JPS61292061A - 単純ヘルペスウイルス抗体の測定方法 - Google Patents
単純ヘルペスウイルス抗体の測定方法Info
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- JPS61292061A JPS61292061A JP59250343A JP25034384A JPS61292061A JP S61292061 A JPS61292061 A JP S61292061A JP 59250343 A JP59250343 A JP 59250343A JP 25034384 A JP25034384 A JP 25034384A JP S61292061 A JPS61292061 A JP S61292061A
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- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/571—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses for venereal disease, e.g. syphilis, gonorrhoea
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
最近単純ヘルペスウィルス（以下Ｈ８Ｖ、！：略す）の
感染にもとすく患者が増加しておシ、新生児ヘルペス、
ヘルペス脳炎、性器ヘルペスなどのＨ８■感染症の増加
は社会問題としても重大な関心を集めている。
感染にもとすく患者が増加しておシ、新生児ヘルペス、
ヘルペス脳炎、性器ヘルペスなどのＨ８■感染症の増加
は社会問題としても重大な関心を集めている。
一方Ｅ（’Ｓ・■に対する抗体保有人口は減少してきて
おシ、これが社会的にもＨ’ＳＶの伝染阻止力を弱めて
いることが懸念されている。
おシ、これが社会的にもＨ’ＳＶの伝染阻止力を弱めて
いることが懸念されている。
このような現状においてほとんどの新生児ヘルペスは、
Ｈ’ＳＶに対する抗体陰性の母親の場合に発症すること
が知られている。従って、新生児ヘルペス対策の前提と
して、妊婦のＨ８■に対する血中抗体を測定することが
必要とされる。また、Ｈ’ＳＶ感染症は皮膚科の領域で
は一般的な疾患であシ、その予防ならびに適切な処置の
ためにもＨ８■の抗体を迅速に測定する方法が望まれる
。
Ｈ’ＳＶに対する抗体陰性の母親の場合に発症すること
が知られている。従って、新生児ヘルペス対策の前提と
して、妊婦のＨ８■に対する血中抗体を測定することが
必要とされる。また、Ｈ’ＳＶ感染症は皮膚科の領域で
は一般的な疾患であシ、その予防ならびに適切な処置の
ためにもＨ８■の抗体を迅速に測定する方法が望まれる
。
Ｈ’ＳＶに対する抗体の測定方法として、中和抗体法、
補体結合反応法（ＣＦ法）、酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法
）が知られている。しかるに中和抗体法では、細胞培養
の設備が必要であシ、感染性のウィルスを扱うため、バ
イオハザードに対する対策が不可欠となる。
補体結合反応法（ＣＦ法）、酵素抗体法（ＥＬＩＳＡ法
）が知られている。しかるに中和抗体法では、細胞培養
の設備が必要であシ、感染性のウィルスを扱うため、バ
イオハザードに対する対策が不可欠となる。
ＣＦ法では、ウイルヌ抗原、羊赤血球、溶血素、補体な
どの試薬を必要とし、操作も非常に煩雑である。またＥ
Ｌ工ＳＡ法では、抗体の検出感度は高いが、測定に高価
な機器を必要とする欠点がある。
どの試薬を必要とし、操作も非常に煩雑である。またＥ
Ｌ工ＳＡ法では、抗体の検出感度は高いが、測定に高価
な機器を必要とする欠点がある。
多くの対象に対して広範囲にＨ３Ｖ抗体を測定するため
には、安価で迅速かつ特殊な測定機器を必要としない方
法が望まれる。そこで我々は、そのような条件を満す測
定方法として、Ｈ，Ｓ Ｖ特異糖蛋白質を結合した受身
