤＮＡ合成活性（ｄＥｌｌ
／１０蛋白）とし、細胞増殖の指標とした。
ロールとのカウントの差として求め、これを肝細胞１１
１１）蛋白−当りに換算してＤＮＡ合成活性（ｄＥｌｌ
／１０蛋白）とし、細胞増殖の指標とした。
、 結果を下記１１表に示す。
第 １ 表
（３回の平均上Ｓ、Ｄ、）
上記第１表より、ｐｒｏ及びＥＧＦの併用は、強力に肝
細胞ＤＮＡ合成を促進することが判る。
細胞ＤＮＡ合成を促進することが判る。
尚、ディツシュにコートされたコラーゲン及び１０−７
Ｍのインスリンは、外因性に添加した試験により、いず
れも上記ＤＮＡ合成には、影響を与えないことを確認し
た。
Ｍのインスリンは、外因性に添加した試験により、いず
れも上記ＤＮＡ合成には、影響を与えないことを確認し
た。
また、フィブロネクチンをコートしたディツシュを用い
、牛血溝の非存在下に同様の試験を行ない、略々同様の
結果を得た。
、牛血溝の非存在下に同様の試験を行ない、略々同様の
結果を得た。
実施例２
ｐｒｏ及びＥＧＦの肝細胞増殖作用をラベリングインデ
ックスにより評価した。即ち、上記実施例１において、
３４時間の培養によるラベル後、細胞を冷ＰＢ８で２回
洗浄し、固定化（ジエンダー溶液、５分）後、サクラＮ
Ｒ−Ｍ２ （小西六写真工業株式会社ＩＩ）でコートし
、ラジオオートグムの真報に、１０日ｆｉｌｌ光させた
。Ｉ胞をエオシン染色後、５０個のｌ１ｍを測定し、３
Ｈ−チミジンでラベルされた被数（％ １ａｂｅｌｌｅ
ｄ ｎｕｃｌｅｉ）を求め、これをラベリングインデ
ックスとした。
ックスにより評価した。即ち、上記実施例１において、
３４時間の培養によるラベル後、細胞を冷ＰＢ８で２回
洗浄し、固定化（ジエンダー溶液、５分）後、サクラＮ
Ｒ−Ｍ２ （小西六写真工業株式会社ＩＩ）でコートし
、ラジオオートグムの真報に、１０日ｆｉｌｌ光させた
。Ｉ胞をエオシン染色後、５０個のｌ１ｍを測定し、３
Ｈ−チミジンでラベルされた被数（％ １ａｂｅｌｌｅ
ｄ ｎｕｃｌｅｉ）を求め、これをラベリングインデ
ックスとした。
結果を下記第２表に示す。
第 ２ 表
第２表より、Ｐｒｏ及びＥＧＦの併用により、全肝細胞
数の約８０％のｌｌｌ胞がＤＮＡ合成を開始することが
判る。
数の約８０％のｌｌｌ胞がＤＮＡ合成を開始することが
判る。
尚、該試験において、ＥＧＦ添加時に２００＋＋。
／Ｑのアスコルビン酸を更に添加した結果、そのラベリ
ングインデックスは、８５．５±６．１に上昇した。
ングインデックスは、８５．５±６．１に上昇した。
実施例３
実施例１において、用いた■培地のｐｒｏ含有量を３．
７．１５．３０．６０又は１２０１ＭＩ２に変化させて
、同様にして試験を行なった。
７．１５．３０．６０又は１２０１ＭＩ２に変化させて
、同様にして試験を行なった。
結果を第１図に示す。図において縦軸はＤＮＡ合成活性
を１時間当りに換算（ｄｐｗ／ｌｏ蛋白／ｈｒ）して表
示する。横軸はＰｒｏ添加量を示す。また図中（１）は
ＥＧＦ添加群を、（２）は対照群を各々示す。
を１時間当りに換算（ｄｐｗ／ｌｏ蛋白／ｈｒ）して表
示する。横軸はＰｒｏ添加量を示す。また図中（１）は
ＥＧＦ添加群を、（２）は対照群を各々示す。
実施例４
この例ではコラーゲン合成促進剤を更に添加併用した場
合の効果を調べた。即ち、上記実施例１の■培地を用い
た試験において、ＥＧＦの添加と同時に更に各種濃度の
アスコルビン酸又は乳酸ナトリウムを添加し、同様の試
験を繰返し、これらコラーゲン合成促進剤の添加がＤＮ
Ａ合成にいかなる影響を与えるかを調べた。
合の効果を調べた。即ち、上記実施例１の■培地を用い
た試験において、ＥＧＦの添加と同時に更に各種濃度の
アスコルビン酸又は乳酸ナトリウムを添加し、同様の試
験を繰返し、これらコラーゲン合成促進剤の添加がＤＮ
Ａ合成にいかなる影響を与えるかを調べた。
■培地（Ｌ−１５＋Ｐｒｏ）へのＥＧＦ単独添加群にお
けるＤＮＡ合成活性を対照（１００％）として、上記各
種濃度のコラーゲン合成促進剤の併用によるＤＮＡ合成
活性の百分率を求めた。
けるＤＮＡ合成活性を対照（１００％）として、上記各
種濃度のコラーゲン合成促進剤の併用によるＤＮＡ合成
活性の百分率を求めた。
結果を下記第３表に示す。
第 ３ 表
第３表より、Ｐｒｏ及びＥＧＦの併用による本発明の効