担体凝集法について研究し、本発明を完成するに至った
。
には、安価で迅速かつ特殊な測定機器を必要としない方
法が望まれる。そこで我々は、そのような条件を満す測
定方法として、Ｈ，Ｓ Ｖ特異糖蛋白質を結合した受身
担体凝集法について研究し、本発明を完成するに至った
。
それぞれｇｏ、ｇ；Ｂ、 ｇ””、ｇＤと名づけられて
いる。
いる。
それぞれの抗原が、液性、細胞性免疫の標的抗原として
重要であることが報告されている。
重要であることが報告されている。
それらの糖蛋白質は、ウィルス感染細胞や、ウィルス粒
子から非イオン系界面活性剤によシ容易に抽出すること
ができる。界面活性剤により抽出した抗原を用いて、サ
ブユニットワクチンを、製造する研究がなされ、それぞ
れの糖蛋白質が感染防御抗原として有効であることが示
された。
子から非イオン系界面活性剤によシ容易に抽出すること
ができる。界面活性剤により抽出した抗原を用いて、サ
ブユニットワクチンを、製造する研究がなされ、それぞ
れの糖蛋白質が感染防御抗原として有効であることが示
された。
最近、ＨＳＶの糖蛋白質に対するモノクローナル抗体の
研究がなされるようになった。
研究がなされるようになった。
その結果、それらのモノクローナル抗体が、中和性、Ａ
ＤＣＣ活性、補体と抗体による感染細胞障害能を有する
ことが明らかとなった。
ＤＣＣ活性、補体と抗体による感染細胞障害能を有する
ことが明らかとなった。
以上のことよシ、ＨＳＶの感染によシ産生される抗体の
々かで、ＨＳＶの糖蛋白質に対する抗体は重要な意味を
持っていると思われる。さらに、Ｈ８Ｖ患者の血中にお
けるＨ３Ｖ蛋白質に対するそれぞれの抗体価を測定して
みると、糖蛋白質に対する抗体価が、非糖蛋白質に対す
る抗体価よシ高いことが報告されている。これらのこと
よシ、従来中和法、ＣＦ法、ＥＬ工ＳＡ法などの方法で
測定しているＨＳＶに対する抗体は、主にＨ８’Ｖの糖
蛋白質に対する抗体を測定しているものと思われる。
々かで、ＨＳＶの糖蛋白質に対する抗体は重要な意味を
持っていると思われる。さらに、Ｈ８Ｖ患者の血中にお
けるＨ３Ｖ蛋白質に対するそれぞれの抗体価を測定して
みると、糖蛋白質に対する抗体価が、非糖蛋白質に対す
る抗体価よシ高いことが報告されている。これらのこと
よシ、従来中和法、ＣＦ法、ＥＬ工ＳＡ法などの方法で
測定しているＨＳＶに対する抗体は、主にＨ８’Ｖの糖
蛋白質に対する抗体を測定しているものと思われる。
中和法、ＣＦ法、ＥＬＴＳＡ法 は特殊な設備を必要と
したう、結果を得るまでに長時間を必要とするため、迅
速診断には不向きである。そこで、本発明では部分精製
又は精製したＨＳＶの糖蛋白質を感作する担体を用いた
凝集反応でＨＳＶに対する抗体を測定するこの糖蛋白質
を抽出するには、０５〜１０％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００、Ｎｏｎ１ｄｅｔ Ｐ−４０、ＴＷｅｅｎ−２０，
Ｄｅ ０ｘｙｃｈｏ］−ｅ酸、ＳＤＳ、ザルコシールな
どの界面活性剤が使用しうる。好しくは、Ｔｒｉｔｏｎ
ｘ−ｔｏｏ、Ｎｏｎ１ｄｅｔ Ｐ４ｏｆ（どの非イオ
ン系界面活性剤を１〜２％で使用する。その後、たとえ
ばレンズ豆レクチンやコンカナバリンＡ等との吸着を利
用する方法、又は抗Ｈ８Ｖ抗体を結合した担体に吸着さ
せる方法でＥ（ＳＶ特異糖蛋白質を精製する。
したう、結果を得るまでに長時間を必要とするため、迅
速診断には不向きである。そこで、本発明では部分精製
又は精製したＨＳＶの糖蛋白質を感作する担体を用いた
凝集反応でＨＳＶに対する抗体を測定するこの糖蛋白質
を抽出するには、０５〜１０％のＴｒｉｔｏｎ Ｘ−１
００、Ｎｏｎ１ｄｅｔ Ｐ−４０、ＴＷｅｅｎ−２０，
Ｄｅ ０ｘｙｃｈｏ］−ｅ酸、ＳＤＳ、ザルコシールな
どの界面活性剤が使用しうる。好しくは、Ｔｒｉｔｏｎ
ｘ−ｔｏｏ、Ｎｏｎ１ｄｅｔ Ｐ４ｏｆ（どの非イオ
ン系界面活性剤を１〜２％で使用する。その後、たとえ
ばレンズ豆レクチンやコンカナバリンＡ等との吸着を利
用する方法、又は抗Ｈ８Ｖ抗体を結合した担体に吸着さ
せる方法でＥ（ＳＶ特異糖蛋白質を精製する。
精製したＨ８Ｖ糖蛋白を適当な担体にタンニン酸等を用
いて不可逆的に感作して受身担体凝集反応用窓作担体を
作製する。このときの担体としては、たとえばグルタル
アルデハイド、ホルマリン等で固定した哺乳類又は鳥類
由来の赤血球もしくは人工担体が用いられる。人工担体
としてはラテツクヌ（ヌチレン重合体）、ゼラチン、エ
ポキシ樹脂、セルロース樹脂、活性炭床などが用いられ
る。このようにして作製した抗原窓作担体を用いて凝集
反応を行ないＨ３Ｖ抗体の測定ができる。
いて不可逆的に感作して受身担体凝集反応用窓作担体を
作製する。このときの担体としては、たとえばグルタル
アルデハイド、ホルマリン等で固定した哺乳類又は鳥類
由来の赤血球もしくは人工担体が用いられる。人工担体
としてはラテツクヌ（ヌチレン重合体）、ゼラチン、エ
ポキシ樹脂、セルロース樹脂、活性炭床などが用いられ
る。このようにして作製した抗原窓作担体を用いて凝集
反応を行ないＨ３Ｖ抗体の測定ができる。
なお、抗原窓作担体はＩＡｓＭ燐酸緩衝生理食塩液（Ｐ
Ｈ７２：ＰＢＳ）にラクトース、血清アルブミン、窒化
ソーダを加えたものに保存すれば必要に応じて随時使用
できる。また、通常の方法により凍結乾燥して保存する
こともできる。
Ｈ７２：ＰＢＳ）にラクトース、血清アルブミン、窒化
ソーダを加えたものに保存すれば必要に応じて随時使用
できる。また、通常の方法により凍結乾燥して保存する
こともできる。
実施例
〔羊赤血球の固定〕
羊の血液を１００？７Ｌ−’採血′し、オルセパ液１０
０Ｍｔ−’と混合し、ガーゼ濾過し、ヘマトクリットに
よシ血球の濃度を測定した。
０Ｍｔ−’と混合し、ガーゼ濾過し、ヘマトクリットに
よシ血球の濃度を測定した。
生理食塩液で５回洗浄し、その後Ｍｅｔｈｏｄｓｉｎ工
ｍｍｕｎｏ１ｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ。
ｍｍｕｎｏ１ｏｇｙ ａｎｄ Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉ
ｓｔｒｙ。
■０工、ＩＶＰＰ、３３〜３４１９７７年（ＷＩＬＬ工
ＡＭＳ 。
ＡＭＳ 。
ＣＨＡＳＥｍＡｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ Ｎｅｗ
Ｙｏｒｋ）のＡｂｒａｍ Ｅ、 ５ｔａＶｉｔＳｋｙ（
Ｄ記載に従イ、ホルマリン固定羊血球を調製した。
Ｙｏｒｋ）のＡｂｒａｍ Ｅ、 ５ｔａＶｉｔＳｋｙ（
Ｄ記載に従イ、ホルマリン固定羊血球を調製した。
すなわち、洗浄遠心した赤血球の沈でんの８倍量の冷３
％ホルムアルデヒド生理食塩液を加え４°０２４時間ゆ
つくシ攪拌する。更にその２倍量の冷４０％ホルムアル
デヒド生理食塩液を加え２４時間攪拌する。それから、
赤血球はガーゼで濾過し、生理食塩液で８回洗浄し、Ｐ
ＢＳで２．５％になるように懸濁し、’／１００量窒化
ソーダを加え４°Ｃに保存する。
％ホルムアルデヒド生理食塩液を加え４°０２４時間ゆ
つくシ攪拌する。更にその２倍量の冷４０％ホルムアル
デヒド生理食塩液を加え２４時間攪拌する。それから、
赤血球はガーゼで濾過し、生理食塩液で８回洗浄し、Ｐ
ＢＳで２．５％になるように懸濁し、’／１００量窒化
ソーダを加え４°Ｃに保存する。
［Ｈ８Ｖ糖蛋白質の精製〕
ヒト喉頭癌細胞（ＨＥｐ”−２）にＨ３Ｖ−ＩＫＯ３株
を、ｍｏｉｌｏで接種し、３７°Ｃで１時間吸着した後
、５％ウシ胎児血清を含む、ダルベツコ変法イーグ／ｌ
ｚ Ｍ Ｅ Ｍ培地を加え１８時間培養した。
を、ｍｏｉｌｏで接種し、３７°Ｃで１時間吸着した後
、５％ウシ胎児血清を含む、ダルベツコ変法イーグ／ｌ
ｚ Ｍ Ｅ Ｍ培地を加え１８時間培養した。
Ｈ６Ｖ感染細胞をＰＢＳで洗浄し、１×１０８細胞につ
き１０ｍ１の可溶化緩衝液（バッファー ：５０ｍＭ
Ｔｒ：ｉｓ ｐ８７．２．０．１５Ｍ ＮａＣ工１％Ｎ
Ｐ−４０）で処理した。超遠心で細胞残渣とヌクレオカ
プシドをとシ除いた溶解液を、糖蛋白質精製の出発材料
とした。レンズ豆レクチン結合５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４