果は、コラーゲン合成促進剤の添加により、更に促進さ
れることが判る。
果は、コラーゲン合成促進剤の添加により、更に促進さ
れることが判る。
実施例５
ヒト肝臓のバイオプシー組織切片の血管の穴から、注射
針のかわりにカニユーレをつけた注射器を用いて、１ｔ
Ｊ８Ｉ流液（０，５１９Ｍ−ＥＧＴＡを含むＣＢ２＋Ｂ
２−のハンクス−１０ｓ Ｍ−Ｈｅｌ）ａｓ緩緩衝液管
注入し、脱血を充分に行なう。脱血の完了後、コラーゲ
ナーゼージスバーゼ液（０，０５％−：１５−ゲｔ−ゼ
、１０００単位／−のジスバーゼ及び５１Ｍ ＣａＣ
Ｑ２を含むハンクス−１０＋ｅ Ｍ−Ｈｅｐｅｓｔ１ｍ
液）を同様に注入する。組織をシャーレに移し、メスで
細分し、これをガーゼを２１１にひいた細胞濾過器で枦
遇し、炉液を細胞遠心管に移し、低速遠心（５０ｏｘ１
分）を行ない上清をすてる。沈澱した細胞をＭＥＭで懸
濁し、同様に遠心し、沈澱した細胞を回収する。この操
作を３回繰り返し、線維芽細胞を含むヒト肝細胞を得た
。
針のかわりにカニユーレをつけた注射器を用いて、１ｔ
Ｊ８Ｉ流液（０，５１９Ｍ−ＥＧＴＡを含むＣＢ２＋Ｂ
２−のハンクス−１０ｓ Ｍ−Ｈｅｌ）ａｓ緩緩衝液管
注入し、脱血を充分に行なう。脱血の完了後、コラーゲ
ナーゼージスバーゼ液（０，０５％−：１５−ゲｔ−ゼ
、１０００単位／−のジスバーゼ及び５１Ｍ ＣａＣ
Ｑ２を含むハンクス−１０＋ｅ Ｍ−Ｈｅｐｅｓｔ１ｍ
液）を同様に注入する。組織をシャーレに移し、メスで
細分し、これをガーゼを２１１にひいた細胞濾過器で枦
遇し、炉液を細胞遠心管に移し、低速遠心（５０ｏｘ１
分）を行ない上清をすてる。沈澱した細胞をＭＥＭで懸
濁し、同様に遠心し、沈澱した細胞を回収する。この操
作を３回繰り返し、線維芽細胞を含むヒト肝細胞を得た
。
上記実施例１において、ラット肝細胞のがわりに上記ヒ
ト肝細胞を使用し、Ｐｒｏ添加量を３００ＭＭＱとし、
以下同様に試験した。肝細胞（実質細胞）と線雑芽細胞
（非実質細胞）の増殖は、ＥＧＦ添加の３４時間後に計
測したＭｗｉ数及び上記実施例２と同様にして測定した
ラベリングインデックスにより評価した。
ト肝細胞を使用し、Ｐｒｏ添加量を３００ＭＭＱとし、
以下同様に試験した。肝細胞（実質細胞）と線雑芽細胞
（非実質細胞）の増殖は、ＥＧＦ添加の３４時間後に計
測したＭｗｉ数及び上記実施例２と同様にして測定した
ラベリングインデックスにより評価した。
結果を下記第４表に示す。
第 ４ 表
咳表より、肝細胞とＩＩ雑芽ｌｌ１ｌＩ！は、Ｐｒｏ及
びＥＧＦの併用により相反的変化を示すことが判る。
びＥＧＦの併用により相反的変化を示すことが判る。
即ち、肝細胞は、その数及びラベリングインデックスの
増加を示すのに反し、線維芽１Ｉｌｌｌのそれらは、顕
著に減少する。このことは、本発明製剤が肝細胞を良好
に増殖させると同時に、繊維化の抑制に著しい効果を有
することを示す。
増加を示すのに反し、線維芽１Ｉｌｌｌのそれらは、顕
著に減少する。このことは、本発明製剤が肝細胞を良好
に増殖させると同時に、繊維化の抑制に著しい効果を有
することを示す。
実施例６
以下、本発明医薬製剤の各種形態の調製例を示す。
■ 注射剤
下記各成分を混合後、滅菌して注射剤を得る。
Ｌ−プロリン ６０００重量部ＥＧＦ（実
施例１で調製したもの）１重量部生理食塩水
５００００重量部■ 注射剤 下記成分を混合後、滅菌して注射剤を得る。
施例１で調製したもの）１重量部生理食塩水
５００００重量部■ 注射剤 下記成分を混合後、滅菌して注射剤を得る。
し−プロリン ５０００重量部ＥＧＦ （
グリゴリー（Ｇ ｒｅｇｏｒｙ。
グリゴリー（Ｇ ｒｅｇｏｒｙ。
Ｈ，）の方法（Ｎａｔｕｒｅ 、２５７ 。
３２５ （１９７５））に従ってＩＩ製したもの）
１重量部注射用蒸留水
８０００重量部
１重量部注射用蒸留水
８０００重量部
第１図は実施例３に示す試験における本発明医薬製剤の
肝細胞増殖作用（ＤＮＡ合成活性）を示すグラフである
。 （以 上）
肝細胞増殖作用（ＤＮＡ合成活性）を示すグラフである
。 （以 上）
Claims (1)
- （１）Ｌ−プロリン及び表皮成長因子（ＥＧＦ）を有効
成分として含有することを特徴とする肝疾患用医薬製剤
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59162073A JPS6137733A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | 肝疾患用医薬製剤 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59162073A JPS6137733A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | 肝疾患用医薬製剤 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6137733A true JPS6137733A (ja) | 1986-02-22 |
| JPH0574574B2 JPH0574574B2 (ja) | 1993-10-18 |
Family
ID=15747573
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59162073A Granted JPS6137733A (ja) | 1984-07-31 | 1984-07-31 | 肝疾患用医薬製剤 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6137733A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0715850A1 (en) * | 1994-12-07 | 1996-06-12 | Research Development Corporation Of Japan | Use of proline and/or derivatives as an antihepatitis agent |
| US6013390A (en) * | 1997-04-01 | 2000-01-11 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Alkaline storage battery |
| US6261720B1 (en) | 1996-09-20 | 2001-07-17 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Positive electrode active material for alkaline storage batteries |
-
1984
- 1984-07-31 JP JP59162073A patent/JPS6137733A/ja active Granted
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0715850A1 (en) * | 1994-12-07 | 1996-06-12 | Research Development Corporation Of Japan | Use of proline and/or derivatives as an antihepatitis agent |
| US6261720B1 (en) | 1996-09-20 | 2001-07-17 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Positive electrode active material for alkaline storage batteries |
| US6013390A (en) * | 1997-04-01 | 2000-01-11 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Alkaline storage battery |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0574574B2 (ja) | 1993-10-18 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| EXPY | Cancellation because of completion of term |