Ｂ （−ｙ −ｙ ｙｖｑ シフ社製） １０−１をカ
ラムに詰め、ＴＮ’Ｎバッファー（５０ｍ Ｍ Ｔｒｉ
ｓ ０．５Ｍ ＮａＣ工、０．０５％ＮＰ−４０）で平
衡化した後、５０ｍ１の溶解液を通液した後、５０ｍ１
の溶解液を通液した。
き１０ｍ１の可溶化緩衝液（バッファー ：５０ｍＭ
Ｔｒ：ｉｓ ｐ８７．２．０．１５Ｍ ＮａＣ工１％Ｎ
Ｐ−４０）で処理した。超遠心で細胞残渣とヌクレオカ
プシドをとシ除いた溶解液を、糖蛋白質精製の出発材料
とした。レンズ豆レクチン結合５ｅｐｈａｒｏｓｅ ４
Ｂ （−ｙ −ｙ ｙｖｑ シフ社製） １０−１をカ
ラムに詰め、ＴＮ’Ｎバッファー（５０ｍ Ｍ Ｔｒｉ
ｓ ０．５Ｍ ＮａＣ工、０．０５％ＮＰ−４０）で平
衡化した後、５０ｍ１の溶解液を通液した後、５０ｍ１
の溶解液を通液した。
ＴＮ’Ｎバッファーでよく洗った後、ＴＮＮ／＜ツフア
−に０．２ Ｍα−メチルマンノシドを添加した溶出バ
ッファーで、ゲルに結合した糖蛋白質を溶出し、フラク
ション−吸光度曲線に基いて○Ｄ２８０のピークフラク
ション２０ｍ１を分取した。このフラクションの０Ｄ２
８０を測定すると１３６であった。
−に０．２ Ｍα−メチルマンノシドを添加した溶出バ
ッファーで、ゲルに結合した糖蛋白質を溶出し、フラク
ション−吸光度曲線に基いて○Ｄ２８０のピークフラク
ション２０ｍ１を分取した。このフラクションの０Ｄ２
８０を測定すると１３６であった。
固定羊赤血球をＰＢＳで２回洗浄し、ＰＢＳ中赤血球濃
度が２５％になるように懸濁した。Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ工ｍ、ｍｕ、ｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ工ｍｍｕｎｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ、’Ｖｏ工、１ＶＰＰ、３６（前出）
を参考に、抗原を感作した。すなわち、タンニン酸をＰ
ＢＳで０．０００５％に希釈し、３０ｍ１の２．５％羊
赤血球と等量混合し、３７°Ｃで４５分反応させた。そ
の後、ＰＢ’Ｓで３回洗浄し、赤血球濃度が２．５％に
なるようにＰＢＳに再懸濁した。レンズ豆レクチンで精
製ｔ、ｔｌｉ蛋白質をＰＢｓでＯＤ ２８０−０．０１
３６になるように希釈し、タンニン酸処理血球と等量混
合し３７°Ｃで３０分感作した。その後、ＰＢＳで３回
洗浄し、１％正常ウサギ血清（Ｎ−ＲＳ）と０１％窒化
ソーダを含むＰＢＳにＱ − ０，７５％になるように懸濁し受身凝集感作反応担体を
１００ ｍｌ−得た。
度が２５％になるように懸濁した。Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉ
ｎ工ｍ、ｍｕ、ｎｏｌｏｇｙ ａｎｄ工ｍｍｕｎｏｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ、’Ｖｏ工、１ＶＰＰ、３６（前出）
を参考に、抗原を感作した。すなわち、タンニン酸をＰ
ＢＳで０．０００５％に希釈し、３０ｍ１の２．５％羊
赤血球と等量混合し、３７°Ｃで４５分反応させた。そ
の後、ＰＢ’Ｓで３回洗浄し、赤血球濃度が２．５％に
なるようにＰＢＳに再懸濁した。レンズ豆レクチンで精
製ｔ、ｔｌｉ蛋白質をＰＢｓでＯＤ ２８０−０．０１
３６になるように希釈し、タンニン酸処理血球と等量混
合し３７°Ｃで３０分感作した。その後、ＰＢＳで３回
洗浄し、１％正常ウサギ血清（Ｎ−ＲＳ）と０１％窒化
ソーダを含むＰＢＳにＱ − ０，７５％になるように懸濁し受身凝集感作反応担体を
１００ ｍｌ−得た。
〔受身凝集窓作担体によるＨ’Ｓ’Ｖ抗体の測定〕ヒト
血清１２０余例をマイクロタイタープレートで２倍階段
希釈した。希釈液は１％ＮＲＳを含むＰＢＳを用いた。
血清１２０余例をマイクロタイタープレートで２倍階段
希釈した。希釈液は１％ＮＲＳを含むＰＢＳを用いた。
希釈後、窓作担体を２５μｍずつ加え、３７°Ｃで２時
間放置し、凝集パターンによシ抗体価を判定した。その
結果を、プラークリダクションで測定した中和抗体価と
ともに第１表に示す。中和法で陰性と判定された血清は
受身担体凝集反応でもすべて陰性と判定され、陽性血清
の抗体価は両者においてよく相関した。第１表において
ＰＨＡは本発明による抗体価であシ、Ｎ−Ｔは中和法に
よる中和抗体節のそれぞれ２ｎ表示のｎの値である。
間放置し、凝集パターンによシ抗体価を判定した。その
結果を、プラークリダクションで測定した中和抗体価と
ともに第１表に示す。中和法で陰性と判定された血清は
受身担体凝集反応でもすべて陰性と判定され、陽性血清
の抗体価は両者においてよく相関した。第１表において
ＰＨＡは本発明による抗体価であシ、Ｎ−Ｔは中和法に
よる中和抗体節のそれぞれ２ｎ表示のｎの値である。
第 １ 表
ＰＨＡ（！：ＮＴとの相関 ２ｎ表示届 ＰＨＴ
ＮＴ 届 ＰＨＴ ＮＴ 届 ＰＨＴ
ＮＴ２ １０ ６ ２１ ９ ６ ４−０
＜１〈１３］、１ ５ ２２ ９ ５
４−１１．２ ６４ １１ ４、 ２３１１
６ ４２１０ ５５ 〈１ 〈１ ２．Ｌ
１０ ６ ４３ 〈１ 〈１６ ８ ３
２５〈１Ｇ ４４ ９ ７７１１ ４
２６１２ ７ ４．５ ８ ５８ １１
６ ２７ １．１． ７ ４−６
１．１ ７９ １０ ６ ２８ ４ 〈１
４７ 〈１＜１１０ ＜１． ＜１ ２９
１１ ５ ４８ ＜１． ＜１１２
１１ ６ ３１ ４ 〈１５０ ＜１ ＜
１１４ 〈１４ ３３ ９ ６ ５２ １
０ ７１５ １２ ５ ３４．１０ ７
５３ ９ ６１．６１０ ５ ３５１０
６ ５４． ９ ６１７ く１ 〈１
３６ く１ 〈１ ５５ 〈１ 〈１１８ １
１ ６ ３７ 〈１＜１ ５６ ’＜１
＜１１．９ ４ ４ ３８ ＜１ ４
５７ １１ ５届 ＰＨＴ ＮＴ 属 ＰＨ
Ｔ ＮＴ 届 ＰＩＮＴ ＮＴ５８ ＜
１＜１． ７９ １１ ５ １００ ＜
１ ＜１６０ 〈１＜］、 ８１ ８
３ １０２ ＜１ ＜１６１ １０ ６
８２ ９ ４ １．０３ ９
７６２ ８ ５ ８３ ＜１
＜１ １．０５ ＜１． （１６３９５
８４−１０７１，０６９７ ６４〈１＜１ ８５ ４ ＜１ １０９
＜１． ＜１６５ ＜１ ＜１． ８
６ ４ ＜１． １１．０ ９ ６
６６４ １ ８７ ８ ７
１１１、 ９ ５６７＜１ ４ ８８
７ ３ １．１２ ９ ５６９ ＜１
＜１ ９０ １．０ ６ １１．４
９ ６７０ ９ ３ ９］、
８ ６ １．１６ ９ ６７１、
８ ５ ９２ ８ ６ １１
．７ ９ ６７２ ８ ４ ９３ ４
＜１． １１９ ＜１ ＜１７３ １．０
４ ９４ ８ ５ １．２０ ＜１
＜ｊ７４ ９ ３ ９５ １１ ７
１２１ ］、、０ ６７５ ９ ４
９６ ＜１ ＜１ １２２ １１．
７７７ ９ ４ ９８ １．０ ６
１２５ ＜］ 〈１７８ １０ ６
９９ １１ ６ １．２６ ＜
１ ＜１−］ １− 〔受身凝集窓作担体の凍結乾燥〕 窓作担体の凍結乾燥にあたシ、窓作担体懸濁液を３ ｍ
Ｊ−バイアルにｌｍ−ｌｌ−ずつ小分けし、合計１００
０本を用意した。これを日本真空技術（株）のＤＦ−５
型凍結乾燥機のチャンバーに納めた。細菌学実習提要（
医科学研究所学友金網）凍結乾燥法に従い１次乾燥とし
て１０００１２０〜２００μＨｇの減圧下１０時間凍結
乾燥を継続し、その後２次乾燥として２５°Ｃｌ２Ｏ〜
４０μＨｇの減圧下１０時間凍結乾燥を継続して乾燥を
完了し、その後ゴム栓で密封した。
ＮＴ 届 ＰＨＴ ＮＴ 届 ＰＨＴ
ＮＴ２ １０ ６ ２１ ９ ６ ４−０
＜１〈１３］、１ ５ ２２ ９ ５
４−１１．２ ６４ １１ ４、 ２３１１
６ ４２１０ ５５ 〈１ 〈１ ２．Ｌ
１０ ６ ４３ 〈１ 〈１６ ８ ３
２５〈１Ｇ ４４ ９ ７７１１ ４
２６１２ ７ ４．５ ８ ５８ １１
６ ２７ １．１． ７ ４−６
１．１ ７９ １０ ６ ２８ ４ 〈１
４７ 〈１＜１１０ ＜１． ＜１ ２９
１１ ５ ４８ ＜１． ＜１１２
１１ ６ ３１ ４ 〈１５０ ＜１ ＜
１１４ 〈１４ ３３ ９ ６ ５２ １
０ ７１５ １２ ５ ３４．１０ ７
５３ ９ ６１．６１０ ５ ３５１０
６ ５４． ９ ６１７ く１ 〈１
３６ く１ 〈１ ５５ 〈１ 〈１１８ １
１ ６ ３７ 〈１＜１ ５６ ’＜１
＜１１．９ ４ ４ ３８ ＜１ ４
５７ １１ ５届 ＰＨＴ ＮＴ 属 ＰＨ
Ｔ ＮＴ 届 ＰＩＮＴ ＮＴ５８ ＜
１＜１． ７９ １１ ５ １００ ＜
１ ＜１６０ 〈１＜］、 ８１ ８
３ １０２ ＜１ ＜１６１ １０ ６
８２ ９ ４ １．０３ ９
７６２ ８ ５ ８３ ＜１
＜１ １．０５ ＜１． （１６３９５
８４−１０７１，０６９７ ６４〈１＜１ ８５ ４ ＜１ １０９
＜１． ＜１６５ ＜１ ＜１． ８
６ ４ ＜１． １１．０ ９ ６
６６４ １ ８７ ８ ７
１１１、 ９ ５６７＜１ ４ ８８
７ ３ １．１２ ９ ５６９ ＜１
＜１ ９０ １．０ ６ １１．４
９ ６７０ ９ ３ ９］、
８ ６ １．１６ ９ ６７１、
８ ５ ９２ ８ ６ １１
．７ ９ ６７２ ８ ４ ９３ ４
＜１． １１９ ＜１ ＜１７３ １．０
４ ９４ ８ ５ １．２０ ＜１
＜ｊ７４ ９ ３ ９５ １１ ７
１２１ ］、、０ ６７５ ９ ４
９６ ＜１ ＜１ １２２ １１．
７７７ ９ ４ ９８ １．０ ６
１２５ ＜］ 〈１７８ １０ ６
９９ １１ ６ １．２６ ＜
１ ＜１−］ １− 〔受身凝集窓作担体の凍結乾燥〕 窓作担体の凍結乾燥にあたシ、窓作担体懸濁液を３ ｍ
Ｊ−バイアルにｌｍ−ｌｌ−ずつ小分けし、合計１００
０本を用意した。これを日本真空技術（株）のＤＦ−５
型凍結乾燥機のチャンバーに納めた。細菌学実習提要（
医科学研究所学友金網）凍結乾燥法に従い１次乾燥とし
て１０００１２０〜２００μＨｇの減圧下１０時間凍結
乾燥を継続し、その後２次乾燥として２５°Ｃｌ２Ｏ〜
４０μＨｇの減圧下１０時間凍結乾燥を継続して乾燥を
完了し、その後ゴム栓で密封した。
この窓作担体乾燥標品を１２ケ月間保存し、経時変化を
調べだ。１．３．６．９および１２ケ月にそれぞれ希釈
液（ＰＢＳ十正常ウサギ血清１％士窒化ソーダ０１％）
で溶解し、陽性血清を用いて受身担体凝集反応を実施し
た。
調べだ。１．３．６．９および１２ケ月にそれぞれ希釈
液（ＰＢＳ十正常ウサギ血清１％士窒化ソーダ０１％）
で溶解し、陽性血清を用いて受身担体凝集反応を実施し
た。
その結果いずれも力価の低下はほとんど認められず、中
和性との相関性も十分に認められ、さらに陰性血清にお
ける非特異反応の発現はみられなかった。
和性との相関性も十分に認められ、さらに陰性血清にお
ける非特異反応の発現はみられなかった。
Claims (4)
- （１）単純ヘルペスウィルス抗原を担体に感作せしめ、
これを用いて受身担体凝集反応を行うことを特徴とする
単純ヘルペスウィルス抗体の測定方法。 - （２）単純ヘルペスウィルス抗原がウィルスに由来する
、又は／及びウィルス感染細胞に由来する特異糖蛋白質
である前記第１項記載の方法。 - （３）担体が哺乳類又は鳥類由来の固定赤血球、又は人
工担体である前記第１項記載の方法。 - （４）窓作担体が凍結乾燥したものである前記第１項記
載の方法。
Priority Applications (6)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59250343A JPS61292061A (ja) | 1984-11-26 | 1984-11-26 | 単純ヘルペスウイルス抗体の測定方法 |
| CA000495472A CA1265049A (en) | 1984-11-26 | 1985-11-15 | Method for determination of herpes simplex virus antibodies |
| KR1019850008605A KR920007163B1 (ko) | 1984-11-26 | 1985-11-18 | 단순헤르페스 바이러스 항체의 측정방법 |
| AT85114921T ATE54758T1 (de) | 1984-11-26 | 1985-11-25 | Verfahren zur bestimmung der antikoerper vom herpes-simplex-virus. |
| EP85114921A EP0183215B1 (en) | 1984-11-26 | 1985-11-25 | Method for determination of herpes simplex virus antibodies |
| DE8585114921T DE3578742D1 (de) | 1984-11-26 | 1985-11-25 | Verfahren zur bestimmung der antikoerper vom herpes-simplex-virus. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59250343A JPS61292061A (ja) | 1984-11-26 | 1984-11-26 | 単純ヘルペスウイルス抗体の測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS61292061A true JPS61292061A (ja) | 1986-12-22 |
Family
ID=17206504
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59250343A Pending JPS61292061A (ja) | 1984-11-26 | 1984-11-26 | 単純ヘルペスウイルス抗体の測定方法 |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0183215B1 (ja) |
| JP (1) | JPS61292061A (ja) |
| KR (1) | KR920007163B1 (ja) |
| AT (1) | ATE54758T1 (ja) |
| CA (1) | CA1265049A (ja) |
| DE (1) | DE3578742D1 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5081010A (en) * | 1989-02-09 | 1992-01-14 | Eastman Kodak Company | Extraction composition, test kit and their use to extract or determine herpes simplex viral antigen |
| US5210039A (en) * | 1989-02-09 | 1993-05-11 | Eastman Kodak Company | Wash composition, test kit and their use to determine a herpes simplex viral antigen |
| US5124245A (en) * | 1989-02-09 | 1992-06-23 | Eastman Kodak Company | Wash composition, test kit and their use to determine a herpes simplex viral antigen |
| US5334503A (en) * | 1991-10-08 | 1994-08-02 | Eastman Kodak Company | Test kit and method for the detection of microorganisms associated with periodontal diseases using surfactant mixture as extraction composition |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3562384A (en) * | 1960-11-08 | 1971-02-09 | Miles Lab | Immunological indicator and test system |
| FR2187909A1 (en) * | 1972-06-08 | 1974-01-18 | Merieux Inst | Stable antigens - by freeze-drying antigen bonded to red blood cells |
| US4130395A (en) * | 1975-08-19 | 1978-12-19 | Beth Israel Medical Center | Process and apparatus for detection of specific biological factors by means of osmotic hemolysis |
| EP0001223A3 (en) * | 1977-09-19 | 1979-12-12 | F.Hoffmann-La Roche & Co. Aktiengesellschaft | Latex coated with a polyhydroxy compound, process for the preparation of this latex, immunological reagent containing this latex, process for the preparation of this reagent, application of this reagent, testing procedure utilising this reagent and reagent kit containing this reagent |
| US4403037A (en) * | 1980-10-10 | 1983-09-06 | American Hoechst Corporation | Erythrocyte preparations and use thereof in hemagglutination tests |
| US4529712A (en) * | 1981-09-18 | 1985-07-16 | Research Corporation | Coated cells and their use |
-
1984
- 1984-11-26 JP JP59250343A patent/JPS61292061A/ja active Pending
-
1985
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- 1985-11-18 KR KR1019850008605A patent/KR920007163B1/ko not_active IP Right Cessation
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- 1985-11-25 DE DE8585114921T patent/DE3578742D1/de not_active Expired - Fee Related
- 1985-11-25 EP EP85114921A patent/EP0183215B1/en not_active Expired - Lifetime
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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| EP0183215A3 (en) | 1986-12-30 |
| DE3578742D1 (de) | 1990-08-23 |
| KR920007163B1 (ko) | 1992-08-27 |
| EP0183215B1 (en) | 1990-07-18 |
| EP0183215A2 (en) | 1986-06-04 |
| CA1265049A (en) | 1990-01-30 |
| ATE54758T1 (de) | 1990-08-15 |
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